一種從木醋液中連續提取抗菌物質和抗氧化物質的方法

2023-10-04 19:58:24

專利名稱：一種從木醋液中連續提取抗菌物質和抗氧化物質的方法
技術領域：
本發明屬於天然產物提取領域，特別涉及一種從木醋液中連續提取抗菌物質和抗
氧化物質的方法，具體地說是先用有機溶劑從木醋液中萃取出有機酸、酚類等具有抗菌和 抗氧化活性的有機物質混合物，通過調節萃取液的酸鹼度以改變萃取液中抗菌物質和抗氧 化物質的存在形式(離子與分子形式間的轉化)，再用有機溶劑分別萃取出抗菌物質和抗 氧化物質的一種方法。
背景技術：
木醋液是以木質材料為原料(如木材、木材加工廢棄物或森林撫育採伐所產生的 枝椏等)乾餾得到的冷凝液經澄清分離出沉澱木焦油後所形成的紅褐色或深褐色液體。隨 著制炭工業的發展，除木材以外的植物(如竹材、玉米核、松塔、棕櫚核、核桃殼、杏核殼和 椰殼等)也可以通過乾餾得到與木醋液性質相似的液體。 木醋液來源於天然植物原料，製取過程不汙染環境，產品對人畜無毒害作用，屬綠 色化學產品。木醋液較好的抗菌、抗氧化作用與其中含有豐富的活性物質有關，其中含量最 多的是有機酸和酚類物質，佔有機物總量的60 80%，是木醋液抗菌和抗氧化作用的主要 物質。但由於木醋液中水分含量高，抗菌和抗氧化能力與其它抗菌劑、抗氧化劑比較不夠突 出，因而影響了其實際應用。現有技術中雖有利用減壓蒸餾法從竹醋液中提取殺菌抑菌物 質，但在提取時去掉了含量較高且具有較強抗氧化作用的酚類物質。

發明內容
針對上述現有技術中木醋液具有水分含量高、抗菌、抗氧化效果差、提取時不能同
時得到抗菌物質和抗氧化物質的不足，本發明提供了一種從木醋液中連續提取抗菌物質和
抗氧化物質的方法。該方法可連續獲得抗菌物質和抗氧化物質，同時還大大增加了木醋液
中抗菌物質和抗氧化物質的濃度，提高了木醋液的抗菌活性和抗氧化活性。
實現上述發明目的的技術方案是一種從木醋液中連續提取抗菌物質和抗氧化物
質的方法，其特徵在於，包括下列步驟 i)將木醋液原液用體積比為o.3 : i i : i的乙酸乙酯或二氯甲烷或氯仿或乙
醚萃取至無色，萃取液用0. 5 0. 8mol/L NaHC03溶液以1 : 1體積比萃取至少3次，合併 NaHC03萃取液； 2)調節萃取液至原木醋液pH值，以體積比為0.3 : 1 1 : l的乙酸乙酯萃取至 少3次，所得萃取液經減壓蒸餾、乾燥得到固體即所述的抗菌物質； 3)將萃取後餘下的溶液用0. 4 0. 7mol/L Na2C03溶液或0. 7 1. 3mol/LNaOH溶 液以1 : 1體積比萃取至少3次，合併Na2C03或Na0H萃取液； 4)調節萃取液至原木醋液pH值，以體積比為0. 3 : 1 1 : 1的二氯甲烷萃取至 少3次，所得萃取液經常壓蒸餾、乾燥得到固體即所述的抗氧化物質。 本發明的方法中所選用的木醋液為高溫乾餾核桃殼所產生的氣體冷凝而成的液體。 本發明的方法中調節萃取液至原木醋液pH值所選用的試劑是3mol/L 1^04溶液。
本發明的方法中提取抗菌物質時其減壓蒸餾的條件為4(TC、真空度為0. lMPa， 乾燥條件為在常壓下、7(TC ;提取抗氧化物質時其常壓蒸餾的條件為4(TC，乾燥條件為
常壓下、5(TC。 本發明從木醋液中連續提取抗菌物質和抗氧化物質的方法的原理是有機酸具有 較強的抗菌活性，酚類具有較強的抗氧化活性。在木醋液原液中，有機酸和酚類物質以分子 形式存在於溶液中，先用有機溶劑(乙酸乙酯或二氯甲烷)將其從木醋液中萃取出，以弱 鹼(NaHC03溶液)調節木醋液萃取液的pH值使其中的有機酸(強酸)以離子形式轉入到 NaHC03溶液中(而酚類等物質仍留在有機溶劑中)，用H2S04溶液調節至原木醋液pH值時， 有機酸又以分子形式游離出，則可採用有機溶劑(乙酸乙酯)萃取出。木醋液原液萃餘液 以強鹼(Na2C03溶液或Na0H溶液)萃取時，酚類物質(弱酸)以離子形式轉入到Na2C03溶 液或NaOH溶液中，用H2S04溶液調節至原木醋液pH值時，酚類物質又以分子形式游離出，則 可採用有機溶劑(二氯甲烷)萃取出。 本發明通過抗菌試驗和抗氧化試驗以及有機酸和酚類物質的含量對提取方法進 行了驗證；本發明方法的抗菌試驗是採用常規的細菌、黴菌和植物病原菌的測試方法，採用 的菌種為金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、黑麴黴菌、蘋果腐爛病原菌和葡萄炭疽病原菌。本發 明方法的抗氧化試驗是採用清除DPra 自由基能力和對Fe2+的還原能力的FRAP測定方 法。本發明方法的有機酸含量是採用GC-MS(氣相色譜-質譜)分析，酚類物質含量是採用 Folin-Ciocalteu法測定。 與現有技術相比，本發明的方法具有以下優點 1)採用本發明方法可以連續從木醋液中提取出抗菌物質和抗氧化物質； 2)本發明方法是利用溶劑萃取、分配的方法連續從木醋液中提取抗菌物質和抗氧
化物質； 3)從木醋液中提取出的抗菌物質對食品腐敗菌和植物病原菌的抑菌效果大大增 強； 4)從木醋液中提取出的抗氧化物質清除DPPH，自由基能力和對Fe"的還原能力 大大增強。 5)本發明方法簡單，易操作。
具體實施例方式
以下通過發明人給出的具體實施例對本發明進行進一步描述，以說明本發明的有 益效果，但本發明的保護範圍並不僅限於此。 以下實施所採用的試劑均為分析純。所用的溶液有0. 5 0. 8mol/L的NaHC03溶 液；3mol/L的H2S04溶液；0. 4 0. 7mol/L的Na2C03溶液；0. 7 1. 3mol/L的Na0H溶液； 乙酸乙酯；二氯甲烷。對細菌(金黃色葡萄球菌、大腸桿菌)、黴菌(黑麴黴菌)和植物病 原菌(蘋果腐爛病原菌、葡萄炭疽病原菌)的抗菌活性測定根據常規的方法(見試驗例1) 進行；抗氧化活性測定採用清除DPra 自由基能力的測定方法(見試驗例2)和對Fe2+的 還原能力的FRAP測定方法(見試驗例3);有機酸含量採用GC-MS (氣相色譜-質譜)分析(見試驗例4-5);總酚含量採用Folin-Ciocalteu法測定(見試驗例6)。
木醋液是以當年生產的核桃殼為原料通過高溫乾餾所產生的氣體冷凝而成的液 體。減壓蒸餾設備是BC-R型數字旋轉薄膜蒸發儀，乾燥設備是實驗室常用的鼓風乾燥箱。
實施例1 :抗菌物質和抗氧化物質的提取 將木醋液原液用體積比為0.5 : 1的乙酸乙酯萃取至無色，萃取液用0.6mol/L 的NaHC03溶液以1 : 1體積比萃取3次，合併NaHC03萃取液並以3mol/LH2S04溶液調節至 原木醋液pH值，以體積比為0.5 : 1的乙酸乙酯萃取3次，所得萃取液在4(TC、真空度為 0. lMPa條件下減壓蒸餾、在常壓、7(TC下乾燥得到固體即所述的抗菌物質。將上述O. 6mo1/ L NaHC03萃取後餘下的溶液用0. 6mol/L Na2C03溶液以1 : 1體積比萃取3次，合併Na2C03 萃取液並以3mol/LH2S04溶液調節至原木醋液pH值，以0.5 : 1 二氯甲烷萃取3次，所得萃 取液在4(TC條件下常壓蒸餾，在常壓、5(TC下乾燥得到固體即所述的抗氧化物質。
按照試驗例1的測定方法對本發明方法提取的抗菌物質(濃度為40mg/mL)進 行抗菌活性測定，試驗結果表明，本發明方法提取的抗菌物質對測試的金黃色葡萄球菌、 大腸桿菌和黑麴黴菌的抗菌圈直徑比木醋液原液大48. 07%、52. 98%、75. 56% ;對測試的 葡萄炭疽病原菌和蘋果腐爛病原菌的半抑制濃度EC5。(mg/mL)比木醋液原液小75. 15%和 76. 95%。可知，經此方法得到的抗菌物質抗菌效果明顯好於木醋液原液。
按照試驗例2和試驗例3的測定方法對本發明方法提取的抗氧化物質進行抗氧化 活性測定。試驗結果表明，本發明方法提取的抗氧化物質(濃度為0. 010mg/mL)對DPffl 自 由基的清除率比木醋液原液大42.03X，對F^+的還原能力比木醋液原液大43. 11%。可 知，經此方法得到的抗氧化物質，抗氧化效果明顯好於木醋液原液。
實施例2 :抗菌物質和抗氧化物質的提取 將木醋液原液用體積比為1 : 1的乙酸乙酯萃取至無色，萃取液用0. 7mol/L的 NaHC03溶液以1 : 1體積比萃取3次，合併NaHC03萃取液並以3mol/LH2S04溶液調節至原木 醋液pH值，以體積比為l : 1的乙酸乙酯萃取3次，所得萃取液在4(TC、真空度為0. lMPa條 件下減壓蒸餾、在常壓、7(TC下乾燥得到固體即所述的抗菌物質。將上述0.7mol/L NaHC03 萃取後餘下的溶液用0.5mol/LNa^03溶液以l : 1體積比萃取3次，合併化20)3萃取液並以 3mol/L H2S04溶液調節至原木醋液pH值，以1 : 1 二氯甲烷萃取3次，所得萃取液在40°C 條件下常壓蒸餾，在常壓、5(TC下乾燥得到固體即所述的抗氧化物質。 按照試驗例1的測定方法對本發明方法提取的抗菌物質(濃度為40mg/mL)進 行抗菌活性測定，試驗結果表明，本發明方法提取的抗菌物質對測試的金黃色葡萄球菌、 大腸桿菌和黑麴黴菌的抗菌圈直徑比木醋液原液大48. 21%、52. 63%、75. 77% ;對測試的 葡萄炭疽病原菌和蘋果腐爛病原菌的半抑制濃度EC5。(mg/mL)比木醋液原液小75. 61 %和 76. 55%。可知，經此方法得到的抗菌物質抗菌效果明顯好於木醋液原液。
按照試驗例2和試驗例3的測定方法對本發明方法提取的抗氧化物質進行抗氧化 活性測定。試驗結果表明，本發明方法提取的抗氧化物質(濃度為0. 010mg/mL)對DPffl 自 由基的清除率比木醋液原液大41. 33X，對Fe"的還原能力比木醋液原液大42. 23%。可 知，經此方法得到的抗氧化物質，抗氧化效果明顯好於木醋液原液。
實施例3 :抗菌物質和抗氧化物質的提取 將木醋液原液用體積比為0. 3 : 1的乙酸乙酯萃取至無色，萃取液用0. 5mol/L的NaHC03溶液以1 : 1體積比萃取3次，合併NaHC03萃取液並以3mol/LH2S04溶液調節至 原木醋液pH值，以體積比為0.3 : 1的乙酸乙酯萃取3次，所得萃取液在4(TC、真空度為 0. lMPa條件下減壓蒸餾、在常壓、7(TC下乾燥得到固體即所述的抗菌物質。將上述O. 5mo1/ L NaHC03萃取後餘下的溶液用0. 4mol/L Na2C03溶液以1 : 1體積比萃取3次，合併Na2C03 萃取液並以3mol/LH2S04溶液調節至原木醋液pH值，以0.3 : 1 二氯甲烷萃取3次，所得萃 取液在4(TC條件下常壓蒸餾，在常壓、5(TC下乾燥得到固體即所述的抗氧化物質。
按照試驗例1的測定方法對本發明方法提取的抗菌物質(濃度為40mg/mL)進行 抗菌活性測定，試驗結果表明，本發明方法提取的抗菌物質對測試的金黃色葡萄球菌、大腸 桿菌和黑麴黴菌的抗菌圈直徑比木醋液原液大46. 58%、50. 63%、73% ;對測試的葡萄炭疽 病原菌和蘋果腐爛病原菌的半抑制濃度EC5。 (mg/mL)比木醋液原液小73. 91 %和75. 21 % 。 可知，經此方法得到的抗菌物質抗菌效果明顯好於木醋液原液。 按照試驗例2和試驗例3的測定方法對本發明方法提取的抗氧化物質進行抗氧化 活性測定。試驗結果表明，本發明方法提取的抗氧化物質(濃度為0. 010mg/mL)對DPffl 自 由基的清除率比木醋液原液大41. 16X，對F^+的還原能力比木醋液原液大42.01X。可 知，經此方法得到的抗氧化物質，抗氧化效果明顯好於木醋液原液。
實施例4 :抗菌物質和抗氧化物質的提取 將木醋液原液用體積比為0.5 : 1的乙酸乙酯萃取至無色，萃取液用0.8mol/L 的NaHC03溶液以1 : 1體積比萃取3次，合併NaHC03萃取液並以3mol/LH2S04溶液調節至 原木醋液pH值，以體積比為0.5 : 1的乙酸乙酯萃取3次，所得萃取液在4(TC、真空度為 0. lMPa條件下減壓蒸餾、在常壓、7(TC下乾燥得到固體即所述的抗菌物質。將上述O. 8mo1/ L NaHC03萃取後餘下的溶液用0. 7mol/L Na2C03溶液以1 : 1體積比萃取3次，合併Na2C03 萃取液並以3mol/LH2S04溶液調節至原木醋液pH值，以0.7 : 1 二氯甲烷萃取3次，所得萃 取液在4(TC條件下常壓蒸餾，在常壓、5(TC下乾燥得到固體即所述的抗氧化物質。
按照試驗例1的測定方法對本發明方法提取的抗菌物質(濃度為40mg/mL)進 行抗菌活性測定，試驗結果表明，本發明方法提取的抗菌物質對測試的金黃色葡萄球菌、 大腸桿菌和黑麴黴菌的抗菌圈直徑比木醋液原液大47. 11%、50. 03%、72. 51% ;對測試的 葡萄炭疽病原菌和蘋果腐爛病原菌的半抑制濃度EC5。(mg/mL)比木醋液原液小73. 51 %和 74. 03%。可知，經此方法得到的抗菌物質抗菌效果明顯好於木醋液原液。
按照試驗例2和試驗例3的測定方法對本發明方法提取的抗氧化物質進行抗氧化 活性測定。試驗結果表明，本發明方法提取的抗氧化物質(濃度為0. 010mg/mL)對DPffl 自 由基的清除率比木醋液原液大41. 79X，對Fe"的還原能力比木醋液原液大42. 81%。可 知，經此方法得到的抗氧化物質，抗氧化效果明顯好於木醋液原液。
實施例5 :抗菌物質和抗氧化物質的提取 將木醋液原液用0. 5 : 1的二氯甲烷萃取至無色，萃取液用0. 6mol/L的NaHC03 溶液以1 : 1體積比萃取3次，合併NaHC03萃取液並以3mol/L H2S04溶液調節至原木醋液 pH值，以0.5 : 1的乙酸乙酯萃取3次，所得萃取液在4(TC、真空度為0. lMPa條件下減壓 蒸餾、在常壓、7(TC下乾燥得到固體即所述的抗菌物質。將上述0.6mol/L NaHC03萃取後餘 下的溶液用0. 6mol/L Na2C03溶液以1 : 1體積比萃取3次，合併Na2C03萃取液並以3mo1/ L H2S04溶液調節至原木醋液pH值，以0.5 : 1二氯甲烷萃取3次，所得萃取液在4(TC條件下常壓蒸餾，在常壓、5(TC下乾燥得到固體即所述的抗氧化物質。 按照試驗例1的測定方法對本發明方法提取的抗菌物質(濃度為40mg/mL)進行抗菌活性測定，試驗結果表明，本發明方法提取的抗菌物質對測試的金黃色葡萄球菌、大腸桿菌和黑麴黴菌的抗菌圈直徑比木醋液原液大47. 97%、52. 65%、75. 09% ;對測試的葡萄炭疽病原菌和蘋果腐爛病原菌的半抑制濃度EC5。(mg/mL)比木醋液原液小74. 22 %和75. 74%。可知，經此方法得到的抗菌物質抗菌效果明顯好於木醋液原液。
按照試驗例2和試驗例3的測定方法對本發明方法提取的抗氧化物質進行抗氧化活性測定。試驗結果表明，本發明方法提取的抗氧化物質(濃度為0. OlOmg/mL)對DPffl 自由基的清除率比木醋液原液大41. 93X，對Fe"的還原能力比木醋液原液大42. 63%。可知，經此方法得到的抗氧化物質，抗氧化效果明顯好於木醋液原液。
實施例6 :抗菌物質和抗氧化物質的提取 將木醋液原液用1 : 1的二氯甲烷萃取至無色，萃取液用0. 7mol/L的NaHC03溶液以l : l體積比萃取3次，合併NaHC03萃取液並以3mol/L H^04溶液調節至原木醋液pH值，以l : 1的乙酸乙酯萃取3次，所得萃取液在4(TC、真空度為0. lMPa條件下減壓蒸餾、在常壓、7(TC下乾燥得到固體即所述的抗菌物質。將上述0. 7mol/L NaHC(^萃取後餘下的溶液用0. 5mol/L Na2C03溶液以1 : 1體積比萃取3次，合併Na2C03萃取液並以3mol/L H2S04溶液調節至原木醋液pH值，以1 : 1二氯甲烷萃取3次，所得萃取液在4(TC條件下常壓蒸餾，在常壓、5(TC下乾燥得到固體即所述的抗氧化物質。 按照試驗例1的測定方法對本發明方法提取的抗菌物質(濃度為40mg/mL)進行抗菌活性測定，試驗結果表明，本發明方法提取的抗菌物質對測試的金黃色葡萄球菌、大腸桿菌和黑麴黴菌的抗菌圈直徑比木醋液原液大48. 11%、52. 97%、75. 27% ;對測試的葡萄炭疽病原菌和蘋果腐爛病原菌的半抑制濃度EC5。(mg/mL)比木醋液原液小74. 62%和75. 96%。可知，經此方法得到的抗菌物質抗菌效果明顯好於木醋液原液。
按照試驗例2和試驗例3的測定方法對本發明方法提取的抗氧化物質進行抗氧化活性測定。試驗結果表明，本發明方法提取的抗氧化物質(濃度為0. 010mg/mL)對DPffl 自由基的清除率比木醋液原液大41. 03X，對Fe"的還原能力比木醋液原液大41. 85%。可知，經此方法得到的抗氧化物質，抗氧化效果明顯好於木醋液原液。
實施例7 :抗菌物質和抗氧化物質的提取 將木醋液原液用0. 3 : 1的二氯甲烷萃取至無色，萃取液用0. 5mol/L的NaHC03溶液以1 : 1體積比萃取3次，合併NaHC03萃取液並以3mol/L H2S04溶液調節至原木醋液pH值，以0.3 : 1的乙酸乙酯萃取3次，所得萃取液在4(TC、真空度為0. lMPa條件下減壓蒸餾、在常壓、7(TC下乾燥得到固體即所述的抗菌物質。將上述0.5mol/L NaHC03萃取後餘下的溶液用0. 4mol/L Na2C03溶液以1 : 1體積比萃取3次，合併Na2C03萃取液並以3mo1/L H2S04溶液調節至原木醋液pH值，以0.3 : 1二氯甲烷萃取3次，所得萃取液在4(TC條件下常壓蒸餾，在常壓、5(TC下乾燥得到固體即所述的抗氧化物質。 按照試驗例1的測定方法對本發明方法提取的抗菌物質(濃度為40mg/mL)進行抗菌活性測定，試驗結果表明，本發明方法提取的抗菌物質對測試的金黃色葡萄球菌、大腸桿菌和黑麴黴菌的抗菌圈直徑比木醋液原液大46. 21%、50. 39%、72. 77% ;對測試的葡萄炭疽病原菌和蘋果腐爛病原菌的半抑制濃度EC5。(mg/mL)比木醋液原液小73. 39 %和74. 91%。可知，經此方法得到的抗菌物質抗菌效果明顯好於木醋液原液。 按照試驗例2和試驗例3的測定方法對本發明方法提取的抗氧化物質進行抗氧化活性測定。試驗結果表明，本發明方法提取的抗氧化物質(濃度為0. OlOmg/mL)對DPffl 自由基的清除率比木醋液原液大41. 08X，對Fe"的還原能力比木醋液原液大41. 93%。可知，經此方法得到的抗氧化物質，抗氧化效果明顯好於木醋液原液。
實施例8 :抗菌物質和抗氧化物質的提取 將木醋液原液用0. 5 : 1的二氯甲烷萃取至無色，萃取液用0. 8mol/L的NaHC03溶液以1 : 1體積比萃取3次，合併NaHC03萃取液並以3mol/L H2S04溶液調節至原木醋液pH值，以0.5 : 1的乙酸乙酯萃取3次，所得萃取液在4(TC、真空度為0. lMPa條件下減壓蒸餾、在常壓、7(TC下乾燥得到固體即所述的抗菌物質。將上述0.8mol/L NaHC03萃取後餘下的溶液用0. 7mol/L Na2C03溶液以1 : 1體積比萃取3次，合併Na2C03萃取液並以3mo1/L H2S04溶液調節至原木醋液pH值，以0.7 : 1二氯甲烷萃取3次，所得萃取液在4(TC條件下常壓蒸餾，在常壓、5(TC下乾燥得到固體即所述的抗氧化物質。 按照試驗例1的測定方法對本發明方法提取的抗菌物質(濃度為40mg/mL)進行抗菌活性測定，試驗結果表明，本發明方法提取的抗菌物質對測試的金黃色葡萄球菌、大腸桿菌和黑麴黴菌的抗菌圈直徑比木醋液原液大46. 91%、50. 68%、72. 97% ;對測試的葡萄炭疽病原菌和蘋果腐爛病原菌的半抑制濃度EC5。(mg/mL)比木醋液原液小73. 57 %和
75. 11%。可知，經此方法得到的抗菌物質抗菌效果明顯好於木醋液原液。 按照試驗例2和試驗例3的測定方法對本發明方法提取的抗氧化物質進行抗氧化活性測定。試驗結果表明，本發明方法提取的抗氧化物質(濃度為0. 010mg/mL)對DPffl 自由基的清除率比木醋液原液大41. 91X，對Fe"的還原能力比木醋液原液大42. 59%。可知，經此方法得到的抗氧化物質，抗氧化效果明顯好於木醋液原液。
實施例9 :抗菌物質和抗氧化物質的提取 將木醋液原液用0. 5 : 1的氯仿萃取至無色，萃取液用0. 6mol/L的NaHC03溶液以1 : 1體積比萃取3次，合併NaHC03萃取液並以3mol/L H2S04溶液調節至原木醋液pH值，以0.5 : 1的乙酸乙酯萃取3次，所得萃取液在4(TC、真空度為0. lMPa條件下減壓蒸餾、在常壓、7(TC下乾燥得到固體即所述的抗菌物質。將上述0.6mol/L NaHC03萃取後餘下的溶液用1. 3mol/L NaOH溶液以1 : 1體積比萃取3次，合併NaOH萃取液並以3mol/L H2S04溶液調節至原木醋液pH值，以0.5 : 1二氯甲烷萃取3次，所得萃取液在4(TC條件下常壓蒸餾，在常壓、5(TC下乾燥得到固體即所述的抗氧化物質。 按照試驗例1的測定方法對本發明方法提取的抗菌物質(濃度為40mg/mL)進行抗菌活性測定，試驗結果表明，本發明方法提取的抗菌物質對測試的金黃色葡萄球菌、大腸桿菌和黑麴黴菌的抗菌圈直徑比木醋液原液大45. 57%、51. 22%、73. 09% ;對測試的葡萄炭疽病原菌和蘋果腐爛病原菌的半抑制濃度EC5。(mg/mL)比木醋液原液小74. 01 %和75. 31%。可知，經此方法得到的抗菌物質抗菌效果明顯好於木醋液原液。
按照試驗例2和試驗例3的測定方法對本發明方法提取的抗氧化物質進行抗氧化活性測定。試驗結果表明，本發明方法提取的抗氧化物質(濃度為0. 010mg/mL)對DPffl 自由基的清除率比木醋液原液大42. 75X，對Fe"的還原能力比木醋液原液大43. 69%。可知，經此方法得到的抗氧化物質，抗氧化效果明顯好於木醋液原液。
實施例10 :抗菌物質和抗氧化物質的提取 將木醋液原液用1 : 1的氯仿萃取至無色，萃取液用0. 7mol/L的NaHC03溶液以1 : 1體積比萃取3次，合併NaHC03萃取液並以3mol/L H2S04溶液調節至原木醋液pH值，以l : 1的乙酸乙酯萃取3次，所得萃取液在4(TC、真空度為0. lMPa條件下減壓蒸餾、在常壓、7(TC下乾燥得到固體即所述的抗菌物質。將上述0. 7mol/L NaHC(^萃取後餘下的溶液用1. Omol/L NaOH溶液以1 : 1體積比萃取3次，合併NaOH萃取液並以3mol/L H2S04溶液調節至原木醋液pH值，以l : 1二氯甲烷萃取3次，所得萃取液在4(TC條件下常壓蒸餾，在常壓、5(TC下乾燥得到固體即所述的抗氧化物質。 按照試驗例1的測定方法對本發明方法提取的抗菌物質(濃度為40mg/mL)進行抗菌活性測定，試驗結果表明，本發明方法提取的抗菌物質對測試的金黃色葡萄球菌、大腸桿菌和黑麴黴菌的抗菌圈直徑比木醋液原液大45. 91%、51. 38%、73. 23% ;對測試的葡萄炭疽病原菌和蘋果腐爛病原菌的半抑制濃度EC5。(mg/mL)比木醋液原液小74. 19%和75. 52%。可知，經此方法得到的抗菌物質抗菌效果明顯好於木醋液原液
按照試驗例2和試驗例3的測定方法對本發明方法提取的抗氧化物質進行抗氧化活性測定。試驗結果表明，本發明方法提取的抗氧化物質(濃度為0. 010mg/mL)對DPffl 自由基的清除率比木醋液原液大43. 13X，對F^+的還原能力比木醋液原液大43.91X。可知，經此方法得到的抗氧化物質，抗氧化效果明顯好於木醋液原液。
實施例11 :抗菌物質和抗氧化物質的提取 將木醋液原液用0. 3 : 1的氯仿萃取至無色，萃取液用0. 5mol/L的NaHC03溶液以1 : 1體積比萃取3次，合併NaHC03萃取液並以3mol/L H2S04溶液調節至原木醋液pH值，以0.3 : 1的乙酸乙酯萃取3次，所得萃取液在4(TC、真空度為0. lMPa條件下減壓蒸餾、在常壓、7(TC下乾燥得到固體即所述的抗菌物質。將上述0.5mol/L NaHC03萃取後餘下的溶液用0. 9mol/L NaOH溶液以1 : 1體積比萃取3次，合併NaOH萃取液並以3mol/L H2S04溶液調節至原木醋液pH值，以0.3 : 1二氯甲烷萃取3次，所得萃取液在4(TC條件下常壓蒸餾，在常壓、5(TC下乾燥得到固體即所述的抗氧化物質。 按照試驗例1的測定方法對本發明方法提取的抗菌物質(濃度為40mg/mL)進行抗菌活性測定，試驗結果表明，本發明方法提取的抗菌物質對測試的金黃色葡萄球菌、大腸桿菌和黑麴黴菌的抗菌圈直徑比木醋液原液大44. 37%、50. 67%、73. 26% ;對測試的葡萄炭疽病原菌和蘋果腐爛病原菌的半抑制濃度EC5。(mg/mL)比木醋液原液小73. 15%和74. 75%。可知，經此方法得到的抗菌物質抗菌效果明顯好於木醋液原液。
按照試驗例2和試驗例3的測定方法對本發明方法提取的抗氧化物質進行抗氧化活性測定。試驗結果表明，本發明方法提取的抗氧化物質(濃度為0. 010mg/mL)對DPffl 自由基的清除率比木醋液原液大41. 51X，對Fe"的還原能力比木醋液原液大42. 43%。可知，經此方法得到的抗氧化物質，抗氧化效果明顯好於木醋液原液。
實施例12 :抗菌物質和抗氧化物質的提取 將木醋液原液用O. 5 : 1的氯仿萃取至無色，萃取液用O. 8mol/L的NaHC03溶液以1 : 1體積比萃取3次，合併NaHC03萃取液並以3mol/L H2S04溶液調節至原木醋液pH值，以0.5 : 1的乙酸乙酯萃取3次，所得萃取液在4(TC、真空度為0. lMPa條件下減壓蒸餾、在常壓、7(TC下乾燥得到固體即所述的抗菌物質。將上述0.8mol/L NaHC03萃取後餘下的溶液用0. 7mol/L NaOH溶液以1 : 1體積比萃取3次，合併NaOH萃取液並以3mol/L H2S04溶液調節至原木醋液pH值，以0.7 : 1二氯甲烷萃取3次，所得萃取液在4(TC條件下常壓蒸餾，在常壓、5(TC下乾燥得到固體即所述的抗氧化物質。 按照試驗例1的測定方法對本發明方法提取的抗菌物質(濃度為40mg/mL)進行抗菌活性測定，試驗結果表明，本發明方法提取的抗菌物質對測試的金黃色葡萄球菌、大腸桿菌和黑麴黴菌的抗菌圈直徑比木醋液原液大43. 33%、50. 26%、71. 29% ;對測試的葡萄炭疽病原菌和蘋果腐爛病原菌的半抑制濃度EC5。(mg/mL)比木醋液原液小72. 56 %和73. 18%。可知，經此方法得到的抗菌物質抗菌效果明顯好於木醋液原液。
按照試驗例2和試驗例3的測定方法對本發明方法提取的抗氧化物質進行抗氧化活性測定。試驗結果表明，本發明方法提取的抗氧化物質(濃度為0. 010mg/mL)對DPffl 自由基的清除率比木醋液原液大42. 67X，對Fe"的還原能力比木醋液原液大43. 61%。可知，經此方法得到的抗氧化物質，抗氧化效果明顯好於木醋液原液。
實施例13 :抗菌物質和抗氧化物質的提取 將木醋液原液用O. 5 : 1的乙醚萃取至無色，萃取液用0.6mol/L的NaHC03溶液以1 : 1體積比萃取3次，合併NaHC03萃取液並以3mol/L H2S04溶液調節至原木醋液pH值，以0.5 : 1的乙酸乙酯萃取3次，所得萃取液在4(TC、真空度為0. lMPa條件下減壓蒸餾、在常壓、7(TC下乾燥得到固體即所述的抗菌物質。將上述0.6mol/L NaHC03萃取後餘下的溶液用1. 3mol/L NaOH溶液以1 : 1體積比萃取3次，合併NaOH萃取液並以3mol/L H2S04溶液調節至原木醋液pH值，以0.5 : 1的二氯甲烷萃取3次，所得萃取液在4(TC條件下常壓蒸餾，在常壓、5(TC下乾燥得到固體即所述的抗氧化物質。 按照試驗例1的測定方法對本發明方法提取的抗菌物質(濃度為40mg/mL)進行抗菌活性測定，試驗結果表明，本發明方法提取的抗菌物質對測試的金黃色葡萄球菌、大腸桿菌和黑麴黴菌的抗菌圈直徑比木醋液原液大41. 62%、46. 36%、70. 56% ;對測試的葡萄炭疽病原菌和蘋果腐爛病原菌的半抑制濃度EC5。(mg/mL)比木醋液原液小70. 11%和71. 97%。可知，經此方法得到的抗菌物質抗菌效果明顯好於木醋液原液。
按照試驗例2和試驗例3的測定方法對本發明方法提取的抗氧化物質進行抗氧化活性測定。試驗結果表明，本發明方法提取的抗氧化物質(濃度為0. 010mg/mL)對DPffl 自由基的清除率比木醋液原液大40. 02X，對Fe"的還原能力比木醋液原液大41. 52%。可知，經此方法得到的抗氧化物質，抗氧化效果明顯好於木醋液原液。
實施例14 :抗菌物質和抗氧化物質的提取 將木醋液原液用1 : 1的乙醚萃取至無色，萃取液用0. 7mol/L的NaHC03溶液以1 : 1體積比萃取3次，合併NaHC03萃取液並以3mol/L H2S04溶液調節至原木醋液pH值，以l : 1的乙酸乙酯萃取3次，所得萃取液在4(TC、真空度為0. lMPa條件下減壓蒸餾、在常壓、7(TC下乾燥得到固體即所述的抗菌物質。將上述0. 7mol/L NaHC(^萃取後餘下的溶液用1. Omol/L NaOH溶液以1 : 1體積比萃取3次，合併NaOH萃取液並以3mol/L H2S04溶液調節至原木醋液pH值，以l : 1二氯甲烷萃取3次，所得萃取液在4(TC條件下常壓蒸餾，在常壓、5(TC下乾燥得到固體即所述的抗氧化物質。 按照試驗例1的測定方法對本發明方法提取的抗菌物質(濃度為40mg/mL)進行抗菌活性測定，試驗結果表明，本發明方法提取的抗菌物質對測試的金黃色葡萄球菌、大腸桿菌和黑麴黴菌的抗菌圈直徑比木醋液原液大42. 58%、48. 63%、71.79% ;對測試的 葡萄炭疽病原菌和蘋果腐爛病原菌的半抑制濃度EC5。(mg/mL)比木醋液原液小71. 14%和 72. 21%。可知，經此方法得到的抗菌物質抗菌效果明顯好於木醋液原液。
按照試驗例2和試驗例3的測定方法對本發明方法提取的抗氧化物質進行抗氧化 活性測定。試驗結果表明，本發明方法提取的抗氧化物質(濃度為0. 010mg/mL)對DPffl 自 由基的清除率比木醋液原液大43. 66X，對Fe"的還原能力比木醋液原液大43. 49%。可 知，經此方法得到的抗氧化物質，抗氧化效果明顯好於木醋液原液。
實施例15 :抗菌物質和抗氧化物質的提取 將木醋液原液用0. 3 : 1的乙醚萃取至無色，萃取液用0. 5mol/L的NaHC(^溶液以 1 : 1體積比萃取3次，合併NaHC03萃取液並以3mol/L H2S04溶液調節至原木醋液pH值， 以0.3 : 1的乙酸乙酯萃取3次，所得萃取液在4(TC、真空度為0. lMPa條件下減壓蒸餾、 在常壓、7(TC下乾燥得到固體即所述的抗菌物質。將上述0.5mol/L NaHC03萃取後餘下的 溶液用0. 9mol/L NaOH溶液以1 : 1體積比萃取3次，合併NaOH萃取液並以3mol/L H2S04 溶液調節至原木醋液pH值，以0.3 : 1的二氯甲烷萃取3次，所得萃取液在4(TC條件下常 壓蒸餾，在常壓、5(TC下乾燥得到固體即所述的抗氧化物質。 按照試驗例1的測定方法對本發明方法提取的抗菌物質(濃度為40mg/mL)進 行抗菌活性測定，試驗結果表明，本發明方法提取的抗菌物質對測試的金黃色葡萄球菌、 大腸桿菌和黑麴黴菌的抗菌圈直徑比木醋液原液大40. 97%、42. 65%、68. 09% ;對測試的 葡萄炭疽病原菌和蘋果腐爛病原菌的半抑制濃度EC5。(mg/mL)比木醋液原液小68. 22 %和
69. 74%。可知，經此方法得到的抗菌物質抗菌效果明顯好於木醋液原液。 按照試驗例2和試驗例3的測定方法對本發明方法提取的抗氧化物質進行抗氧化 活性測定。試驗結果表明，本發明方法提取的抗氧化物質(濃度為0. 010mg/mL)對DPffl 自 由基的清除率比木醋液原液大39. 83X，對Fe"的還原能力比木醋液原液大40. 37%。可 知，經此方法得到的抗氧化物質，抗氧化效果明顯好於木醋液原液。
實施例16 :抗菌物質和抗氧化物質的提取 將木醋液原液用O. 5 : 1的乙醚萃取至無色，萃取液用0.8mol/L的NaHC03溶液以 1 : 1體積比萃取3次，合併NaHC03萃取液並以3mol/L H2S04溶液調節至原木醋液pH值， 以0.5 : 1的乙酸乙酯萃取3次，所得萃取液在4(TC、真空度為0. lMPa條件下減壓蒸餾、 在常壓、7(TC下乾燥得到固體即所述的抗菌物質。將上述0.8mol/L NaHC03萃取後餘下的 溶液用0. 7mol/L NaOH溶液以1 : 1體積比萃取3次，合併NaOH萃取液並以3mol/L H2S04 溶液調節至原木醋液pH值，以0.7 : 1的二氯甲烷萃取3次，所得萃取液在4(TC條件下常 壓蒸餾，在常壓、5(TC下乾燥得到固體即所述的抗氧化物質。 按照試驗例1的測定方法對本發明方法提取的抗菌物質(濃度為40mg/mL)進 行抗菌活性測定，試驗結果表明，本發明方法提取的抗菌物質對測試的金黃色葡萄球菌、 大腸桿菌和黑麴黴菌的抗菌圈直徑比木醋液原液大40. 12%、41.05%、68. 31% ;對測試的 葡萄炭疽病原菌和蘋果腐爛病原菌的半抑制濃度EC5。(mg/mL)比木醋液原液小69. 62 %和
70. 23%。可知，經此方法得到的抗菌物質抗菌效果明顯好於木醋液原液。 按照試驗例2和試驗例3的測定方法對本發明方法提取的抗氧化物質進行抗氧化 活性測定。試驗結果表明，本發明方法提取的抗氧化物質(濃度為0. 010mg/mL)對DPffl 自由基的清除率比木醋液原液大41. 52X，對Fe"的還原能力比木醋液原液大41. 89%。可 知，經此方法得到的抗氧化物質，抗氧化效果明顯好於木醋液原液。
實施例17 :抗菌物質和抗氧化物質的提取 將木醋液原液用1 : 1的二氯甲烷萃取至無色，萃取液用0. 6mol/L的NaHC03溶 液以l : l體積比萃取3次，合併NaHC03萃取液並以3mol/L H^04溶液調節至原木醋液pH 值，以l : 1的乙酸乙酯萃取3次，所得萃取液在4(TC、真空度為0. lMPa條件下減壓蒸餾、 在常壓、7(TC下乾燥得到固體即所述的抗菌物質。將上述0.6mol/L NaHC03萃取後餘下的 溶液用0. 9mol/L NaOH溶液以1 : 1體積比萃取3次，合併NaOH萃取液並以3mol/L H2S04 溶液調節至原木醋液pH值，以1 : 1二氯甲烷萃取3次，所得萃取液在4(TC條件下常壓蒸 餾，在常壓、5(TC下乾燥得到固體即所述的抗氧化物質。 按照試驗例1的測定方法對本發明方法提取的抗菌物質(濃度為40mg/mL)進 行抗菌活性測定，試驗結果表明，本發明方法提取的抗菌物質對測試的金黃色葡萄球菌、 大腸桿菌和黑麴黴菌的抗菌圈直徑比木醋液原液大49. 12%、53. 15%、75. 19% ;對測試的 葡萄炭疽病原菌和蘋果腐爛病原菌的半抑制濃度EC5。(mg/mL)比木醋液原液小74. 39 %和 75. 03%。可知，經此方法得到的抗菌物質抗菌效果明顯好於木醋液原液。
按照試驗例2和試驗例3的測定方法對本發明方法提取的抗氧化物質進行抗氧化 活性測定。試驗結果表明，本發明方法提取的抗氧化物質(濃度為0. 010mg/mL)對DPffl 自 由基的清除率比木醋液原液大42. 71X，對Fe"的還原能力比木醋液原液大43. 55%。可 知，經此方法得到的抗氧化物質，抗氧化效果明顯好於木醋液原液。
實施例18 :抗菌物質和抗氧化物質的提取 將木醋液原液用0. 5 : 1的二氯甲烷萃取至無色，萃取液用0. 7mol/L的NaHC03 溶液以1 : 1體積比萃取3次，合併NaHC03萃取液並以3mol/L H2S04溶液調節至原木醋液 pH值，以0.5 : 1的乙酸乙酯萃取3次，所得萃取液在4(TC、真空度為0. lMPa條件下減壓 蒸餾、在常壓、7(TC下乾燥得到固體即所述的抗菌物質。將上述0.7mol/L NaHC03萃取後餘 下的溶液用1. lmol/L NaOH溶液以1 : 1體積比萃取3次，合併NaOH萃取液並以3mol/L H^(^溶液調節至原木醋液pH值，以0.5 : 1二氯甲烷萃取3次，所得萃取液在4(TC條件下 常壓蒸餾，在常壓、5(TC下乾燥得到固體即所述的抗氧化物質。 按照試驗例1的測定方法對本發明方法提取的抗菌物質(濃度為40mg/mL)進 行抗菌活性測定，試驗結果表明，本發明方法提取的抗菌物質對測試的金黃色葡萄球菌、 大腸桿菌和黑麴黴菌的抗菌圈直徑比木醋液原液大47. 21%、52. 39%、74. 77% ;對測試的 葡萄炭疽病原菌和蘋果腐爛病原菌的半抑制濃度EC5。(mg/mL)比木醋液原液小74. 39%和 75. 91%。可知，經此方法得到的抗菌物質抗菌效果明顯好於木醋液原液。
按照試驗例2和試驗例3的測定方法對本發明方法提取的抗氧化物質進行抗氧化 活性測定。試驗結果表明，本發明方法提取的抗氧化物質(濃度為0. 010mg/mL)對DPffl 自 由基的清除率比木醋液原液大43. 96X，對Fe"的還原能力比木醋液原液大43. 91%。可 知，經此方法得到的抗氧化物質，抗氧化效果明顯好於木醋液原液。
實施例19 :抗菌物質和抗氧化物質的提取 將木醋液原液用1 : 1的乙酸乙酯萃取至無色，萃取液用0. 6mol/L的NaHC03溶 液以l : l體積比萃取3次，合併NaHC03萃取液並以3mol/L H^04溶液調節至原木醋液pH值，以l : 1的乙酸乙酯萃取3次，所得萃取液在4(TC、真空度為0. lMPa條件下減壓蒸餾、 在常壓、7(TC下乾燥得到固體即所述的抗菌物質。將上述0.6mol/L NaHC03萃取後餘下的 溶液用1. 3mol/L NaOH溶液以1 : 1體積比萃取3次，合併NaOH萃取液並以3mol/L H2S04 溶液調節至原木醋液pH值，以1 : 1二氯甲烷萃取3次，所得萃取液在4(TC條件下常壓蒸 餾，在常壓、5(TC下乾燥得到固體即所述的抗氧化物質。 按照試驗例1的測定方法對本發明方法提取的抗菌物質(濃度為40mg/mL)進 行抗菌活性測定，試驗結果表明，本發明方法提取的抗菌物質對測試的金黃色葡萄球菌、 大腸桿菌和黑麴黴菌的抗菌圈直徑比木醋液原液大48. 21%、53. 39%、75. 77% ;對測試的 葡萄炭疽病原菌和蘋果腐爛病原菌的半抑制濃度EC5。(mg/mL)比木醋液原液小75. 39 %和 76. 91%。可知，經此方法得到的抗菌物質抗菌效果明顯好於木醋液原液。
按照試驗例2和試驗例3的測定方法對本發明方法提取的抗氧化物質進行抗氧化 活性測定。試驗結果表明，本發明方法提取的抗氧化物質(濃度為0. 010mg/mL)對DPffl 自 由基的清除率比木醋液原液大43. 36X，對Fe"的還原能力比木醋液原液大43. 81%。可 知，經此方法得到的抗氧化物質，抗氧化效果明顯好於木醋液原液。
實施例20 :抗菌物質和抗氧化物質的提取 將木醋液原液用0. 5 : 1的乙酸乙酯萃取至無色，萃取液用0. 5mol/L的NaHC03 溶液以1 : 1體積比萃取3次，合併NaHC03萃取液並以3mol/L H2S04溶液調節至原木醋液 pH值，以0.5 : 1的乙酸乙酯萃取3次，所得萃取液在4(TC、真空度為0. lMPa條件下減壓 蒸餾、在常壓、7(TC下乾燥得到固體即所述的抗菌物質。將上述0.5mol/L NaHC03萃取後餘 下的溶液用0. 7mol/L NaOH溶液以1 : 1體積比萃取3次，合併NaOH萃取液並以3mol/L H^(^溶液調節至原木醋液pH值，以0.5 : 1二氯甲烷萃取3次，所得萃取液在4(TC條件下 常壓蒸餾，在常壓、5(TC下乾燥得到固體即所述的抗氧化物質。 按照試驗例1的測定方法對本發明方法提取的抗菌物質(濃度為40mg/mL)進 行抗菌活性測定，試驗結果表明，本發明方法提取的抗菌物質對測試的金黃色葡萄球菌、 大腸桿菌和黑麴黴菌的抗菌圈直徑比木醋液原液大48. 35%、53. 04%、75. 82% ;對測試的 葡萄炭疽病原菌和蘋果腐爛病原菌的半抑制濃度EC5。(mg/mL)比木醋液原液小75. 27 %和 76. 36%。可知，經此方法得到的抗菌物質抗菌效果明顯好於木醋液原液。
按照試驗例2和試驗例3的測定方法對本發明方法提取的抗氧化物質進行抗氧化 活性測定。試驗結果表明，本發明方法提取的抗氧化物質(濃度為0. 010mg/mL)對DPffl 自 由基的清除率比木醋液原液大41. 75X，對Fe"的還原能力比木醋液原液大42. 48%。可 知，經此方法得到的抗氧化物質，抗氧化效果明顯好於木醋液原液。
試驗例1 :抗菌試驗測定方法 細菌(金黃色葡萄球菌、大腸桿菌)培養基蛋白腖6g，牛肉膏2.5g，酵母膏3g， 瓊脂20g，水1000mL， pH7. 0 ; 黴菌(黑麴黴菌)培養基馬鈴薯200g，葡萄糖20g，氯化鈉5g，瓊脂20g，水 1000mL，自然pH。 菌懸液或孢子懸液製備預先將金黃色葡萄球菌、大腸桿菌和黑麴黴菌菌種分 別用其適宜的斜面培養基進行活化，然後各挑取四環菌苔，用無菌水分別製成含菌數約 1Q9cfu/mL的菌懸液，備用。
將固體培養基溶化倒入各培養平皿，待冷卻凝固後，加入0. lmL金黃色葡萄球菌、 大腸桿菌懸液以及黑麴黴菌孢子懸液，然後用無菌塗布棒塗布均勻。將直徑為6mm的消毒 濾紙片放入木醋液原液及其提取物(樣液)中浸泡12小時後，再等距離、平穩地將3個浸 泡有樣液的濾紙片放在含菌的固體培養基平面上，以無菌水作為對照。每個處理重複3次， 最後將各皿放入各種菌適宜的溫度培養。金黃色葡萄球菌和大腸桿菌採用37t:，培養24h ; 黑麴黴菌採用2『C，培養72h。取出後，測量抗菌圈直徑。
抗菌圈直徑(cm)=測量直徑平均值-0. 6 ; 以上方法參考文獻程麗娟，薛泉宏，2000微生物學實驗技術，西安世界圖書出 版社出版所述方法進行。 對葡萄炭疽病原菌和蘋果腐爛病原菌的抑制作用採用菌絲生長速率法。將木醋液 原液及其木醋液提取物用無菌水配製成一定濃度的馬鈴薯葡萄糖瓊脂(PDA)培養基。對照 樣培養基為同等體積的無菌水和PDA培養基混合。在預實驗的基礎上，選擇合適的5個質量 濃度梯度，每個設3次重複，接入生長旺盛的直徑為6mm的葡萄炭疽病原菌(Gloeosporium fructige皿m)、蘋果腐爛病原菌(Valsa ceratosperma)菌餅，在25"C條件下培養，定期觀 察並測定菌落直徑，每個菌落十字交叉測2個直徑，以其平均數代表菌落大小。用下列公式 計算菌絲生長抑制率 菌落直徑(cm)=測量菌落直徑平均值-0. 6 ;抗菌率(％ )=(對照菌落直徑-樣液處理菌落直徑)/對照菌落直徑X100 所得數據經Finney機率值分析法用DPS統計軟體求出EC5。值，對各種植物病原菌 的抑制效果以ECs。表示。 以上方法參考文獻慕立義，1994，植物化學保護研究方法.北京中國農業出版 社出版所述方法進行。
試驗例2:清除DPra 自由基能力測定 在2. OmL 60iimol/L DPK1 無水乙醇溶液中分別加入3mL—定濃度的木醋液原 液或木醋液提取物，用力搖勻後於室溫下放置30min，測定其在517nm下的吸光值(As);以 3mL水代替樣品為空白對照(A。)；以3mL樣品與2mL無水乙醇混合液為樣品對照(Ax)，以消 除樣品本身顏色的影響；以3mL水和2mL無水乙醇的混合液調儀器零點。每個樣品每個濃 度重複3次，取平均值。清除率按下式計算
DPPH 清除率(% ) = [A。-(As_Ax)]/A。X100% 以上方法參考文獻牛鵬飛，仇農學，杜寅.2008.蘋果渣中不同極性多酚的分離 及體外抗氧化活性研究，農業工程學報，24(3) :237-242所述方法進行。
試驗例3 :FRAP法測定木醋液的還原能力 取一定濃度的木醋液原液或木醋液提取物各2mL，加入3mL TPTZ工作液，混合後 於37t:反應，30min後，於593nm處測定吸光度值和還原力標準曲線，計算FeS04濃度，以 FeS04濃度(mg/L)表示木醋液的還原能力大小。 以上方法以及TPTZ工作液的配製和還原力標準曲線的製作參考文獻牛鵬飛，仇 農學，杜寅.2008.蘋果渣中不同極性多酚的分離及體外抗氧化活性研究.農業工程學報， 24(3) :237-242所述方法進行。
試驗例4 :木醋液原液的化學組成
採用氣-質聯用儀(GC-MS)測定了原木醋液的化學組成。氣-質聯用測定條件 將脫水木醋液或木醋液提取物用乙醚稀釋後，直接進行GC-MS分析。氣相色譜條件DB-WAX 毛細管柱(30mX0. 25mmXO. 25 y m)，進樣口溫度220°C ，柱溫60°C ，恆溫2min後，以6. 0°C / min速度升溫至24(TC，恆溫8min。分流進樣80 : 1。載氣流速1. OmL/min。質譜條件EI 源，電子能量70eV，離子源溫度25(TC，質量掃描範圍35 400amu。質譜標準庫NIST庫。
結果見表5。由表5可以看出，木醋液原液中含量最多的是有機酸和酚類物質，其 中有機酸含量為32. 46%。 表5木醋液原液化學成分的GC-MS分析結果
:0127]序號化合物名稱 相對含量/%
:0128] 1 酮類(Ketones) 6.42
:0129] 2 有k酸類(organic acid) 32.46
:0130] 3 呋喃及其衍生物(Furan and pyran derivatives) 5.56
:0131] 4 酯類(esters) 0.98
:0132] 5 酚類(Phenol and derivatives) 39.34
:0133] 6 醇(Alcohols) 0.40
:0134] 7 醛(Aldehydes) 0. 37
:0135] 8 烷芳醚(Alkyl aryl ether) 7.9
:0136] 9 含氮化合物(Nitrogenated compounds) 0.33 試驗例5從木醋液中提取的抗菌物質的化學組成 將木醋液原液用0. 5 : 1的乙酸乙酯萃取至無色，萃取液用0. 6mol/L的NaHC03 溶液以1 : 1體積比萃取3次，合併NaHC03萃取液並以3mol/L H2S04溶液調節至原木醋液 pH值，以0.5 : 1的乙酸乙酯萃取3次，所得萃取液在4(TC、真空度為0. lMPa條件下減壓 蒸餾、在常壓、7(TC下乾燥得到固體即所述的抗菌物質。將此物質採用上述試驗例4相同的 氣-質聯用測定條件測定了化學組成，結果見表6。由表6可以看出，提取出的抗菌物質中 有機酸含量提高到78. 21%，其它物質的含量都有很大程度降低。
表6從木醋液中提取出的抗菌物質的GC-MS分析結果序號化合物名稱相對含1酮類(Ketones)4. 352有機酸類(organic acid)78. 213呋卩南及其衍生物(Furan and pyran derivatives)1. 714酯類(esters)0. 355酷類(Phenol and derivatives)13. 61 試驗例6木醋液原液及其提取的抗氧化物質的總酚含量 將試驗例5中0. 6mol/L NaHC03萃取後餘下的溶液用0. 6mol/L Na2C03溶液以 1 : 1體積比萃取3次，合併NaOH萃取液並調節至原木醋液pH值，以0.5 : l二氯甲烷萃取 3次，所得萃取液在4(TC條件下常壓蒸餾，在常壓、5(TC下乾燥得到固體即所述的抗氧化物 質。按照Folin-Ciocalteu法(參考文獻錢華等，竹醋液中酚類化合物Folin-Ciocalteu 法測定[J].林產化學與工業.2007,10(27) :105-108)測定了此物質的總酚含量。
結果見表7。由表7可以看出，提取出的抗氧化物質中酚類物質的含量比木醋液原
液有很大程度提高。 表7總酚含量測定結果
樣品總酚濃度/(mg/g)木醋液原液462. 170.4mol,化20)3萃取液1036.210.5mol,化20)3萃取液1168.840.6mol,化20)3萃取液1247. 990.7mo1,化20)3萃取液1121. 010.7mo1,Na0H萃取液1186.320.9mo1,Na0H萃取液1197. 591.Omol,Na0H萃取液1398.781.lmol,Na0H萃取液1288.751.3mo1,1Na0H萃取液1186.9權利要求
一種從木醋液中連續提取抗菌物質和抗氧化物質的方法，其特徵在於，包括下列步驟1)將木醋液原液用體積比為0.3∶1～1∶1的乙酸乙酯或二氯甲烷或氯仿或乙醚萃取至無色，萃取液用0.5～0.8mol/L NaHCO3溶液以1∶1體積比萃取至少3次，合併NaHCO3萃取液；2)調節萃取液至原木醋液pH值，以體積比為0.3∶1～1∶1的乙酸乙酯萃取至少3次，所得萃取液經減壓蒸餾、乾燥得到固體即所述的抗菌物質；3)將萃取後餘下的溶液用0.4～0.7mol/L Na2CO3溶液或0.7～1.3mol/LNaOH溶液以1∶1體積比萃取至少3次，合併Na2CO3或NaOH萃取液；4)調節萃取液至原木醋液pH值，以體積比為0.3∶1～1∶1的二氯甲烷萃取至少3次，所得萃取液經常壓蒸餾、乾燥得到固體即所述的抗氧化物質。
2. 根據權利要求1所述的一種從木醋液中連續提取抗菌物質和抗氧化物質的方法，其 特徵在於，所述的木醋液為高溫乾餾核桃殼所產生的氣體冷凝而成的液體。
3. 根據權利要求1所述的從木醋液中連續提取抗菌物質和抗氧化物質的方法，其特徵 在於，調節萃取液至原木醋液pH值所用的試劑是3mol/L H2S04溶液。
4. 根據權利要求1所述的從木醋液中連續提取抗菌物質和抗氧化物質的方法，其特徵 在於，步驟2)中所述的減壓蒸餾的條件為4(TC、真空度為0. lMPa ;所述的乾燥條件為在 常壓下、7(TC。
5. 根據權利要求1所述的從木醋液中連續提取抗菌物質和抗氧化物質的方法，其特徵在於，步驟4)中所述的常壓蒸餾的條件為4(TC ;所述的乾燥條件為在常壓下、5(TC。
全文摘要
本發明公開了一種從木醋液中連續提取抗菌物質和抗氧化物質的方法，該方法是將木醋液原液用乙酸乙酯萃取至無色，萃取液用NaHCO3溶液以1∶1體積比萃取至少3次，合併NaHCO3萃取液並調節至原木醋液pH值，以1∶1的乙酸乙酯萃取至少3次，所得萃取液經減壓蒸餾、乾燥得到固體即抗菌物質，將餘下的溶液用Na2CO3溶液以1∶1體積比萃取至少3次，合併Na2CO3萃取液並調節至原木醋液pH值，用二氯甲烷萃取至少3次，所得萃取液經常壓蒸餾、乾燥得到固體即抗氧化物質。本發明提取出的抗菌物質和抗氧化物質比木醋液原液具有更強的抑菌和抗氧化效果，可廣泛應用於農業、食品、日化、醫藥等領域。
文檔編號A61P31/04GK101697738SQ200910218609
公開日2010年4月28日 申請日期2009年10月27日 優先權日2009年10月27日
發明者劉勝臣, 尉芹, 張珊珊, 施琳, 薛雷, 馬希漢 申請人:西北農林科技大學