新的取代的丙醯胺苯甲醯脲衍生物，含它們的藥物組合物及其用途的製作方法

2023-10-05 00:31:49

專利名稱：新的取代的丙醯胺苯甲醯脲衍生物，含它們的藥物組合物及其用途的製作方法
技術領域：
本發明涉及新的2-取代丙醯胺苯甲醯脲衍生物或其藥用鹽，其製備方法，含它們的藥物組合物及其作為微管蛋白抑制劑的用途。
背景技術：
微管是真核生物細胞骨架的重要組成成分，參與細胞的分裂，運動和物質運輸等，具有多種生物學活性。阻斷微管功能的抗微管藥物廣泛運用於醫學領域，比較熟知的有抗腫瘤，抗痛風，細胞核型診斷試劑，抗寄生蟲及農業上的殺蟲劑等方面。抗微管蛋白藥物是目前有效的一類抗腫瘤藥物，它能干擾細胞分裂中紡錘體的形成，從而使細胞停滯在有絲分裂中期，阻斷細胞分裂增值；同時，由於微管是信號傳導和物質運輸的通道，幹擾微管的形成可影響與凋亡相關的信號傳導通路，引起細胞凋亡；基於這些抗腫瘤分子機制的闡明，這類抗腫瘤藥日益引起人們的關注。微管蛋白抑制劑主要可分為兩種類型一類是紫杉醇型，其促進微管蛋白聚合，抑制微管解聚；紫杉醇自1989年問世，相繼有紫杉醇類似物產生Epothilone(1995)，Discodermolide(1996)，Eleutherobins(1997)and DepoB DepoF(2001)等；另一類是秋水仙素或長春新鹼型，與微管蛋白結合，抑制微管聚合。這類藥物的類似物有phomopsinA(1995)，cryptophycin(1998)，2-aroylindoles(2001)。
發明目的本發明的目的是尋找新的微管蛋白抑制劑。
發明簡述本發明人經研究現已發現2-取代的丙醯胺苯甲醯脲衍生物或其藥用鹽具有優良的抑制微管蛋白組裝的作用，從而可成為有效的抗腫瘤化合物。
由此，本發明第一方面涉及式I的2-取代丙醯胺苯甲醯脲衍生物或其藥用鹽 式I其中X為滷素，如氟、氯、溴或碘。
本發明還涉及作為抗腫瘤劑的式I 2-取代丙醯胺苯甲醯脲衍生物或其藥用鹽 其中X為滷素，如氟、氯、溴或碘。
本發明還涉及藥物組合物，其包括式I 2-取代的丙醯胺苯甲醯胺衍生物或其藥用鹽及藥用賦形劑或載體。
本發明還涉及作為微管蛋白抑制劑或抗腫瘤劑的藥物組合物，其包括式I 2-取代的丙醯胺苯甲醯胺衍生物或其藥用鹽及藥用賦形劑或載體。
本發明還涉及式I 2-取代的丙醯胺苯甲醯脲衍生物或其藥用鹽在製備用於治療腫瘤或與微管蛋白組裝有關疾病的藥物中的用途。
本發明還涉及治療腫瘤或與微管蛋白組裝有關疾病的方法，其包括將治療有效量的式I 2-取代丙醯胺苯甲醯脲衍生物給藥於需治療的患者。
本發明進一步涉及式I 2-取代丙醯胺苯甲醯脲衍生物或其藥用鹽的製備方法，其包括將下式的化合物 與下式化合物反應， 其中X為滷素。
發明詳述根據本發明，「X」為氟，氯，溴或碘，優選為溴。
根據本發明，優選X為溴的式I化合物，即3-(2-溴代丙醯氨基)苯甲醯脲。
根據本發明，式I丙醯胺苯甲醯脲衍生物的藥用鹽包括式I丙醯胺苯甲醯脲衍生物與無機酸或有機酸形成的藥用鹽，無機酸舉例有鹽酸，硫酸或磷酸；有機酸舉例有甲酸，乙酸，苯甲酸，甲磺酸，乙磺酸。
本發明中所用術語「患者」意指哺乳動物，例如人。
根據本發明，本發明的化合物或藥物組合物可單獨或通過口服或非腸道或局部途徑使用，口服的劑型舉例講有片劑，膠囊，溶液，混懸液，粉劑。非腸道給藥的劑型舉例講有注射液，粉針劑等。
根據本發明，本發明所用的原料3-氨基苯甲醯脲的製備可見(Jiang ID，Roboz J.Weisz I.Deng L，Holland JF，Bekesi JG.Synthesis，canceridal and antimicrotubule activities of 3-(haloacetamido)-benzolureas.Anticancer Drug Des.1998，13(7)735-747)。
式II化合物的製備可見「Beil 2，248；256。


圖1和圖2表示本發明化合物1對微管組裝和解聚的作用。圖1具體表示在本發明化合物1(1或4μM)或paclitaxel(20μM)或長春鹼(20μM)存在或不存在下於反應緩衝液中的游離微管與GTP和Mg2+D於37℃培養從而進行的組裝；圖2具體表示在本發明化合物1(32μM)或Paclitaxel(20μM)或長春鹼(20μM)存在或不存在下組裝的微管在冰中培養從而進行的解聚。微管的組裝或解聚每5分鐘於350nM測定OD(光密度)。
下面的實施例和生物活性試驗用來進一步說明本發明，但不意味著對本發明的任何限制。
實施例1 3-(2-溴代丙醯氨基)苯甲醯脲的製備 將0.895g(5.0mmol)3-氨基苯甲醯脲於室溫下溶解於1.0ml N，N-二甲基乙醯胺中，滴加1.0ml2-溴丙醯溴，並在室溫下繼續攪拌2小時，攪拌下加入100ml冰水，有沉澱析出，抽濾，用水充分洗滌，得灰白色固體，用甲醇重結晶，得白色固體0.8g，收率為51.1％。
Mp252-254℃；FABM+1314；IR(kBr)cm-11712cm-1，1674cm-1；300MHZ，1H-NMR(d6-DMSO)δ7.80(dd，1H，2-芳環氫)，7.68(d，1H，6-芳環氫)，7.43(m，2H，4-5-芳環氫)，4.70(q，1H，-CHBr)，1.75(d，3H，-CH3)，10.55，10.52，8.14，8.0(4s，活潑氫)
本發明實施例1化合物(化合物1)的體外抗腫瘤活性化合物1體外對腫瘤淋巴細胞和多種不同的實體瘤細胞的抑制作用見下面表1，其中化合物1的抗瘤活性以半數有效濃度IC50表示，IC50值在0.3μM-3.0μM之間，結果見表1。
表1.化合物1對多種腫瘤細胞的半數有效濃度IC50

由表1結果可看到，本發明化合物對多種腫瘤細胞有良好的抑制作用。
化合物1對微管蛋白組裝的抑制純化的牛腦微管蛋白購自Sigma(St.Lows，MO)。化合物1對微管蛋白組裝一解組裝過程的作用採用Vender建議的條件進行測定。對於組裝抑制，是將100μl微管蛋白溶液(500-600μg蛋白/ml)溫和地與400μl反應緩衝液(含0.1M MES，1mM EGTA，0.5mM MgCl2)，0.1mM EDTA和2.5M甘油於35℃混合。然後將化合物1加到每個樣品池中。在加GTP到每個樣品中使最終濃度為1mM之後，在分光光度計(pharmaceia LKB，Uppsala，Sweden)上於350nm每隔5分鐘測量光密度(OD)的變化以監測微管蛋白組裝過程。於室溫40分鐘內觀察到整個組裝過程。對於解組裝的抑制，按上述方法將化合物1加到含再聚微管蛋白的池中，並在融冰中培養。於350nm監測OD變化30分鐘直到對照組中OD值返回到起始水平，即組裝一脫組裝循環完全。溶劑用作對照但對組裝或脫組裝過程均無作用。結果見圖A和B。圖A和B表明本發明化合物1可抑制微管蛋白的組裝，而不阻滯微管蛋白的解聚。
化合物1體內抗腫瘤作用裸鼠(6-7周齡，16-20克重)來自中國醫科院實驗動物中心並用於人肝癌細胞BEC-7402異種移植。在培養前小心除去所有腫瘤移植組織的結締組織和血塊。在實驗小鼠背部皮下移植人腫瘤細胞(4mm3/鼠)。一星期後，帶腫瘤裸鼠隨機分為溶劑對照和治療組，每組8隻小鼠。在移植後第8天腹膜給予化合物1(劑量5，10或15mg/kg)。每隔4天給予一次，再給予6次。每星期測腫瘤體積來觀察治療反應，直到對照組腫瘤體積達到2000mm3。由測經儀得到兩個垂直腫瘤直徑，寬和長，然後由下式得到腫瘤體積，腫瘤腫瘤＝長×寬2×0.52，結果見表2表2.化合物1對人肝癌細胞裸鼠體內異種移植的生長抑制作用組別給藥方案動物數 體重(X±SD) 瘤體積 抑瘤率開始最後 (％)對照 8 20.1±2.2 23.4±5.0 2026.8±1072.1化合物1i.p 7 19.2±2.1 21.9±3.6 831.8±477.0*58.910mg/kg/4天*P＜0.0權利要求
1.式I的2-取代丙醯胺苯甲醯脲衍生物或其藥用鹽 式I其中X為滷素，如氟、氯、溴或碘。
2.作為抗腫瘤劑的式I 2-取代丙醯胺苯甲醯脲衍生物或其藥用鹽 其中X為滷素，如氟、氯、溴或碘。
3.權利要求1或2的式I 2-取代丙醯胺苯甲醯脲衍生物或其藥用鹽，其中所述化合物是3-(2-溴代丙醯氨基)苯甲醯脲。
4.藥物組合物，其包括式I 2-取代的丙醯胺苯甲醯胺衍生物或其藥用鹽及藥用賦形劑或載體。
5.作為微管蛋白抑制劑或抗腫瘤劑的藥物組合物，其包括式I 2-取代的丙醯胺苯甲醯胺衍生物或其藥用鹽及藥用賦形劑或載體。
6.權利要求4或5的藥物組合物，其中式I 2-取代的丙醯胺苯甲醯胺衍生物或其藥用鹽是3-(2-溴代丙醯氨基)苯甲醯脲。
7.式I 2-取代的丙醯胺苯甲醯脲衍生物或其藥用鹽在製備用於治療腫瘤或與微管蛋白組裝有關疾病的藥物中的用途。
8.權利要求7的用途，其中式I 2-取代的丙醯胺苯甲醯胺衍生物或其藥用鹽是3-(2-溴代丙醯氨基)苯甲醯脲。
9.式I 2-取代丙醯胺苯甲醯脲衍生物或其藥用鹽的製備方法，其包括將下式的化合物 與下式化合物反應， 其中X為滷素。
全文摘要
本發明涉及新的2－取代丙醯胺苯甲醯脲衍生物或其藥用鹽，其製備方法，含它們的藥物組合物及其作為微管蛋白抑制劑的用途。
文檔編號C07C273/18GK1488624SQ0214428
公開日2004年4月14日 申請日期2002年10月10日 優先權日2002年10月10日
發明者蔣建東, 李建農, 宋丹青 申請人:中國醫學科學院醫藥生物技術研究所