高產脲酶的聚多麴黴及其用途的製作方法

2023-10-04 23:53:19 6

專利名稱：高產脲酶的聚多麴黴及其用途的製作方法
技術領域：
本發明涉及高產脲酶的聚多麴黴及其用途，屬於微生物領域。
背景技術：
脲酶(Urease, urea amidohydrolase, EC 3. 5.)，又稱尿素氨基水解酶，存在於大多數細菌、麴黴和高等植物裡。它是一種醯胺酶、能使有機物質分子中酶鍵的水解。其作用極為專性的，它僅能水解尿素，水解的最終產物是氨和碳酸[1]。在國外，乳酸桿菌已經被用於生產脲酶酶製劑，能有效地減少葡萄酒中尿素含量 [2_6]。在國內，脲酶已經被用於降低黃酒中尿素含量。但是，酒用脲酶在我國尚未形成生產能力，目前所用的酶製劑均從國外進口 [7]。而在白酒行業中，這方面的研究幾乎是空白。因此酒用脲酶的研究對我國釀酒業的發展，拓展國際市場等方面均有深遠的意義。目前，江南大學分離獲得的腸出血性大腸埃希氏菌，產脲酶活性為O.58Um。浙江大學分離的高產酸性脲酶菌株肺炎克雷伯氏菌，產脲酶活性達到17. 17U[9]。這些產脲酶菌株的屬於細菌類，是從動物糞便(鳥糞、鼠糞、牛羊糞便)、農田土壤、汙泥等中分離獲得[8]。現有研究結果表明，海洋來源的聚多麴黴(Aspergillus sydowii) PFW-13能夠產生抗腫瘤活性次級代謝產物[1°];胡利勇報導了 A. sydowii LC-562有較強的產纖維素酶活性[1]。至今未報導聚多麴黴有高產脲酶的能力。

發明內容
本發明所要解決的第一個技術問題是提供一株高產脲酶的聚多麴黴菌株Aspergillus sydowii JNC-U5,該菌株已於2012年9月18日保藏於中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(CGMCC)，保藏號為CGMCC No. 6577，保藏地址北京市朝陽區北辰西路I號院3號中國科學院微生物研究所，郵編100101。進一步的，所述聚多麴黴的18S rDNA的序列如SEQ ID No.1所示。本發明還提供了所述的聚多麴黴在生產脲酶中的用途。本發明還提供了所述的聚多麴黴在釀酒中的用途。本發明還提供了所述的聚多麴黴在黃酒生產中的用途。本發明的菌株是從四川劍南春(集團)有限責任公司的酒麴中分離獲得。該菌株為聚多麴黴，特徵如下(I)菌落特徵菌落在ME培養基上輻射生長，有輻射形溝紋，28°C培養7天直徑約22_30mm ;顏色呈灰綠色，周圍有白色的暈圈；菌落反面呈淡褐或暗褐色。(2)分生孢子及分生孢子梗特徵分生孢子頭球形，小分生孢子頭，呈疏鬆柱形或散亂；分生孢子梗直接生於基質或生於氣生菌絲，分生孢子為球形或近球形，孢子表面有小刺。(3)培養條件
培養基5 7波美麥芽汁；溫度3(T35°C ;液態發酵15(T200rpm，6 8天。本發明的有益效果在於本發明首次發現一株產脲酶的聚多麴黴。該菌株產脲酶活性可達到49. 7U，為脲酶的生產提供了寶貴的菌株資源。本發明的聚多麴黴是從酒麴中分離出來的，所產的脲酶可用於提高酒麴中脲酶的活性，有效降低曲藥中尿素的含量，提高白酒的安全質量。同時，本發明聚多麴黴也為生產酒用脲酶製劑提供了新的選擇，具有極大的應用和推廣價值。本發明提供的聚多麴黴(Aspergillus sydowii) JNC-U5,於2012年9月18日保藏於中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(CGMCC)，保藏號為CGMCC No. 6577，保藏地址北京市朝陽區北辰西路I號院3號中國科學院微生物研究所，郵編100101。


圖1本發明菌株的菌落形態圖2本發明菌株的分生孢子及分生孢子梗的形態圖3本發明菌株分生孢子的超微結構圖4本發明菌株的分生孢子梗的超微結構
具體實施例方式本發明的聚多麴黴(Aspergillus sydowii)JNC_U5於2012年9月18日保藏於中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(CGMCC)，保藏號為CGMCC No. 6577，保藏地址北京市朝陽區北辰西路I號院3號中國科學院微生物研究所，郵編100101。進一步的，所述聚多麴黴的18S rDNA的序列如SEQ ID No.1所示。本發明還提供了所述的聚多麴黴在生產脲酶中的用途。本發明還提供了所述的聚多麴黴在釀酒中的用途。本發明還提供了所述的聚多麴黴在黃酒生產中的用途。本發明的菌株是從四川劍南春(集團)有限責任公司的酒麴中分離獲得。本發明的聚多麴黴產脲酶能力可以達到49. 7U，是一株高產脲酶的新菌株，可用於脲酶的生產。本發明的聚多麴黴是從酒麴中分離出來的，所產的脲酶可用於提高酒麴中脲酶的活性，有效降低曲藥中尿素的含量，提高白酒的安全質量。因此，本發明的聚多麴黴菌株可用於釀酒生產，特別是黃酒生產。同時，本發明的聚多麴黴也為生產酒用脲酶製劑提供了寶貴的菌種資源，具有極大的應用和推廣價值。實施例1菌株篩選1、菌株的初篩材料四川劍南春(集團)有限責任公司使用的酒麴培養基蛋白腖10. 0g，葡萄糖18g，0. 4%酚酞溶液3mL，氯化鈉5. 0g，磷酸二氫鉀
2.Og,瓊脂20. O,蒸餾水1000mL。除酚酞外，溶解上述各種成分，並調pH為6. 8飛.9，然後加入酚酞指示劑。分裝三角瓶，121°C滅菌15min，待培養基冷至50_55°C時，加入預先過濾滅菌的20%尿素水溶液，使其在培養基中在最終濃度為2%，搖勻後備用。實驗方法無菌條件下取10克酒麴於裝有90mL無菌水並放有玻珠的25mL三角瓶中，置搖床上室溫振蕩30分鐘。取菌液按10倍的梯度稀釋到10_6，取各稀釋度菌液ImL放入無菌平皿中，倒入滅菌後冷卻至50°C的培養基，混勻，待凝固後放入30°C培養箱培養2 5天，按菌落周圍是否變紅進行初篩，結果見表I。因為脲酶分解尿素產生氨使培養基呈鹼性；酚酞遇鹼變紅，顏色的深淺初步表示了菌株產脲酶能力的大小。挑選菌落周圍變紅的單菌落保存。初篩得到的菌株經形態觀察發現主要為黴菌和細菌。表I初篩得到菌株的變紅時間及顏色深淺

權利要求
1.高產脲酶的聚多麴黴Aspergillussydowii JNC-U5，其保藏號為CGMCC No. 6577。
2.根據權利要求1所述的產脲酶聚多麴黴，其特徵在於其18SrDNA序列如SEQ IDNo.1所示。
3.權利要求1或2所述的聚多麴黴在生產脲酶中的用途。
4.權利要求1或2所述的聚多麴黴在釀酒中的用途。
5.權利要求1或2所述的聚多麴黴在黃酒生產中的用途。
全文摘要
本發明涉及一株高產脲酶的聚多麴黴(Aspergillus sydowii)及其用途，屬於微生物領域。本發明所要解決的第一個技術問題是提供一株高產脲酶的聚多麴黴菌株Aspergillus sydowiiJNC-U5。本發明的聚多麴黴菌株已於2012年9月18日保藏於中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(CGMCC)，保藏號為CGMCC No.6577。本發明提供聚多麴黴產脲酶可以達到49.7U，可用於高純度脲酶的生產。
文檔編號C12N9/78GK102994398SQ20121053202
公開日2013年3月27日 申請日期2012年12月11日 優先權日2012年12月11日
發明者唐清蘭, 徐姿靜, 魏勇, 徐佔成 申請人:四川綿竹劍南春酒廠有限公司