一種二苯乙烯和二苯乙烷類化合物的磷醯胺基酸及其衍生物的製備與用途的製作方法

2023-10-19 14:03:32 1

本發明屬於藥物化學領域，具體涉及一種二苯乙烯和二苯乙烷類化合物的磷醯胺基酸及其衍生物的製備及用途。

背景技術：

二苯乙烯和二苯乙烷類化合物廣泛存在於自然界中，具有多種生物活性。二苯乙烯分為順式二苯乙烯與反式二苯乙烯，兩種構型在自然界都有存在。反式構型常以苷元或苷存在於天然植物中比較多，白藜蘆醇和紫檀芪是該類化合物的代表。白藜蘆醇(化學名：(e)-3，4′，5-三羥基二苯乙烯)又稱為芪三酚，主要來源於花生、葡萄(紅葡萄酒)、虎杖、桑椹等植物，是一種生物性很強的天然多酚類物質，是腫瘤的化學預防劑，也是對降低血小板聚集，預防和治療動脈粥樣硬化、心腦血管疾病的化學預防劑。而紫檀芪(pterostilbene，pte，化學名：(e)-3，5-二甲氧基-4′-羥基苯乙烯)，作為白藜蘆醇的一種天熱的甲基化產物衍生物，最初是在紫檀中提取發現的，隨後在藍莓、葡萄和花櫚木等植物和蜂膠中發現過它的身影。有報導稱，紫檀芪具有抗癌、抗炎、抗氧化和鎮痛劑的作用[remsbergcm，yanezja，ohgamiy，etal.pharmacometricsofpterostilbene：preclinicalpharmacokineticsandmetabolism，anticancer，anti-inflammatory，antioxidantandanalgesicactivity[j].phytotherres，2008，22(2)：169-179.]。而作為抗癌藥物，紫檀芪也表現出對hepg2細胞[劉盛楠，邵淑麗，張偉偉等.紫檀芪對人肝癌hepg2細胞增殖及凋亡的影響[j].基因組學與應用生物學.2015，34(8)：1617-1624.]，mda-mb-231細胞[黃海進，焦峰，何秀芝.紫檀芪對人乳腺癌mda-mb-231細胞系增殖及凋亡的影響[j].山東醫藥.2012，52(44)：53-55.]等較好的活性。

有關順式二苯乙烯類天然產物的報導主要來自於從南非的一種灌木(combretumcaffrum)中分離出來一系列具有二苯乙烯類結構的活性組分，藥理研究表明，該類化合物顯示出特異性靶向和破壞已生成的腫瘤血管，因此能強效攻擊活體腫瘤，導致腫瘤從內到外徹底死亡，其中以combretastatina-4(化學名：(z)-3，4，5-三甲氧基-3』-羥基-4』-甲氧基二苯乙烯，以下簡稱：ca4)的活性最好(srivastava，v.，etal.bioorg.med.chem.2005，13，5892-5908；dzierzbicka，k.，etal.polishj.chem.，2004，78，323-341.)。有關ca4的進一步的研究表明，此類化合物不僅能夠阻斷腫瘤血供對腫瘤細胞有抑制作用而且也能抑制微管蛋白的聚合這極大的引起了科學工作者的興趣，隨後對ca-4展開了一系列的合成修飾等研究。歷經多年的發展，很多ca4衍生物被合成出來，而且已經有製藥公司將ca-4做成前藥用於臨床，例如它的磷酸酯二鈉鹽前藥(化學名：(z)-3，4，5-三甲氧基-4』-甲氧基二苯乙烯-3』-o-磷酸二鈉鹽，以下簡稱ca4p)在1/10mtd時就能顯著地降低腫瘤血管的血流量，最終導致腫瘤壞死。ca4p是全球第一個進入臨床研究的腫瘤血管破壞藥物，目前已進入了iii期臨床研究。

ca4具有與其它抑制微管聚合的抗癌藥物相同的結構特徵——二苯乙烯，其中有三個甲氧基的環為a環，另一個為b環(medarde，m.，etal.bioorg.med.chem.lett.1999，9，2303-2308)。hamel等的假設模型認為ca4的a，b兩環分別與微管蛋白的α和β鏈上兩個相離的位點作用，從而引起腫瘤血管內皮細胞的凋亡，這導致很多研究者把研究的重點放在兩環之間的烯鍵。而分子結構中烯鍵的存在就必然有順反異構的問題，因此研究者對其比較了順式和反式。經研究表明順式比反式明顯有較高的活性(cushman，m.，etal.j.med.chem.，1991，34，2579-2588.nam，n.h.，etal.bioorg.med.chem.lett.，2002，12，1955-1958.)。其次，把烯鍵改成碳的數目為0～4的飽和碳鏈，活性實驗結果顯示除了碳數目為2的化合物保留有活性外，其餘的化合物都沒有活性(getahun，z.，etal.j.med.chem.，1992，35，1058-1067.)。在烯鍵上引入取代基的報導也有較多(hadfield，j.a.，etal.eur.j.med.chem.，2005，40，529-541.pinney，k.g.，etal.bioorg.med.chem.2000，8，2417-2425.borrel，c.etal.bioorg.med.chem.2005，13，3853-3864.)，但是所合成的衍生物活性並不高。另外，國外也有對ca-4進行拼接嵌合的報導。coggiola等(coggiola，b.，pagliai，f.，allegrone，g.etal..bioorg.med.chem.lett.2005，15，3551-3554.)把氮芥類藥物結構中的有效部分帶到ca4中，合成了化合物通過實驗發現其對微管蛋白聚合有很好的抑制作用。toki等(pettit，g.r.，toki，b.，herald，d.l.etal.j.med.chem.1998，41，1688-1695.)通過研究與腫瘤迅速增殖相關的酶的作用，設計併合成出了新的ca4前藥可在某種酶的作用下分解成為ca4。這種設計思路，為ca4前藥的研究開闢了新的方向和研究領域，但是到目前為止尚未發現具有更高活性的化合物。

毛蘭素(化學名：3，4，5-三甲氧基-3』-羥基-4』-甲氧基二苯乙烷，代號：mls)是一種天然的二苯乙烷類化合物，在結構上與ca4類似，是乙烯基橋被氫化了的ca4，同樣是一種具有抗腫瘤活性的天然產物，是從我國名貴中藥材石斛中提取出來的。石斛除了具有滋陰養胃，清熱生津，潤肺止咳，明目強身的傳統功效外，現代藥理學研究還發現其有抗腫瘤、抗衰老、增強體質和免疫力、擴張血管、減輕肝損傷的作用。

我們通過研究發現將二苯乙烯類化合物的雙鍵氫化後形成的二苯乙烷類衍生物3，4，5-三甲氧基-3』-羥基-4』-乙氧基二苯乙烷(ebt)的4』-位-乙氧基和3』-位羥基同樣具有協同作用，且與ca4相比其抗腫瘤效果有顯著提高(吳範宏等，一種乙氧基二苯乙烷衍生物及其製備方法和用途，國際公布號us2012/0046492a1；一種3，4，5-三甲氧基-3』-羥基-4』-烷氧基二苯乙烷的製備方法cn103539642)。將雙鍵改造成飽和鍵後，由於不存在順反式異構體的變化，相關理化性質比ca4更穩定，化合物的製備工藝更加簡便，合成收率顯著提高，而原料損耗和單位合成成本大大降低。在此工作基礎上，本發明人發現將二苯乙烯和二苯乙烷類化合物與胺基酸片段通過磷酸酯和磷酸醯胺鍵起來，形成新穎結構的抗腫瘤藥物分子。在同等條件下比較，顯示出優於ca4和ca4p的抗腫瘤活性，具有良好的應用開發前景。

技術實現要素：

1、本發明提供一種二苯乙烯和二苯乙烷類化合物的磷醯胺基酸及其衍生物及其製備方法與用途，其結構如通式(i)：

其中：

1)r1、r2、r3為羥基、烷基、氟取代的烷基、烷氧基、氟取代的烷氧基等，優選甲氧基和氟取代的甲氧基。

2)r4為羥基、烷基、氟取代的烷基、烷氧基和氟取代的烷氧基，優選甲氧基和乙氧基等。

3)r5為氫、烷基或芳基，優選苯基。

4)r6為氫、烷基、取代的烷基。

5)r7為烷基、烷氧基、羥基、氨基、取代的胺基、胺基酸及其衍生物等，優選烷氧基。

6)「---」為鍵或不存在。

2、本發明提供了一種通式(i)化合物中二苯乙烯類化合物磷醯胺基酸及其衍生物的製備方法，由二苯乙烯片段(ii)、胺基酸衍生物片段(iii)和二氯磷酸酯(iv)合成得到。

具體操作包括：

1)將所用的胺(iii)溶於二氯甲烷中，在低溫下滴加三乙胺；

2)向上述所述的反應液中滴加二氯磷酸酯(iv)的二氯甲烷溶液；

3)再向以上的反應液中滴加二苯乙烯中間體(ii)與三乙胺的混合溶液，反應完畢經後處理得到產物通式(i)所述產物。

3、提供了一種通式(i)上化合物在製備治療微管蛋白聚集抑制劑中的應用。

4、上述通式(i)上化合物在製備作為抗腫瘤血管破壞劑，對各種腫瘤具有血管靶向作用的藥物中的應用。所述各種腫瘤主要包括有：肺癌、非小細胞肺癌、肝癌、胰腺癌、胃癌、骨癌、食道癌、乳房癌、前列腺癌、睪丸癌、結腸癌、卵巢癌、膀朧癌、子宮頸癌、黑色素瘤、鱗狀細胞癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳頭狀癌、乳頭狀腺癌、囊性腺癌、囊性癌、髓狀癌、支氣管癌、骨細胞癌、上皮癌、膽管癌、絨毛膜癌、胚癌、精原細胞癌、維爾姆斯癌、膠質細胞癌、星形細胞瘤、成神經管細胞瘤、顱咽管瘤、室管膜瘤、松果體瘤、成血細胞瘤、聲帶神經瘤、腦膜瘤、成神經細胞瘤、成視神經細胞瘤、成視網膜細胞瘤、神經纖維瘤、纖維肉瘤、成纖維細胞瘤、纖維瘤、纖維腺瘤、纖維軟骨瘤、纖維囊瘤、纖維粘液瘤、纖維骨瘤、纖維粘液肉瘤、纖維乳頭狀瘤、粘液肉瘤、粘液囊瘤、粘液軟骨瘤、粘液軟骨肉瘤、粘液軟骨纖維肉瘤、粘液腺瘤、成粘液細胞瘤、脂肉瘤、脂肪瘤、脂肪腺瘤、成脂細胞瘤、脂肪軟骨瘤、脂肪纖維瘤、脂肪血管瘤、粘液脂瘤、軟骨肉瘤、軟骨瘤、軟骨肌瘤、脊索瘤、絨毛膜腺瘤、絨毛上皮瘤、成絨毛膜細胞瘤、骨肉瘤、成骨細胞瘤、骨軟骨纖維瘤、骨軟骨肉瘤、骨軟骨瘤、骨囊瘤、骨牙質瘤、骨纖維瘤、骨纖維肉瘤、血管肉瘤、血管瘤、血管脂肪瘤、血管軟骨瘤、成血管細胞瘤、血管角質瘤、血管神經膠質瘤、血管內皮瘤、血管纖維瘤、血管肌瘤、血管脂肪瘤、血管淋巴管瘤、血管脂肪平滑肌瘤、血管肌脂瘤、血管肌神經瘤、血管粘液瘤、血管網狀內皮瘤、淋巴管肉瘤、淋巴肉芽瘤、淋巴管瘤、淋巴瘤、淋巴粘液瘤、淋巴肉瘤、淋巴管纖維瘤、淋巴細胞瘤、淋巴上皮瘤、成淋巴細胞瘤、內皮瘤、成內皮細胞瘤、滑膜瘤、滑膜肉瘤、間皮瘤、結締組織瘤、尤因瘤、平滑肌瘤、平滑肌肉瘤、成平滑肌瘤、平滑肌纖維瘤、橫紋肌瘤、橫紋肌肉瘤、橫紋肌粘液瘤、急性淋巴白血病、急性骨髓性白血病、慢性病細胞、紅細胞增多症、淋巴瘤、多發性骨髓瘤。

5、上述所述通式(i)上化合物在製備治療非正常新生血管引起的疾病的藥物中的應用，所述的疾病主要包括有：風溼性關節炎、糖尿病視網膜病、早熟視網膜病、視網膜靜脈閉塞、牛皮癬、紅斑痤瘡、卡波濟肉瘤、特異性反應性角膜炎、流行性角膜結膜炎、新生血管性青光眼、細菌性潰瘍、真菌性潰瘍、單純性疤疹感染、帶狀疤疹感染、原生動物感染、分支桿菌感染、多動脈炎、肉樣瘤、鞏膜炎、潮紅、口乾眼燥關節炎綜合症、全身性紅斑狼瘡、愛滋病綜合症、梅毒。

6、上述通式(i)上化合物在製備作為抗腫瘤藥物，測試對各種腫瘤具有抗腫瘤作用的藥物中的應用。所測試腫瘤種類有：宮頸癌細胞hela、胃癌細胞mkn45、乳腺癌細胞mcf-7、結腸癌細胞hct-116、人胃癌細胞mgc-803、人肝癌細胞hepg2、人肺癌細胞a549、人乳腺癌細胞mda-mb-231、人甲狀腺癌細胞sw579等。

7、上述所述通式(i)上化合物藥效、安全評價結果綜述如下：

1)通過細胞毒性實驗(mtt)檢測的化合物抗腫瘤活性的評價。所測試腫瘤種類有：宮頸癌細胞hela、胃癌細胞mkn45、乳腺癌細胞mcf-7、結腸癌細胞hct-116、肺癌細胞a549。結果表明：所測試化合物中，化合物sit-108所顯示活性稍次於其他化合物，但也優於ca4p。化合物sit-116的化合物對多種腫瘤具有抗腫瘤活性，顯示出廣譜抗腫瘤活性，且其活性測試ic50值均較ca4p的為低，表明sit-116的抗腫瘤活性要優於ca4p。對於胃癌細胞mkn45，只有化合物sit-116表現出抗腫瘤活性。對於宮頸癌細胞hela，化合物sit-116表現出最優抗腫瘤活性；對於其餘癌細胞，化合物sit-116基本上表現出最差抗腫瘤活性。這說明化合物sit-116抗腫瘤譜較廣，活性優於ca4p，但次於所測的其他化合物。

2)通過採用cck-8法測試化合物對多種耐藥型腫瘤細胞株，如人胃癌細胞mgc-803、人肝癌細胞hepg2、人肺癌細胞a549、人乳腺癌細胞mda-mb-231、人甲狀腺癌細胞sw579等細胞的體外細胞毒活性及強度，結果表明：化合物對人胃癌細胞mgc-803、人肝癌細胞hepg2、人肺癌細胞a549、人乳腺癌細胞mda-mb-231、人甲狀腺癌細胞sw579等細胞具有不同程度的抑制細胞增殖的活性。

3)化合物sit-108、sit-109、sit-111、sit-115、sit-116、sit-117等對人胃癌細胞mgc-803具有顯著的細胞毒活性，其ic50值在10μm以下。化合物sit-108、sit-109、sit-111、sit-116、sit-117等對人肝癌細胞hepg2具有顯著的細胞毒活性，其ic50值在10μm以下，化合物sit-115對人肝癌細胞hepg2亦具有明顯的細胞毒活性，其ic50值在10μm-40μm之間。化合物sit-108、sit-109、sit-111、sit-116等對人肺癌細胞a549具有顯著的細胞毒活性，其ic50值在10μm以下，化合物sit-115、sit-117對人肺癌細胞a549亦具有明顯的細胞毒活性，其ic50值在10μm-40μm之間。化合物sit-108、sit-111、sit-116、sit-117等對人甲狀腺癌細胞sw579具有顯著的細胞毒活性，其ic50值在10μm以下，sit-115對人甲狀腺癌細胞sw579亦具有明顯的細胞毒活性，其ic50值在10μm-50μm之間。化合物sit-108、sit-109、sit-116、sit-117等對人乳腺癌細胞mda-mb-231具有顯著的細胞毒活性，其ic50值在10μm以下；化合物sit-111、sit-115對人乳腺癌細胞mda-mb-231亦具有明顯的細胞毒活性，其ic50值在10μm-50μm之間。

8、本發明研究發現ca4類似物經磷酸酯拼接多種胺基酸衍生物所得化合物確實對多種腫瘤細胞具有明顯細胞毒活性，在相同條件下比較，確實顯示出優於ca4和ca4p的抗腫瘤活性。這也說明此類將ca4及類似物進行某些藥效基團或小分子拼接的設計確實有助於藥效的提高。而且本發明的實驗方法路線簡單，操作簡便，合成周期短。

具體實施方式

為了能夠更清楚地理解本發明的技術內容，現結合實施例進一步說明如下：

實施例1[(2-甲氧基-5-甲基-((z)-3，4，5-三甲氧基苯乙烯基)苯氧基)(苯氧基)磷醯]-d-亮氨酸甲酯(代號：sit-109)的製備

向三口瓶中加入l-亮氨酸甲酯鹽酸鹽(1.82g，10mmol)和二氯甲烷(30ml)，攪拌溶解，冰浴冷卻，加入三乙胺(2.81ml，20mmol)，攪拌30min後，向該反應液中緩慢滴加入ca4(3.16g，10mmol)和三乙胺(1.40ml，10mmol)的ch2cl2混合溶液(30ml)，加畢，繼續攪拌反應4h，tlc檢測顯示反應完畢，加水淬滅，二氯甲烷萃取，分液，有機相依次用稀鹽酸水溶液、飽和碳酸氫鈉、食鹽水和水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓旋幹，粗品經柱色譜分離(pe/ea＝2/1)得產品為淺黃色油狀物(2.82g，收率47％)。1hnmr(500mhz，cdcl3)δ7.30(dd，j＝9.1，6.2hz，2h)，7.26-7.18(m，3h)，7.14(t，j＝6.9hz，1h)，7.07(d，j＝8.4hz，1h)，6.78(dd，j＝11.9，8.6hz，1h)，6.49(s，2h)，6.43(s，2h)，4.12(dd，j＝14.6，7.5hz，1h)，3.81(d，j＝17.2hz，6h)，3.65(dd，j＝28.5，8.0hz，9h)，1.56-1.42(m，2h)，0.91-0.86(m，3h)，0.84(dd，j＝6.2，4.5hz，3h)；ms(m/z)：599(m+)；hrms：calcd.599.2284，found599.2121。

實施例2[(2-甲氧基-5-甲基-((z)-3，4，5-三甲氧基苯乙基)苯氧基)(苯氧基)磷醯)甘氨酸甲酯(sit-116)的製備

向三口瓶中加入l-亮氨酸甲酯鹽酸鹽(1.82g，10mmol)和二氯甲烷(30ml)，攪拌溶解，冰浴冷卻，加入三乙胺(2.81ml，20mmol)，攪拌30min後，向該反應液中緩慢滴加入毛蘭素(3.18g，10mmol)和三乙胺(1.40ml，10mmol)的ch2cl2混合溶液(30ml)，加畢，繼續攪拌反應4h，tlc檢測顯示反應完畢，加水淬滅，二氯甲烷萃取，分液，有機相依次用稀鹽酸水溶液、飽和碳酸氫鈉、食鹽水和水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓旋幹，粗品經柱色譜分離(pe/ea＝2/1)得產品為淺黃色油狀物(2.45g，收率45％)，。1hnmr(500mhz，cdcl3)δ7.35(t，j＝7.8hz，2h)，7.29(d，j＝8.6hz，2h)，7.18(t，j＝7.6hz，1h)，6.93(d，j＝8.3hz，1h)，6.86(d，j＝8.3hz，1h)，6.79(dd，j＝17.9，8.1hz，1h)，6.39(d，j＝4.5hz，2h)，4.18(q，j＝7.1hz，2h)，3.83(d，j＝4.5hz，14h)，2.82(d，j＝5.9hz，4h)，1.25(t，j＝7.1hz，3h)；ms(m/z)：559(m+)；hrms：calcd.559.19712，found559.18135。

實施例3[(2-甲氧基-5-甲基-((z)-3，4，5-三甲氧基苯乙烯基)苯氧基)(苯氧基)磷醯]-d-丙氨酸異丙酯(代號：sit-105)的製備

操作同實施例1，以3mmol投料，得0.97g，產率55.22％。1hnmr(500mhz，cdcl3)δ7.30(t，j＝7.5hz，2h)，7.22(d，j＝7.5hz，3h)，7.15(t，j＝6.9hz，1h)，7.07(d，j＝8.3hz，1h)，6.79(t，j＝8.0hz，1h)，6.48(d，j＝1.8hz，2h)，6.43(s，2h)，5.01-4.94(m，1h)，4.10(dd，j＝16.5，9.7hz，1h)，3.82(t，j＝6.1hz，6h)，3.68(s，6h)，1.33(t，j＝7.2hz，3h)，1.21(dd，j＝12.0，6.0hz，6h).

實施例4[(2-甲氧基-5-甲基-((z)-3，4，5-三甲氧基苯乙烯基)苯氧基)(苯氧基)磷醯]-d-纈氨酸甲酯(代號：sit-106)的製備

操作同實施例1，以10mmol投料，得3.1042g，產率53.01％。1hnmr(500mhz，cdcl3)δ7.29(t，j＝7.7hz，2h)，7.22(t，j＝7.6hz，3h)，7.13(t，j＝7.2hz，1h)，7.06(d，j＝8.4hz，1h)，6.80-6.75(m，1h)，6.46(d，j＝15.8hz，2h)，6.40(d，j＝12.5hz，2h)，3.99-3.92(m，1h)，3.83-3.79(m，6h)，3.64(dd，j＝25.6，7.2hz，10h)，2.03(s，1h)，0.87-0.82(m，3h)，0.82-0.77(m，3h).

實施例5[(2-甲氧基-5-甲基-((z)-3，4，5-三甲氧基苯乙烯基)苯氧基)(苯氧基)磷醯]-d-環丙氨酸乙酯(代號：sit-107)的製備

操作同實施例1，以10mmol規模投料，得2.94g，產率50.38％。1hnmr(500mhz，cdcl3)δ7.32(t，j＝7.8hz，2h)，7.25(d，j＝6.9hz，3h)，7.16(t，j＝7.2hz，1h)，7.08(d，j＝8.4hz，1h)，6.80(d，j＝8.5hz，1h)，6.49(d，j＝13.3hz，2h)，6.44(t，j＝6.9hz，2h)，4.05(dd，j＝7.2，3.4hz，2h)，3.86-3.69(m，12h)，1.45-1.37(m，2h)，1.26(ddd，j＝15.6，13.0，4.9hz，2h)，1.16(t，j＝7.1hz，3h).

實施例6[(2-甲氧基-5-甲基-((z)-3，4，5-三甲氧基苯乙烯基)苯氧基)(苯氧基)磷醯]-d-甘氨酸乙酯(代號：sit-108)的製備

操作同實施例1，以10mmol投料，得2.7445，產率49.23％。1hnmr(500mhz，cdcl3)δ7.32(t，j＝7.8hz，2h)，7.24(d，j＝8.8hz，3h)，7.16(t，j＝7.2hz，1h)，7.08(d，j＝8.4hz，1h)，6.80(d，j＝8.5hz，1h)，6.47(d，j＝9.7hz，2h)，6.43(d，j＝13.0hz，2h)，4.18(q，j＝7.1hz，2h)，3.83(d，j＝2.9hz，6h)，3.69(s，6h)，2.04(s，2h)，1.26(t，j＝7.1hz，6h).

實施例7[(2-甲氧基-5-甲基-((z)-3，4，5-三甲氧基苯乙烯基)苯氧基)(苯氧基)磷醯]-d-苯丙氨酸甲酯(代號：sit-110)的製備

操作同實施例1，以10mmol投料，產量3.5702g，產率56.4％。1hnmr(500mhz，cdcl3)δ7.30(dd，j＝15.5，7.7hz，2h)，7.21(dd，j＝15.0，7.2hz，6h)，7.14(dd，j＝14.8，7.4hz，1h)，7.08(t，j＝7.0hz，1h)，7.00(dd，j＝9.0，5.7hz，2h)，6.77(dd，j＝8.4，2.7hz，1h)，6.51-6.40(m，4h)，4.45(qd，j＝9.6，5.2hz，1h)，3.82(s，3h)，3.73(d，j＝9.0hz，3h)，3.65(s，6h)，3.58(d，j＝21.5hz，3h)，3.12-2.90(m，2h).

實施例8[(2-甲氧基-5-甲基-((z)-3，4，5-三甲氧基苯乙烯基)苯氧基)(苯氧基)磷醯]-d-穀氨酸二甲酯(代號：sit-111)的製備

操作同實施例1，以10mmol投料，得2.75g，產率43.68％。1hnmr(500mhz，cdcl3)δ7.31(t，j＝7.7hz，2h)，7.25-7.18(m，3h)，7.16(t，j＝7.2hz，1h)，7.08(d，j＝8.0hz，1h)，6.79(t.j＝9.1hz，1h)，6.47(d，j＝13.0hz，2h)，6.42(t，j＝8.2hz，2h)，4.24-4.15(m，1h)，4.04-3.89(m，1h)，3.83(dd，j＝10.4，8.7hz，6h)，3.71-3.61(m，12h)，2.45-2.23(m，2h)，2.17-1.88(m，3h).

實施例9[(2-甲氧基-5-甲基-((z)-3，4，5-三甲氧基苯乙烯基)苯氧基)(苯氧基)磷醯]-d-異亮氨酸甲酯(代號：sit-112)的製備

操作同實施例1，以10mmol投料，得2.8140g，產率46.93％。1hnmr(500mhz，cdcl3)δ7.30(t，j＝7.6hz，2h)，7.25-7.19(m，3h)，7.14(t，j＝7.1hz，1h)，7.07(d，j＝8.4hz，1h)，6.78(t，j＝8.5hz，1h)，6.47(d，j＝15.0hz，2h)，6.41(d，j＝12.6hz，2h)，3.91(dd，j＝19.1，10.0hz，1h)，3.84-3.79(m，6h)，3.65(dd，j＝27.8，8.1hz，9h)，1.81-1.67(m，1h)，1.10(ddd，j＝22.4，15.3，7.8hz，1h)，0.90-0.83(m，6h).

實施例10[(2-甲氧基-5-甲基-((z)-3，4，5-三甲氧基苯乙基)苯氧基)(苯氧基)磷醯)丙氨酸異丙酯(代號：sit-113)的製備

操作同實施例2，以3mmol投料，產量0.95g，產率53.89％。1hnmr(500mhz，cdcl3)δ7.35(t，j＝7.1hz，2h)，7.28(t，j＝7.6hz，2h)，7.22(s，1h)，7.18(t，j＝7.2hz，1h)，6.93(d，j＝8.2hz，1h)，6.88-6.83(m，1h)，6.39(s，2h)，5.00(tt，j＝12.4，6.2hz，1h)，4.20-4.12(m，1h)，3.85(d，j＝15.3hz，12h)，2.87-2.75(m，4h)，1.35(dd，j＝27.0，7.0hz，3h)，1.25-1.19(m，6h)，0.09(s，1h).

實施例11[(2-甲氧基-5-甲基-((z)-3，4，5-三甲氧基苯乙基)苯氧基)(苯氧基)磷醯)纈氨酸甲酯(sit-114)的製備

操作同實施例2，以3mmol投料，產量0.97g，產率55.03％。1hnmr(500mhz，cdcl3)δ7.37-7.31(m，2h)，7.31-7.25(m，2h)，7.22(d，j＝11.6hz，1h)，7.17(t，j＝7.1hz，1h)，6.93(d，j＝8.3hz，1h)，6.85(dd，j＝8.3，4.1hz，1h)，6.39(d，j＝3.4hz，2h)，3.99(dtd，j＝15.1，10.4，4.7hz，1h)，3.84(dd，j＝10.8，7.7hz，12h)，3.63(d，j＝20.2hz，3h)，2.81(d，j＝5.0hz，4h)，2.07-1.99(m，1h)，0.94-0.87(m，4h)，0.80(t，j＝6.5hz，3h)，0.09(s，1h).

實施例12[(2-甲氧基-5-甲基-((z)-3，4，5-三甲氧基苯乙基)苯氧基)(苯氧基)磷醯)環丙氨酸乙酯(代號：sit-115)的製備

操作同實施例2，以10mmol投料，產量3.1761g，產率54.24％。1hnmr(500mhz，cdcl3)δ7.37-7.31(m，2h)，7.28(d，j＝8.5hz，2h)，7.24(s，1h)，7.17(t，j＝7.2hz，1h)，6.93(d，j＝7.7hz，1h)，6.86(d，j＝8.3hz，1h)，6.38(d，j＝11.5hz，2h)，4.03(q，j＝7.1hz，2h)，3.87-3.72(m，12h)，2.82(d，j＝2.9hz，4h)，1.51-1.25(m，4h)，1.13(t，j＝7.1hz，3h).

實施例13[(2-甲氧基-5-甲基-((z)-3，4，5-三甲氧基苯乙基)苯氧基)(苯氧基)磷醯)亮氨酸甲酯(代號：sit-117)的製備

操作同實施例2，以5mmol投料，產量1.21g，產率40.22％。1hnmr(500mhz，cdcl3)δ7.36-7.31(m，2h)，7.30(s，1h)，7.27-7.20(m，2h)，7.20-7.15(m，1h)，6.94(d，j＝6.5hz，1h)，6.86(t，j＝8.3hz，1h)，6.40(d，j＝5.5hz，2h)，3.84(q，j＝8.0hz，12h)，3.71(d，j＝13.1hz，1h)，3.63(d，j＝21.3hz，3h)，2.85-2.78(m，4h)，1.52(dt，j＝12.3，6.4hz，2h)，1.28(t，j＝7.1hz，1h)，0.85-0.81(m，3h)，0.09(s，1h).

實施例14[(2-甲氧基-5-甲基-((z)-3，4，5-三甲氧基苯乙基)苯氧基)(苯氧基)磷醯)苯丙氨酸甲酯(代號：sit-118)的製備

操作同實施例2，以10mmol投料，產量2.7480g，產率43.23％。1hnmr(500mhz，cdcl3)δ7.35(dd，j＝13.1，7.3hz，2h)，7.26(d，j＝15.0hz，5h)，7.22-7.19(m，2h)，7.03(d，j＝6.6hz，1h)，6.95(t，j＝8.4hz，2h)，6.85(d，j＝8.3hz，1h)，6.40(d，j＝2.4hz，2h)，4.54-4.45(m，1h)，3.84(s，9h)，3.77(d，j＝15.2hz，3h)，3.67(d，j＝12.6hz，1h)，3.61(d，j＝29.1hz，3h)，2.98(dd，j＝13.4，6.0hz，2h)，2.82(s，4h)，0.10(s，1h).

實施例15[(2-甲氧基-5-甲基-((z)-3，4，5-三甲氧基苯乙基)苯氧基)(苯氧基)磷醯)穀氨酸二甲酯(代號：sit-119)的製備

操作同實施例2，以10mmol投料，產量1.14g，產率18.05％。1hnmr(500mhz，cdcl3)δ7.31-7.25(m，2h)，7.24(s，1h)，7.21(t，j＝7.3hz，1h)，7.16-7.08(m，2h)，6.87(d，j＝8.2hz，1h)，6.80(t，j＝7.9hz，1h)，6.34(d，j＝4.2hz，2h)，4.20-4.13(m，1h)，3.78(t，j＝8.9hz，12h)，3.57(dd，j＝19.1，14.5hz，6h)，2.76(s，4h)，2.34-1.81(m，4h).

實施例16[(2-甲氧基-5-甲基-((z)-3，4，5-三甲氧基苯乙基)苯氧基)(苯氧基)磷醯)異亮氨酸甲酯(代號：sit-120)的製備

操作同實施例2，以10mmol投料，產量3.7757g，產率61.81％。1hnmr(500mhz，cdcl3)δ7.33(td，j＝8.1，3.0hz，2h)，7.30-7.25(m，2h)，7.25-7.19(m，1h)，7.16(t，j＝6.8hz，1h)，6.92(d，j＝8.3hz，1h)，6.87-6.82(m，1h)，6.39(d，j＝4.1hz，2h)，4.09-4.00(m，1h)，3.87-3.81(m，12h)，3.62(d，j＝20.8hz，3h)，2.80(dd，j＝8.5，5.7hz，4h)，1.80-1.67(m，1h)，1.27(dd，j＝15.1，8.1hz，2h)，0.91-0.75(m，7h)

實施例17化合物對hela宮頸癌細胞株的體外增殖抑制活性(mtt法)

1、試驗方法

細胞以含200ml/l胎牛血清的rpmi1640培養液培養，使細胞一直處於對數生長期，接種至96孔板，密度4～8×104/ml，37℃，預培養24小時加藥，藥物設6個濃度，每種藥物設3個復孔。連續作用48小時，甩去培養液風乾，每孔加冰冷500g/l三氯醋酸50μl(終濃度為100g/l)固定60min後去離子水洗4～5次，乾燥，每孔加4g/lsrb100μl作用30min，10ml/l醋酸輕洗4次，甩幹，每孔加10mmoltrisbase200μl搖動混勻，在平板振蕩器上振蕩5min，在酶聯免疫檢測儀測定a值，用空白對照調零，所用波長為490nm，抑瘤率(％)＝(無藥細胞對照孔a值平均值-用藥孔a值平均值)/無藥細胞對照孔a值平均值×100％，陽性對照為ca4和ca4p，根據不同濃度下藥物對細胞生長的抑制率，以logit方法計算ic50值。

2.試驗結果

表1實施例化合物對hela宮頸癌細胞株的體外增殖抑制活性(mtt法)。

表2實施例化合物對多種腫瘤細胞株的體外抗腫瘤活性評價(mtt法)

-*沒測定

實施例17化合物對多種耐藥性腫瘤細胞株的體外抗腫瘤活性評價(cck-8法)

1.實驗方法

取活細胞比例達90％以上的細胞進行實驗。細胞增殖抑制試驗採用enogenecelltmcountingkit-8(cck-8)細胞活力檢測試劑盒。細胞消化、計數、製成濃度為1×105個/ml的細胞懸液，96孔板中每孔加入100μl細胞懸液(每孔1×104個細胞)；96孔板置於37℃，5％co2培養箱中培養24小時；每孔加入100μl相應的含藥物的培養基，同時設立陰性對照組，溶媒對照組，陽性對照組，每組5復孔；96孔板置於37℃，5％co2培養箱中培養72小時後；每孔加入10μlcck-8溶液，將培養板在培養箱內孵育4小時，用酶標儀測定在450nm處的od值，計算這些化合物對人甲狀腺癌細胞sw579、人肝癌細胞hepg2、人肺癌細胞a549、人胃癌細胞mgc-803和人乳腺癌細胞mda-mb-231等細胞的抑制率及ic50值。

2.實驗結果

表3化合物對多種耐藥型腫瘤細胞株的體外增殖活性的抑制率及ic50值(cck8法)

需要說明的是，以上實施例僅用以說明本發明的技術方案而非限制。儘管通過參照本發明的優選實施例已經對本發明進行了描述，但本領域的普通技術人員應當理解，可以在形式和細節上對其作出各種各樣的改變，而不偏離本發明的精神和範圍。