羥肟酸衍生物的製作方法

2023-09-22 14:27:30 2

專利名稱：羥肟酸衍生物的製作方法
技術領域：
本發明涉及能有效地預防和治療因結締組織破壞亢進所致疾病的羥肟酸衍生物，包括其製備方法及含羥肟酸衍生物的醫藥組合物等。
作為哺乳動物結締組織的主要構成成分的膠原和糖蛋白等經間質金屬蛋白酶(Matrix Metallo proteaseMMP)特異性分解後，再被其它蛋白分解酶水解。間質金屬蛋白酶迄今已知有膠原酶(MMP1)、明膠酶(MMP2)和糖蛋白酶(MMP3)等。這些間質金屬蛋白酶與其體內抑制因子-組織抑制劑(Tissue Inhibitor of Metallo-proteaseTIMP)和α2-巨球蛋白等對結締組織的代謝調節有很大關係。結締組織破壞的亢進被認為是由於這種間質金屬蛋白酶與機體內抑制劑的水平不平衡，導致間質金屬蛋白酶過剩，從而由膠原和糖蛋白的分解而引起的。
因此，在結締組織破壞亢進引起的所謂類風溼性關節炎、變形性關節炎等關節炎、牙周疾病、角膜潰瘍、表皮水泡症、腫瘤性浸潤及骨吸收疾病等的預防、治療方面，可認為抑制間質金屬蛋白酶分解作用的間質金屬蛋白酶抑制劑在抑制組織破壞上是有用的。
迄今為止，進行了阻斷膠原酶活性，抑制膠原分解的醫藥化合物的開發研究，報導了有大致區別的某種磷酸衍生物與羥肟酸衍生物。
特別與本發明化合物有關連的羥肟酸衍生物可舉出特許公開發表公報平4-502008號(國際公開WO90/05719)，在該公報中，揭示了以羥肟酸為基礎的膠原酶阻斷劑-以如下通式表示的化合物。
式中，R1為C1-C6烷基、苯基、硫代苯基、取代苯基、苯基(C1-C6)烷基、雜環基、(C1-C6)烷基羰基、苯甲醯甲基或取代的苯甲醯甲基，或者，在n＝0時，R1為RX表示為下述基團-SRX時的基團;
R2為氫原子或C1-C6烷基、C1-C6鏈烯基、苯基(C1-C6)烷基、環烷基(C1-C6)烷基或環鏈烯基(C1-C6)烷基;
R3為胺基酸側鏈或C1-C6烷基、苄基、(C1-C6)烷氧基苄基、苄氧基(C1-C6)烷基或苄氧基苄基;
R4為氫原子或C1-C6烷基;
R5為氫原子或甲基;
n為0、1或2的整數;
A為C1-C6碳氫鏈，可任意地被1種或1種以上C1-C6烷基取代，也可為苯基或取代苯基。
然而，鑑於迄今的膠原酶阻斷劑的藥理學、毒理學或物理化學性質，作為間質金屬蛋白酶阻斷劑，期待在體內有確實藥理活性或藥理活性增強、對其他間質金屬蛋白酶效力範圍擴大、毒性減輕或溶解性改善等種種方面有所改進。
本發明者們找到了與已有的膠原酶阻斷劑化學結構上不同的新型羥肟酸衍生物，認定其優良的膠原酶阻斷活性，發現其可成為結締組織破壞亢進所致疾病的預防、治療劑，從而完成了本發明。
即本發明提供以如下通式
(式中符號表示如下意思R1可被從巰基、低級烷基硫代基、芳基硫代基和由低級醯基硫代基組成的一組中選擇的取代基取代的低級烷基;
R2、R3和R4相同或不同的低級烷基;
X氧原子或硫原子;
Y單鍵或低級亞烷基)表示的化合物、其製藥學上允許的鹽、其製藥學上允許的水合物、其製藥學上允許的溶劑合物或其立體異構體。
本發明還提供上述化合物(Ⅰ)等的製造方法或含這些化合物的醫藥組合物。
本發明化合物(Ⅰ)在如下方面具有化學結構上的特徵與上述特許公開發表公報平4-502008號記載的化合物的R2對應的部分有-Y-X-R2，形成醚或硫醚結構。而且，在該公報實施例中僅僅揭示了R3為苄基的化合物，而本發明的化合物對應於該R3的基團為必定以低級烷氧基取代的苄基，這一點也是與該公報具體揭示的化合物化學結構不同之處。
特別是，上述公報中僅揭示體外膠原酶活性，而未揭示體內效果。
以下對本發明化合物進行詳述。
在本說明書通式的定義上，「低級」意味著碳原子數為1至6的直鏈或支鏈碳鏈。
因此，「低級烷基」為直鏈或支鏈的C1-C6烷基，具體地為諸如甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、異戊基、己基、異己基等。
特別是，R1、R3和R4作為低級烷基與可被取代的低級烷基中的低級烷基，以直鏈或支鏈的C1-4烷基為佳，尤以甲基為最佳。而且，作為R2的低級烷基中較好的為直鏈或支鏈C1-4烷基，其中以丙基為最理想。
作為R1的低級烷基的取代基的「低級烷基硫代基」，具體地可舉出甲基硫代基、乙基硫代基、丙基硫代基、異丙基硫代基、丁基硫代基、異丁基硫代基、仲丁基硫代基、叔丁基硫代基、戊基硫代基、己基硫代基等直鏈或支鏈C1-6烷基硫代基，其中甲基硫代基、異丙基硫代基等C1-4烷基硫代基作為較好的基團。
作為取代基「芳基硫代基」，具體地可列舉諸如苯基硫代基、甲苯基硫代基、甲氧苯基硫代基、萘基硫代基等C6-10芳基硫代基，其中以苯基硫代基為佳。
作為取代基「低級醯基硫代基」，具體地可列舉諸甲醯基硫代基、乙醯基硫代基、丙醯基硫代基、丁醯基硫代基、異丁基硫代基、戊醯基硫代基、己醯基硫代基等直鏈或支鏈的C1-6醯基硫代基，其中以乙醯基硫代基為佳。
作為Y表示的「低級亞烷基」，具體地可列舉諸如亞甲基、亞乙基、甲基亞乙基、1，3-亞丙基、亞丙基、1，4-亞丁基、1，5-亞戊基、1，6-亞甲基等直鏈或支鏈C1-6烷基，其中以亞甲基等C1-3亞烷基為佳。
本發明化合物(Ⅰ)與鹼生成鹽。本發明中也包括化合物(Ⅰ)的製藥學業上可允許的鹽。作為這樣的鹽，具體地可列舉諸如與鈉、鉀等鹼金屬生成的鹽，與鎂，鈣等鹼土金屬生成的鹽，與鋁生成的鹽，與甲胺、乙胺、二甲胺、二乙胺、三甲胺、三乙胺、二乙醇胺、環己胺、賴氨酸、鳥氨酸等有機鹼和氨生成的鹽。
本發明化合物(Ⅰ)分子中至少有3個以上不對稱碳原子，由於這些不對稱碳原子的存在，至少存在8個以上立體異構體。本發明中包括化合物(Ⅰ)的光學對映體和非對映異構體等全部立體異構體及其混合物(外消旋體)，本發明說明書、權利要求書中的術語「立體異構體」可理解為也含異構體混合物。
本發明進一步包括這些化合物(Ⅰ)的製藥學上允許的水合物，製藥學上允許的各種溶劑合物和結晶多形等。
本發明化合物(Ⅰ)中，較好的化合物為-Y-X-R2為丙氧基甲基或丙基硫代基的化合物，尤以-Y-X-R2為丙氧基甲基或丙基硫代基，同時R1為烷基或低級烷基硫代甲基的化合物為特別好。
本發明的代表目的化合物舉例如下(1)Na-〔3-(N-羥基氨基甲醯)-4-甲基硫代-2-丙氧基甲基)丁醯基〕-N，O-二甲基酪氨醯胺及其製藥學上許可的鹽和立體異構體。
(2)Na-〔3-(N-羥基氨基甲醯)-4-異丙基硫代-2-丙氧基甲基)丁醯基〕-N，O-二甲基酪氨醯胺及其製藥學上許可的鹽和立體異構體。
(3)Na-〔3-(N-羥基氨基甲醯)-2-丙基硫代)丁醯基-N，O-二甲基酪氨醯胺及其製藥學上許可的鹽和立體異構體以通式(Ⅰ)表示的本發明的目的化合物可利用其基本骨架及取代基特徵，用各種合成法加以製備。以下所示為其代表性製法。
(反應式中，R1、R2、R3、R4、X和Y意義同上，R1-a為除去以巰基取代的低級烷基外與R1相同的基團，R5為氫原子或保護基，R6為氫原子或C1-5烷基，A1為低級亞烷基)就R1為巰基取代的低級烷基以外的化合物而言，本發明化合物(Ⅰ)可按如下兩種方法加以製備製法A.將相應的羧酸(Ⅱ)或其活性衍生物與通式(Ⅲ)表示的可被保護的羥胺或其鹽進行反應，接著按所需要的除去保護基;製法B.將通式(Ⅳ)表示的可被保護的羧酸或其活性衍生物與通式(Ⅴ)表示的胺或其鹽反應，進行醯胺化，接著按所需要的除去保護基。當R1為巰基低級烷基時，可用含相應的醯基硫代低級烷基的化合物(Ⅰ-a)加水分解的方法(製法C)製備本發明化合物(Ⅰ)。
以下詳細介紹各有關製法。
製法A本方法利用由羧酸或其活性衍生物製備羥肟酸的反應，可使用此常法。
作為化合物(Ⅱ)的活性衍生物，可列舉甲酯、乙酯、異丁酯、叔丁酯、苄酯、對甲氧基苄酯等通常的酯;與如醯氯那樣的醯滷、對硝基苯酚等的苯酚類化合物和1-羥基琥珀醯亞胺、1-羥基苯並三唑(HOBT)等N-羥胺類化合物反應所得的活性酯;對稱型酸酐;烷基碳酸、對甲基苯磺酸等與其他有機酸反應所得的有機酸類的混合酸酐及與二苯基膦醯氯、N-甲基嗎啉等反應所得的磷酸類的混合酸酐等。使用烷基碳酸混合酸酐，可容易地成為目的物，故特別有利。
使用游離的羧酸(Ⅱ)時，在雙環己基碳化二亞胺(DCC)等縮合劑存在下進行反應。
反應隨所使用的活性衍生物不同而不同。通常宜在N，N-二甲基甲醯胺、N，N-二甲基乙醯胺、二甲基亞碸、乙醚、二噁烷、四氫呋喃、二氯甲烷、二氯乙烷、氯仿等對反應惰性的有機溶劑或其混合溶劑中，將化合物(Ⅱ)或其活性衍生物與可被保護的羥胺或其鹽以等摩爾量至一方略過量，在冷卻至室溫下進行反應。
在反應中，添加N-甲基嗎啉、三甲胺、三乙胺、N，N-二甲基苯胺、吡啶、甲基吡啶、二甲基吡啶、三硝基甲苯B等鹼，在使反應順利進行上是有利的。
作為保護基，可用苄基、2，6-二氯苄基，2-硝基苄基等取代苄基等苄基類保護基和苄氧基羰基等醯基類保護基等等羥基保護基。這些保護基除了均可用接觸還原法除去外，苄基類保護基用酸處理，醯基類保護基用鹼性化，可容易地除去。
製法B此本法是從羧酸或其衍生物製備醯胺，可採用醯胺化或肽化的常規方法。
在此方法中，活性衍生物為醯氯、醯溴之類的醯滷;醯基迭氮、與製法A相同的活性酯;對稱型酸酐、與製法A相同的混合酸酐等。
在游離酸或上述活性酯中使化合物(Ⅳ)發生反應時，除了上述DCC外，還可在羰醯二咪唑、二苯基磷醯迭氮和二乙基磷醯苯胺等縮合劑的存在下進行反應。
本發明中，在HOBT-DCC法等活性酯與縮合劑共同存在下，反應尤為有利。
在與製法A製備羥肟酸的有機溶劑大致相同的有機溶劑中，將化合物(Ⅳ)或其活性衍生物與化合物(Ⅴ)或其鹽以大致等摩爾量至一方略過量。通常於冷卻至室溫下進行反應較為有利。
同時，在與製法A同樣鹼的存在下進行反應，在反應的順利進行上較為有利。
關於保護基及其除去，與製法A相同。
製法C此方法是硫酯的加水分解，用氫氧化鈉、氫氧化鉀、碳酸鈉、碳酸氫鈉、氫氧化銨、碳酸銨和氨基甲酸銨等鹼的水性溶劑進行處理而實施的。
其它製備方法本發明化合物(Ⅰ)也可用上述製法C以外的取代基變換方法進行製備。以下就主要的取代基變換法加以說明。
(1)還原由相應的R1為低級鏈烯基或低級亞烷基的化合物還原可得到R1為低級烷基的化合物。這種還原法可列舉諸如加氫反應，較好地是在鈀-炭等催化劑存在下的接觸還原處理。催化劑還原反應是在甲苯、甲醇、乙醇等惰性溶劑中，在室溫或加熱下進行的。
(2)加成a.在無溶劑或甲醇等惰性溶劑中，在室溫下，用相應的R1為低級鏈烯基或低級亞烷基的化合物對相應的低級烷基硫醇、芳基硫醇、硫代低級鏈烷酸作加成反應處理，可得到R1為低級烷基硫代低級烷基、芳基硫代低級烷基、低級醯基硫代低級烷基的化合物。
b.用具有部分結構為
的鏈烯醯胺衍生物對相應的低級烷基硫醇進行與a同樣的加成反應處理，可製備Y為單鍵、X為硫原子的化合物。
(3)醚化、硫醚化a.應用常規的醚化、硫醚化反應，將部分結構為
或
(Z滷原子)的化合物與R2-Z(Z同前)或R2-XH在氫氧化鈉等鹼的存在下進行反應，可製備本發明化合物(Ⅰ)。
b.R1為低級烷基硫代低級烷基、芳基硫代低級烷基的化合物也可用與a同樣的方法，由相應的硫醚與滷化物的反應而製得。
由上述各製法所得到的反應生成物、游離化合物，它們的鹽，水合物或各種溶劑合物分離後精製。鹽可用通常的成鹽反應製得。
用分離、精製、提取、濃縮、蒸餾、結晶化、過濾、重結晶、各種色譜法等通常的化學操作進行處理。
各立體異構體和非對映異構體混合物等可按常法，如分步結晶化或色譜法等加以分離。
本發明化合物(Ⅰ)、其製藥學上允許的鹽、其製藥學上允許的水合物等具有優良的阻斷間質金屬蛋白酶活性，特別是，可證明其對家兔變形性關節炎模型有效，在結締組織破壞亢進被認為是主要原因的人和溫血動物的類風溼性關節炎、變形性關節炎等關節炎、牙周疾病、角膜潰瘍、表皮水泡症、腫瘤性浸潤及骨吸收疾病等的預防、治療上是有用的。
本發明化合物的間質金屬蛋白酶阻斷作用被確認為是對膠原酶的阻斷活性。
膠原酶阻斷活性可以如下方法加以測定。
對膠原酶阻斷活性的測定法將M.butyricum 10mg/ml(液體石臘配製)從Lewis大鼠尾根部給予0.1ml，3-4周後從佐劑性關節炎發病大鼠的膝關節取出含膝蓋骨的骨膜組織，將其置於0.2%乳白蛋白MEM培養基中培養2天。按永井等的方法〔炎症4(2)，123(1984)〕，在培養的上清液中，用螢光標記膠原測定對膠原酶的阻斷作用。
用胰蛋白酶活化培養上清液中膠原酶，接著用過量的大豆胰蛋白酶抑制劑滅活胰蛋白酶。然後加入阻斷劑，加入底物膠原，於36℃下反應。2至數小時後以乙二胺四乙酸(EDTA)終止反應，以70%乙醇只提取膠原分解產物。離心處理於520nm(Em)/495nm(Ex)處測定所提取的分解物的螢光強度。
結果顯示，實施例大部分化合物的膠原酶活性(IC50)值為10-9-10-10M。
(2)變形性關節炎模型關於家兔變形性關節炎模型的評價，按Arthritis and Rheuma-tism 26，875(1983);同上26，1132(1983);同上26，1380(1983)記載的方法進行測定。
用上述家兔變形性關節炎模型的試驗法可證實本發明化合物有效。
含有以通式(Ⅰ)表示的化合物、其製藥學上允許的鹽、製藥學上允許的水合物等的1種或2種以上有效成分的醫藥組合物，用通常所用的製劑用載體、賦形劑、其它添加劑等，製成片劑、散劑、細粒劑、顆粒劑、膠囊劑、丸劑、水劑、注射劑、栓劑、軟膏、貼敷劑等，經口(包括舌下)或非經口(包括關節內)給藥。
本發明化合物對人的臨床用量根據用藥患者的症狀、體重、年令和性別等作適當決定，通常成人1天口服10-500mg，以100-500mg為佳，非經口給藥1-100mg，以10-100mg為佳，一次或分數次給予。給藥量因各種條件而異，也有比上述給藥範圍用藥少而足夠的情況。
按本發明，作為口服的固體組合物可用片劑、散劑、顆粒劑等。這樣的固體組合物，是將一種或一種以上活性物質至少與一種惰性稀釋劑，例如乳糖、甘露糖醇、葡萄糖、羥丙基纖維素、微晶纖維、澱粉、聚乙烯吡咯烷、矽鋁酸鎂，混合而成。按常規方法，組合物也可含有惰性稀釋劑以外的添加劑，如硬脂酸鎂之類潤滑劑、纖維素乙醇酸鈣之類崩解劑、乳糖之類穩定劑、穀氨酸或天門冬氨酸之類助溶劑。片劑或丸劑按需要可用蔗糖、明膠、羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素鄰苯二甲酸酯等胃溶性或腸溶性物質的薄膜包衣。
口服給藥的液體組合物包括藥劑上允許的乳劑、溶液劑、混懸劑、糖漿劑、酏劑等，含有一般所用的惰性稀釋劑，如精製水、乙醇。該組合物也可含有除惰性稀釋劑外的可溶化劑及助溶劑、溼潤劑、懸浮劑之類輔助劑、甜味劑、風味劑、芳香劑和防腐劑。
非經口給藥的注射劑包括無菌的水性或非水性溶液劑、混懸劑、乳劑。水性的溶液劑、混懸劑含有諸如注射用蒸餾水及生理鹽水。非水溶性的溶液劑。混懸劑為諸如丙二醇、聚乙二醇、橄欖油之類植物油，乙醇那樣的醇類，聚山梨酸酯80(商品名)等。這樣的組合物還可含有等滲劑、防腐劑、溼潤劑、乳化劑、分散劑、穩定劑(如乳糖)、可溶化至輔助溶解劑之類的添加劑。將這樣的組合物以如下方式滅菌，例如，通過截留細菌的濾器過濾，與殺菌劑配合或照射。這些組合物也可製成無菌的固體組成物，在使用前溶於無菌水或無菌注射用溶劑，然後使用。
下面，列舉實施例更具體地說明本發明。另外，以參考例對實施例所用原料化合物的製備方法加以說明。
參考例和實施例中，Tr為三苯甲基、Bzl為苄基、tBu為叔丁基、iBu為異丁基、HOBT為1-羥基苯並三唑、DCC為二環己基碳二亞胺。
參考例1(1)
在-15℃下，在60%氫化鈉10g、咪唑0.35g和乾燥四氫呋喃90ml的混合液中，於15分鐘內滴加N-三苯甲基-D-絲氨酸8.3g、四氫呋喃50ml的混合液，於-15℃下攪拌45分鐘。在混合液中加入丙基碘32g，在-5℃下攪拌2小時，再在-15℃下加入60%氫化鈉4.0g、丙基碘64g，在-5℃下攪拌過夜。在反應液中加水400ml，用乙醚100ml提取2次。
用冰醋酸中和水層。用乙醚120ml提取2次。合併醚液，用5%枸櫞酸水溶液和飽和食鹽水洗淨，乾燥，濃縮，得油狀物。在油狀物狀物中加入10%乙酸-乙醇溶液36ml，於室溫下攪拌過夜。濾取沉澱物，用乙醇及乙醚洗淨，得O-丙基-D-絲氨酸3.2g。
理化性質MS(m/z)(EI)147(M+)1H NMR(D2O，TMS內部標準)δ0.87(3H，t，J＝7.2Hz)，1.46～1.69(2H，m)，3.51(2H，t，J＝6.7Hz)，3.87(2H，m).
(2)
在O-丙基-D-絲氨酸11.5g、溴化鉀32.7g和23%硫酸60ml的混合液中，於-5℃下，經1小時時間，滴加亞硝酸鈉7.12g溶於70ml水中的溶液。在0℃下攪拌5小時，反應液用二氯甲烷100ml提取4次，乾燥、濃縮，得2R-溴-3-丙氧基丙酸12.9g。
理化性質MS(m/z)(EI)211(M+)1H NMR(CDCl3，TMS內部標準)δ0.91(3H，t，J＝7.3Hz)，1.41～1.71(2H，m)，3.50(2H，t，J＝6.5Hz)，3.85(2H，m)，4.35(1H，m).
(3)
在2R-溴-3-丙氧基丙酸16.4g、二氯甲烷50ml的混合液中，於-40℃下，加入等體積的異丁烯和2ml濃硫酸，封管，於室溫下攪拌過夜。將反應液濃縮至1/2體積，二氯甲烷層用10%碳酸鈉水溶液洗滌2次，乾燥、濃縮，得2R-溴-3-丙氧基丙酸叔丁酯18.2g。
理化性質1H NMR(CDCl3，TMS內部標準)δ0.91(3H，t，J＝7.3Hz)，1.47(3H，s)，1.46～1.60(2H，m)，3.46(2H，t，J＝6.6Hz)，3.79(2H，m)，4.20(1H，m).
(4)
在丙二酸二苄酯19.4g與N，N-二甲基甲醯胺70ml的混合液中，於冰冷卻下加入叔丁醇鉀7.65g。於0℃下，經1小時時間滴加2R-溴-3-丙氧基丙酸叔丁酯和N，N-二甲基甲醯胺30ml的混合液，於5℃下攪拌過夜。在反應液中加入飽和氯化銨水溶液，以乙酸乙酯100ml提取4次，乾燥，濃縮，得〔2-苄氧基羰基-3R-(叔丁氧羰基)-4-丙氧基〕丁酸苄酯29.5g。
理化性質MS(m/z)(FAB)471(M++1)1H NMR(CDCl3，TMS內部標準)δ0.84(3H，t，J＝7.7Hz)，1.39(9H，s)，1.46～1.50(2H，m)，3.25(2H，t，J＝7.0Hz)，3.48(1H，s)，3.60(2H，m)，4.01(1H，d，J＝9.0Hz)，
5.11～5.17(4H，m)，7.26～7.34(10H，m).
參考例2
將N，O-二甲基酪氨醯胺50g、乾燥氯仿400ml、檸康酸酐27g的混合液於室溫下攪拌6小時後，減壓濃縮，經矽膠柱層析，以氯仿-甲醇-乙酸洗脫，得Na-(3-羧基-2-丁烯醯基)-N，O-二甲基酪氨醯胺20g。
理化性質MS(m/z)(FAB)321(M++1)1H NMR(DMSO-d6，TMS內部標準)δ1.73(3H，s)，2.59(1H，m)，2.64(3H，d，J＝4Hz)，3.20(1H，m)，3.70(2H，s)，4.27～4.33(1H，m)，5.74(1H，s)，6.82(2H，d，J＝6.8Hz)，7.12(2H，d，J＝6.8Hz)，7.81(1H，d，J＝2Hz)，8.46(1H，d，J＝7.2Hz)，12.80(1H，br).
參考例3(1)
將〔2-苄氧基羰基-3R-(叔丁氧羰基)-4-丙氧基〕丁酸苄酯29.0g及95%三氟乙酸水溶液50ml的混合液於5℃以下攪拌過夜。濃縮，得油狀物25.5g。在此油狀物與1-羥基苯並三唑9.88g、N-甲基嗎啉7.47g、O-甲基酪氨酸N-甲基醯胺15.3g及N，N-二甲基甲醯胺150ml的混合液中，於冰冷下滴加二環己碳二亞胺15.2g與四氫呋喃150ml的混合液，於室溫下攪拌過夜。
濃縮後加入乙酸乙酯，有機層用10%枸櫞酸水溶液、飽和碳酸氫鈉、飽和食鹽水洗滌，乾燥、濃縮後，殘渣經矽膠柱層析，以氯仿洗脫，得Na-〔〔3，3-二(苄氧羰基)-2R-丙氧甲基〕丙醯基〕-N，O-二甲基酪氨醯胺25.0g。
理化性質MS(m/z)(FAB)606(M++1)1H NMR(CDCl3，TMS內部標準)δ0.78(3H，t，J＝7.7Hz)，1.24～1.36(2H，m)，2.69(3H，d，J＝5.0Hz)，3.78(3H，s)，
4.60(1H，m)，5.09～5.16(4H，m)，6.30(1H，s)，6.55(1H，d，J＝8.5Hz)，6.82(2H，d，J＝8.5Hz)，7.10(2H，d，J＝8.5Hz)，7.26～7.32(10H，m).
(2)
將盛有Na-〔〔3，3-二(苄氧羰基)-2R-丙氧甲基〕丙醯基〕-N，O-二甲基酪氨醯胺300mg、甲醇5ml和10%鈀炭催化劑50mg的混合物的容器內用氫氣取代，於室溫下攪拌2小時。濾去催化劑後，濃縮，得Na-〔〔3，3-二羧基-2-丙氧甲基)丙醯基〕-N，O-二甲基酪氨醯胺190mg。
理化性質MS(m/z)(FAB)425(M++1)1H NMR(DMSO-d6，TMS內部標準)δ0.73～0.85(3H，m)，1.31～1.46(2H，m)，2.60(3H，d，J＝4.4Hz)，3.70(3H，s)，4.66(1H，m)，6.82(2H，d，J＝7.8Hz)，7.12(2H，d，J＝7.8Hz)，7.86(1H，d，J＝4.4Hz).
參考例4
將盛有Na-〔〔3，3-二(苄氧羰基)-2R-丙氧甲基〕丙醯基〕-N，O-二甲基酪氨醯胺4.9g、甲酸銨2.55g10%鈀炭催化劑1.0g及乙醇70ml的混合液的容器內用氫氣取代，於室溫下攪拌1小時。濾去催化劑後，在濾液中加入哌啶0.76g，於室溫下攪拌30分鐘，加入35%甲醛水溶液3.8ml，於室溫下攪拌過夜。
加熱回流1小時後，濃縮，加入10%枸櫞酸水溶液，用乙酸乙酯提取3次。有機層用碳酸鉀水溶液提取，水層用鹽酸調至pH4，再用二氯甲烷提取。將二氯甲烷提取液乾燥，濃縮，得Na-〔(3-羧基-2-丙氧甲基)-3-丁烯醯基〕-N，O-二甲基酪氨醯胺1.5g。
理化性質MS(m/z)(FAB)393(M++1)1H NMR(DMSO-d6，TMS內部標準)δ0.76～0.83(3H，m)，1.37～1.48(2H，m)，2.57(3H，d，J＝4.8Hz)，3.70(3H，s)，4.38(1H，m)，5.53，6.06(2H，s)，6.77(2H，d，J＝8.4Hz)，7.05(2H，d，J＝8.4Hz)，7.71(1H，d，J＝4.8Hz)，7.98(1H，d，J＝8.8Hz)，12.60(1H，s).
參考例5
將盛有Na-〔(3-羧基-2-丙氧甲基)-3-丁烯醯基〕-N，O-二甲基酪氨醯胺500mg、甲醇10ml及鈀炭催化劑50mg混合液的容器內用氫氣還原，於室溫下攪拌5小時。濾去催化劑後，濃縮，得Na-〔(3-羧基-2-丙氧甲基)丁醯基〕-N，O-二甲基酪氨醯胺470mg。
理化性質MS(m/z)(FAB)395(M++1)1H NMR(DMSO-d6，TMS內部標準)δ0.59(3H，d，J＝6.8Hz)，0.74～0.86(3H，m)，1.40～1.45(2H，m)，2.58(3H，d，J＝4.4Hz)，3.69(3H，s)，4，43(1H，m)，6.80(2H，d，J＝8.8Hz)，7.14(2H，d，J＝8.8Hz)，7.49(1H，d，J＝4.4Hz)，8.31(1H，d，J＝8.8Hz).
參考例6
將Na-〔(3-羧基-2-丙氧甲基)-3-丁烯醯基〕-N，O-二甲基酪氨醯胺1.0g和硫代乙酸6ml的混合液於室溫下攪拌過夜。濃縮，用乙醚洗滌殘渣，得Na-(3-羧基-4-乙醯硫代-2-丙氧甲基)丁醯基〕-N，O-二甲基酪氨醯胺0.8g。
理化性質MS(m/z)(FAB)469(M++1)1H NMR(DMSO-d6，TMS內部標準)δ0.78～0.82(3H，m)，1.39～1.44(2H，m)，2.25(3H，s)，2.58(3H，d，J＝4.4Hz)，3.65(3H，s)，6.74(2H，d，J＝8.8Hz)，7.13(2H，d，J＝8.8Hz)，7.59(1H，d，J＝4.9Hz)，8.40(1H，d，J＝8.8Hz).
熔點185-186℃(從甲醇中重結晶)元素分析值(C22H32N2O7S·1/2H2O)以C(%) H(%) N(%) S(%)理論值 55.33 6.96 5.87 6.71實驗值 55.54 6.72 5.82 6.91
參考例7
將Na-〔(3-羧基-4-乙醯硫代-2-丙氧甲基)丁醯基〕-N，O-二甲基酪氨醯胺200mg溶於10ml甲醇中。邊通入氬氣邊加入1N氫氧化鈉水溶液0.86ml，於室溫下攪拌2小時。加入1N鹽酸1ml，濃縮後，加水，濾取生成的沉澱，得Na-〔(3-羧基-4-巰基-2-丙氧甲基)丁醯基〕-N，O-二甲基酪氨醯胺130mg。
理化性質MS(m/z)(FAB)428(M++1)1H NMR(DMSO-d6，TMS內部標準)δ0.78～0.82(3H，m)，1.39～1.46(2H，m)，2.59(3H，d，J＝4.4Hz)，3.72(3H，s)，6.82(2H，d，J＝8.8Hz)，7.15(2H，d，J＝8.4Hz)，7.54(2H，d，J＝4.9Hz)，8.40(1H，d，J＝8.8Hz).
參考例8
將Na-〔(3-羧基-2-丙氧甲基)-3-丁烯醯基〕-N，O-二甲基酪氨醯胺1.0g、硫酚5ml的混合液在60℃下避光攪拌2天。加乙醚，濾取沉澱物，用乙醚洗淨，得Na-〔(3-羧基-4-苯基硫代-2-丙氧甲基)丁醯基〕-N，O-二甲基酪氨醯胺200mg。
理化性質MS(m/z)(FAB)504(M++1)1H NMR(DMSO-d6，TMS內部標準)δ0.78～0.82(3H，m)，1.38～1.46(2H，m)，2.60(3H，d，J＝4.4Hz)，3.68(3H，s)，6.71(2H，d，J＝8.8Hz)，6.99(2H，d，J＝8.4Hz)，7.64(1H，d，J＝4.9Hz)，8.50(1H，d，J＝8.8Hz).
參考例9
在Na-〔(3-羧基-4-乙醯硫代-2-丙氧甲基)丁醯基〕-N，O-二甲基酪氨醯胺800mg和甲醇10ml的混合液中，於室溫下邊通入氬氣邊加入1N氫氧化鈉水溶液8.5ml，攪拌30分鐘。加碘甲烷0.97g，再攪拌2小時。加1N鹽酸10ml，濃縮，加水，濾取沉澱物，得Na-〔(3-羧基-4-甲基硫代-2-丙氧基甲)丁醯基〕-N，O-二甲基酪氨醯胺650mg。
理化性質MS(m/z)(FAB)441(M++1)1H NMR(DMSO-d6，TMS內部標準)δ0.79～0.83(3H，t，J＝7.2Hz)，1.36～1.46(2H，m)，2.59(3H，t，J＝4.4Hz)，3.39(3H，s)，3.68(3H，s)，6.81(2H，d，J＝8.8Hz)，7.16(2H，d，J＝8.8Hz)，7.54(1H，d，J＝4.4Hz)，8.43(1H，d，J＝9.1Hz).
參考例10
將Na-〔(3-羧基-4-乙醯硫代-2-丙氧甲基)丁醯基〕-N，O-二甲基酪氨醯胺800mg按參考例9同樣的方法處理，得Na-〔(3-羧基-4-異丙基硫代-2-丙氧甲基)丁醯基〕-N，O-二甲基酪氨醯胺730mg。
理化性質MS(m/z)(FAB)470(M++1)1H NMR(DMSO-d6，TMS內部標準)δ0.79～0.83(3H，t，J＝7.3Hz)，0.96，1.02(6H，d，J＝6.3Hz)，1.40～1.45(2H，m)，2.60(3H，d，J＝3.4Hz)，3.71(3H，s)，6.80(2H，d，J＝8.3Hz)，7.17(2H，d，J＝8.3Hz)，7.54(1H，s).
8.46(1H，d，J＝8.8Hz).
參考例11
將Na-(3-羧基-2-丁烯醯基)-N，O-二甲基酪氨醯胺20g、硫代乙酸80ml的混合液在氬氣氛圍下，在室溫下攪拌3天。反應液減壓濃縮，殘渣中加甲苯200ml，再減壓濃縮。將殘渣溶於150ml甲醇，在冰浴中冷至10℃以下。加入10N氫氧化鈉水溶液11ml在氬氣中攪拌2小時。在10℃以下加入碘代丙烷21.3g，攪拌3小時。反應液減壓濃縮，殘渣中加入300ml水，濾取生成的沉澱，乾燥，得Na-〔(3-羧基-2-丙基硫代)丁醯基〕-N，O-二甲基酪氨醯胺10g，為2個異構體的混合物。
理化性質MS(m/z)(FAB)397(M++1)1H NMR(DMSO-d6，TMS內部標準)δ0.67～1.0(6H，(m))，1.29～1.49(2H，(m))，2.12～2.26(1H，m)，2.40～2.60(6H，(m))，2.60～2.73(1H，m)，2.86～2.90(1H，m)，3.63～3.68(3H，s)，4.35～4.52(1H，m)，6.79～6.82(2H，(m))，7.12～7.19(2H，(m))，7.89(1H，(m))，8.34～8.39(1H，(m)).
12.30(1H，br s)
實施例1
在Na-〔(3-羧基-2-丙氧甲基)丁醯基〕-N，O-二甲基酪氨醯胺370mg、四氫呋喃10mg和N，N-二甲基甲醯胺2ml的混合液中，於冰冷卻下加入N-甲基嗎啉0.20ml，再加氯甲酸異丁酯0.26ml，在這樣的溫度下攪拌1小時。
在冰冷卻下加入鹽酸羥胺210mg、N-甲基嗎啉0.33ml及N，N-二甲基甲醯胺4ml的混合液，在5℃以下攪拌過夜。濃縮後，加入乙酸乙酯和10%硫酸氫鉀水溶液，濾取沉澱物，得Na-〔〔3-(N-羥基氨基甲醯基)-2-丙氧甲基〕丁醯基〕-N，O-二甲基酪氨醯胺120mg。
理化性質MS(m/z)(FAB)410(M++1)1H NMR(DMSO-d6，TMS內部標準)δ0.46(3H，d，J＝6.8Hz)，0.80～0.83(3H，m)，1.41～1.46(2H，m)，2.59(3H，d，J＝4.4Hz)，3.68(3H，s)，6.79(2H，d，J＝8.8Hz)，7.15(2H，d，J＝8.7Hz)，7.34(1H，d，J＝4.4Hz)，8.36(1H，d，J＝8.8Hz)，8.75(1H，s)，
10.42(1H，s).
實施例2
將Na-〔(3-羧基-4-乙醯硫代-2-丙氧甲基)丁醯基〕-N，O-二甲基酪氨醯胺800mg按實施例1同樣的方法處理，得Na-〔〔3-(N-羥基氨基甲醯基)-4-乙醯硫代-2-丙氧甲基〕丁醯基〕-N，O-二甲基酪氨醯胺680mg。
理化性質MS(m/z)(FAB)484(M++1)1H NMR(DMSO-d6，TMS內部標準)δ0.78～0.82(3H，m)，1.39～1.44(2H，m)，2.50(3H，s)，2.59(3H，d，J＝4.8Hz)，3.72(3H，s)，6.82(2H，d，J＝8.8Hz)，7.15(2H，d，J＝8.8Hz)，7.54(1H，d，J＝4.4Hz)，8.40(1H，d，J＝8.8Hz)，8.88(1H，s)，10.56(1H，s).
實施例3
在Na-〔〔3-(N-羥基氨基甲醯基)-4-乙醯硫代-2-丙氧甲基〕丁醯基〕-N，O-二甲基酪氨醯胺460mg、甲醇10ml的混合液中，在室溫下邊通入氬氣邊加入1N氫氧化鈉水溶液4.8ml，攪拌2小時。加入1N鹽酸5.0ml，濃縮，加水，濾取沉澱物，得Na-〔〔3-(N-羥基氨基甲醯基)-4-巰基-2-丙氧甲基〕丁醯基〕-N，O-二甲基酪氨醯胺210mg。
理化性質MS(m/z)(FAB)442(M++1)1H NMR(DMSO-d6，TMS內部標準)δ0.79～0.82(3H，(m))，1.40～1.46(2H，m)，2.60(3H，d，J＝4.9Hz)，3.72(3H，s)，6.82(2H，d，J＝9.0Hz)，7.16(2H，d，J＝9.0Hz)，7.38(1H，d，J＝4.8Hz)，8.42(1H，d，J＝9.0Hz)，8.88(1H，s)，10.56(1H，s).
實施例4
將Na-〔〔3-羥基-4-苯基硫代-2-丙氧甲基〕丁醯基〕-N，O-二甲基酪氨醯胺150mg按實施例1同樣的方法處理，得Na-〔〔3-(N-羥基氨基甲醯基)-4-苯基硫代-2-丙氧甲基〕丁醯基〕-N，O-二甲基酪氨醯胺90mg。
理化性質MS(m/z)(FAB)518(M++1)1H NMR(DMSO-d6，TMS內部標準)δ0.79～0.82(3H，t，J＝7.3Hz)，1.40～1.46(2H，m)，2.57(3H，d，J＝4.4Hz)，3.67(3H，s)，6.77(2H，d，J＝8.3Hz)，7.14(2H，d，J＝8.3Hz)，7.88(1H，d，J＝4.4Hz)，8.34(1H，d，J＝8.3Hz)，8.90(1H，s)，10.60(1H，s).
實施例5
將Na-〔(3-羥基-4-甲硫基-2-丙氧甲基〕丁醯基〕-N，O-二甲基酪氨醯胺275mg按實施例1同樣的方法處理，得Na-〔〔3-(N-羥基氨基甲醯基)-4-甲硫基-2-丙氧甲基〕丁醯基〕-N，O-二甲基酪氨醯胺210mg。
理化性質MS(m/z)(FAB)456(M++1)1H NMR(DMSO-d6，TMS內部標準)δ0.80～0.83(3H，t，J＝7.1Hz)，1.35～1.46(2H，m)，2.61(3H，d，J＝4.0Hz)，3.41(3H，s)，3.71(3H，s)，6.82(2H，d，J＝7.8Hz)，7.17(2H，d，J＝7.8Hz)，7.35(1H，d，J＝4.4Hz)，8.43(1H，d，J＝9.0Hz)，8.86(1H，s)，10.52(1H，s).
熔點252-254℃(從N，N-二甲基甲醯胺中重結晶)元素分析值(C21H33N3O6S)C(%) H(%) N(%) S(%)理論值 55.37 7.30 9.22 7.04實驗值 55.09 7.12 9.25 7.04實施例6
將Na-〔(3-羧基-4-異丙基硫代-2-丙氧甲基)丁醯基〕-N，O-二甲基酪氨醯胺350mg按實施例1同樣的方法處理，得Na-〔〔3-(N-羥基氨基甲醯基)-4-異丙基硫代-2-丙氧甲基〕丁醯基〕-N，O-二甲基酪氨醯胺150mg。
理化性質MS(m/z)(FAB)484(M++1)1H NMR(DMSO-d6，TMS內部標準)δ0.80～0.84(3H，t，J＝7.4Hz)，0.90，1.00(6H，d，J＝6.6Hz)，1.41～1.47(2H，m)，2.60(3H，d，J＝3.4Hz)，3.71(3H，s)，6.79(2H，d，J＝8.3Hz)，7.18(2H，d，J＝8.3Hz)，7.36(1H，d，J＝4.4Hz)，8.46(1H，d，J＝9.3Hz)，8.85(1H，s)，10.49(1H，s).
實施例7
將Na-〔(3-羧基-2-丙硫基)丁醯基〕-N，O-二甲基酪氨醯胺7.1g溶於乾燥四氫呋喃150ml，N，N-二甲基甲醯胺10ml的混合液中。將混合液在氬氣流中5℃以下冷卻，加N-甲基嗎啉2.4ml，然後在5℃以下滴加氯甲酸異丁酯2.8ml。在5℃以下攪拌20分鐘後，加入鹽酸羥胺1.9g、N-甲基嗎啉3ml、N，N-二甲基甲醯胺20ml的混合液。
攪拌3小時後，將反應液減壓濃縮。殘渣中加50ml稀鹽酸，濾取生成的沉澱。沉澱用水、乙醚洗後，乾燥，得Na-〔〔3-(N-羥基氨基甲醯基)-2-丙硫基〕丁醯基〕-N，O-二甲基酪氨醯胺5.2g二種異構體的混合物。將1g混合物作矽膠柱層析，以氯仿-甲醇-乙酸(100∶2∶2)洗脫，得Na-〔〔3-(N-羥基氨基甲醯基)-2-丙硫基〕丁醯基〕-N，O-二甲基酪氨醯胺異構體A0.3g，(異構體B0.3g)。
理化性質MS(m/z)(FAB)412(M++1)1H NMR(DMSO-d6，TMS內部標準)δ0.54(3H，d，J＝6.8Hz)，0.85(3H，t，J＝7.2Hz)，1.43(2H，q，J＝7.2Hz)，1.89～2.33(1H，m)，2.44(2H，t，J＝7.2Hz)，2.58(3H，d，J＝4.0Hz)，2.65～2.71(1H，m)，2.85～2.88(1H，m)，3.67(3H，s)，4.47(1H，m)，6.79(2H，d，J＝8.4Hz)，7.14(2H，d，J＝8.4Hz)，7.85(1H，d，J＝4.4Hz)，8.34(1H，d，J＝8.8Hz)，8.75(1H，br s)，10.43(1H，s).
處方例1(片劑)1片的含量實施例5的化合物 10mg乳糖 109mg玉米澱粉 27.25mg羥丙基纖維素 3mg硬脂酸鎂 0.75mg150mg
將實施例5的化合物、乳糖和玉米澱粉在混合機中混合，將此混合物用預先配製的羥丙基纖維素水溶液以流動層制粒法制粒。所得的顆粒物於40℃下乾燥後，與硬脂酸鎂均勻混合，壓縮成形，得每片重150mg的片劑。
處方例2(片劑)1片的含量實施例5的化合物 40mg乳糖 130.5mg玉米澱粉 14.5mg羥丙基纖維素 4mg羧甲基纖維素鈣 10mg硬脂酸鎂 1mg200mg將實施例5的化合物、乳糖和玉米澱粉在混合機中混合，將此混合物用預先配製的羥丙基纖維素水溶液以流動層制粒法制粒。所得的顆粒物於40℃下乾燥，在此顆粒物中均勻地混入羧甲基纖維素鈣和硬脂酸鎂後，壓縮成形，得每片重200mg的片劑。
權利要求
1.以通式(Ⅰ)
表示的化合物、其製藥學上允許的鹽、製藥學上允許的水合物、製藥學上允許的溶劑合物及其立體異構體，其特徵在於式中，R1為可被從巰基、低級烷基硫代基、芳基硫代基和低級醯基硫代基組成的一組中選擇的取代基取代的低級烷基；R2、R3和R4為相同或不同的低級烷基；X為氧原子或硫原子；Y為單鍵或低級亞烷基。
2.按權利要求1所述的化合物，其特徵在於-Y-X-R2基為丙氧甲基或丙基硫代基。
3.按權利要求1所述的化合物，其特徵在於-Y-X-R2基為丙氧甲基或丙基硫代基，同時，R1為低級烷基或低級烷基硫代甲基。
4.Na-〔〔3-(N-羥基氨基甲醯基)-4-甲硫基-2-丙氧甲基〕丁醯基〕-N，O-二甲基酪氨醯胺，其製藥學上允許的鹽或其立體異構體。
5.Na-〔〔3-(N-羥基氨基甲醯基)-4-異丙基硫代-2-丙氧甲基〕丁醯基〕-N，O-二甲基酪氨醯胺，其製藥學上允許的鹽或其立體異構體。
6.Na-〔〔3-(N-羥基氨基甲醯基)-2-丙硫基〕丁醯基〕-N，O-二甲基酪氨醯胺，其製藥學上允許的鹽或其立體異構體。
7.一種醫藥組合物，其特徵在於由權利要求1所記載的化合物(Ⅰ)、其製藥學上允許的鹽、製藥學上允許的水合物、製藥學上允許的溶劑合物或其立體異構體與製藥學上允許的載體所組成。
8.按權利要求7所述的醫藥組合物，其特徵在於是一種以結締組織破壞亢進為主要原因的疾病的預防和/或治療劑。
9.以通式(Ⅰ)
表示的化合物、其製藥學上允許的鹽、製藥學上允許的水合物、製藥學上允許的溶劑合物及其立體異構體的製備方法，式中，R1為可被從巰基、低級烷基硫代基、芳基硫代基和低級醯基硫代基組成的一組中選擇的取代基取代的低級烷基;R2、R3和R4為相同或不同的低級烷基;X為氧原子或硫原子;Y為單鍵或低級亞烷基，該方法的特徵在於(a)通式(Ⅱ)
式中，R2、R3、R4、X和Y意義同前，R1-a為除巰基取代的低級烷基外，與R1相同的基團所表示的羧酸或其活性衍生物與通式(Ⅲ)式中R5為氫原子或保護基所表示的可被保護的羥胺或其鹽進行反應，根據需要再除去保護基，(b)通式(Ⅳ)
式中，R1-a、R2、R5、X和Y意義同前，表示的可被保護的羧酸或其活性衍生物與通式(Ⅴ)
式中，R3和R4意義同前，表示的胺或其鹽進行反應，根據需要再除去保護基，或(C)通式(Ⅰ-a)
式中，R2、R3、R4、X和Y意義同前，R6為氫原子或C1-5烷基，A1為低級亞烷基，表示的低級醯基硫代低級烷基取代的化合物加水分解。
全文摘要
通式(I)(式中R本發明化合物有間質金屬蛋白酶阻斷作用，可作為結締組織破壞亢進所致疾病的預防、治療劑。
文檔編號A61P29/00GK1073166SQ9211298
公開日1993年6月16日 申請日期1992年11月6日 優先權日1991年11月6日
發明者磯村八州男, 赤松清二郎, 餘田徹, 工藤雅文, 須賀亮 申請人:山之內製藥株式會社