N-乙醯-β-氨基葡萄糖苷酶診斷試劑盒及N-乙醯-β-氨基葡萄糖苷酶活性測定方法
2023-10-21 10:58:02
專利名稱:N-乙醯-β-氨基葡萄糖苷酶診斷試劑盒及N-乙醯-β-氨基葡萄糖苷酶活性測定方法
技術領域:
本發明涉及一種N-乙醯-(3-氨基葡萄糖苷酶(EC3.2丄30)診斷試 劑盒,同時本發明還涉及測定N-乙醯-p-氨基葡萄糖苷酶(EC 3.2丄30) 活性的方法,屬於醫學檢驗測定技術領域。
背景技術:
N-乙醯-P-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)是細胞內溶酶體的一種酸性水 解酶。研究結果表明,人體液(血液、尿液)中NAG活力的大小可用作 多種疾病的有效輔助診斷指標,檢測體液中NAG活力具有重要的臨床 價值。NAG可作為腎損傷一個極為靈敏的指標,由休克引起急性腎功 能衰竭患者尿中極度增高,最高可達正常人的1200倍。急性腎小球腎 炎、腎病症候群,毒物或藥物引起的腎毒性反應均可使NAG增加。腎 移植後,酶測定可用來判斷有無排斥反應。病理性增高見於各種腎實 質性病變,腎移植排異反應,腎毒性藥物使用過多。某些腎小球腎炎、 腎病症候群也有部分升高。
NAG活力的測定主要有螢光分光光度法和可見分光光度法。前者 因所需儀器價格昂貴,且對底物溶液配製的要求較高而不宜用作一般 醫院的常規檢驗;後者已見報導的方法在各種實驗條件的選定上雖各 有千秋,但有的操作麻煩費時,有的所選定的條件或試劑穩定性欠佳,
難以滿足臨床檢驗要求。
發明內容
本發明要解決的技術問題是提出一種利用酶比色法(Enzymatic Colorimetric Method)技術,連續監測在580nm波長處吸光度的變化, 得以測定N-乙醯-f3-氨基葡萄糖苷酶活性的方法,同時,本發明還將給 出用以實現該方法的N-乙醯-p-氨基葡萄糖苷酶診斷試劑盒,採用該試 劑盒不僅可以在可見光分析儀或半、全自動生化分析儀上進行N-乙醯 -p-氨基葡萄糖苷酶活性測定,而且測定速度快、準確度高,因而可以 得到切實的推廣應用。
本發明N-乙醯-p-氨基葡萄糖苷酶活性測定方法原理如下
間甲酚磺醯二甲酸厄吲基-|3-乙醯氨基葡萄糖苷
乙醯氨基葡萄糖苷酶 間甲酚磺醯二甲酸厄吲+乙醯氨基葡萄糖苷 這種方法應用N-乙醯-P-氨基葡萄糖苷酶酶促反應連續監測法。N-乙醯 -卩-氨基葡萄糖苷酶酶解間甲酚磺醯二甲酸厄吲基-(3-乙醯氨基葡萄糖 苷反應產生間甲酚磺醯二甲酸厄剛基(在580nm處有吸收峰,摩爾消 光係數為40.670),通過測量580nm處吸光度上升的速度,可以測算 N-乙醯-P-氨基葡萄糖苷酶的活性大小。
實驗表明,從測定結果的準確性和配製成本的經濟性兩方面綜合 考慮,無論是單劑或雙劑,如下成分關係的本發明N-乙醯-p-氨基葡萄 糖苷酶診斷試劑盒較為理想
緩衝液 100mmol/L
穩定劑 50 mmol/L
間甲酚磺醯二甲酸厄吲基-P-乙醯氨基葡萄糖苷2 mmol/L 本發明的N-乙醯-P-氨基葡萄糖苷酶診斷試劑盒可以是單劑,包括 緩衝液、穩定劑、間甲酚磺醯二甲酸厄吲基-P-乙醯氨基葡萄糖苷。試 劑盒可以是乾粉狀態,在使用前加水溶解後使用;也可以配製成液體 試劑,直接使用。
也可以將上述單劑試劑配成如下雙劑試劑 試劑1
緩衝液、穩定劑。 試劑2
緩衝液、穩定劑、間甲酚磺醯二甲酸厄吲基-p-乙醯氨基葡
萄糖苷。
間甲酚磺醯二甲酸厄吲基-P-乙醯氨基葡萄糖苷在試劑1或試劑2 中的位置可以不限。試劑盒可以是乾粉狀態,在使用前加水溶解後使 用;也可以配製成液體試劑,直接使用。
具體實施例方式
下面結合實施例子對本發明作進一步的說明。 實施例一
本實施例的N-乙醯-P-氨基葡萄糖苷酶診斷試劑為單試劑,包括 咪唑/鹽酸緩衝液 50 mmol/L
穩定劑 50 mmol/L
間甲酚磺醯二甲酸厄吲基-P-乙醯氨基葡萄糖苷2 mmol/L
試劑全部溶解配好後,分裝入瓶,進行冷凍乾燥,製成乾粉試劑; 使用前,加入純淨水,復溶後使用。
在全自動生化分析儀上設定溫度37i:,反應時間IO分鐘,起 始吸光度《0.1,測試主波長580nm,測試副波長660nm,被測N-乙醯 -(3-氨基葡萄糖苷酶樣品與試劑的體積比例為1/25,反應方向為正反應 (上升反應),延遲時間大約l分鐘左右,檢測時間2分鐘左右,理論 K值639。
加入樣品和試劑後,使之混合併發生反應,最終將反應物置於生 化分析儀下,檢測主波長580nm吸光度上升的速度,從而測算出N-
vi、,
乙醯-p-氨基葡萄糖苷酶的活性大z
實施例二
本實施例的N-乙醯-P-氨基葡萄糖苷酶診斷試劑為雙試劑,包括: 試劑1
磷酸氫二鈉-檸檬酸緩衝液
穩定劑
50 mmol/L
50 mmol/L
試劑2
磷酸氫二鈉-檸檬酸緩衝液
50 mmol/L
穩定劑 50 mmol/L
間甲酚磺醯二甲酸厄吲基-p-乙醯氨基葡萄糖苷2mmol/L 試劑全部溶解配好後,分裝入瓶,製成液體雙試劑,可以直接使用。 在全自動生化分析儀上設定溫度37"C,反應時間10分鐘,起始 吸光度《0.1,測試主波長580nm,測試副波長660nm,被測N-乙醯-卩-
氨基葡萄糖苷酶樣品與試劑1、試劑2的體積比例為2/20/5,反應方向 為正反應(上升反應),延遲時間大約1分鐘左右,檢測時間2分鐘左 右,理論K值332。
加入樣品和試劑後,使之混合併發生反應,最終將反應物置於生化 分析儀下,檢測主波長580nm吸光度上升的速度,從而測算出N-乙醯-P-氨基葡萄糖苷酶的活性大小。
總之,實驗證明,採用本發明的測定方法完全可以通過一般生化分 析儀器得出所需的測定結果,並且靈敏度高、精確度好、不受內外源 物質的汙染,便於推廣應用。
權利要求
1.一種N-乙醯-β-氨基葡萄糖苷酶活性測定方法,其方法原理如下間甲酚磺醯二甲酸厄吲基-β-乙醯氨基葡萄糖苷 乙醯氨基葡萄糖苷酶間甲酚磺醯二甲酸厄吲+乙醯氨基葡萄糖苷間甲酚磺醯二甲酸厄吲基-β-乙醯氨基葡萄糖苷m-Cresolsulfonphthaleinyl-N-acetyl-D-glucosamine間甲酚磺醯二甲酸厄吲m-Cresolsulfonphthalein將最終反應物置於可見光分析儀或半、全自動生化分析儀下,檢測主波長580nm吸光度上升的速度,測算出N-乙醯-β-氨基葡萄糖苷酶的活性大小測定結果。
2. —種N-乙醯-P-氨基葡萄糖苷酶診斷試劑盒,主要成分包括緩衝液 20~~500腿ol/L穩定劑 1- 50mmol/L間甲酚磺醯二甲酸厄吲基-P-乙醯氨基葡萄糖苷0.2-10mmol/L其特徵在於試劑盒可以是乾粉狀態,在使用前加水溶解後使用;也可以配製成液體試劑,直接使用。
3. 根據權利要求2所述N-乙醯-P-氨基葡萄糖苷酶診斷試劑盒,其特 徵在於由緩衝液、穩定劑、間甲酚磺醯二甲酸厄噴基-P-乙醯氨基 葡萄糖苷組成單劑試劑。
4. 根據權利要求2所述N-乙醯-l3-氨基葡萄糖苷酶診斷試劑盒,其特徵在於由緩衝液、穩定劑、間甲酚磺醯二甲酸厄n引基-(3-乙醯氨基葡萄糖苷組成雙劑試劑;試劑l,由緩衝液、穩定劑組成;試劑2, 由緩衝液、穩定劑、間甲酚磺醯二甲酸厄吲基-p-乙醯氨基葡萄糖苷 組成。間甲酚磺醯二甲酸厄吲基-(3-乙醯氨基葡萄糖苷在試劑1或試 劑2中的位置可以不限。
5. 根據權利要求2所述N-乙醯-(3-氨基葡萄糖苷酶診斷試劑盒,其特 徵在於還包括穩定劑1~4000 mmol/L或0.1。/。-100。/。體積比。所 述穩定劑為硫酸銨(Ammonia Sulfate)、甘油(Glycerol)、丙二 醇(Propylene Glycol)、乙二醇(Ethylene glycol)及防腐劑中的至 少一種。
全文摘要
本發明涉及一種N-乙醯-β-氨基葡萄糖苷酶診斷試劑盒,同時本發明還涉及測定N-乙醯-β-氨基葡萄糖苷酶活性的方法原理、試劑的組成及成分,屬於醫學檢驗測定技術領域。本發明的試劑盒主要成分包括緩衝液、間甲酚磺醯二甲酸厄吲基-β-乙醯氨基葡萄糖苷及穩定劑;通過將樣品與試劑按一定的體積比混合,使之發生一系列的酶促反應,再將反應物置於可見光分析儀下,檢測主波長580nm處吸光度上升的速度,從而測算出N-乙醯-β-氨基葡萄糖苷酶的活性大小。採用本發明完全可以通過可見光分析儀器得出所需的測定結果,便於推廣應用。
文檔編號G01N21/77GK101173901SQ20061009733
公開日2008年5月7日 申請日期2006年10月30日 優先權日2006年10月30日
發明者王爾中 申請人:蘇州艾傑生物科技有限公司