製備噬菌體混合物的方法以及該噬菌體混合物在抗生素抗性葡萄球菌治療中的用途的製作方法

2023-10-21 18:35:42

專利名稱：製備噬菌體混合物的方法以及該噬菌體混合物在抗生素抗性葡萄球菌治療中的用途的製作方法
製備噬菌體混合物的方法以及該噬菌體混合物在抗生素抗 性葡萄球菌治療中的用途細菌感染引發多種疾病，其中一些疾病是致命的。很多細菌感染已成功地通過開 發抗生素得以抗擊。然而，大量使用不同抗生素已經導致出現經常不僅對一種抗生素有抗 性而是對多種抗生素有抗性的細菌。如此高抗性的細菌菌株越來越多地引發嚴重的問題， 特別是發生在醫院中，因為在醫院中即使在醫師實施治療時病人也可能被這樣的菌株感 染。如果該菌株對於大多數的通常所用的抗生素具有抗性，這將引起特別嚴重的疾病，其後 果經常是死亡。在本發明的範圍內，請求保護一種抗擊細菌的可選手段。存在多種攻擊植物和動 物且經常引發嚴重的疾病的病毒，同樣地，也存在特異地攻擊細菌的病毒。這些病毒被稱為 噬菌體。它們通常對於特定類型的細菌是特異的且經常連接至細菌細胞壁上那些通常發生 養分(例如糖等)吸收的區域。噬菌體的吸收發生在細菌細胞壁上，噬菌體將它們的核苷 酸注入到細菌中。核苷酸在細菌中進行複製並形成噬菌體特異蛋白質。當細菌細胞中有足 夠的噬菌體核苷酸的拷貝數和充足的噬菌體蛋白質時，它們溶解細菌細胞且釋放大量已形 成的噬菌體進入環境中。然後又可以開始感染的循環。發現噬菌體用於治療特定疾病的用途已有幾十年。該抗擊細菌的方法在東歐 國家中得以顯著發展。在WO 2004/052274中記載了生產噬菌體組合物的方法，該噬菌 體組合物可以用於細菌感染的治療中且特別地用於治療由綠膿假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa)引發的細菌感染。在該申請中，用半固體培養基來培養噬菌體。WO 97/39111 記載了生產具有寬宿主譜(a widespectrum of hosts)的噬菌體的方法以及該噬菌體在治 療中的用途。在W001/50866中公開了用於消滅在各種固體表面上的細菌的噬菌體混合物 (cocktail of bacteriophage)，例如在手術室中或甚至在牲畜棚(facilities forhousing livestock)禾口屠宰場中。US 2004/0247569記載了含有噬菌體的醫藥組合物，該噬菌體可以使多種抗生素 抗性細菌失活，例如腸球菌、金黃色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)、假單胞菌等。WO 2006/047870記載了吸附在基質(matrix)上的固定的噬菌體組合物。0，Flaherty等人， 在 Applied and Environmental Microbiology [2005]，pp. 1836-1842 中描述了 抗葡萄 球菌屬噬菌體K和其用於控制來自醫院的抗生素抗性葡萄球菌的用途。WO 2007/148919 記載了金黃色葡萄球菌特異的噬菌體以及其在抗擊感染中的用途。Capparelli等人，在 Antimicrobialagents and Chemotherapy [2007], pp. 2675-2773 中記載了噬菌體 Msa 和其 在小鼠模型中對抗金黃色葡萄球菌的用途。Rashel等人，在JID[2007]，pp. 1237-1247中 記載了對內溶素的克隆，該內溶素是來自噬菌體OMRll的分解肽聚糖(ρ印tidoglycan)的 酶。本發明涉及生產噬菌體混合物(mixture of bacteriophage)的方法，其中，首先 使葡萄球菌屬菌株與可以溶解葡萄球菌的噬菌體在預培養(preculture)中生長，然後進 一步在主培養(main culture)中繁殖(!^production)。然後組合大量所述噬菌體以形成 混合物。
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所用的噬菌體混合物包括至少兩種，優選至少三種不同的噬菌體的血清型 (serotype of bacteriophage)，該噬菌體特異地溶解葡萄球屬菌種的細菌。噬菌體株優選 使用來自肌病毒科(Myoviridae)和短尾病毒科(Podoviridae)的噬菌體。本發明的一個重要方面是如下事實使用大量不同的噬菌體，該噬菌體都具有 可以溶解葡萄球菌的共同屬性。具體來說，所用的噬菌體必須溶解涉及疾病和對於人類 和/或動物是致病條件的葡萄球菌。作為特別優選，本發明所用的噬菌體溶解葡萄球菌， 且具體來說是金黃色葡萄球菌菌株，其對於抗生素是有抗性的且具體來說是對甲氧西林 (methicillin)具有抗性的。本發明的一個重要方面是大量不同的噬菌體存在於噬菌體混 合物中。這些噬菌體可以是特異溶解金黃色葡萄球菌菌株的噬菌體，但是它們也可以是溶 解其他類型細菌的噬菌體，雖然這種噬菌體株僅優選用於補充屬於至少兩種不同血清型的 噬菌體的混合物。用於本發明所述方法的噬菌體可以是有特徵明確的噬菌體或者是來源於野生分 離株。為此目的，使用一般的噬菌體分離方法並且從合適的來源開始，首先通過和葡萄球菌 屬菌株聯合生長使噬菌體增多然後將其用於本發明的方法中。在本發明的方法中，出於安全原因，優選金黃色葡萄球菌的甲氧西林敏感菌株用 於繁殖噬菌體。在醫院經常會出現的問題感染就是由金黃色葡萄球菌的甲氧西林抗性菌株所引 起的，其經常縮寫為MRSA。然而，優選用於繁殖噬菌體混合物的是金黃色葡萄球菌的甲氧西 林敏感性菌株(MSSA)。根據布達佩斯條約，優選的菌株現在存放在德國微生物和細胞培養 物保藏中心(German Collectionof Microorganisms and Cell Cultures)，登陸號為 DSM 18421。根據本發明的用於繁殖噬菌體的金黃色葡萄球菌菌株的特別重要的優點在 於，大量下述毒力因子(Virulence factor)不存在於該菌株中。以下是位於移動元件 (transferrable element)上白勺毒素決定M (toxin determinant)tst 161/93sea 619/93seb 62/92sec 1229/93sed 1634/93see FRJ918eta 1437/100eta, etb 1004/00IukS-IukF 3925/02cna 2773/03seg N315seg 和 seh 2773/03.在優選的實施方式中，上述毒力因子全部不存在於所用的菌株中。由此，毒力因子不會從用於繁殖的菌株轉移到噬菌體上，從這個方面來說噬菌體 的繁殖是特別安全的。
根據本發明的用於繁殖的菌株的另一個優點在於即使在多次傳代之後菌株中繁 殖的噬菌體的特性也不會改變。根據本發明為了生產噬菌體混合物，第一步使所用的金黃色葡萄球菌菌株的預培 養物生長。當該細菌達到合適的光密度時，添加待繁殖的噬菌體，調整預培養物中的細菌與 噬菌體的比率至大約IO5 IO2細菌比1個噬菌體。然後使預培養物和噬菌體生長直到細菌開始溶解。將含有噬菌體的預培養物添加 到葡萄球菌的主培養物中，優選調整比率使得存在的細菌顯著過量。特別優選的範圍是對 於每個噬菌體大約有50 1000個細菌。上述過剩獲得如下結果所有存在於預培養物中 的噬菌體均找到合適的細菌並在該細菌中進行繁殖。噬菌體比細菌的比率也指已知的MOI (感染複數(multiplicity of infection)) 值。在優選的實施方式中，預培養中和主培養中的MOI值是10_6 1。在本發明的方法中，通常在大小合適的發酵罐中實施主培養。在發酵罐中，可以連 續地控制單個環境參數例如供氣(air infeed)、pH、養分的添加等。在優選的實施方式中， 在減少供氣的條件下進行主培養物的生長，且PH也優選維持在範圍5. 8 7. 8。在發酵之後，噬菌體通常通過下述步驟從發酵液中獲得通過第一次離心和/或 過濾掉發酵培養基從而分離除掉來源於已溶解的細菌的細胞組分。在這種情況下，優選 通過一個或多個過濾器(filter)過濾上清液，選擇孔徑從而使得在第一次過濾時任何可 能存在的細菌無法通過過濾器。這些過濾器的孔徑優選的範圍為0. 1 Ι.Ομπι，優選為 0. 1「111 0.5「111，更優選為0. Ιμπι 0. 45 μ m，最優選為0. 1 0. 2 μ m。由於噬菌體的大 小更小，因此噬菌體可以通過這個尺寸的過濾器。然而，必須注意的是，所使用的過濾器是 儘可能不會吸附噬菌體的過濾器，這是因為如果噬菌體吸附在過濾器上，這可能導致過濾 器變得阻塞以及使噬菌體的產率變差。在進一步的步驟中，優選對含有噬菌體的溶液進行滲濾從而使得噬菌體不能通過 小孔從而在溶液中濃縮。噬菌體的濃度可以快速地利用微生物測定的標準方法來測定。所 述溶液優選含有每毫升至少IOkiPFU' s (噬斑形成單位(plaque-forming unit))的濃度。在本發明的範圍內，使用至少兩種或更多種噬菌體的混合物。優選按照下述方法 生產此類混合物首先通過所用的每一種噬菌體來生產含有確定噬菌體濃度的溶液，然後 以需要的比率混合所述溶液。濃縮的噬菌體可以屬於相同的噬菌體分類(class)或甚至 屬於不同的噬菌體分類。在特別優選的實施方式中，噬菌體混合物由肌病毒科的兩種不同 種類的噬菌體組成。特別優選，一方面噬菌體混合物具有KP3類型的噬菌體和/或鑑定為 MP13.3的噬菌體。除此之外，混合物也可以包括其它合適的噬菌體。2006年10月18日兩種優選的噬菌體存放在Brunswick的德國微生物和細胞培養 物保藏中心[Deutsche Sammlung von Mikroorganismen undZellkulturen GmbH]。給予 噬菌體株MP13. 3的登錄號為DSM 18722以及給予命名為KP3的噬菌體株的登錄號為DSM 18723。按照布達佩斯條約進行存放。按如下的方式生產噬菌體混合物，首先每個噬菌體株單獨地在宿主細菌中進行繁 殖。在純化每種噬菌體製劑並測定其滴度(titre)之後，製備混合物，在這種情況下，在單 個噬菌體之間的比率可在1 10 10 1的範圍內變化。優選所用的混合物由大約同等 比例的兩種噬菌體組成，每一種的比例均基於噬斑形成單位。其它分別繁殖的噬菌體株也可以添加入所述的混合物中。根據本發明的噬菌體混合物可以經受合適的進一步處理從而用作藥劑 (medicament)。在這些階段中，必須注意不使所述噬菌體失活。優選添加保護物質例如增 稠物質，例如甘油或聚乙二醇。當藥劑以液體形式給藥時，此類添加劑是優選。在另一優選的實施方式中，根據本發明的噬菌體混合物具有穩定劑，特別優選人
血清清蛋白。在優選的實施方式中，根據本發明的噬菌體混合物以如下方式用作藥劑，至少還 有一種酶添加到噬菌體溶液中，所述酶對於噬菌體溶液的效率具有協同效應。討論的所述 酶可能本身是殺菌的。因此可以使用細胞溶素(Iysin)，例如溶菌酶，其來自不同的來源，換 言之來自噬菌體、來自細菌(內溶素(endolysinshexolysins)或來自其他來源。任選地， 可以使用例如分離自雞蛋的溶菌酶，其可以溶解細菌的細胞壁，特別是革蘭氏陽性細菌。同 樣可以有利地使用屬於蛋白酶和/或肽酶組的其它酶。在這種情況下，一個舉出的例子是 木瓜蛋白酶(papain)。最後，酶也可以是核酸酶或氨基葡萄糖苷酶，雖然其本身不是直接殺 菌的，但是可以起到協助噬菌體的作用。在特別優選的實施方式中，上述酶是蛋白酶沙雷菌蛋白酶 (proteaseserralysin)，其由菌株粘質沙雷氏菌(Serratia marcescens)生產。另一個優 選的酶是核酸酶Benzonase或鏈球菌DNA酶α (dornase α )。在實施例7中，公開了該組合 在生物基質(唾液)中的優良特性。如果以不同方式應用本發明的噬菌體混合物，對混合物進行冷凍乾燥 (Iyophilised)可能對其是有利的。在這樣情況下，可以添加非常合適的保護組分例如各種糖。可以以溶液、酊劑(tincture)、藥膏或外用藥水(lotion)的方式應用本發明的藥 劑。在另一優選的實施方式中，此類藥劑除含有噬菌體混合物之外，還含有優選對革蘭氏陽 性細菌有效的抗生素。這種組合的背景如下所述事實上通過本發明的噬菌體混合物溶解 甲氧西林抗性細菌。然而同時其目的還在於阻止任何其它可能存在的且對抗生素沒有抗性 的細菌再一次活躍(flourish)。因為抗生素抗性經常編碼在葡萄球菌的質粒上，本身是抗 生素敏感的細菌可以吸收溶解細菌的質粒。這種現象可以通過優選的組合來阻止。本發明的噬菌體混合物優選用於生產用來治療因抗生素抗性金黃色葡萄球菌菌 株所引發的感染的藥劑。在優選的實施方式中，上述這些感染出現在皮膚或黏膜上。本發 明的噬菌體混合物可以容易地且有效地治療這些感染。在這種情況下，存在的優點是噬菌 體混合物不必通過靜脈注射和/或肌內注射進行給藥。而可以簡單地以溶液、粉末、噴霧或 藥膏的方式施用於受感染區域。根據本發明的噬菌體混合物一方面可以用於治療已存在的感染。然而，根據本發 明的另一方面，噬菌體混合物也可以用於預防由抗生素抗性葡萄球菌屬菌株引起的感染危 險。在這種情況下，預防地使用噬菌體混合物。在格外特別優選的實施方式中，本發明的噬 菌體混合物可以治療地使用也可以預防地使用，特別是對於治療肺感染或避免肺感染的危 險。肺經常承受增加的感染危險，這是因為細菌，特別是抗生素抗性細菌可以容易地通過呼 吸和換氣設備找到進入肺的路徑。本發明的噬菌體混合物的另一優選的應用領域是用於眼睛。如果發生這類感染，
6噬菌體混合物以滴眼劑(eye drop)的方式進行給藥。本發明的方法顯示在

圖1流程圖中。在根據本發明方法的優選實施方式中，添加Benzonase至含有噬菌體的溶液中。 主要來源於溶解的葡萄球菌的高分子量DNA通過Benzonase進行裂解，從而使得不需擔心 傳染性或可能的葡萄球菌DNA片斷的重組(recombination)。另一方面，所述Benzonase對 於噬菌體溶液的粘性(viscosity)有有益效果。因此優選在微量過濾(microfiltration) 之前或在滲濾之後添加Benzonase。如果添加了 Benzonase，建議在通過離子交換色譜法進 行純化之後還進行凝膠色譜。通過該手段除去仍然存在的Benzonase殘餘物。Benzonase 的分子量介於30000 40000道爾頓之間。因此可取的是，用於凝膠色譜法的色譜柱材料 具有針對約100000道爾頓的空隙體積(void volume)，優選約50000道爾頓的空隙體積。添加Benzonase的另外的顯著優點在於增加了離子交換色譜法中的產率。換言 之，喪失的噬菌體更少，這是因為對與核苷酸絡合(complexing)存在有益效果從而提高了 產率。本發明的另一優選方面是可以通過添加人血清清蛋白來穩定噬菌體懸浮液 (suspension)。可以是從人血漿中得到的人血清清蛋白。然而，在這種情況下，必須除去任 何病毒的汙染物。任選地，可以使用通過重組過程生產的人血清清蛋白來避免病毒汙染物 的危險。在另一優選的實施方式中，通過添加Mg2+濃度介於0. 1 IOOmM(優選介於1 IOmM)的鎂離子以穩定噬菌體溶液。在格外特別優選的實施方式中，通過添加鎂離子和人血 清清蛋白來實現穩定。通過以下實施例對本發明進行說明。實施例1 在發酵罐中生產噬菌體1. 1微生物用於發酵的細菌噬斑測試細菌噬菌體1. 2營養培養基a) APS LB 發酵液稱量出20g已制好的培養基(Becton Dickinson，批號430510)，溶解在去離子水 中並添加去離子水至1升的終體積。以這樣的方式生產的培養基的天然PH大約是6. 8且
MRSA M. 03. 02. 0028，從 Freiburg 的 Daschner 教授處 獲得的菌株的冷凍培養物。按照布達佩斯條約，菌株 已存放在德國微生物和細胞培養物保藏中心，編號為 18421。
金黃色葡萄球菌M. 03. 02. 0008,從Freiburg的 Daschner教授處獲得。按照布達佩斯條約，菌株已存 放在德國微生物和細胞培養物保藏中心，編號為DSM 18421。
初始噬菌體I，經無菌過濾 濃度:lX1010PFU/ml
已分別生長的兩種噬菌體株KP3 (DSM 18723)和 MP13. 3 (DSM 18722)。不需要進行調節。121°C對培養基滅菌20分鐘，然後放置於室溫環境(室溫為20-22°C )。b) APS LB發酵液(發酵)稱量出20g現成的培養基(見上)和2. 5g MgS04 (Roth, pro analysi)，溶解在去離 子水中並添加去離子水至1升的終體積。121°C在培養基準備器(MediaPr印preparatory) 對培養基滅菌20分鐘，然後直接注入已滅菌的培養瓶中。c) LB 培養基10g來自酪蛋白的胰蛋白腖(Roth，微生物用)，5g氯化鈉(Roth, proanalysi)和 酵母提取物(Roth，細菌用)溶解在去離子水中並添加去離子水至1升的終體積。為了配製固體營養培養基，添加15g瓊脂/每升(Roth，高純度)。121°C對培養基 滅菌20分鐘。瓊脂平板保存在室溫下。用於檢測的平板是在所述條件下已保存最多為一 個星期的平板。d) Vogel-Johnson 瓊月旨(Vogel-Johnson agar)將58g已制好的培養基(Merck)溶解在1升熱的去離子水中，然後在121°C滅菌 20分鐘。冷卻培養基至大約50°C，然後添加0. 24g/l的亞碲酸鉀(無菌過濾溶液)。將培 養基注入到培養皿(Petri dish)中，所述培養皿在超淨工作檯(clean bench)中乾燥30 分鐘然後在4°C保存。e)LB頂層瓊脂l.Og來自酪蛋白的胰蛋白腖，0.5g 氯化鈉，0. 8g 瓊脂，溶解於去離子水中，添加去離子束使混合物為100ml，然後在121°C滅菌20分鐘。 維持在60°C的乾燥箱內直到使用。1. 3緩衝液a) 0.85% 氯化鈉將0. 85g氯化鈉溶解在去離子水中並添加去離子水至100ml的終體積。在121°C 對所述緩衝液滅菌20分鐘。b)噬菌體緩衝液20mM Tris(pH 7. 4), (Roth, ultra quality),lOOmM 氯化鈉，lOmM MgS04X7H20,由無菌貯存液和無菌去離子水配製。保存於室溫。c) 1M NaOH將40. 01g NaOH (Roth)溶解在去離子水中並添加去離子水至1升的終體積。在 121°C對溶液滅菌20分鐘和然後維持於室溫。d) pH(calibrating solution) pH 4. 01 (Mettler Toledo)pH 7. 00 (Mettler Toledo)e)氧氣探針(p02探針，測量培養基中的氧氣分壓)對p02探針進行標定，首先在任務欄中按下標定按鈕然後在接下來的窗口中按下 p02按鈕。在這種情況下，將溫度值調節至室溫或輸入溶液的溫度。
f)光密度探針0D探針未標定，但是對於特定的培養基在每次新運行時簡單地調節至0。因為所 述探針還沒有線性化，沒有必要和由分光光度計(photometer)測量的0D_進行外部比較。g)pH 的測量在測量之前打開pH計並調節所需要的溫度。檢查pH計的標定狀態和如有必需則 參照廠商說明書進行標定。探針從3M的KC1溶液中取出並用去離子水衝洗乾淨。用紙巾 擦乾探針並保持在待測量的溶液中。可以通過振動或攪拌溶液來加速測量過程。記下所測 量的數值，從溶液中拿出探針並用70%的乙醇進行徹底地衝洗，然後用去離子水進行衝洗， 用紙巾擦乾並放回到3M的KC1的溶液中。1. 5細菌菌株的生長-從-80°C的冷凍室中取出準備用於發酵的1.1中特定的菌株的冷凍甘油培養物 並在超淨工作檯中解凍。-將2接種環細胞原料接種至20ml的APSLB培養基中並在37°C和200rpm振動 條件下進行過夜溫育。1.6 發酵-從37°C操作的振動培養箱中取出培養基。-取出0.1ml用於光密度的測量，1份培養物用9份培養基進行稀釋 (0. 9mlAPS-LB+0. lml培養物)，測量出的0D_的平均值為1. 363。-用撓性管抽取(flexiblewithdrawal tubing)培養基樣品並加入到Eppi (= Eppendorf公司製備的反應容器)中。每份500 u 1平鋪在LB瓊脂和Vogel-Johnson瓊脂 上並在37°C過夜溫育。1.7調整過夜的培養物的0D至8.0-將培養物(culture)和培養基(medium)在無菌Falcon管中混合併用無菌培養 基稀釋調節光密度至約8.0。1.8細菌/噬菌體的溫育-在Eppi，s中用噬菌體緩衝液稀釋待使用的噬菌體(1.1)至2X 10_2(終體積= 2ml的2X10—2稀釋液)-當容器中的溫度穩定時，將15ml的經調節的細菌培養物和2ml噬菌體在Falcon 管中混合併在37°C溫育20分鐘。-通過針頭抽吸細菌和噬菌體的混合物到20ml的注射器中，並通過隔膜注入培養
瓶蓋中。-攪拌3分鐘之後，測定用於發酵的第一個測量值。1.9CFU/ml 的測定-調整培養基的0D至8.0並按照以下表格進行移液，形成稀釋倍數(factor)為 10的稀釋液系列表1
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權利要求
用於製備噬菌體混合物的方法，在該方法中，分別繁殖至少兩種不同的噬菌體株，其中葡萄球菌屬菌株與噬菌體株中的每一種在預培養中生長，所述噬菌體株可以溶解葡萄球菌，然後在主培養中進一步繁殖，之後進行純化，隨後混合所述不同的株，其特徵在於使用的噬菌體混合物包括至少兩種不同的噬菌體血清型，所述噬菌體特異地溶解葡萄球屬菌種的細菌，以及用於繁殖所述噬菌體的細菌菌株是金黃色葡萄球菌的甲氧西林敏感菌株。
2.根據權利要求1所述的方法，其特徵在於所述金黃色葡萄球菌的甲氧西林敏感菌株 的登錄號為DSM 18421。
3.根據上述權利要求中任一項所述的方法，其特徵在於將在預培養中生長的細菌和噬 菌體的混合物添加至葡萄球菌預先生長的培養物中，調整噬菌體比細菌的比率使得MOI值 為0. 01 1。
4.根據上述權利要求中任一項所述的方法，其特徵在於所述噬菌體的純化包括離子交 換色譜法和/或用Benzonase進行處理。
5.根據上述權利要求中任一項所述的方法，其特徵在於所述噬菌體混合物含有登錄號 為DSM 18722的噬菌體MP13. 3和登錄號為DSM 18723的噬菌體KP3。
6.噬菌體混合物，其特徵在於所述噬菌體具有每微克蛋白質至少IO8噬斑形成單位的 比活。
7.根據權利要求6的噬菌體混合物，其特徵在於所述混合物含有分別具有每微克蛋白 質至少IO8PFU比活的噬菌體MP13. 3 (DSM 18722)和/或噬菌體KP3 (DSM 18723)。
8.根據權利要求6或7所述的噬菌體混合物，該噬菌體混合物通過權利要求1 6中 任一項所述的方法獲得。
9.藥劑，其特徵在於所述藥劑含有權利要求6 8中任一項所述的噬菌體混合物。
10.根據權利要求9所述的藥劑，其特徵在於所述藥劑還含有對於革蘭氏陽性細菌有 效的抗生素。
11.根據權利要求9或10所述的藥劑，其特徵在於所述藥劑還含有酶，所述酶選自細 胞溶素、蛋白酶、肽酶、核酸酶和/或氨基葡萄糖苷酶和/或穩定噬菌體的物質，其選自人血 清清蛋白和/或Mg2+離子。
12.根據權利要求6 8中任一項所述的噬菌體混合物用於製備藥劑的用途，所述藥劑 用來治療由抗生素抗性葡萄球菌所引發的感染。
13.根據權利要求6 8中任一項所述的噬菌體混合物用於製備藥劑的用途，所述藥劑 用來預防治療以預防由抗生素抗性葡萄球菌所引發的感染。
14.根據權利要求12或13所述的用途，其特徵在於所述感染是皮膚和/或黏膜的感
15.根據權利要求12或13所述的用途，其特徵在於所述感染由對多種抗生素具有抗性 的葡萄球菌所引發。
全文摘要
本發明涉及用於製備噬菌體混合物的方法，在該方法中，分別繁殖至少兩種不同的噬菌體株，其中葡萄球菌屬菌株與噬菌體株中的每一種在預培養中生長，所述噬菌體株可以溶解葡萄球菌，然後在主培養中進一步繁殖，之後進行純化，隨後混合所述不同的株，其中，使用的噬菌體混合物包括至少兩種不同的噬菌體血清型，所述噬菌體特異地溶解葡萄球菌種的細菌。
文檔編號A61P31/04GK101977616SQ200980110033
公開日2011年2月16日 申請日期2009年3月13日 優先權日2008年3月20日
發明者羅伯特·F·米勒 申請人:菲託萊恩有限責任公司