延胡索定性定量中藥飲片的質量標準與製造工藝的製作方法

2023-10-22 06:54:47 1

本發明涉及中藥領域，具體為延胡索定性定量中藥飲片的質量標準、操作規程與製造工藝。

背景技術：

延胡索(學名：Corydalis yanhusuo W.T.Wang ex Z.Y.Su et C.Y.Wu)，又名：延胡、玄胡索、元胡索、元胡等，為罌粟科、紫堇屬多年生草本植物，其藥用部位為乾燥塊莖，主產浙江省東陽、磐安一帶。元胡史載於《開寶本草》，性溫，味辛苦，入心、脾、肝、肺，是活血化瘀、行氣止痛之妙品，尤以止痛之功效而著稱於世。李時珍在《本草綱目》中歸納元胡有「活血，利氣，止痛，通小便」四大功效，並推崇元胡「能行血中氣滯，氣中血滯，故專治一身上下諸痛」。正因為延胡索效果顯著，臨床應用廣泛，在《中國藥典》2005年版中，接近30％的複方製劑中使用了延胡索，其市場前景廣闊。

胡索含20多種生物鹼，據現行版《中國藥典》中記載，延胡索的功能與主治為：活血，行氣，止痛。用於胸脅、脘腹疼痛，胸痺心痛，經閉痛經，產後瘀阻，跌扑腫痛。延賀凱、高建莉、趙光樹的《延胡索化學成分、藥理作用及質量控制研究進展》對延胡索的功效綜述為：延胡索中的生物鹼具有很強的鎮痛、鎮靜、降壓和抗心律失常作用，目前，很多新研究表明，延胡索還具有其他廣泛的生理活性，如抗心肌缺血、抗實驗性胃潰瘍、抗腫瘤、抗氧化、保肝等，延胡索乙素是其中多數藥理作用的主要活性成分。延胡索乙素為鎮痛的主要成分，其功能與主治具有活血，行氣，止痛的功效。20世紀中葉，中國科學家成功地從延胡索中分離出鎮痛效果明顯的延胡索乙素，它的鎮痛作用較解熱鎮痛藥強，又沒有杜冷丁等鎮痛藥物的成癮性，口服吸收良好，適用於內科疾病引起的鈍痛，如頭痛、月經痛及分娩痛等。

延胡索作為應用廣泛的中藥材，為滿足市場需求，現多採用人工種植的方式，因此也不可避免的會產生農藥殘留導致重金屬超標等質量問題，黃衛平等的《「浙八味」藥材中重金屬鉛、鎘、銅含量分析》中指出由於環境的影響以及植物可能對重金屬的富集，中藥材中重金屬普遍存在，「由於國際國內對中藥材中的有害重金屬十分重視並有逐年提高限量要求的趨勢，加強對藥材重金屬的檢測和控制，制訂相應的限量指標尤為必要。」

附圖說明

附圖1是延胡索定性定量中藥飲片生產工藝流程圖。

技術實現要素：

為了解決上述問題，本發明提供的延胡索定性定量中藥飲片的質量標準與製造工藝，增加藥屑雜質、重金屬及有害元素、有機氯農藥殘留量、黃麴黴毒素B1、二氧化硫殘留量、含量測定，並將含量測定中的延胡索乙素的標準限度從0.040％(延胡索中藥材標準)提高至0.044％。並通過特定的工序生產出片厚0.3～1mm的延胡索中藥飲片，確保中藥飲片符合高標準高品質的要求。

本發明提供的延胡索定性定量中藥飲片的製造工藝，包括以下步驟：

A10、淨制：清除混在延胡索中的雜質、灰塵及黴變品等，以便達到潔淨或進一步加工處理。

A20、切碎：碎粒，按粗碎機操作規程操作，用孔徑3mm的篩網將延胡索進行切碎操作。切碎後崗位人員需填寫中間產品請檢單，交質管部由QA取樣進行中間產品檢查。

A30、包裝：根據本品包裝規格要求進行包裝。包括前需對包裝間進行檢查，確認包裝生產線的清場已經完成，並核對包裝材料是否符合要求。

A40、內包裝：在設備上調整好需要印製的生產日期、批號，QA監控，稱取規定重量的藥材放入料鬥中，用封口機封口，要求做到封口嚴密、平整、美觀。操作過程中每隔30min抽樣檢測裝量、封口及生產日期印製是否清晰等情況。

A50、外包裝：在設備上調整好需印製的生產日期及批號，QA監控，在外包裝盒子上列印批號、生產日期，列印過程中需注意批號及生產日期是否清晰。將內包裝完成後的飲片及檢驗報告書放入外包盒中，4袋/盒。將每10盒飲片，套入1個熱縮膜中，進行熱收縮；熱收縮後裝入大紙箱中，240盒/箱。操作過程中，QA隨時抽檢。

A60、包裝後崗位人員需填寫成品請檢單，交質量部由QA取樣進行產品檢查。

增加藥屑雜質、重金屬及有害元素、有機氯農藥殘留量、黃麴黴毒素B1、二氧化硫殘留量、含量測定，並將含量測定中的延胡索乙素的標準限度從0.040％(延胡索中藥材標準)提高至0.044％。修訂後的延胡索定性定量中藥飲片的質量標準如下所示：

延胡索飲片

拼音名稱：Yanhusuo Yinpian

包裝：純鋁複合膜包裝。

【性狀】取本品適量，在日光下觀察，本品呈不規則的碎塊。外表皮黃色或黃褐色，有不規則細皺紋。斷面黃色，角質樣，具蠟樣光澤。嗅之，氣微，嘗之，味苦。

【鑑別】

顯微鑑別

儀器及用具：中藥粉碎機、藥典篩、顯微鏡、酒精燈

試劑及試液：水合氯醛試液、甘油醋酸試液、甘油乙醇試液、稀甘油(試劑均使用分析純，實驗用水為純化水)

測定及結果判定：取本品粉末(過四號篩)適量，挑取少許置載玻片上，滴加甘油醋酸試液、水合氯醛試液或其他試液1～2滴，蓋上蓋玻片。必要時滴加水合氯醛試液後，在酒精燈上加熱透化，並滴加甘油乙醇試液或稀甘油，蓋上蓋玻片，於顯微鏡下觀察：本品粉末綠黃色。糊化澱粉粒團塊淡黃色或近無色。下皮厚壁細胞綠黃色，細胞多角形、類方形或長條形，壁稍彎曲，木化，有的成連珠狀增厚，紋孔細密。螺紋導管直徑16～32μm。

薄層鑑別

儀器及用具：中藥粉碎機、分析天平、藥典篩、超聲波清洗機、恆溫水浴鍋、點樣器、展開缸、薄層板、三用紫外儀

試劑及試液：乙醚、乙醇、正己烷、乙酸乙酯、碳酸氫鈉、甲醇、環己烷、二氯甲烷、甲酸、稀鹽酸(試劑均使用分析純，實驗用水為純化水)

對照藥材及對照品：延胡索對照藥材、阿魏酸對照品、藁本內酯對照品

取本品粉末1g，加甲醇50ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸乾，殘渣加水10ml使溶解，加濃氨試液調至鹼性，用乙醚振搖提取3次，每次10ml，合併乙醚液，蒸乾，殘渣加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液。另取延胡素對照藥材1g，同法製成對照藥材溶液。再取延胡索乙素對照品，加甲醇製成1ml含0.5mg的溶液，作為對照品溶液照薄層色譜法(通則0502)試驗，吸取上述三種溶液各2～3μl分別點於同一用1％氫氧化鈉溶液製備的矽膠G薄層板上，以甲苯-丙酮(9∶2)為展開劑，展開，取出，晾乾，置碘缸中約3分鐘後取出，揮盡板上吸附的碘後，置紫外光燈(365nm)下檢視。結果判定：供試品色譜中，在與對照藥材色譜和對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的螢光斑點。

結果判定：供試品色譜中，在與對照藥材色譜和對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的螢光斑點。

檢查

藥屑、雜質

儀器及用具：中藥粉碎機、分析天平、藥典篩

測定及結果判定：照雜質檢查法(通則2301)測定。取供試品約100g(精確到0.1g)，攤開，揀出雜質，用6號篩篩出藥屑，合併，稱重，計算其在供試品中的量(％)。結果判定：本品藥屑、雜質不得過3％。

水分

儀器及用具：中藥粉碎機、分析天平、藥典篩、電熱恆溫鼓風乾燥箱、稱量瓶

測定及結果判定：照水分測定法(通則0832第二法)測定。取供試品適量(約相當於含水量1～4ml)，精密稱定，置500ml的短頸圓底燒瓶中，加甲苯約200ml，必要時加入乾燥、潔淨的無釉小瓷片數片或玻璃珠數粒，連接儀器，自冷凝管頂端加入甲苯至充滿水分測定管的狹細部分。將圓底燒瓶置電熱套中或用其他適宜方法緩緩加熱，待甲苯開始沸騰時，調節溫度，使每秒餾出2滴。待水分完全餾出，即測定管刻度部分的水量不再增加時，將冷凝管內部先用甲苯衝洗，再用飽蘸甲苯的長刷或其他適宜方法，將管壁上附著的甲苯推下，繼續蒸餾5分鐘，放冷至室溫，拆卸裝置，如有水黏附在水分測定管的管壁上，可用蘸甲苯的銅絲推下，放置使水分與甲苯完全分離(可加亞甲藍粉末少量，使水染成藍色，以便分離觀察)。檢讀水量，並計算成供試品的含水量(％)。結果判定：本品水分不得過15.0％。

總灰分

儀器及用具：中藥粉碎機、分析天平、藥典篩、馬弗爐、電爐、坩堝

測定及結果判定：照灰分測定法(通則2302)測定。取供試品2～3g(如須測定酸不溶性灰分，可取供試品3～5g)，置熾灼至恆重的坩堝中，稱定重量(準確至0.01g)，緩緩熾熱，注意避免燃燒，至完全炭化時，逐漸升高溫度至500～600℃，使完全灰化並至恆重。根據殘渣重量，計算供試品中總灰分的含量(％)。結果判定：本品總灰分不得過4.0％。

重金屬及有害元素

儀器及用具：中藥粉碎機、分析天平、藥典篩、微波消解儀、原子吸收分光光度計

試劑及試液：硝酸、磷酸二氫銨、硝酸鎂、碘化鉀、抗壞血酸、鹽酸、硼氫化鈉、氫氧化鈉、硫酸、高錳酸鉀、鹽酸羥胺(其中硝酸、磷酸二氫銨、硝酸鎂為優級純，其他試劑均使用分析純，實驗用水為純化水)

標準樣品：鉛單元素標準樣品、鎘單元素標準樣品、砷單元素標準樣品、汞單元素標準樣品、銅單元素標準樣品

方法：照鉛、鎘、砷、汞、銅測定法(通則2321)測定

鉛的測定(石墨爐法)

測定條件參考條件：波長283.3nm，乾燥溫度100～120℃，持續20秒；灰化溫度400～750℃，持續20～25秒；原子化溫度1700～～2100℃，持續4～5秒。

鉛標準貯備液的製備精密量取鉛單元素標準溶液適量，用2％硝酸溶液稀釋，製成每1ml含鉛(Pb)1μg的溶液，即得(0～5℃貯存)。

標準曲線的製備分別精密量取鉛標準貯備液適量，用2％硝酸溶液製成每1ml分別含鉛0ng、5ng、20ng、40ng、60ng、80ng的溶液。分別精密量取1ml，精密加含1％磷酸二氫銨和0.2％硝酸鎂的溶液0.5ml，混勻，精密吸取20μl注入石墨爐原子化器，測定吸光度，以吸光度為縱坐標，濃度為橫坐標，繪製標準曲線。

供試品溶液的製備A法取供試品粗粉0.5g，精密稱定，置聚四氯乙烯消解罐內，加硝酸3～5ml，混勻，浸泡過夜，蓋好內蓋，旋緊外套，置適宜的微波消解爐內，進行消解(按儀器規定的消解程序操作)。消解完全後，取消解內罐置電熱板上緩緩加熱至紅棕色蒸氣揮盡，並繼續緩緩濃縮至2～3ml，放冷，用水轉入25ml量瓶中，並稀釋至刻度，搖勻，即得。同法同時製備試劑空白溶液。

測定法精密量取空白溶液與供試品溶液各1ml，精密加含1％磷酸二氫銨和0.2％硝酸鎂的溶液0.5ml，混勻，精密吸取10～20μl，照標準曲線的製備項下方法測定吸光度，從標準曲線上讀出供試品溶液中鉛(Pb)的含量，計算，即得。

鎘的測定(石墨爐法)

測定條件參考條件：波長228.8nm，乾燥溫度100～120℃，持續20秒；灰化溫度300～500℃，持續20～25秒；原子化溫度1500～1900℃，持續4～5秒。

鎘標準貯備液的製備精密量取鎘單元素標準溶液適量，用2％硝酸溶液稀釋，製成每1ml含鎘(Cd)1μg的溶液，即得(0～5℃貯存)。

標準曲線的製備分別精密量取鎘標準貯備液適量，用2％硝酸溶液稀釋製成每1ml分別含鎘0ng、0.8ng、2.0ng、4.0ng、6.0ng、8.0ng的溶液。分別精密吸取10μl，注入石墨爐原子化器，測定吸光度，以吸光度為縱坐標，濃度為橫坐標，繪製標準曲線。

供試品溶液的製備同鉛測定項下供試品溶液的製備。

測定法精密吸取空白溶液與供試品溶液各10～20μl，照標準曲線的製備項下方法測定吸光度(若供試品有幹擾，可分別精密量取標準溶液、空白溶液和供試品溶液各1ml，精密加含1％磷酸二氫銨和0.2％硝酸鎂的溶液0.5ml，混勻，依法測定)，從標準曲線上讀出供試品溶液中鎘(Cd)的含量，計算，即得。

砷的測定(氫化物法)

測定條件採用適宜的氫化物發生裝置，以含硼氫化鈉和0.3％氫氧化鈉溶液(臨用前配製)作為還原劑，鹽酸溶液(1→100)為載液，氮氣為載氣，檢測波長為193.7nm。

砷標準貯備液的製備精密量取砷單元素標準溶液適量，用2％硝酸溶液稀釋，製成每1ml含砷(As)1μg的溶液，即得(0～5℃貯存)。

標準曲線的製備分別精密量取砷標準貯備液適量，用2％硝酸溶液稀釋製成每1ml分別含砷0ng、5ng、10ng、20ng、30ng、40ng的溶液。分別精密量取10ml，置25ml量瓶中，加25％碘化鉀溶液(臨用前配製)1ml，搖勻，加10％抗壞血酸溶液(臨用前配製)1ml，搖勻，用鹽酸溶液(20→100)稀釋至刻度，搖勻，密塞，置80℃水浴中加熱3分鐘，取出，放冷。取適量，吸入氫化物發生裝置，測定吸收值，以峰面積(或吸光度)為縱坐標，濃度為橫坐標，繪製標準曲線。

供試品溶液的製備同鉛測定項下供試品溶液的製備中的A法製備。

測定法精密吸取空白溶液與供試品溶液各10ml，照標準曲線的製備項下，自「加25％碘化鉀溶液(臨用前配製)1ml」起，依法測定。從標準曲線上讀出供試品溶液中砷(As)的含量，計算，即得。

汞的測定(冷蒸氣吸收法)

測定條件採用適宜的氫化物發生裝置，以含0.5％硼氫化鈉和0.1％氫氧化鈉的溶液(臨用前配製)作為還原劑，鹽酸溶液(1→100)為載液，氮氣為載氣，檢測波長為253.6nm。

汞標準貯備液的製備精密量取汞單元素標準溶液適量，用2％硝酸溶液稀釋，製成每1ml含汞(Hg)1μg的溶液，即得(0～5℃貯存)。

標準曲線的製備分別精密量取汞標準貯備液0ml、0.1ml、0.3ml、0.5ml、0.7ml、0.9ml，置50ml量瓶中，加20％硫酸溶液10ml、5％高錳酸鉀溶液0.5ml，搖勻，滴加5％鹽酸羥胺溶液至紫紅色恰消失，用水稀釋至刻度，搖勻。取適量，吸入氫化物發生裝置，測定吸收值，以峰面積(或吸光度)為縱坐標，濃度為橫坐標，繪製標準曲線。

供試品溶液的製備A法取供試品粗粉0.5g，精密稱定，置聚四氟乙烯消解罐內，加硝酸3～5ml，混勻，浸泡過夜，蓋好內蓋，旋緊外套，置適宜的微波消解爐內進行消解(按儀器規定的消解程序操作)。消解完全後，取消解內罐置電熱板上，於120℃緩緩加熱至紅棕色蒸氣揮盡，並繼續濃縮至2～3ml，放冷，加20％硫酸溶液2ml、5％高錳酸鉀溶液0.5ml，搖勻，滴加5％鹽酸羥胺溶液至紫紅色恰消失，轉入10ml量瓶中，用水洗滌容器，洗液合併於量瓶中，並稀釋至刻度，搖勻，必要時離心，取上清液，即得。同法同時製備試劑空白溶液。

測定法精密吸取空白溶液與供試品溶液適量，照標準曲線製備項下的方法測定從標準曲線上讀出供試品溶液中汞(Hg)的含量，計算，即得。

銅的測定(火焰法)

測定條件檢測波長為324.7nm，採用空氣-乙炔火焰，必要時進行背景校正。

銅標準貯備液的製備精密量取銅單元素標準溶液適量，用2％硝酸溶液稀釋，製成每1ml含銅(Cu)10μg的溶液，即得(0～5℃貯存)。

標準曲線的製備分別精密量取銅標準貯備液適量，用2％硝酸溶液製成每1ml分別含銅0μg、0.05μg、0.2μg、0.4μg、0.6μg、0.8μg的溶液。依次噴入火焰，測定吸光度，以吸光度為縱坐標，濃度為橫坐標，繪製標準曲線。

供試品溶液的製備同鉛測定項下供試品溶液的製備。

測定法精密吸取空白溶液與供試品溶液適量，照標準曲線的製備項下的方法測定。從標準曲線上讀出供試品溶液中銅(Cu)的含量，計算，即得。

結果判定：本品含鉛不得過8mg/kg；鎘不得過0.8mg/kg；砷不得過4mg/kg；汞不得過0.8mg/kg；銅不得過20mg/kg。

有機氯類農藥殘留量

儀器及用具：中藥粉碎機、分析天平、藥典篩、旋轉蒸發儀、超聲波清洗機、氣相色譜儀

試劑及試液：石油醚(60～90℃)、丙酮、氯化鈉、二氯甲烷、無水硫酸鈉(其中石油醚(60～90℃)為色譜純，其他試劑均使用分析純，實驗用水為純化水)

對照品：α-BHC，β-BHC，γ-BHC，δ-BHC、pp′-DDE，pp′-DDD，op′-DDT，pp′-DDT、PCNB農藥對照品

方法：照農藥殘留量測定法(通則0512第一法)測定。

色譜條件與系統適用性試驗以(14％-氰丙基-苯基)甲基聚矽氧烷或(5％苯基)甲基聚矽氧烷為固定液的彈性石英毛細管柱(30m×0.32mm×0.25μm)，63Ni-ECD電子捕獲檢測器。進樣口溫度230℃，檢測器溫度300℃，不分流進樣。程序升溫：初始100℃，每分鐘10℃升至220℃，每分鐘8℃升至250℃，保持10分鐘。理論板數按α-BHC峰計算應不低於1×106，兩個相鄰色譜峰的分離度應大於1.5。

對照品貯備溶液的製備精密稱取六六六(BHC)(α-BHC，β-BHC，γ-BHC，δ-BHC)、滴滴涕(DDT)(pp′-DDE，pp′-DDD，op′-DDT，pp′-DDT)及五氯硝基苯(PCNB)農藥對照品適量，用石油醚(60～90℃)分別製成每1ml約含4～5μg的溶液，即得。

混合對照品貯備溶液的製備精密量取上述各對照品貯備液0.5ml，置10ml量瓶中，用石油醚(60～90℃)稀釋至刻度，搖勻，即得。

混合對照品溶液的製備精密量取上述混合對照品貯備液，用石油醚(60～90℃)製成每1L分別含0μg、1μg、5μg、10μg、50μg、100μg、250μg的溶液，即得。

供試品溶液的製備取供試品，粉碎成粉末(過三號篩)，取約2g，精密稱定，置100ml具塞錐形瓶中，加水20ml浸泡過夜，精密加丙酮40ml，稱定重量，超聲處理30分鐘，放冷，再稱定重量，用丙酮補足減失的重量，再加氯化鈉約6g，精密加二氯甲烷30ml，稱定重量，超聲15分鐘，再稱定重量，用二氯甲烷補足減失的重量，靜置(使分層)，將有機相迅速移入裝有適量無水硫酸鈉的100ml具塞錐形瓶中，放置4小時。精密量取35ml，於40℃水浴上減壓濃縮至近幹，加少量石油醚(60～90℃)如前反覆操作至二氯 甲烷及丙酮除淨，用石油醚(60～90℃)溶解並轉移至10ml具塞刻度離心管中，加石油醚(60～90℃)精密稀釋至5ml，小心加入硫酸1ml，振搖1分鐘，離心(3000轉/分鐘)10分鐘，精密量取上清液2ml，置具刻度的濃縮瓶中，連接旋轉蒸發器，40℃下(或用氮氣)將溶液濃縮至適量，精密稀釋至1ml，即得。

測定法分別精密吸取供試品溶液和與之相對應濃度的混合對照品溶液各1μl，注入氣相色譜儀，按外標法計算供試品中9種有機氯農藥殘留量。

結果判定：本品含總六六六(α-BHC、β-BHC、γ-BHC、δ-BHC之和)不得過0.2mg/kg；總滴滴涕(pp′-DDE、pp′-DDD、op′-DDT、pp′-DDT之和)不得過0.2mg/kg；五氯硝基苯不得過0.1mg/kg。

二氧化硫殘留量

儀器及用具：中藥粉碎機、分析天平、藥典篩、電熱套

試劑及試液：過氧化氫、甲基紅乙醇溶液、0.01mol/L氫氧化鈉滴定液、鹽酸溶液(6mol/L)(試劑均使用分析純，實驗用水為純化水)

方法：照二氧化硫殘留量測定法(通則2331)測定。

取藥材或飲片細粉約10g，精密稱定，置兩頸圓底燒瓶中，加水300～400ml。打開回流冷凝管開關給水，將冷凝管的上端E口處連接一橡膠導氣管置於100ml錐形瓶底部。錐形瓶內加入3％過氧化氫溶液50ml作為吸收液(橡膠導氣管的末端應在吸收液液面以下)。使用前，在吸收液中加入3滴甲基紅乙醇溶液指示劑(2.5mg/ml)，並用0.01mol/L氫氧化鈉滴定液滴定至黃色(即終點；如果超過終點，則應捨棄該吸收溶液)。開通氮氣，使用流量計調節氣體流量至約0.2L/min；打開分液漏鬥C的活塞，使鹽酸溶液(6mol/L)10ml流入蒸餾瓶，立即加熱兩頸燒瓶內的溶液至沸，並保持微沸；燒瓶內的水沸騰1.5小時後，停止加熱。吸收液放冷後，置於磁力攪拌器上不斷攪拌，用氫氧化鈉滴定液(0.01mol/L)滴定，至黃色持續時間20秒不褪，並將滴定的結果用空白實驗校正。

結果判定：本品二氧化硫殘留量不得過150mg/kg。

浸出物

儀器及用具：中藥粉碎機、分析天平、藥典篩、恆溫水浴鍋、電熱恆溫鼓風乾燥箱

試劑及試液：70％乙醇(試劑使用分析純，實驗用水為純化水)

方法：照醇溶性浸出物測定法(通則2201)項下的熱浸法測定，用70％乙醇作溶劑。

取供試品約2～4g，精密稱定，置100～250ml的錐形瓶中，精密加70％乙醇50～100ml，密塞，稱定重量，靜置1小時後，連接回流冷凝管，加熱至沸騰，並保持微沸1小時。放冷後，取下錐形瓶，密塞，再稱定重量，用70％乙醇補足減失的重量，搖勻，用乾燥濾器濾過，精密量取濾液25ml，置已乾燥至恆重的蒸發皿中，在水浴上蒸乾後，於105℃乾燥3小時，置乾燥器中冷卻30分鐘，迅速精密稱定重量。除另有規定外，以乾燥品計算供試品中醇溶性浸出物的含量(％)。

結果判定：本品醇溶性浸出物不得少於50.0％。

黃麴黴毒素B1

儀器及用具：中藥粉碎機、分析天平、藥典篩、均質瓶、離心機、高效液相色譜儀(配置螢光檢測器及衍生化泵、衍生化保溫箱)

試劑及試液：甲醇、乙腈、碘、氯化鈉、免疫親合柱(其中乙腈為色譜純，其他試劑為分析純，實驗用水為純化水)

對照品：黃麴黴毒素B1對照品

方法：照黃麴黴毒素測定法(通則2351)測定。

色譜條件與系統適用性試驗以十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑；以甲醇-乙腈-水(40∶18∶42)為流動相；採用柱後衍生法檢測，碘衍生法：衍生溶液為0.05％的碘溶液(取碘0.5g，加入甲醇100ml使溶解，用水稀釋至1000ml製成)，衍生化泵流速每分鐘0.3ml，衍生化溫度70℃以螢光檢測器檢測，激發波長λex＝360nm(或365nm)，發射波長λex＝450nm。兩個相鄰色譜峰的分離度應大於1.5。

混合對照品溶液的製備精密量取黃麴黴毒素B1對照品溶液(標示濃度為1.0μg/ml)0.5ml，置10ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，作為貯備溶液。精密量取貯備溶液1ml，置25ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，即得。

供試品溶液的製備取供試品粉末約15g(過二號篩)，精密稱定，置於均質瓶中，加入氯化鈉3g，精密加入70％甲醇溶液75ml，高速攪拌2分鐘(攪拌速度大於11000轉/分鐘)，離心5分鐘(離心速度2500轉/分鐘)，精密量取上清液15ml，置50ml量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，量取續濾液20.0ml，通過免疫親合柱，流速每分鐘3ml，用水20ml洗脫，洗脫液棄去，使空氣進入柱子，將水擠出柱子，再用適量甲醇洗脫，收集洗脫液，置2ml量瓶中，並用甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

測定法分別精密吸取上述混合對照品溶液5μl、10μl、15μl、20l、25μl，注入液相色譜儀，測定峰面積，以峰面積為縱坐標，進樣量為橫坐標，繪製標準曲線。另精密吸取上述供試品溶液20～25μl，注入液相色譜儀，測定峰面積，從標準曲線上讀出供試品中相當於黃麴黴毒素B1的量，計算，即得。

結果判定：本品每1000g含黃麴黴毒素B1不得過5μg。

二氧化硫殘留量

儀器及用具：中藥粉碎機、分析天平、藥典篩、電熱套

試劑及試液：過氧化氫、甲基紅乙醇溶液、0.01mol/L氫氧化鈉滴定液、鹽酸溶液(6mol/L)(試劑均使用分析純，實驗用水為純化水)

方法：照二氧化硫殘留量測定法(通則2331)測定。取藥材或飲片細粉約10g，精密稱定，置兩頸圓底燒瓶中，加水300～400ml。打開回流冷凝管開關給水，將冷凝管的上端E口處連接一橡膠導氣管置於100ml錐形瓶底部。錐形瓶內加入3％過氧化氫溶液50ml作為吸收液(橡膠導氣管的末端應在吸收液液面以下)。使用前，在吸收液中加入3滴甲基紅乙醇溶液指示劑(2.5mg/ml)，並用0.01mol/L氫氧化鈉滴定液滴定至黃色(即終點；如果超過終點，則應捨棄該吸收溶液)。開通氮氣，使用流量計調節氣體流量至約0.2L/min；打開分液漏鬥C的活塞，使鹽酸溶液(6mol/L)10ml流入蒸餾瓶，立即加熱兩頸燒瓶內的溶液至沸，並保持微沸；燒瓶內的水沸騰1.5小時後，停止加熱。吸收液放冷後，置於磁力攪 拌器上不斷攪拌，用氫氧化鈉滴定液(0.01mol/L)滴定，至黃色持續時間20秒不褪，並將滴定的結果用空白實驗校正。

結果判定：本品二氧化硫殘留量不得過150mg/kg。

含量測定

儀器及用具：中藥粉碎機、分析天平、藥典篩、恆溫水浴鍋、高效液相色譜儀

試劑及試液：甲醇、氨水、磷酸、三乙胺(其中甲醇為色譜純，其他試劑均使用分析純，實驗用水為純化水)

對照品：延胡索乙素對照品

方法：照高效液相色譜法(通則0512)測定。

色譜條件與系統適用性試驗以十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑；以甲醇-0.1％磷酸溶液(三乙胺調pH值至6.0)(55∶45)為流動相；檢測波長為280mn。理論板數按延胡索乙素峰計算應不低於3000。

對照品溶液的製備取延胡索乙素對照品適量，精密稱定，加甲醇製成每1ml含46ug溶液，即得。

供試品溶液的製備取本品粉末(過三號篩)約0.5g，精密稱定，置平底燒瓶中，精密加入濃氨試液-甲醇(1∶20)混合溶液50ml，稱定重量，冷浸1小時後加熱回流1小時，放冷，再稱定重量，用濃氨試液-甲醇(1∶20)混合溶液補足減失的重量，搖勻，濾過。精密量取續濾液25ml，蒸乾，殘渣加甲醇溶解，轉移至5ml量瓶中，並稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，即得。

結果判定：本品按乾燥品計算，含延胡索乙(C21H25NO4)不得少於0.044％

微生物限度

沙門菌取本品10g，以無菌接種至適宜體積(經方法適用性實驗確定)的胰酪大豆腖液體培養基中，混勻，按非無菌產品微生物限度檢查：控制菌檢查法檢查。

結果判定：沙門菌不得檢出(10g)。

耐膽鹽革蘭陰性菌取本品，以無菌胰酪大豆腖液體培養基為稀釋劑，製成1∶10的供試液，混勻，按非無菌產品微生物限度檢查：控制菌檢查法檢查。

結果判定：耐膽鹽革蘭陰性菌應小於104cfu(1g)。