從蛇床子中製備蛇床子素和異茴芹內酯的工藝方法
2023-10-27 06:00:27 2
專利名稱：從蛇床子中製備蛇床子素和異茴芹內酯的工藝方法
技術領域：
本發明涉及從天然植物中製備活性成分的方法，具體地說，涉及一種從蛇床子中製備蛇床子素和異茴芹內酯的工藝方法。
背景技術：
蛇床子系傘形科植物蛇床Cnidium monnieri (L.) Cuss.的乾燥成熟果實，夏秋二季果實成熟時採收。性辛、苦，溫，有小毒，歸腎經。《中國藥典》2010年版一部記載具有燥溼祛風、殺蟲止癢、溫腎壯陽之功效，中醫用於陰癢帶下、溼疹瘙癢、溼痺腰痛、腎虛陽痿、宮冷不孕。蛇床子主要含有蛇床子素(osthole)、香柑內酯(bergapten)、異茴芹內酯 (isopimpinellin)、花椒毒素(xanthotoxin)、歐前胡素(imperatorin)等具有生物活性的香豆素類化合物。現代藥理研究表明，蛇床子中香豆素類成分在抗心律失常、抗骨質疏鬆、 抗愛滋病、抗真菌、抗腫瘤及抗誘變等方面均有作用。蛇床子素，即甲氧基歐芹素，分子式C15H16O3,分子量M4. 29,mp. 83-84°C，為白色針狀結晶。藥理研究表明蛇床子素具有抗高血壓、抗心律失常、抗衰老、抗腫瘤、抗骨質疏鬆症等功效。異茴芹內酯，又名異茴芹素、異茴芹靈、異虎耳草素，分子式C13HltlO5,分子量 M6.21，為無色針晶(乙酸乙酯)，mp.200-201°C。藥理研究表明，異茴芹內酯體外試驗對髮癬菌的鬚髮癬菌有強的活性，同時對體外培養的骨細胞代謝有積極作用。現有工藝主要有1、中國專利(申請號201010531931. 6) 「一種蛇床子素的製備方法」，採用80%醇
提、鹼洗雜、二次鹼沉、重結晶，得到蛇床子素，該方法使用大量鹼液，對產品結構產生了破壞。2、中國專利(申請號201010527673. 4) 「一種從中藥蛇床子中提取蛇床子素的方法」，通過滲漉、醇提水沉、結晶和重結晶等步驟，該方法提取率不高、產品純度低。3、中國專利(申請號2006100^997. 2) 「中藥蛇床子有效成分歐前胡素和蛇床子素的提取方法」，採用超臨界流體萃取、乙醚超聲提取和重結晶的方法得到歐前胡素和蛇床子素，該方法使用大量乙醚溶液，不適宜工業生產。
發明內容
本發明的目的在於提供一種從蛇床子中製備蛇床子素和異茴芹內酯的工藝方法， 以同時得到高純度的蛇床子素和異茴芹內酯。為實現上述目的，本發明的技術方案如下1)將蛇床子藥材粉碎，置於萃取釜中，進行超臨界(X)2萃取，解析，收集蛇床子提取物；幻將蛇床子提取物與聚醯胺樹脂按重量比1 1-3充分混勻，裝入層析柱，然後用20-95%乙醇洗脫，流速為0. 5-2BV/h，收集洗脫液，濃縮，得粗品；3)用水和乙腈按體積比1 1-1 3混合，配製混合液A，用乙酸乙酯和正己烷按體積比1 2-2 1，配製混合液B，將混合液A和混合液B均勻混合，充分飽和後，靜置 10-12小時，取上相為固定相，下相為流動相，將粗品用流動相溶解，將固定相泵入逆流色譜的螺旋管柱中，調節轉速為800-950rpm，以l-;3ml/min的流速將流動相泵入，待機子穩定後進樣，分別收集蛇床子素和異茴芹內酯流分，濃縮、低溫乾燥即得蛇床子素和異茴芹內酯。所述超臨界萃取溫度為43_50°C，萃取壓力為22_33MPa，解析溫度為20-40°C，解析壓力為8-10MPa，CO2流量為20_30L/h。本發明的優勢在於(1)採用超臨界提取技術，高效無溶劑殘留，對環境無汙染；(2)通過聚醯胺樹脂對香豆素類化合物的吸附和洗脫，操作簡單、分離效果好；(3)本發明採用高速逆流色譜製備工藝，較製備液相色譜製備工藝而言，克服了固相載體帶來的樣品吸附、損失和峰形拖尾等缺點，且HSCCC法具有製備量大、易於工業推廣等優點。
具體實施例方式下面結合實施例進一步對本發明加以說明實施例1 將蛇床子藥材粉碎，取Ikg置於萃取釜中，通入超臨界CO2流體，CO2流量為21L/h， 超臨界萃取溫度為45°C，萃取壓力為30MPa，解析溫度為34°C，解析壓力為lOMPa，進行超臨界CO2萃取，解析，收集蛇床子提取物。蛇床子提取物與聚醯胺樹脂按重量比1 1充分混勻，裝入層析柱，依次用去離子水、50%乙醇溶液和90%乙醇溶液洗脫，流速為0. 8BV/h，收集高濃度乙醇洗脫液，減壓濃縮，得粗品。用水和乙腈按體積比1 1混合，配製混合液A， 用乙酸乙酯和正己烷按體積比1 2，配製混合液B，將混合液A和混合液B均勻混合，充分飽和後，靜置10小時，取上相為固定相，下相為流動相，將粗品用流動相溶解，將固定相泵入逆流色譜的螺旋管柱中，調節轉速為900rpm，以2ml/min的流速將流動相泵入，待機子穩定後進樣，分別收集蛇床子素和異茴芹內酯流分。將蛇床子素流分濃縮、低溫乾燥得到蛇床子素，經HPLC檢測，純度為98.2% ；將異茴芹內酯流分濃縮、低溫乾燥得到異茴芹內酯，經 HPLC檢測，純度為98. 1%0實施例2 將蛇床子藥材粉碎，取3kg置於萃取釜中，通入超臨界(X)2流體，CO2流量為ML/h， 超臨界萃取溫度為43°C，萃取壓力為^MPa,解析溫度為^°C，解析壓力為8MPa，進行超臨界CO2萃取，解析，收集蛇床子提取物。蛇床子提取物與聚醯胺樹脂按重量比1 2充分混勻，裝入層析柱，依次用去離子水、30%乙醇溶液和90%乙醇溶液洗脫，流速為0. 5BV/h，收集高濃度乙醇洗脫液，減壓濃縮，得粗品。用水和乙腈按體積比1 3混合，配製混合液A， 用乙酸乙酯和正己烷按體積比1 2，配製混合液B，將混合液A和混合液B均勻混合，充分飽和後，靜置12小時，取上相為固定相，下相為流動相，將粗品用流動相溶解，將固定相泵入逆流色譜的螺旋管柱中，調節轉速為800rpm，以lml/min的流速將流動相泵入，待機子穩定後進樣，分別收集蛇床子素和異茴芹內酯流分。將蛇床子素流分濃縮、低溫乾燥得到蛇床子素，經HPLC檢測，純度為98. 0% ；將異茴芹內酯流分濃縮、低溫乾燥得到異茴芹內酯，經 HPLC檢測，純度為97.6%。實施例3 將蛇床子藥材粉碎，取5kg置於萃取釜中，通入超臨界(X)2流體，CO2流量為^L/h， 超臨界萃取溫度為50°C，萃取壓力為22. 5MPa，解析溫度為38°C，解析壓力為9MPa，進行超臨界CO2萃取，解析，收集蛇床子提取物。蛇床子提取物與聚醯胺樹脂按重量比1 3充分混勻，裝入層析柱，依次用去離子水、40 %乙醇溶液和95 %乙醇溶液洗脫，流速為1. OBV/h, 收集高濃度乙醇洗脫液，減壓濃縮，得粗品。用水和乙腈按體積比1 2混合，配製混合液 A，用乙酸乙酯和正己烷按體積比1 1，配製混合液B，將混合液A和混合液B均勻混合，充分飽和後，靜置11小時，取上相為固定相，下相為流動相，將粗品用流動相溶解，將固定相泵入逆流色譜的螺旋管柱中，調節轉速為850rpm，以2ml/min的流速將流動相泵入，待機子穩定後進樣，分別收集蛇床子素和異茴芹內酯流分。將蛇床子素流分濃縮、低溫乾燥得到蛇床子素，經HPLC檢測，純度為98.6% ；將異茴芹內酯流分濃縮、低溫乾燥得到異茴芹內酯， 經HPLC檢測，純度為98.4%。實施例4 ；將蛇床子藥材粉碎，取IOkg置於萃取釜中，通入超臨界(X)2流體，CO2流量為30L/ h，超臨界萃取溫度為47°C，萃取壓力為32MPa，解析溫度為20°C，解析壓力為8MPa，進行超臨界CO2萃取，解析，收集蛇床子提取物。蛇床子提取物與聚醯胺樹脂按重量比1 3充分混勻，裝入層析柱，依次用去離子水、20 %乙醇溶液和85 %乙醇溶液洗脫，流速為2. OBV/h, 收集高濃度乙醇洗脫液，減壓濃縮，得粗品。用水和乙腈按體積比1 3混合，配製混合液 A，用乙酸乙酯和正己烷按體積比2 1，配製混合液B，將混合液A和混合液B均勻混合，充分飽和後，靜置10小時，取上相為固定相，下相為流動相，將粗品用流動相溶解，將固定相泵入逆流色譜的螺旋管柱中，調節轉速為950rpm，以3ml/min的流速將流動相泵入，待機子穩定後進樣，分別收集蛇床子素和異茴芹內酯流分。將蛇床子素流分濃縮、低溫乾燥得到蛇床子素，經HPLC檢測，純度為97. 3% ；將異茴芹內酯流分濃縮、低溫乾燥得到異茴芹內酯， 經HPLC檢測，純度為96.7%。
權利要求
1.從蛇床子中製備蛇床子素和異茴芹內酯的工藝方法，其特徵在於1)將蛇床子藥材粉碎，置於萃取釜中，進行超臨界(X)2萃取，解析，收集蛇床子提取物；2)將蛇床子提取物與聚醯胺樹脂按重量比1 1-3充分混勻，裝入層析柱，然後用 20-95%乙醇洗脫，流速為0. 5-2BV/h，收集洗脫液，濃縮，得粗品；3)用水和乙腈按體積比1 1-1 3混合，配製混合液A，用乙酸乙酯和正己烷按體積比1 2-2 1，配製混合液B，將混合液A和混合液B均勻混合，充分飽和後，靜置10-12小時，取上相為固定相，下相為流動相，將粗品用流動相溶解，將固定相泵入逆流色譜的螺旋管柱中，調節轉速為800-950rpm，以l-3ml/min的流速將流動相泵入，待機子穩定後進樣， 分別收集蛇床子素和異茴芹內酯流分，濃縮、低溫乾燥即得蛇床子素和異茴芹內酯。
2.根據權利要求1所述的製備蛇床子素和異茴芹內酯的工藝方法，其特徵在於所述超臨界萃取溫度為43-50°C，萃取壓力為22-33MPa，解析溫度為20-40°C，解析壓力為 8-IOMPa, CO2 流量為 20_30L/h。
全文摘要
本發明公開一種從蛇床子中製備蛇床子素和異茴芹內酯的工藝方法。方法是蛇床子粉末先經超臨界CO2萃取，得到蛇床子提取物，然後經聚醯胺樹脂分離純化，得粗品，最後經高速逆流色譜進一步提純，得蛇床子素和異茴芹內酯純品。本發明首先在國內建立了異茴芹內酯的提純工藝，得到高純度的異茴芹內酯，而且本發明採用高速逆流色譜法製備工藝，較製備液相色譜法，克服了樣品吸附、損失等缺點，且高速逆流色譜具有製備量大、易於工業化等優點。
文檔編號C07D493/04GK102267968SQ20111015174
公開日2011年12月7日 申請日期2011年6月7日 優先權日2011年6月7日
發明者蘇劉花 申請人:南京澤朗農業發展有限公司