用於抑制神經元nmda受體(nmdar)與nmdar相互作用蛋白的相互作用的融合肽的製作方法

2024-04-03 07:00:05 2

專利名稱：用於抑制神經元nmda受體(nmdar)與nmdar相互作用蛋白的相互作用的融合肽的製作方法
技術領域：
易地確定。例如，可以將運載體肽融合於蛋白質如GFP，或可以用
放射性標記、酶或焚光團等(其可以容易地在細胞中加以檢測)來 標記運載體肽。然後，將融合的運載體肽轉染到細胞中或將其加入 培養基上清中並可以通過利用生物物理學標準方法來監測細月包月莫 的通透性。
如上文所限定的，融合肽的成分(I)可以由天然存在的胺基酸，
即L-胺基酸組成，或由D-胺基酸組成，即由包含D-胺基酸的氨基 酸序列(與天然序列相比具有逆-反次序)糹且成。術i吾"逆-反 (retro-inverso )"是指線性肽的同分異構體，其中序列的方向被反 轉並且每個胺基酸殘基的手性^皮反演。因此，本文中的以L-型存在 的任何序列在本文中也當然地披露為D-對映體(逆-反)肽序列。根據 本發明的D-對映體(逆-反)肽序列可以例如通過4十對相應的天然L-胺基酸序列合成反向的胺基酸序列來加以構建。在D-逆-反對映體 肽中，例如本發明的融合肽的成分，在每個單醯胺4定中的羰基和氨 基的位置發生交換，而保護在每個a碳處的側鏈基團的位置。如果 將逆-反肽用作本發明的融合肽的成分，則具有各種有用的特性。例 如，它們更有效地進入細胞，它們更穩定(尤其是在體內)並且表現 出比相應的L-肽更低的免疫原性。相反，天然存在的蛋白質通常包 含L-胺基酸。因此，幾乎所有分解酶(如蛋白酶或肽酶)可斷裂相 鄰L-胺基酸之間的肽4建。因此，由逆-反次序的D-對映體胺基酸組 成的本發明的融合肽，尤其是成分(II)以及可選地成分(I),在4艮大程 度上可抗蛋白水解。可以通過化學合成相應的天然存在的L-型胺基酸序列的反向
胺基酸序列或通過技術人員已知的任何其他適宜的方法來實現如
上文所限定的具有D-對映體胺基酸的本發明融合肽的成分的製備。 優選通過固相合成將D胺基酸連接於所期望的逆-反序列來進行上 述合成。除了 4吏用的D胺基酸並以逆-反次序胺基酸進行合成以外， 本發明的D胺基酸序列的固相合成在化學上與基於L胺基酸的肽的 合成才目同。例^口，在Brown J.等(1979), Methods in Enzymology, 68:109; Sambrook J, Maniatis T (1989)(上文)中才是供了用於構建4壬 何所期望的DNA序列的一^:方法。
可替換地，可以利用如上述所-坡露的化學合成來製備本發明的 融合肽或其成分的D-逆-反-對映體形式，其中利用本發明的融合肽 或其成分的L-型作為化學合成D-逆-反-對映體形式的母體。
如上文所限定的，本發明的融合肽的成分(II)選自能夠抑制神經 元N-曱基-D-天冬氨酸受體(NMDAR)與NMDAR相互作用蛋白(如 相關蛋白，例如PSD-95、神經元蛋白等)的相互作用的任何肽。這 樣的狀通常捕獲(一種或多種)NMDAR相互作用蛋白並由此抑制 NMDA受體與這些蛋白質的相互作用，反之亦然。而且，這些肽並 不阻斷NMDA受體，因此避免了與NMDA受體的阻斷有關的缺點。 更具體地，如上文所限定的本發明的融合肽的成分(II)可以選自設計 為通過才莫擬NMDAR的相互作用結構i或(例如，NR2的C端PDZ相 互作用結構域)或通過才莫擬相關蛋白的相互作用結構域(例如， PSD-95的PDZ1結構i或)來中斷NMDAR與其相關蛋白之間的相互 作用(例如PSD-95-NR2相互作用)的任何肽。適宜作為本發明的融 合肽的成分(II)的肽可以選自(但不限於)NMDA受體亞單位NRl和 NR2。 N-曱基-D-天冬氨酸(NMDA)受體的NRl和NR2亞單位由不 同基因編碼。在大鼠腦中，NRl亞單位的四個C端變體(NR1-1至 NRl-4)是單個基因編碼的，並通過CI和C2夕卜顯子盒(exon cassette )
16的選擇性剪接而產生，而NR2亞單位(NR2 A-D)由四種不同的基因 編碼。功能性NMDA受體來自於NR1變體與不同NR2亞單位的異 源多聚體糹且裝(heteromultimeric assembly) 。 NR2B亞單^f立與突觸 後緻密蛋白物95(PSD-95)、 SAP97等、以及蛋白質的膜相關鳥苷酸 樣激酶(MAGUK)家族的成員發生相互作用。這種相互作用通過 NR2B亞單位的C端tSXnV細胞內基序與PSD-95和SAP97蛋白的 N端PDZ(PSD-95, discs-large, ZO-l)結構i或的結合而發生。NR1-3 和NR1-4也都顯示一致的C端tSXnV基序。因此，用作本發明的 融合肽的成分(II)的肽可以選自包含tSXnV基序的肽，其中S是絲 氨酸，Xn是任何胺基酸(其中n為至少1、 2、 3、 4、 5等)，以及V 是纈氨酸。特別優選地，用作本發明的融合肽的成分(II)的肽可以選 自衍生自NMDAR的肽，其能夠結合於突觸後緻密物-95蛋白、結 合於PSD-95、結合於PSD-93、或結合於SAP102,更優選衍生自 這樣的肽，其結合PDZ-結合結構域，如包含多肽的PDZ2-結構域， 優選相應於PSD-95的殘基65-248,編碼PSD-95的第一和第二PDZ 結構域(PDZl-2)。通常，用作本發明的融合肽的成分(II)的上述肽包 含長度為5至40個胺基酸，優選長度為5至30個或5至20個氨 基酸，以及更優選長度為5至15個或甚至5至10個胺基酸。甚至 更優選地，適宜作為本發明的融合肽的成分(II)的肽可以選自包含 D-對映體胺基酸序列vdseisslk(SEQ ID NO: 31)的序列或與SEQ ID NO: 31的序歹'J(或任何上述序歹'J)具有約60、 70、 80、 90、 95、或最 優選99%的序列一致性的序列。
如在本文中所限定的，術語"序列一致性"是指如下述對序列 進行比較。為了確定兩個胺基酸序列的一致性百分數(percent identity),出於最佳比較的目的，可以對序列進行比對(例如，可以 在第一胺基酸序列的序列中引入空位)。然後可以比較在相應胺基酸 位置的胺基酸。當第一序列中的一個位置被與第二序列中相應位置 的相同胺基酸佔據時，那麼分子在該位置是相同的。兩個序列之間的一致性百分數是序列共有的相同位置數的函數。例如，如果提到 特定肽相對於確定長度的參比多肽具有特定的一致性百分數時，該 一致性百分悽史是相對於該參比肽的。因此，與參比多肽(其長度為
100個胺基酸)具有50%—致性的肽可以是50個胺基酸的多肽，其 與參比多肽的長度為50個胺基酸的部分完全一致。它還可以是長 度為IOO個胺基酸的多肽，其整個長度中有50%與參比多肽相同。 因此，認為具有特定的一致性百分ft的特定肽，可以選自但不限於 例如一種具體的肽，例如，按照用於成分(I)的SEQIDNO: 1至29 中的任一種，以及選自一種具體的肽，例如，按照用於成分(II)的 SEQ ID NO: 31,或選自例如按照用於整個融合肽的SEQ ID NO: 33 和35的肽。當然，其他多肽將滿足相同的標準。可以利用it學算 法來完成兩個序列的一致性百分數的確定。用於比較兩個序列的數 學算法的優選的、非限制性實例是Karlin等(1993), PNAS USA, 90:5873-5877的算法。將這樣的算法併入NBLAST程序中，其可以 用來鑑別與本發明的胺基酸序列具有所期望的 一致性的序列。為了 獲4尋用於比4交目的的空4立比只於(gapped alignment),》o在Altschul 等(1997)，Nucleic Acids Res, 25:3389-3402中所描述的，可以採用空 位BLAST ( gapped BLAST )。當採用BLAST和空位BLAST程序 時，可以使用各程序(例如，NBLAST)的默認參數。可以利用Genetic Computing Group's GAP(全局比對程序)的片反本9進一步對這些序列 進行比對，其中利用默認(BLOSUM62)矩陣(數值-4至+11),其空位 開方欠罰分(對於空位的第一空值)為-12,且空位延伸罰分(在空位中 的每個另外的連續空值)為-4。在比對以後，通過將匹配數表示為在 所要求的序列中的胺基酸數目的百分率來計算一致性百分數。所描 述的用於確定兩個胺基酸序列的一致性百分H的方法可以相應地 用於核酸序列。
如上文所限定的，本發明的融合肽的成分(II)完全由D-對映體 胺基酸組成，即，由包含如上文所限定的逆-反次序的D-胺基酸的胺基酸序列組成，並且可以如上文述所4皮露的來製備。如用於本發 明融合肽的成分(II)的逆-反肽具有如上文針對成分(I)已經描述的各 種有用的特性，例如，形成本發明的融合肽的一部分的成分由於缺 少這種成分的蛋白水解等而具有更長的生物利用度。
可以直4妄或經由耳關結子(或4妄頭，linker)來連4妾本發明融合肽 的成分(I)和(II)。本文中的"聯結子(linker)"優選為寡肽或多肽 並且可以用來連4妻如上文所限定的成分(I)和(n)。優選地，4關結子的 長度為1-10個胺基酸，更優選1至5個胺基酸，以及最優選1至3 個胺基酸。有利地，聯結子並不具有任何形成二級結構的特性，即， 沒有任何形成a-螺旋或(3-片層結構的趨勢，例如，如果聯結子由至 少35%的甘氨酸殘基組成。聯結子通常可以是全甘氨酸序列，例如 GG、 GGG、 GGGG、 GGGGG等。4吏用細月包內/內源可裂解的寡肽 或多肽序列作為耳關結子可以侵J尋在遞送到革巴細月包以後成分(II)與成 分(I)分開。在這種情況下，可裂解的寡肽或多肽序列還包括蛋白酶 可裂解的寡肽或多肽序列，其中蛋白酶裂解位點的選4奪通常取決於 由經處理的細月包內源表達的蛋白酶。如果如上文所限定的耳關結子以 寡肽或多肽序列的形式存在，則可以由D-胺基酸或天然存在的氨基 酸(即L-胺基酸)組成。作為上述方法的一種可^,換方法，可以經 由偶聯劑或共輒(結合)劑(例如交聯劑)使本發明融合肽的成分 (I)和(II)偶聯。有若干種可以使用的分子間交聯劑，參見例如，Means 和Feeney, Chemical Modification of Proteins, Holden-Day, 1974,第 39-43頁。這些試劑包4舌，例如，N-琥珀醯亞胺基-3-(2-吡。定基二碌0 丙酸酯(SPDP)或N,N'-(l,3-亞苯基)雙馬來醯亞胺；N,N'-亞乙基-雙 -(石典乙醯胺)或具有6至11個碳亞甲基橋的其他這樣的試劑；以及 1，5-二氟-2,4-二硝基苯。可用於此目的的其他交聯劑包括p,p'-二氟 -m,m'-二硝基二苯基石風；二曱基己二醯亞胺酸酯(dimethyl adipimidate ); 笨盼-l,4-二碌醜氣(phenol-1,4-disulfonylchloride ); 亞己基二異氰酸酯或亞己基二異^L氰酸酯、或偶氮苯基-對-二異氰酸酯；戊二醛以及二重氮基耳關苯胺(disdiazobenzidine)。交聯劑可 以是雙同官能團的(homobifunctional)，即，具有兩個官能團，進 行相同的反應。優選的雙同官能團交聯劑是雙馬來醯亞胺正己烷 (BMH)。 BMH包含兩個馬來醯亞胺官能團，其在溫和條4牛(pH 6.5-7.7)下特異性地與含巰基的化合物發生反應。兩個馬來醯亞胺基 團通過烴鏈來連接。因此，BMH用於包含半胱氨酸殘基的蛋白質(或 多肽)的不可逆交耳關。交4關劑還可以是雙異官能團的 (heterobifunctional) 。 7又異官能團交聯劑具有兩個不同的官能團， 例如胺反應基團和巰基反應基團，它們會分別使具有游離胺和羥基 的兩種蛋白質發生交耳關。異雙官能團交聯劑的實例是琥珀醯亞胺 4-(N-馬來醯亞胺基甲基)環己烷-l-羧酸酯(SMCC)、間-馬來醯亞胺 苯甲醯基-N-羥基琥珀醯亞胺酯(MBS)、以及琥珀醯亞胺4-(對-馬來 醯亞胺基苯基)丁酸酯(SMPB)，其是MBS的一種延長鏈類似物。這 些具有伯胺的交if關劑的琥珀醯亞胺基，以及巰基反應性馬來醯亞胺 與半胱氨酸殘基的巰基形成共價鍵。由於交聯劑在水中經常具有低 溶解度，所以可以將親水部分如磺酸酯(鹽)基團加入交聯劑，以 改善其水溶性。硫代MBS和硫代SMCC是具有改善的水溶性的交 聯劑的實例。許多交聯劑產生在細胞條件下基本上是不可裂解的共 輒物(結合物)。因此， 一些交聯劑包含共價鍵，如二硫化物，其 在細胞條件下是可裂解的。例如，Traut，s試劑、二>5危代雙(琥珀醯 亞胺基丙酸酯)(DSP)、以及N-琥珀醯亞胺基3-(2-吡啶基二石克)丙酸 酯(SPDP)是眾所周知的可裂解交聯劑。可裂解交聯劑的使用可以使 得在遞送到耙細胞以後成分(II)與成分(I)分開，只要細胞能夠裂解交 聯劑的特定序列。為此，也可以採用直鏈二碌^建(direct disulfide linkage)。化學交聯還包括使用間隔臂(spacer arms)。間隔臂提 供分子內柔性或調節共輒部分之間的分子內3巨離，乂人而有助於4呆存 生物學活性。間隔臂可以具有蛋白質(或多肽)部分的形式，其包括 間隔胺基酸，例如脯氨酸。可替換地，間隔臂可以是交聯劑的一部 分，如在"長鏈SPDP，，中(Pierce Chem. Co., Rockford, III" cat. No.21651 H)。許多交聯劑(包括上文所討論的交聯劑)是可商購的。 關於它們的使用的詳細說明可容易地獲自商品供應商。關於蛋白質 的交耳關和共專厄物製備的一4殳參考文獻是Wong, Chemistry of Protein Conjugation and Cross-Linking, CRC Press (1991)。
如上文所限定的，本發明的融合肽可以可選地包含另外的成分
本發明的上下文中，"用於純化的標籤"可以是任意種類的適用於 重組蛋白純化的標籤，如六組氨酸-標籤(his-標籤、聚組氨酸-標籤)、 鏈黴親和素(strep-標籤)、SBP-標籤(鏈黴親和素結合標籤)、GST(谷 胱甘肽-S-轉移酶)-標籤、丹磺醯-標籤等，或藉助於抗體表位(抗體 結合標籤)，例如myc-標籤、Swall-表位、FLAG-標籤等。如上所 述的標籤優選位於如上文所限定的由成分(I)、 (II)以及可選的成分 (III)組成的(整個)融合肽的C端。例如，如上所述的標籤優選位於 成分(I)的C端(如果成分(I)位於融合肽的C端)，或更優選地位於 成分(II)的C端(如果成分(II)位於融合肽的C端)。此外，優先選 擇如上所述的成分(III)，以便不幹擾成分(I)或(II)的生物功能，例如， 本發明的融合肽的成分(I)的穿透細胞膜的能力，以及成分(II)的抑制 NMDAR與NMDAR相互作用蛋白的相互作用能力。因此，優先選 捧非大體積的(non-bulky)標籤作為成分(III),如六組氨酸-標籤、 鏈抗生物素蛋白標籤(strep-標籤)、SBP-標籤(鏈抗生物素蛋白結合標 籤)，或抗體表位，例如myc-標籤、Swall-表位、FLAG-標籤等。
此外，如果如上述所限定的成分(III)以寡肽或多肽的形式存在， 則其可以由如上文所限定的D-胺基酸或由天然存在的胺基酸(即， L-胺基酸)組成。因此，包含成分(I)、 (II)和可選的成分(III)、以及 如上文所限定的耳關結子的整個融合肽，可以由^o上文所限定的D-胺基酸組成。如果包含成分(I)、 (II)和可選的成分(III)、以及如上文 所限定的聯結子的本發明的整個融合肽由D-胺基酸組成，則就整體
21而言，融合肽可以如上述針對本發明融合肽的D-對映體成分所4皮露 的製備，例如利用化學合成方法或4壬4可其他適合的方法。
通常，可以適當地排列如上文所限定的本發明的融合肽的成分
(i)、 (n)以及可選的(ni),即，以允許當排列在本發明的融合肽中成 分(I)能夠引導本發明的融合肽穿過質膜的任何次序進行排列。而
且，成分(II)仍然應該能夠抑制N-曱基-D-天冬氨酸受體與NMDAR 相互作用蛋白的相互作用。才艮據一種優選實施方式，成分(I)可以位 於本發明的融合肽的N端，而成分(II)可以位於本發明的融合肽的C 端。此外，如果在本發明的融合肽中包含如上文所限定的成分(III), 則成分(III)可以位於本發明的整個融合肽的C端。因此本發明的融 合肽的一種優選排列可以顯示為從N端至C端為成分(I)、成分(II)、 以及可選的成分(III)。然而，還可以選4,其他排列，例如,人N端至
c端為成分(n)、成分(i)、以及可選的成分(ni)。如果合適的話，可 以將耳關結子插入如上文所限定的成分(i)和(n)之間。
本發明的融合肽還可以包含如上文所限定的成分(i)和/或成分 (n)的"衍生物"。根據本發明的成分(i)和/或(n)的衍生物是指成分 (i)或(n)的序列，其來源於如上文所限定的成分(i)或(n)的天然存在 的(L-胺基酸)序列，通過在胺基酸序列的一個或多個位點置換一個 或多個胺基酸、通過在天然存在序列的任何位點缺失一個或多個氨 基酸、和/或通過在天然存在的肽序列的 一個或多個位點插入一個或 多個胺基酸而獲得。如果用作本發明的融合肽的成分(i)或(n)，"衍 生物"應保留它們的生物學活性，例如，成分(i)的衍生物應能夠將 本發明的融合肽引入細胞質，或甚至進一步，如上文所限定的，引 至特定的細胞目標，而成分(i)的衍生物應能夠抑制神經元N-曱基
-D畫天冬氨酸受體(NMDAR)與NMDAR相互作用蛋白的相互作用。 在本發明的上下文中，衍生物還可以以如上文所限定的它們的L-或D-胺基酸序列的形式存在、或以這兩種形式存在。如果進行胺基酸的置換來製備本發明的融合肽的成分(I)和/或 成分(II)的衍生物，則保守性(胺基酸)置換是優選的。保守性(胺基酸)
置換通常包括在以下組內的置換甘氨酸和丙氨酸；纈氨酸、異亮 氨酸和亮氨酸；天冬氨酸和穀氨酸；天冬醯胺和穀氨醯胺；絲氨酸 和蘇氨酸；賴氨酸和津奇氨酸；以及苯丙氨酸和酪氨酸。因此，伊C選 的保守性置換組是天冬氨酸-穀氨酸；天冬醯胺-穀氨醯胺；纈氨酸-亮氨酸-異亮氨酸；丙氨酸-纈氨酸；苯丙氨酸-酪氨酸；以及賴氨酸 -精氨酸。通過這樣的突變，例如，可以使本發明的融合肽的成分(I) 和(II)的穩定性和/或有效性得到增強。如果將突變引入本發明的融 合肽的成分(I)和(II),這些成分(I)和(II)仍然是與具有相應親本序列 的蛋白質(功能上)同源的，例如，在序列、在功能、以及在抗原特 性或其他功能方面。本發明的融合肽的上述突變成分(I)和(II)可以具 有變化的特性，對於某些應用而言，其可以優於成分(I)和(II)的未變 化的序列(例如，增加的pH最適度、提高的溫度穩定性等)。
本發明的融合肽的成分(I)的衍生物或成分(II)的衍生物分別被 限定為與如上述所限定的本發明的融合狀的成分(I)或成分(II)的非 修飾序列基本上一致，例如與HIV TAT蛋白轉運序列(如果用作 成分(I))基本一致。特別優選的胺基酸序列與天然存在的類似物具 有至少30%的序列一致性，優選至少50%,甚至優選至少60%,甚 至優選至少75%,甚至更優選至少80%,還更優選90%以及最優選 至少95%或甚至99%。上文描述了用於合成或分離本發明的融合肽 的成分(I)和(II)的功能化衍生物以及用於確定兩個胺基酸序列的一 致性百分數的適當方法。另夕卜，用於生產如上述所4皮露的本發明的
本4頁i或4支術人員熟^口的才示準方法來實施(參見，^口 Sambrook J, Maniatis T (1989)，見上)。作為一種進一步的實施方式，本發明提供了包含如上文所限定 的本發明的融合肽的藥物組合物。優選地，這樣的藥物組合物包含
本發明的融合肽，其具有如上述所限定的成分(i)和(n)、可選地具有 成分(m)以及可選的聯結子。另外，這樣的藥物組合物可以包含藥 用載體、佐劑、或賦形劑。本發明的"藥用載體、佐劑、或賦形劑" 是指無毒的載體、佐劑或賦形劑，其並不破壞與其一起進行配製的 本發明的融合肽的藥理活性。可以用於本發明的藥物組合物中的藥 用載體、佐劑或賦形劑包括但不限於離子交換劑、氧化鋁、硬脂 酸鋁、卵磷脂、血清蛋白(如人血清白蛋白)、緩衝物質(如磷酸 鹽)、甘氨酸、山梨酸、山梨酸鉀、飽和植物脂肪酸的部分甘油酯 混合物、水、鹽或電解質(如石克酸魚精蛋白)、磷酸氫二鈉、磷酸 氫鉀、氯化鈉、鋅鹽、"交體氧化石圭、三石圭酸4美、聚乙烯吡咯烷酮、 基於纖維素的物質、聚乙二醇、羧甲基纖維素鈉、聚丙烯酸酯、蠟、 聚乙烯-聚氧丙烯嵌段聚合物、聚乙二醇以及羊毛脂。
可以口服、腸胃外、通過吸入噴霧、局部、直腸、鼻部、口腔、
陰道或經由才直入型藥盒(implanted reservoir )來《會予本發明的藥物 組合物。
如在本文中所使用的，術語"腸道外"包括皮下、靜脈內、肌 內、關節內、滑膜內、胸骨內、鞘內、肝內、損傷內(intralesional) 以及顱內注射或輸注技術。優選口服、腹膜內或靜脈內給予該藥物 組合物。本發明的藥物組合物的無菌可注射形式可以是水性或油性 的混懸劑。這些混懸劑可以按照本技術領域已知的技術使用適宜的 分散劑或潤溼劑以及懸浮劑來配製。無菌可注射製劑還可以是在無 毒的腸道外可接受的稀釋劑或溶劑中的無菌可注射溶液或混懸劑， 例如在1,3-丁二醇中的溶液。可以採用的可接受賦形劑和溶劑有水、 林才各液(Ringer，s solution )以及等滲氯化鈉溶液。此夕卜，通常4吏用 無菌、非揮發性油作為溶劑或懸浮介質。
24為此目的，可以採用任何刺激性小的非揮發性油，包括合成的 單酸甘油酯或二商臾甘油酯。脂肪酸，如油酸和其甘油酯書亍生物可用 於製備注射物，就像天然藥用油(如橄欖油或蓖麻油) 一樣，尤其 是以它們的聚氧乙基化形式。這些油性溶液或混懸劑還可以包含長 鏈醇稀釋劑或分散劑，如羧曱基纖維素或通常用於配製包括乳劑和 混懸劑的藥用劑型的類似的分散劑。為了進行配製，還可以使用通 常用於製備藥用固體、液體、或其他劑型的其他常用的表面活性劑， 如吐溫、司盤類和其他乳化劑或生物利用度增強劑。
可以以任何口服用劑型來口服給予本文的藥用組合物，包括但 不限於膠嚢劑、片劑、水性混懸劑或溶液。在用於口服的片劑的情 況下，通常使用的載體包括乳糖和玉米澱粉。通常還加入潤滑劑， 如硬脂酸鎂。對於以膠嚢劑形式的口服給藥，有用的稀釋劑包括乳 糖和幹玉米澱粉。當需要用於口服的水性混懸劑時，將活性成分與 乳化劑和懸浮劑結合。如果需要的話，還可以加入某些甜味劑、香 P未劑或著色劑。
可^,4灸;也，3o本文所限定的本發明的藥物組合物可以以4全劑的 形式給予，用於直腸給藥。這樣的栓劑可以通過將藥劑與適宜的非 刺激性賦形劑混合來製備，其中該賦形劑在室溫下為固態，而在直 腸溫度下為液態，因而會在直腸中熔化以釋放藥物。這樣的物質包 括可可脂、蜂蠟以及聚乙二醇。
還可以局部給予如本文所限定的本發明的藥物組合物，尤其是 當治療的靶標包括通過局部施用容易進入的區域或器官時，其包括
目艮、皮月夫、或下腸道(lower intestinal tract)的疾病。只于于各種這些 區i或或器官，可以容易製備適合的局部配方。
可以以直腸一全劑劑型(參見上文)或以適合的灌腸劑劑型來局部 施用於下腸道。還可以4吏用局部透皮貼劑。為了局部施用，可以在適宜的軟膏劑中配製如本文所限定的本 發明的藥物組合物，其包含如上述確定的並懸浮或溶解在一種或多 種載體中的本發明的融合肽。用於局部給予本發明的融合肽的載體 包括zf旦不限於礦物油、液狀石蠟、白軟石蠟、丙二醇、聚氧乙烯、 聚氧丙烯化合物、乳化蠟以及水。可替換地，可以在適宜的洗劑或 乳膏劑中配製如本文所限定的本發明的藥物組合物，其包含懸浮或 溶解在一種或多種藥用載體中的本發明的融合肽。適宜的載體包括
但不限於礦物油、單硬脂山梨坦、聚山梨酯60、十六烷基酯蠟、鯨 蠟基_硬脂基醇(cetearyl alcohol) 、 2-辛基十二醇、千醇以及水。
為了進行眼部應用，可以將本發明的藥物組合物配製成在等 滲、pH經調節的無菌鹽水中的微粒化混懸劑，或優選地，配製成 在等滲、pH經調節的無菌鹽水中的溶液，其中含有或不含有防腐 劑，3口苯4L氯4耍(benzylalkonium chloride )。可替4奐;也，為了進4亍 眼部應用，可以在4欠膏劑(如凡士林)中配製該藥用組合物。
還可以通過鼻腔氣霧劑或吸入劑來糹合予如本文所限定的本發 明的藥物組合物。可以按照藥物劑型領域眾所周知的技術來製備這 樣的組合物，並且可以製備成鹽水中的溶液，其中採用苄醇或其他 適宜的防腐劑、吸收促進劑(以增強生物利用度)、碳氟化合物、 和/或其他常規增溶劑或分散劑。
最優選地，將本文的藥用組合物配製為用於口服或腸道外給 予， <列^口通過5主射。
為了治療目的，無毒的、損傷減少的、有效量的本發明的融合 肽可以用於製備如上文所限定的本發明的藥物組合物。因此，可以 4吏一定量的本發明的融合肽結合於一種或多種載體物質以產生如 上文所限定的組合物。本發明的藥物組合物通常被製備成單(或多) 劑量形式，其將隨所治療的宿主和給予的特定方式不同而變〗L。通常，將本發明的藥物組合物配製為可以將在0.001-100 mg/kg體重/ 天的融合肽的劑量範圍/劑量給予接受本發明的藥物組合物的患者。 優選的劑量範圍/劑量在0.01-50 mg/kg體重/天變化，甚至進一步優 選的劑量範圍/劑量在0.1-25 mg/kg體重/天變化。然而，如上所述
的劑量範圍和治療方案可以適當地適用於任何特定的患者，這取決 於各種因素，其包括所採用的具體的本發明的融合肽的活性、年齡、
體重、 一般健康狀態(general health )、性別、飲食、給藥的時間、 排洩速率、聯合給藥、治療醫生的判斷以及待治療的具體疾病的嚴 重性。關於這一點，可以在初始劑量範圍內進行給藥，其中初始劑 量範圍可以在整個治療的時間內而不同，例如通過在如上文所述的 範圍內增加或減少初始劑量範圍。可替換地，通過給予特定的劑量 範圍，可以以連續方式進行給藥，從而在整個治療期間維持初始劑 量範圍。此外可以將兩種給予形式結合，例如，如果在各種治療階 段之間調整劑量範圍(增加或減少)，就在單個階段內保持恆定，從 而各階段的劑量範圍彼此不同。
本發明的藥物組合物可以用於治療、改善或預防與對哺乳動物 細胞傷害的損傷效應有關的疾病(如本文糹皮露的)，尤其用於治療 腦卒中或脊髓損傷、對腦或脊髓的擊夾血性或創傷性損傷、以及對中 樞神經系統(CNS)神經元的損傷(包括但不限於急性CNS損傷)、 缺血性腦卒中或脊髓損傷、以及缺氧、在失血、機械損傷、神經性疼 痛，尤其是與PSD-95和/或NMDAR相互作用有關的神經性疼痛等。 此外，本發明的藥物組合物可以用來對興奮性毒性損傷和缺血性損 傷、興奮'性毒寸生、擊夾少一申糹至營養'l"生支持(neurotrophic support)、失 連4妄(或士刀斷，disconnection) 、 7於一申經元的4員傷，包才舌例3o癲癇、 慢性神經變性病症等提供神經保護效應或對其進行治療。關於這一 點，興奮性中毒尤其與中風創傷性腦損傷和中樞神經系統(CNS)的 神經變性疾病有關，例如可如此得到治療的多發性硬化症、阿爾茨 海默病、肌萎縮側索硬化(ALS)、纖維肌痛、帕金森病、以及亨廷
27頓病。引起神經元周圍穀氨酸濃度過高並可以如此得到治療的其他 常見病症是低血糖症和癲癇持續狀態、青光眼/視網膜神經節細胞衰 退等。
與對哺乳動物細胞傷害的損傷效應(如上述所限定的)以及與 其他的疾病或病症(如本文所述的)有關的疾病的治療、改善或預 防通常是通過在如上述所限定的劑量範圍內給予如上述限定的本 發明的藥物組合物來進行的。可以在興奮性中毒和/或(缺血性)腦損 傷(即對哺乳動物細胞損害的損傷效應)發作前或發作時或發作後，
糹合予本發明的藥物組合物；例如，可以在腦卒中或脊髓損傷、對腦 或脊髓的缺血性或創傷性損傷、以及一般地對中樞神經系統(CNS) 神經元的損傷以後，在(長達)l小時(O-l小時)、長達2小時、長達 3-5小時或長達24小時或更長的時間內全會予本發明的藥物組合物。
本發明還糹是供了試劑盒，該試劑盒包括至少 一種上述配方的上 文所限定的本發明的藥物組合物(在一個或多個容器中)，以及涉及 與本發明的藥物組合物的應用有關的說明和/或信息的說明書或信 息冊。
雖然以上披露內容已描述和說明了本發明的某些優選的實施 方式，^f旦應當明了，本發明並不限於那些具體實施方式
。而是，本 發明包括功能上或機制上等效於已描述和說明的具體實施方式
和 特點的所有實施方式。


以下附圖是用來進一步說明本發明而不是限制本發明的範圍。
圖1:示出在了 20 pM NMDA存在下，SEQ ID NO: 32和33 的融合肽的效力的持續時間，具體地是L-型TAT-NR2B9c肽(L畫TAT-L-NR2B9c序列YGRKKRRQRRR-KLSS正SDV(SEQ ID NO: 32)， 與US 20030050243相同)與其D畫型(D國TAT-D-NR2B9c,序列 vdseisslk-rrrqrrkkrgy(SEQ ID NO: 33))相比。在此實-驗(以及以下實-驗) 中，平4亍於肽的添加測量細月包死亡率，其中肽能夠通過與NMDA 受體相互作用而抑制細胞死亡。如在圖1中可以看出，在任何單一 實驗中，與SEQ ID NO: 32的比4交4匕合物L-TAT-L-NR2B9c相比， 才艮據SEQ ID NO: 33的D-TAT-D-NR2B9c表現至少相等的效力，而 在多數情況下效力顯著增加，即神經元細胞的細胞死亡率(％)顯著 降<氐；圖1中的*表示PO.05, @表示PO.07(配對t衝企-驗，比專交經 肽處理的神經元與對照神經元)。尤其是，如果肽培育和NMDA添 加之間的間隔28小時，貝'J D-TAT-D-NR2B9c顯示其正歲文應。這揭 示了 D-型的延長的藥理活性。在4和48小時之間，尤其是在8和 24小時之間，觀測到最有效的治療窗。
圖2:示出了在40 pM NMDA存在下，SEQ ID NO: 32和33 的融合肽的效力的持續時間，具體地是L-型TAT-NR2B9c肽
32),與US 20030050243相同)與其D-型(D-TAT-D-NR2B9c,序列 vdseisslk-rrrqrrkkrgy反向(SEQIDNO: 33))相比。如在圖2中可以看 出，在任何單一實驗中，與根據SEQ ID NO: 32的比較化合物 L-TAT-L-NR2B9c相比，才艮據SEQ ID NO: 33的D-TAT-D-NR2B9c
表現出至少相等的效力、而多悽t情況下效力顯著增加，即神經元細 胞的細胞死亡率(％)顯著降低。圖2中的*表示PO.05, @表示 PO.07(配對t#r-驗，比4交經肽處理的神經元與對照神經元)。如果時 間窗短於24小時，則本發明的融合肽的顯著的正效應會變得顯而 易見。
圖3:示出了在20 pM NMDA存在下，SEQ ID NO: 34和35 的融合肽的效力的持續時間，具體地是L-型(Arg)s-NR2B9c肽(L畫(Arg)8-L畫NR2B9c序歹'J RRRRRRRR-KLSSIESDV(SEQ ID NO:34))與其D-型(D-(Arg)8-D-NR2B9c,序列vdseisslk-rrrrrrrr(SEQ IDNO: 35))相比。如在圖3中可以看出，在任何單一實驗中，與根據SEQ ID NO: 34的比專交化合物L-(Arg)8-L-NR2B9c相比，才艮據SEQ IDNO: 35的本發明的融合肽D-(Arg)8-D-NR2B9c表現出至少相等的效力，而在多數情況下效力顯著增加，即神經元細胞的細胞死亡率(％)顯著降低；在圖3中的*表示P<0.05, @表示PO.07(配對t檢驗，比專交經肽處理的神經元與對照神經元)。
圖4:示出了在40 NMDA存在下，SEQ ID NO: 34和35的融合肽的效力的持續時間，具體地是L-型(Arg)8-NR2B9c肽(L畫(Arg)8-L-NR2B9c序列RRRRRRRR-KLSSIESDV(SEQ ID NO:34))與其D畫型(D隱(Arg)8畫D-NR2B9c,序列vdseisslk-rrrrrrrr(SEQ IDNO:35))相比。如在圖4中可以看出，在4壬4可單一實-驗中，在長達8小時的時間點上，與根據SEQ ID NO: 34的比較化合物L-(Arg)8-L-NR2B9c相比，根據SEQ ID NO: 35的本發明的融合肽D-(Arg)8-D-NR2B9c表iE見出至少相等的歲丈力、而在多悽史情況下凌文力顯著增加，即神經元細胞的細胞死亡率(％)顯著降低；在圖4中的*表示PO.05, @表示PO.07(配對t檢驗，比較經肽處理的神經元與對照神經元)。
實施例
以下實施例是用來進一步i兌明本發明而不是將本發明的範圍局限於這些實施例。
實施例1 本發明的融合肽的合成
才妄照標準程序，通過N"-Boc化學SPPS,在MBHA杉於脂(Novabiochem, Merck)上人工合成TAT-NR2B9C肽。通過TNBSA顯色試驗來監測所有偶聯。在0。C下，用含有適合的清除劑的90%HF處理1小時使肽裂解並同時使肽脫樹脂保護。將粗肽溶解於20%的乙酸水溶液，用雙蒸水稀釋至5%乙酸;容液，然後通過二乙醚洗滌來提取剩餘的清除劑。然後將包含肽的溶液凍幹以除去乙酸。藉助於製備RP-HPLC在Atlantis (Waters) dC18柱上純化肽L/D-NR2B9C (15-45。/。緩沖液B,以15 mL/min,經45分鐘)，然後通過ESI-MS加以表4正。
(Arg)8-NR2B9C肽是人工合成的。該合成在固相載體上、利用Fmoc策略在Novabiochem的Fmoc-Val畫NovaSyn TGA初於脂上進4亍，其中負載為0.22 mmol/g。在ACT自動裝置上，在對應於145 (imol的孔中，使用4當量胺基酸、4當量偶聯劑HOBt以及4當量DIPCDI進行合成。由於合成需要，每3個胺基酸進行雙偶聯
一與4當量胺基酸、4當量HOBt以及4當量DIPCDI的第 一偶
聯
-與4當量胺基酸、4當量HATU以及4當量DIEA的第二偶聯。
在每次偶聯以後，用DMF中的10%乙酸肝進行加帽步驟(15分鐘)。
用DMF中的20。/。哌。定進行脫保護步驟(2x20分鐘)。保持在"n"位的Fmoc直到合成結束。在清除劑存在下，在86%TFA ;容液中進4亍裂解。在醚中沉澱肽。然後，在C-18反相柱上利用0至60%乙腈梯度在60分鐘內對肽進行純化，在220 nm處(對於肽鍵)和在300nm處(對於Fmoc <呆護)進4亍UV 4企測。其後，將具有Fmoc保護基團的肽凍幹，以後通過用20當量的DEA溶液處理來除去Fmoc保護基團。然後對肽進行再次純化(利用和上述相同的條件)，然後凍幹、分析並用於隨後的實驗中。
31實施例2 對於興備I"生中泰損傷，由TAT-NR2B9c提供的4申經4呆護的持續時間測試
方案
將獲自E21大鼠的大鼠皮質神經元在Neurobasal-A培養基+B-27補充物(均來自Invitrogen)、 1 mM穀氨醯胺、+50單位/ml青黴素、50jig/ml鏈黴素中體外培養7-9天。
1. 在暴露於化合物之前的不同時間，從基於Neurobasa1-A的培養基中除去神經元，並放入"轉染培養基"(TM; Bading等(1993)，Science 260, 181-186)中10%最低基礎培養基，Irwi加gen(21090022),(包含Earles鹽，但不含L-穀氨醯胺)，90%鹽-葡萄糖-甘氨酸(SGG)培養基SGG: 114mMNaCl、 0.219% NaHC03、 5.292mMKCl、 lmMMgCl2、 2mMCaCl2、 10mMHEPES、 1 mM甘氨酸、30mM葡萄衝唐、0.5 mM丙酮酸鈉、0.1%酚紅、月夷島素運4失蛋白隱亞石西酸鹽補充物(Sigma， 7.5 pg月夷島素/ml; 7.5 ng運糹失蛋白/ml和7.5 ng亞硒酸鈉/ml);最終摩爾滲透壓濃度為325 mosm/1)。所有隨後的步驟在TM中進4亍。
2. 然後將神經元暴露於10 |iM的發明的融合肽1小時。(尤其是 L- 型 TAT畫NR2B9c 肽 (L-TAT-L畫NR2B9c 序列YGRKKRRQRRR-KLSSIESDV (SEQ ID NO: 32), 與 US20030050243相同)以及它們的D-型(D-TAT-D-NR2B9c ，序列vdseisslk-rrrqrrkkrgy反向(SEQ ID NO: 33)))
3. 1小時後在TM中^)誇一申經元洗滌一次以除去肽。
4. 在不同時間l殳以後，將神經元暴露於20或40 (iM的NMDA1小時，其後將神經元置於TM中24小時。5.對神經元進行固定(3。/。多聚甲醛)並染色(DAPI， 4'，6-二脒基-2-苯基吲哚)。固縮核的數目計數為總數的百分比(％)。實驗重複進行三次。
結果
對於NMDA(20和40 jiM),在洗掉肽以後，D-型和L-型TAT-NR2B9c(L-TAT陽L畫NR2B9c序列YGRKKRRQRRR-KLSSIESDV(SEQID NO: 32),與US 20030050243相同)、D陽TAT-D-NR2B9c序列vdseisslk-rrrqrrkkrgy反向(SEQ ID NO: 33))提供保護長達4小時。然而，對於更低劑量的NMDA,在洗掉肽之後，由D-型提供的保護延長至長達48小時(圖1)，這表明它是作為治療性藥物的更有希望的候選物。對於40 pM NMDA,它還^是供顯著的^f呆護長達24小時，而由L-型獲得的神經保護僅在1小時內是顯著的(圖2)。
實施例3對於興奮性中毒損傷，由(Arg)8-NR2B9c拔^供的神經保護的持續時間測試
方案
將獲自E21大鼠的大鼠皮質神經元在Neurobasal-A培養基+B-27 #卜充物(均來自Invitrogen)、 1 mM穀氨醯胺、+50單4立/ml青黴素、50ng/ml鏈黴素中體外培養7-9天。
1.在暴露於肽之前的不同時間，從基於Neurobasal-A的培養基中除去神經元，並》文入包括胰島素-運鐵蛋白-亞硒酸鹽補充物(Sigma)的TM(參見上文)中。所有隨後的步驟在TM中進行(參見上文)。2. 然後將神經元暴露於10 (aM本發明的融合肽1小時。(尤其 是 D-型 (Arg)8-NR2B9c 肽(D-TAT-D-NR2B9c , 序歹'J vdseisslk-rrrrrrrr(SEQ ID NO: 35))以及L陽型(SEQ ID NO: 34))
3. 在1小時以後，在TM中將神經元洗滌一次，以除去肽。
4. 在不同時間^殳後，將神經元暴露於NMDA 1小時，其後將 3申經元置於TM中24小時。
5. 對神經元進行固定(3。/。多聚曱醛)並染色(DAPI， 4'，6-二脒基 -2-苯基卩引咮)。將固縮核的數目計數為總數的百分比(％)。實驗重 復進行三次。
結果
對於 NMDA(20 juM), 在洗掉肽以後，D-型 (Arg)8國NR2B9c(D-(Arg)8-D畫NR2B9c(SEQ ID NO: 35)提供比L-型更 為優越的長達8小時的神經保護(圖3)。在更高的NMDA劑量(40 pM) 下，D-型也表現出相同至更好的保護效果(圖4)。這些結果表明， D-型是作為治療性藥物的更有希望的候選物。總的說來，雖然 D-(Arg)8-D-NR2B9c(SEQ ID NO: 35))具有較短的神經保護活性持續 時間，^旦其類似於D-TAT-D-NR2B9c(SEQ ID NO: 33))起作用，這 可以表明D-TAT具有比D-(Arg)8更顯著的細胞穿透能力。
3權利要求
1. 一種融合肽，至少包含成分(I)和成分(II)，其中成分(I)包含運載體肽，成分(II)選自抑制神經元N-甲基-D-天冬氨酸受體(NMDAR)與NMDAR相互作用蛋白的相互作用的肽，其中成分(II)完全由D-對映體胺基酸組成。
2. 根據權利要求1所述的融合肽，其中，成分(I)選自細胞穿透肽， 所述細胞穿透肽包括(a)蛋白質轉導結構域(PTD)和源於蛋白質的CPP,包括 源於4空制觸角的基因的序列、pAntp (43-58),包含序列 RQIKIWFQNRRMKWKK(SEQ ID NO: 1) 或 RQIKIWFQNRRMKWKK畫醯胺(SEQ ID NO: 2),包括源於人免 疫缺陷病毒l(HIV-l)的序列、TAT、 TAT的37至72區域、TAT 的37至60區i或、TAT的48至60區i或或49至57區i或、序列 GRKKRRQRRR(SEQ ID NO: 3)、 YGRKKRRQRRR(SEQ ID NO: 4) 、 CGRKKRRQRRRPPQC(SEQ ID NO: 5)或 CGRKKRRQRRRPPQCC(SEQ ID NO: 6), 包括具有序列 LGTYTQDFNKFHTFPQTAIGVGAP-NH2(SEQ ID NO: 7)的 hCT(9-32)、包含序歹寸LLIILRRRIRKQAHAHSK-NH2(SEQ ID NO: 8)的； VEC、包含序歹'J RVIRVWFQNKRCKDKK-NH2(SEQ ID NO: 9) 的 pISL 、 包 含 序 列 MANGLYWLLALFVTMWTDVGLCKKRPKP-NH2(SEQ ID NO: 10)的小鼠PRP(l-28)以及其包括人同系物的同系物、包含 序歹'J RQGAARVTSWLGLQLRIAGKRLEGRSK-NH2(SEQ ID NO: 11) 的 Ems (194-220)、 包 含序 列 KLIKGRTPIKFGK-NH2(SEQ ID NO: 12)的Restricocin L3 (60-73),或(b) 模型 肽， 包 括 包含序 列 DPKGDPKGVTVTVTVTVTGKGDPKPD-NH2(SEQ ID NO: 13) 的VT5、包含序歹'J KLALKLALKALKAALKLA-NH2(SEQ ID NO:14)的MAP、精氨酸伸長序列，所述精氨酸伸長序列包括 RRRRRRR,即(Arg》(SEQ ID NO: 15),或RRRRRRR-NH2， 即(Arg)7-NH2(SEQ ID NO: 16)， 或 RRRRRRR畫C ， 即 (Arg)7-C(SEQ ID NO: 17),或RRRRRRRR，即(Arg)s(SEQ ID NO: 18)，或RRRRRRRR-NH2,即(Arg)8-NH2(SEQ ID NO: 19), RRRRRRRRR ， 即(Arg)9(SEQ ID NO: 20), 或 RRRRRRRRR-NH2， W(Arg)9-NH2， (SEQ ID NO: 21),或(c) 設計的 CPP , 包 4舌包含序列 GALFLGFLGAAGSTMGAWSQPKSKRKV(SEQ ID NO: 22)或 GALFLGFLGAAGSTMGAWSQPKSKRKV-半胱胺(SEQ ID NO: 23) 的 MPG 、 包 含 序 列 GWTLNSAGYLLGKINLKALAALAKKIL-NH2(SEQ ID NO: 24) 的 糹田月包月莫穿透肽、 包含序列 AGYLLGKINLKALAALAKKIL-NH2(SEQ ID NO: 25)的細月包 月莫 穿 透 肽 10 、 包 含 序 列 KETWWETWWTEWSQPKKKRKV(SEQ ID NO: 26)或 KETWWETWWTEWSQPKKKRKV-半胱胺(SEQ ID NO: 27) 的Pep-l，或所述成分(I)可以選自包含序列28) 的 KALA 肽 或 選 自 包 含 序 歹寸 TRSSRAGLQFPVGRVHRLLRK(SEQ ID NO: 29)的Bulforin 2,或由D胺基酸組成的SEQ ID Nos: 1-29的逆-反同分異構體。
3. 根據權利要求2所述的融合肽，其中，成分(I)選自與權利要求 2中所限定的SEQ ID Nos: 1至29中的一個序列具有約60、 70、 80、 90、 95或甚至99%的序列一致性的細月包穿透肽，只 要成分(I)仍然保留其生物學活性，即，引導本發明的融合肽穿 過質膜的生物學活性。
4. 根據權利要求3所述的融合肽，其中，成分(II)選自NMDA受 體亞單位NR1和NR2、包含PDZ-結合結構域的肽、包含tSXnV 基序的肽或來自突觸後緻密物-95蛋白的肽、PSD-95、PSD-93、 SAP 102。
5. 根據權利要求4所述的融合肽，其中，成分(II)的長度為5至 40個胺基酸，更優選長度為5至30或5至20個胺基酸以及 甚至更優選長度為5至15或甚至5至10個胺基酸。
6. 根據權利要求4或5所述的融合肽，其中，成分(II)選自包含 序列vdseisslk(SEQ. ID NO: 31)的序列。
7. 根據權利要求4至6中任一項所述的融合肽，其中，成分(II) 選自一種包含與SEQ ID NO: 31的序列具有約60、 70、 80、 90 、 95或甚至99%的序列 一致性的序列。
8. 根據權利要求1至7中任一項所述的融合肽，其中，成分(I) 完全由L-胺基酸、D-胺基酸、或兩者組成。
9. 根據權利要求1至8中任一項所述的融合肽，其中，成分(I) 和(II)通過i[關結子連接。
10. 根據權利要求1至9中任一項所述的融合肽，另外還包含成分 (III),其中成分(III)是用於純化的標籤。
11. 藥物組合物，包含根據權利要求1至10中任一項所述的融合肽以及可選的藥物載體。
12. 才艮據權利要求1至10中任一項所述的融合肽用於製備藥物組 合物的應用，所述藥物組合物用於治療、改善或予貞防與對哺乳 動物細力包損害的損傷歲文應有關的疾病，所述疾病選自腦卒中或 脊髓損傷、腦或脊髓的缺血性或創傷性損傷以及中樞神經系統 (CNS)神經元的損傷，包4舌急性CNS損傷、缺血性腦卒中或 脊髓損傷，以及缺氧、缺血、機械損傷，或用於為以下疾病提 供神經保護效應或對其進行治療興奮性中毒損傷和缺血性損 傷、興奮性中毒、缺少神經營養支持物、失連接、神經元的損 傷，包糹舌癲癇、l曼性神經變性病症和一申經性疼痛，包4舌與 PSD-95和/或NMDAR相互作用有關的3中經性疼痛。
13. 試劑盒，包括才艮據權利要求11所述的藥物組合物和說明書或 信息冊，其中所述i兌明書或信息冊具有所述藥物組合物的應用 的"i兌明和/或4言息。
全文摘要
本發明提供了一種融合肽，該融合肽包含至少成分(I)以及成分(II)，其中成分(I)包括運載體肽，成分(II)選自抑制神經元N-甲基-D-天冬氨酸受體(NMDAR)與NMDAR相互作用蛋白的相互作用的肽，其中成分(II)完全由D-對映體胺基酸組成。本發明還提供了發明的藥物組合物，該藥物組合物包含本發明的融合肽，並提供了用於給予該藥物組合物的方法，以及採用本發明的融合肽的試劑盒和應用。
文檔編號C07K14/47GK101490081SQ200780027425
公開日2009年7月22日 申請日期2007年7月25日 優先權日2006年7月31日
發明者託馬斯·邁爾 申請人:西根股份公司