具有層粘連蛋白塗層的可植入的醫學製品和使用方法

2023-05-04 19:40:46

專利名稱：：具有層粘連蛋白塗層的可植入的醫學製品和使用方法具有層粘連蛋白塗層的可植入的醫學製品和使用方法對相關申請的交叉引用本非臨時申請要求申請流水號為60/655,576的臨時申請的優先權，該臨時申請的申請日為2005年2月23日，名稱為支持不同細胞活性的管狀結構的表面修飾為了促進新血管形成的聚合物表面修飾。發明領域本發明涉及促進與可植入的醫學製品相關的血管化反應的方法。在某些方面，所述可植入的醫學製品具有含有層粘連蛋白的塗層。在其他方面，本發明涉及具有穩定去核的多孔部分的可植入的醫學製品。發明背景直到最近，可植入的醫學製品技術的發展的主要焦點一直是改變所述製品的結構特徵，以便改善它在體內的功能。不過，越來越明顯的是，植入的器械在植入部位的功能通過改善所述器械在組織反應中的相容性可以得到很大提升，所述反應是因為植入而發生的。理想的是，改善了的相容性使得所述植入器械的表面可以模擬通過損傷而暴露的天然組織，並且提供作為癒合過程結果的形成正常組織的環境。儘管是惰性的和無毒的，但與所述器械相關的植入的生物材料，如各種塑料和金屬，通常會引起異物反應，如發炎，纖維化，感染和血栓形成。如果反應過度，這些反應中的某些可能導致所述器械在體內失效。在植入之後不久，通常會出現適當的細胞炎性反應，其中，白細胞，激活的巨噬細胞和異物巨細胞被募集到植入器械的表面。儘管所述炎性反應是常見的，並且通常是癒合過程的一種要素，但它通常伴隨著在植入器械的表面上形成明顯的纖維基質。過度纖維化和纖維基質膠嚢化通常是不理想的，因為這種膠嚢化可能使植入器械與周圍的組織隔離，從而妨礙所述移植物的血管化。通常被視為微血管的新血管的形成同樣是組織癒合過程的一部分。血管生成反應被稱為由現有血管形成新血管。血管發生反應表示從單細胞新形成新血管。新血管的形成是一個複雜過程，對它的了解不多，不過，似乎涉及內皮細胞向血管形成部位的募集。促進與植入表面相關的血管生成反應和新血管形成被認為能改善移植物在周圍組織環境中的同化。通過改變移植物特性改善血管生成反應，可以通過改善新血管形成使植入物長期起作用，這使得能夠將合適的養分和廢物交換到周圍組織中。改善了的血管生成反應能夠以其他方式發揮效用。例如，對於血管移植物來說，通過移植物間隙的血管滲透的加強(新血管形成)可以改善血管的開放性。增強的血管滲透可以提供用於腔內皮化的自體內皮細胞來源，從而形成不形成血栓的血液/組織界面。可以客觀評估導致增強了的血管生成反應的生物相容性的改善。例如，可以通過在植入之後一定時間用顯微鏡測定與移植物表面相關的微血管密度對血管生成反應進行定量。除了測定新微血管生長程度之外，可以進行組織學分析，以j更確定所形成的與移植物表面相關的微血管類型。在這點上，血管生長和血管複雜性可能是癒合過程的重要因素，並且可以在對該器械的表面進行修飾和植入一段時間之後評估。另外，生物相容性的改善還可以通過觀察由所述器械引起的受控制的炎性，和最低纖維化反應衡量。生物相容性的改善還可以通過證實所述反應與觀察到的其他類型的表面修飾的反應不同，或反應強度更小而進4亍衡量。基於上述原因，業已實現了對器械的修飾，修飾方式模擬體內受損組織的自然癒合，並且將植入的製品整合在正常組織中，它能夠極大地改善植入器械的功能和功能壽命。所述修飾理想的可導致最低的或無纖維化的膠嚢化，並且導致與移植物表面相關的微血管發育的增強。具有各種天然和合成材料的塑料或金屬可植入的醫學製品表面的修飾是本領域公知的改善可植入的器械的生物相容性的途徑。改善可植入的醫學製品的生物相容性的一種方法包括對移植物進行修飾，以便促進內皮細胞從相鄰組織的遷移。所述修飾被認為能改善與所述器械表面相關的新血管的形成。提供具有改善的生物相容性的表面的努力涉及將細胞外基質(ECM)蛋白沉積在可植入的塑料器械表面上。所述蛋白的穩定形成是理想的，因為它可以促進新血管的形成和持久性。業已證實用活性基團修飾ECM蛋白是改善塗層穩定性的方法。例如，用光反應性基團衍生化並且固定在聚亞安酯(PU)和膨脹的聚四氟乙烯(ePTFE)血管移植物上的纖連蛋白(FN)和膠原IV可以增強內皮細胞與移植物表面的體外結合和生長。另外，儘管用某些細胞外基質蛋白對器械表面進行修飾可以促進內皮細胞結合，但這種結合可能與促進血管發生的塗層表面的能力無關。另外，所述塗層器械還可能促進相當的炎性和纖維化反應。概述本發明總體上涉及可植入的醫學製品，它具有能促進所述製品的體內功能的塗層。本發明還涉及將所述塗層的醫學製品用於對象體內的方法。具體地講，本發明的塗層可以通過促進與塗敷表面相關的血管形成而改善所述製品的功能。在與本發明的一個方面相關的實驗研究中，業已發現將層粘連蛋白多肽固定在醫學移植物表面上能顯著增強與所述製品的塗敷表面相關的血管生長的形成。具體地講，證實了包括層粘連蛋白-5的塗層能導致與塗敷表面相關的血管形成，正如遍布具有層粘連蛋白-5塗層的多孔ePTFE基質的微血管的形成所證實的。特別是，所述微血管的形成不伴有所述製品表面上的厚的無血管的纖維嚢的形成，並存在受控制的炎性反應。基於上述發現的其他研究發現了層粘連蛋白，如層粘連蛋白-1或層粘連蛋白-5，和其他粘著因子，如膠原的組合也能促進良好的細胞附著和與用所述材料包衣的的表面相關的增強了的新血管生長。在與可植入的醫學製品組合使用時，本發明的塗層能促進傷口癒合反應，這種反應更接近身體的自然傷口癒合反應。表現為觀察到的受控制的炎性反應，最低纖維化反應，以及形成與植入器械的塗敷表面相關的微血管的緻密網絡。這一發現提供了對製備和使用可植入的醫學製品的重大改進。使用所述移植物的層粘連蛋白-型塗層出現的明顯的血管形成，與最低纖維化的和受控制的炎性反應的組合，建立了改善植入製品功能的參數，特別是長時間使用時的參數。本發明的塗層提供了相對現有技術的粘著因子塗層的改進，因為在其他塗層中的上述反應(即，新血管生長，最低炎性和纖維化反應)的組合是以前無法實現的。一方面，本發明提供了導致與可植入的醫學製品表面相關的血管形成的方法。該方法還可以在需要降低與醫學製品植入相關的纖維化反應時使用。該方法包括將具有塗層的醫學製品植入到對象體內的步驟。一方面，所述塗層包括層粘連蛋白-5、它的活性部分或它的結合成分，其使用量足以導致與植入的醫學製品表面相關的血管形成。該方法的另一個步驟涉及將所述醫學製品保持在對象體內，保持時間足以導致與植入的醫學製品表面相關的血管形成。在某些方面，該方法是使用包括層粘連蛋白-5、它的活性部分或它的結合成分的塗層實施的，其中，所述塗層是通過以下方法形成的，該方法包括沉積塗層組合物的步驟，該組合物包括層粘連蛋白-5、它的活性部分或它的結合成分，濃度為1Mm/mL或以上。其他研究發現，層粘連蛋白和其他粘著因子的組合還可以導致與有塗層的製品表面相關的顯著的血管形成，並且減弱纖維化反應。因此，本發明還提供了包括將具有塗層的醫學製品植入到對象體內的步驟，所述塗層包括第一成分，包括層粘連蛋白、它的活性部分或它的結合成分，和第二成分，包括粘著因子、它的活性部分或它的結合成分。一種優選的塗層包括層粘連蛋白-5、它的活性部分或它的結合成分，和膠原、它的活性部分或它的結合成分。在某些方面，層粘連蛋白-5的活性部分是層粘連蛋白-5的a3(a3)鏈，所述(a3)鏈的LG3模塊，或LG3模塊的活性肽結構域(如PPFLMLLKGSTR和NSFMALYLSKGR)。另一種優選的塗層包括層粘連蛋白-l，或它的活性部分，或它的結合成分和膠原，或它的活性部分，或它的結合成分。優選的膠原選自膠原I和膠原IV。一般，將有塗層的製品保持在對象體內，保持時間足以導致與塗敷表面相關的血管形成。例如，在植入四周之後，與移植物塗層表面相關的微血管密度超過100個脈管/cm2。另外，在該時期之後，觀察到纖維嚢的形成被最小化。本發明的塗層特別適用於長期可植入的器械，如在體內放置一個月或更長時間的器械。在某些場合下，植入步驟是通過將醫學製品輸送到對象體內的血管內位置實施的。例如，通過血管輸送的製品可以是特定形式的移植物，支架，支架-移植物組合，內植入物，和分流器。優選的是，所述可植入的醫學製品包括多孔部分。例如，所述多孔部分可以包括大小足以允許血管在層粘連蛋白-型塗層的促進下向內生長或穿過生長的孔。在本發明的某些方面，所述多孔部分可以用天然或合成材料製成，包括製成紡織和/或無紡纖維結構的聚合材料。在某些方面，所述多孔結構包括ePTFE。正如通過筒形血管內移植物作為例子進行說明的，所述層粘連蛋白-型塗層可以促進新血管從移植物的無腔表面向有腔表面的生長，而不會在移植物的任何表面上形成厚的細胞纖維化嚢。在這點上，層粘連蛋白_型塗層能促進組織樣結構的形成，包括多孔移植物部分，它是高度血管化的，並且能夠交換生物學成分，如養分和廢物，將移植物全面有效地整合在周圍組織中。在本發明的某些方面，包括層粘連蛋白-5的塗層是通過以下方法在可植入的醫學製品的表面形成的，該方法包括以下步驟(a)讓可植入的醫學製品的表面與富含層粘連蛋白-5的細胞滲出物接觸。層粘連蛋白-5與其他多肽輔助因子一起可以沉積在所述製品表面，以便形成所述塗層。例如，作為在具有多孔部分的製品上提供含有層粘連蛋白塗層的一種方法，可以卩吏組合物，如細胞滲出物流過所述製品迫使層粘連蛋白，和其他成分進入所述製品的多孔部分，以便使層粘連蛋白沉積在多孔部分的表面上。該方法可以包括以下步驟(a)提供具有多孔部分的製品(b)在加壓條件下，使包括層粘連蛋白的組合物流過多孔部分，其中，層粘連蛋白沉積在多孔部分上。層粘連蛋白在表面上的沉積可以通過吸附進4亍。，形成，本發明還提供了包括多孔部分的血管內裝置的透皮內皮化的方法。該方法可以包括將包括層粘連蛋白-型塗層的製品保持在對象體內的步驟，保持時間足以導致微血管生長進入可植入器械的多孔部分，並且足以通過所述微血管為所述器械的腔表面提供內皮細胞。業已發現，通過將包括層粘連蛋白、它的活性部分或它的結合成分的多肽與一種或多種其他粘著因子、它的活性部分或它的結合成分，以及一種或多種其他塗層成分組合可以形成強化塗層。所述一種或多種其他成分可以包括聚合物成分，第一活性基團，和第二活性基團。第一活性基團使得所述聚合成分可以交聯，或使所述聚合成分與所述製品表面結合，而第二活性基團使得層粘連蛋白和粘著因子結合。優選的是，所述聚合成分包括側掛的第一活性基團和側掛的第二活性基團。在某些方面，第一活性基團包括光反應性基團。第二活性基團分別與層粘連蛋白和粘著因子起反應，例如，第二活性基團可以是胺反應性基團，可以分別將層粘連蛋白的攜帶胺的殘基和粘著因子結合在所述聚合物上。所述塗層提供了形成具有兩種或兩種以上多肽-型成分的塗層的獨特優點(如層粘連蛋白和其他粘著因子)。所述塗層容易形成，並且不需要對層粘連蛋白和其他粘著因子進行化學修飾。例如，在形成所述塗層的方法中，作為塗層工藝的一個步驟，可以將所述聚合物成分沉積在所述製品表面上，並且進行處理，以便形成聚合物底層，其中，所述第一活性基團將所述聚合物共價結合在所述製品表面上，和/或第一活性基團與所述聚合物共價交聯，以便在所述製品表面上形成塗層。隨後的步驟可能涉及將含有層粘連蛋白和粘著因子的組合物沉積在所述聚合物層上，其中，所述層粘連蛋白和粘著因子能夠通過第二活性基團分別結合在所述聚合物成分上。在這點上，加工步驟被最小化。這改進了與塗層方法相關的效率並且降低了成本。另外，層粘連蛋白和其他粘著因子穩定存在於所述器械表面上。因此，另一方面，本發明還提供了具有塗層的可植入的醫學製品，所述塗層能夠導致與所述製品表面相關的血管形成。所述塗層包括層粘連蛋白、它的活性部分或它的結合成分，和粘著因子、它的活性部分或它的結合成分，所述塗層還包括聚合物成分，起反應以使聚合物成分發生交聯的第一基團，起反應以分別將層粘連蛋白和粘著因子結合在所述聚合物成分上的第二基團。一方面，所述塗層包括層粘連蛋白-5,或它的活性部分，和膠原，優選膠原I,或它的活性部分，其中，所述層粘連蛋白-5和膠原通過第二基團分別結合在所述聚合成分上，並且所述聚合物成分通過第一基團交聯。另一方面，所述塗層包括層粘連蛋白-l和膠原I。在使用聚合物成分製備層粘連蛋白-型塗層時，發現聚合物基層本身在與具有多孔部分的可植入的製品組合使用時有利於提供獨特的優點。例如，業已發現，由使用包括側掛的第一活性基團和側掛的第二活性基團的聚合物提供的聚合物基層，使得所述多孔部分在可植入的製品的加工和使用期間保持為穩定去核的狀態。去核是除去某些多孔材料，如ePTFE的間隙中滯留的氣泡的過程。業已證實，除了增強ePTFE周圍和內部的血管發育之外，去核的ePTFE移植物還可以減少以前與未處理過的ePTFE相關的纖維嚢(Boswell，CA.andWilliams，S.K.,etal.J.Biomater.SciPolymerEdn.,10:319—329)。不過，在隨後的處理或操作期間，ePTFE可能很容易再次成核，這可能降低才直入物效力。因此，另一方面，本發明提供了具有塗層的包含穩定去核的多孔部分的可植入的醫學製品，所述塗層含有合成聚合物。所述包括穩定去核的多孔部分的可才直入的醫學製品可以通過以下方法生產，該方法包括以下步驟(a)對多孔部分進行去核；和(b)在所述多孔部分的表面上形成包括合成聚合物的層。所述穩定去核的醫學製品可以植入對象體內，該製品只具有包括合成聚合物的層，或可以將一種或多種其他因子結合在包括所述合成聚合物的層上。例如，任何層粘連蛋白-型組合物都可以與本文所披露的合成聚合物結合。在某些優選方面，所述聚合物是包括活性基團，如光反應性基團的合成聚合物。所述合成聚合物還優選是親水的。典型的合成聚合物是乙烯基聚合物，如丙烯醯胺聚合物。附圖的簡要說明圖la是Western印跡分析，表示層粘連蛋白-5的P3鏈的鑑定，它是在HCM流之後從ePTFE中收集的蛋白中鑑定的，表明層粘連蛋白-5沉積在ePTFE的表面上。圖lb是Western印跡分析，檢測膠原I，膠原IV，纖連蛋白，層粘連蛋白-1，和層粘連蛋白-5在ePTFE上的HCM沉積蛋白中的存在。在HCM沉積的蛋白中觀察到了纖連蛋白，層粘連蛋白-1和層粘連蛋白圖lc是在層粘連蛋白-5消耗柱之前和之後層粘連蛋白-5的三種鏈(ot3，P3，和y2鏈)的存在的Western印跡分鬥斤。圖2a是每個HPF(高功率場)的HMVEC數量的圖，所述HPF粘附於未修飾過的ePTFE或用HCM，層粘連蛋白-5耗盡的HCM，純的層粘連蛋白-5，或DCS-PBS塗敷的ePTFE，並且與圖2b-2f相應。圖2b-2f是未修飾過的，或用HCM,層粘連蛋白-5耗盡的HCM，純的層粘連蛋白-5，或DCS-PBS塗敷過的ePTFE管的腔表面的電子顯微照片。用HMVEC浸泡未修飾過的或塗敷過的ePTFE管，以便測定粘著。圖2b-2f相應於曲線2a的結果。圖3a是來自小鼠皮下組織的ePTFE植入物的皮下血管化的圖，所述移植物是未修飾過的或用HCM,層粘連蛋白-5耗盡的HCM，純的層粘連蛋白-5，或DCS-PBS塗敷，正如通過每平方毫米上的血管數量衡量的，並且相應於圖3b-3f。圖3b-3f是與來自小鼠皮下組織的ePTFE植入物的橫截面相關的GS-1陽性血管的光學顯微照片，所述移植物是未修飾過的或用HCM，層粘連蛋白-5耗盡的HCM，純的層粘連蛋白-5，或DCS-PBS塗敷，並且相應於曲線3a的結果。圖4是來自小鼠皮下組織的ePTFE植入物的炎性反應圖，所述移植物是未修飾過的或用HCM，層粘連蛋白-5耗盡的HCM，純的層粘連蛋白-5，或DCS-PBS塗敷，正如通過與每平方毫米植入物相關的F4/80陽性細胞(激活的巨噬細胞和單核細胞)的數量衡量的。圖5a-5e是蘇木精和曙紅-染色的組織橫截面的光學顯微照片，所述截面含有來自小鼠皮下組織的ePTFE植入物，所述移植物是未修飾過的或用HCM，層粘連蛋白-5耗盡的HCM,純的層粘連蛋白-5，或DCS-PBS塗敷。圖6是所述試劑與五種二元蛋白塗層組合的結果的柱狀圖。圖7是所述試劑本身和與一種二元塗層組合的結果的柱狀圖。詳細i兌明下面披露的本發明的實施方案並非窮舉性質的，或者是將本發明局限於以下詳細說明所披露的確切形式，相反，選擇並且披露這些實施方案，是為了使本領域的其他技術人員能夠了解本發明的原理和實踐。這裡提到的全部出版物和專利通過引用合併與此，其中的任何內之前，包括其中所引用的任何出版物和/或專利。一方面，本發明基於添加層粘連蛋白-型塗層能夠增強與有塗敷的植入物表面相關的血管形成能力相關的發現。具體地講，將含有層粘連蛋白-5的條件細胞培養基用於將分泌的蛋白沉積在生物反應器系統中的ePTFE表面上(參見實施例1)。用修飾的ePTFE基質試驗血管反應(包括血管發生和新血管形成)，細胞粘著，炎性反應，和纖維嚢形成(參見實施例2-4)。使用抗膠原I，膠原IV，纖連蛋白，層粘連蛋白-l,和層粘連蛋白-5的抗體的免疫印跡，發現鑑定了纖連蛋白和層粘連蛋白-1，此外還有層粘連蛋白-5是從條件培養基表面沉積到ePTFE上的蛋白。同時這一類細胞表現出良好的內皮細胞的細胞粘著，和ePTFE的血管化，並且還觀察到了植入物的纖維包裹。選擇性地消耗層粘連蛋白-5,並且用層粘連蛋白-5-耗盡的條件培養基對ePTFE進行塗敷表現出內皮細胞的細胞粘著和ePTFE的血管化的顯著減少，並且適當減輕了炎性反應。根據上述發現，將純化的層粘連蛋白-5沉積在ePTFE上。具有純化的層粘連蛋白的塗層表現出良好的內皮細胞粘著(不過，比使用來自所述條件培養基的塗層觀察到的所述細胞粘著少)，具有純化的層粘連蛋白-5塗層的ePTFE的新血管形成與來自所述條件培養基的塗層相比令人吃驚地得到增強。另外，純化的層粘連蛋白-5塗敷的ePTFE表現出最低組織嚢厚度和適度的炎性反應。根據上述發現，製備了這樣的塗層，以便研究層粘連蛋白本身，或與其他粘著因子組合之後對細胞粘著和產生與塗敷表面相關的新血管反應的發生的作用。另外，還用結合成分製備了塗層，以便改善含有多肽型粘著因子的塗層的形成。將包括第一和第二活性基團的聚合成分用於改善塗層工藝和塗層性質。在形成塗層的過程中，發現這種聚合物-型塗層成分有利於形成具有穩定去核的多孔部分的可植入的醫學製品。發現特別優選的塗層包括層粘連蛋白和膠原的組合。典型的組合包括層粘連蛋白-5和膠原I,以及層粘連蛋白-l和膠原I。本發明的塗層，器械，和方法可用於促進與所述製品的塗敷表面相關的血管形成。在某些方面，所述血管形成的發生與多孔表面相關。新血管的形成表現為血管生成(由先前存在的血管發育成新血管)或新血管化(在植入物的多孔部分內形成血管)反應。在很多方面，可以通過新血管使它有神經分布，如果條件適合所述新血管在塗敷表面附近形成，如通過本發明的層粘連蛋白-型塗層促進的，所述可植入的醫學製品具有複雜的幾何形狀。血管形成使得所述植入物能夠與植入物周圍的組織一致性地起作用，因為血管化的植入物更接近於天然組織。根據本發明，層粘連蛋白-型塗層能導致與本文披露的可植入的醫學製品塗層相關的血管形成。可植入的醫學製品可以是導入哺乳動物體內用於預防或治療醫學症狀的製品。可植入的醫學製品包括，但不局限於血管植入物和移植物，植入物，手術器械；合成假體，包括支架，內置假體，支架-移植物，和血管內支架組合的血管假體；小直徑移植物，腹主動脈瘤移植物；創傷敷料和創傷管理器械；止血帶；紗布和病氣塞子；貼片，包括子宮出血貼片，房間隔缺損(ASD)貼片，卵圓孔未閉(PF0)貼片，室間隔缺損(VSD)貼片，心包貼片，心外膜貼片，和其他通用心臟貼片；ASD，PF0，和VSD閉鎖裝置；經皮閉鎖裝置，二尖瓣修復裝置；心瓣，靜脈瓣，大動脈過濾器；靜脈過濾器；左心耳過濾器；瓣環成形術器械，導管；神經血管瘤(neuroanuerysm)貼片；中心靜脈通路導管，血管通路導管，膿腫引流術導管，藥物灌輸導管，腸胃外餵飼導管，靜脈內導管(例如，用抗血栓形成劑處理的)，休克治療導管，血壓和支架移植物導管；吻合器械和吻合閉鎖裝置；動脈瘤排出器械；生物傳感器包括葡萄糖傳感器；生育控制裝置；美容植入物，包括乳房植入物，嘴唇植入物；下巴和面頰植入物；心臟傳感器；感染控制裝置；薄膜；組織支架；組織相關的材料，包括小腸黏膜下層(SIS)基質；分流通路，包括腦脊髓液(CSF)分流通路，青光眼排洩分流通路；牙科裝置和牙科移植物；耳裝置，如耳引流管，鼓膜切開術通風管；眼科器械；裝置的套管和套管部分，包括引流管套管，植入的藥物灌注管套管，導管套管，縫合套管，脊柱和神經裝置；神經再生導管；神經導管；神經貼片；整形裝置，如整形關節移植物，骨骼修復/增大裝置，軟骨修復裝置；泌尿裝置和尿道裝置，如泌尿植入物，膀胱裝置，包括膀胱吊索，腎裝置和血液透析裝置，結腸瘻袋結合裝置；膽汁引流製品。具有能導致與塗敷表面相關的血管形成的含有層粘連蛋白的塗層的醫學製品還可以通過組裝具有兩個或兩個以上"部分"(例如，可以放在一起，以便構成所述製品的多件醫學製品)的製品製備，其中，至少一個部分具有塗層。所述醫學製品的所有或一個部分可以具有含有層粘連蛋白的塗層。在這點上，本發明還涉及具有含層粘連蛋白的塗層的醫學製品的各個部分(例如，不是完全組裝的製品)。所述可植入的醫學製品可以用任何合適的材料製成。製備醫學製品的材料的一般類型可以包括天然聚合物，合成聚合物，金屬和陶資。上述一般類型材料的任意組合可用於生產所述可植入的醫學製品。可用在所述可植入的醫學製品上的金屬包括鉑，金，或鴒，以及其他金屬，如錸，把，銠，釕，鈦，鎳，和上述金屬的合金，如不鏽鋼，鈦/鎳，鎳鈦諾合金，鈷鉻合金，非鐵合金，和柏/銥合金。一種典型的合金是MP35。可植入的金屬製品的表面可以進行處理，以便有利於形成含有層粘連蛋白的塗層。例如，包括金屬的可植入的醫學製品可以包括一個或多個基層，如ParyleneTM層，或含矽烷的層，如羥基-或氯-矽烷。所述可植入的醫學製品可以用合成聚合物，包括通過加成或縮合聚合作用產生的低聚物，均聚物，和共聚物製成。合適的加成聚合物的例子包括，但不局限於，丙烯酸樹脂，如由丙烯酸曱酯，曱基丙烯酸曱酯，曱基丙烯酸羥乙酯，丙烯酸羥乙酯，丙烯酸，曱基丙烯酸，甘油丙烯酸酯，曱基丙烯酸縮水甘油酯，曱基丙烯醯胺，和丙烯醯胺；乙烯基，如乙烯，丙烯，氯乙烯，醋酸乙烯酯，乙烯基吡咯烷酮，和偏二氟乙烯聚合而成的樹脂。縮合聚合物的例子包括，但不局限於尼龍，如聚已內醯胺，聚十二烷基內醯胺，聚己二醯已二胺，和聚環已烷十二烷二胺，還包括聚亞安酯，聚碳酸酯，聚醯胺，聚碸，聚(對苯二甲酸亞乙酯)，聚乳酸，聚乙醇酸，葡聚糖，硫酸葡聚糖，聚二曱基矽氧烷，和聚醚酮。在本發明的一方面，所述醫學製品包括卣代聚合物，如氯代和/或氟代聚合物。例如，所述含有層粘連蛋白的塗層可以在可植入的醫學製品的表面上形成，它包括全卣代聚合物，如全氟代聚合物。可以用作基質材料的全卣代聚合物的例子包括全氟代烷氧基(PFA)聚合物，如Teflon和Neoflon;聚三氟氯乙烯(PCTFE);氟代乙烯聚合物(FEP)，如四氟乙烯和六氟丙烯的聚合物；聚(四氟乙烯)(PTFE);和ePTFE。其他含氟聚合物為本領域所公知並且披露於各種文獻中，如W.Woebcken,SaechtlingInternationalPlasticsHandbookfortheTechnologist,EngineerandUser,3rdEd.，(HanserPublishers，1995)pp.234-240。在本發明的某些方面，所述可植入的醫學製品包括多孔部分和在所述多孔部分表面上形成的含有層粘連蛋白的塗層。所述多孔部分可以用類似或不同生物材料的一種或組合製成。所述多孔部分的孔的物理尺寸優選允許在多孔結構內形成血管。例如，合適的平均孔度可以為2|um或以上，優選在大約4Mm-大約150"m範圍內。在很多情況下，所述可植入的醫學製品的多孔部分包括纖維，或具有纖維狀質量。如果所述多孔部分包括纖維，它可以具有任何合適的直徑，從納米直徑的纖維到毫米直徑的纖維。不同大小纖維的組合還可存在於所述多孔部分。所述多孔部分可以用紡織或無紡材料或它們的組合製成。所述多孔表面可以用紡織物製成，它包括機織材料，針織材料，和編織材料。典型的紡織物材料是機織材料，它可以使用本領域公知的任何編織圖案生產。所述多孔表面可以是移植物，鞘，外罩，貼片，套管，包套，和封罩等的表面。所述製品的類型可以作為醫學製品本身，或者與醫學製品的其他部分組合。所述多孔部分可選擇性地包括剛性材料，以便改善它的物理特性。例如，剛性材料可以改善移植物的強度，從而改善它的效能。在本發明的一個典型方面，所述含有層粘連蛋白的塗層是在多孔PTFE基質上形成的。PTFE的使用是可植入的醫學製品領域所公知的。PTFE管通常被用作血管移植物，用於取代或修復血管。ePTFE管具有微觀孔結構，由通過很多細小的原纖維連接的的小的節組成。所述小纖維跨越的節表面之間的空間(即孔)被定義為節間距(IND)。具有大的IND的移植物能增強組織向內生長和細胞內皮化，因為所述移植物本身有更多的孔。ePTFE血管移植物的多孔性可以通過控制所述管的孩O見孔結構的IND控制。可以將單層或多層ePTFE移植物用作新血管化塗層的基質。可用作可植入的假體的多層ePTFE管狀結構的例子可以參見美國專利號4,816,338;4，478,898和5，001,276。所述含有層粘連蛋白的塗層還可以在其他多孔移植物上形成，如包括絲絨質地的外觀的移植物，具有紡織物或平滑的內部。用紡織物製品製成的移植物為本領域所公知，並且業已在多個文獻中披露，例如，美國專利號4,047，252;美國專利號5，178，630;美國專利號5，282,848;和美國專利號5，800，514。具有多孔部分的製品還包括支架-移植物組合。作為另一個例子，可以包括含有層粘連蛋白的塗層的另一製品是水排洩裝置，又被稱作洩液線或青光眼分流通路。上述裝置被用於解除眼睛內部過高的壓力(眼內壓；IOP),通常與患有青光眼的對象相關。將洩液線放置在眼睛側面的組織中，並且通過小管與眼睛正面部分的內側部分連接。所述管可以從眼睛內部排洩多餘的流體，從而降低IOP。水排洩裝置包括多孔部分，如ePTFE，可以提供本文所述的含有層粘連蛋白的塗層。所述含有層粘連蛋白的塗層可以增加ePTFE內的血管形成，並且減少通常與未塗敷裝置相關的纖維嚢形成。所述可植入的醫學製品還可以是藥物洗脫或藥物釋放性的。儘管層粘連蛋白和任何其他可選擇的多肽成分一般與所述製品表面結合，所述製品還能夠從所述製品的一部分釋放藥物。所述製品的藥物洗脫或藥物釋放部分可以位於所述製品的包括層粘連蛋白_型塗層的相同部分，或者可以在所述製品的不同部分。在某些情況下，親水性藥物，如沒有與所述器械表面結合的其他多肽可以存在於包括層粘連蛋白的所述塗層中。在上述情況下，所述親水性藥物可以從所述塗層中釋放，而層粘連蛋白保持與所述表面結合。在其他情況下，所述製品包括具有藥物的塗層，其中，所述藥物可以從所述塗層中洗脫或釋放。在優選方面，該塗層是聚合物層。例如，所述可以洗脫或釋放藥物的塗層可以包括聚合物，層粘連蛋白與所述聚合物共價結合。例如，藥物可存在於包括聚合物的塗層中，並且可以從它裡面釋放。所述聚合物具有能夠將層粘連蛋白共價結合在該聚合物上的基團。所述藥物還可存在於包括疏水性聚合物的塗層中。例如，所述藥物可存在於包括聚(烷基(曱基)丙烯酸酯)，如聚丁基丙烯酸甲酯(pBMA)的塗層中。所述層還可以包括其他聚合物，如聚(乙烯基乙酸乙烯酯)(pEVA);參見美國專利號6，214，901。可以使用其他藥物洗脫聚合物層(如披露於以下文獻中的聚合物層美國專利號6，669，980聚(苯乙烯-異丁烯-苯乙烯)；以及美國專利公開號2005/0220843和2005/0244459)。一般，在可植入的醫學製品的表面上形成的含有層粘連蛋白的塗層包括層粘連蛋白，或它的活性部分。所述層粘連蛋白家族包括多結構域糖蛋白，它天然存在於基底層中。層粘連蛋白是三種不同鏈的雜合三聚體。在羧基末端結合成巻曲螺旋結構的a,P,和y鏈，以便形成通過二硫鍵穩定化的雜合三聚體分子。每一個層粘連蛋白鏈是由不同基因編碼的多結構域蛋白。業已披露了每一條鏈的若干種同種型。不同的a，P，和y鏈同種型組合形成了不同的雜合三聚體層粘連蛋白同種型。在本發明的一個方面，所述可植入的醫學製品上的塗層包括層粘連蛋白-5或它的活性部分。層粘連蛋白-5由y2鏈與a3和P3鏈(層粘連蛋白a3P3y2)組成。最初它是以460kD分子形式合成的，在被分泌到ECM中後，該分子發生特異性蛋白酶剪切形成更小的形式。其大小的縮小是oc3和y2亞基分別從190-200加工成160kD和從155加工到105kD造成的。層粘連蛋白-5是錨絲的整體部分，它將內皮細胞連接在基底膜上。所述塗層可以包括層粘連蛋白-5的活性部分，它可以是層粘連蛋白-5的一個或多個鏈，所述鏈的一部分，或它們的組合，其中，所述活性部分能夠導致與移植物的塗敷表面相關的血管形成。在某些方面，層粘連蛋白a3鏈，或它的一部分包含在可植入的醫學製品上的塗層中。層粘連蛋白cc3鏈的一部分具有球狀結構，並且被稱作G結構域，它本身由五個串聯的重複單元，被稱作LG重複單元組成。G結構域中的模塊之一被稱作LG3模塊，業已被證實能複製關鍵的Ln-5活性，包括細胞粘著，延展，和遷移(Shang，M.,etal.(2001)J.Biol.Chem.276:33045-33053。人LG3模塊的序列能夠從NCBI(NationalCenterforBiotechnologyInformation)獲得,編號為A55347。一方面，所述塗層包括具有層粘連蛋白oc3鏈的LG3序列的多肽。所述G結構域中的其他更短的肽也可用於本發明的塗層中，如肽序列PPFLMLLKGSTR和NSFMALYLSKGR。使用一部分層粘連蛋白-5的優點是，可以在所述表面上提供更高密度的層粘連蛋白-5活性。另外，需要更少的多肽提供與醫學製品上的塗層相關的理想的血管反應。層粘連蛋白-5可以從各種細胞系中獲得，包括HaCaT(自發永生化的人角化細胞；Boukamp,P.,etal.(1988)J.CellBiol106:761-771)，和HT-1080(人纖維肉瘤；ATCC,CCL-121)。抗層粘連蛋白-5的多克隆抗體可以通過商業渠道獲得，例如，Abeam(#abl4509;Cambridge,MA);抗層粘連蛋白-5鏈的單克隆抗體可以通過商業渠道獲得，例如，Chemicon(小鼠抗-層粘連蛋白-5y2子鏈MAb;Temecula,CA)和TransductionLaboratories(小鼠抗-層粘連蛋白-5P3子鏈MAb;Lexington,KY)，或可以才艮據層粘連蛋白-5序列製備(例如，兔抗-層粘連蛋白-5a3子鏈多克隆(RB-71),如，由BethylLaboratories,Inc.(Montgomery,TX)製備的抗所述狀CKANDITDEVLDGLNPIQTD(參見實施例))。可以獲得人層粘連蛋白-5cc3,P3，和y2鏈的完整的核酸和蛋白序列。給出的這些該信息和技術是本領域技術人員可以獲得的，理想的層粘連蛋白-5部分可以使用諸如免疫純化，重組蛋白產品，或通過肽合成的技術獲得。具有層粘連蛋白-5活性的塗層還可以通過提供包括能專一性地結合層粘連蛋白-5，或它的一部分的成分，本文稱之作"結合部件"的塗層製備。抗層粘連蛋白-5和它的部分的抗體可以通過商業渠道獲得，並且在本文中披露。所述塗層可以通過用抗層粘連蛋白-5的抗體取代所述塗層中的層粘連蛋白-5，或用抗層粘連蛋白-5的抗體補充所述塗層製備。層粘連蛋白-5，它的一部分，或它的結合成分可以塗在可植入的醫學製品的表面上，塗層量足以導致與塗敷表面相關的血管形成。在某些方面，層粘連蛋白-5,或它的一部分被塗在所述表面上，其中，所述層粘連蛋白-5在所述塗層組合物中的濃度大約為1jam/mL或以上。在本發明的另一方面，層粘連蛋白-5，或它的一部分是作為主要多肽存在於所述塗層中的。就是說，層粘連蛋白-5，或它的一部分的使用量超過塗層中多肽總數量的50%。可以在所述塗層中選擇性地添加一種或多種其他粘著因子成分。包括層粘連蛋白-5或它的活性部分的塗層還可以包括參與細胞粘著的另一種因子。例如，所述塗層可以包括層粘連蛋白-5和選自能夠與蛋白的整聯蛋白家族成員結合的一組因子的其他成分在一個方面，所述其他成分選自下列一組膠原，層粘連蛋白-1，玻連蛋白，觸覺蛋白，腱生蛋白，凝血栓蛋白，和ICAM，蛋白聚糖，彈性蛋白，透明質酸，及其活性部分。在某些方面，可以包括纖連蛋白或纖維蛋白原。在某些方面，所述塗層包括層粘連蛋白-5,或它的活性部分，和膠原，或它的活性部分的組合。例如，所述塗層可以包括層粘連蛋白-5和選自膠原I和膠原IV的膠原的組合。一種典型的組合包括層粘連蛋白-5和膠原I的組合。在一種實施模式中，層粘連蛋白-5，或它的活性結構域在所述塗層中的存在量佔所述塗層中多肽總量的50-99%，而膠原I在所述塗層中的存在量佔所述塗層中所存在的多肽總量的1-49%。在本發明的另一方面，所述塗層包括層粘連蛋白，如層粘連蛋白-l,或它的活性結構域，與參與細胞粘著的其他因子組合。例如，所述塗層可以包括層粘連蛋白-1，或它的活性結構域，和選自能夠結合本文所披露的蛋白的整聯蛋白家族成員的因子的其他成分。例如，所述塗層可以包括層粘連蛋白-1和選自膠原，層粘連蛋白-5，玻連蛋白，觸覺蛋白，腱生蛋白，凝血栓蛋白，和ICAM(細胞間粘附分子)，及其活性部分的因子的組合。在某些方面，所述塗層可以包括層粘連蛋白和特定結合成分或抗參與粘著的細胞表面抗原的抗體的組合。例如，所述塗層可以包括層粘連蛋白和抗CD34的抗體，或CD34的結合成分，如MadCAM或L-選擇蛋白。抗-CD34單克隆抗體可以結合來自人外周血液的內皮祖細胞。所述祖細胞能夠分化成內皮細胞(Asaharaetal,(1997)Science275:964-967)。生產針對CD34的單克隆抗體的雜交瘤可以從美國模式組織保藏所(Rockville，Md.)獲得。所述層粘連蛋白-型塗層能夠以一種或多種方式形成。在某些方面，層粘連蛋白，如層粘連蛋白-5或層粘連蛋白-1，或它的活性結構域，以及任何其他成分是通過沉積固定的，並且吸附在所述醫學製品表面上。一般，多肽成分的吸附被認為是通過一部分多肽和所述基質表面之間的非共價疏水性相互作用導致的。為了吸附多肽，所述可植入的醫學製品一般具有疏水性表面。所述疏水性表面可以通過器械材料本身提供，如卣化熱塑塑料，如ePTFE,或可以對所述器械表面進行修飾，以便提供疏水性表面。可以使用任何合適方法通過吸附將一種或多種多肽成分固定在所述表面上。如果固定一種以上成分，該方法可以通過兩種成分同時固定的方式進行。例如，可以製備層粘連蛋白和膠原的混合物，並且沉積在所述製品表面。成分的濃度，塗敷時間，塗敷溫度，塗層pH，溶液離子強度，任何其他製劑(如洗滌劑)在塗層溶液中的存在，可以根據本領域已知的參數選擇，以便在所述製品表面上提供合適的層粘連蛋白-型塗層。為了說明通過粘著實現的使層粘連蛋白固定的模式，披露了ePTFE移植物的塗層。通過用醇處理除去ePTFE間隙中的空氣，以便提供具有較小表面張力的去核的移植物。例如，去核可以通過連續的浸泡完成，開始使用高醇濃度溶液(如100%)並且將醇濃度降低直到進入去離子水溶液。另外，去核可以通過以下方式進行，開始使用水溶液，然後換成醇溶液。然後在塗層工藝之前將移植物放入PBS(例如，不含陽離子的磷酸鹽緩衝鹽水)。對於所述塗層方法來說，將包括層粘連蛋白的塗層組合物放在與ePTFE表面接觸的地方。在某些實施方式中，例如，對於管狀ePTFE基質來說，所述層粘連蛋白組合物可以通過管狀部分泵送預定的時間。在一種實施方式中，讓所述塗層組合物與所述基質接觸大約1小時-大約12小時。層粘連蛋白在所述組合物中的存在量能夠提供會導致與塗敷表面相關的血管形成的塗層。例如，層粘連蛋白-5在所述組合物中的使用濃度為大約1jlig/mL或以上。所述組合物可以包括層粘連蛋白，如純的形式的層粘連蛋白-5,或從富含層粘連蛋白的組合物中獲得的層粘連蛋白。可以通過使用去汙劑，如SDS除掉沉積的蛋白，然後通過免疫印跡進行蛋白定量來測定沉積在所述基質上的層粘連蛋白的數量。在本發明的某些方面，通過塗層成分將所述塗層組合物的一種或多種成分固定在器械表面上。在某些方面，所述塗層成分可用於改善所述塗層的成分(例如，層粘連蛋白和其他可選擇的成分)在所述器械表面上的穩定性。一般，可以通過一種或兩種不同的配製，或兩種配製的組合固定所述塗層的多肽成分(層粘連蛋白或層粘連蛋白和其他多肽因子的組合)。在某些方面，所述塗層成分可以是連接部分。作為改善所述塗層的成分結合的手段，通過所述連接部分將所述多肽成分結合在另一種成分上。在這種設計中，所述成分與另一種成分交聯，以便在所述製品表面上形成聯接的分子網絡。例如，多種層粘連蛋白分子可以通過所述連接部分交聯，以便形成層粘連蛋白分子的塗層。其他成分，如第二成分，例如，選自膠原，層粘連蛋白-l，玻連蛋白，觸覺蛋白，腱生蛋白，凝血栓蛋白，ICAM，它們的活性結構域可以與所述層粘連蛋白交聯。沉積在器械表面上的成分的交聯可以通過讓所述塗層組合物的多肽成分與連接部分起反應而完成，其中，所述器械表面一般不會與所述連接部分發生反應。例如，其中，所述連接部分是可以通過熱或光能激活的基團，並且，所得到的激活了的基團可以與所述塗層組合物的成分起反應，而不是與所述器械表面起反應，所述連接部分與一部分塗層成分(例如，層粘連蛋白)起反應，以便形成由共價結合的多肽構成的網絡。與所述塗層組合物接觸的表面一般不會與所述連接部分起反應，它在某些方面是疏水性的，並且是可抽取氫的較差的來源。例如，所述表面是含氟聚合物表面，如ePTFE。在本發明的某些方面，所述連接部分包括光反應性基團。廣義地講，光反應性基團是能夠對專門施加的在外部光能作出反應的基團，進行活性物質的生成，導致與目標的共價結合。光反應性基團是分子中的原子團，它在儲存條件下保持它們的共價鍵不變，不過，在被激活時，與其他分子形成共價鍵。所述光反應性基團能產生活性物質，如自由基，氮賓，亞碳化物，以及在吸收外部電磁或動能(熱能)時酮的激發狀態。可以選擇光反應性基團，以便對電磁波頻譜的各個部分作出反應，並且，優選對光譜的紫外線，可見光，或紅外部分作出反應的光反應性基團。光反應性基團，包括本文所披露的基團為本領域所公知。本發明涉及將任何合適的光反應性基團用於形成本文所披露的本發明的塗層。光反應性基團可以產生活性物質，如自由基，特別是氮賓，亞碳化物，和在吸收電磁能時激活的酮的激發狀態。可以選擇光反應性基團以便對電磁波頻譜的各個部分作出反應。通常使用對所述光譜的紫外和可見光部分作出反應的基團。可以使用光反應性芳基酮，如乙醯苯，二苯甲酮，蒽醌，蒽酮，和蒽酮-樣雜環(例如，蒽酮的雜環類似物，如在10號位置上具有氮，氧或硫的蒽酮)，或它們的取代過的(例如，環取代過的)衍生物。芳基酮的例子包括蒽酮的雜環衍生物，包括吖啶酮，氧雜蒽酮，和噻噸酮，以及它們的環取代過的衍生物。某些光反應性基團包括噻噸酮，以及它的衍生物，它的激發能量大於約360nm。這些類型的光反應性基團，如芳基酮，很容易發生本文所披露的激活/失活/再激活循環。二苯曱酮是特別優選的潛伏的活性部分，因為它能夠發生光化激發，最初形成激發單重態，它發生系統間雜交，形成三重態。通過萃取氫原子(例如，從支撐表面上萃取)，可以將激發三重態插入碳-氫鍵，從而形成自由基對。自由基對隨後的崩潰導致形成新的碳-碳鍵。如果活性鍵(例如，碳-氬)不能用於結合，紫外線誘導的二苯甲酮的激發是可逆轉的，並且所述分子在取消所述能源後恢復到基態能水平。光可激活的芳基酮，如二苯曱酮和乙醯苯是特別重要的，因為這些基團在水中可以發生多種反應，並因此提供增高的塗層效率。所述疊氮構成了另一種類型的光反應性基團，並且包括arylazides(C6R5N3)，如苯基疊氮和4-氟-3-硝基苯疊氮；醯基疊氮(-C0-N3)，如苯曱醯疊氮和對-曱基苯曱醯疊氮；疊氮曱酸酯(-0-C0-N3),如乙基疊氮甲酸酯和苯基疊氮甲酸酯；磺醯疊氮(-S02-N3)，如苯磺醯疊氮；和磷酸疊氮[(R0)2PON3]，如二苯基磷酸疊氮和二乙基磷酸疊氮。重氮化合物構成了另一種類型的光反應性基團，並且包括重氮烷(-C冊2)，如重氮曱烷和二苯基重氮甲烷；重氮酮(-C0-CHN2),如重氮乙醯苯和l-三氟曱基-l-重氮基-2-戊酮；重氮基乙酸酯(-0-C0-CHN2),如叔-丁基重氮基乙酸酯和苯基重氮基乙酸酯；和|3-酮-oc-重氮基乙醯乙酸酯(-C0-CN2C0-0-),如#又-丁基a重氮基乙醯乙酸酯。其他光反應性基團包括偶氮甲烷(-CHN2)，如3-三氟曱基-3-苯基偶氮曱烷；和烯酮(CH=C=0，如烯酮和二苯基烯酮。參見實施方案，其中，所述塗層包括多肽成分的交聯層，所述塗層可以通過提供包括光反應性基團(即，光-層粘連蛋白)的層粘連蛋白形成。在這些方面，光-層粘連蛋白可以被激活，以便與所述塗層組合物中的其他成分，包括其他光-層粘連蛋白交聯。另外，所述塗層可以通過讓所述塗層組合物的成分與作為光可活化的交聯劑的連接部分結合形成。所述光可活化的交聯劑可以是非離子或離子型的。所述光可活化的交聯劑可以包括至少兩個潛伏光反應性基團，在它們接觸合適的光化能源時可以變成光化學活性的。例如，所述層粘連蛋白塗層可以使用具有結構式的非離子光可活化的交聯劑形成，其中，X是化學主鏈，而RmR2，R3，和114是包括潛伏光反應性基團的自由基。例如，典型的非離子交聯劑披露於美國專利號5，414，075和5，637，460中(Swanetal.，"RestrainedMultifunctionalReagentforSurfaceModification")。還可將離子光可活化的交聯劑用於形成所述層粘連蛋白塗層。某些離子光可活化的交聯劑是具有以下結構式的化合物X廣Y-X2，其中，Y是包括至少一個酸基，鹼基，或酸基或鹼基的鹽的自由基。X,和Xz分別是包括潛伏光反應性基團的自由基。例如，結構式l的化合物可以具有自由基Y，它包括磺酸或磺酸鹽基團；X,和X2可以包括光反應性基團，如芳基酮。所述化合物包括4，5-二(4-苯曱醯苯基亞曱基氧)苯-l，3-二磺酸或鹽；2，5-二(4-苯曱醯苯基亞甲基氧)苯-1，4-二磺酸或鹽；2，5-二(4-苯曱醯亞甲基氧)苯-1-磺酸或鹽；N，N-二[2-(4-苯曱醯節氧基)乙基]-2-氨基乙磺酸或鹽等。參見美國專利號6,278，018。例如，所述鹽的抗衡離子可以是銨或石鹹金屬鹽，如鈉，鉀或4裡。作為改善所述塗層的多肽成分結合的優選方式，所述多肽(包括層粘連蛋白)成分可以使用一種或多種其他塗層成分固定在所述器械表面上。所述一種或多種其他成分可以包括聚合物成分，第一活性基團，和第二活性基團。在某些實施方式中，第一活性基團可以使聚合物成分交聯形成塗層。例如，第一活性基團可以被激活，以與其他聚合物成分起反應並且與它結合，形成聚合物成分的網絡，在可植入的醫學製品的表面形成一個層。所述聚合物成分的交聯的網絡可以在第一活性基團和所述製品表面少有或沒有活性的時候形成。在某些場合下，第一活性基團是從聚合物成分上側掛的。優選的是，第一活性基團包括本文所披露的光-活性基團。另外，在可植入的醫學製品的表面上形成的聚合物成分的網絡層是通過聚合成分與本文所披露的交聯劑，如包括光反應性基團的交聯劑結合形成的。在某些場合下，所述聚合成分通過使第一活性基團，如光反應性基團與所述製品表面起反應結合在所述製品表面上。在這種情況下，所述聚合成分共價結合在所述製品表面上。第二活性基團可以結合層粘連蛋白，在某些場合下，結合其他粘著因子。第二活性基團可以分別與層粘連蛋白和粘著因子起反應。例如，第二活性基團可以是胺反應性基團，如N-氧琥珀醯亞胺(oxysuccinimide)(N0S)基團。其他胺反應性基團包括，醛，異硫氰酸鹽，溴乙醯基，氯乙醯基，石輿乙醯基，酸酐，異氰酸鹽和馬來醯亞胺基團。第二活性基團可以是從聚合物成分側掛的。優選的是，所述聚合成分包括側掛的第一活性基團和側掛的第二活性基團。具有側掛的第一和第二活性基團的聚合成分的使用，提供了獨特的加工和功能優點。例如，具有所述側掛的基團的聚合成分可以沉積在所述製品表面，並且進行處理以便激活第一活性基團形成塗層。然後，可以將層粘連蛋白沉積在所述表面上，以便與第二活性基團起反應，將層粘連蛋白有效固定在所述表面上。當層粘連蛋白和其他粘著因子的組合，如層粘連蛋白-5和膠原的組合固定在所述表面上時，這種結構是特別有利的。在沉積之前，所述多肽成分(包括層粘連蛋白)能夠以預期的比例或濃度組合，然後沉積在具有有活性的第二基團的聚合成分上。每一種多肽成分可以分別與第二活性基團起反應，將所述多肽結合在所述聚合物成分上。在這點上，加工步驟被最小化。這些措施改善了與所述塗層方法相關的效率，並且降低了成本。在一個優選方面，所述聚合物(塗層成分)包括親水性聚合物。用於形成含有層粘連蛋白的塗層的親水性聚合物可以是合成聚合物，天然聚合物，或天然聚合物的衍生物。典型的天然親水性聚合物包括羧曱基纖維素，羥曱基纖維素，所述聚合物的衍生物，以及類似的天然親水性聚合物及其衍生物。在另一個優選方面，所述聚合物是親水的和合成的。合成的親水聚合物可以用任何合適的單體製備，包括丙烯酸單體，乙烯單體，乙醚單體，或上述單體中的任何一種或多種的組合。例如，丙烯酸單體包括，甲基丙烯酸酯，甲基丙烯酸曱酯，曱基丙烯酸羥乙酯，丙烯酸鞋乙酯，曱基丙烯酸，丙烯酸，丙烯酸甘油酯，甘油甲基丙烯酸酯，丙烯醯胺，甲基丙烯醯胺，以及上述任何物質的衍生物和/或混合物。乙烯單體包括，例如，乙酸乙烯酯，乙烯吡咯烷酮，乙烯醇，和它們中任意一種的衍生物。醚單體包括，例如，環氧乙烷，環氧丙烷，環氧丁烷，和它們中間任意一個的衍生物。可以用所述單體形成的聚合物的例子包括聚(丙烯醯胺)，聚(曱基丙烯醯胺)，聚(乙烯吡咯烷酮)，聚(丙烯酸)，聚(乙二醇)，聚(乙烯醇)，和聚(HEMA)。親水共聚物的例子包括，例如，曱基乙烯基醚/馬來酸酐共聚物和乙烯吡咯烷酮/(曱基)丙烯醯胺共聚物。可以使用均聚物和/或共聚物的混合物。在典型實施方式中，所述親水性聚合物是(曱基)丙烯醯胺共聚物，如由(曱基)丙烯醯胺和(甲基)丙烯醯胺衍生物形成的共聚物。聚合物-型塗層成分的使用，在可植入的醫學製品上製備塗層時提供了獨特的加工，功能和經濟優點。例如，在形成所述塗層的方法中，作為塗層工藝的一個步驟，所述聚合物塗層成分可以沉積在所述製品表面上，並且進行處理，以便形成聚合物基層，其中，所述第一活性基團被激活，以便將所述聚合物共價結合在所述製品表面上，和/或第一活性基團將所述聚合物共價交聯在所述聚合物上，以便形成塗層。隨後的步驟可能涉及將包括一種或多種多肽成分的組合物(層粘連蛋白或層粘連蛋白和其他多肽因子的組合)沉積在所述聚合物層上，其中，所述第一和第二成分通過第二活性基團結合在所述聚合物上。在使用聚合物塗層成分製備所述塗層的過程中，發現在沉積層粘連蛋白之前用所述聚合成分形成塗層，導致了額外的加工和功能優點。在給ePTFE移植物提供塗層的過程中，實施了對ePTFE的孔進行去核的步驟，就是說從所述孔中除去氣泡的過程。一般，去核可以通過首先用醇-型溶液處理ePTFE然後轉移到主要為水的溶液，如PBS的溶液中實現。這種方法總的來說是有利的，因為它增加了移植物植入之後體液和組織成分可以接觸的表面積，導致了在ePTFE周圍和內部的較少的纖維嚢形成和增強了的血管發育(Boswell,CA.andWilliams,S.K.，etal.J.Biomater.SciPolymerEdn.，10:319-329)。不過，ePTFE可以方〗更地再加核(可以將氣泡重新導入所述多孔部分)，在隨後的加工或處理過程中置換所述水溶液。一般，ePTFE移植物的再加核能夠以所述材料外觀改變的形式出現。可以將其他技術用於確定相對去核或再加核。再加核可能降低才直入效果。發現在塗層過程中提供聚合物材料基層的步驟之後，ePTFE移植物能夠保持"穩定去核"。在穩定去核的多孔部分(如穩定去核的ePTFE移植物)，難於將氣泡重新導入所述多孔部分。就是說，水溶液不容易被小的濾氣袋置換。具有穩定去核的多孔部分的可植入的醫學製品可以提供獨特的加工和功能優點。例如，具有穩定去核的多孔部分的可植入的醫學製品可以經受處理步驟，否則會對所述製品的多孔部分再加核。在這點上，用於保持多孔製品的去核狀態的加工步驟，如特殊保存或處理步驟可能是不需要的。隨後可以用需要的組合物塗敷具有穩定去核的多孔部分的可植入的醫學製品。該組合物可以是本文所披露的任何含有層粘連蛋白的組合物。另外，可以將任何其他類型的分子塗敷在本文所披露的穩定去核的部分上。下面將結合以下非限定實施例對本發明作進一步說明。試-驗和分析^Western印跡分析在條件培養基在生物反應器系統中流動的四個時間點將層粘連蛋白-5沉積在ePTFE上，並且對之前和之後在抗體BM165(UniversityofArizona;Dr.StuartK.Williams)免疫親和柱上流過的條件培養基才羊品通過Western印跡分4斤進4於評估。收集沉積在ePTFE上的蛋白，包括輕輕攪拌ePTFE樣品，同時在37。C下將它們在500ML的LaemmliSDS樣品緩沖液和10。/。2-P-巰基乙醇中浸泡24小時。使用CentriconYM30(CentriconCentrifugalFilterDevices,MilliporeCo.,Bedford,MA),按照生產商的指南濃縮條件培養基樣品。使用MicroBCA試劑盒(Pierce,Rockford,IL)測定蛋白濃度。使用來自生物反應器修飾的20ul每一種蛋白樣品或等於20|ig條件培養基樣品的蛋白的體積進行7%十二烷基硫酸鈉聚丙烯醯胺凝膠電泳(SDS-PAGE)。然後將凝膠轉移到聚偏二氟乙烯薄膜(PVDF)上，Immobilon-P(MilliporeCorp.，Bedford,MA)。用麗春紅S對印跡進行染色，並在必要時切成獨立的條進行分析用特殊抗體檢測蛋白；(l)兔抗-膠原I多克隆抗體(C0L1.1;abeam,UK)l:7500，2)小鼠抗-膠原IV單克隆抗體(目錄並MAB1910;Chemicon，Temecula，CA)1:10,000,3)小鼠抗-纖連蛋白單克隆抗體(克隆FN-15;Sigma，St.Louis,MO)1:10，000，4)兔抗-層粘連蛋白-1多克隆(產品#L-9393;Sigma,St.Louis,MO)1:7500，5)小鼠抗-層粘連蛋白-5P3子鏈單克隆抗體(克隆17;TransductionLaboratories,Lexington,KY)1:1500，6)小鼠抗-層粘連蛋白-5y2子鏈單克隆抗體(目錄#MAB19562;Chemicon，Temecula，CA)1:5000，7)兔抗-層粘連蛋白-5a3子鏈多克隆抗體(RB—71，由BethylLaboratories,Inc.定製的抗狀序歹'JCKANDITDEVLDGLNPIQTD的抗體，最初是由Champliaudetal.鑑定的(Champliaud，M.F.etal.Humanamnioncontainsanovellamininvariant,laminin7，which1ikelaminin6，covalentlyassociateswithlaminin5topromotestableepithelial-stromalattachment.JCellBiol132，1189-1198(1996)，1:5000，並且使用SuperSignalTM底物按照生產商的說明觀察(Pierce,Rockford，IL)。使用與辣根過氧物酶綴合的兩種二級抗體，大鼠抗-小鼠IgG(克隆L0-MG1-2;Serotec，Raleigh,NC)l:5000，和山羊抗-兔IgG(產品#A9169;Sigma，St.Louis,MO)1:5000。蛋白標準物由人膠原I，膠原IV，纖連蛋白，EHS層粘連蛋白-1(都是從BectonDickinson購買的，SanJose，CA)，和純化的層粘連蛋白-5。粘著在ePTFE上的細胞製備了人類微血管內皮細胞(HMVECs)的融合單層，進行粘著研究，包括在37。C下用溶解在Dulbeccos修飾的Eagle培養基(DMEM)中的5mM乙二胺四乙酸(EDTA)處理20分鐘。將懸浮細胞收集到無血清培養基(M199)中，該培養基含有0.1。/。牛血清白蛋白(BSA),2mML-穀氨醯胺，和5mMHEPES緩沖液。按照以前糹皮露的方法以2xl05細胞/cm2的密度接種細胞，該方法由Williams,S.Ketal.進行了微小的改變(Williams,S.K.，Schneider,T.,Kapelan，B.&Jarrell,B.E.FormationofaFunctionalEndotheliumonVascularGrafts.JElectronMicroscTech19,439—451(1991))。簡單地講，將細胞加壓接種在每一個ePTFE管的腔表面上，並且讓它附著1小時，同時在37。C和5%C02下在培養箱中轉動。在該培養時間之後，收集ePTFE樣品，並且力欠入福馬林固定劑中。與ePTFE黏附的HMVEC的定量以DNA嵌入劑，雙苯醯亞胺(BBI)標記粘附細胞，它能在紫外線下發出螢光。使用落射螢光顯微鏡在10倍物鏡下使用UV濾光鏡觀察每一個樣品。隨機挑選五個視場，將圖像捕獲到基於計算機的計量形態學系統中(MetamorphImagingSystemsSoftware;UniversalImagingCorporation,WestChester,PA),並且才艮才居它計算細月包密度。掃描電子顯微術通過脫水，臨界點乾燥，和使用金目標噴射塗層製備用於掃描電子顯微術評估的樣品。評估所述樣品，並且使用JEOL820掃描電子顯微鏡(JEOLUSA，Peabody，MA)獲得光學顯微照片。植入物研究設計所有動物研究是使用得到UniversityofArizonaIACUC批准的方法，按照實驗動物看護和使用的國家衛生指導研究所的要求(#85-23Rev.1985)進行的。研究局限於小鼠的皮下組織。按照以前由Salzmann，D.Letal.披露的方法實施手術(Salzmann，D丄，Kleinert，L.B.,Berman,S.S.&Williams,S丄TheeffectsofporosityonendothelializationofePTFEimplantedinsubcutaneousandadiposetissue.J.BiomedMaterRes34,463—476(1997))。纖維包裹評估在植入物周圍形成的組織嚢的評估是用第一個系列的植入物(HCM系列)進行的。從來自每一個蘇木精和曙紅(H&E)染色的切片的聚合物的腔或非腔邊緣拍攝五張隨機圖像，使用20倍物鏡和索尼夜視鏡照相機。根據它們相對ePTFE圓片的位置(腔或非腔)以及膠囊組織類型(纖維或細胞嚢)對所述圖像進行分類。使用基於計算機的計量形態學系統(MetaniorphImagingSystemsSoftware;UniversalImagingCorporation,WestChester,PA),對每一個圖4象進4亍三次包膜厚度測量，每個樣品一共進行十五次測量(每個樣品五個圖像，每個圖像測量三次)，測量值表達為平均厚度ym土s.e.m。血管密度使用用西非單豆素-l(GS-1)(生物素化的凝集素-GS-l;1:250;VectorLaboratories,Burlingame，Ca)染色的切片評4古血管密度，在40倍水浸物鏡下觀察。統計每一個高倍視野(HPF)(HPF=54x54lam2)血管的橫截面和縱剖面數量。陽性血管的指標為1)陽性GS-l反應，2)可以識別的腔，3)位於指定的HPF區內。所述HPF是在組織-聚合物界面上沿植入物圓片的整個外部輪廓隨機挑選的，分別在組織中挑選10個場並且在ePTFE中挑選10個場。血管密度表達為每一組的平均血管數量/mm2±s.e.m。發炎炎性反應是使用用F4/80染色的切片評估的，在40倍水浸物鏡下觀察。使用54x54|^1112高倍視野，在組織-聚合物界面上，沿植入物圓片的整個外部曲線在組織中隨機挑選10個視野。統計HPF中F4/80陽性染色細胞。每一種植入物的炎性反應表達為F4/80陽性細胞平均數量/mm2±s.e.m。組織學和免疫組織化學對固定的組織樣品進4亍脫水，包埋在石蠟中，切成6pm的切片，並且加工以便進行組織學和免疫細胞化學評估。通過蘇木精和曙紅染色測定一般組織學結構。使用凝集素，GS-l鑑定脈管結構。通過免疫細胞化學評估所述樣品中激活的巨噬細胞的存在，使用抗F4/80160kD糖蛋白抗原的抗體(生物素-單克隆抗體，1:100Serotec,Inc.,Raleigh,NC)。將過氧化物酶綴合的抗生蛋白鏈菌素試劑盒(DakoInc.,Carpinteria，Ca)用於檢測與兩次評估的結合，並且讓樣品與3，3'二氨基聯苯胺(DAB)底物起反應以便觀察。在免疫細胞化學技術之後將曱基綠染色用於確定背景核。實施例1體外細胞培養將HaCaT和II-4細胞系(Dr.NorbertFusenig(GermanCancerResearchCenter)維持在培養基中(Dulbecco's修飾的Eagle's培養基，具有高葡萄糖，10%牛胎兒血清，2mML-穀氨醯胺，和5mMHEPES緩沖液)。用pH7.4的無雙-陽離子磷酸緩衝的鹽水(DCF-PBS)漂洗融合度為70%的細胞，並且放入無血清培養基中培養48小時，然後收集條件培養基。收集到的條件培養基以750g的速度離心5分鐘，以便除去碎片，然後實施塗敷方法。人類樣吏血管內皮細胞(HMVEC)是從Williams等以前披露的人類吸脂中分離的(Williams，S.K.，Wang，T.F.，CastriUo，R.&Jarrell，B.E.Liposuction-derivedhumanfatusedforvasculargraftsoddingcontainsendothelialcellsandnotmesothelialcellsasthemajorcelltype.JVaseSurg19，916-923(1994))。將細胞維持在培養基中(培養基199,10%牛胎兒血清，60pg/ml粗製內皮細胞生長因子(ECGS)，2mML-穀氨醯胺，和5mMHEPES緩沖液)並且在第2代和第5代之間使用。從條件培養基中純化/除去層粘連蛋白-5層粘連蛋白-5純化是按照Champliaud等的方法進行的(Champliaud，M.F.etal.Humanamnioncontainsanovellamininvariant,laminin7,which1ikelaminin6，covalentlyassociateswithlaminin5topromotestableepithelial—stromalattachment.JCellBiol132，1189-1198(1996)),進行了微小的改動。簡單地講，與該方法的差異包括層粘連蛋白-5的來源；層粘連蛋白-5是從HaCaT細胞的細胞培養上清液中獲得的，而不是從人羊膜中獲得。另外，使用了免疫親和層析，使用與靶定層粘連蛋白-5的a3鏈的單克隆抗-層粘連蛋白抗體，BM165絡合的Sepharose柱。從條件培養基中除去層粘連蛋白-5(以便製備HaCaT條件培養基-Ln5)是在粘著實-驗的同一天進行的。Sepharose珠與單克隆抗-層粘連蛋白a3鏈抗體，BM165絡合，使用300^1綴合的珠製備柱。讓條件培養基一共通過所述柱兩次。在兩次通過之間使用1M乙酸，並且用Dulbecc(/s不含陽離子的磷酸鹽緩衝鹽水(DCF-PBS)漂洗，以便除去酸來再生所述珠。收集過柱前和過柱後樣品，以便進行western印跡分析，並且證實除去了層粘連蛋白-5。表面修飾在用條件培養基製備ePTFE的修飾時(4腿直徑的管狀植入材料，IMPRA，Inc.,Tempe，AZ),使用連續的乙醇浸泡除去材料間隙的空氣，開始使用100%的乙醇，然後以10%的增量逐漸降低直到進入去離子水，時間間隔為20分鐘。該過程被稱作去核，並且導致了空氣的排出和具有較小表面張力的移植物的產生。在去核之後，將ePTFE》文入DCF-PBS中1小時，然後進行生物反應器過程。對於所述塗層過程來說，將具有遠端帶帽的管狀ePTFE放入生物反應器中，參見美國臨時申請US60/655，576，申請日為2/23/2005。通過管狀ePTFE以15ml/min的速度泵送大約55ml的HaCaT條件培養基(HCM)，泵送時間為1，3,6,或12小時。將1小時流動方案用於HCM和HCM減去層粘連蛋白-5組(HCM-Ln5)。還評估了DCF-PBS和純化的層粘連蛋白-5修飾。在去核之後，將DCF-PBS組浸泡在DCF-PBS中過夜，並且對純的層粘連蛋白-5組(1|ig/cm2)進行塗敷，保持在4。C的DCF-PBS/層粘連蛋白-5溶液中過夜，然後進行細胞附著研究。另外，用EDTA處理樣品，以^使確定將層粘連蛋白-5沉積在ePTFE上的過程中是否需要鉤。將樣品放入4mMEDTA浴中，後修飾24小時，進行柔和攪拌，然後收集蛋白。Western印跡分析在圖1(a)中，層粘連蛋白-5的03鏈是在HCM流動後從ePTFE中收集到的蛋白中鑑定的，證實了層粘連蛋白-5沉積在ePTFE表面上。通過流動時間(l，3,6，或12小時)對泳道進行分類。在圖1(b)中，在通過HCM沉積到ePTFE上的蛋白中鑑定到了多種細胞外基質蛋白。蛋白標準物由膠原I(CI),膠原IV(CIV)，纖連蛋白(FN),層粘連蛋白1(Lnl)和HaCaT細胞裂解液(Ln5)組成。FN，Lnl，和Ln5(P3鏈)出現在HCM沉積的蛋白中。在圖1(c)中，層粘連蛋白-5被成功地從HCM中去掉。層粘連蛋白-5的三條鏈a3，P3,和y2中的每一個都鑑定到了。剩餘了最低數量的cc3和P3鏈，而y2被完全去掉。粘著在ePTFE上的細胞製備人微血管內皮細胞(固VECs)的融合單層，用於粘著研究，包括用溶解在DMEM中的5mMEDTA在37。C下處理20分鐘。將懸浮細胞收集到無血清培養基(M199)中，該培養基包括0.1%BSA，2mML-穀氨醯胺，和5mMHEPES緩衝液。按照以前7>開的方法以2x105細胞/cii^的密度接種所述細胞，由Williams，S.K等進行了微小的改進(Williams,S丄，Schneider,T.,Kapelan,B.&Jarrell,B.E.FormationofaFunctionalEndotheliumonvasculargrafts.JElectronMicroscTech19，439—451(1991))。簡單地講，將細胞加壓接種到每一個ePTFE管的腔表面上，並且讓它粘著l小時，同時在37°(:和5°/0)2下在培養箱中旋轉。在該培養時間之後，收集ePTFE樣品，並且放入福馬林固定劑中。粘著在ePTFE上的HMVEC的定量圖2a所示出的柱狀圖表示粘著在修飾的ePTFE上的HMVEC的定量結果。圖中的數值表示為每個HPF的平均細胞數量。HCM和純的層粘連蛋白-5修飾導致了相對非-修飾的ePTFE的粘著增強。圖2b-2f是用人微血管內皮細胞(HMVEC)接種的ePTFE管的腔表面的掃描電子顯微照片。EPTFE修飾包括非-修飾的HaCaT條件培養基(HCM)，HCM減去層粘連蛋白-5，純的層粘連蛋白-5,和DCF-PBS修飾的ePTFE。線條等於100!jm。HMVEC在DCF-PBS和非—務飾的樣品上呈圓形，而在條件培養基和層粘連蛋白-5修飾的表面上鋪展。掃描電子顯微照片從視覺上體現了圖2a中的柱狀圖所示出的結果。掃描電子顯微術在圖3a所示出的柱狀圖中，示出了與植入小鼠皮下組織的修飾的和非-修飾的ePTFE相關的血管生成和新血管反應的定量結果。數值表示為每mm2的平均血管數量。HCM-Ln5,和DCF-PBS組表現出血管發生評估的活性，證實了HCM組的新血管形成。圖3b-3f是與來自小鼠皮下組織的ePTFE植入物的橫截面相關的GS-1陽性血管的光學顯微照片，所述移植物是未修飾過的或用HCM,層粘連蛋白-5耗盡的HCM,純的層粘連蛋白-5，或DCS-PBS塗敷過的，並且相應於圖3所示結果。才直入物研究設計對每一種方法來說，在手術之前通過腹膜內注射400mg/kg阿佛丁對動物進行麻醉。將ePTFE圓片(用4mm活組織^r查打孔器打出的4mm直徑的管狀植入材料製備的打孔圓片)植入右側和左側後臀部皮下組織，按隨機順序植入，每隻動物總共植入兩個樣品(11=4/組)。在植入五周之後取出樣品，並且放入HistochoiceTM固定劑中(Amresco，Solon，0H)。樣品由HaCaT條件培養基(HCM)修飾的ePTFE，HCM減去層粘連蛋白-5,層粘連蛋白-5，DCF-PBS或去核的，和非-修飾的ePTFE組成，它們以隨機的順序植入，每隻動物總共植入四個樣品(11=4/組)。在修飾之後，皮下植入ePTFE圓片，一共植入十五隻雄性129-SVJ小鼠體內。纖維包裹評估在植入物周圍形成的組織嚢的評估是對第一個系列的植入物(HCM系列)進行的。在來自每一個H&E染色的切片的聚合物的腔或非腔邊緣拍攝五張隨機的圖像，使用20倍物鏡和索尼夜視鏡照相機。使用基於計算機的計量形態學系統，根據它們相對ePTFE圓片的位置(腔或非腔)以及嚢組織類型(纖維或細胞嚢)對這些圖像進行分類。層粘連蛋白5產生了可測量的非腔，腔和細胞效應。表1tableseeoriginaldocumentpage41炎性反應圖4是F4/80陽性細胞(激活的巨噬細胞和單核細胞)與修飾的和非-修飾的ePTFE相關的炎性反應的圖。F4/80陽性細胞與植入小鼠皮下組織的ePTFE相關。有關數值表示為每平方毫米的平均細胞數量。沒有觀察到在修飾的層粘連蛋白-5的存在和炎性細胞反應程度方面之間的方式。組織學和免疫組織化學圖5a-5b是蘇木精和曙紅染色的包括來自小鼠皮下組織的ePTFE植入物的組織橫截面的光學顯微照片，所述移植物是未修飾過的或用HCM，層粘連蛋白-5耗盡的HCM，純的層粘連蛋白-5,或DCS-PBS塗敷過的。線條等於25jam。可以觀察到與HCM修飾的樣品相關的增強了的細胞反應，其中，層粘連蛋白-5修飾的樣品具有在它周圍形成的薄的，相對無細胞的嚢。實施例2二元蛋白塗層方法將含有胺-活性和光-活性基團的雜合雙功能聚丙烯醯胺試劑(HBPR,按照US5，858,653的實施例9披露的方法製備)用於細胞外基質蛋白固定在ePTFE血管移植物上(4mm直線，CR.Bard,ImpraCorporation,Tempe，AZ)。基質蛋白是從以下來源獲得的牛膠原-1(KenseyNash)，人膠原-IV(BDBiosciences)，人纖連蛋白(BDBiosciences),小鼠層粘連蛋白-I(BDBiosciences),和人層粘連蛋白-V(UniversityofArizona)。在移植物和試劑的所有操作期間使用了無菌技術。將植入物切成3.2cm長度。用外科縫合線將luer內螺紋管接頭配件(SmallParts,Inc.)固定在移植物的每一端。通過在異丙醇(ipa)中浸泡20分鐘對移植物進行去核(從移植物的間隙中除去滯留的空氣)，然後將移植物放入脫氣的Dulbecco's無陽離子磷酸鹽緩衝鹽水(DCF-PBS)，pH7.4中。將移植物從DCF-PBS中取出，使多餘的PBS滴完，並且將所述移植物放入HBPR溶液(10mg/ml,溶解在50%IPA/水)中。30分鐘之後，將移植物從HBPR溶液中取出，乾燥(大約1.5小時)，並且用水銀弧光地燈(在320_340nm波長下發光強烈)照射3分鐘。再次按以前披露的方法對移植物進行去核。將來自含有兩種不同蛋白的單一溶液的基質蛋白塗在移植物上，所述蛋白溶解在0.1M碳酸鹽/碳酸氫鹽(CBC)緩沖液，pH9.0(參見表l)中。對移植物的遠端進行封堵，並且使用注射器和4_通道凸模滑動活塞(Cole-Parmer)迫使12ml蛋白溶液通過所述移植物。讓HBPR-修飾的移植物與所述蛋白在4。C下反應過夜。然後用DCF-PBS簡單地漂洗所述移植物，並且評估蛋白含量和生物活性(體外細胞粘著)。tableseeoriginaldocumentpage43免疫螢光染色方法為了證實所述蛋白在塗層中的存在，採用了免疫螢光染色方法。使用了以下抗體兔抗-膠原-1(Rockland,Inc.)，小鼠抗-人膠原-IV(Chemicon)，兔抗-小鼠層粘連蛋白-1(Sigma),小鼠抗-人層粘連蛋白-V(TransductionLaboratories),兔抗-人纖連蛋白(Sigma)，山羊抗-兔TexasRed(Rockland,Inc.)，抗-小鼠AlexaFluor350(MolecularProbes),和山羊抗-小鼠Cy3(JacksonLaboratories)。切割移植物樣品，並且放入12x75mm塑料試管。然後用溶解在tris-緩衝鹽水(TBS)中的2ml1.5%(w/v)BSA封閉樣品，所述緩衝液含有0.05%Tween-20，封閉是在定軌搖床上在室溫下進行20分鐘。然後，樣品與Q.4ml—級抗體在DCF-PBS中，在室溫下，在定軌搖床上培養l小時。然後，所有移植物用2mlDCF-PBS洗滌3次，每次15分鐘，同時在定軌搖床上搖晃。樣品與0.4ml二級抗體(螢光綴合物)在DCF-PBS中，在室溫下在定軌搖床上培養1小時。然後再次按上述方法用DCF-PBS洗滌樣品。用螢光顯微鏡，使用20倍物鏡對有腔移植物進行成像。所有數字圖像參數(對比度，亮度等)都相對HBPR對照統一化。免疫螢光染色結果用HBPR試劑進行免疫螢光染色，證實了膠原-1和層粘連蛋白-1是在塗敷到移植物上的二元蛋白檢測到的。在其他染色試驗中，檢測了膠原-i和層粘連蛋白-v。觀察到了其他二元蛋白塗層的類似結果(表3)。表3tableseeoriginaldocumentpage44細胞粘著分析試驗了移植物的急性細胞粘著，以便評估每一種蛋白塗層的生物活性。分離牛大動脈內皮細胞(BAECs)並且以lxlO6細胞/ml的密度重新懸浮在培養基中(IO代或以下)。將活塞連接在試驗移植物的近端，使遠端開放。用注射器將O.75ml的充分混合的細胞懸浮液立即輸入所述活塞，直到在遠端看見有效的液體彎月面。封閉所述活塞，並且在所述遠端加蓋。然後將移植物放入培養箱在"。C和5%C02中培養30分鐘。將移植物從培養箱中取出，並且將luer配件從所述近端和遠端切除。用剪刀進行縱向切割，以便打開所述移植物。用鑷子固定移植物末端，在DCF-PBS中洗滌所述移植物大約5秒。移植物在4'C下，在用去離子水配製的8%多聚曱醛固定過夜。然後用V，6-聯脒-2-苯基p引咮(DAPI，Sigma-Aldrich，Milwaukee,WI)對移植物進行染色，並且用焚光顯微鏡獲取圖像。用20倍物鏡獲得每一個移植物的八個視野。確定細胞數量並且加以平均。細胞粘著結果與僅有HBPR相比(圖6)，五種二元蛋白塗層中的四種將細胞粘著增強了5-11倍。HBPRLMI/FN不能增強細胞粘著(圖7)。實施例3大鼠植入物體內研究評估了與用試劑和蛋白塗層塗敷的ePTFE圓片相關的傷口癒合和炎症。epTFE圓片(直徑4mm,(4mm直線，CR.Bard，ImpraCorporation,Tempe，AZ.A光反應性共聚物(HBPR)是按照US5，858，653的實施例9所述方法製備的。評估了以下樣品未塗敷的ePTFE，HBPR本身，HBPR膠原-1,HBPR層粘連蛋白-I，HBPR層粘連蛋白-V,HBPR膠原-I/層粘連蛋白-1,和HBPR膠原-I/層粘連蛋白-V,光膠原I和光層粘連蛋白1。所述層粘連蛋白和膠原樣品是從實施例2所述來源獲得的。光膠原1和光層粘連蛋白1是通過US5，744，515的實施例1所述方法製備的。所不同的是膠原1或層粘連蛋白l是取代過的，是為了本實施例而專門製備的。HBPR和蛋白樣品的塗敷方法如實施例2所述，所不同的是膠原I/層粘連蛋白V的例子是以10/5.0jig/ml的濃度製備的。在4周結束時，對動物進行麻醉，並且切除所述圓片，並且》文入Histochoice固定劑。在收穫材料之後用大劑量(100mg/kg)的戊巴比妥對動物實施安樂死。對圓片進行切片，放在載玻片上，並且用H&E染色，並且用GS-1進行免疫組織化學染色。對ePTFE圓片進行外殖和加工用於組織學分析。分析ePTFE移植物材料的每一個圓片的移植物周圍血管發生和新血管形成。能最有效地支持多孔材料(在這裡它是ePTFE)的新血管形成的處理是HBPR膠原-I/層粘連蛋白-I-V和光層粘連蛋白1。光膠原1和HBPR膠原-I能支持表面血管發生，但是不支持充分的新血管形成。未塗敷的ePTFE表現出最低血管發生和最低新血管形成。HBPR層粘連蛋白-V表現出的新血管形成超過了對照，但是小於光層粘連蛋白1。實施例4評估了HBPR/蛋白-修飾的(HBPRC0LI/LM5等)冠狀支架(3x8mm)在紐西蘭白兔的髂動脈中的癒合反應。將所述支架巻曲在氣嚢導管(3xl5mra)上，並且用環氧乙烷消毒。然後將所述支架，在一個髂動脈中的試驗支架和在相對的動脈中的棵金屬支架對照展開在紐西蘭白兔體內。所述支架是在7，28和90天移出的，並且通過光學和掃描電子顯微術評估。將移出的支架縱向切成1/2長度，並且進行處理以便進行組織學分析。在支架的一半上進行常規組織病理學檢查，使用到支架/血管界面的近端和遠端血管的石蠟切片以及來自中間支架/血管部位的塑料包埋的切片。進行合適的蘇木精和曙紅(H&E)，Masson's三色和彈性VanGieson或等同物的染色。特別強調內皮化，新內膜厚度，炎症，腔狹窄百分比，內膜纖維蛋白含量。為了證實內皮化和血栓形成程度，每一個支架的其餘1/2進行處理，以便進行掃描電子顯微術分析。權利要求1.導致與可植入的醫學製品的表面塗層相關的血管形成的方法，包括以下步驟·將所述醫學製品植入到對象體內，所述塗層包括層粘連蛋白-5、它的活性部分或它的結合成分；和·將所述醫學製品保持在對象體內，保持時間足以導致與塗敷表面相關的血管形成。2.如權利要求1的方法，其中，所述植入步驟包括將所述醫學製品輸送到對象的血管內位置。3.如權利要求1的方法，其中，所述維持步驟導致了在可植入的醫學製品上形成了厚度小於100mm的無細胞纖維嚢。4.如權利要求1的方法，其中，所述維持步驟導致了在所迷可植入的醫學製品上形成厚度小於75mm的無細胞纖維嚢。5.導致與可植入的醫學製品的表面塗層相關的血管形成的方法，包括以下步驟.將所述醫學製品植入到對象體內，所述塗層包括〇層粘連蛋白、它的活性部分或它的結合成分，和〇膠原、它的活性部分或它的結合成分，將所述醫學製品保持在對象體內，保持時間足以導致與塗敷表面相關的血管形成.6.具有塗層的可植入的醫學製品，包括-第一成分，包括層粘連蛋白、它的活性部分或它的結合成分，和第二成分，包括粘著因子、它的活性部分或它的結合成分，其中，所述塗層還包括聚合物成分，起反應以形成包括所述聚合物成分的層的第一基團，起反應以將第一和第二成分結合在聚合物成分上的第二基團。7.如權利要求6的可植入的醫學製品，其中，所述第一成分包括分子量小於500kDa的層粘連蛋白。8.如權利要求6的可植入的醫學製品，其中，所述第一成分包括層粘連蛋白-5。9.如權利要求6的可植入的醫學製品，其中，所述第一成分包括層粘連蛋白-5的oc3鏈。10.如權利要求6的可植入的醫學製品，其中，所述第一成分包括層粘連蛋白-5的a3鏈的LG3序列。11.如權利要求6的可植入的醫學製品，其中，所述第一成分包括選自下列一組的層粘連蛋白多肽序列PPFLMLLKGSTR，LAIKNDNLVYVY，DVISLYNFKHIY，TLFLAHGRLVFM,LVFMFNVGHKKL和NSFMALYLSKGR。12.如權利要求6的可植入的醫學製品，其中，所述第一成分包括蛋白酶-修飾的層粘連蛋白-5。13.如權利要求12的可植入的醫學製品，其中，所述第一成分包括金屬蛋白酶-修飾的層粘連蛋白-5。14.如權利要求6的可植入的醫學製品，其中，所述第一成分包括層粘連蛋白-l。15.如權利要求6的可植入的醫學製品，其中，所述第二成分包括膠原、它的活性部分或它的結合成分。16.如權利要求15的可植入的醫學製品，其中，所述第二成分包括膠原I、它的活性部分或它的結合成分。17.如權利要求6的可植入的醫學製品，包括多孔部分。18.如權利要求17的可植入的醫學製品，其中，所述多孔部分與移植物，鞘或護套結合。19.如權利要求17的可植入的醫學製品，其中，所述多孔部分包括合成疏水性聚合材料。20.如權利要求19的可植入的醫學製品，其中，所述多孔部分包括ePTFE。21.如權利要求6的可植入的醫學製品，其中，所述聚合成分包括合成聚合物。22.如權利要求21的可植入的醫學製品，其中，所述合成聚合物是丙烯醯胺聚合物。23.如權利要求6的可植入的醫學製品，其中，所述第一基團包括光反應性基團。24.如權利要求6的可植入的醫學製品，其中，所述第二基團包括胺反應性基團。25.可植入的醫學製品，包括穩定去核的多孔部分。26.如權利要求25的可植入的醫學製品，其中，所述多孔部分包括包含合成聚合物的塗層。27.如權利要求26的可植入的醫學製品，其中，所述合成聚合物包括側掛光反應性基團。28.製備包括穩定去核的多孔部分的可植入的醫學製品的方法，包括以下步驟使所述多孔部分去核；和.在所述多孔部分的表面上形成塗層，所述塗層包括合成聚合物。全文摘要披露了用於可植入的醫學製品的表面的含有層粘連蛋白的塗層。所述塗層能促進與塗敷表面相關的血管形成，並具有最低纖維化的反應。文檔編號A61L27/22GK101160144SQ200680012444公開日2008年4月9日申請日期2006年2月23日優先權日2005年2月23日發明者D·E·巴布科克,D·L·克拉珀,J·A·欽恩,S·K·威廉士申請人:蘇爾莫迪克斯公司