作為用於治療增殖病症的蛋白激酶PLK1抑制劑的4,5-二氫-[1,2,4]三唑並[4,3-f]蝶啶的製作方法

2023-05-15 09:10:21 3

專利名稱：作為用於治療增殖病症的蛋白激酶PLK1抑制劑的4,5-二氫-[1,2,4]三唑並[4,3-f]蝶啶的製作方法
技術領域：
本發明涉及可用作蛋白激酶抑制劑的化合物。本發明還提 供含本發明化合物的藥學上可接受的組合物，和用這些組合物治療各 種病症的方法。本發明還提供製備本發明化合物的方法。
背景技術：
近年來，對與疾病有關的酶和其它生物分子的結構更確切 的了解對尋找新的治療藥物有很大幫助。作為本發明研究對象的 一類 重要的酶是蛋白激酶。多種蛋白激酶組成結構相關的酶的大家族，這些酶的作用 是控制細胞中多種信號轉導處理(參見Hardie, G and Hanks, S. The Protein Kinase Facts Book, I and II, Academic Press, San Diego, CA: 1995)。據認為，由於它們的結構保守性和催化功能，蛋白激酶由共同 祖基因進化產生。幾乎所有激酶含相似的250-300胺基酸催化域。可 按照它們進行磷酸化的相應底物(例如蛋白-酪氨酸、蛋白-絲氨酸/蘇氨 酸、脂質等)將激酶分為多個家族。已鑑定出通常響應這些激酶家族中 各激酶的序列基元(參見例如Hanks， S.K., Hunter, T., FASEB J. 1995， 9 576-596; Knighton et al.， Science 1991, 253， 407-414; Hiles et al, Cell 1992， 70， 419-429; Kunz et al， Cell 1993, 73, 585-596; Garcia畫Bustos et al, EMBO J 1994， 13, 2352-2361)。 —般而言，通過將三磷酸核苷的磷醯基轉運到涉及信號途 徑的蛋白受體上，蛋白激酶介導細胞內信號。這些磷酸化事件起分子 開/關轉換的作用，分子開/關轉換可調節或調控靶蛋白生物功能。這 些磷酸化事件最終被觸發，以響應多種細胞外和其它刺激。此類刺激 的實例包括環境和化學應激信號(例如休克、熱休克、紫外線輻照、細 菌內毒素和H202)、細胞因子(例如白介素-l (IL-l)和腫瘤壞死因子-oc(TNF-a)，和生長因子(例如粒細胞巨噬細胞-集落刺激因子(GM-CSF) 和成纖維細胞生長因子(FGF))。細胞外刺激可影響一種或多種細胞反 應，這些反應與細胞生長、遷移、分化、激素分泌、轉錄因子激活、 肌肉收縮、葡萄糖代謝、蛋白合成控制、細胞周期的保留和調節有關。許多疾病與由上述蛋白激酶-介導的事件引發的異常細胞 反應有關。這些疾病包括但不限於癌症、自身免疫性疾病、炎性疾病、 骨病、代謝疾病、神經和神經變性疾病、心血管疾病、過lt和哮喘、 早老性痴呆和激素相關疾病。因此，已在藥物化學中付出了大量努力， 以尋找作為有效治療藥物的蛋白激酶抑制劑。馬球樣(Polo-like)激酶(Plk)屬於絲氨酸/蘇氨酸激酶家族， 這些激酶在從酵母到人的不同種之間高度保守(在Lowery DM et al., Oncogene 2005， 24;248-259中的綜述)。Plk激酶在細胞周期中具有多 種作用，這些作用包括控制進入有絲分裂和通過有絲分裂遞進。 Plkl是Plk家族成員中被最充分表徵的一員。Plkl在有絲 分裂指數高的組織中廣泛表達，且最豐富。在有絲分裂中，Plkl的蛋 白水平升高並達到峰值(Hamanaka， R et al., J Biol Chem 1995, 270， 21086-21091)。據才艮道，Plkl的底物是已知調節進入有絲分裂和通過 有絲分裂遞進的所有分子，它們包括CDC25C、細胞周期蛋白B、p53、 APC、 BRCA2和蛋白酶體。在多種類型的癌症中，Plkl上調，表達 水平與疾病的嚴重程度相關(Macmillan, JC et al., Ann Surg Oncol 2001: 8, 729-740)。 Plkl是致癌基因，可轉化NIH-3T3細胞(Smith, MR et al., Biochem Biophys Res Commun 1997， 234, 397-405)。通過siRNA、反義、 顯微注射抗體去除或抑制Plkl或將Plkl的顯性負構件轉染到細胞中， 可減少體外腫瘤細胞增殖和生存力(Guan， R et al,, Cancer Res 2005, 65 2698-2704; Liu, X et al.， Proc Natl Acad Sci U S A 2003， 100， 5789-5794 Fan, Y et al" World J Gastroenterol 2005, 11, 4596-4599; Lane， HA et al. J Cell Biol 1996， 135， 1701-1713)。去除Plkl的肺瘤細月包激活紡4垂體關 卡，且在紡錘體形成、染色體排列和分離以及胞質分裂中造成缺陷。 據報導，生存力喪失是誘導凋亡的結果。相反，據報導，正常細胞在 去除Plkl後仍保持生存力。通過siRNA體內剔除Plkl或使用顯性負 構件，導致異種移植模型中腫瘤生長抑制或退化。
Plk2主要在細胞周期的Gl期表達，定位在分裂間期細胞 中的中心體。剔除Plk2的小鼠發育正常，可生育且存活率正常，但比 野生型小鼠小約20% 。剔除Plk2的動物細胞在整個細胞周期比正常小 鼠的細胞發育慢(Ma， S et al.， Mol Cell Biol 2003， 23， 6936-6943)。通過 siRNA去除Plk2或將激酶鈍化突變體轉染到細胞可阻斷中心粒複製。 部分通過抑制p53響應，Plk2下調也使腫瘤細胞對紫杉醇增敏，且促 進有絲分裂突變(Burns TF et al.， Mol Cell Biol 2003, 23， 5556-5571)。 Plk3在整個細胞周期中均表達，並從Gl增加至有絲分裂。 在高度增殖的卯巢肺瘤和乳腺癌中表達被上調，它與預後惡化有關 (Weichert, W et al., Br J Cancer 2004， 90， 815-821; Weichert， W et al.， Virchows Arch 2005, 446， 442-450)。除調節有絲分裂外，據信，Plk3 還涉及細胞周期中高爾基體斷裂和DNA-損傷響應。據報導，通過顯 性負表達抑制Plk3可促進DNA損傷後p53非依賴型凋亡，和抑制胂 瘤細胞的集落形成(Li, Z et al.， J Biol Chem 2005, 280, 16843-16850。 Plk4的結構與其它Plk家族成員更不相同。去除該激酶可 造成癌細胞凋亡(Li， J et al., Neoplasia 2005， 7, 312-323)。剔除Plk4的 小鼠在E7.5停滯，進行有絲分裂的細胞比例高，且部分染色體分離 (Hudson, JW et al" Current Biology 2001, 11, 441-446)。蛋白激酶家族的分子涉及腫瘤細胞生長、增殖和存活。因 此，非常需要開發可用作蛋白激酶抑制劑的化合物。有關Plk激酶是 細胞分裂要素的證據很可信。阻斷細胞周期是已認可的抑制腫瘤細胞 增殖和存活的臨床方法。因此，需要開發可用作Plk家族蛋白激酶(例 如Plk 1 、 Plk2 、 Plk3和Plk4)的抑制劑，此類抑制劑可抑制腫瘤細胞 的增殖和減少腫瘤細胞的成活力，尤其是對開發新的癌症的治療藥物 存在非常強烈的醫學需要。
發明概述本發明涉及式I的化合物
N-R
、
N
、
14其中
環A是5元雜芳基環，其中所述環任選地被以下基團取代CV6 卣代烷基、囟素、N02、 -OH、 -CN或任選被取代的Cw烷基；
X'是鍵、-O畫、-NR8-、 -S-、 -8(0)-或-8(0)2畫；
W是H、 Cwo脂族(基團)、Cwo環脂族(基團)、Q-k)芳基、5-10 元雜芳基或3-10元雜環基，其中所述R1任選地被0-5個J1取代；
每一個R"和R 獨立地是H、Cwo脂族(基團)或Cwo環脂族(基團)， 其中每一個R2和RM壬選地並且獨立地分別被0-5個f和js取代，或
者
W和R3，與它們所連接的碳原子一起，形成3-8元飽和或部分不 飽和的含0-4個獨立地選自O、 N和S的雜原子的單環，其中所述由 R 和113形成的單環任選地被0-4個J"取代；
R4是H、 -C(O)R、畫C(O)OR、 -C(O)NRR'、 Cwo脂族(基團)、C3-10
環脂族(基團)、C6.,。芳基、C5.k)雜芳基、3-10元雜環基、(d.6脂族HCwo 環脂族(基團))、(d-6脂族)-(C6.k)芳基)或(d.6脂族H5-10元雜芳基)，
其中所述R"任選地被0-5個J"取代；
R8是H、 d-6脂族(基團)、C3-s環脂族(基團)、-C(O)R、畫C(O)OR 或-C(O)NRR';
每一個jM蟲立地是Cw卣代烷基、卣素、N02、 CN、 Q或-Z-Q, 或者結合在一起的兩個^可能任選地形成=0;
每一個Z獨立地是CL6脂族(基團)，其中所述CL6脂族(基團)中的
0-3個-CH2-單元任選地被替換為-NR-、 -O-、 -S-、 -C(O)-、 -C(=NR)-、 -C(=NOR)-、 -8(0)-或-8(0)2-,其中所述CL6脂族(基團)中的任何未被 替換的-CH2-單元任選地被0-2個jz取代；
每一個Q獨立地是H、 C^脂族(基團)、3-8-元芳族或非芳族的具 有0-3個獨立地選自O、 N和S的雜原子的單環或8-12元芳族或非芳 族的具有0-5個獨立地選自0、 N和S的雜原子的雙環體系，其中每 一個Q任選地被0-5個JQ取代；
每 一 個J2和J3獨立地是C, -6脂族(基團)、C3_6環脂族(基團)或-(C! -4 烷基VV1,其中
n是0或1，
每一個V1獨立地是卣代(d—4脂族(基團))、-O(卣代Cm脂族(基團))、卣素、N02、 CN、 OH、 OR"SH、 SR"、 NH2、 NHR"、 N(R")2、 COH、 COR"、 C02H、 C02R"、 CONH2、 CO麗R"、 CONR"2、 OCOR"、 OCONH2、 OCONHR"、 OCON(R")2、 NHCOR"、 NR"COR"、 NHC02R"、 NR"C02R" 、 NHC02H 、 NR"C02H 、 NHCONH2 、 NHCONHR"、 NHCON(R")2、 S02NH2、 S02NHR"、 S02N(R")2、 NHS02R"、 NR"S02R", 或者
V'是選自(:3.6環脂族(基團)、苯基、5-6元雜芳基或3-6元雜環基 的環狀基團，其中所述環狀基團任選地被0-3個jv取代；
每一個R"獨立地是未被取代的C!-4脂族(基團)，或者鍵合至相同
原子的相同的2和J3中的兩個， 一起可能任選地形成=0;
每一個f和jV獨立地是卣素、d-6脂族(基團)、C3-6環脂族(基團)、
N02、 CN、 OH、 NH2、 NH(Cm脂族(基団))、N(d-4脂族(基團》2、 -O(Cm 脂族(基團))、-C02H、《02((:1-4脂族(基團))、-O(滷代d-4脂族(基團)) 或卣代(d-4脂族(基團))；
每一個JQ、"和J"獨立地是-M或-Y-M;
每一個Y獨立地是未被取代的CL6脂族(基團)，其中所述Q-6脂
族(基團)中的0-3個-CH2-單元任選地被替換為-NR-、 -O-、 -S-、 -C(O)-、 隱S(0)-或-S(0)2畫；
每一個M獨立地是H、 d—6脂族(基團)、<:3.6環脂族(基團)、卣代
(d—4脂族(基團》、0(滷代d—4脂族(基團))、3-6元雜環基、卣素、N02、 CN、 OH、 OR'、 SH、 SR'、麗2、麗R'、 N(R')2、 COH、 COR'、 C02H、 C02R'、 CONH2、 CONHR'、 CONR'2、 OCOR'、 OCONH2、 OCONHR'、 OCON(R')2、麗COR'、 NR'COR'、 NHC02R'、 NR'C02R'、 NHC02H、 NR'C02H、 NHCONH2、 NHCONHR'、 NHCON(R')2、 S02NH2、 S02NHR'、 S02N(R')2、 NHS02R'或NR'S02R，；
每一個R獨立地是H或未被取代的d.6脂族(基團)；和 每一個R'是未被取代的Cw脂族(基團)，或者兩個R'基團，與它 們鍵接的原子一起，形成未被取代的3-8元飽和或部分不飽和的具有 0-l個獨立地選自O、 N和S的雜原子的單環。本發明化合物及其藥學上可接受的組合物是有效的蛋白 激酶抑制劑。在某些實施方案中，這些化合物是有效的PLK蛋白激酶抑制劑；在某些實施方案中，是PLK1蛋白激酶抑制劑。這些化合物 或其藥學上可接受的鹽具有本文中定義的式I。這些化合物及其藥學上可接受的組合物可用於治療或預 防多種疾病、障礙或病症，它們包括但不限於自身免疫性、炎性、增 殖或過度增殖疾病、神經變性疾病或免疫介導的疾病。由本發明提供 的化合物也可用於在生物學和病理學現象中的激酶研究；由此類激酶 介導的細胞內信號轉導途徑的研究和新的激酶抑制劑的對比評價。本發明化合物包括本文中所述的那些化合物，通過本文中 公開的類、亞類和具體化合物進一步說明(參見例如實施方案1-22)。 除另有說明外，採用本文中使用的以下定義。對於本發明的目的，按 照、Periodic Table of the Elements, CAS version, Handbook of Chemistry and Physics，第75版鑑定化學元素。另外，有關有機化學的一般性原 貝寸參見"Organic Chemistry", Thomas Sorrell, University Science Books, Sausalito: 1999和"March's Advanced Organic Chemistry",第5版,Ed.: Smith, M.B. and March, J.， John Wiley & Sons, New York: 2001所述， 這些文獻的全部內容通過引用結合到本文中。本文中所述原子的特定數目範圍包括其中任何整數。例 如，具有1-4個原子的組可具有1、 2、 3或4個原子。本文中所述本發明化合物可任選^皮一個或多個取代基取 代，例如以上一般性所述或通過本發明特定類、亞類和具體化合物舉 例說明的那些。應認識到，短語"任選取代的"與短語"取代的或未被取 代的"可互換使用。 一般而言，術語"取代"無論位於術語"任選"之前或 之後，均指在給定結構中氫原子團被特定取代基置換。除另有說明外， 任選取代的基團在基團的各可取代位置可具有取代基，且當在任何給 定結構中一個以上的位置可被選自指定基團的一個以上的取代基取 代時，在每個位置中的取代基可相同或不同。本發明設想的取代基組 合優選是導致形成穩定的或化學上可行的化合物的那些取代基組合。本文中使用的術語"穩定的"是指為了本文中公開的一個 和多個目的，當經歷允許它們的製備、檢測、回收、純化和使用的條 件時，基本上未改變的化合物。在某些實施方案中，穩定的化合物或
ik^S在7t^化^/^闢^ 1T Jt太 I-去亦Aft 乂>入
本文中使用的術語"脂族"或"脂族基團"表示直鏈(即非支 鏈)或支鏈，取代的或未被取代的烴鏈，該烴鏈完全飽和或含一個或多 個不飽和單元，其與分子的其餘部分有一個連接點。除另有說明外，脂族基團含1-20個脂族碳原子。在某些 實施方案中，脂族基團含1-10個脂族碳原子。在其它實施方案中，脂 族基團含1-8個脂族碳原子。在還其它實施方案中，脂族基團含1-6 個脂族碳原子，在又其它實施方案中，脂族基團含l-4個脂族碳原子。 合適的脂族基團包括但不限於直鏈或支鏈，取代的或未被取代的烷 基、烯基或炔基。具體實例包括但不限於甲基、乙基、異丙基、正丙 基、仲丁基、乙烯基、正丁烯基、乙炔基和叔丁基。術語"脂環族"(或"碳環"或"碳環基"或"環烷基")是指完全飽
和或含一個或多個不飽和單元的單環C3-Cs烴或雙環Cg-d2烴，但這
些烴不是芳族，與分子其餘部分有一個連接點，其中在所述雙環環系 統中的任何單個環具有3-7個成員。合適的脂環族基團包括但不限於 環烷基和環烯基。具體實例包括但不限於環己基、環戊烯基和環丁基。本文中使用的術語"雜環"、"雜環基"或"雜環的"表示非芳族 單環、雙環或三環環系統，其中一個或多個環成員是獨立選擇的雜原 子。在某些實施方案中，"雜環"、"雜環基"或"雜環的"基團具有3-14 個環成員，其中一個或多個環成員是獨立選自氧、硫、氮或磷的雜原 子，且系統中的各環含3-7個環成員。合適的雜環包括但不限於3-lH-苯並咪唑-2-酮、3-(1-烷基)-苯並咪唑-2-酮、2-四氫呋喃基、3-四氬呔喃基、2-四氫遂:吩基、3-四 氫噻吩基、2-嗎啉代、3-嗎啉代、4-嗎啉代、2-硫代嗎啉代、3-硫代嗎 啉代、4-硫代嗎啉代、l-吡咯烷基、2-吡咯烷基、3-吡咯烷基、1-四氬 哌嗪基、2-四氫哌嗪基、3-四氫喊溱基、l-旅咬基、2-艱咬基、3-哌啶 基、l-吡唑淋基、3-吡唑啉基、4-吡唑啉基、5-吡唑啉基、l-哌咬基、 2-哌咬基、3-派咬基、4-哌咬基、2-漆唑烷基、3-p塞唑烷基、4-遙唑烷 基、l-咪唑烷基、2-咪唑烷基、4-咪唑烷基、5-咪唑烷基、二氫巧l味基、 四氫p奎淋基、四氫異喹啉基、苯並硫雜環戊烷(benzothiolane)、苯並二 p塞烷(benzodithiane)和1，3-二氬-咪唑-2畫酉同。環狀基團(例如脂環族和雜環)可以是線型稠合環、橋環或螺環。
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術語"雜原子，，表示氧、硫、氮、磷或矽中的一個或多個(包 括氮、硫、磷或矽的任何氧化形式；任何鹼性氮的季銨化形式；或雜 環的可取代的氮例如N (如在3，4-二氫-2H-吡咯基中)、NH (如在吡咯 烷基中)或NR+ (如在N-取代的吡咯烷基中))。本文中使用的術語"不飽和"表示具有一個或多個不飽和單 元的部分。本文中使用的術語"非芳族"描述飽和或部分不飽和的環。本文中使用的術語"烷氧基"或"烷硫基(thioalkyl)"是指前文 中定義的烷基通過氧("烷氧基")或硫("烷硫基")原子連接。術語"卣代烷基"、"卣代烯基"、"卣代脂族基團"和"卣代烷 氧基"表示視情況而定可被一個或多個卣素原子取代的烷基、烯基或 烷氧基。術語"滷素"、"滷基"和"滷代"表示F、 Cl、 Br或I。單獨或作為更大部分如在"芳烷基"、"芳烷氧基"或"芳氧基 烷基"中的一部分使用的術語"芳基"是指具有總數5-14個環成員的單 環、雙環和三環環系統，其中系統中的至少一個環是芳環，和其中系 統中的各環含3-7個環成員。術語"芳基"可與術語"芳環"互換使用。單獨或作為較大部分如在"雜芳烷基"或"雜芳基烷氧基"中 的一部分使用的術語"雜芳基"是指具有總數5-14個環成員的單環、雙 環和三環環系統，其中系統中至少一個環是芳環，系統中至少一個環 含一個或多個雜原子，和其中系統中的各環含3-7個環成員。術語"雜 芳基"可與術語"雜芳環"或術語"雜芳族"互換使用。合適的雜芳環包括 但不限於2-呋喃基、3-吹喃基、N-咪唑基、2-咪唑基、4-咪唑基、5-咪唑基、苯並咪唑基、3-異嚼唑基、4-異嚼唑基、5-異嗯唑基、2-噁唑 基、4-噁唑基、5-噁唑基、N-吡咯基、2-吡咯基、3-吡咯基、2-吡啶基、 3-吡啶基、4-吡咬基、2-嘧咬基、4-嘧。定基、5-嘧咬基、噠喚基(例如 3隱p達n秦基)、2-p塞峻基、4-p塞峻基、5-p塞哇基、四唑基(例如5-四唑基)、 三唑基(例如2-三哇基和5-三哇基)、2-遂:p分基、3-謹:吩基、苯並呋喃 基、苯並噻吩基、吲哚基(例如2-吲咮基)、吡唑基(例如2-吡唑基)、 異瘞唑基、1，2，3-噁二唑基、1,2，5-嚼二唑基、1，2，4-嚼二唑基、1，2，3-三唑基、1,2,3-噻二唑基、1,3,4-噻二唑基、1，2,5-噻二唑基、嘌呤基、 吡嗪基、1，3,5-三溱基、喹啉基(例如2-喹啉基、3-喹啉基、4-喹啉基) 和異喹啉基(例如l-異喹啉基、3-異喹啉基或4-異喹啉基)。
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本文中使用的術語"保護基"和"保護基團"可互換使用，是 指用於臨時性封閉具有多個活性部位的化合物中的 一個或多個需要 的官能團的試劑。在某些實施方案中，保護基具有一個或多個，或優 選所有以下特性a)可選擇性加入官能團，得到高收率的保護底物， 即b)對在一個或多個其它反應部位發生的反應穩定；和c)可通過不 進攻再生的脫保護的官能團的試劑以好的收率選擇性除去。如本領域 技術人員理解的，在一些情況中，該試劑不進攻化合物中的其它反應 性基團。在其它情況中，該試劑也可以與化合物中的其它反應性基團 反應。在Greene, T.W.， Wuts， P. G在"Protective Groups in Organic Synthesis",第3版，John Wiley & Sons, New York: 1999 (和該書的其它 版本)中對舉例說明的保護基有詳細描述，其全部內容通過引用結合到 本文中。本文中使用的術語"氮保護基"是指用於臨時性封閉多官能化 合物中的 一 個或多個需要的氮反應部位的物質。優選的氮保護基也具 有以上舉例說明的特性，在Greene, T.W.， Wuts, P. G在"Protective Groups in Organic Synthesis",第7章，第3版,John Wiley & Sons, New York: 1999中對某些舉例說明的氮保護基也有詳細描述，其全部內容 通過引用結合到本文中。在某些實施方案中，烷基或脂族鏈可任選被另一個原子或 基團置換。這意味著烷基或脂族鏈的亞甲基單元任選被所述其它原子 或基團置換。此類原子或基團的實例包括但不限於-NR-、 -O-、 -C(O)-、 -C(=N-CN)畫、-C(=NR)-、 -C(-NOR)-、 -S-、畫SO畫或國S02-。這些原子或 基團可以結合而形成更大的基團。這樣的基團的實例包括但不限於 -OC(O)-、 -C(O)CO誦、-C02-、 -C(O)NR-、 -C(=N-CN) 、 -NRCO-、 -NRC(O)O- 、 -S02NR- 、 -NRS02- 、 -NRC(O)NR- 、 -OC(O)NR-和 -NRS02NR-，其中R的定義同本文。除另有說明外，該任選的置換形成化學穩定的化合物。任 選的置換可發生在鏈中和鏈的任一末端；即發生在連接點和/或末端。 只要可形成化學穩定的化合物，兩個任選的置換也可在鏈中彼此相鄰 發生。任選的置換也可完全置換鏈中的所有碳原子。例如C3脂族基 團可任選被-NR-、 -C(O)-和-NR-置換，形成-NRC(O)NR-(脲)。
除另有說明外，如果置換發生在末端，則置換原子與末端 上的H連接。例如，如果-CH2CH2CH3任選被-0-置換，得到的化合物 可以是-OCH2CH3 、 -CH2OCH3或-CH2CH2OH 。除另有說明外，本文中所示結構還要包括所有異構形式 (例如該結構的對映異構、非對映異構、幾何異構、構象異構和旋轉異 構的形式)。例如各不對稱中心的R和S構型，(Z)和(E)雙鍵異構體和 (Z)和(E)構象異構體都包括在本發明內。如本領域技術人員理解的，
取代基可圍繞任何可旋轉鍵自由旋轉。例如，所示取代基^也代表因此，本發明化合物的單一立體化學異構體和對映異構、 非對映異構、幾何異構、構象異構或旋轉異構的混合物在本發明範圍 內。除另有說明外，本發明化合物的所有互變異構體均在本發 明範圍內。另外，除另有說明外，本文中所示結構還要包括不同之處 僅在於存在一個或多個同位素富集原子的化合物。例如，具有本發明 結構，但不同之處在於氫被氘或氚取代或碳被130或"C-富集碳置換 的化合物在本發明範圍內。此類化合物可用於例如生物測定的分析工 具或探針。本發明化合物能夠以治療用的游離形式存在，或適當時， 以藥學上可接受的鹽的形式存在。本文中使用的術語"藥學上可接受的鹽"是指適合預定用 途的化合物的鹽。在某些實施方案中，鹽適用於與人和低級動物的組 織接觸而無過度毒性、刺激、過敏反應等，具有合理的利益/風險比。 在其它實施方案中，鹽可適用於體外分析、動力學研究、晶體學研究 等。在本領域中熟知藥學上可接受的鹽。例如，S.M. Bergeet al.在J. Pharmaceutical Sciences, 1977, 66, 1-19中詳細論述了藥學上可 接受的鹽，其通過引用結合到本文中。本發明化合物藥學上可接受的鹽包括由合適的無機和有機酸和鹼衍生的那些鹽。在化合物最後分離 和純化期間，可原位製備這些鹽。可通過1)使游離形式的純化化合 物與合適的有機或無機酸反應，2)將由此形成的鹽分離，製備酸加成藥學上可接受的無毒酸加成鹽實例是與無機酸例如鹽酸、 氫溴酸、磷酸、硫酸和高氯酸或與有機酸例如乙酸、草酸、馬來酸、 酒石酸、檸檬酸、琥珀酸或丙二酸或通過用本領域中使用的其它方法 例如離子交換形成的氨基鹽。其它藥學上可接受的鹽包括己二酸鹽、 藻酸鹽、抗壞血酸鹽、天冬氨酸鹽、苯磺酸鹽、苯曱酸鹽、硫酸氫鹽、 硼酸鹽、丁酸鹽、樟腦酸鹽、樟腦磺酸鹽、檸檬酸鹽、環戊烷丙酸鹽、 二葡糖酸鹽、十二烷基硫酸鹽、乙磺酸鹽、甲酸鹽、富馬酸鹽、葡庚 酸鹽、甘油磷酸鹽、甘醇酸鹽、葡糖酸鹽、半硫酸鹽、庚酸鹽、己酸 鹽、氫碘酸鹽、2-羥基-乙磺酸鹽、乳糖酸鹽(lactobionate)、乳酸鹽、 月桂酸鹽、十二烷基硫酸鹽、蘋果酸鹽、馬來酸鹽、丙二酸鹽、曱磺 酸鹽、2-萘磺酸鹽、煙酸鹽、硝酸鹽、油酸鹽、草酸鹽、棕櫚酸鹽、 palmoate、果膠酯酸鹽(pectinate)、過硫酸鹽、3-苯基丙酸鹽、磷酸鹽、 苦味酸鹽、新戊酸鹽、丙酸鹽、水楊酸鹽、硬脂酸鹽、琥珀酸鹽、硫 酸鹽、酒石酸鹽、硫氰酸鹽、對甲苯磺酸鹽、十一酸鹽、戊酸鹽等。
由適當的鹼衍生的鹽包括鹼金屬、鹼土金屬、銨和N+(CM烷基)4鹽。
過此類季銨化得到可在水或油中溶解或分散的^:。
' ^ °可通過1)使酸形式的純化化合物與合適的有機或無機鹼 反應，2)將由此形成的鹽分離，製備鹼加成鹽。鹼加成鹽包括鹼金屬 或鹼土金屬鹽。代表性的鹼金屬或鹼土金屬鹽包括鈉、鋰、鉀、4丐、 鎂等。當合適時，其它藥學上可接受的鹽包括無毒銨、季銨和用反荷 離子例如卣離子、氫氧根、羧酸根、硫酸根、磷酸根、硝酸根、磺酸 低級烷基酯和磺酸芳基酯形成的胺陽離子。其它酸和鹼，雖然本身不 是藥學上可接受的，但可用於製備可用作中間體的鹽，通過該中間體 得到本發明化合物及其藥學上可接受的酸或鹼加成鹽。 4吏用以下縮寫 LG 離去基團
TBTU 四氟硼酸O-(苯並三唑-l-基)-N，N，N'，N'-四曱基脲鐵DMSO二曱亞碸
DMA二曱基乙醯胺
TCA三氯乙酸
ATP三磷酸腺苷
DEAD偶氮二羧酸二乙酯
HEPES4-(2-羥基乙基)-l-口底,乙磺酸
BSA牛血清白蛋白
DTT二硫蘇糖醇
MOPS4_嗎啉丙磺酸
麗R核磁共振
HPLC高效液相色"i普
LCMS液相色譜-質i普
TIX薄層層析
Rt保留時間
發明詳述在一些方面中，本發明提供了可用作蛋白激酶抑制劑的式 I的化合物或藥學上可接受的鹽
2
3
I
其中
環A是5元雜芳基環，其中所述環任選地被以下基團取代 卣代烷基、卣素、N02、 -OH、 -CN或任選被取代的Cw烷基；
X是鍵、-O-、 -NR8-、 -S國、-S(0:M^-S(0)2-;
W是H、 Cwo脂族(基團)、Cwo環脂族(基團)、Cwo芳基、5-10 元雜芳基或3-10元雜環基，其中所述RM壬選地被0-5個J4又代；
每一個I^和RS獨立地是H、Cwo脂族(基團)或Cwo環脂族(基團), 其中每一個112和R"壬選地並且獨立地分別被0-5個f和js取代，或
23r2和r3,與它們所連接的碳原子一起，形成3-8元飽和或部分不 飽和的含0-4個獨立地選自0、 n和s的雜原子的單環，其中所述由 112和W形成的單環任選地被0-4個JP取代；
R4是H、 -C(O)R、 -C(O)OR、 -C(O)NRR'、 Cw。脂族(基團)、c3.10
環脂族(基團)、Cw。芳基、Cs.k)雜芳基、3-10元雜環基、(d-6脂族)-(C3-k) 環脂族(基團))、(d-6脂族)-(C6-q芳基)或(d.6脂族H5-10元雜芳基)，
其中所述R"任選地被0-5個4取代；
R8是H、 d.6脂族(基團)、C3.8環脂族(基團)、-C(O)R、 -C(O)OR 或-C(O)NRR';
每一個JJ獨立地是d—6卣代烷基、滷素、N02、 CN、 Q或-Z-Q， 或者結合在一起的兩個^可能任選地形成=0;
每一個Z獨立地是Q-6脂族(基團)，其中所述d-6脂族(基團)中的
0-3個畫CH2-單元任選地被替換為-NR-、 -O-、畫S-、畫C(O)-、 -C(=NR)-、 -C(=NOR)-、 -8(0)-或-8(0)2-,其中所述d-6脂族(基團)中的任何未被 替換的-CH2-單元任選地被0-2個jz取代；
每一個Q獨立地是H、 Q.6脂族(基團)、3-8-元芳族或非芳族的具 有0-3個獨立地選自O、 N和S的雜原子的單環或8-12元芳族或非芳 族的具有0-5個獨立地選自0、 N和S的雜原子的雙環體系，其中每 一個Q任選地被0-5個JQ取代；
每 一 個J2和J3獨立地是C,_6脂族(基團)、C3.6環脂族(基團)或-(C i.4 烷基VV1,其中
n是O或1,
每一個V1獨立地是卣代(cm脂族(基團))、-O(卣代Cm脂族(基
團))、卣素、N02、 CN、 0H、 OR"、 SH、 SR"、 NH2、 NHR"、 N(R")2、 COH、 COR"、 C02H、 C02R"、 CONH2、 CONHR"、 CONR"2、 OCOR"、 OCONH2、 OCONHR"、 OCON(R")2、 NHCOR"、 NR"COR"、 NHC02R"、 NR"C02R" 、 NHC02H 、 NR"C02H 、 NHCONH2 、 NHCONHR"、 NHCON(R")2、 S02NH2、 S02NHR"、 S02N(R")2、 NHS02R"、 NR"S02R", 或者
Vi是選自C3.6環脂族(基團)、苯基、5-6元雜芳基或3-6元雜環基 的環狀基團，其中所述環狀基團任選地被0-3個jv取代；
每一個R"獨立地是未被取代的Cm脂族(基団)，或者鍵合至相同
24原子的相同的f和J3中的兩個， 一起可能任選地形成O;
每一個JZ和jV獨立地是滷素、Cw脂族(基團)、C3-6環脂族(基團)、
N02、 CN、 OH、 NH2、 NH(Cm脂族(基団))、N(d-4脂族(基團》2、 -O(Cm 脂族(基團))、-C02H、 -C02(d-4脂族(基團))、-O(滷代CM脂族(基團)) 或滷代(CM脂族(基團))；
每一個JQ、"和J"獨立地是-M或-Y-M;
每一個Y獨立地是未被取代的d-6脂族(基團)，其中所述Cw脂
族(基團)中的0-3個-CH2-單元任選地被替換為-NR-、 -O-、 -S-、 -C(O)-、 -S(0)-或-S(0)2-;
每一個M獨立地是H、 d-6脂族(基團)、<:3.6環脂族(基團)、滷代
(C,-4脂族(基團))、0(卣代C-4脂族(基團))、3-6元雜環基、滷素、N02、 CN、 OH、 OR'、 SH、 SR'、 NH2、 NHR'、 N(R')2、 COH、 COR'、 C02H、 C02R'、 CONH2、 CONHR'、 CONR'2、 OCOR'、 OCONH2、 OCONHR'、 OCON(R')2、 NHCOR'、 NR'COR'、 NHC02R'、 NR'C02R'、 NHC02H、 NR'C02H、 NHCONH2、 NHCONHR'、 NHCON(R')2、 S02NH2、 S02NHR'、 S02N(R')2、 NHS02R'或NR'S02R';
每一個R獨立地是H或未被取代的Q-6脂族(基團)；和 每一個R'是未被取代的d—6脂族(基團)，或者兩個R'基團，與它 們鍵接的原子一起，形成未被取代的3-8元飽和或部分不飽和的具有 0-1個獨立地選自O、 N和S的雜原子的單環。在一些實施方案中，環A是三唑環，其任選地-陂以下基團 取代cl6卣代烷基、卣素、N02、 OH、 CN或任選被取代的d.6烷 基。在某些實施方案中，環A是咪唑環，其任選地被以下基團 取代C，.6卣代烷基、卣素、N02、 OH、 CN或任選被取代的Cl6烷 基。在一些實施方案中，Xi是-0-、 -NRS-或-S-。
在其它實施方案中，Xi是-NR8-。在一些實施方案中，118是H或-C(O)OR,其中R是C!.6 烷基；例如R8是-C(0)OCH3。在某些實施方案中，W是H、任選被取代的Cwo芳基、 任選被取代的芳烷基或任選被取代的Cs.,o雜芳基。
在一些實施方案中，rh壬選地被-0-q、滷素、-C(O)N(R)-Q 或Q取代，其中，Q、 -C(O)N(R)-Q和-O-Q中的每一個Q獨立地任選 被0-5個jQ取代。在一些實施方案中，R1是苯基，該苯基任選地在對位被 -C(O)N(R)-Q取代並且任何剩餘位置被-O-Q、卣素或Q取代，其中， Q、 -C(O)N(R)-Q和-O-Q中的每一個Q獨立地任選被0-5個jQ取代。在一些實施方案中，JQ是d-6脂族(基團)，其任選被C3-6 環脂族(基團)、滷代(C-4脂族(基團))、O(滷代d-4脂族(基團))或3-6 元雜環基取代。在一些實施方案中，I^是雜芳基，該雜芳基被-C(O)N(R)-Q 取代並且任何剩餘位置被-O-Q或Q取代，其中，Q、 -C(O)N(R)-Q和 -O-Q中的每一個Q獨立地任選被0-5個JQ取代。在一些實施方案中，-C(O)N(R)-Q中的Q是H、Cm脂族(基
團)、CM囟代脂族(基團)、C3.7環脂族(基團)、C3.7雜環脂族(基團)、 C!-6烷氧基、(d—6烷氧基)Ci-6烷基或d_6卣代烷氧基。在一些實施方案中，其中R^是苯基，該苯基在對位被Q 取代，該苯基在任何剩餘位置任選地被卣素、CM脂族(基團)、Cm面
代脂族(基團)、C3.7環脂族(基團)、C3.7雜環脂族(基團)、C,-6烷氧基、 (C,-6烷氧基)d.6烷基或d-6囟代烷氧基取代。在一些實施方案中，-C(O)N(R)-Q的Q是曱基、乙基、1-曱基哌啶-4-基、環丙基、環戊基、3-呋喃基、3-氟代吡咯烷-l-基或3,3-二氟環丁基。在一些實施方案中，R1是任選被取代的C^烷基或C3.7 環烷基。在某些實施方案中，W是苯基，該苯基在苯基的對位被至 少一種/個Q取代，並且Q是氟、羧基、三氟曱基、4-曱基哌嗪-l-基、 二氟曱氧基、嗎啉-l-基、吡唑-l-基或吡咯烷-l-基。在有些情況下，W是雜芳基，該雜芳基被-C(O)N(R)-Q取 代並且在任何剩餘位置被-O-Q或Q取代，其中，Q、 -C(O)N(R)-Q和 -O-Q中的每一個Q獨立地任選被0-5個JQ取代。在一些實施方案中，-C(O)N(R)-Q中的Q是H、Cm脂族(基 團)、Cm滷代脂族(基團)、(:3-7環脂族(基團)、Cw雜環脂族(基團)、Cw烷氧基、(d-6烷氧基)d，6烷基或C,-6卣代烷氧基。在更進一步的實施方案中，-C(O)N(R)-Q中的Q是曱基、 乙基、l-曱基哌啶-4-基、環丙基、環戊基、3-呋喃基、3-氟代吡咯烷 畫l-基或3，3畫二氟環丁基。在有些情況下，R1是任選被取代的烷基或Cw環烷基。 在更進一步的情況中，W是H、乙基、環丙基或環戊基。在一些實施方案中，R是在對位被Q或-ZQ取代的苯基。 在有些情況下，在對位的取代基是氟、羧基、三氟曱基、4-曱基哌嗪 -l-基、二氟甲氧基、嗎啉-l-基、吡唑-l-基或吡咯烷-l-基。在一些實施方案中，R^是噻吩-2-基、吡啶-3-基、吡啶-4-基或6-三氟甲基吡啶-3-基。在某些實施方案中，f和R3中的每一個獨立地是H或Cw 烷基，其任選地且獨立地被0-5個f和js取代。在有些情況下，R2 是H而R^是d.3烷基，如乙基。在其它實施方案中，112和R3,與它們所連接的碳原子一 起，形成3-8元飽和或部分不々包和的含0-4個獨立地選自O、 N和S 的雜原子的單環，其中所述由R2和R3形成的單環任選地被0-4個J23 取代。在有些情況下，J"是H、滷素、CM烷基、OH、 Q-4烷氧 基、Cm卣代烷氧基或氨基。在某些實施方案中，每一個f和f獨立地是d-6脂族(基
團)、C3-6環脂族(基團)或-(d-4烷基)n-V1,其中
n是0或1,
每一個V1獨立地是卣代(CM脂族(基團))、-O(卣代Cm脂族(基 團))、囟素、N02、 CN、 OH、 OR"、 SH、 SR"、 NH2、 NHR"、 N(R")2、 COH、 COR"、 C02H、 C02R"、 CONH2、 CONHR"、 CONR"2、 OCOR"、 OCONH2、 OCONHR"、 OCON(R'V NHCOR"、 NR"COR"、 NHC02R"、 NR"C02R" 、 NHC02H 、 NR"C02H 、 NHCONH2 、 NHCONHR"、 NHCON(R'V S02NH2、 S02NHR"、 S02N(R")2、 NHS02R"、 NR"S02R", 或者
Vi是選自(:3.6環脂族(基團)、苯基、5-6元雜芳基或3-6元雜環基 的環狀基團，其中所述環狀基團任選地被0-3個,取代；和
27每一個R"獨立地是未被取代的Cm脂族(基団)，或者鍵合至相同
原子的相同的2和J3中的兩個， 一起可能任選地形成=0。在有些情況下，每一個^和JS獨立地是C^脂族(基團)、
C3-6環脂族(基團)或-(C!-4烷基)n-V1，其中
n是0或1,
每一個V1獨立地是卣代(CM脂族(基團))、-O(滷代Cm脂族(基 團))、卣素、N02、 CN、 OH、 SH、 NH2、、 COH、 C02H、 CONH2、 OCONH2、 NHC02H、 NHCONH2、 S02NH2,或者V^環狀基團，其 選自C3—6環脂族(基團)、苯基、5-6元雜芳基或3-6元雜環基，其中所 述環狀基團任選地被0-3個,取代；和
每一個R"獨立地是未被取代的Cm脂族(基団)，或者鍵合至相同 原子的相同的《12和J3中的兩個， 一起可能任選地形成=0。在其它實施方案中，每一個f或f獨立地是氨基、醯胺 基、CN、 OH、 d-4烷氧基或Cm卣代烷氧基和V1是H、卣素、CM 烷基、OH、 C,-4烷氧基、Cm卣代烷氧基或氨基。在一些實施方案中，rA是Cl6脂族(基団)、Cwo環脂族(基 團)、C3.10雜環脂族(基團)、Q.m芳基或(:5.14雜芳基，每一個任選被 0-5個f取代。在一些實施方案中，114是環戊基。在一些實施方案中，每一個JQ、 P和J"獨立地是-M或 -Y-M。在某些實施方案中，每一個Y獨立地是未被取代的d-6 脂族(基團)，其中所述d-6脂族(基團)中的0-3個-CH2-單元任選地被 替換為-NR-、 -O-、 -S-、 -C(O)-、 -8(0)畫或陽8(0)2-;在其它實施方案中，每一個M獨立地是H、 Cl6脂族(基
團)、(33.6環脂族(基團)、滷代(CM脂族(基團))、0(滷代d—4脂族(基團))、 3-6元雜環基、卣素、N02、 CN、 OH、 OR'、 SH、 SR'、 NH2、 NHR'、 N(R')2、 COH、 COR'、 C02H、 C02R'、 CONH2、 CONHR'、 CONR'2、 OCOR'、 OCONH2、 OCONHR'、 OCON(R')2、 NHCOR'、 NR'COR'、 NHC02R'、 NR'C02R'、 NHC02H、 NR'C02H、 NHCONH2、 NHCONHR'、 NHCON(rv S02NH2、 S02NHR'、 S02N(R')2、 NHS02R^ NR'S02R'。
在其它情況中，每一個M獨立地是H、 d-6脂族(基團)、C3-6環脂族(基團)、滷代(d-4脂族(基團))、O(卣代C1-4脂族(基團))-3-6元雜環基，在一些實施方案中，本發明的化合物可以由式II表示；
丄丄 J<=3
II
其中X1、 R1、 R2、 W和W是如前所述的和ja是H、 Cm坑基. 或OH。在一些實施方案中，本發明的化合物表示在表1中。
表1
formula see original document page 29formula see original document page 30formula see original document page 311-25 1-26 1-27
1-28 1-29 1-30
1-34 1-35 1-36
32formula see original document page 33
通用合成方法 —般而言，可通過方法例如以下通用方案所示那些和隨後 的製備實施例製備本發明化合物。除另有說明外，以下方案中所有變 量的定義同本文。
方案1formula see original document page 33以上方案1顯示了為得到用於以下所述的工序(sequence) 的起點la的合成路線(參見US20040176380)。化合物A的4位上的氯 在丙酮(或己烷)中置換為氨基酯而得到B。硝基的還原，隨後原位分子內環化作用而得到化合物la。 方案2以上方案2顯示了用於製備本發明的化合物的通用合成路 線。在已知條件下激活1中的內醯胺官能團(參見US20040176380), 其中LG是合適的離去基團，而得到化合物2(X可以是，但非局限於 滷素、烷氧基和磷酸根)。然後化合物2在1-2步驟的工序中使用(取 決於環A)而得到化合物4。或者，1中的羰基醯胺可以被轉化為硫代 羰基而提供硫代內醯胺3。化合物3然後被轉化為化合物2(乂=烷基硫 基)或者直接地在1-2步驟的工序中使用(取決於環A)而得到化合物4。 LG可以最後用作用於製備式I的化合物的處理(handle)。在該最後一 步中，LG能夠例如用胺置換或者用於已知的鈀輔助的偶聯反應，例 如Suzuki 、 Stille或Buchwald反應。
方案3以上方案3顯示了用於製備本發明的化合物的通用合成路 線，其中環A是三唑。2A中的氯亞氨酸根(chloroimidate)(X-Cl)或2A 中的磷酸根(X二OP(0)(OEt)2)與肼反應而得到中間體5。 5與原酸酯 rC(OR)3的反應得到化合物4A,其中環A是三唑。或者2A中的氯亞 氨酸根或磷酸根(XK)P(0)(OEt)2)可以與醯肼JaC(0)NHNH2反應而直接得到化合物4A，其中環A是三唑。LG可以最後用作用於製備式IA 的化合物的處理(handle)。在該最後一步中，LG能夠例如用胺置換或 者用於為本領域技術人員所知的鈀輔助的偶聯反應(例如Suzuki、Stille 或Buchwald)。類似方法已經報到在用於將醯胺RLNH-CO-I^轉化為R1-三唑-R2的文獻中，例如
Trends in Het Chem, 8,49-60， 2002
J Org Chem， 70(7)， 2878-2880， 2005
Bioorg Med Chem Lett, 15(19)， 4359-4362， 2005
方案4
或以上方案4顯示了用於製備本發明的化合物的通用合成路 線，其中環A可以是，但不局限於，咪唑IB,或咪唑啉IC。類似方法已經報到在用於將醯胺R、NH-CO-R2轉化為R1-咪唑-R2的文獻中，例如 Afinidad, 45 (417)， 443-446， 1988
J Org Chem， 59 (7), 5084-5087， 1994
Hev. Chim. Acta^ 80 (3)， 979-987, 1997
US2004132708
Bioorg Med Chem Lett, 12 (21)， 3219-3222, 2002類似方法已經報到在用於將醯胺R、NH-CO-I^轉化為R1-咪唑啉-112的文獻中，例如
Afinidad' 45 (417)， 443-446， 1988
J Het Chem, 19 (1)， 193-200， 1982
J Org Chem, 50 (13), 2220-2224, 1985
Indian J Chem, 12 (3)， 263-269， 1974
Heterocycles, 60 (6)， 1425-1432, 2003類似方法已經報到在用於將醯胺R^NH-CO-I^轉化為R1-四氫嘧咬-R2的文獻中，例如
J Am Ch咖Soc, 126 (7)， 1971-1979， 2004
Angew Chemie, 43 (4), 478~482, 2004
J Am Chem Soc, 103 (14), 4186-4194， 1981
Indian J Chem， 12 (3)， 263-269， 1974本發明的一個實施方案提供了 一種用於製備式I的化合物 的方法
formula see original document page 36I
其中
X1、 R1、 R2、 R3、 114和環A是如本文中所限定的。
本文中使用的術語"偶聯反應"是指其中在金屬催化劑的 幫助下形成碳-碳鍵的反應。通常，碳原子中之一與官能團("交叉偶聯 基團")結合，同時其它碳原子與卣素結合。偶聯反應的實例包括但不 限於Suzuki偶聯、Stille偶聯、Negishi偶聯和Buchwald偶聯。
本文中使用的術語"偶聯基團"是指在偶聯反應中可與另 一個官能團(例如滷素)反應形成碳-碳("C-C")鍵或碳-氮("C-N")鍵的官 能團。在某些實施方案中，在兩芳基之間形成C-C鍵。本文中使用的術語"偶聯條件"是指使偶聯反應發生所需 要的化學條件(例如需要的溫度、反應時間長度、溶劑體積)。偶聯基團及其相應的偶聯條件的實例包括但不限於硼酸 和硼酸酯和Suzuki偶聯條件；SnBu3和Stille偶聯條件；和ZnX和 Negishi偶聯條件。所有這3種偶聯條件通常涉及使用催化劑、合適的溶劑和 任選的鹼。Suzuki偶聯條件涉及使用鈀催化劑、合適的鹼和合適的溶 劑。合適的鈀催化劑的實例包括但不限於PdCl2(PPh3)2、 Pd(Ph3)4和 PdCl2(dppf)。合適的鹼包括但不限於K2C03和Na2C03。合適的溶劑 包括但不限於四氫呋喃、曱苯和乙醇。 Stille偶聯條件涉及使用催化劑(通常為鈀，但有時為鎳)、 合適的溶劑和其它任選的試劑。合適的催化劑的實例包括但不限於 PdCl2(PPh3)2、 Pd(Ph3)4和PdCl2(dppf)。合適的溶劑包括但不限於四氫 呋喃、曱苯和二曱基曱醯胺。 Negishi偶聯條件涉及使用催化劑(釔或鎳)和合適的溶劑。 合適的催化劑的實例包括但不限於Pd2(dba)3 、 Ni(PPh3)2Cl2 、 PdCl2(PPh3)"。 Pd(Ph3)4。合適的溶劑包括但不限於四氬呋喃、曱苯和 二曱基曱醯胺。本領域:汰術人員已知Suzuki、 Stille和Negishi條件， 在包括"March's Advanced Organic Chemistry"在內的多種參考文獻有 更詳細的闡述。 Buchwald偶聯條件包括使用鈀催化劑、合適的鹼和合適的 溶劑。合適的鈀催化劑的實例包括但不局限於Pd(OAc)2與xanthphos、 PdCl2(PPh3)2 、 Pd(Ph3)4和PdCl2(dppf)。合適的鹼包括但不局限於 Cs2C03、 K2C03和Na2C03。合適的溶劑包括但不局限於二氧雜環己 烷、四氫呋喃、曱苯和乙醇。如本領域技術人員所理解的，偶聯基團由偶聯基團前體形 成。"偶聯基團前體"是用於形成交叉偶聯基團的試劑或試劑的基團。 實例包括但不限於在Negishi偶聯反應中用於形成硼酸酯(boronate esters)的二硼酸二(頻哪醇酯)(bis(pinacolato) diborane);用於形成硼酸
37的硼酸三曱酯；用於形成錫烷的Bii3SnCl;和用於形成鋅酸鹽的ZnCl:
備硼酸酯；通過將硼酸酯水解製備硼酸；通過兩步法製備錫烷1)卣素金屬交換，然後2)用Bu3SnCl進行金屬轉移；和通過兩步法製備鋅酸鹽1)卣素金屬交換，然後2)加入ZnCl2。本發明的另一個方面提供蛋白激酶抑制劑化合物，因此可用於治療疾病、障礙和病症以及本文中所述其它用途。在本發明的另一個方面，提供藥學上可接受的組合物，其中這些組合物包含本文中所述任何化合物和任選包含藥學上可接受的載體、助劑或溶媒。在某些實施方案中，這些組合物任選還包含一種或多種其它治療藥物。本發明提供了可用作蛋白激酶抑制劑的化合物和組合物。在某些實施方案中，蛋白激酶是PLK。在某些實施方案中，PLK1。作為蛋白激酶抑制劑，本發明化合物和組合物尤其可用於治療或緩解疾病、病症或障礙的嚴重程度，其中蛋白激酶與所述疾病、病症或障礙有關。在一個方面，本發明提供治療或緩解疾病、病症或障礙的嚴重程度的方法，其中蛋白激酶與疾病狀態有關。在另一方面，本發明提供治療或緩解激酶疾病、病症或障礙的嚴重程度的方法，其中抑制酶活性與治療疾病有關。在另一方面，本發明提供用抑制酶活性的化合物治療或緩解疾病、病症或障礙的嚴重程度的方法，這些化合物通過與蛋白激酶結合抑制酶活性。另 一方面提供了通過用蛋白激酶抑制劑抑制激酶的酶活性來治療或緩解激酶疾病、病症或障礙的嚴重程度。在某些實施方案中，所述蛋白激酶抑制劑是PLK抑制劑。
本發明的 一 個方面涉及在患者中抑制蛋白激酶活性的方法，該方法包括給予患者式I化合物或含所述化合物的組合物。在某些實施方案中，所述方法用於治療或預防選自以下的病症自身免疫性疾病、炎性疾病、增殖或過度增殖疾病、免疫介導的疾病、骨病、代謝疾病、神經或神經變性疾病、心血管疾病、激素相關疾病、過敏、哞喘、早老性痴呆。在某些實施方案中，所述蛋白激酶/PLK。在其它實施方案中，所述病症選自增殖障礙和神經變性障礙。根據所治療或預防的具體的蛋白激酶介導的病症，通常可
合適的偶聯基團形成
38將給予的治療或預防該病症的其它藥物與本發明抑制劑 一起給予。例 如，化療藥物或其它抗增殖藥物可與本發明蛋白激酶抑制劑聯合治療 增殖疾病。可由含蛋白激酶抑制劑的化合物或組合物，分別給予作為 多劑量方案的一部分的那些其它藥物。或者，那些藥物可在單一組合 物中作為單劑量形式的 一 部分與蛋白激酶抑制劑混合在 一 起。作為蛋白激酶的抑制劑，本發明的化合物和組合物還可用 於生物樣品中。本發明的 一 個方面涉及在生物樣品中抑制蛋白激酶活 性的方法，該方法包括使所述生物樣品與式I化合物或含所述化合物 的組合物接觸。本文中使用的術語"生物樣品"表示體外或離體樣品， 它們包括但不限於細胞培養物或其提取物；從哺乳動物或其提取物得 到的活組織4企查物；和血液、唾液、尿、糞、4青液、淚液或其它體液 或其提取物。生物樣品中蛋白激酶活性的抑制可用於本領域技術人員 已知的多種目的。此類目的的實例包括但不限於輸血、器官移植和生 物樣品貯存。本發明的另 一個方面涉及蛋白激酶的生物和病理現象的 研究；由此類蛋白激酶介導的細胞內信號轉導途徑的研究；和新的蛋 白激酶抑制劑的對比性評價。此類用途的實例包括但不限於生物測 定，例如酶測定和基於細力包的(cell-based)測定。可體外、體內或在細胞系中測定作為蛋白激酶抑制劑的化 合物的活性。體外測定包括檢測激活的激酶的激酶活性或ATP酶活性 抑制的測定。或者，體外測定可定量檢測抑制劑與蛋白激酶結合的能 力，可通過結合前將抑制劑放射性標記，使抑制劑/激酶複合物分離， 測定放射性標記結合的量；或通過進行竟爭性實驗，其中將新抑制劑 與和已知放射性配體結合的激酶一起溫育，測量。測定作為PLK1、 PLK2、 PLK3和PLK4的抑制劑的在本發明中使用的化合物的詳細條 件闡述在下文的實施例中。本發明的 一 個方面提供了可用於治療以過度或異常細胞 增殖為特徵的疾病、病症或障礙的化合物。這些疾病包括增殖或過度 增殖疾病和神經變性疾病。增殖或過度增殖疾病的實例包括但不限於癌症。
術語"癌症，，包括但不限於以下癌症乳腺癌；卵巢癌；宮 頸癌；前列腺癌；睪丸癌、泌尿生殖道癌；食道癌；喉癌、成"交質細 胞瘤；成神經細胞瘤；胃癌；皮膚癌、角化棘皮瘤；肺癌、表皮樣瘤、 大細胞瘤、小細胞瘤、肺腺癌；骨癌；結腸癌；結腸直腸癌；腺瘤； 胰腺癌、腺癌；甲狀腺癌、卵泡癌、未分化癌、乳頭狀癌；精原細胞 瘤；黑素瘤；肉瘤；膀胱癌；肝癌和膽道癌；腎癌；骨髓病；淋巴病、 霍奇金病、毛細胞瘤；口腔癌和咽癌(口)、唇癌、舌癌、口癌、咽癌； 小腸癌；結腸-直腸癌、大腸癌、直腸癌；腦和中樞神經系統癌；慢性 粒細胞性白血病(CML)和白血病。神經變性疾病的實例包括但不限於早老性痴呆。
本發明的一個方面提供治療或緩解疾病嚴重程度的方法， 所述疾病選自增殖或過度增殖疾病、或神經變性疾病，該方法包括 給予有需要的患者有效量的化合物或含化合物的藥學上可接受的組合物。在某些實施方案中，化合物或藥學上可接受的組合物的 "有效量"是治療所述疾病的有效量。可用有效治療或緩解所述疾病的 嚴重程度的任何量和任4可給藥途徑給予通過本發明方法得到的化合 物詳p糹且合物。在某些實施方案中，所述疾病是蛋白激酶-介導的病症。 在某些實施方案中，所述疾病是PLK-介導的病症。本文中使用的術語"蛋白激酶-介導的病症"表示蛋白激酶 在其中起作用的任何疾病或其它有害病症。此類病症包括但不限於自
身免疫性疾病、炎性疾病、增殖和過度增殖疾病、免疫介導的疾病、 骨病、代謝疾病、神經和神經變性疾病、心血管疾病、激素相關疾病、 過敏、哮喘和早老性痴呆。本文中使用的術語"PLK介導的病症"表示PLK在其中起 作用的任何疾病或其它有害病症。此類病症包括但不限於增殖或過度 增殖疾病、或神經變性疾病。在本發明的另一個方面，提供藥學上可接受的組合物，其
的載體、助劑或溶媒/' ° ' 口 、在某些實施方案中，這些組合物任選還包含一種或多種其
40它治療藥物。例如，化療藥物或其它抗增殖藥物可與本發明化合物聯合
治療增殖疾病和癌症。已知的化療劑的實例包括但不局限於GleevecTM、多柔比 星、地塞米松、長春新鹼、環磷醯胺、氟尿嘧啶、topotecan、紫杉酚、 幹擾素和鉑衍生物。還可與本發明抑制劑結合的藥劑的其它實例包括但不限 於用於早老性痴呆的治療劑如八^6 1@和Excelon ;用於帕金森氏 病的治療劑如L-DOPA/卡比多巴、恩他卡朋、ropinrole、普4立克索、 溴隱亭、培高利特、trihexephendyl和金剛烷胺；用於治療多發性硬化 (MS)的藥劑如卩幹擾素(例如八￥0116乂@和Rebi產)、Copaxone 和米託蒽 醌；用於哮喘的治療劑如沙丁胺醇和Singulair ;用於治療精神分裂 症的藥劑如奧蘭扎平、維思通、喹硫平和氟哌啶醇；抗炎藥劑如皮質 類固醇、TNF阻斷劑、IL-1 RA、硫唑嘌呤、環磷醯胺和柳氮磺吡啶； 免疫調節和免疫抑制的藥劑如環孢菌素、他克莫司、雷帕黴素、麥考 酚酸嗎乙酯(mycophenolatemofetil)、幹擾素、皮質類固醇、環磷醯胺 (cyclophophamide)、硫唑。票呤和柳氮磺吡。定；神經營養因子如乙醯膽 鹼酯酶抑制劑、MAO抑制劑、幹擾素、抗驚厥劑、離子通道封阻劑、 利魯唑和抗似帕金森氏病的藥劑；用於治療心血管疾病的藥劑如卩-阻斷劑、ACE抑制劑、利尿劑、硝酸鹽、《丐通道阻斷劑和斯特汀；用 於治療肝病的藥劑如皮質類固醇、考來烯胺、幹擾素和抗病毒藥劑； 用於治療血液病的藥劑如皮質類固醇、抗白血病的藥劑和生長因子； 和用於治療免疫缺陷病症的藥劑如y-球蛋白。本文中所述本發明藥學上可接受的組合物還包含藥學上 可接受的載體、助劑或溶媒，在本文中，它們包括任何和所有溶劑、 稀釋劑或其它液體溶媒、分散體或懸浮液助劑；表面活性劑、等滲劑、 增稠劑或乳化劑、防腐劑、固體粘合劑、潤滑劑和適合需要的具體劑 型的類4以物。Remington's Pharmaceutical Sciences, 第 16版,E. W. Martin (Mack Publishing Co.， Easton， Pa., 1980)公開了用於配製藥學上 可接受的組合物的各種載體和製備其的已知技術。除作為不與本發明 化合物配伍的任何常規載體介質例如通過產生任何有害生物作用或 按有害方式與藥學上可接受的組合物的任何其它成分相互作用外，考慮其用途在本發明範圍內。可作為藥學上可接受的載體物質的某些實例包括但不限
於離子交換劑、氧化鋁、硬脂酸鋁、卵磷脂；血清蛋白例如人血清白 蛋白；緩衝物質例如磷酸鹽、甘氨酸、山梨酸或山梨酸鉀、飽和植物 脂肪酸的部分甘油酯混合物、水、鹽或電解質例如硫酸魚精蛋白、磷 酸氫二鈉、磷酸氫鉀、氯化鈉、鋅鹽、矽膠、三矽酸鎂、聚乙烯吡咯 烷酮、聚丙烯酸酯、蠟、聚乙烯-聚氧丙烯嵌段聚合物、羊毛脂；糖例 如乳糖、葡萄糖和蔗糖；澱粉例如玉米澱粉和馬鈴薯澱粉；纖維素及 其衍生物例如羧甲基纖維素鈉、乙基纖維素和乙酸纖維素；黃芪膠粉 末；麥芽；明膠；滑石粉；賦形劑例如可可豆脂和栓劑蠟；油例如椰 子油、棉籽油；紅花油；芝麻油；橄欖油；玉米油和大豆油；二元醇； 例如丙二醇或聚乙二醇；酯例如油酸乙酯和月桂酸乙酯；瓊脂；緩沖 劑例如氫氧化鎂和氫氧化鋁；藻酸；無熱原水；等滲鹽水；林格氏液； 乙醇和磷酸鹽緩沖液，以及其它無毒可配伍潤滑劑例如十二烷基硫酸 鈉和硬脂酸鎂，以及著色劑、脫模劑、包衣劑、甜味劑、矯味劑和香 精，也可根據配製配方設計師的判斷將防腐劑和抗氧劑加入組合物。
可將蛋白激酶抑制劑或其藥用鹽配製成給予動物或人的 藥用組合物。含有效治療或預防蛋白激酶介導的病症的量的蛋白抑制 劑和藥學上可接受的載體的這些藥用組合物是本發明的另 一個實施 方案。在某些實施方案中，所述蛋白激酶介導的病症是PLK介導的病 症。治療需要的化合物的確切量因患者而異，取決於患者的種 族、年齡和一般狀況；感染的嚴重程度、具體藥物、給藥模式等。優 選將本發明化合物配製為便於給藥和劑量均 一 性的劑量單位形式。本 文中使用的表述"劑量單位形式"是指適合所治療患者的藥物的物理分 離單位。但是，可以理解，本發明化合物和組合物的每日用法須由主 治醫師在合理的醫學判斷範圍內決定。對於任何具體患者或生物體的 特定有效劑量水平要取決於多種因素，這些因素包括所治療的病症和 病症的嚴重程度；所使用的具體化合物的活性；所使用的具體組合物； 患者的年齡、體重、 一般健康、性別和飲食；給藥時間、給藥途徑和 所使用的具體化合物的排洩途徑；療程；與所用的具體化合物聯用或同時使用的藥物；和醫學領域中熟知的類似因素。本文中使用的術語 "患者"表示動物，優選哺乳動物，最優選人。可通過以下途徑給予人和其它動物本發明藥學上可接受 的組合物口服、直腸、腸胃外、腦池內、陰道內、腹膜內、局部(如 通過散劑、軟膏劑或滴劑)、含服、口腔或鼻噴霧或取決於所治療感染 嚴重程度的類似方式。在某些實施方案中，可按約0.01 mg/kg-約50 mg/kg，優選約1 mg/kg -約25 mg/kg患者體重/日劑量水平，口服或腸 胃外給予本發明化合物，每日一次或多次，得到需要的療效。用於口服給藥的液體劑型包括但不限於藥學上可接受的 乳液、微乳、溶液、混懸液、糖漿和酏劑。除活性化合物外，液體劑 型可含本領域中常用的惰性稀釋劑，例如水或其它溶劑；增溶劑和乳 化劑例如乙醇、異丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苯曱醇、苯曱酸苄酯、 丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基曱醯胺、油(尤其棉籽、落花生、玉米、 胚芽、橄欖、蓖麻和芝麻的油)、甘油、四氫糠醇、聚乙二醇和脫水山 梨醇的脂肪酸酯及其混合物。除惰性稀釋劑外，口服組合物也可包含 助劑例如溼潤劑、乳化劑和懸浮劑、甜味劑、矯味劑和香精。可按照已知技術，用合適的分散或溼潤劑和懸浮劑配製注 射製劑，例如無菌注射水或油混懸劑。無菌注射製劑也可是用無毒腸 胃外可接受的稀釋劑或溶劑配製的無菌注射溶液、混懸液或乳液，例 如以1，3-丁二醇為溶劑的溶液。其中，可使用的可接受的溶^ 某和溶劑 是水、林格氏液、U.S.P.和等滲氯化鈉溶液。另外，無菌非揮發性油 通常用作溶劑或懸浮介質。因此，可使用任何非刺激性非揮髮油，它 們包括合成甘油單酯或甘油二酯。另外，脂肪酸例如油酸還用於製備 注射劑。例如通過除菌濾器或通過加入無菌固體組合物形式的殺 菌劑，將注射劑滅菌，臨用前，可將無菌固體組合物溶於或分散於無 菌水或其它無菌注射介質。為延長本發明化合物的作用，通常需要延緩通過皮下或肌 內注射的化合物的吸收。可通過使用水溶性差的結晶或無定形物質的 液體混懸液實現。然後化合物的吸收速度取決於其溶出速度，溶出速 度又可取決於結晶大小和晶型。或者，可通過將化合物溶於或懸浮於 油溶媒，完成延遲吸收的腸胃外給藥的化合物形式。通過在可生物降
43解聚合物例如聚丙交酯-聚乙交酯中形成化合物的微嚢骨架製備注射 貯庫形式。根據化合物與聚合物的比例和具體使用的聚合物的性質， 可控制化合物的釋放速度。其它可生物降解的聚合物的實例包括聚(原 酸酯)和聚(酐)。也可通過用與身體組織相容的脂質體或微乳捕獲化合 物，製備貯庫注射製劑。用於直腸或陰道給藥的組合物優選為栓劑，可通過使本發 明化合物與合適的非刺激性賦形劑或載體混合，製備栓劑，例如在環 境溫度下為固體但在體溫下為液體因此在直腸或陰道腔熔化和釋放 活性化合物的可可豆酯、聚乙二醇或栓劑蠟。用於口服給藥的固體劑型包括膠嚢劑、片劑、丸劑、散劑 和顆粒劑。在此類固體劑型中，活性化合物與至少一種惰性藥學上可 接受的賦形劑或載體例如檸檬酸鈉或磷酸氫二 4丐和/或以下物質混合:
a) 填充劑或補充劑例如澱粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和矽酸，
b) 粘合劑例如羧甲基纖維素、藻酸鹽、明膠、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖 和阿拉伯膠，c)保溼劑例如甘油，d)崩解劑例如瓊脂-瓊脂、碳酸鈣、 馬鈴薯或木薯澱粉、藻酸、某些矽酸鹽和碳酸鈉，e)溶液阻滯劑例如 石蠟，f)吸收促進劑例如季銨化合物，g)溼潤劑例如鯨蠟醇和甘油 單硬脂酸酯，h)吸收劑例如高嶺土和皂土，和i)潤滑劑例如滑石粉、 硬脂酸鈣、硬脂酸鎂、固體聚乙二醇、十二烷基硫酸鈉及其混合物。 在膠嚢劑、片劑和丸劑的情況下，劑型也可包含緩沖劑。相似種類的固體成分也可用作軟和硬填充明膠膠嚢中的 填充劑，在此類膠嚢中使用此類賦形劑如乳糖或奶糖(milk sugar)和高 分子量聚乙二醇等。可用包衣劑和殼例如腸溶包衣劑和藥劑領域中熟 知的其它包衣劑製備固體劑量形式的片劑、糖錠劑、膠嚢劑、丸劑和 顆粒劑。它們可任選含遮光劑並也可為以下組合物該組合物僅在或 優先在腸道的某個部分任選以緩釋方式釋放活性成分。可使用的包埋 成分的實例包括高分子物質和蠟。相似種類的固體成分也可用作軟和 硬填充明膠膠嚢中的填充劑，此類膠嚢使用此類賦形劑如乳糖或奶糖 和高分子量聚乙二醇等。活性化合物也可以是含一種或多種上述賦形劑的微嚢形 式。可用包衣劑和殼例如腸溶包衣劑、控釋包衣劑和藥劑領域中熟知 的其它包衣劑製備固體劑量形式的片劑、糖錠劑、膠嚢劑、丸劑和顆
44粒劑。在此類固體劑型中，活性化合物可與至少一種惰性稀釋劑例如 蔗糖、乳糖或澱粉混合。按其通常慣例，此類劑型還可包含非惰性稀 釋劑的其它物質，例如壓片潤滑劑和其它壓片助劑如硬脂酸鎂和微晶 纖維素。在膠嚢劑、片劑和丸劑的情況下，劑型也可包含緩沖劑。它 們可任選含遮光劑並也可為以下組合物該組合物〗又在或優先在腸道 的某個部分任選以緩釋方式釋放活性成分。可使用的包埋成分的實例 包括高分子物質和蠟。用於局部或透皮給予本發明化合物的劑型包括軟膏劑、糊 劑、霜劑、洗劑、凝膠劑、散劑、溶液劑、噴霧劑、吸入劑或貼劑。 在無菌條件下，將活性成分與藥學上可接受的載體和可能需要的任何 防腐劑或緩衝劑混合。還可考慮眼藥製劑、滴耳劑和滴眼劑在本發明 的範圍內。另外，本發明還考慮使用透皮貼劑，該透皮貼劑具有提供 控制遞送化合物至身體的額外優點。可通過將化合物溶於或分散於合 適介質製備此類劑型。也可用吸收促進劑增加透過皮膚的化合物通 量。可通過提供速度控制膜或通過使化合物分散在聚合物基質或凝膠 中，控制速度。除本發明化合物外，也可在組合物中使用本發明化合物的 藥學上可接受的衍生物或前藥，治療或預防以上確定的病症。本發明的化合物還可以以藥學上可接受的衍生物的形式存在。"藥學上可接受的衍生物"是給予有需要的患者後可直接或
生物。藥、學上可接受的衍生物的^例包括但不 艮於酯^此類酯的I 。
"藥學上可接受的衍生物或前藥"表示給予接受者後本發明 化合物的酯或其它衍生物的任何藥學上可接受的酯、鹽能夠直接或間 接提供本發明化合物或抑制性活性代謝物或其殘基。尤其有利的衍生 物或前藥是與母體化合物相比，當給予患者此類化合物(例如通過讓口 服給予的化合物更容易吸收到血液中)時，增加本發明化合物生物利用 度或促使母體化合物遞送到生物房室(例如腦或淋巴系統)的那些物 質。本發明化合物的藥學上可接受的前藥包括但不限於酯、氨 基酸酯、磷酸酯、金屬鹽和磺酸酯。
45
可用於這些藥用組合物的藥學上可接受的載體包括但不 限於離子交換劑、氧化鋁、硬脂酸鋁、卵磷脂；血清蛋白例如人血清 白蛋白、緩沖物質例如磷酸鹽、甘氨酸、山梨酸、山梨酸鉀、飽和植 物脂肪酸的部分甘油酯混合物、水、鹽或電解質例如硫酸魚精蛋白、 磷酸氫二鈉、磷酸氫鉀、氯化鈉、鋅鹽、矽膠、三矽酸鎂、聚乙烯吡 咯烷酮、纖維素類物質、聚乙二醇、羧曱基纖維素鈉、聚丙烯酸酯、 蠟、聚乙烯-聚氧丙烯-嵌段聚合物、聚乙二醇和羊毛脂。可通過口服、腸胃外、吸入噴霧、局部、直腸、鼻、含服、 陰道或植入貯庫給予本發明組合物。本文中使用的術語"腸胃外"包括 但不限於皮下、靜脈內、肌內、關節內、滑液內、胸骨內、鞘內、肝 內、損害內和顱內注射或輸注技術。優選，通過口服、腹膜內或靜脈 內給予組合物。無菌注射形式的本發明組合物可以是水或油性混懸液。可 按照本領域已知技術，用合適的分散劑或溼潤劑和懸浮劑配製這些混 懸液。這種無菌注射製劑也可以是用無毒腸胃外可接受的稀釋劑或溶 劑配製的無菌注射溶液或混懸液，例如用1,3-丁二醇製備的溶液。其 中可使用的可接受的溶媒和溶劑是水、林格氏液和等滲氯化鈉溶液。 另外，無菌非揮發性油通常用作溶劑或懸浮介質。因此，可使用任何 非刺激性非揮髮油，它們包括合成甘油單酯或甘油二酯。脂肪酸例如 油酸及其甘油酯衍生物可用於製備注射劑，天然的藥學上可接受的油 例如橄欖油或蓖麻油，尤其它們的聚氧乙烯化形式也可用於該製劑。 這些油溶液或混懸液也可含長鏈醇稀釋劑或分散劑，例如在藥學上可 接受的劑型配製中常用的羧甲基纖維素或類似分散劑，這些劑型包括 乳劑和混懸劑。在製備藥學上可接受的固體、液體或其它劑型中常用 的其它常用的表面活性劑例如吐溫、司盤和其它乳化劑或生物利用度 促進劑也可用於製劑。可以任何口服可接受的劑型，通過口服給予本發明藥用組 合物，這些劑型包括但不限於膠嚢劑、片劑、水混懸劑或溶液劑。在 口服片劑中，常用的載體包括但不限於乳糖和玉米澱粉。通常也可加 入潤滑劑例如硬脂酸鎂。對於口服給予的膠嚢形式，有用的稀釋劑包 括乳糖和幹玉米澱粉。當需要口服給予水混懸液時，將活性成分與乳 化劑和懸浮劑混合。如果需要，也可加入某些甜味劑、矯味劑或著色劑。或者，可通過直腸以栓劑形式給予本發明藥用組合物。可 通過將藥物與合適的非刺激性賦形劑混合，製備這些栓劑，所述賦形 劑在室溫下為固體但在直腸溫度下為液體，因此在直腸中融化釋放藥 物。此類物質包括但不限於可可豆脂、蜂蠟和聚乙二醇。也可局部，尤其當治療靶標包括易通過局部塗藥到達的部 位或器官時，給予本發明藥用組合物，這些靶標包括發生疾病的眼睛、 皮膚或下腸道。可容易地製備用於各這些部位或器官的合適的局部制 劑。可通過直腸栓劑(見以上)或合適的灌腸劑實現用於下腸道 的局部給藥。也可使用局部透皮貼劑。為局部給藥，可將藥用組合物配製成合適的軟膏，該軟膏 含懸浮或溶於一種或多種載體中的活性成分。用於局部給予本發明化 合物的載體包括但不限於礦物油、液體凡士林、白凡士林、丙二醇、 聚氧乙烯、聚氧丙烯化合物、乳化蠟和水。或者，可將藥用組合物配 製成合適的洗劑或霜劑，它們含有懸浮或溶於一種或多種藥學上可接 受的載體中的活性成分。合適的載體包括但不限於礦物油、司盤-60、 吐溫60、十六烷基酯蠟、十六醇十八醇混合物(cetearyl alcohol)、 2-辛基十二醇、苯曱醇和水。可在等滲調pH的無菌鹽水中將藥用組合物配製成眼用微 粉化混懸液，或優選在含或不含防腐劑例如苯扎氯銨的等滲調pH的 無菌鹽水中配製成眼用溶液。或者，可在軟膏例如凡士林中配製眼用 藥用組合物。也可通過鼻噴霧劑或吸入給予本發明藥用組合物。按照藥 劑領域中熟知的技術製備此類組合物，可用鹽水製備溶液，用苯曱醇 或其它合適的防腐劑、增加生物利用度的吸收促進劑、碳氟化合物和 /或其它常用穩定劑或分散劑。可與載體物質組合得到單 一 劑型的蛋白激酶抑制劑的量 取決於所治療的宿主、具體給藥才莫式而變。優選，應按0.01-100 mg 抑制劑/kg體重/日劑量給予接受這些組合物的患者，配製組合物。還應理解，用於任何具體患者的特定劑量和治療方案取決 於多種因素，它們包括所使用的特定化合物的活性、年齡、體重、一般健康狀況、性別、飲食、給藥時間、排洩速度、聯合藥物、主治醫 師的判斷和所治療的具體疾病的嚴重程度。抑制劑的量還取決於組合 物中的具體化合物。按照另一個實施方案，本發明提供治療或預防蛋白激酶介
導的病症(在某些實施方案中，為PLK介導的病症)的方法，該方法包 括給予患者上述藥用組合物之一的步驟。本文中使用的術語"患者"表 示動物，優選人。在某些實施方案中，所述方法用於治療或預防選自以下的 病症增殖疾病如癌症、神經變性疾病、自身免疫性疾病、炎性疾病、 免疫介導的疾病。在某些實施方案中，用該方法治療或預防選自例如 以下癌症的病症乳腺、結腸、前列腺、皮膚、胰腺、腦、泌尿生殖 道、淋巴系統、胃、喉的癌症和包括肺腺癌和小細胞肺癌在內的肺癌； 中風、糖尿病、骨髓瘤、肝腫大、心肥大、早老性痴呆、嚢性纖維變 性和病毒性疾病，或上述任何具體疾病。 —般而言，可通過本領域技術人員已知的方法製備本發明 化合物。可通過已知方法分析那些化合物，這些方法包括但不限於 LCMS (液相色譜質譜)和NMR (核磁共振)。也可按照這些實例測試本 發明化合物。應理解，以下所示特定條件僅為實例，而不應限制這些 可用於製備、分析或測試本發明化合物的條件的範圍。另外，本發明 還包括本領域技術人員已知的製備、分析和測試本發明化合物的條 件。
實施例本文中使用的術語"Rt(分鐘)"是指與化合物有關的HPLC 保留時間，以分鐘為單位。除另有說明外，得到報導的保留時間所使 用的HPLC方法如下
柱ACEC8柱，4.6x150 mm
梯度0-100o/。乙腈 +曱醇60: 40 (20mM三磷酸酯(Tris phosphate))
流速1.5mL/分鐘 才企測波長225 nm。在MicroMass Quattro Micro質語分光計上分析質譜樣品， 按電噴霧離子化下的單MS模式操作。用色譜方法將樣品引入質譜分光計。用Bruker DPX 400儀，在400 MHz下記錄！H-NMR圖譜
並且以ppmS進行報導。如下製備並分析以下式I化合物。
實施例1:
4-((R)-5-環戊基-4-乙基-4，5-二氫-[l，2，4]三唑並[4,3-f]蝶啶-7-基氨 基)-3-曱氧基-N-曱基苯曱醯胺(I-1)
formula see original document page 49
方法A: (R)-7-氯.
formula see original document page 49
在110°C攪拌(R)-2-氯-8-環戊基-7-乙基-7,8-二氫蝶啶-6(5H)-酮 (100mg, 0.357mmol)/三氯氧化磷(3.0mL)3小時，然後在減壓下濃縮。 將殘餘物溶解在無水二氯曱烷中並且將其滴加到1.0M肼/THF(3.6mL, 3.57mmo1)。在室溫攪拌該混合物過夜，；改入乙酸乙酯，用石友酸氬鈉水 溶液洗滌，用硫酸鎂乾燥並且濃縮。將粗製的醯肼的殘餘物溶解在原 曱酸三曱酯(2.0mL)中並且在110。C攪拌90min。在減壓下濃縮混合物， 並且純化，通過快速色譜法，在矽膠上，用乙酸乙酯洗脫，而得到(R)-7-氯-5-環戊基-4-乙基-4，5-二氫-[l,2，4]三唑並[4，3-f]蝶啶(68mg, 63%),淡 褐色固體；
NMR (DMSO D6) 0.75 (3H, t), 1.50-1.64 (2H, m)， 1.80-2.08 (8H, m)， 4.22-4.33 (1H, m)， 5.28-5.35 (1H, m)， 8.68 (1H， s)， 9.35 (1H, s); MS (ES+) 305.方法B: 4-((R)-5-環戊基-4-乙基-4,5-二氫-[l，2，4]三唑並[4，3-f]蝶啶 -7-基氨基)-3-甲氧基-N-曱基苯曱醯胺(I-1)
向(R)-7-氯-5-環戊基-4-乙基-4,5-二氫-[l，2,4]三唑並[4,3-f]蝶啶 (80mg, 0.263mmol)/乙醇/水(1/4， 5mL)混合物的溶液中添加4-氨基-3-曱氧基—N-甲基苯甲醯胺(72mg， 0.394mmo1)，隨後添加催化量的濃 HCl(0.04mL)。在90。C攪拌反應混合物24小時，然後冷卻至室溫並 且用飽和的NaHC03水溶液鹼化。用乙酸乙酯萃取混合物，乾燥 (MgS04)有機層並且通過快速色譜法純化殘餘物而得到標題化合物， 無色固體(92mg， 78%收率)。
呈現為游離鹼。
& NMR (DMSO D6) 0.75 (3H， t)， 1.43-1.60 (4H， m), 1.80-2.07 (6H, m)， 2.80 (3H, d), 3.88 (3H, s), 4.19 (1H, m)， 5.38 (1H， m)， 7.50 (1H， d)， 7.59 (1H, s), 7.83 (1H， d), 8,47 (1H， m), 8.67 (1H， s), 9.31 (1H， s)， 9.40 (1H， br s); MS (ES*) 449.
實施例2:
4-((R)-5-環戊基-4-乙基-4,5-二氫-[l，2，4]三唑並[4，3-f]蝶啶-7-基氨 基)-3-曱氧基-N-(l-甲基哌啶-4-基)苯曱醯胺(I-2)
N H
N八0 H
1-2
使用方法B來製備，呈現為游離鹼。
50'H雨R (DMSO D0) 0.73 (3H， t), 1.52-2.11 (15H, m), 2.25 (3H, s), 2.80-2.92 (2H， m), 3.27-3.32 (1H， m), 3.72-3,82 (1H， m)， 4.37-4.47 (1H, m)， 5.16-5.22 (1H， m), 7.46-7.51 (2H， m), 7.94 (1H, s), 8.12 (1H, d), 8.27 (1H, d), 8.61 (1H, s), 9.25 (1H， s); MS (ES"1") 532.
實施例3: 4-((R)-5-環戊基-4-乙基-4，5-二氫-[l,2，4]三唑並[4，3畫f] 蝶啶-7-基氨基)-3-氯苯甲酸(I-3)
使用方法B來製備，呈現為游離石威。
MS (ES+) 440; (ES〕 438.
實施例4
方法C: 4-((R)-5-環戊基-4-乙基-4,5-二氫-[l，2,4]三唑並[4，3]蝶啶 -7-基氨基)-3-氯-^曱基苯甲醯胺(I-4)
將4-((R)-5-環戊基-4-乙基-4，5-二氫-[l,2,4]三唑並[4,3-f]蝶啶-7-基 氨基)-3-氯苯曱酸(I-3)(27mg)溶解在DMF(0.4mL)中並且用羰基二咪唑 (12mg， 0.077mmol)處理並且混合物在室溫下攪拌90min。在水浴中冷 卻溶液並且鼓泡入曱胺氣體2min。在室溫攪拌該混合物2小時，在降 低的壓力蒸發並且通過色譜法提純而得到4-((11)-5-環戊基-4-乙基-4，5-二氫-[1，2，4]三唑並[4，3-f]蝶啶-7-基氨基)-3-氯-N-曱基苯曱醯胺 (15mg),無色固體。
呈現為游離^5威。
N H'H NMR (DMSO Db) 0.71 (3H， t)， 1.37-2.05 (IOH， m)， 2.80 (3H， s)， 4.12-4.25 (1H， m)， 5.20-5.31 (1H, m), 7.88 (1H， d)， 8.00 (1H， d)， 8.05 (1H, s), 8.50-8.55 (1H, m), 8.60 (1H: s)' 8.97 (IH, br s)， 9.35 (1H, s); MS (ES" 453， (ES-) 451.
4-((R)-5-環戊基-4-乙基-4，5-二氫-[l,2，4]三唑並[4,3]蝶啶-7-基氨 基)-N,N,3-三曱基苯曱醯胺(I-5)
用羰基二咪唑(3.22g, 1.2Eq.)攪拌3-曱基-4-硝基苯甲酸(3.0g， 16.56mmol)/DMF(30ml)90min。在冰浴中冷卻反應混合物，添加二曱 胺(2M/THF, 25mL， 3 Eq.)。然後允許混合物升溫至室溫並且攪拌2小 時。將混合物倒在冰水(200ml)上並且用EtOAc(X6)萃取。將合併的萃 取物用鹽水洗滌，用MgS04乾燥，過濾和蒸發。用醚研磨(Tritration), 隨後過濾，得到N，N,3-三曱基-4-硝基苯曱醯胺(2.6g,無色固體)；MS (ES+) 209。
方法E: 4-氨基-N，N,3-三曱基苯曱醯胺
使用H-cube裝置氫化N，N,3-三曱基-4-硝基苯曱醯胺(0.6g， 2.88mmol)/曱醇(1.2mL/min，室溫，大氣壓力)。45分鐘後，完成反應。
實施例在真空中除去溶劑得到4-氨基-N,N，3-三甲基苯甲醯胺，無色固體(定 量)；MS (ES+) 179。
4-((R)-5-環戊基-4-乙基-4,5-二氫-[l，2，4]三唑並[4,3]蝶啶-7-基氨 基)-N,N，3-三曱基苯曱醯胺(I-5)
I
1-5使用方法B來製備，呈現為游離44。
NMR (DMSO D6) 0.69 (3H, t)， 1-25-1.45 (4H， m)， 1.70-2.05 (6H， m), 2.27 )3H, s)， 2.97 (6H， s)， 4.08-4.15 (1H, m)， 5.30-5.37 (1H， m)， 7.29 (1H， d), 7.36 (1H， s), 7.46 (1H， d), 8.62 (1H, s)， 9.33 (1H, s), 9.75 (1H, br s); MS (ES" 447, (ES') 445.
實施例6:
4-((R)-5-環戊基-4-乙基-4,5-二氫-[l，2，4]三唑並[4，3]蝶啶-7-基氨 基)-N，3-二甲基苯曱醯胺(I-6)
I國6
N,3-二曱基-4-硝基苯曱醯胺
使用方法D來製備 4-氨基-N,3-二曱基苯曱醯胺
53使用方法E來製備，呈現為游離鹼。
4-((R)-5-環戊基-4-乙基-4,5-二氫-[l,2，4]三唑並[4，3]蝶啶-7-基氨 基)-N,3-二曱基苯曱醯胺(I-6)
1-6
使用方法B來製備，呈現為游離鹼。 'H NMR(DMSO D6) 0.68 (3H， t)， 1.15-1.35 (4H， m)， 1.65-2.05 (6H， m), 2.26 (3H， s)，
2.78 (3H， s), 4.03-4.17 (1H, m), 5.36-5.43 (1H， m), 7.52 (1H， d), 7.76 (1H， d)， 7.卯(1H,
s)， 8.52-8.57 (1H, m)， 8.74 (1H, s)， 9.39 (1H, s>， 10,13 (1H， s); MS (ES+) 433, (ES， 431.
實施例7:
4-((R)-5-環戊基-6-乙基-5，6-二氫咪唑並[l，2)蝶啶-3-基氨基)-3-曱 氧基-N-曱基苯甲醯胺(I-7)
N人0 H
1-7
方法F: (R)-2-氯-8-環戊基-7-乙基-7,8-二氬蝶。定-6-胺
54加熱(R)-2-氯-8-環戊基-7-乙基-7,8- 二氫蝶啶-6(5H)-酮(200mg, 0.714mmol)/POCl3(6mL)至100°C達4.5小時。在真空中除去溶劑，並 且用乾燥曱苯共沸兩次。將殘餘物溶解在乾燥CH2Cl2(1.5mL)中並且 滴加到THF(5ml)並且在液體NH3(4.2g)中。在室溫攪拌反應混合物過 周末。將反應混合物倒在冰水上並且用EtOAc萃取X3。在真空中濃 縮合併的有機萃取物而得到(R)-2-氯-8-環戊基-7-乙基-7，8-二氫蝶啶 -6-胺，棕色油(181mg)。 MS (ES+) 280， (ES-) 278.
方法G: (R)-3-氯-5-環戊基-6-乙基-5,6-二氫咪唑並[l,2-f]蝶啶
用50%氯乙醛水溶液(131(^, 1.3 Eq.)處理(R)-2-氯-8-環戊基-7-乙 基-7，8-二氬蝶啶-6-胺(177mg， 0.64mmol)/MeOH(1.5mL)並且加熱反應 混合物來回流6小時。添加另一部分的50。/。氯乙醛水溶液(400^iL, 3.0 Eq.)，將反應混合物加熱到68。C過夜。添加NaHC03(飽和水溶液)和 EtOAc,進一步用EtOAc萃取該水溶液。用MgS04乾燥合併的有機萃 取物，過濾，在真空中濃縮。
MS (ES+) 304。
4-((R)-5-環戊基-6-乙基-5,6-二氫咪唑並[l，2)蝶啶-3-基氨基)-3-曱 氧基-N-曱基苯甲醯胺(I-7)
1-7
使用方法B來製備，呈現為游離石威。
'H NMR (DMSO D6) 0.66 (3H， t)， 1.55-2.13 (認，m)， 2.79 (3H, d)， 3.94 (3H， s), 4.35-4.4g (1H, m)， 4.98-5.07 (1H， m), 7.13 (1H， s)， 7.45-7.53 (2H, m)， 7.79 (1H， s)， 7.86 (1H: s)， 8,25-8,38 (2H, m), 8.45 (1H， s); MS (ES+) 448， MS (ES-) 446.
N H實施例8:
(R)-4-(5-環戊基-4-乙基-4,5-二氫-[l,2,4]三唑並[4,3-f]蝶啶-7-基氨 基)-N—環丙基-3-曱氧基苯甲醯胺(I-8)
使用方法B來製備，呈現為游離鹼。
NMR DMSO D6 0.56-0.59 (2H， m)， 0.68-0.73 (5H， m), 1.55-2.10 (10H, m)， 2.82 (1H， m), 3.92 (3H, s)， 4.42 (1H， m)， 5.21 (1H, m)， 7.46-7.48 (2H, m), 7.95 (1H, s), 8.26 (1H， d), 8.35 (1H, d)， 8.59 (1H, s), 9.25 (1H， s); HPLC rt(min): 8.91; MS (ES" 475， (ES， 474.
實施例9:
4-((R)-5-環戊基-4-乙基-4，5-二氫-[l，2,4]三唑並[4，3-f]蝶啶-7-基氨 基)-3-曱氧基-N-((R)-四氫呋喃-3-基)苯曱醯胺(I-9)
使用方法B來製備，呈現為游離鹼。 NMR DMSO D6 0.71 (3H， t)， 1.55-2.20 (12H， m), 3.60 (1H, dd), 3.72 (1H, m)， 3.87
(2H, m)， 3.94 (3H， s)， 4.40-4.53 (2H， 5.22 (1H， m), 7.51-7.54 (2H, m), 7.96 (1H, s),
8.30 (1H， m)， 8.42 (1H， d)， 8.60 (1H, s)， 9.25 (1H， s); HPLC rt(min): 8.63; MS (ES, 505.
實施例10:
(R)-N-環戊基-4-(5-環戊基-4-乙基-4，5-二氫-[l,2，4]三唑並[4,3-f]蝶 啶-7-基氨基)-3-甲氧基苯曱醯胺(1-10)
formula see original document page 56N H
使用方法B來製備，呈現為游離鹼。 'H NMRDMSO D6 0.71 (3H， t)， 1,48-1.65 (6H, m)， 1.67-2.09 (12H， m), 3.93 (3H， s),
4.214.26 (1H， m), 4.42 (1H, quin), 5.20-5.22 (1H, m), 7.49-7.51 (2H, m), 7.95 (1H， s),
8.16 (1H, d), 8.29 (1H， d), 8.59 (1H， s)， 9.25 (1H， s); HPLC rt(min): 9.76; MS (ES+) 503，
0SS-)501.
實施例11:
(R)-4-(5-環戊基-4-乙基-4，5-二氫-[l,2，4]三唑並[4,3-f]蝶啶-7-基氨 基)-N—環丙基苯曱醯胺(I-11)
使用方法B來製備，呈現為游離石鹹。 lH NMR DMSO D6 0.53-0.57 (2H， m)， 0.63-0.73 (5H， m)， 1.59-1.99 (9H, m)， 2,06-2.15 (1H, m)， 2.79-2.83 (1H, m)， 4.48-4.55 (1H, m)， 5.21 (1H, dd)， 7.737.80 (4H， ra)， 8.26 (1H， d), 8.60 (1H, s), 9.25 (1H， s)， 9.65 (1H, s); HPLC rt(min): 8.36; MS (ES+) 445， (ES") 443.
實施例12:
(4-((R)-5-環戊基-4-乙基-4,5-二氫-[l,2,4]三唑並[4,3-f]蝶啶-7-基氨 基)-3_曱氧苯基)((S)-L氟代吡咯烷-l-基)曱酮(I-12)
N
H
57使用方法B來製備，呈現為游離鹼。 !H NMR DMSO D6 0.70 (3H， t)， 1.50-1.62 (2H, m), 1.69-2.23 (10H, m)， 3.53-3.84 (4H，
m), 3.卯(3H， s), 4.38 (1H, t)， 5.20 (1H, dd), 5.40 (1H， dd)， 7.15 (1H， d)， 7.20 (1H， d), 7.99
(1H, s), 8.20 (1H， s)' 8.57 (1H， s)， 9.25 (1H， s); HPLC rt(min): 8.94; MS (ES, 507， (ES3
505,
實施例13:
(R)-4-(5-環戊基-4-乙基-l-曱基-4,5-二氫-[l，2,4]三唑並[4，3-f]蝶啶 -7-基氨基)-N-環丙基-3-甲氧基苯曱醯胺(1-13)
使用方法B來製備，呈現為游離鹼。 !H NMR DMSO D6 0.55-0.60 (2H， m), 0.69-0.78 (5H, m), 1.55-2.10 (10H, m)， 2.68 (3H， s)， 2.82 (1H, m), 3.93 (3H, s)， 4.48 (1H, quint)， 5.01 (1H， dd), 7.46-7.49 (2H， m)， 7.94 (1H， s)， 8.30 (1H， d), 8.35 (1H， d)， 8.45 (1H， s); HPLC rt(min): 9.12; MS (ES、 490， (ES， 488.
實施例14:
(R)-4-(5-環戊基-4-乙基-4，5-二氫-[l，2，4]三唑並[4,3-f]蝶啶-7-基氨 基)—N-環丙基-S-氟苯曱醯胺(I-l4)
N H
58NH
使用方法C來製備，呈現為游離^5威。'H NMR DMSO D6 0.55-0.59 (2H， m), 0.67-0.73 (5H, tn), 1.46-1.95 (10H, m)， 2.84 (1H，
m), 4.30 (1H, quint), 5.18 (1H， dd)， 7.64-7.70 (2H, m), 7.91 (1H， t), 8.41 (1H， d), 8.55
(1H, s)， 9.02 (1H， s), 9.24 (1H, s); HPLC rt(min): 8.58; MS (ES+) 464， (ES-) 462,
實施例15:
(R)-5-(5-環戊基-4-乙基-4,5-二氫-[l，2,4]三唑並[4，3-f]蝶啶-7-基氨基)-N-環丙基蓬吩-2-曱醯胺(I-15)
一"
4吏用方法B來製備，呈現為游離石威。'H僱R DMSO D6 0.48-0.54 (2H, m)， 0.63-0.74 (5H, m)， 1.65-1.95 (IOH， m), 2.74 (1H，
m)， 4.83 (1H， br s)， 5.24 (1H， dd), 7.58 (1H, d)， 7.47 (1H， d), 8.14 (1H, d), 8.63 (1H， s)，
9.24 (1H， s), 10.83 (1H， br s); HPLC rt(min): 8,17; MS (ES+) 452, (ES') 450.
實施例16:
(R)-4-(5-環戊基-4-乙基-4,5-二氫-[l,2，4]三唑並[4，3-f]蝶啶-7-基氨基)-3-氟-N-甲基苯曱醯胺(I-16)
NH使用方法C來製備，呈現為曱磺酸鹽。
方法H:甲磺酸鹽形成
將游離鹼(38.2mg, 0.088mmol)溶解在熱曱醇(3ml)中並且用曱烷磺酸(5.68fxL, 0.088mmol)處理，在降低的壓力蒸發並且用二乙醚共沸3次。用醚研磨殘餘物並且過濾而得到曱烷磺酸鹽(50.4mg)。
NMR DMSO D6 0.69 (3H, t), 1.35-1.55 (4H, m), 1.70-2.0 (6H, m), 2.33 (3H, s)， 2.79(3H， d), 4.24 (1H， quint), 5.25 (1H， dd), 7.69-7.73 (2H， ra), 7.84 (1H, t), 8.48 (1H， q), 8.57(1H, s)， 9.28 (1H， s), 9.39 (1H, s); HPLC rt(min): 8.07; MS (ES+) 438, (ES") 436.
實施例17:
(R)-4-(5-環戊基-4-乙基-4，5-二氫-[l，2,4]三唑並[4，3-f]蝶啶-7-基氨基)-N-aS-二氟環丁基"-曱氧基苯甲醯胺(I-l7)
使用方法B來製備，呈現為曱磺酸鹽(方法H)。NMR DMSO D6 0.70 (3H, t), 1.42-1.70 (4H, m)， 1.75-2.04 (6H, m)， 2,33 (3H， s)， 2.70-2.85 (2H, m)， 2.卯-3.20 (2H， m)， 3.92 (3H, s), 4.32 (2H, m), 5.33 (1H, dd), 7.52-7.56 (2H，m), 7.99 (1H， d)， 8.59 (1H， s), 8.78 (1H， d), 8.98 (1H， br s), 9.30 (1H， s); HPLC rt(min):9.35; MS (ES+) 526， (ES) 524.
實施例18:
(R)-4-(5-環戊基-4-乙基-4,5-二氫-[l,2,4]三唑並[4，3-f]蝶啶-7-基氨基)-N-乙基-3-甲氧基苯曱醯胺(1-18)
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使用方法B來製備，呈現為曱磺酸鹽(方法H》'H NMR DMSOD。 0.70 (3H, t), 1.14 (3H， t), 1.45-1.67 (4H, m)， 1.77-2.30 (6H， m), 2.31(3H, s), 3.31 (2H, quint)， 3.91 (3H， s), 4.32 (1H， quint)， 5.32 (1H, dd), 7.52 (1H, dd)， 7.56(1H， d)， 7.98 (1H， br d)， 8.47 (1H， t), 8.58 (1H， s), 8.85 (1H, br s)， 9.29 (1H， s); HPLCrt(min): 8.94; MS (ES+) 463, (ES-) 461
實施例19:
(R)-4-(5—環戊基-4-乙基-4,5-二氫-[l，2,4]三唑並[4，3-f]蝶啶-7-基氨基)-N-乙基J-氟苯曱醯胺(I-l9)
使用方法C來製備，呈現為曱磺酸鹽(方法H)。'H NMR DMSO D6 0.70 (3H， t)， 1.13 (3H, t)， 1.38-1.55 (4H， m)， 1.75-2.00 (6H, m)， 2.32(3H, s)， 3.29 (2H， quint), 4.23 (1H' quint), 5.27 (1H, dd), 7.70-7.77 (2H, m〉， 7.83 (1H， t)，8.51 (1H， t)， 8.57 (1H， s), 9.29 (1H， s)， 9.45 (1H， br s); HPLC rt(min): 8.64; MS (ES+)452, (ES-) 450.
實施例20:
(R)-5-環戊基-4-乙基-N-(2-氟-4-(三氟曱基)苯基)-4,5-二氫-[1,2，4]三唑並[4,3-f]蝶啶-7-胺(I-20)
使用方法B來製備，呈現為曱磺酸鹽(方法H)。& NMR DMSO D6 0.69 (3H， m), 1.35-1.45 (4H， m), 1.73-2.00 (6H, m), 2.38 (3H, s),4.16 (1H, quint), 5.31 (1H, dd), 7.63 (1H， d)， 7.81 (1H， d), 7.91 (1H, t)， 8.62 (1H, s)， 9.34(1H， s)， 9.85 (1H， br s); HPLC rt(min): 10.44; MS (ES、 448, (ES-) 446.
實施例21:
方法I: (R)-4-(5-環戊基-4-乙基-4，5-二氫-[l,2，4]三唑並[4，3-f]蝶啶-7-基氨基)-N-甲基-3-(
三氟曱基)苯曱醯胺(1-21)
NH
在微波中在150。C攪拌(R)-7-氯-5-環戊基-4-乙基-4,5-二氫-[1，2，4]
三唑並[4，3-f]蝶啶(100mg, 0.329mmo1)、 4-氨基-3-三氟甲基-N-甲基苯
甲醯胺、乙酸鈀(6mg)、石友酸銫(214mg， 0.658mmol)和xanthphos(20mg)/
二氧雜環己烷(4mL)的混合物1小時。用乙酸乙酯稀釋混合物並且用
碳酸氬鈉水溶液洗滌，用硫酸鎂乾燥和濃縮。純化殘餘物，通過色鐠，
在矽膠上，用0-12%曱醇/乙酸乙酯洗脫，而得到4-((11)-5-環戊基-4-
乙基-4，5-二氫-[l,2,4]三唑並[4,3-f]蝶啶-7-基氨基)-3-三氟曱基-N-曱基
苯曱醯胺，為無色玻璃狀(70mg, 46%)。
呈現為曱磺酸鹽(方法H)。，H NMR DMSO D6 0.67 (3H, t), 0.96-1.35 (4H， m), 1.60-2.00 (6H， m), 2.34 (3H， s)， 2.83
(3H, d)， 3.卯-4.03 (1H， m)， 5.25-5.32 (1H， m)， 7.82 (1H， d)， 8.19 (1H， d)， 8.26 (1H, s),
8.57 (1H， s), 8.75 (1H， d)， 9.30 (1H, s), 9.46-9.66 (1H, br s); HPLC rt(min): 8.94; MS
(ES+) 487,
實施例22:
(11)-5-環戊基-4-乙基^-苯基-4,5-二氫-[1,2,4]三唑並[4,3-1]蝶啶-7-胺(I-22)
使用方法B來製備，呈現為游離鹼。'HNMR DMSO D6 0,69-0.73 (3H, m), 1.59 (2H, m), 1.66-1.91 (7H， m), 2.06 (1H, m)，
4.48 (1H, m), 5.18 (1H, m), 6.94 (1H, m), 7.25-7.28 (2H， m)， 7.69-7.71 (2H, m), 8.55 (1H:
s)， 9.23 (1H， s), 9.37 (1H, s); HPLC rt(min): 9.75; MS (ES+) 362, (ES") 360.
實施例23:(R)-5-環戊基-4-乙基-N-(吡啶-4-基)-4,5-二氫-[l,2,4]三唑並[4，3-f]蝶咬-7-胺(1-23)
使用方法I來製備，呈現為游離鹼。'H NMR DMSO D6 0.70-0,74 (3H， m)， 1.62-1.63 (2H, m)， 1.72-1.93 (7H, m)， 2.11 (1H，
m), 4.54 (1H, m)， 5.23 (1H， m)， 7.72 (2H, d), 8.33 (2H， d)， 8.64 (1H， s)， 9.27 (1H, s)， 9.83(1H, s); HPLC rt(min): 8.70; MS (ES+) 363， (ES-) 361.
實施例24:
(R)-4-(5-環戊基-4-乙基-4,5-二氫-[l，2,4]三唑並[4，3-f]蝶啶-7-基氨基)-3-(二氟曱基)-N-曱基苯曱醯胺(1-24)
使用方法I來製備，呈現為曱磺酸鹽(方法H)。'HNMR DMSO D6 0.69 (3H, t), 1.17-1.34 (4H， m)， 1.71-1.89 (6H， m)， 2.33 (3H, s)， 2.81(3H， d)， 4.07-4.11 (1H, tn)， 5,27-5.29 (1H， m)， 7.25 (1H， t), 7.70 (1H， d), 8.04 (1H, d),8.15 (1H， s)， 8.59 (1H, s)， 8.63-8.65 (1H, m), 9.31 (1H, s)， 9.60-9.64 (1H, m); HPLCrt(min): 8.28; MS (ES"1") 469, (ES") 467,
實施例25:
(R)-5-環戊基-4-乙基-N-(吡啶-3-基)-4，5-二氫-[l，2,4]三唑並[4，3-f]蝶。定-7-胺(1-25)
N
H
63使用方法I來製備，呈現為游離鹼。 'H NMR DMSO D6 0.69-0.73 (3H， tn)， 1.57-1.58 (2H， m)， 1.71-1.90 (7H， m), 2.07 (1H,
m)， 4.48 (1H, m), 5.20 (1H， m), 7.30 (1H, m)， 8.113-8.15 (2H, m)， 8.58 (1H, m), 8.87 (1H, d)， 9.25 (1H， s)， 9.55 (1H, s); HPLC rt(min): 8.50; MS (ES+) 363， (ES， 361.
實施例26:
方法J: (R)-5-環戊基-N-環丙基-4-乙基-4,5-二氫-[l,2,4]三唑並 [4，3-f]蝶啶-7-胺(I-26)
在140。C在微波中在密封管中加熱(11)-7-氯-5-環戊基-4-乙基-4，5-二氫-[l，2,4]三唑並[4,3-f]蝶啶(70mg， 0.23mmo1)、環丙胺(0.5mL， 7.18mmo1)、 DIPEA(0.16mL, 0.918mmol)/nBuOH(2ml)90分鐘。在真空 中濃縮反應混合物，通過反相製備HPLC純化[Waters Sunfire C18, 10pM, IOOA柱，梯度10%-95% B(溶劑A: 0.05% TFA/水；溶劑B: CH3CN),在16分鐘內，在25mL/min下]，得到標題化合物，為灰白 色粉末狀。使用碳酸氫鹽樹脂，形成游離鹼，將其冷凍乾燥而得到標 題化合物，無色固體(25.6mg， 34%收率)
呈現為游離^L
，H畫R DMSO D6 0.46 (2H， m), 0.62-0.63 (2H, m)， 0.67-0.71 (3H， m), 1.49 (2H, m)， 1.60-2.00 (8H, m), 2.64 (1H, m), 4.22 (1H， br s)， 5.U (1H, m), 7.17 (1H， m), 8.38 (1H, s), 9.16 (1H, s); HPLC rt(min): 9,15; MS (ES+) 326， (ES-) 324.
實施例27:
方法K: (11)-5-環戊基-4-乙基-4,5-二氫-[1,2,4]三唑並[4,3-幻蝶啶-7-胺(I曙27)
在微波輻射下在140。C加熱(R)-7-氯-5-環戊基-4-乙基-4,5-二氫-[1,2，4]三唑並[4,3^蝶啶(5000^, 1.64mmol)/氫氧化銨(10ml)溶液30分 鍾。在減壓下除去溶劑並且添加冷水(5ml)。在真空條件下過濾所得的 淺棕色固體並且用冷水洗滌而得到標題化合物(170mg, 36%收率)。 呈現為游離^5威。
'H NMR DMSO D6 0.69 (3H， t), 1.48-2.01 (IOH， m), 4.40 (1H, dt), 5.06 (1H, dd), 6.40 (2H, s), 8.35 (1H, s), 9.15 (1H' s); HPLC rt(min): 7.43; MS (ES^ 286.
實施例28:
方法L: (R)-5-環戊基-4-乙基-N-(吡啶-3-基)-4，5-二氫-[l，2,4]三唑 並[4，3-f]蝶啶-7-胺(I-28)
在0。C向(R)-5-環戊基-4-乙基-4,5-二氫-[l,2,4]三唑並[4，3-f]蝶啶
-7-胺(50mg， 0.175mmol)/DMF(lmL)中添加氫化鈉(600/0，在礦物油中，
7.7mg, 0.193mmo1)。攪拌反應混合物10分鐘，然後添加氯曱酸甲酯
(13.6pL， 0.175mmo1)。允許反應升溫至室溫並且攪拌18小時。添加氯
化銨(5mL,飽和水溶液)並且用EtOAc萃取(3X10mL)。將合併的有機
物用鹽水(10ml)洗滌，MgS04乾燥，過濾並且在真空條件下除去溶劑。
通過反相製備HPLC純化粗產物[Waters Sunfire C18, 10pM， IOOA柱,
梯度10。/。-95。/。B(溶劑A: 0.05% TFA/水；溶劑B: CH3CN),在16分
鍾內，在25mL/min下]，得到標題化合物，為灰白色粉末狀(25mg,
31%)。
呈現為三氟乙酸鹽。 'H NMR DMSO D6 0.69 (3H, t)， 1.47-1.63 (2H， m)， 1.78-2.18 (8H， m)， 3.70 (3H, s)， 4.28 (1H， dt)， 5.30 (1H, dd), 8.58 (1H, s)， 9.34 (1H， s)， 10.69 (1H， br s); HPLC rt—): 7.62; MS (ES+) 344, (ES-) 342.
實施例29:
(R)-4-(5-環丁基-4-乙基-4,5-二氫-[l,2，4]三唑並[4,3-f]蝶啶-7-基氨 基)-3-甲氧基-N-曱基苯曱醯胺(1-29)
65N H
使用方法B來製備，呈現為曱磺酸鹽(方法H)。
'H NMR DMSO D6 0.72 (3H, t), 1.63-1.87 (4H, m)， 2.10-2.50 (4H, m)， 2.31 (3H， s)， 2,80 (3H， d), 3.92 (3H, s)， 4.47 (1H， quint), 5.32 (1H, dd), 7.50-7.55 (2H， m)， 8.11 (1H, br d)， 8.43 (1H， br q)， 8.59 (1H， s)， 8.82 (1H, br s), 9,30 (1H， s); HPLC rt(min): 8.32; MS (ES" 435, (ES-) 433.
實施例30:
(R)-4-(5-環戊基-4-乙基-4,5-二氫-[l,2,4]三唑並[4,3-f]蝶啶-7-基氨 基)-3-(曱氧基曱基)-N-曱基苯甲醯胺(1-30)
使用方法I來製備，呈現為曱磺酸鹽(方法H)。
'H畫R DMSO D6 0.69 (3H， t), 1.31-1.50 (4H， m), 1,72-2.03 (6H， m), 2.33 (3H， s)， 2.79 (3H, d)， 3.32 (3H， s)， 4.09-4.20 (1H， m), 4.52 (2H， s)' 5.28-5.35 (1H， m)， 7.80-7.87 (2H， m)， 7.90 (1H， s), 8.41-8.49 (1H， m), 8.58 (1H， s)' 9,20-9.35 (1H， br s)， 9.30 (1H， s); HPLC rt(min): 8.39; MS (ES4) 463， (ES-) 461.
實施例31:
(11)-仏節基-5-環戊基-4-乙基-4，5-二氫-[1,2,4]三唑並[4,3-￡]蝶啶-7-胺(1-31)
N
H使用方法J來製備，呈現為游離鹼。 . NMR DMSO D6 0.65-0.69 (3H, m), 1.48 (2H, m)， 1.64-1.89 (8H, m)， 4.10 (1H, m)， 4.45 (2H， m), 5.07 (1H, m), 7.20 (1H, m), 7.28 (4H, m), 7.57 (1H, br s)， 8.38 (1H, s)， 9.14 (1H, s); HPLC rt(min): 9.77; MS (ES" 376， (ES') 374.
實施例32:
(R)-5-環戊基-4-乙基-N-(4-(4-曱基哌嗪-l-基)苯基)-4，5-二氫-[1，2,4] 三唑並[4,3^蝶啶_7-胺(1-32)
使用方法I來製備，呈現為游離鹼。 'H雨R DMSO D6 0.70-0.72 (3H， m)， 1.56 (2H， m)， 1.74-2.02 (8H, m), 2.23 (3H， s)， 2.50 (4H， m)， 3.06 (4H, m), 4.43 (1H, m)， 5.15 (1H, m), 6.86 (2H, d), 7.50 (2H, d)， 8.49 (1H, s)， 9.10 (1H, s)， 9.20 (1H, s); HPLC rt(min): 9.02; MS (ES+) 460, (ES〕 458.
實施例33:
(R)-5-環戊基-N-(4-(二氟曱氧基)苯基)4-乙基-4，5-二氫-[1，2,4]三 唑並[4,3-f]蝶啶-7-胺(I-33)
使用方法I來製備，呈現為游離鹼。 'H NMR DMSO D6 0.75 (3H, m)，.1.59 (2H, m), 1.76-1.89 (8H， m), 2.07 (1H, m)， 4.48 (1H， m), 5.18 (1H， m)， 7.11 (2H, d), 7.72 (2H， d)， 8,55 (1H, s)， 9.23 (1H, s), 9.44 (1H， s); HPLC rt(min): 9.70; MS (ES+) 428, (ES-) 426.實施例34:
(R)-5-環戊基-4-乙基-N-(4-嗎啉代苯基)-4，5-二氫-[1,2,4]三唑並 [4,3-f]蝶啶-7-胺(I-34)
使用方法I來製備，呈現為游離鹼。
'H NMR DMSO D6 0.69-0.72 (3H， m), 1.57 (2H, m), 1.71-1.89 (7H， m)， 2.00 (1H， m), 2.54 (叫m), 3.72-3.75 (4H， m)， 4.43 (1H, m)， 5.16 (1H， m)， 6.87 (2H, d), 7.52 (2H， d), 8.50 (1H, s), 9.12 (1H, s), 9.21 (1H, s); HPLC rt(min): 9.12; MS (ES4) 447, (ES") 445.
實施例35:
(R)-5-環戊基-4-乙基-N-(4-氟苯基)-4,5-二氫-[l，2，4]三唑並[4，3-f] 蝶啶-7-胺(1-35)
使用方法I來製備，呈現為游離石鹹。 ，H雨R DMSO D6 0.69-0.72 (3H, m), 1.60 (2H, m)， 1.73-1.卯(7H, m)， 2.06 (1H， m)，
4.46 (1H, m)， 5.19 (1H， m), 7.09 (2H， m)， 7.67-7.70 (2H， m)， 8.54 (1H， s), 9.23 (1H, s)，
9.38 (IH, s); HPLC rt(min): 9.78; MS (ES+) 380, (ES') 378.
實施例36:
方法M: (R)-5-環戊基-4-乙基-N-曱基-4,5-二氫-[l，2，4]三唑並[4,3-f] 蝶咬-7-胺(1-36)
68在包含(R)-7-氯-5-環戊基-4-乙基-4,5-二氫-[l,2，4]三唑並[4，3-f]蝶 ，定(70mg, 0.23mmol)的小瓶中添加曱胺/乙醇(2mL, 2M溶液)溶液。密 封容器，然後在50。C加熱18小時。冷卻後，在減壓下除去溶劑並且 通過反相製備HPLC純化粗產物[Waters Sunfire C18, lO(aM， IOOA柱， 梯度10。/。-95。/。B(溶劑A: 0.05。/。TFA/水；溶劑B: CH3CN)，在16分 鍾內，在25mL/min下]。通過使TFA鹽/乙腈/水通過碳酸鹽筒而獲得 游離鹼，得到標題化合物，為白色粉末狀(42mg, 61%收率)。
呈現為游離石鹹。
]H NMR DMSO D6 0.68 (3H， t)， 1.47-2.03 (IOH， m), 2.77 (3H, d)， 4.24-4.32 (1H， m)， 5.09 (1H， d)， 6.86 (1H, bs), 8.38 (1H, s), 9.15 (1H, s); HPLC rt(min): 8,57; MS (ES, 300, (ES—) 298.
實施例37:
(R)-5-環戊基-N,4-二乙基-4,5-二氫-[l，2,4]三唑並[4,3-f]蝶啶-7-胺 (1-37)
使用方法M來製備，呈現為游離鹼。 'HNMRDMSO D6 0.69 (3H， t)， 1.10 (3H, t), 1.47-1.99 (IOH， m)， 3.26 (2H， dt)， 4.27 (1H: br s)， 5.09 (1H， d), 6.94 (1H, br s)， 8.37 (1H， s)， 9.15 (1H, s); HPLC rt(min): 9.14; MS (ES"314'(ES-)312.
實施例38:
(R)-N,5-二環戊基-4-乙基-4,5-二氫-[l,2,4]三唑並[4,3-f]蝶啶-7-胺 (1-38)使用方法J來製備，呈現為游離鹼。 'H NMR DMSO D6 0.69 (3H, t)， 1.43-2.00 (18H, m), 4.07-4.17 (1H， m)， 4.17-4.34 (1H, m)， 5.08 (1H, bs), 6.98 (1H， bs)， 8.36 (1H， s)， 9.14 (1H, s); HPLC rt(min): 10.2; MS (ES+) 354， (ES") 352.
實施例39:
(R)-N-(4-(lH-吡唑-l-基)苯基)-5-環戊基-4-乙基-4，5-二氫-[l,2,4]三 唑並[4，3-f]蝶啶-7-胺(I-39)
使用方法I來製備，呈現為三氟乙酸鹽。
LH NMR DMSO D6 0.70 (3H， m), 1.58-1,59 (2H, m), 1.75-2.07 (7H, m)， 2.33 (1H， m), 4.48 (1H， m)， 5.22 (1H， m), 6.52 (1H, s)， 7.71-7.81 (5H, m)， 8.42 (1H， m), 8.58 (1H， s)， 9,26 (1H， s)， 9-64 (1H， s); HPLC rt(min): 9.32; MS (ES^ 428， (ES-) 426.
實施例40:
(R)-5-環戊基-4-乙基-N-(6-(三氟曱基)吡啶-3-基)-4,5-二氫-[1,2，4] 三唑並[4，3-f]蝶啶-7-胺(I-40)
使用方法I來製備，呈現為游離械。
70'H NMRDMSO Db 0.70 (3H, m), 0.70-0.74 (3H, m), 1,60-1.63 (2H, m), 1.71-1.92 (7H, m), 2.08 (1H, m), 4.51 (1H, m)， 5.22 (1H, m)， 7.82 (〗H, d)， 8.42 (1H， d)， 8.64 (1H， s)， 9.03 (1H， m)， 9.27 (1H, s)， 9.98 (1H， s); HPLC rt(min): 9.70; MS (ES+) 431 ， (ES-) 429.
實施例41:
(R)-5-環戊基-4-乙基-N-(6-(4-曱基哌嗪-l-基)吡啶-3-基)-4,5-二氫 -[1，2，4]三唑並[4，3^蝶啶-7-胺(1-41)
使用方法I來製備，呈現為游離鹼。 'H雨R DMSO D6 0.68-0.72 (3H， m)， 1.53 (2H， m), 1.69-1-97 (8H， m)， 2.23 (3H, s), 2.42 (4H, m)， 3.40 (4H， m), 4.35 (1H, m), 5.14 (1H, m), 6.80 (1H' d), 7.79 (1H， m), 8.32 (1H， m)， 8.48 (1H， s), 9.04 (1H, s), 9.20 (1H， s); HPLC rt(min): 8.70; MS (ES^ 461， (ES") 459.
實施例42:
(R)-5-環戊基-4-乙基-N-(4-(吡咯烷-l-基)苯基)-4，5-二氫-[l,2,4]三 唑並[4,3力蝶啶-7-胺(1-42)
使用方法I來製備，呈現為游離鹼。 NMR DMSO D6 0.69-0.72 (3H, m)， 1.54 (2H, m), 1.60-1.81 (8H， m), 1.89-1.94 (4H, m)， 3-19 (4H， m)， 4.38 (1H, m)， 5.13 (1H， m)， 6.47-6.52 (2H， m), 7.42 (2H, d), 8.46 (1H: s)， 8.91 (1H, s), 9.19 (1H, s); HPLC rt(min): 10.44; MS (ES4) 431, (ES-) 429.
實施例43: PLK1測定
71
可用以下測定評價作為人PLK激酶抑制劑的本發明化合物。
Plkl承卩制觀'j定用放射性磷酸鹽結合測定篩選具有抑制Plkl能力的化合 物。在25mM HEPES (pH 7.5), 10mM MgCl2和ImM DTT的混合物中 進行測定。底物終濃度為50|iM [y-33P]ATP (136mCi 33P ATP/mmol ATP, Amersham Pharmacia Biotech/Sigma Chemicals)和 10pM 肽 (SAM68蛋白A332-443)。在25。C下，在15nMPlkl (A20-K338)的存在 下進行測定。製備含除ATP和目的試驗化合物外的上列所有試劑的測 定貯備緩衝液。將30^L貯備液放入96孔板中，然後按一式兩份(終 DMSO濃度為5%)，加入2pL含系列稀釋濃度的試驗化合物的DMSO 貯備液(通常起始濃度為lOpM終濃度，按2倍稀釋倍數進行系列稀 釋)。將板在25。C下預溫育10分鐘，然後通過加入8|aL [ 33P]ATP (終 濃度50^M)起動反應。 60分鐘後，通過加入lOO^L 0.14M磷酸使反應終止。用 100nL 0.2M磷酸將多網(multiscreen)磷酸纖維素過濾器96孑L板 (Millipore,分類號MAPHN0B50)預處理，然後加入125jiL終止反應的 測定混合物。將板用4x200|iL 0.2M磷酸漂洗。乾燥後，將100pL Optiphase 'SuperMix'液體閃爍混合物(Perkin Elmer)力口入孔中，然後進 行閃爍計數(1450 Microbeta液體閃爍計數器，Wallac)。將所有數據點的平均背景值扣除後，通過用Prism軟體包 (Macintosh, GraphPad Software的 GraphPad Prism 3.0cx片反本，San Diego California, USA)對初始速率數據進行非線性回歸分析，計算 Ki(app)數據。
Plkl才中制測定用放射性磷酸鹽結合測定篩選具有抑制Plkl能力的化合 物。在25mM HEPES (pH 7.5), 10mM MgCl2， 0.1% BSA和2mM DTT 的混合物中進行測定。底物終濃度為150pM (350pM,用於確定〈lnM 的值)[y-33P]ATP (115mCi 33P ATP/mmol ATP, Amersham Pharmacia Biotech/Sigma Chemicals)和300pM (450pM,用於確定〈lnM的值)肽 (KKKISDELMDATFADQEAK) SEQ. ID No.l。在25°C下，在4nM (lnM，用於確定〈lnM的值)Plkl的存在下進行測定。製備含除ATP和目的試驗化合物外的上列所有試劑的測定貯備緩衝液。將30pL貯 備液放入96孔板中，然後按一式兩份(終DMSO濃度為5%)，加入2pL 含系列稀釋濃度的試驗化合物的DMSO貯備液(通常起始濃度為 10pM終濃度，按2倍稀釋倍數進行系列稀釋)。將板在25。C下預溫育 10分鐘，然後通過加入8pL [y-33P]ATP (終濃度150pM(350^iM,用於 確定〈lnM的值))起動反應。 90分鐘(240分鐘，用於確定〈lnM的值)後，通過加入100(iL 0.14M磷酸將反應終止。用1 OOpL 0.2M磷酸將多網磷酸纖維素過濾器 96孔板(Millipore,分類號MAPHN0B50)預處理，然後加入125pL終 止反應的測定混合物。將板用4x200(iL 0.2M磷酸漂洗。乾燥後，將 100fxL Optiphase 'SuperMix'液體閃爍混合物(Perkin Elmer)力口入孔中， 然後進行閃爍計悽t(1450 Microbeta液體閃爍計悽t器，Wallac)。將所有數據點的平均背景值扣除後，通過用Prism軟體包 (Macintosh, GraphPad Software 的 GraphPad Prism 3.0cx片反本,San Diego California, USA)對初始速率數據進行非線性回歸分析，計算 Ki(app)數據。 —般而言，本發明化合物均可有效抑制Plkl。以下化合物 在放射性結合測定中顯示的Ki為低於10 nM: I國l、 1-2、 1-4、 1-5、 1-6、 1-7、 1-8、 1-9、 1-10、 1-11、 1-12、 1-13、 1-14、 1-15、 1-16、 1-17、 1-18、 1-19、 1-20、 1-21、 1-22、 1-23、 1-24、 1-25、 1-29、 1-30、 1-32、 1-33、 1-34、 1-35、 1-39、 1-41、 1-42。以下化合物在放射性結合測定中顯示的Ki 為lOnM-lOOnM: 1-31、 1-40。以下化合物在放射性結合測定中顯示 的Ki為100nM-4nM: 1-26、 1-27、 1-28、 1-36、 1-37、 1-38。
Plk2 4中制觀'J定用放射性磷酸鹽結合測定篩選具有抑制Plk2能力的化合 物。在25mM HEPES (pH 7.5)， 10mM MgCl2， 0.1% BSA和2mM DTT 的混合物中進行測定。底物終濃度為200(iM ["33P]ATP (57mCi 33P ATP/mmol ATP, Amersham Pharmacia Biotech/Sigma Chemicals)和 300(iM肽(KKKISDELMDATFADQEAK) SEQ. ID No.2。在25°C下， 在25nM Plk2的存在下進行測定。製備含除ATP和目的試驗化合物外 的上列所有試劑的測定貯備緩衝液。將30|aL貯備液放入96孔板中， 然後按一式兩4分(終DMSO濃度為5%),加入2pL含系列稀釋濃度的試驗化合物的DMSO貯備液(通常起始濃度為IO^iM終濃度，按2倍 稀釋倍數進行系列稀釋)。將板在25。C下預溫育IO分鐘，然後通過加 入8ptL [y-33P]ATP (終濃度200pM)起動反應。 90分鐘後，通過加入100pL 0.14M磷酸將反應終止。用 lOO)iL 0.2M磷酸將多網磷酸纖維素過濾器96孔板(Millipore，分類號 MAPHN0B50)預處理，然後加入125pL終止反應的測定混合物。將板 用4x200pL 0.2M磷酸漂洗。乾燥後，將100pL Optiphase 'SuperMix' 液體閃爍混合物(Perkin Elmer)加入孔中，然後進行閃爍計數(1450 Microbeta液體閃爍計數器，Wallac)。將所有數據點的平均背景值扣除後，通過用Prism軟體包 (Macintosh, GraphPad Software的 GraphPad Prism 3.0cx片反本，San Diego California, USA)對初始速率數據進行非線性回歸分析，計算 Ki(app)數據。
Plk3抑制測定用放射性磷酸鹽結合測定篩選具有抑制Plk3能力的化合 物。在25mM HEPES (pH 7.5), 10mM MgCl2和lmM DTT的混合物中 進行測定。底物終濃度為75|iM [y-33P]ATP (60mCi 33P ATP/mmo1 ATP, Amersham Pharmacia Biotech/Sigma Chemicals)和 10|jM 肽 (SAM68蛋白A332-443)。在25°C下，在5nM Plk3 (S38-A340)的存在 下進行測定。製備含除ATP和目的試驗化合物外的上列所有試劑的測 定貯備緩衝液。將30pL貯備液放入96孔板中，然後按一式兩份(終 DMSO濃度為5%),加入2pL含系列稀釋濃度的試驗化合物的DMSO 貯備液(通常起始濃度為10(xM終濃度，按2倍稀釋倍數進行系列稀 釋)。將板在2S。C下預溫育10分鐘，然後通過加入8(iL [y-33P]ATP (終 濃度75i!M)起動反應。 60分鐘後，通過加入lOOpL 0.14M磷酸將反應終止。用 lOO[iL 0.2M磷酸將多網磷酸纖維素過濾器96孔板(Millipore,分類號 MAPHN0B50)預處理，然後加入125pL終止反應的測定混合物。將板 用4x200pL 0.2M磷酸漂洗。乾燥後，將lOO(aL Optiphase 'SuperMix' 液體閃爍混合物(Perkin Elmer)加入孔中，然後進行閃爍計數(1450 Microbeta液體閃爍計數器，Wallac)。將所有數據點的平均背景值扣除後，通過用Prism軟體包(Macintosh, GraphPad Software的GraphPad Prism 3.0cx片反本，San Diego California, USA)對初始速率數據進行非線性回歸分析，計算 Ki(app)數據。
Plk4抑制測定用放射性磷酸鹽結合測定篩選具有抑制Plk4能力的化合 物。在8mM MOPS (pH 7.5)， 10mM MgCl2， 0.1% BSA和2mM DTT的 混合物中進行測定。底物終濃度為15pM [y-33P]ATP (227mCi 33P ATP/mmol ATP, Amersham Pharmacia Biotech/Sigma Chemicals)和 300pM肽(KKKMDATFADQ) SEQ. ID No.3。在25°C下，在25nM Plk4 的存在下進行測定。製備含除ATP和目的試驗化合物外的上列所有試 劑的測定貝i備緩沖液。將30nL貯備液》文入96孔板中，然後按一式兩 份(終DMSO濃度為5%),加入2pL含系列稀釋濃度的試驗化合物的 DMSO貯備液(通常起始濃度為10pM終濃度，按2倍稀釋倍數進行系 列稀釋)。將板在25。c下預溫育10分鐘，然後通過加入8pL [y-33P]ATP (終濃度15pM)起動反應。 180分鐘後，通過加入100pL 0.14M磷酸將反應終止。用 100pL 0.2M磷酸將多網磷酸纖維素過濾器96孔板(Millipore,分類號 MAPHN0B50)預處理，然後加入125|aL終止反應的測定混合物。將板 用4x200pL 0.2M磷酸漂洗。乾燥後，將IOOjiL Optiphase 'SuperMix' 液體閃爍混合物(Perkin Elmer)加入孔中，然後進行閃爍計數(1450 Microbeta液體閃爍計悽史器，Wallac)。
將所有數據點的平均背景值扣除後，通過用Prism軟體包 (Macintosh, GraphPad Software的 GraphPad Prism 3.0cx片反本，San Diego California, USA)對初始速率數據進行非線性回歸分析，計算 Ki(app)數據。
權利要求
1. 式I的化合物其中環A是5元雜芳基環，其中所述環任選地被以下基團取代C1-6滷代烷基、滷素、NO2、-OH、-CN或任選被取代的C1-6烷基；X1是鍵、-O-、-NR8-、-S-、-S(O)-或-S(O)2-；R1是H、C1-10脂族基團、C3-10環脂族基團、C6-10芳基、5-10元雜芳基或3-10元雜環基，其中所述R1任選地被0-5個J1取代；每一個R2和R3獨立地是H、C1-10脂族基團或C3-10環脂族基團，其中每一個R2和R3任選地並且獨立地分別被0-5個J2和J3取代，或者R2和R3，與它們所連接的碳原子一起，形成3-8元飽和或部分不飽和的含0-4個獨立地選自O、N和S的雜原子的單環，其中所述由R2和R3形成的單環任選地被0-4個J23取代；R4是H、-C(O)R、-C(O)OR、-C(O)NRR′、C1-10脂族基團、C3-10環脂族基團、C6-10芳基、5-10元雜芳基、3-10元雜環基、(C1-6脂族)-(C3-10環脂族基團)、(C1-6脂族)-(C6-10芳基)或(C1-6脂族)-(5-10元雜芳基)，其中所述R4任選地被0-5個J4取代；R8是H、C1-6脂族基團、C3-8環脂族基團、-C(O)R、-C(O)OR或-C(O)NRR′；每一個J1獨立地是C1-6滷代烷基、滷素、NO2、CN、Q或-Z-Q，或者結合在一起的兩個J1可能任選地形成＝O；每一個Z獨立地是C1-6脂族基團，其中所述C1-6脂族基團中的0-3個-CH2-單元任選地被替換為-NR-、-O-、-S-、-C(O)-、-C(＝NR)-、-C(＝NOR)-、-S(O)-或-S(O)2-，其中所述C1-6脂族基團中的任何未被替換的-CH2-單元任選地被0-2個JZ取代；每一個Q獨立地是H、C1-6脂族基團、3-8-元芳族或非芳族的具有0-3個獨立地選自O、N和S的雜原子的單環或8-12元芳族或非芳族的具有0-5個獨立地選自O、N和S的雜原子的雙環體系，其中每一個Q獨立地任選被0-5個JQ取代；每一個J2和J3獨立地是C1-6脂族基團、C3-6環脂族基團或-(C1-4烷基)n-V1，其中n是0或1，每一個V1獨立地是滷代(C1-4脂族基團)、-O(滷代C1-4脂族基團)、滷素、NO2、CN、OH、OR＂、SH、SR＂、NH2、NHR＂、N(R＂)2、COH、COR＂、CO2H、CO2R＂、CONH2、CONHR＂、CONR＂2、OCOR＂、OCONH2、OCONHR＂、OCON(R＂)2、NHCOR＂、NR＂COR＂、NHCO2R＂、NR＂CO2R＂、NHCO2H、NR＂CO2H、NHCONH2、NHCONHR＂、NHCON(R＂)2、SO2NH2、SO2NHR＂、SO2N(R＂)2、NHSO2R＂、NR＂SO2R＂，或者V1是選自C3-6環脂族基團、苯基、5-6元雜芳基或3-6元雜環基的環狀基團，其中所述環狀基團任選地被0-3個JV取代；每一個R＂獨立地是未被取代的C1-4脂族基團，或者鍵合至相同原子的相同的J2和J3中的兩個，一起可能任選地形成＝O；每一個JZ和JV獨立地是滷素、C1-6脂族基團、C3-6環脂族基團、NO2、CN、OH、NH2、NH(C1-4脂族基團)、N(C1-4脂族基團)2、-O(C1-4脂族基團)、-CO2H、-CO2(C1-4脂族基團)、-O(滷代C1-4脂族基團)或滷代(C1-4脂族基團)；每一個JQ、J4和J23獨立地是-M或-Y-M；每一個Y獨立地是未被取代的C1-6脂族基團，其中所述C1-6脂族基團中的0-3個-CH2-單元任選地被替換為-NR-、-O-、-S-、-C(O)-、-S(O)-或-S(O)2-；每一個M獨立地是H、C1-6脂族基團、C3-6環脂族基團、滷代(C1-4脂族基團)、O(滷代C1-4脂族基團)、3-6元雜環基、滷素、NO2、CN、OH、OR′、SH、SR′、NH2、NHR′、N(R′)2、COH、COR′、CO2H、CO2R′、CONH2、CONHR′、CONR′2、OCOR′、OCONH2、OCONHR′、OCON(R′)2、NHCOR′、NR′COR′、NHCO2R′、NR′CO2R′、NHCO2H、NR′CO2H、NHCONH2、NHCONHR′、NHCON(R′)2、SO2NH2、SO2NHR′、SO2N(R′)2、NHSO2R′或NR′SO2R′；每一個R獨立地是H或未被取代的C1-6脂族基團；和每一個R′是未被取代的C1-6脂族基團，或者兩個R′基團，與它們鍵接的原子一起，形成未被取代的3-8元飽和或部分不飽和的具有0-1個獨立地選自O、N和S的雜原子的單環。
2. 權利要求1的化合物，其中環A是三唑環，其任選地被以 下基團取代Cm卣代烷基、囟素、N02、 0H、 CN或任選被取代的Ci-6坑基。
3. 權利要求1的化合物，其中環A是咪唑環，其任選地被以 下基團取代d_6面代烷基、卣素、N02、 OH、 CN或任選被取代的C"6棍基。
4. 權利要求1-3中任一項的化合物，其中X"是-0-,-nr8-或-S-。
5. 權利要求4的化合物，其中乂1是^118-。
6. 權利要求5的化合物，其中RS是H或-C(0)OR。
7. 權利要求6的化合物，其中r8是H。
8. 權利要求6的化合物，其中rs是-C(0)OC^6烷基。
9. 權利要求8的化合物，其中RS是-C(0)OCH3。
10. 權利要求1-9中任一項的化合物，其中R是H、任選被取 代的C^芳基、任選被取代的芳烷基或任選被取代的Cwo雜芳基。
11. 權利要求10的化合物，其中W是H。
12. 權利要求10的化合物，其中每一個I^是任選被取代的C6.10 芳基。
13. 權利要求10的化合物，其中Ri是任選被取代的C5.u)雜芳基。
14. 權利要求12或13的化合物，其中RM壬選地被0-3個-O-Q、 面素、-C(O)N(R)-Q或Q取代，其中，Q、 -C(O)N(R)-Q和-O-Q中的 每一個Q獨立地任選被0-5個JQ取代。
15. 權利要求12的化合物，其中C6.1G芳基是任選地在對位被 -C(O)N(R)-Q取代並且任何剩餘位置被-O-Q、卣素或Q取代的苯基， 其中，Q、 -C(O)N(R)-Q和-O-Q中的每一個Q獨立地任選被0-5個JQ 取代。
16. 權利要求13的化合物，其中雜芳基被-C(O)N(R)-Q取代並 且任何剩餘位置被-O-Q或Q取代，其中，Q、 -C(O)N(R)-Q和-O-Q中 的每一個q獨立地^壬選糹皮0-5個jQ耳又4戈。
17. 權利要求15或16的化合物，其中-C(O)N(R)-Q中的Q是H、Cm脂族基団、CM滷代脂族基團、C3-7環脂族基團、Cw雜環脂族基團、d—6烷氧基、(Cb6烷氧基)d-6烷基或d-6卣代烷氧基。
18. 權利要求17的化合物，其中苯基在任何剩餘位置任選地被滷素、Cm脂族基団、CM滷代脂族基團、C3.7環脂族基團、C3.7雜環脂族基團、C^烷氧基、(d.6烷氧基)C,-6烷基或d_6卣代烷氧基取代。
19. 權利要求17的化合物，其中-C(O)N(R)-Q的Q是甲基、乙基、l-曱基哌啶-4-基、環丙基、環戊基、3-呋喃基、3-氟代吡咯烷-1-基或3，3-二氟環丁基。
20. 權利要求1-9中任一項的化合物，其中W是任選被取代的d-6烷基或Cw環烷基。
21. 權利要求19的化合物，其中W是H、乙基、環丙基或環戊基。
22. 權利要求14的化合物，其中Ri是苯基並且在苯基的對位上的一個取代基是Q或-Z-Q。
23. 權利要求22的化合物，其中在對位的取代基是氟、羧基、三氟曱基、4-甲基哌嗪-l-基、二氟曱氧基、嗎啉-l-基、吡唑-l-基或吡咯烷-l-基。
24. 權利要求13的化合物，其中W是噻吩-2-基、吡啶-3-基、吡啶-4-基或6-三氟曱基吡咬-3-基。
25. 權利要求1-24中任一項的化合物，其中112和113中的每一個是任選被取代的d.3烷基。
26. 權利要求1-24中任一項的化合物，其中f是H和113是任選被取代的Cw烷基。
27. 權利要求26的化合物，其中RS是乙基。
28. 權利要求1-24中任一項的化合物，其中112和113與它們鍵接的原子一起形成任選被0-4個J"取代的3-7元環烷基環。
29. 權利要求1-28中任一項的化合物，其中！^是CL6脂族基團、C3—,o環脂族基團、C3.10雜環脂族基團、C6.m芳基或Cw4雜芳基，每一個任選被0-5個J"取代。
30. 權利要求29的化合物，其中W是Cwo環脂族基團，其任選被0-5個"取代。
31. 權利要求30的化合物，其中W是環戊基。
32. 權利要求l的化合物，由式II表示；formula see original document page 6其中W是任選被取代的C6.,。芳基或任選被取代的5-10元雜芳基；和 每一個W和ie獨立地是H， Cwo脂族基團，或者 C3.K)環脂族基團；其中每一個P^和RM壬選地分別被0-5個2和 3取代；或者R2和R3,與它們所連接的碳原子一起，可以形成任選被取代的 3-6元飽和或部分不飽和的單環；和JA是H或CM烷基。
33. 選自以下的化合物formula see original document page 6formula see original document page 7formula see original document page 8formula see original document page 9
34. —種組合物，所述組合物包含權利要求1-33中任一項的化 合物和藥學上可接受的載體、助劑或溶媒。
35. —種在患者中抑制蛋白激酶活性的方法，所述方法包括給 予所述患者權利要求1-33中任一項的化合物或權利要求34的藥物組 合物。
36. —種在生物樣品中抑制蛋白激酶活性的方法，所述方法包 括使所述生物樣品與權利要求1-33中任一項的化合物或權利要求34 的藥物組合物4妄觸。
37. 權利要求35或權利要求36的方法，其中所述蛋白激酶是 PLK。
38. 權利要求37的方法，其中所述蛋白激酶是PLK1。
39. —種在患者中治療增殖病症、神經變性病症、自身免疫性 病症、炎性病症或免疫介導的病症的方法，所述方法包括給予患者權 利要求1-33中任一項的化合物或權利要求34的藥物組合物的步驟。
40. 權利要求39的方法，所述方法包括給予所述患者選自以下的其它治療藥劑化療或抗增殖藥劑、抗炎藥物、免疫調節或免疫抑制藥劑、神經營養因子、用於治療心血管疾病的藥劑、用於治療破壞 性骨病的藥劑、用於治療肝病的藥劑、抗病毒藥劑、用於治療血液病 的藥劑、用於治療糖尿病的藥劑或用於治療免疫缺陷疾病的藥劑，其中a) 所述其它治療藥劑適合所治療的疾病；和b) 將所述其它治療藥劑和所述組合物以單一劑量形式一起給予， 或作為多劑量形式的 一 部分與所述組合物分別給予。
41. 一種在患者中治療黑素瘤、骨髓瘤、白血病、淋巴瘤、成 神經細胞瘤或癌症的方法，所述癌症選自結腸癌、乳腺癌、胃癌、卵 巢癌、宮頸癌、肺癌、中樞神經系統(CNS)癌、腎癌、前列腺癌、膀 胱癌或胰腺癌，其中所述方法包括給予所述患者權利要求1-33中任一 項的化合物或權利要求34的藥物組合物。
42. —種在患者中治療癌症的方法，其中所述方法包括給予所 述患者權利要求1-33中任一項的化合物或權利要求34的藥物組合物。
43. 權利要求42的方法，其中所述方法包括通過用權利要求 1-33中任一項的化合物或權利要求34的藥物組合物抑制PLK來破壞 癌細胞的有絲分裂的步驟。
全文摘要
本發明涉及可用作蛋白激酶抑制劑的式(I)的化合物。本發明還提供了包括所述化合物的藥學上可接受的組合物和在治療多種疾病、障礙或病症中使用所述組合物的方法。本發明還提供了用於製備本發明的化合物的方法。
文檔編號C07D491/00GK101484457SQ200780021866
公開日2009年7月15日 申請日期2007年4月12日 優先權日2006年4月12日
發明者D·凱, J·-D·沙裡耶, R·克內特爾 申請人:弗特克斯藥品有限公司