巰基化殼聚糖包裹人參納米顆粒的製備方法
2023-05-02 03:21:31 2
專利名稱：巰基化殼聚糖包裹人參納米顆粒的製備方法
技術領域：
本發明涉及一種巰基化殼聚糖包裹人參納米顆粒的製備方法。
背景技術：
近年來，中藥現代化逐步加強，尤其是對納米天然藥材的研究與開發已倍受重視。 徐輝碧(納米技術在中藥研究中的應用.中國藥科大學學報，2001.)等率先將納米技術引進中藥研發，發現將中藥牛黃加工到納米級的水平，不僅能提高藥效和生物利用度，甚至可能產生新的藥理效果，具有極強的靶向作用，並據此提出了「納米中藥」的科學概念。此後， 又有人對100多種中藥進行了研究，已經獲得平均粒徑僅有17nm的血竭，23nm的蜂膠等的納米顆粒。殼聚糖是一種天然聚陽離子鹼性多糖，近年來，研究特別側重於生物醫學及藥物製劑等領域，證實殼聚糖具有生物黏附性和多種生物活性，它能與活體組織相容，不會引起過敏反應和排斥現象，其被體內的溶菌酶、胃蛋白酶降解後，降解產物能完全地被人體吸收，無毒、無副作用，較適於作為緩控釋輔料。殼聚糖包封藥物後，可使其釋放減慢、療效延長，毒副作用降低。利用殼聚糖製備緩釋、控釋製劑已成為近年來新劑型研究的熱點。
發明內容
本發明的目的在於提供一種巰基化殼聚糖包裹人參納米顆粒的製備方法。本發明以巰基乙酸作為巰基供體，對殼聚糖進行化學修飾，並以人參納米顆粒作為模型藥物進行包裹，應用巰基敏感的螢光試劑進行螢光標記，製備了螢光標記的巰基化殼聚糖包裹人參納米顆粒。本發明在乙酸和乙醇的混合溶劑中，以巰基乙酸為羧基供體，殼聚糖表面的羥基為受體，合成了巰基化殼聚糖；再利用三聚磷酸鈉為交聯劑，包裹人參納米顆粒。—種巰基化殼聚糖包裹人參納米顆粒的製備方法，其特徵在於該方法步驟為A、將巰基化殼聚糖溶於由乙酸和無水乙醇組成的混合溶劑中，加入人參納米顆粒，以三聚磷酸鈉水溶液為交聯劑進行包裹，得到巰基化殼聚糖包裹的人參納米顆粒微球；B、將巰基敏感螢光試劑溶於N，N- 二甲基甲醯胺，加入磷酸鹽緩衝液，在常壓以及 250C _36°C條件下，使巰基敏感螢光試劑與巰基化殼聚糖包裹的人參納米顆粒微球充分反應後，裝入透析袋，進行透析，得到產物。在透析完成後，從透析袋中取少量的溶液，進行螢光電鏡的檢測，完成巰基化殼聚糖載藥納米顆粒微球的螢光標記。在A步驟中，無水乙醇與乙酸的體積比為1 1-5。在A步驟中，三聚磷酸鈉水溶液的濃度為l_2mg/ml。在A步驟中，人參納米顆粒的製備方法來源於中國專利(液相超聲製備納米天然藥材顆粒方法200910117753. X)。
在B步驟中，巰基敏感螢光試劑與磷酸鹽緩衝液的體積比為1 6000-10000。在B步驟中，Img巰基敏感螢光試劑溶於N，N-二甲基甲醯胺100-300 μ 1中。在B步驟中，磷酸鹽緩衝液的ρΗ值為7. 1-7.4。本發明製備出了能夠帶有螢光基團的人參納米顆粒，這些顆粒既保持有納米級尺度，又具有螢光特徵。本發明的優點是能夠以巰基乙酸作為巰基供體，對殼聚糖進行化學修飾，並以人參納米顆粒作為模型藥物進行包裹，應用巰基敏感的螢光試劑進行螢光標記，製備了螢光標記的巰基化的殼聚糖包裹人參納米顆粒。對其進行了相關的性質的表徵和檢測。通過掃描電鏡和螢光電鏡分析，結果顯示巰基化殼聚糖人參納米顆粒形狀規則， 具有核-殼結構，溼態下平均粒徑約為300-350nm ；同時在生理ρΗ下它還具有很強的螢光活性。本發明的用途殼聚糖具有生物黏附性和多種生物活性，它能與活體組織相容，不會引起過敏反應和排斥現象，其被體內的溶菌酶、胃蛋白酶降解後，降解產物能完全地被人體吸收，無毒、無副作用，較適於作為緩控釋輔料。殼聚糖包封藥物後，可使其釋放減慢、療效延長，毒副作用降低。利用巰基化殼聚糖包裹的人參納米顆粒，可使其帶有螢光特性，在動物體內顯示出納米人參顆粒的代謝途徑。
具體實施例方式實施例1巰基化殼聚糖載藥納米顆粒的製備採用溶劑揮發法稱取0. Ig巰基化殼聚糖溶於乙酸與無水乙醇混合液(60ml，乙酸乙醇=1 1)中，加熱攪拌超聲至完全溶解後加入人參納米顆粒，磁力攪拌，至完全分散，繼續磁力攪拌且同時逐滴緩慢加入三聚磷酸鈉水溶液(lmg/ml)，得到巰基化殼聚糖包裹人參納米顆粒的微球。取微球溶液進行掃描電鏡檢測。巰基化殼聚糖載藥納米顆粒微球的螢光標記將螢光試劑溶於N，N- 二甲基甲醯胺(Img 100 μ 1)，加入磷酸鹽緩衝液(ρΗ = 7. 1)。保溫在25°C條件下反應。螢光試劑與巰基化殼聚糖載藥納米顆粒充分反應後，裝入透析袋，進行透析。透析完成後，從透析袋中取少量的溶液，進行螢光電鏡的檢測。巰基化殼聚糖包裹人參納米顆粒的掃描電鏡表徵實驗掃描電鏡結果顯示人參納米中藥顆粒能夠被殼聚糖較好的包裹，巰基化殼聚糖載人參納米顆粒微球分散較均勻， 形成較典型的核-殼結構，人參納米藥物部分在內部，充當核結構，巰基化殼聚糖分子在外部充當殼結構，形狀較規則，其平均直徑在310nm左右。包裹效果較好。螢光電鏡檢測實驗螢光電鏡結果顯示在討如！!!波長的螢光激發下，呈現出少量紅色螢光圖像。，顏色較暗。說明巰基化殼聚糖在體外的螢光標記有效果。實施例2巰基化殼聚糖載藥納米顆粒的製備採用溶劑揮發法稱取0. Ig巰基化殼聚糖溶於乙酸與無水乙醇混合液(60ml，乙酸乙醇=3 1)中，加熱攪拌超聲至完全溶解後加入人參納米顆粒，磁力攪拌，至完全分散，繼續磁力攪拌且同時逐滴緩慢加入三聚磷酸鈉水溶液(1.5mg/ml)。即得到巰基化殼聚糖包裹人參納米顆粒的微球。
取微球溶液進行掃描電鏡檢測。巰基化殼聚糖載藥納米顆粒微球的螢光標記將螢光試劑溶於N，N- 二甲基甲醯胺(Img 200 μ 1)，加入磷酸鹽緩衝液(ρΗ=7.2)。保溫在30°C條件下反應。螢光試劑與巰基化殼聚糖載藥納米顆粒充分反應後，裝入透析袋，進行透析。透析完成後，從透析袋中取少量的溶液，進行螢光電鏡的檢測。巰基化殼聚糖包裹人參納米顆粒的掃描電鏡表徵實驗掃描電鏡結果顯示人參納米中藥顆粒能夠被殼聚糖較好的包裹，巰基化殼聚糖載人參納米顆粒微球分散均勻，形成典型的核-殼結構，人參納米藥物在內部，充當核結構，巰基化殼聚糖分子在外部充當殼結構，形狀規則，近似圓形，表面光滑，其平均直徑在300nm左右。包裹效果良好。螢光電鏡檢測實驗螢光電鏡結果顯示在討如！!!波長的螢光激發下，呈現出紅色螢光圖像。螢光聚集在一起，顏色明顯。說明巰基化殼聚糖在體外的螢光標記成功，完全能夠識別。實施例3巰基化殼聚糖載藥納米顆粒的製備採用溶劑揮發法稱取0. Ig巰基化殼聚糖溶於乙酸與無水乙醇混合液(60ml，乙酸乙醇=4 1)中，加熱攪拌超聲至完全溶解後加入人參納米顆粒，磁力攪拌，至完全分散，繼續磁力攪拌且同時逐滴緩慢加入三聚磷酸鈉水溶液Qmg/ml)。即得到巰基化殼聚糖包裹人參納米顆粒的微球。取微球溶液進行掃描電鏡檢測。巰基化殼聚糖載藥納米顆粒微球的螢光標記將螢光試劑溶於N，N- 二甲基甲醯胺(Img 300 μ 1)，加入磷酸鹽緩衝液(ρΗ= 7.4)。保溫在36°C條件下反應。螢光試劑與巰基化殼聚糖載藥納米顆粒充分反應後，裝入透析袋，進行透析。透析完成後，從透析袋中取少量的溶液，進行螢光電鏡的檢測。巰基化殼聚糖包裹人參納米顆粒的掃描電鏡表徵實驗掃描電鏡結果顯示人參納米中藥顆粒基本能被殼聚糖包裹，巰基化殼聚糖載人參納米顆粒微球聚集，形成典型的核-殼結構，表面粗糙，其平均直徑在350nm左右。包裹效果一般。螢光電鏡檢測實驗螢光電鏡結果顯示在討如！!!波長的螢光激發下，呈現出暗紅色螢光圖像。螢光聚集在一起，顏色不明顯。說明巰基化殼聚糖在體外的螢光標記效果一般，能夠識別。
權利要求
1.一種巰基化殼聚糖包裹人參納米顆粒的製備方法，其特徵在於該方法步驟為A、將巰基化殼聚糖溶於由乙酸和無水乙醇組成的混合溶劑中，加入人參納米顆粒，以三聚磷酸鈉水溶液為交聯劑進行包裹，得到巰基化殼聚糖包裹的人參納米顆粒微球；B、將巰基敏感螢光試劑溶於N，N-二甲基甲醯胺，加入磷酸鹽緩衝液，在常壓以及 250C _36°C條件下，使巰基敏感螢光試劑與巰基化殼聚糖包裹的人參納米顆粒微球充分反應後，裝入透析袋，進行透析，得到產物。
2.如權利要求1所述的方法，其特徵在於在A步驟中，無水乙醇與乙酸的體積比為 1 1-5。
3.如權利要求1所述的方法，其特徵在於在A步驟中，三聚磷酸鈉水溶液的濃度為 l-2mg/ml0
4.如權利要求1所述的方法，其特徵在於在B步驟中，巰基敏感螢光試劑與磷酸鹽緩衝液的體積比為1 6000-10000。
5.如權利要求1所述的方法，其特徵在於在B步驟中，Img巰基敏感螢光試劑溶於N， N-二甲基甲醯胺100-300 μ 1中。
6.如權利要求1所述的方法，其特徵在於在B步驟中，磷酸鹽緩衝液的ρΗ值為 7. 1-7. 4。
全文摘要
本發明公開了一種巰基化殼聚糖包裹人參納米顆粒的製備方法。本發明在乙酸和乙醇的混合溶劑中，以巰基乙酸為羧基供體，殼聚糖表面的羥基為受體，合成了巰基化殼聚糖；再利用三聚磷酸鈉為交聯劑，包裹人參納米顆粒。本發明的優點在於加入對巰基敏感的螢光探針，得到了被螢光標記的巰基化殼聚糖人參納米顆粒。利用螢光顯微鏡對其螢光活性進行檢測。結果顯示巰基化殼聚糖人參納米顆粒形狀規則，具有核-殼結構，溼態下平均粒徑約為300nm；同時在生理pH下它還具有很強的螢光活性。
文檔編號A61K47/36GK102210733SQ20101016283
公開日2011年10月12日 申請日期2010年4月8日 優先權日2010年4月8日
發明者劉勇, 周綱, 張龍, 楊建設 申請人:中國科學院蘭州化學物理研究所