在環境溫度下穩定血液樣品中的非變性多肽、核酸和外來體的製作方法

2023-04-26 22:20:21 2

本申請要求提交於2014年6月10日的第62/010,164號美國臨時申請的權益，該申請通過引用而全文併入於此。發明背景1.
技術領域：
本發明總體上涉及在環境溫度下穩定血液樣品中的一種或多種非變性核酸分子和/或多肽或外來體。具體而言，本發明涉及用於使血液樣品中的一種或多種非變性核酸分子和/或多肽或外來體在環境溫度下基本穩定儲存的製劑、組合物、製品、試劑盒及方法。2.
背景技術：
：全血是細胞、核酸、蛋白質和多種其它分析物的複雜混合物。具體來說，血液成分包括但不限於：細胞，諸如白細胞(單核細胞、淋巴細胞及粒細胞)、紅細胞、凝血細胞及循環腫瘤細胞；核酸分子，諸如循環遊離DNA(cfDNA)；多肽，諸如脂蛋白、白蛋白及血清蛋白，以及其它多種分析物。在某種程度上由於對於全血的相對較短半衰期及儲存要求，一直存在對於獻血者的全血的需求。例如，為了輸血而採集的全血必須在冰中運輸並儲存在持續搖動的冷藏條件下，以保持完整的活細胞並且保護細胞和非細胞多肽、核酸分子及其它分析物免於化學及酶促降解。這種對冷藏條件的要求可限制全血供應在缺乏所需冷藏設施的地區的可用性，例如由於缺乏足以維持充分的冷藏溫度的設備或必需的持續電力所導致的。已經研究了用於在環境溫度下穩定、運輸及儲存全血和血液成分的組合物和方法。雖然目前採用的組合物能夠防止多肽及核酸分子的降解，但由於儲存製劑和組合物中所採用的反應性組分，主要的局限性在於這些已穩定的多肽和核酸分子保持在變性的構象下，例如缺乏合適的二級和/或三級結構的單鏈DNA和解摺疊的蛋白質。另外的局限性在於這些製劑可導致血細胞的裂解從而將細胞內容物釋放到全血樣品中，從而使得自由循環的多肽及核酸分子的後續定量和診斷分析由於汙染了基因組DNA和細胞內蛋白質而變得複雜。近來已開發出非侵入式診斷測試以利用母血中的循環無細胞DNA測定胎兒異常(例如，PLUS非侵入式胎兒異常測試，Sequenom,Inc)。這種手段的影響已促進了利用無細胞DNA和無細胞胺基酸分布來預測某些疾病的疾病狀態和相對進展的進一步研究。由於在環境溫度下該分布在相對較短的時間內發生變化，且暴露於4℃下可導致細胞表面上診斷標誌物的虛假變化並增加釋放到血漿或血清部分中的量，因此在較短的預定時間內使用採集的血液標本至關重要。雖然存在用於在室溫下穩定無細胞核酸長達7天的採集管(StreckLabs)，但該管中提供的製劑的主要組分為能發生反應從而固定細胞並使其對於進入或離開細胞的試劑而言變得通透性較低的甲醛釋放劑(諸如咪唑啉基脲或雙咪唑烷基脲)。因此，需要開發用於使核酸分子和多肽單獨或共同地穩定的新製劑、組合物及方法，其中基本穩定的核酸分子和多肽在血液樣品中於環境溫度下保持其天然、非變性的構象。通過保持血細胞的完整性以防止所裂解的細胞成分汙染循環核酸分子和多肽，同時還通過在環境溫度下保存呈天然構象的功能活性多肽和核酸分子，本發明的製劑、組合物和方法有利地克服了前述局限性。這些已穩定的核酸分子和多肽可以在不需要冷藏或冷凍的情況下運輸及儲存，並且在環境溫度下穩定延長的時間段，例如數天、數周、數月或甚至數年，從而有利於多種核酸分子和多肽的定量、分析和/或用於診斷和潛在治療應用的用途。技術實現要素：在本發明的一個方面，提供了用於使血液樣品中呈天然、非變性構象的一種或多種多肽在環境溫度下基本穩定儲存的製劑，其中所述一種或多種多肽在環境溫度下儲存後在基本無細胞內多肽汙染的天然、非變性構象下穩定至少3天的時間。在一些實施方案中，至少80％的該多肽在環境溫度下儲存後在天然、非變性構象下穩定至少三天的時間。在一些實施方案中，所述一種或多種多肽在環境溫度下儲存後保持在天然、非變性構象下至少4天、至少5天、至少6天、至少7天、至少8天、至少9天、至少10天、至少11天、至少12天、至少13天、至少14天、至少15天、至少16天、至少17天或至少18天的時間。在一些實施方案中，該製劑包含：pH緩衝液；非還原糖；三糖；以及水溶性聚合物、陽離子化合物、兩性離子化合物、磷酸酶抑制劑或其組合中的一種或多種。在一些實施方案中，該非還原糖為蔗糖。在一些實施方案中，該三糖選自麥芽三糖、異麥芽三糖、蜜三糖、松三糖、黑麴黴三糖(nigerotriose)及其組合。在一些實施方案中，該三糖為松三糖。在一些實施方案中，該水溶性聚合物為聚乙烯醇。在一些實施方案中，該磷酸酶抑制劑為2-甘油磷酸酯。在一些實施方案中，該兩性離子化合物為式(I)化合物：其中R1、R2和R3獨立地選自未取代或取代的烷基、未取代或取代的芳基、未取代或取代的芳基烷基，或者R1和R2任選地形成環，Y為CH2、CH(A)、CH(A)-CH(A)、CH(A)-CH(A)-CH(A)，其中A為未取代或取代的烷基、芳基、芳基烷基，或通常在20種天然存在的胺基酸之一種中發現的任何側鏈；並且Z為CO2-、SO3-或OPO3-。在一些實施方案中，該陽離子化合物選自：(a)式(II)化合物：其中R1、R2和R3獨立地選自未取代或取代的烷基、未取代或取代的芳基、未取代或取代的芳基烷基，或者R1和R2任選地形成環，Y為CH2、CH(A)、CH(A)-CH(A)、CH(A)-CH(A)-CH(A)，其中A為未取代或取代的烷基、芳基、芳基烷基，或通常在20種天然存在的胺基酸之一種中發現的任何側鏈；Z為CO2A；並且X為藥學上可接受的陰離子；(b)式(III)化合物：其中R1、R2、R3和R4獨立地選自未取代或取代的烷基、未取代或取代的芳基、未取代或取代的芳基烷基，或者R1和R2任選地形成環，Y為CH2、CH(A)、CH(A)-CH(A)、CH(A)-CH(A)-CH(A)，其中A為未取代或取代的烷基、芳基、芳基烷基，或通常在20種天然存在的胺基酸之一種中發現的任何側鏈；並且X為藥學上可接受的陰離子；和(c)式(IV)化合物：其中R1和R2獨立地選自未取代或取代的烷基、未取代或取代的芳基、未取代或取代的芳基烷基；並且X為藥學上可接受的陰離子。在一些實施方案中，式(I)、式(II)或式(III)化合物的R1和R2形成嗎啉基環、吡咯烷鎓環、哌啶鎓環或噁嗪鎓環。在一些實施方案中，該兩性離子化合物選自表1中列出的兩性離子化合物。在一些實施方案中，該陽離子化合物選自表1中列出的陽離子化合物。在一些實施方案中，該兩性離子化合物為N,N-二甲基-N-(2-羥乙基)-3-銨-丙酸鹽或N-乙基-哌啶鎓-4-丁基磺酸鹽。在一些實施方案中，所述一種或多種多肽選自抗體、酶、血漿蛋白、血清蛋白及其組合。在一些實施方案中，該組合物包含：pH緩衝液；非離子型澱粉；以及多元醇、磷酸酶抑制劑、胺基酸或其組合中的一種或多種。在一些實施方案中，該多元醇選自二醇(glycol)、甘油、赤蘚糖醇、蘇糖醇、阿拉伯糖醇、木糖醇、核糖醇、側金盞糖醇、甘露糖醇、山梨糖醇、半乳糖醇、巖藻糖醇、艾杜糖醇、肌醇及其組合。在一些實施方案中，該多元醇為甘油。在一些實施方案中，該磷酸酶抑制劑為2-甘油磷酸酯。在一些實施方案中，該胺基酸為甘氨酸。在一些實施方案中，該胺基酸為肌氨酸。在一些實施方案中，該非還原糖為蔗糖，並且該三糖選自麥芽三糖、異麥芽三糖、蜜三糖、松三糖和黑麴黴三糖，更優選松三糖。在一些實施方案中，該水溶性聚合物為聚乙烯醇，該磷酸酶抑制劑為2-甘油磷酸酯，且該兩性離子化合物為季內鹽(quaternaryinnersalt)。在一些實施方案中，該水溶性聚合物為聚乙烯醇，該磷酸酶抑制劑為2-甘油磷酸酯，且該兩性離子化合物為N,N-二甲基-N-(2-羥乙基)-3-銨-丙酸鹽或N-乙基-哌啶鎓-4-丁基磺酸鹽。在某些實施方案中，該多元醇選自二醇、甘油、赤蘚糖醇、蘇糖醇、阿拉伯糖醇、木糖醇、核糖醇、側金盞糖醇、甘露糖醇、山梨糖醇、半乳糖醇、巖藻糖醇、艾杜糖醇和肌醇，該磷酸酶抑制劑為2-甘油磷酸酯，且該胺基酸為甘氨酸或肌氨酸。在某些實施方案中，該多元醇為甘油，該磷酸酶抑制劑為2-甘油磷酸酯，並且該胺基酸為甘氨酸或肌氨酸。在一些實施方案中，該製劑選自表2中列出的那些製劑。在一些實施方案中，提供了基本穩定地儲存的一種或多種純化的非變性多肽的組合物，其包含與任何前述製劑相混合的一種或多種純化的非變性多肽。本文在一些實施方案中描述了用於使血液樣品中呈天然、非變性構象的一種或多種多肽在環境溫度下基本穩定儲存的方法，其包括：將來自受試者的採集血液樣品與本文提供的用於使血液樣品中呈天然、非變性構象的一種或多種多肽基本穩定儲存的製劑相混合，其中所述一種或多種多肽在室溫下儲存後保持在天然、非變性狀態下至少三天的時間。在一些實施方案中，該多肽選自抗體、酶、血漿蛋白、血清蛋白及其組合。在一些實施方案中，至少80％的該多肽在室溫下儲存後保持在天然、非變性狀態下至少三天的時間。在一些實施方案中，該受試者為動物。在一些實施方案中，該受試者為哺乳動物。在一些實施方案中，該受試者為人。在本發明的另一個方面，提供了用於使血液樣品中呈天然、非變性狀態的一種或多種核酸分子在環境溫度下基本穩定儲存的製劑，其中所述一種或多種核酸分子在環境溫度下儲存後在基本無細胞內核酸汙染的天然、非變性狀態下穩定至少3天的時間。在一些實施方案中，至少80％的該核酸分子在室溫下儲存後在基本無細胞內核酸汙染的天然、非變性狀態下穩定至少3天的時間。在一些實施方案中，所述一種或多種核酸分子在室溫下儲存後保持在天然、非變性構象下至少4天、至少5天、至少6天、至少7天、至少8天、至少9天、至少10天、至少11天、至少12天、至少13天、至少14天、至少15天、至少16天、至少17天或至少18天的時間。在一些實施方案中，該製劑包含：pH緩衝液；磷酸酶抑制劑；嘌呤；兩性離子化合物、陽離子化合物或其組合；以及凋亡抑制劑或胱天蛋白酶抑制劑。在一些實施方案中，該磷酸酶抑制劑為2-甘油磷酸酯。在一些實施方案中，該兩性離子化合物為季內鹽。在一些實施方案中，該季內鹽為2-(苄基(2-羥乙基)(甲基)銨基)乙酸鹽。在一些實施方案中，該兩性離子化合物為式(I)化合物：其中R1、R2和R3獨立地選自未取代或取代的烷基、未取代或取代的芳基、未取代或取代的芳基烷基，或者R1和R2任選地形成環，Y為CH2、CH(A)、CH(A)-CH(A)、CH(A)-CH(A)-CH(A)，其中A為未取代或取代的烷基、芳基、芳基烷基，或通常在20種天然存在的胺基酸之一種中發現的任何側鏈；並且Z為CO2-、SO3-或OPO3-。在一些實施方案中，該陽離子化合物選自：(a)式(II)化合物：其中R1、R2和R3獨立地選自未取代或取代的烷基、未取代或取代的芳基、未取代或取代的芳基烷基，或者R1和R2任選地形成環，Y為CH2、CH(A)、CH(A)-CH(A)、CH(A)-CH(A)-CH(A)，其中A為未取代或取代的烷基、芳基、芳基烷基，或通常在20種天然存在的胺基酸之一種中發現的任何側鏈；Z為CO2A；並且X為藥學上可接受的陰離子；(b)式(III)化合物：其中R1、R2、R3和R4獨立地選自未取代或取代的烷基、未取代或取代的芳基、未取代或取代的芳基烷基，或者R1和R2任選地形成環，Y為CH2、CH(A)、CH(A)-CH(A)、CH(A)-CH(A)-CH(A)，其中A為未取代或取代的烷基、芳基、芳基烷基，或通常在20種天然存在的胺基酸之一種中發現的任何側鏈；並且X為藥學上可接受的陰離子；和(c)式(IV)化合物：其中R1和R2獨立地選自未取代或取代的烷基、未取代或取代的芳基、未取代或取代的芳基烷基；並且X為藥學上可接受的陰離子。在一些實施方案中，式(I)、式(II)或式(III)化合物的R1和R2形成嗎啉基環、吡咯烷鎓環、哌啶鎓環或噁嗪鎓環。在一些實施方案中，該兩性離子化合物選自表1中列出的兩性離子化合物。在一些實施方案中，該陽離子化合物選自表1中列出的陽離子化合物。在一些實施方案中，該製劑進一步包含核酸酶抑制劑。在一些實施方案中，該嘌呤為腺嘌呤。在一些實施方案中，該核酸酶抑制劑為金精三羧酸。在一些實施方案中，該組合物進一步包含選自抗生素、嘌呤衍生物及其組合的試劑。在一些實施方案中，該抗生素選自利福平、放線菌素D、5-羥基-1,4-萘醌及其組合。在一些實施方案中，該嘌呤衍生物為5-巰基嘌呤。在一些實施方案中，該胱天蛋白酶抑制劑為Q-VD-OPH。在一些實施方案中，所述一種或多種核酸分子為循環遊離DNA分子。在某些實施方案中，該磷酸酶抑制劑為2-甘油磷酸酯，該兩性離子化合物為季內鹽，更優選2-(苄基(2-羥乙基)(甲基)銨基)乙酸鹽，該凋亡抑制劑為ApoptosisInhibitor(Calbiochem，目錄號178488)，該胱天蛋白酶抑制劑為Q-VD-OPH，並且該pH緩衝液為MOPS。在某些實施方案中，該磷酸酶抑制劑為2-甘油磷酸酯，該兩性離子化合物為2-(苄基(2-羥乙基)(甲基)銨基)乙酸鹽，該凋亡抑制劑為ApoptosisInhibitor(Calbiochem，目錄號178488)，該胱天蛋白酶抑制劑為Q-VD-OPH，並且該pH緩衝液為MOPS。在某些其它實施方案中，該製劑包含：pH緩衝液；磷酸酶抑制劑；嘌呤；陽離子化合物或兩性離子化合物；以及核酸酶抑制劑。在某些實施方案中，該磷酸酶抑制劑為2-甘油磷酸酯，該嘌呤為腺嘌呤，該兩性離子化合物為季內鹽，該核酸酶抑制劑為金精三羧酸，並且該pH緩衝液為MOPS。在某些實施方案中，該磷酸酶抑制劑為2-甘油磷酸酯，該嘌呤為腺嘌呤，該兩性離子化合物為2-(苄基(2-羥乙基)(甲基)銨基)乙酸鹽，該核酸酶抑制劑為金精三羧酸，並且該pH緩衝液為MOPS。在一些實施方案中，該製劑進一步包含極性溶劑和螯合劑。在一些實施方案中，該製劑進一步包含二甲基乙醯胺和EDTA三鉀。在一些實施方案中，該製劑選自表3中列出的製劑。在一些實施方案中，提供了基本穩定地儲存的一種或多種純化的非變性核酸分子的組合物，其包含與任何前述製劑相混合的一種或多種純化的非變性核酸分子。本文在一些實施方案中描述了用於使血液樣品中呈天然、非變性狀態的一種或多種核酸分子在環境溫度下基本穩定儲存的方法，其包括：將來自受試者的採集血液樣品與本文提供的用於使血液樣品中呈天然、非變性狀態的一種或多種核酸分子在環境溫度下基本穩定儲存的製劑相混合，其中所述一種或多種核酸分子在室溫下儲存後保持在基本無細胞內核酸汙染的天然、非變性狀態下至少三天的時間。在一些實施方案中，該核酸分子編碼選自抗體、酶和血清蛋白抗體、酶、血漿蛋白和血清蛋白的多肽。在一些實施方案中，至少80％的該核酸分子在室溫下儲存後保持在基本無細胞內核酸汙染的天然、非變性狀態下至少三天的時間。在一些實施方案中，該核酸分子為循環遊離DNA分子。在一些實施方案中，該受試者為動物。在一些實施方案中，該受試者為哺乳動物。在一些實施方案中，該受試者為人。本文在一些實施方案中描述了用於使血液樣品中呈天然狀態的一種或多種外來體在環境溫度下基本穩定儲存的製劑，其包含：pH緩衝液；磷酸酶抑制劑；嘌呤；兩性離子化合物、陽離子化合物或其組合；及凋亡抑制劑或胱天蛋白酶抑制劑，其中所述一種或多種外來體在室溫下儲存後穩定至少三天的時間。在一些實施方案中，至少80％的該外來體在室溫下儲存後穩定至少三天的時間。在一些實施方案中，所述一種或多種外來體在室溫下儲存後穩定至少4天、至少5天、至少6天、至少7天、至少8天、至少9天、至少10天、至少11天、至少12天、至少13天、至少14天、至少15天、至少16天、至少17天或至少18天的時間。在一些實施方案中，該磷酸酶抑制劑為2-甘油磷酸酯。在一些實施方案中，該兩性離子化合物為季內鹽。在一些實施方案中，該季內鹽為2-(苄基(2-羥乙基)(甲基)銨基)乙酸鹽。在一些實施方案中，該兩性離子化合物為式(I)化合物：其中R1、R2和R3獨立地選自未取代或取代的烷基、未取代或取代的芳基、未取代或取代的芳基烷基，或者R1和R2任選地形成環，Y為CH2、CH(A)、CH(A)-CH(A)、CH(A)-CH(A)-CH(A)，其中A為未取代或取代的烷基、芳基、芳基烷基，或通常在20種天然存在的胺基酸之一種中發現的任何側鏈；並且Z為CO2-、SO3-或OPO3-。在一些實施方案中，該陽離子化合物選自：(a)式(II)化合物：其中R1、R2和R3獨立地選自未取代或取代的烷基、未取代或取代的芳基、未取代或取代的芳基烷基，或者R1和R2任選地形成環，Y為CH2、CH(A)、CH(A)-CH(A)、CH(A)-CH(A)-CH(A)，其中A為未取代或取代的烷基、芳基、芳基烷基，或通常在20種天然存在的胺基酸之一種中發現的任何側鏈；Z為CO2A；並且X為藥學上可接受的陰離子；(b)式(III)化合物：其中R1、R2、R3和R4獨立地選自未取代或取代的烷基、未取代或取代的芳基、未取代或取代的芳基烷基，或者R1和R2任選地形成環，Y為CH2、CH(A)、CH(A)-CH(A)、CH(A)-CH(A)-CH(A)，其中A為未取代或取代的烷基、芳基、芳基烷基，或通常在20種天然存在的胺基酸之一種中發現的任何側鏈；並且X為藥學上可接受的陰離子；和(c)式(IV)化合物：其中R1和R2獨立地選自未取代或取代的烷基、未取代或取代的芳基、未取代或取代的芳基烷基；並且X為藥學上可接受的陰離子。在一些實施方案中，式(I)、式(II)或式(III)化合物的R1和R2形成嗎啉基環、吡咯烷鎓環、哌啶鎓環或噁嗪鎓環。在一些實施方案中，該兩性離子化合物選自表1中列出的兩性離子化合物。在一些實施方案中，該陽離子化合物選自表1中列出的陽離子化合物。在一些實施方案中，該製劑進一步包含核酸酶抑制劑。在一些實施方案中，該嘌呤為腺嘌呤。在一些實施方案中，該核酸酶抑制劑為金精三羧酸。在一些實施方案中，該組合物進一步包含選自抗生素、嘌呤衍生物及其組合的試劑。在一些實施方案中，該抗生素選自利福平、放線菌素D、5-羥基-1,4-萘醌及其組合。在一些實施方案中，該嘌呤衍生物為5-巰基嘌呤。在某些實施方案中，該磷酸酶抑制劑為2-甘油磷酸酯，該兩性離子化合物為季內鹽，更優選2-(苄基(2-羥乙基)(甲基)銨基)乙酸鹽，該凋亡抑制劑為ApoptosisInhibitor(Calbiochem，目錄號178488)，該胱天蛋白酶抑制劑為Q-VD-OPH，並且該pH緩衝液為MOPS。在某些實施方案中，該磷酸酶抑制劑為2-甘油磷酸酯，該兩性離子化合物為2-(苄基(2-羥乙基)(甲基)銨基)乙酸鹽，該凋亡抑制劑為ApoptosisInhibitor(Calbiochem，目錄號178488)，該胱天蛋白酶抑制劑為Q-VD-OPH，並且該pH緩衝液為MOPS。在某些實施方案中，該製劑包含pH緩衝液、磷酸酶抑制劑、嘌呤、陽離子化合物或兩性離子化合物；以及核酸酶抑制劑。在某些實施方案中，該磷酸酶抑制劑為2-甘油磷酸酯，該嘌呤為腺嘌呤，該兩性離子化合物為季內鹽，該核酸酶抑制劑為金精三羧酸，並且該pH緩衝液為MOPS。在某些實施方案中，該磷酸酶抑制劑為2-甘油磷酸酯，該嘌呤為腺嘌呤，該兩性離子化合物為2-(苄基(2-羥乙基)(甲基)銨基)乙酸鹽，該核酸酶抑制劑為金精三羧酸，並且該pH緩衝液為MOPS。在一些實施方案中，該製劑進一步包含極性溶劑和螯合劑。在一些實施方案中，該製劑進一步包含二甲基乙醯胺和EDTA三鉀。在一些實施方案中，該製劑選自表3中列出的製劑。在一些實施方案中，提供了基本穩定地儲存的一種或多種純化的外來體的組合物，其包含與任何前述製劑相混合的一種或多種純化的外來體。本文在一些實施方案中描述了用於使血液樣品中呈天然狀態的一種或多種外來體在環境溫度下基本穩定儲存的方法，其包括：將來自受試者的採集血液樣品與本文提供的用於使血液樣品中呈天然狀態的一種或多種外來體在環境溫度下基本穩定儲存的製劑相混合，其中所述一種或多種外來體在室溫下儲存後保持在天然狀態下至少三天的時間。在一些實施方案中，該受試者為動物。在一些實施方案中，該受試者為哺乳動物。在一些實施方案中，該受試者為人。本文在一些實施方案中描述了包含容納在採血管內的任意一種本文所述製劑(包括表2和表3中列出的製劑)的製品。在一些實施方案中，該採血管為抽空的採血管本文在一些實施方案中描述了包含任一種所述製品和包裝說明書的試劑盒。具體實施方式本發明涉及用於使血液樣品中呈天然、非變性構象的一種或多種多肽或核酸分子在環境溫度下基本穩定儲存的製劑、組合物、製品、試劑盒及方法。在一些實施方案中，本發明還涉及用於使血液樣品中的一種或多種外來體在環境溫度下基本穩定儲存的製劑、組合物、製品、試劑盒及方法。在一些實施方案中，該製劑提供多肽和/或核酸分子的基本穩定的儲存，其中至少60％、70％、80％、90％、95％或甚至99％的該多肽和/或核酸分子在室溫下儲存後保持在基本無細胞內成分汙染的天然、非變性狀態下。在一些實施方案中，該製劑提供外來體的基本穩定的儲存，其中至少60％、70％、80％、90％、95％或甚至99％的該外來體在室溫下儲存後是穩定的。在一些實施方案中，該製劑提供多肽的基本穩定的儲存，該多肽保持其天然構象並且是功能活性的。在一些實施方案中，本文描述的組合物還為無細胞內DNA汙染的非變性、全長核酸分子如循環遊離DNA提供了基本穩定的儲存條件，以用於改善的定量或診斷分析。定義除非另有定義，否則本文中所採用的所有技術和科學術語具有與本發明所屬領域的技術人員所普遍理解的相同的含義。本文提及的所有專利、專利申請和出版物均通過引用全文併入本文。除非上下文中另有明確規定，否則如本說明書及隨附的權利要求書中所用的，單數形式「一個」、「一種」和「該/所述」包括其複數提法。因此，例如，提及「該/所述方法」包括本領域技術人員在閱讀此公開內容等之後將會明白的一種或多種方法和/或本文描述的這種類型的步驟。如本文所使用的「約」在提及可測值如量、時距等時，意在包括指定值的±20％或±10％或±5％或甚至±1％的偏差，因為此類偏差對於所公開的組合物或實施所公開的方法是合適的。如本文所述，核酸分子是指兩種或更多種修飾的和/或未修飾的脫氧核糖核苷酸或核糖核苷酸的聚合物，既可以是單獨的片段形式也可以是較大結構的成分。核酸分子、寡核苷酸和多核苷酸包括RNA或DNA(單鏈或雙鏈的、編碼的、互補的或反義的)或多於一種核苷酸的單鏈或雙鏈形式的RNA/DNA雜合序列、諸如PNA(肽核酸)的DNA類似物及其任何化學修飾物。該DNA可以是單鏈或雙鏈的DNA、cDNA，或通過任何擴增技術擴增的DNA，或任何DNA聚合物。在一些實施方案中，該核酸分子為循環遊離DNA(cfDNA)。如本文所用的，cfDNA是指在受試者血液中循環而不包含在細胞內的DNA。RNA可以是mRNA、rRNA、tRNA、siRNA、總RNA、小核RNA(snRNA)、RNAi、微RNA、基因組RNA、從細胞或組織中分離的RNA、核酶或任何RNA聚合物。在一些實施方案中包括天然的核酸分子，諸如可從天然來源中分離出的那些。在一些實施方案中，該核酸分子為源自天然來源的形式、片段和衍生物，以及重組形式和人工分子，只要具有該天然分子的至少一種性質即可。在一些實施方案中，生物樣品中的該核酸分子為可應用於分析、診斷和/或藥學目的的那些核酸分子，諸如但不限於核酸及其衍生物(例如寡核苷酸、DNA、cDNA、PCR產物、基因組DNA、質粒、染色體、人工染色體、基因轉移載體、RNA、mRNA、tRNA、siRNA、miRNA、hnRNA、核酶、基因組RNA、肽核酸(PNA)和細菌人工染色體(BAC))。在一些實施方案中，該生物樣品為血液。如在「純化的多肽」或「純化的核酸分子」或「純化的外來體」中使用的術語「純化的」分別是指多肽、核酸分子或外來體的回收，就汙染物，例如細胞成分如蛋白質、脂質或鹽的去除而言，其為至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少92％、至少94％、至少95％、至少96％、至少98％或至少99％純化的。術語「基本純化的」一般是指大部分細胞蛋白質或反應汙染物從血液樣品中的分離，從而能干擾分離的生物分子(諸如核酸分子)的後續使用的化合物得以去除。如本文所述，術語「多肽」是指胺基酸的任何聚合鏈。術語「肽」和「蛋白質」與術語多肽可互換使用，並且也表示胺基酸的聚合鏈。術語「多肽」包括天然或人工蛋白質、蛋白質片段以及蛋白質序列的多肽類似物。多肽可以是單體的或聚合的。除非上下文與此衝突，否則術語「多肽」包括其片段和變體(包括變體的片段)。術語「分離的蛋白質」或「分離的多肽」，就其衍生的起源(例如細胞或生物樣品)或來源來說，是與其天然狀態下伴隨的天然關聯成分不再關聯的蛋白質或多肽。因此，化學合成的多肽將會是從其天然關聯的成分中「分離」的。蛋白質也可通過分離使其基本沒有天然關聯的成分而進行純化或基本純化，就利用本領域公知的蛋白質純化技術去除汙染物，例如細胞成分如蛋白質、脂質或鹽而言，其為至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少92％、至少94％、至少95％、至少96％、至少98％或至少99％純化的。用於使血液樣品中呈天然、非變性狀態的多肽、核酸或外來體在環境溫度下穩定的製劑和組合物在本發明的一個方面，提供了用於使血液樣品中呈非變性構象的一種或多種多肽在環境溫度下基本穩定儲存的製劑和組合物，其中所述一種或多種多肽在室溫下儲存後在天然、非變性構象下穩定至少三天的時間。在一些實施方案中，提供了用於使血液樣品中呈天然、非變性構象的多肽在環境溫度下基本穩定儲存的製劑和組合物，其中至少80％的該多肽在室溫下儲存後在天然、非變性構象下穩定至少三天的時間。在一些實施方案中，所述一種或多種多肽在室溫下儲存後保持在天然、非變性構象下至少4天、至少5天、至少6天、至少7天、至少8天、至少9天、至少10天、至少11天、至少12天、至少13天、至少14天、至少15天、至少16天、至少17天或至少18天的時間。如本文中所使用的術語「環境溫度」是指平常的室內室溫。在一些實施方案中，環境溫度為15℃到32℃。在一些實施方案中，環境溫度為20℃到27℃。在某些實施方案中，用於使血液樣品中呈天然、非變性狀態的一種或多種多肽和/或核酸分子在環境溫度下基本穩定儲存的製劑包含：pH緩衝液；非還原糖；三糖；以及水溶性聚合物、陽離子化合物、兩性離子化合物和磷酸酶抑制劑中的至少一種。在某些實施方案中，提供了用於使血液樣品中呈天然、非變性狀態的一種或多種多肽和/或核酸分子在環境溫度下基本穩定儲存的製劑，其包含pH緩衝液；非離子型澱粉；以及多元醇、磷酸酶抑制劑和胺基酸中的一種或多種，其中所述一種或多種多肽和/或核酸分子在室溫下儲存後在天然、非變性狀態下穩定至少三天的時間。在某些實施方案中，該多元醇選自二醇、甘油、赤蘚糖醇、蘇糖醇、阿拉伯糖醇、木糖醇、核糖醇、側金盞糖醇、甘露糖醇、山梨糖醇、半乳糖醇、巖藻糖醇、艾杜糖醇和肌醇，該磷酸酶抑制劑為2-甘油磷酸酯，並且該胺基酸為甘氨酸或肌氨酸。在某些實施方案中，該多元醇為甘油，該磷酸酶抑制劑為2-甘油磷酸酯，並且該胺基酸為甘氨酸或肌氨酸。在一些實施方案中，提供了用於使血液樣品中呈天然、非變性狀態的一種或多種核酸分子在環境溫度下基本穩定儲存的製劑，其中所述一種或多種核酸分子在室溫下儲存後保持在基本無細胞內核酸汙染的天然、非變性狀態下至少三天的時間。在一些實施方案中，提供了用於使血液樣品中呈天然、非變性狀態的核酸分子在環境溫度下基本穩定儲存的製劑，其中至少80％的該核酸分子在室溫下儲存後在天然、非變性狀態下穩定至少三天的時間。在其它實施方案中，所述一種或多種核酸分子在室溫下儲存後保持在天然、非變性構象下至少4天、至少5天、至少6天、至少7天、至少8天、至少9天、至少10天、至少11天、至少12天、至少13天、至少14天、至少15天、至少16天、至少17天或至少18天的時間。在某些實施方案中，該製劑包含：pH緩衝液；磷酸酶抑制劑；嘌呤；兩性離子化合物、陽離子化合物或其組合；以及凋亡抑制劑或胱天蛋白酶抑制劑。在某些優選的實施方案中，該磷酸酶抑制劑為2-甘油磷酸酯，該兩性離子化合物為季內鹽，更優選2-(苄基(2-羥乙基)(甲基)銨基)乙酸鹽，該凋亡抑制劑為ApoptosisInhibitor(Calbiochem，目錄號178488)，該胱天蛋白酶抑制劑為Q-VD-OPH，並且該pH緩衝液為MOPS。在某些其它實施方案中，用於使血液樣品中呈天然、非變性狀態的一種或多種核酸在環境溫度下基本穩定儲存的製劑包含：pH緩衝液；磷酸酶抑制劑；嘌呤；兩性離子化合物、陽離子化合物或其組合；以及核酸酶抑制劑。在某些實施方案中，該磷酸酶抑制劑為2-甘油磷酸酯，該嘌呤為腺嘌呤，該兩性離子化合物為季內鹽，更優選2-(苄基(2-羥乙基)(甲基)銨基)乙酸鹽，該核酸酶抑制劑為金精三羧酸，並且該pH緩衝液為MOPS。在一些實施方案中，該製劑進一步包含以下中的一種：抗生素、嘌呤衍生物、凋亡抑制劑、胱天蛋白酶抑制劑或其組合。在一些實施方案中，該製劑包含極性溶劑和螯合劑。在一些實施方案中，該製劑進一步包含二甲基乙醯胺和EDTA三鉀。在一些實施方案中，本文提供了組合物，其中血液樣品與核酸、多肽或外來體以及所述穩定製劑進行混合，以在全血製劑中分別產生基本穩定的一種或多種非變性的核酸、多肽或外來體。在一些實施方案中，提供了一種組合物，其包含與相應的穩定製劑混合的純化的或基本純化的一種或多種核酸分子、多肽或外來體。配製試劑A.pH緩衝液根據某些實施方案，本文描述的用於使血液樣品中的核酸分子、多肽或外來體在環境溫度下基本穩定儲存的製劑和組合物包含一種或多種pH緩衝液。在一些實施方案中，該pH緩衝液是因其對抗溶液的pH變化的能力而為本領域所知的大量化合物中的任意化合物，諸如在存在pH緩衝液的水溶液中。用於包含在穩定儲存組合物中的一種或多種具體pH緩衝液的選擇可基於本公開內容以及根據本領域的常規實踐來進行，並且可受到多種因素的影響，包括希望維持的pH、待穩定的樣品的性質、將採用的溶劑條件、將採用的製劑的其它成分以及其它條件。例如，一般而言，pH緩衝液以在質子解離常數(pKa)的約0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9或1.0個pH單位以內的pH使用，質子解離常數為緩衝液的一個特徵。pH緩衝液的非限制性實例包括檸檬酸、酒石酸、蘋果酸、磺基水楊酸、磺基間苯二甲酸、草酸、硼酸鹽、CAPS(3-(環己基氨基)-1-丙磺酸)、CAPSO(3-(環己基氨基)-2-羥基-1-丙磺酸)、EPPS(4-(2-羥乙基)-1-哌嗪丙磺酸)、HEPES(4-(2-羥乙基)哌嗪-1-乙磺酸)、MES(2-(N-嗎啉基)乙磺酸)、MOPS(3-(N-嗎啉基)丙磺酸)、MOPSO(3-嗎啉基-2-羥基丙磺酸)、PIPES(1,4-哌嗪二乙磺酸)、TAPS(N-[三(羥甲基)甲基]-3-氨基丙磺酸)、TAPSO(2-羥基-3-[三(羥甲基)甲基氨基]-1-丙磺酸)、TES(N-[三(羥甲基)甲基]-2-氨基乙磺酸)、bicine(N,N-二(2-羥乙基)甘氨酸)、tricine(N-[三(羥甲基)甲基]甘氨酸)、tris(三(羥甲基)氨基甲烷)以及bis-tris(2-[二(2-羥乙基)氨基]-2-(羥甲基)-1,3-丙二醇)。本文所涵蓋的某些實施方案，包括表2或表3中列出的大量實施方案，可表徵具有約4.0、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9、8.0、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9或9.0的pH的製劑。B.陽離子化合物和兩性離子化合物在本文描述的某些實施方案中，所述兩性離子化合物為季內鹽。在一些實施方案中，用於核酸的基本穩定儲存的季內鹽為WO2012/018638中公開的那些。在一些實施方案中，該兩性離子化合物為式(I)化合物：其中R1、R2和R3獨立地選自未取代或取代的烷基、未取代或取代的芳基、未取代或取代的芳基烷基，或者R1和R2任選地形成環，Y為CH2、CH(A)、CH(A)-CH(A)、CH(A)-CH(A)-CH(A)，其中A為未取代或取代的烷基、芳基、芳基烷基，或通常在20種天然存在的胺基酸之一種中發現的任何側鏈；並且Z為CO2-、SO3-或OPO3-。在一些實施方案中，R1和R2形成嗎啉基環、吡咯烷鎓環、哌啶鎓環或噁嗪鎓環。在一些實施方案中，該陽離子化合物選自：(a)式(II)化合物：其中R1、R2和R3獨立地選自未取代或取代的烷基、未取代或取代的芳基、未取代或取代的芳基烷基，或者R1和R2任選地形成環，Y為CH2、CH(A)、CH(A)-CH(A)、CH(A)-CH(A)-CH(A)，其中A為未取代或取代的烷基、芳基、芳基烷基，或通常在20種天然存在的胺基酸之一種中發現的任何側鏈；Z為CO2A；並且X為藥學上可接受的陰離子；(b)式(III)化合物：其中R1、R2、R3和R4獨立地選自未取代或取代的烷基、未取代或取代的芳基、未取代或取代的芳基烷基，或者R1和R2任選地形成環，Y為CH2、CH(A)、CH(A)-CH(A)、CH(A)-CH(A)-CH(A)，其中A為未取代或取代的烷基、芳基、芳基烷基，或通常在20種天然存在的胺基酸之一種中發現的任何側鏈；並且X為藥學上可接受的陰離子；和(c)式(IV)化合物：其中R1和R2獨立地選自未取代或取代的烷基、未取代或取代的芳基、未取代或取代的芳基烷基；並且X為藥學上可接受的陰離子。在一些實施方案中，式(II)或式(III)化合物的R1和R2形成嗎啉基環、吡咯烷鎓環、哌啶鎓環或噁嗪鎓環。「烷基」基團是指脂肪族烴基團。該烷基部分包括「飽和烷基」基團，這意味著其不含任何烯烴或炔烴部分。該烷基部分也包括「不飽和烷基」部分，這意味著其含有至少一個烯烴或炔烴部分。「烯烴」部分是指具有至少一個碳碳雙鍵的基團，而「炔烴」部分是指具有至少一個碳碳三鍵的基團。無論是飽和的還是不飽和的，該烷基部分均包括支鏈、直鏈或環狀部分。根據結構，烷基基團包括單價基團或雙價基團(即亞烷基)，並且如果是「低級烷基」則具有1到6個碳原子。如本文所使用的，C1-Cx包括C1-C2、C1-C3、……C1-Cx。該「烷基」部分任選地具有1到10個碳原子(本文中無論何時出現，諸如「1到10」的數值範圍均指給定範圍內的每個整數；例如，「1到10個碳原子」意味著該烷基基團選自具有1個碳原子、2個碳原子、3個碳原子等直至且包含10個碳原子的部分，儘管本定義也涵蓋未指定數值範圍的術語「烷基」的出現)。本文描述的化合物的烷基基團可被指定為「C1-C4烷基」或類似的指定。僅舉例而言，「C1-C4烷基」表示在烷基鏈中具有一個到四個碳原子，即，該烷基鏈選自甲基、乙基、丙基、異丙基、正丁基、異丁基、仲丁基和叔丁基。因此，C1-C4烷基包括C1-C2烷基和C1-C3烷基。烷基基團為任選取代的或未取代的。典型的烷基基團包括但絕不限於甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、叔丁基、戊基、己基、乙烯基、丙烯基、丁烯基、環丙基、環丁基、環戊基、環己基等。如本文所用的，術語「環」是指任何共價閉合的結構。環包括，例如，碳環(例如芳基和環烷基)、雜環(例如雜芳基和非芳族雜環)、芳族(例如芳基和雜芳基)和非芳族(例如環烷基和非芳族雜環)。環可以是任選取代的。環可以是單環的或多環的。單獨使用的或作為如「芳基烷基」、「芳基烷氧基」或「芳氧基烷基」中較大部分的一部分使用的術語「芳基」是指單環的、雙環的或三環的碳環體系，其包括稠環，其中該體系中的至少一個環是芳族的。術語「芳基」可與術語「芳環」互換使用。在一個實施方案中，芳基包括具有6-12個碳原子的基團。在另一個實施方案中，芳基包括具有6-10個碳原子的基團。芳基基團的實例包括苯基、萘基、蒽基、菲基、並四苯基、1,2,3,4-四氫化萘基、1H-茚基、2,3-二氫-1H-茚基等。一種具體的芳基為苯基。在另一個實施方案中，芳基包括茚滿基、萘基、四氫化萘基等，其中該基團或連接點在芳環上。術語「任選取代的」或「取代的」意指所提及的基團可被一個或多個另外的基團所取代，該另外的基團單獨地且獨立地選自烷基、環烷基、芳基、雜芳基、雜脂環、羥基、烷氧基、芳氧基、烷硫基、芳硫基、烷基亞碸、芳基亞碸、烷基碸、芳基碸、氰基、滷代、醯基、硝基、滷代烷基、氟烷基、氨基(包括單取代和雙取代的氨基基團)及其受保護的衍生物。舉例而言，可選的取代基可以是LsRs，其中每個Ls獨立地選自鍵、-O-、-C(＝O)-、-S-、-S(＝O)-、-S(＝O)2-、-NH-、-NHC(O)-、-C(O)NH-、S(＝O)2NH-、-NHS(＝O)2、-OC(O)NH-、-NHC(O)O-、-(取代或未取代的C1-C6烷基)或-(取代或未取代的C2-C6烯基)；並且每個Rs獨立地選自H、取代或未取代的C1-C4烷基、取代或未取代的C3-C6環烷基、雜芳基或雜烷基。在本文描述的製劑(包括表2或表3中列出的那些製劑)的某些其它實施方式中，所述陽離子化合物或兩性離子化合物選自表1的示例性化合物中的一種。表1.示例性陽離子化合物和兩性離子化合物在用於使一種或多種多肽基本穩定儲存的某些實施方案中，包括表2中列出的那些實施方案中，所述兩性離子化合物為季內鹽。在某些實施方案中，該季內鹽為約1.0–100mg/mL或1.0–50mg/mL或10.0–50mg/mL濃度的N,N-二甲基-N-(2-羥乙基)-3-銨-丙酸鹽或N-乙基-哌啶鎓-4-丁基磺酸鹽。在用於使一種或多種核酸分子基本穩定儲存的某些實施方案中，包括表3中列出的那些實施方案中，該季內鹽為2-(苄基(2-羥乙基)(甲基)銨基)乙酸鹽。C.非還原糖在一些實施方案中，本文還描述了在使血液樣品中呈天然構象的一種或多種多肽在環境溫度下基本穩定儲存的組合物中包含至少一種非還原糖的製劑。非還原糖為缺少醛官能團的碳水化合物分子。示例性的非還原糖包括蔗糖和海藻糖。在一些實施方案中，該非還原糖為海藻糖且以約1.0–50mM或約10.0–30mM或約25mM的濃度存在。在用於使呈天然構象的一種或多種多肽基本穩定儲存的一些實施方案中，該非還原糖為以約1.0–50mM或約1.0–30mM或約10mM的濃度存在的蔗糖。D.三糖如本文所述，在某些實施方案中，所述製劑在使全血樣品中呈天然構象的一種或多種多肽在環境溫度下基本穩定儲存的製劑或組合物中包含至少一種三糖。三糖為由三個單糖單體用糖苷鍵相連接構成的寡糖。該糖苷鍵可形成於成分單糖上的任何羥基基團之間，並且不同的鍵組合(區域選擇性化學(regiochemistry))和立體化學(α-或β-)產生具有不同化學及物理性質的互為非對映體的三糖。用於包含在穩定儲存組合物中的一種或多種具體三糖的選擇可基於本公開內容以及根據本
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的常規實踐來進行，並且可受到包括其它製劑組分在內的多種因素的影響。示例性的三糖包括但不限於麥芽三糖、異麥芽三糖、蜜三糖、松三糖和黑麴黴三糖。在用於穩定多肽的某些實施方案中，包括表2中列出的製劑中，該三糖為松三糖。在一些實施方案中，該松三糖以約1％-20％或約5.0–15％的濃度存在。E.多元醇同樣如本文所述，某些實施方案包括在用於使全血樣品中呈天然構象的一種或多種多肽在環境溫度下基本穩定儲存的組合物中的至少一種多元醇。多元醇為含有兩個或更多個羥基基團的多羥基醇，並且具有通式H(CHOH)nH，其中n為選自2到7(含)的整數。多元醇在鏈長上存在差異，其中大多數多元醇具有源自戊糖(五碳糖)和己糖(六碳糖)的五碳或六碳鏈；但是也存在更短或更長的碳鏈的多元醇。示例性的多元醇包括但不限於二醇、甘油、赤蘚糖醇、蘇糖醇、阿拉伯糖醇、木糖醇、核糖醇、側金盞糖醇、甘露糖醇、山梨糖醇、半乳糖醇、巖藻糖醇、艾杜糖醇和肌醇。用於包含在基本穩定儲存組合物中的一種或多種具體多元醇的選擇可基於本公開內容以及根據本領域的常規實踐來進行，並且可受到包括其它製劑組分在內的多種因素的影響。在某些實施方案中，存在於製劑(包括表2中的那些)中的多元醇為戊糖多元醇，並且以20–100mM或約25–75mM的濃度存在。在某些實施方案中，存在於製劑(包括表2中的那些)中的多元醇為側金盞糖醇，並且以20–100mM或約25–75mM的濃度存在。F.水溶性聚合物如本文所述，某些實施方案包括在用於使全血樣品中呈天然構象的一種或多種多肽在環境溫度下基本穩定儲存的製劑及組合物中的至少一種水溶性聚合物。此類水溶性聚合物包括聚乙烯醇。應當理解，基於本公開內容，技術人員可選擇其它水溶性聚合物以在穩定儲存製劑及組合物中使用，並且可根據所採用的組合物的其它成分、所儲存的具體生物樣品、所要回收的是核酸分子還是多肽分子還是兩者均回收以及其它因素而變化。某些實施方案，包括但不限於表2中示出的那些實施方案，涵蓋以約0.1％到10％(vol/vol)或約0.1％到5％(vol/vol)或1.0％(vol/vol)的濃度(基於體積，即vol/vol)包含水溶性聚合物。在某些實施方案中，該水溶性聚合物為具有約30-70,000道爾頓的分子量範圍且約87-90％水解的聚乙烯醇。G.磷酸酶抑制劑在某些實施方案中，本文描述的用於使血液樣品中呈非變性狀態的一種或多種核酸分子或多肽在環境溫度下基本穩定儲存的製劑含有磷酸酶抑制劑。在某些實施方案中，該磷酸酶抑制劑為絲氨酸-蘇氨酸類磷酸酶的抑制劑。在某些實施方案中，該磷酸酶抑制劑為2-甘油磷酸酯。為了穩定多肽，其濃度為約1.0–100mM或約25–75mM或約50mM；而對於核酸分子，其為約1.0–200mM或約25–150mM或約125mM；而對於外來體，其為約1.0–200mM或約25–150mM或約125mM。H.非離子型澱粉在某些實施方案中，用於使血液樣品中呈非變性構象的一種或多種多肽在環境溫度下基本穩定儲存的製劑含有非離子型澱粉。在某些實施方案中，該非離子型澱粉為羥乙基澱粉(HES)。羥乙基澱粉是B.BraunMedicalInc.的最常用的容量擴充劑之一，商品名為HESPAN。在某些實施方案中，HES以約1.0–10％或約1.0–5.0％或約1.0–2.0％的濃度存在。I.螯合劑根據某些實施方案，螯合劑或螯合物包含在當前描述的用於使血液樣品中呈非變性狀態的一種或多種多肽或核酸分子基本穩定儲存的製劑及組合物中，並且因其與金屬陽離子絡合併阻礙金屬陽離子反應性的能力而為本領域技術人員所知。示例性的螯合劑包括二亞乙基三胺五乙酸(DTPA)、乙二胺四乙酸(EDTA)、乙二醇四乙酸(EGTA)、反式-1,2-二氨基環己烷-N,N,N',N'-四乙酸(CDTA)、1,2-雙(2-氨基苯氧基)乙烷-N,N,N',N'-四乙酸(BAPTA)、1,4,7,10-四氮雜環十二烷-1,4,7,10-四乙酸(DOTA)、N-(2-羥乙基)亞乙基二胺-N,N',N'-三乙酸、葡萄糖酸鈉和次氨基三乙酸(NTA)。在一些實施方案中，該螯合劑為EDTA二鈉或三鉀，並且以約1.0–100mM或約10–90mM或約70mM的濃度存在。J.核酸酶抑制劑在某些實施方案中，用於使血液樣品中的一種或多種非變性核酸分子在環境溫度下基本穩定儲存的製劑含有核酸酶抑制劑。核酸酶抑制劑為本領域技術人員所周知。在一些實施方案中，任何此類核酸酶抑制劑在本發明的製劑(包括表3中的那些製劑)、組合物及方法中使用。在一些實施方案中，該核酸酶抑制劑為金精三羧酸。K.嘌呤及嘌呤衍生物根據某些實施方案，在當前描述的用於使血液樣品中的核酸分子基本穩定儲存的組合物中包含嘌呤或嘌呤衍生物。在一些實施方案中，該嘌呤為腺嘌呤、鳥嘌呤或其組合。在一些實施方案中，該嘌呤為嘌呤衍生物。在一些實施方案中，該嘌呤衍生物為2-巰基嘌呤。L.抗生素在某些實施方案中，用於使血液樣品中的一種或多種非變性核酸分子在環境溫度下基本穩定儲存的製劑含有抗生素。抗生素為本領域技術人員所周知。在一些實施方案中，任何此類抗生素在本發明的製劑、組合物及方法中使用。在一些實施方案中，該抗生素為利福平、放線菌素D、5-羥基-1,4-萘醌或其組合。M.極性溶劑在某些實施方案中，用於使血液樣品中的一種或多種非變性核酸分子在環境溫度下基本穩定儲存的製劑含有極性溶劑。在一些實施方案中，該極性溶劑為二甲基乙醯胺。在一些實施方案中，該極性溶劑以25％的濃度存在。在一些實施方案中，該極性溶劑為二甲基乙醯胺，並且以25％的濃度存在。用於使血液樣品中的非變性的、天然的多肽、核酸分子或外來體在環境溫度下穩定的製劑在一些實施方案中，本文描述了用於使血液樣品中的一種或多種非變性多肽在環境溫度下基本穩定儲存的製劑，其包含：pH緩衝液；非還原糖；三糖；以及水溶性聚合物、兩性離子化合物、陽離子化合物或磷酸酶抑制劑中的至少一種，其中所述一種或多種多肽和/或核酸分子在室溫下儲存後保持在天然、非變性狀態下至少三天的時間。在其它實施方案中，所述一種或多種多肽或核酸分子在室溫下儲存後保持在基本無細胞內多肽汙染的天然、非變性構象下至少4天、至少5天、至少6天、至少7天、至少8天、至少9天、至少10天、至少11天、至少12天、至少13天、至少14天、至少15天、至少16天、至少17天或至少18天的時間。在某些實施方案中，該二糖為蔗糖，並且該三糖選自麥芽三糖、異麥芽三糖、蜜三糖、松三糖和黑麴黴三糖，更優選松三糖。在另一些優選的實施方案中，該水溶性聚合物為聚乙烯醇，該磷酸酶抑制劑為2-甘油磷酸酯，並且該兩性離子化合物為季胺，優選N,N-二甲基-N-(2-羥乙基)-3-銨-丙酸鹽或N-乙基-哌啶鎓-4-丁基磺酸鹽。在某些優選的實施方案中，用於使血液樣品中的非變性多肽在環境溫度下基本穩定儲存的製劑從表2中選擇。表2.用於使血液樣品中的非變性多肽在環境溫度下穩定的示例性製劑在其它方面，提供了用於使血液樣品中呈天然、非變性狀態的一種或多種核酸分子在環境溫度下基本穩定儲存的製劑，其中所述一種或多種核酸分子在室溫下儲存後在基本無細胞內核酸的天然、非變性狀態下穩定至少三天的時間。在某些實施方案中，該製劑包含：pH緩衝液；磷酸酶抑制劑；嘌呤；兩性離子化合物、陽離子化合物或其組合；以及凋亡抑制劑或胱天蛋白酶抑制劑。在某些實施方案中，該磷酸酶抑制劑為2-甘油磷酸酯，該兩性離子化合物為季內鹽，該凋亡抑制劑為ApoptosisInhibitor(Calbiochem，目錄號178488)，該胱天蛋白酶抑制劑為Q-VD-OPH，並且該pH緩衝液為MOPS。在某些實施方案中，該磷酸酶抑制劑為2-甘油磷酸酯，該兩性離子化合物為2-(苄基(2-羥乙基)(甲基)銨基)乙酸鹽，該凋亡抑制劑為ApoptosisInhibitor(Calbiochem，目錄號178488)，該胱天蛋白酶抑制劑為Q-VD-OPH，並且該pH緩衝液為MOPS。在其它實施方案中，所述一種或多種核酸分子在室溫下儲存後保持在基本無細胞內核酸的天然、非變性構象下至少4天、至少5天、至少6天、至少7天、至少8天、至少9天、至少10天、至少11天、至少12天、至少13天、至少14天、至少15天、至少16天、至少17天或至少18天的時間。在某些其它實施方案中，該製劑包含：pH緩衝液；磷酸酶抑制劑；嘌呤；兩性離子化合物、陽離子化合物或其組合；以及核酸酶抑制劑。在某些實施方案中，該磷酸酶抑制劑為2-甘油磷酸酯，該嘌呤為腺嘌呤，該兩性離子化合物為季內鹽，更優選2-(苄基(2-羥乙基)(甲基)銨基)乙酸鹽，該核酸酶抑制劑為金精三羧酸，並且該pH緩衝液為MOPS。在其它實施方案中，該製劑可進一步包含以下中的一種：抗生素、嘌呤衍生物、凋亡抑制劑或胱天蛋白酶抑制劑。在一些實施方案中，該製劑進一步包含極性溶劑和螯合劑。在一些實施方案中，該製劑包含二甲基乙醯胺和EDTA三鉀。在某些實施方案中，用於使血液樣品中的非變性核酸分子在環境溫度下基本穩定儲存的製劑從表3中選擇。表3.用於使血液樣品中的非變性核酸分子在環境溫度下穩定的示例性製劑在其它方面，提供了用於使血液樣品中呈天然狀態的一種或多種外來體在環境溫度下基本穩定儲存至少三天時間的製劑。在某些實施方案中，該製劑包含：pH緩衝液；磷酸酶抑制劑；嘌呤；兩性離子化合物、陽離子化合物或其組合；以及凋亡抑制劑或胱天蛋白酶抑制劑。在某些實施方案中，該磷酸酶抑制劑為2-甘油磷酸酯，該兩性離子化合物為季內鹽，該凋亡抑制劑為ApoptosisInhibitor(Calbiochem，目錄號178488)，該胱天蛋白酶抑制劑為Q-VD-OPH，並且該pH緩衝液為MOPS。在某些實施方案中，該磷酸酶抑制劑為2-甘油磷酸酯，該兩性離子化合物為2-(苄基(2-羥乙基)(甲基)銨基)乙酸鹽，該凋亡抑制劑為ApoptosisInhibitor(Calbiochem，目錄號178488)，該胱天蛋白酶抑制劑為Q-VD-OPH，並且該pH緩衝液為MOPS。在其它實施方案中，該外來體在室溫下儲存後保持在天然狀態下至少4天、至少5天、至少6天、至少7天、至少8天、至少9天、至少10天、至少11天、至少12天、至少13天、至少14天、至少15天、至少16天、至少17天或至少18天的時間。在某些實施方案中，該製劑包含：pH緩衝液；磷酸酶抑制劑；嘌呤；兩性離子化合物或陽離子化合物；以及核酸酶抑制劑。在某些實施方案中，該磷酸酶抑制劑為2-甘油磷酸酯，該嘌呤為腺嘌呤，該兩性離子化合物為季內鹽，更優選2-(苄基(2-羥乙基)(甲基)銨基)乙酸鹽，該核酸酶抑制劑為金精三羧酸，並且該pH緩衝液為MOPS。在其它實施方案中，該製劑可進一步包含以下中的一種：抗生素和嘌呤衍生物。在一些實施方案中，該製劑進一步包含極性溶劑和螯合劑。在一些實施方案中，該製劑包含二甲基乙醯胺和EDTA三鉀。在某些實施方案中，用於使血液樣品中的外來體在環境溫度下基本穩定儲存的製劑從表3中選擇。用於使非變性核酸分子和多肽在環境溫度下穩定的製劑的製備方法本製劑可採用可商購試劑以及本領域技術人員公知的方法製備。在一些實施方案中，將該製劑製備成配製試劑的濃縮原液，例如2X、5X、10X、20X等，並以適宜的濃度與血液樣品混合。在一些實施方案中，血液樣品與該製劑原液等體積(1:1)混合。純化的核酸分子和多肽在一些實施方案中，於環境溫度下在血液樣品中基本穩定的一種或多種多肽和/或核酸分子進一步利用本領域技術人員常用的公知常規方法進行純化。用於從血液中純化核酸分子和多肽的設備、試劑盒及方法是眾所周知的。例如，在一些實施方案中，基本穩定的多肽和核酸通過親和色譜法、凝膠電泳等進行純化。在一些實施方案中，已純化的一種或多種多肽或核酸分子隨後在分析之前儲存在本文描述的製劑中達延長的時間。製品在某些實施方案中，提供了製品，其中本文描述的製劑(包括表2或表3中列出的那些製劑)中的一種容納在合適的採血管、採血容器或採血器皿中。在一些實施方案中，這些製品通過在採血時穩定一種或多種血液成分來用於使一種或多種血液成分基本穩定儲存。在某些實施方案中，該採血管為具有低於大氣壓的氣壓以抽出預定體積的全血的抽空採血管。在一些實施方案中，這些製品在本文描述的試劑盒及方法中使用。試劑盒在本發明的某些方面，提供了試劑盒，該試劑盒包含任意一種含有本發明製劑的製品以及包裝說明書。在一些實施方案中，該試劑盒的組件裝在容器中，諸如帶隔室的塑料包圍體中。在一些實施方案中，該容器具有可嚴密密封的蓋子，使得該試劑盒的內容物在使用前可消毒並密封儲存。用於血液成分的基本穩定儲存的方法在本發明的另一個方面，提供了用於使血液樣品中呈天然、非變性構象或狀態的一種或多種多肽、核酸分子或外來體基本穩定儲存的方法。在某些實施方案中，該方法包括將血液樣品與用於使血液樣品中的一種或多種多肽在環境溫度下基本穩定儲存的製劑相混合，其中所述一種或多種多肽在室溫下儲存後在天然、非變性狀態下穩定至少三天的時間。在一些實施方案中，至少80％的該多肽保持在天然、非變性狀態下至少三天的時間。在某些實施方案中，用於使血液樣品中的一種或多種非變性多肽在環境溫度下基本穩定儲存的製劑包含：pH緩衝液；非還原糖；三糖；以及水溶性聚合物、兩性離子化合物、陽離子化合物或磷酸酶抑制劑中的至少一種或多種。在某些實施方案中，該製劑為表2中列出的製劑中的一種。在該方法的一些實施方案中，所述一種或多種多肽在室溫下儲存後保持在天然、非變性構象下至少4天、至少5天、至少6天、至少7天、至少8天、至少9天、至少10天、至少11天、至少12天、至少13天、至少14天、至少15天、至少16天、至少17天或至少18天的時間。在一些實施方案中，該方法包括將血液樣品與用於使血液樣品中的一種或多種核酸分子在環境溫度下基本穩定儲存的製劑相混合，其中所述一種或多種核酸分子在室溫下儲存後在基本無細胞內核酸汙染的天然、非變性狀態下穩定至少三天的時間。在一些實施方案中，至少80％的該核酸保持在天然、非變性的狀態下至少三天的時間。在某些實施方案中，用於使血液樣品中的一種或多種非變性核酸分子在環境溫度下基本穩定儲存的製劑包含：pH緩衝液；磷酸酶抑制劑；嘌呤；兩性離子化合物、陽離子化合物或其組合；以及凋亡抑制劑或胱天蛋白酶抑制劑。在某些實施方案中，該製劑包含：pH緩衝液；磷酸酶抑制劑；嘌呤；兩性離子化合物或陽離子化合物；以及核酸酶抑制劑。在一些實施方案中，該製劑進一步包含：極性溶劑和螯合劑。在一些實施方案中，該製劑進一步包含二甲基乙醯胺和EDTA三鉀。在某些實施方案中，該製劑為表3中列出的製劑中的一種。在該方法的一些實施方案中，所述一種或多種核酸分子在室溫下儲存後保持在天然、非變性構象下至少4天、至少5天、至少6天、至少7天、至少8天、至少9天、至少10天、至少11天、至少12天、至少13天、至少14天、至少15天、至少16天、至少17天或至少18天的時間。在一些實施方案中，該方法包括將血液樣品與用於使血液樣品中的一種或多種外來體在環境溫度下基本穩定儲存的製劑相混合，其中所述一種或多種外來體在環境溫度下穩定至少三天的時間。在一些實施方案中，至少80％的該外來體穩定至少三天的時間。在某些實施方案中，用於使血液樣品中的一種或多種外來體在環境溫度下基本穩定儲存的製劑包含：pH緩衝液；磷酸酶抑制劑；嘌呤；兩性離子化合物、陽離子化合物或其組合；以及凋亡抑制劑或胱天蛋白酶抑制劑。在某些實施方案中，該製劑包含：pH緩衝液；磷酸酶抑制劑；嘌呤；兩性離子化合物或陽離子化合物；以及核酸酶抑制劑。在一些實施方案中，該製劑進一步包含：極性溶劑和螯合劑。在一些實施方案中，該製劑進一步包含二甲基乙醯胺和EDTA三鉀。在某些實施方案中，該製劑為表3中列出的製劑中的一種。在該方法的一些實施方案中，所述一種或多種外來體在室溫下儲存後穩定至少4天、至少5天、至少6天、至少7天、至少8天、至少9天、至少10天、至少11天、至少12天、至少13天、至少14天、至少15天、至少16天、至少17天或至少18天的時間。採血管、採血袋、採血容器和採血器皿是本領域公知的，並且已經被執業醫師使用了數十年。可利用本領域技術人員通常採用的任何方法或設備如靜脈穿刺或手指針刺來採集血液。當通過靜脈穿刺採集血液時，可在從受試者獲取血液樣品時，將本發明製劑置於採血管內部，例如抽空的管(VACUTAINER採血管、BectonDickenson或VACUETTE，Greiner)內部，或者可將該製劑添加至已獲得的全血樣品中，優選地在抽取後立即或不久添加。如本文描述的方法可採用本文披露的製品及試劑盒。以說明而非限制的方式給出以下實施例。實施例1人血液樣品中的功能活性多肽在環境溫度下穩定至少九天的時間本實施例說明了本發明的製劑，包括所闡述的用於使血液樣品中呈天然、非變性構象的天然、功能活性多肽在環境溫度下基本穩定儲存至少九天時間的那些製劑。根據製造商的使用說明，採用來自LuminexCorp的MillipexMAP人細胞因子/趨化因子系列組HCYTOMAG-60K-PX29試劑盒來檢驗表2中列出的示例性製劑A-G在環境溫度下穩定多種多肽(例如對29種細胞因子和趨化因子的研究)的能力。簡單來說，從供體採集人全血樣品並對血液進行分級分離，然後分析血漿層。將75或135(表2中的9:1樣品)微升份的血漿添加至1.7mL微量離心管中，向其中加入29種不同細胞因子的溶液以使樣品摻加有400pg/mL的內部標準，並且將體積調節至150微升。製備不存在(儲存在-80℃)或存在血漿(試驗當天新鮮)的含有內部標準的對照樣品，並且與測試樣品同時進行處理。此外，利用16、80、400、2,000和10,000pg/mL準備標準曲線，以確保該試驗的線性度並幫助已結合的細胞因子和趨化因子濃度的恰當定量。將對照和測試樣品置於室溫下，並在第0天、第3天及第6天取出25微升的小份。第0天和第3天的樣品儲存在-80℃下直至第6天處理。向每個25mL份中加入各25微升的測定緩衝液，隨後添加25微升量的固定有人細胞因子/趨化因子抗體的磁珠，該磁珠上塗有29種針對細胞因子/趨化因子系列組的每個成員的抗體中的一種。這些抗體僅識別非變性的細胞因子和趨化因子多肽，而變性的多肽不會與該磁珠結合。將該混合物在4℃振動下溫育過夜。將96孔板抵靠磁體放置以隔離結合的磁珠，移除上清液，並用洗滌緩衝液洗滌磁珠兩次。向洗滌過的磁珠，向每個樣品添加25微升份的檢測抗體溶液，並在室溫下溫育一小時。添加25微升份的鏈黴親和素-藻紅蛋白溶液，並在室溫下儲存該樣品30min。將磁體緊挨著96孔板放置以隔離磁珠，移除上清液，並且將樣品洗滌兩次然後重懸浮在150微升的洗滌緩衝液中。根據製造商的使用說明，採用LuminexBio-TekELx405儀器來測定來自每個血漿樣品的已結合的細胞因子/趨化因子的量，並對每個樣品計算非變性細胞因子和趨化因子的29個成員中的每一種的量。細胞因子子集的結果示於表4中。表4利用表2的製劑，在環境溫度下穩定來自血液樣品的細胞因子和趨化因子系列組在環境溫度下的穩定NP：未受保護的對照實施例2在環境溫度下穩定人血液樣品中的循環遊離核酸至少八天的時間本實施例說明了本發明的製劑，包括表3中列出的那些製劑，這些製劑用於使血液樣品中呈天然、非變性狀態的核酸分子在環境溫度下基本穩定儲存，同時防止來自裂解的血細胞的細胞內核酸的明顯汙染至少八天的時間。在兩個單獨的實驗中檢測表3中列出的示例性製劑1-10穩定血液樣品中基本無細胞內核酸汙染的多種循環遊離核酸的能力。簡言之，對於每種製劑，分別將1.0mL的製劑置於三個5mL的Eppendorf管中。置於室溫及4℃下的未受保護的管不接納製劑。從健康供體採集新鮮的人全血。將血液合併，混合，然後將4.0mL等份分至各管中。在10個管中都裝載有血液後，將管封閉並顛倒混合10次，之後向更多管中加入血液。在向下一組管中添加前將血液再混合。一旦所有的管都已經裝載並混合，則將時間零點的管以3000rpm旋轉10分鐘。在不擾動白細胞和紅細胞的情況下移出兩份1.25mL的血漿，轉移至單獨的1.5mL的Eppendorf微量離心管中並在4℃下以16,000g旋轉10min。通過添加1mL的1XPBSpH7.4製備NP室溫時間零點的血液。將該管顛倒混合10次，然後如上所述製備血漿。對於每種測試的製劑，在來自RocheMolecularSystems的RocheMagNAPureCompactInstrument上利用MagNAPureCompactNucleicAcidIsolationKit1，LargeVolume(Roche，目錄號03730972001)提取兩份1mL的無細胞血漿等份。在100μL洗脫緩衝液中洗脫核酸。將時間零點的樣品保持在4℃下直至如上所述製備第4天的樣品。在Bio-RadCFX96RealTimeSystem(C1000TouchThermalCycler)上，使用來自Qiagen的一組18srRNA引物(目錄號PPH05666E-200)以及Bio-RadiQSYBRGreenSupermix(目錄號170-8882)，通過qPCR分析從每種樣品中提取的DNA。使用5μL的每種樣品，產生以下圖表。此外，製備分離的DNA的1:10稀釋液，並同樣地通過qPCR擴增5μL的該稀釋液。表5利用表3的製劑，在環境溫度下穩定血液樣品中的基本無細胞內核酸汙染的循環遊離核酸。產量(μg/mL)天數4℃室溫製劑1製劑2製劑3製劑4製劑500.020.020.020.020.020.020.0240.170.190.140.040.020.070.0780.060.910.100.060.080.030.08表6利用表3的製劑，在環境溫度下穩定血液樣品中的基本無細胞內核酸汙染的循環遊離核酸。產量(μg/mL)天數4℃室溫製劑6製劑7製劑8製劑9製劑1000.030.030.030.030.030.030.0340.290.440.420.430.340.430.0883.014.210.770.650.760.690.11如表5和表6所示，向人血液中添加表3的示例性製劑導致保持基本無細胞內DNA汙染的循環遊離核酸的回收。在第0天，測試樣品中存在的循環遊離核酸的量與對照和其它測試樣品基本上相同；然而，在第8天，儲存在4℃或室溫下的血液顯示出循環遊離核酸水平的明顯升高，正如這些樣品中來自裂解的血細胞的汙染細胞內核酸的產量增加所示的。相反，製劑1-10使循環遊離核酸保持基本無細胞內核酸，在第8天僅顯示出適度的升高，並且與在4℃下儲存8天的未受保護的樣品相比，所有這些製劑都表現得大致相同或更好。除非上下文另有要求，否則在本說明書和權利要求書通篇中，詞語「包含」及其變化形式(其可與「包括」、「含有」或「特徵在於」互換使用)是包含性或開放式語言，並且不排除另外的、未列舉的要素或方法步驟。短語「由……組成」排除權利要求中未指明的任何要素、步驟或成分。短語「基本由……組成」將權利要求的範圍限制於指明的物質或步驟以及那些實質上不影響所請求保護的發明的基本特性及新特性的物質或步驟。本公開內容涵蓋對應於這些短語中每一個的範圍的本發明組合物及方法的實施方案。因此，包含所列舉的要素或步驟的組合物或方法涵蓋其中組合物或方法基本由這些要素或步驟組成或者由這些要素或步驟組成的具體實施方案。本說明書通篇提及的「一個實施方案」或「實施方案」或「方面」意指與該實施方案相關聯地描述的具體特徵、結構或特性包含在本發明的至少一個實施方案中。因此，短語「在一個實施方案中」或「在實施方案中」在本說明書全文各處的出現並不一定都指的是同一個實施方案。此外，這些具體特徵、結構或特性可以在一個或多個實施方案中以任何合適的方式組合。以上描述的各種實施方案可進行組合以提供進一步的實施方案。可根據以上詳述的說明對實施方案作出這些和其它改變。總之，在所附的權利要求中，所採用的術語不應解釋為將權利要求限制於說明書和權利要求書中公開的具體實施方案，而應解釋為包括這些權利要求所請求保護的所有可能的實施方案以及等同方案的全部範圍。因此，權利要求不受公開內容的限制。從前述內容應當理解，雖然本文出於說明的目的已描述了本發明的具體實施方案，但在不偏離本發明的精神和範圍的情況下可作出多種修改。因此，本發明除了隨附的權利要求外不受限制。當前第1頁1&nbsp2&nbsp3&nbsp