用於治療多發性硬化、類風溼性關節炎以及其他自身免疫病症的c1orf32的製作方法

2023-09-19 21:21:15

專利名稱：用於治療多發性硬化、類風溼性關節炎以及其他自身免疫病症的c1orf32的製作方法
用於治療多發性硬化、類風溼性關節炎以及其他自身免疫病症的C10RF32發明領域
本發明涉及一種新穎蛋白，以及其變體、片段以及融合蛋白，以及將其用於免疫療法和藥物開發的方法。
發明背景
誘導免疫耐受性已經長時間被認為是自身免疫疾病療法的「聖杯」。免疫系統具有針對入侵病原體保護宿主，但同時防止對於自身抗原的不想要的反應所導致的損害的彼此相反的任務。後一部分被稱為免疫耐受性並且通過調節免疫應答的一組複雜的相互作用的並且互補的通路來進行。T細胞具有與自身以及非自身的各種抗原起反應的能力。因此，現存許多天然地存在以便消除潛在自身反應性應答的機制一這被稱為天然耐受性。消除潛在自身反應性T細胞的主要機制在胸腺中出現並且被稱為中心耐受性。一些潛在自身反應性 T細胞逃避中心耐受性，並且因此還存在多種周圍耐受性機制。儘管存在這些機制，一些自身反應性T細胞可能『逃避』並且以集合狀態(repertoire)存在；據信它們的活化可以導致自身免疫疾病。
對於治療耐受性的研究已經嘗試誘導並且擴大有效的生理性耐受機制以便消除或中和自身反應性T細胞並且預防或治療自身免疫疾病。誘導耐受性的一種方法是通過操縱共刺激配體與抗原呈遞細胞(APC)以及淋巴細胞上的受體之間的相互作用。
CTLA-4是下調免疫應答的最廣泛研究的共刺激分子。免疫抑制品質以及能夠誘導耐受性的屬性使它被公認為用於自身免疫介導的炎症病症的潛在免疫治療劑。阿巴西普(Abatacept ;商品名稱奧瑞希納(Orencia))是由與hlgGl的Fe片段融合的CTLA-4的 ECD (細胞外域)組成的融合蛋白。據信阿巴西普可通過有效地幹擾炎症級聯來誘導共刺激阻斷，它已經被批准用於治療患有類風溼性關節炎的患者。
用當前療法來誘導疾病控制，隨後在重新建立免疫耐受性的同時逐漸撤藥，可能在未來成為用於自身免疫療法的有吸引力的方法。此外，由於它們的免疫特異性，在不存在整體免疫抑制的情況下，這類療法對於長期使用應是安全的。
多發性硬化(MS)是中樞神經系統(CNS)的一種慢性、炎症性、脫髓鞘性病症，它涉及對於髓磷脂抗原的自身免疫應答。它的特徵在於CNS內的病變並且脫髓鞘是這些病變的關鍵特徵。自身反應性T細胞被認為引起針對CNS髓磷脂組分的自身免疫應答。這些自身免疫反應的主要目標被認為是髓磷脂鹼性蛋白(MBP)、蛋白脂質蛋白(PLP)以及髓磷脂少突膠質細胞糖蛋白(MOG)。實驗性自身免疫性腦脊髓炎(EAE )，一種通過用佐劑中的髓磷脂組分進行免疫接種來誘導的MS動物模型，展示了可比較的神經元病變 。不希望受單一假設限制，EAE中的研究提供了特異性針對自身抗原的T細胞介導這些疾病中的病變的令人信服的證據。
T輔助I型(Thl)細胞由IL-12誘導並且產生IFN- Y，而T輔助2型(Th2)細胞分泌 IL-4、IL-5以及IL-13。Thl細胞可以介導促炎症性或細胞介導性免疫應答，而Th2細胞主要促進某些類型的體液免疫。一些免疫相關疾病，例如自身免疫反應、炎症、慢性感染以及敗血症的特徵在於免疫系統的促炎症性相對於抗炎症性傾向的失調，連同Thl相對於Th2 細胞因子平衡的失衡。在炎症期間，誘導從Thl到Th2的平衡轉變通過減少免疫系統的炎症性傾向來保護有機體免受Thl/促炎症性細胞因子的全身性『過調節(overshooting)』。 與Thl到Th2免疫轉變相關的免疫調節療法在多種Thl介導的自身免疫疾病，例如多發性硬化以及類風溼性關節炎中具有保護性作用。例如，在包括MS的若干自身免疫疾病的動物模型中已經證明了功效的拉喹莫德(Laquinimod)展示出通過Thl/Th2轉變實現的免疫調節作用，並且不導致免疫抑制。乙酸格拉替雷(Glatiramer acetate ;克帕松(Copaxone)) 也誘導Thl/Th2轉變，同時減少促炎症細胞因子的分泌，而增加抗炎症細胞因子的分泌。此外，乙酸格拉替雷特異性Th2細胞能夠遷移越過血腦屏障並且引起自身攻擊性ThlT細胞的原位旁觀者抑制(bystander suppression)。
某些免疫細胞以及免疫細胞信號轉導通路是用於治療免疫病症的新藥劑的有希望的靶點。例如Thl、Thl7、Th2以及調控T細胞(Treg)在調節自身免疫性以及炎症中發揮重要作用。來自許多研究的越來越多的證據顯示，這些免疫細胞在多種病症，例如類風溼性關節炎、炎症性腸病、多發性硬化、牛皮癬、紅斑狼瘡、I型糖尿病以及葡萄膜炎中的重要性。 大多數現有療法一次只靶向一個通路。
發明簡要概述
背景技術未能提供靶向在自身免疫性以及炎症中所涉及的多個細胞以及通路的療法，這些細胞例如Thl、Thl7、Th22、Th2、Treg或者分泌或影響其他細胞分泌炎症分子的其他細胞，這些炎症分子例如細胞因子、金屬蛋白酶、趨化因子以及其他分子。
本發明關於新穎蛋白，以及其變體、片段以及融合蛋白，以及將其用於免疫療法和藥物開發的方法，包括但不局限於治療免疫相關疾病的方法。
如在此使用，術語「免疫相關疾病」包括以下疾病的如下列出類型以及亞型的任何一種多發性硬化、類風溼性關節炎、I型糖尿病、牛皮癬、全身紅斑狼瘡、炎症性腸病、葡萄膜炎或舍格倫氏症候群(Djogren』 s syndrome)。
如在此使用，「多發性硬化」包括以下一種或多種多發性硬化、良性多發性硬化、 復發緩解性多發性硬化、繼發性進行性多發性硬化、原發性進行性多發性硬化、進行性復發性多發性硬化、慢性進行性多發性硬化、過渡性/進行性多發性硬化、快速惡化性多發性硬化、臨床確診的多發性硬化、惡性多發性硬化(又稱為馬爾堡變種(Marburg’s Variant)), 以及急性多發性硬化。任選地，「與多發性硬化有關的病狀」包括例如德維克氏病(Devic’s disease)，又稱為視神經脊髓炎；急性散播性腦脊髓炎、急性脫髓鞘性視神經炎、脫髓鞘橫貫性脊髓炎、米勒_費歇爾症候群(Miller-Fisher syndrome)、腦脊髓神經根神經病變、急性脫髓鞘多神經病、腫脹性多發性硬化以及Balo同心圓性硬化。
如在此使用，「類風溼性關節炎」包括以下一種或多種類風溼性關節炎、痛風以及假性痛風、幼年特發性關節炎、幼年類風溼性關節炎、斯提耳氏病(Still’s disease)、 強直性脊柱炎、類風溼性脈管炎。任選地，與類風溼性關節炎有關的病狀包括例如骨關 節炎、肉狀瘤病、亨-舍二氏紫癜(Henoch-Schonlein purpura)、牛皮癬性關節炎、反應性關節炎、脊柱關節病、膿毒性關節炎、血色病、肝炎、脈管炎、韋格納氏肉芽腫病(Wegener’s granulomatosis)、萊姆氏病(Lyme disease)、家族性地中海熱、具有回歸熱的高免疫球蛋白血症D、TNF受體相關周期性症候群，以及與炎症性腸病相關的腸病性關節炎。
如在此使用，「葡萄膜炎」包括以下一種或多種葡萄膜炎、前葡萄膜炎(或虹膜睫狀體炎)、中間葡萄膜炎(扁平部睫狀體炎)、後葡萄膜炎(或脈絡膜視網膜炎)以及全葡萄膜炎形式。
如在此使用，「炎症性腸病」包括以下一種或多種炎症性腸病、克羅恩氏病 (Crohn’s disease)、潰瘍性結腸炎(UC)、膠原性結腸炎、淋巴細胞性結腸炎、缺血性結腸炎、改道性結腸炎、貝切特氏病(Behcet’s disease)、未確定的結腸炎。
如在 此使用，「牛皮癬」包括以下一種或多種牛皮癬；非膿皰性牛皮癬，包括尋常性牛皮癬以及牛皮癬性紅皮症(紅皮性牛皮癬)；膿皰性牛皮癬，包括泛發性膿皰性牛皮癬 (宗布希膿皰性牛皮癖(pustular psoriasis ofvon Zumbusch))、掌妬膿皰病(永久性掌妬膿皰病、理髮師類型的膿皰性牛皮癖(pustular psoriasis of the Barber type)、四肢膿皰性牛皮癬)、環狀膿皰性牛皮癬、持續性肢端皮炎、皰疹樣膿皰病。任選地，與牛皮癬有關的病狀包括例如藥物誘導的牛皮癬、皮褶牛皮癬、尿布區牛皮癬、脂溢性皮炎樣牛皮癬、滴狀牛皮癬、指甲牛皮癬、牛皮癬性關節炎。
如在此使用，「I型糖尿病」包括以下一種或多種1型糖尿病、胰島素依賴性糖尿病、特發性糖尿病、幼年I型糖尿病、青春晚期糖尿病、成人隱匿性自身免疫性糖尿病、妊娠糖尿病。與I型糖尿病有關的病狀包括神經病變，包括多神經病變、單神經病變、周圍神經病變以及自主神經病變；眼睛併發症青光眼、白內障、視網膜病。
如在此使用，「舍格倫氏症候群」包括以下一種或多種舍格倫氏症候群、原發性舍格倫氏症候群以及繼發性舍格倫氏症候群，以及與舍格倫氏症候群有關的病狀，包括結締組織疾病，例如類風溼性關節炎、全身性紅斑狼瘡或硬皮病。其他併發症包括肺炎，肺纖維化，間質性腎炎，腎臟過濾器周圍組織的炎症，腎小球性腎炎，腎小管性酸中毒，腕管症候群，周圍神經病變，顱神經病變，原發性膽汁性肝硬變(PBC)，肝硬化，食道、胃、胰腺以及肝臟的炎症(包括肝炎)，多肌炎，雷諾氏現象(Raynaud’s phenomenon),脈管炎，自身免疫甲狀腺問題，淋巴瘤。
如在此使用，「全身性紅斑狼瘡」包括以下一種或多種全身性紅斑狼瘡、盤狀狼瘡、狼瘡性關節炎、狼瘡性肺炎、狼瘡性腎炎。與全身性紅斑狼瘡有關的病狀包括骨關節結核、抗磷脂抗體症候群、心臟各個部分的炎症(例如心包炎、心肌炎以及心內膜炎)、肺以及胸膜炎症、胸膜炎、胸膜腔積液、慢性彌散性間質性肺病、肺動脈高壓、肺栓塞、肺出血，以及肺萎縮症候群、狼瘡性頭痛、格-巴二氏症候群(Guillain-Barre syndrome)、無菌性腦膜炎、脫髓鞘性症候群、單神經病變、多發性單神經炎、重症肌無力、脊髓病變、顱神經病變、多神經病變、脈管炎。
根據本發明的至少一些實施方案，提供的是C10RF32多肽，任選地被提供為含有 C10RF32多肽的融合蛋白。C10RF32融合多肽任選地具有直接或間接地經由肽連接物序列或化學連接物融合在一起的第一融合伴侶與第二融合伴侶該第一融合伴侶包括C10RF32 可溶性多肽的全部或一部分，或包括H19011_1_P8 (SEQ ID號4)、H19011_1_P8_V1 (SEQ ID 號5)、H19011_1_P9 (SEQ ID 號6)或 H19011_1_P9_V1 (SEQ ID 號34)的細胞外域的全部或一部分的多肽或與它同源的序列，該第二融合伴侶由異源序列(對應地非C10RF32) 組成。
根據至少一些實施方案，分離的多肽與包括H19011_1_P8 (SEQ ID號4)、H19011丄P8_V1 (SEQ ID 號5)、H19011_1_P9 (SEQ ID 號6)或 H19011_1_P9_V1 (SEQ ID號34)的細胞外域的全部或一部分的多肽至少80%、90%、95%、96%、97%、98%或99%同源。 根據至少一些實施方案，與包括 H19011_1_P8 (SEQ ID 號4)、H19011_1_P8_V1 (SEQ ID 號5)、H19011_1_P9 (SEQ ID 號6)或 H19011_1_P9_V1 (SEQ ID 號34)的細胞外域的全部或一部分的多肽至少80%、90%、95%、96%、97%、98%或99%同源的分離的多肽具有如在此描述的(例如在實例I中)至少一種SNP變化。C10RF32多肽可為任何物種來源。在進一步的實施方案中，C10RF32多肽為鼠科、非人靈長類動物或人類來源。
不希望受單一假設限制，根據至少一些實施方案，C10RF32融合蛋白抑制Thl、 Thl7、Th22或分泌或引起其他細胞分泌炎症分子的其他細胞的炎症活性，這些炎症分子包括但不局限於 IL-1 β、TNF-a ,TGF-β、IFN1、IL-17、IL-6、IL-23、IL-22、IL-21 以及 MMP。 再次不希望受單一假設限制，根據至少一些實施方案，C10RF32融合蛋白還可增加Treg的抑制能力或Th2細胞的免疫調節活性。C10RF32融合蛋白還可增加抗炎症分子，例如細胞因子IL-10的產生。
根據至少一些實施方案，C10RF32融合蛋白可任選地包括C10RF32的完全細胞外域(E⑶)或其片段或同源物。在一個實施方案中，C10RF32多肽為全長C10RF32E⑶的可溶性片段。這類片段任選地包括保持結合至其天然受體的能力並且合併有C10RF32多肽的細胞外域的部分或全部、並且缺乏細胞內和/或跨膜域的部分或全部的那些片段。在一個實施方案中，C10RF32多肽片段包括C10RF32多肽的整個細胞外域。在其他實施方案中，C10RF32 多肽的可溶性片段是保持C10RF32生物活性的細胞外域的片段。
C10RF32多肽細胞外域可包括來自跨膜域的1、2、3、4、5或更多個連續胺基酸，和/ 或來自信號序列的1、2、3、4、5或更多個連續胺基酸。可替代地，該細胞外域可有1、2、3、4、5、或更多個連續胺基酸被從C-末端、N-末端或這兩個末端去除。還可使用C10RF32多肽的生物活性變體和/或同源物及其片段。
根據本發明的至少一些實施方案，提供的是包括如在此描述的分離的C10RF32多肽的融合蛋白用於治療免疫相關病症的用途，該融合蛋白任選地在包括藥學上可接受的稀釋劑或載體的藥用組合物中。
在一個實施方案中，C10RF32多肽可任選地被融合至Ig重鏈恆定區的一個或多個域，該恆定區優選地具有與人免疫球蛋白Cy1、Cy2、Cy3*Cy4鏈的鉸鏈，CH2以及CH3 區或與鼠免疫球蛋白C Y 2a鏈的鉸鏈，CH2以及CH3區對應的胺基酸序列。
這些融合蛋白可任選地二聚化或多聚化以便形成同源二聚體、異源二聚體、同源多聚體或異源多聚體。二聚/多聚伴侶可在平行或反平行方向上安排。任選地，融合蛋白具有在SEQ ID號8、22、23、38、29中的任何一個中闡明的序列。
根據本發明的至少一些實施方案，提供的是一種藥用組合物，該藥用組合物包括能夠抑制T細胞活化的一種分離的可溶性C10RF32多肽、或其片段或變體或同源物，或含有它們的融合蛋白，以及藥學上可接受的稀釋劑或載體。任選地，該藥用組合物包括含有 H19011_1_ P8(SEQ ID 號4)、H19011_1_P8_V1(SEQ ID 號5)、H19011_1_P9(SEQ ID 號:6) 或H19011_1_P9_V1 (SEQ ID號34)的細胞外域的可溶性C10RF32多肽或其片段，以及藥學上可接受的稀釋劑或載體。根據本發明的至少一些實施方案，提供的是一種藥用組合物， 該藥用組合物包括一種分離的可溶性C10RF32多肽、或片段或變體或同源物或含有它們的融合蛋白，以及藥學上可接受的稀釋劑或載體，該藥用組合物被適配用於通過以下途徑中的任何一個或多個來治療炎症抑制或減少Thl、Thl7、Th22和/或分泌或引起其他細胞分泌炎症分子的其他細胞的分化；抑制或減少Thl、Thl7、Th22和/或分泌或引起其他細胞分泌炎症分子的其他細胞的活性；抑制或減少Thl和/或Thl7通路；抑制或減少Thl和/或 Thl7通路，同時促進Th2通路/活性/分化；抑制或減少Thl、Thl7、Th22和/或分泌或引起其他細胞分泌炎症分子的其他細胞的炎症分子產生和/或分泌；抑制或減少Thl、Thl7、 Th22和/或分泌或引起其他細胞分泌炎症分子的其他細胞的增殖；與Treg相互作用；增強 Treg活性；增強Treg的IL-10分泌;增力口 Treg數量;增力口 Treg的抑制能力；與Th2細胞相互作用；增強Th2活性，增強Th2細胞的免疫調節能力，增加Th2細胞數，增強Th2細胞的 IL-4、IL-5或IL-10產生；或其組合。
根據本發明的至少一些實施方案，提供的是一種藥用組合物，該藥用組合物包括一種分離的可溶性C10RF32多肽、片段、變體或同源物或含有它們的融合蛋白或偶聯物，以及藥學上可接受的稀釋劑或載體，該藥用組合物被適配用於治療免疫相關病症。
在一個實施方案中但是不希望受單一假設限制，C10RF32多肽或含有它們的融合蛋白或藥用組合物增強Treg對於免疫系統的抑制活性。Treg可抑制通過Thl、Thl7、Th22 和/或分泌或引起其他細胞分泌炎症分子的其他細胞的分化、增殖、活性和/或細胞因子產生和/或分泌。在一個實施方案中，C10RF32多肽或含有它們的融合蛋白或藥用組合物增強 Treg對於初始T細胞的抑制活性以便抑制或減少初始T細胞分化成Thl、Thl7、Th22細胞並且從而減少受試者中的Thl、Thl7、Th22和/或分泌或引起其他細胞分泌炎症分子的其他細胞的數量，這些炎症分子包括但不局限於IL-1 β、TNF-a、TGF-β、IFN-Y、IL-17、IL-6、 IL-23、IL-22、IL-21 以及 MMP。
在一個實施方案中，C10RF32多肽或含有它們的融合蛋白或藥用組合物增強Th2 免疫應答活性或增加Th2細胞數。Th2細胞可調節Thl、Thl7、Th22和/或分泌或引起其他細胞分泌炎症分子的其他細胞的分化、增殖、活性和/或細胞因子產生和/或分泌，從而導致Thl和/或Thl7應答的抑制，以及經由Thl/Th2轉變的免疫調節。在一個實施方案中， C10RF32多肽或含有它們的融合蛋白或藥用組合物增強Th2對於初始T細胞的免疫調節活性以便抑制或減少初始T細胞分化成Thl、Thl7、Th22細胞並且從而減少受試者的Thl、 Thl7、Th22和/或分泌或引起其他細胞分泌炎症分子的其他細胞的數量，這些炎症分子包括但不局限於 IL-1 β、TNF-a ,TGF-β、IFN1、IL-17、IL-6、IL-23、IL-22、IL-21 以及 MMP。 在一個實施方案中，C10RF32多肽或含有它們的融合蛋白或藥用組合物促進或增強Th2細胞的IL-4、IL-5或IL-10產生。任選地，該組合物是用於治療免疫相關病症。
根據本發明的至少一些實施方案，提供的是以下各項的用途一種分離的可溶性 C10RF32多肽、或片段或變體或同源物或含有它們的融合蛋白或偶聯物，或包括H19011_l_ P8 (SEQ ID 號4)、H19011_1_P8_V1 (SEQ ID 號5)、H19011_1_P9 (SEQ ID 號6)或 H19011_1_P9_V1 (SEQ ID號34)的細胞外域的多肽、或其片段或變體或同源物或含有它們的融合蛋白或偶聯物，或含有前述任一種的藥用組合物，上述各項被適配用於治療免疫相關病症。
任選地，該多肽包含與 以下各項具有至少95%序列一致性的胺基酸殘基的序列 與在SEQ ID號14中描繪的胺基酸序列對應的H19011_1_P8 (SEQ ID號4)的胺基酸殘基21-186、或與在SEQ ID號35中描繪的胺基酸序列對應的H19011_1_P8_V1 (SEQ ID 號:5)的殘基21-186、或與在SEQ ID號15中描繪的胺基酸序列對應的H19011_1_P9(SEQ ID號6)的殘基21-169、或與在SEQ ID號36中描繪的胺基酸序列對應的H19011_1_P9_ Vl (SEQ ID號34)的殘基21-169、或與在SEQ ID號37中描繪的胺基酸序列對應的序列 H19011_1_P8 (SEQ ID號4)的殘基1-184、或與在SEQ ID號19中描繪的胺基酸序列對應的序列H19011丄P8_V1 (SEQ ID號5)的殘基1-184、或與在SEQ ID號28中描繪的胺基酸序列對應的H19011_1_P9 (SEQ ID號6)的殘基1-169、或與在SEQ ID號30中描繪的胺基酸序列對應的H19011_1_P9_V1 (SEQ ID號34)的殘基1-169，或其片段或變體或同源物，這些序列被適配用於治療免疫相關病症。任選地，該多肽附接至一個可檢測的或治療的部分上。
根據至少一個實施方案，提供的是通過向受試者給予有效量的一種可溶性 C10RF32多肽、其片段、變體、同源物、融合蛋白或偶聯物、或其藥用組合物來抑制或減少受試者中中中的表位擴展的方法。進一步的實施方案提供給予有效量的可溶性C10RF32多肽、其片段、變體、同源物、融合蛋白或偶聯物或其藥用組合物以便抑制或減少患有免疫相關病症的患者的表位擴展的方法。
C10RF32多肽、其片段、變體、同源物、融合蛋白和/或偶聯物可結合一種或多種另外治療劑來給予，這些另外治療劑包括但不局限於，針對其他淋巴細胞表面標記(例如 ⑶40、α -4整聯蛋白)或針對細胞因子的抗體；其他融合蛋白，例如CTLA4-lg( Orencia 、 貝拉西普(belatac印t))、TNFR-1i ( Lnbrel ) ; TNF- α阻斷劑，例如英利昔單抗 (Remicade)、賽妥珠單抗(Cimzia)以及阿達木單抗(Humira) ;Q)73_Ig ;環磷醯胺(CTX) (gp E.ndoxan' 、Cytoxan 、Neosar 、Procytox 、Rev immune );甲氨喋呤(MTX)(即 Rheumatrex 、Trexall );貝利木單抗(belimumab ；即 Benlysta );那他珠單抗(Tysabri)或其他免疫抑制藥物、抗增殖藥物、細胞毒性劑、或可有助於免疫抑制的其他化合物。
在一個實施方案中，該額外治療劑靶向免疫活化中涉及到的不同通路。在一個進一步的實施方案中，該另外治療劑是一種CTLA-4融合蛋白，例如CTLA-41 g (阿巴西普(abatacept))。在一個進一步的實施方案中，該額外治療劑是一種被稱為貝拉西普的 CTLA4-1g融合蛋白，它含有在體內顯著地增加其對於CD86的親合力的兩個胺基酸取代 (L104E 以及 A29Y)。
在另一個實施方案中，第二治療劑是環磷醯胺(CTX)。在一個進一步的實施方案中，C10RF32多肽、其片段或融合蛋白與CTX是以治療慢性自身免疫疾病或病症，例如全身性紅斑狼瘡(SLE)的有效量共同給予的。
在另一個實施方案中，第二治療劑是甲氨喋呤(MTX)。在一個進一步的實施方案中，C10RF32多肽、其片段或融合蛋白與MTX是以治療慢性自身免疫疾病或病症，例如類風溼性關節炎(RA)的有效量共同給予的。在另一個實施方案中，第二治療劑增加血清中的腺苷量。
在一個進一步的實施方案中，第二治療劑為⑶73-1g、重組⑶73或增加⑶73表達的另一種藥劑(例如細胞因子或單克隆抗體或小分子)。在另 一個實施方案中，第二治療劑是幹擾素-β。
在另一個實施方案中，第二治療劑是那他珠單抗或用於MS的另一種治療劑。在一個進一步的實施方案中，C10RF32多肽、其片段或融合蛋白與那他珠單抗輪轉使用或在藥物假期期間使用以便允許第二治療劑給藥的頻率更低並且減少例如PML的副作用的風險並防止對於第二治療劑的抗性。
在另一個實施方案中，第二治療劑是抑制或減少Thl、Thl7、Th22和/或分泌或引起其他細胞分泌炎症分子的其他細胞的分化、增殖、活性和/或細胞因子產生和/或分泌的一種小分子。在另一個實施方案中，第二治療劑是與Treg相互作用、增強Treg活性、促進或增強Treg的IL-10分泌、增加Treg數量、增加Treg的抑制能力、或其組合的一種小分子。 在一個實施方案中，該小分子是視黃酸或其衍生物。在另一個實施方案中，第二治療劑是與 Th2細胞相互作用、增強Th2活性、促進或增強Th2細胞的IL-10、IL-4或IL-5產生、增加 Th2細胞數、增加Th2細胞的免疫調節能力、或其組合的一種小分子。
根據本發明的至少一些實施方案，提供的是如在此列舉的一種C10RF32可溶性多肽與有效於治療免疫相關病症的一種已知治療劑的組合的用途。
根據本發明的至少一些實施方案，提供的是一種治療免疫相關病症的方法，該方法包括向有需要的受試者給予一種藥用組合物，該藥用組合物包括一種具有C10RF32多肽的細胞外域的可溶性分子、或其片段或變體或同源物；或其融合蛋白或偶聯物；或包括以下各項的多肽與在SEQ ID號14中描繪的胺基酸序列對應的H19011_1_P8 (SEQ ID 號4)的胺基酸殘基21-186、或與在SEQ ID號35中描繪的胺基酸序列對應的H19011_l_ P8_V1 (SEQ ID號5)的殘基21-186、或與在SEQ ID號15中描繪的胺基酸序列對應的 H19011丄P9 (SEQ ID號:6)的殘基21-169、或與在SEQ ID號36中描繪的胺基酸序列對應的H19011_1_P9_V1 (SEQID號34)的殘基21-169、或與在SEQ ID號37中描繪的胺基酸序列對應的序列H19011_1_P8 (SEQ ID號4)的殘基1_184、或與在SEQ ID號19中描繪的胺基酸序列對應的序列H19011_1_P8_V1 (SEQ ID號5)的殘基1-184、或與在SEQ ID 號28中描繪的胺基酸序列對應的H19011_1_P9 (SEQ ID號6)的殘基1-169、或與在SEQ ID號30中描繪的胺基酸序列對應的H19011_1_P9_V1 (SEQ ID號34)的殘基1-169，或序列H19011_1_P8_V1 (SEQ ID號5)的殘基21-167，或其片段或變體或同源物。
根據本發明的至少一些實施方案，提供的是一種預防MS患者的中樞神經系統的神經細胞的髓磷脂外層(myelin coat)損傷的方法，該方法包括向有需要的受試者給予一種藥用組合物，該藥用組合物包括一種具有C10RF32多肽的細胞外域的可溶性分子、或其片段、變體、同源物、融合蛋白或偶聯物；或包括以下各項的多肽與在SEQ ID號14中描繪的胺基酸序列對應的H19011_1_P8 (SEQ ID號4)的胺基酸殘基21-186、或與在SEQ ID 號35中描繪的胺基酸序列對應的H19011丄P8_V1 (SEQ ID號5)的殘基21-186、或與在 SEQ ID號15中描繪的胺基酸序列對應的H19011_1_P9 (SEQ ID號6)的殘基21-169、或與在SEQ ID號36中描繪的胺基酸序列對應的H19011_1_P9_V1 (SEQ ID號34)的殘基 21-169、或與在SEQ ID號 37中描繪的胺基酸序列對應的序列H19011_1_P8(SEQ ID號:4) 的殘基1-184、或與在SEQ ID號19中描繪的胺基酸序列對應的序列H19011_1_P8_V1(SEQ ID號5)的殘基1-184、或與在SEQ ID號28中描繪的胺基酸序列對應的H19011_1_P9 (SEQ ID號6)的殘基1-169、或與在SEQ ID號30中描繪的胺基酸序列對應的H19011_l_ P9_V1 (SEQ ID號34)的殘基1_169，或其片段或變體或同源物；任選地以藥用組合物形式提供。
根據本發明的至少一些實施方案，提供的是一種治療免疫相關病症的方法，其中該治療不引起受試者的免疫系統的整體免疫抑制，該方法包括向有需要的受試者給予一種藥用組合物，該藥用組合物包括一種具有C10RF32多肽的細胞外域的可溶性分子、其片段、變體、同源物、融合蛋白或偶聯物；或包括以下各項的多肽與在SEQ ID號14中描繪的胺基酸序列對應的H19011_1_P8(SEQ ID號4)的胺基酸殘基21-186、或與在SEQ ID號35 中描繪的胺基酸序列對應的H19011_1_P8_V1 (SEQ ID號5)的殘基21-186、或與在SEQ ID號15中描繪的胺基酸序列對應的H19011_1_P9 (SEQ ID號6)的殘基21-169、或與在 SEQ ID號36中描繪的胺基酸序列對應的H19011_1_P9_V1(SEQID號34)的殘基21-169、 或與在SEQ ID號37中描繪的胺基酸序列對應的序列H19011_1_P8 (SEQ ID號4)的殘基1-184、或與在SEQ ID號19中描繪的胺基酸序列對應的序列H19011丄P8_V1 (SEQ ID 號5)的殘基1-184、或與在SEQ ID號28中描繪的胺基酸序列對應的H19011_1_P9 (SEQ ID號6)的殘基1-169、或與在SEQ ID號30中描繪的胺基酸序列對應的H19011_1_P9_V1 (SEQ ID號34)的殘基1-169，或其片段或變體或同源物；任選地以藥用組合物形式提供。
根據本發明的至少一些實施方案，提供的是一種分離的可溶性C10RF32多肽、其片段、變體或同源物；任選地為融合蛋白或偶聯物，其中所述多肽或所述融合蛋白或偶聯物是用於如在此描述的免疫相關病狀的抗免疫相關病狀免疫療法，任選地提供為藥用組合物。
任選地，治療包括預防、治癒、控制、逆轉、減弱、減輕、最小化、抑制、管理或阻止上述疾病的有害作用的這些項中的一個或多個。
任選地，管理包括降低疾病的嚴重度、減少疾病發作頻率、減少這類發作的持續時間、或減少這類發作的嚴重度、或其組合。
在另一個實施方案中，這些C10RF32多肽、其片段或變體或同源物、包含它們的融合蛋白或偶聯物，或包含它們的藥用組合物可用於治療不對TNF阻斷劑起·反應的患者。
附圖簡要說明


圖1A示出H19011_1_P8 (SEQ ID號4)蛋白與已知蛋白Q71H61_人類以及 NP_955383 (SEQ ID 號:3)的比對。
圖1B示出H19011_1_P9 (SEQ ID號6)蛋白與已知蛋白Q71H61_人類以及 NP_955383 (SEQ ID 號:3)的比對。
圖2 示出 C10RF32_T8_P8_Vl_ECD_mFc (在此又稱為 C10RF32_ECD_mFc) DNA 序列 (1287bp) (SEQ ID號7)。ECD序列以粗體標明，TEV裂解位點序列加下劃線，mFc序列為非粗斜體並且信號肽序列為粗斜體。
圖3 示出 C10RF32_T8_P8_Vl_ECD_mFc (在此又稱為 C10RF32_ECD_mFc)胺基酸序列(428aa) (SEQ ID號8)。ECD序列以粗體標明，TEV裂解位點序列加下劃線並且由TEV 序列的N-末端上的GS連接物以及TEV序列的C-末端上的SG包圍，mFc序列為非粗斜體並且信號肽序列為粗斜體。
圖4不出從疾病誘導日開始以兩種劑量(30和100微克/小鼠)以及兩種頻率(每天一次或每周3次)在預防模式下給予的C10RF32-P8-V1-E⑶-mFc (SEQ ID號8)的六次給予對於小鼠R-EAE模型的臨床症狀的效果，展示為平均臨床計分(圖4A)、累積臨床計分(圖4B)以及復發頻率(圖4C)。在此項研究中，與給予連續6天的Ig對照(100微克/小鼠) 以及NM-抗-CD3 (50微克/小鼠)比較來研究C10RF32-P8-Vl-ECD-mFc (SEQ ID號8)的效果。
圖5示出疾病緩解發生時(第25天)以兩種劑量(30和100微克/小鼠)以及兩種頻率(每天一次或每周3次)在治療模式下給予的C10RF32-P8-V1-E⑶-mFc (SEQ ID號8) 的六次給予對於SJL小鼠中的PLP139-151-誘導R-EAE模型的臨床症狀的效果，展示為平均臨床計分(圖5A)、累積臨床計分(圖5B)以及復發頻率(圖5C)。在此項研究中，與給予連續6天的Ig對照(100微克/小鼠)以及抗-CD80FaB比較來研究C10RF32-P8-Vl-ECD_mFc (SEQ ID號:8)的效果。
圖6 示出與對照 Ig 以及 B7-H4-1g 比較，C10RF32-ECD_mFc (SEQ ID 號8)治療對於來源於SJL或BALB/c小鼠的T細胞增殖的效果。
圖7示出以可溶性或結合至板亦或珠粒形式呈現的C10RF32-E⑶-mFc (SEQ ID 號8)對於從SJL小鼠分離的初始CD4+T細胞的增殖以及細胞因子分泌的體外效果。
圖8示出以可溶性或結合至板或珠粒形式呈現的C10RF32-E⑶-mFc(SEQ ID號8) 對於從BALB/c小鼠分離的初始CD4+T細胞的增殖以及細胞因子分泌的體外效果。
圖9示出在以連同抗-⑶3以及抗-⑶28的珠粒結合形式呈現時，以及在以可溶性蛋白形式添加至經過照射的從DO. 11小鼠分離的APC+0VA323_339時，C10RF32-ECD-mFc (SEQ ID號8)對於在ThO、Thl、Th2以及Thl7促進條件下的T細胞活化以及分化的效果。
圖 10 示出在 HEK-293 中產生的 C10RF32-ECD_mFc(SEQ ID 號8)在小鼠 R-EAE 模型中的效果。C10RF32-ECD-mFc (SEQ ID號8)在疾病誘導後第0_5天經由腹膜內(1. ρ·) 注射在預防模式下給予。
圖 11 示出在 CHO 以及 HEK-293 中產生的 C10RF32-ECD_mFc (SEQ ID 號8)對於在ThO、ThU Th2以及Thl7衍生條件下的⑶4+T細胞增殖以及細胞因子產生的體外活性的比較。
圖12示出在治療模式下每周3次1. p.給予歷時兩周的C10RF32-ECD-mFc (SEQ ID號8)在SJL小鼠的PLP139-151-誘導R-EAE中的效果。展示了對於以下各項的效果 平均臨床計分、累積臨床計分以及復發頻率(圖12A);免疫細胞到脾、淋巴結以及CNS的募集(圖12B);免疫細胞群對CNS的浸潤(圖12C);經由增殖實現的脾細胞對於起始以及擴展表位的回憶應答(圖12D);經由細胞因子分泌實現的脾細胞對於起始以及擴展表位的回憶應答(圖12E);經由增殖實現的頸部淋巴結細胞對於起始表位的回憶應答(圖12F)。在此項研究中，與Ig對照(100微克/小鼠)以及抗-⑶80Fab (50微克/小鼠)比較來研究 C10RF32-P8-Vl-ECD-mFc (SEQ ID 號8)的效果。
圖13A 示出與 Ig 對照比較，C10RF32-ECD-mFc (SEQ ID 號8)在 100、30 以及 10微克/小鼠下每周3次1. P.給予歷時2周在SJL小鼠的PLP139-151-誘導R-EAE中的治療性治療的劑量應答效果。呈現了以平均臨床計分來表現的臨床療效(圖13A);還估計了如以上在100和30微克/小鼠下給予的C10RF32-E⑶-mFc (SEQ ID號8)對於以下各項的效果在R-EAE誘導之後第35天進行的 對於誘導表位(PLP139-151)或擴展表位(PLP178-191)的DTH應答(圖13B)，在R-EAE誘導之後第35天的回憶應答，表現為響應誘導表位(PLP139-151)、擴展表位(PLP178-191)以及抗CD3的淋巴結細胞(圖13C)或脾細胞(圖13D)的增殖；在R-EAE誘導後第65天進行的對於擴展表位(PLP178-191以及 MBP84-104)的DTH應答(圖13E)，以及在R-EAE誘導之後第65天的回憶應答，表現為響應抗 CD3、0VA323-339、誘導表位(PLP139-151)以及擴展表位(PLP178-191 以及 MBP84-104) 的脾細胞的增殖。
圖14示出在過繼轉移模型中在細胞轉移時給予時C10RF32-E⑶-mFc (SEQ ID 號8)或對照Ig治療對於R-EAE發展(圖14A)以及將總免疫細胞(圖14B)和自身反應T 細胞(圖14C)募集到脾、淋巴結以及CNS的效果。
圖15和圖16示出C10RF32-ECD-mFc (SEQ ID號8)對於來自不同人類供體的人 T細胞活化的效果，這種活化表現為細胞增殖以及IFNy分泌。使用以C10RF32-E⑶-mFc (SEQ ID號8)、抗⑶3以及抗⑶28塗布的珠粒在一步法(圖15)或兩步法(圖16)中進行活化。
圖17示出C10RF32-ECD-mFc (SEQ ID號8)對於人T細胞增殖的效果的劑量依賴性。
圖18示出C10RF32-ECD-mFc(SEQ ID號8)以及對照Ig對於來自不同供體的純化的人T細胞的增殖的效果，這些T細胞由以抗-⑶3以及抗-⑶28抗體連同C10RF32-E⑶-mFc (SEQ ID號8)塗布的珠粒來活化。
圖19示出C10RF32-ECD-mFc (SEQ ID號8)以及對照Ig對於來自不同供體的純化的人T細胞的增殖的效果，這些T細胞由經過照射的自體PBMC以及抗-⑶3和抗-⑶28 抗體來活化。
圖20示出每周3次以100或30微克/小鼠1. p.給予歷時10天的 C10RF32-E⑶-mFc (SEQ ID號8)在類風溼性關節炎的膠原誘導的關節炎(CIA)模型中的治療效果。測量的是臨床計分(A)、腳爪腫脹(B)以及患病腳爪數量(C)。益賽普(Enbrel) (TNF-R-1g, 100微克/小鼠)用作陽性對照，而對照Ig (100微克/小鼠)用作陰性對照。
圖 21 示出1. 5 和 5mg/kg 下的 C10RF32-P8-Vl-ECD_mFc (SEQ IDEnbrel :8)在轉移體內測定中對於DTH的效果，表現為與同種型對照(mlgG2a，5mg/kg)或媒介物(PBS)治療的小鼠比較的腳爪厚度的變化(Λ )，如圖中詳述。FK506在3和30mg/kg的劑量下用作陽性對照。在注射從4個不同供體匯集的PBMC後獲得的結果在圖21A中示出，注射來自每個供體的PBMC時獲得的單獨數據呈現於圖21B和圖21C中。
圖22 示出 C10 RF32-P8-Vl-ECD-mFc (SEQ ID 號8)對於脾細胞的 IFN Y (A 和 B)、IL-2 (C和D)以及IL-4 (E和F)產生的效果，這些脾細胞在板結合抗-⑶3以及可溶性抗-⑶28的存在下被刺激24小時。FK506和B7-H4_Ig用作陽性對照，mIgG2a用作陰性對照。對於每個細胞因子，提供兩個研究的結果，在圖上標記為研究I和2。
本發明的詳細說明
本發明在至少一些實施方案中涉及以下各項中的任何一個被稱為C10RF32的蛋白、其片段、變體以及同源物以及含有它們的融合蛋白和偶聯物，以及包含它們的藥用組合物，以及編碼它們的核酸序列，以及其作為治療在此描述的免疫相關病症的治療劑的用途， 包括但不局限於C10RF32蛋白的ECD (細胞外域)、其片段和/或變體和/或同源物(單獨或作為融合蛋白或偶聯物的一部分)的用途。
為了使本發明可更容易理解，首先定義某些術語。額外的定義貫穿詳細說明而闡明。
如在此使用，術語「分離的」是指處於與化合物天然地發生於其中的環境不同的環境中的所感興趣的化合物(例如多核苷酸或多肽)，例如，像通過將肽濃縮至它在天然狀態下不存在的濃度來從其天然環境中分離。「分離的」包括樣品內基本上富含所感興趣的化合物和/或其中所感興趣的化合物是部分或基本上純化的化合物。
「免疫細胞」是指來自造血來源的任何細胞，包括但不局限於T細胞、B細胞、單核細胞、樹突狀細胞以及巨噬細胞。
如在此使用，術語「多肽」是指具有任何長度的胺基酸鏈，而無論是否修飾(例如， 磷酸化或糖基化)。
如在此使用，「共刺激多肽」或「共刺激分子」是在與T細胞上的細胞表面分子相互作用時調節T細胞應答的一種多肽。
如在此使用，「共刺激信號傳導」是在抗原特異性T細胞應答期間在抗原呈遞細胞上的共刺激多肽與其在T細胞上的受體之間的相互作用所產生的信號傳導活性。不希望受單一假設限制，據信該抗原特異性T細胞應答由兩種信號介導，即I) T細胞受體(TCR)與在 MHC背景下呈遞的抗原性肽的接合(信號1)，以及2)在不同的共刺激受體/配體對之間的接觸所遞送的第二個抗原非依賴性信號(信號2)。不希望受單一假設限制，此「第二信號」 在確定T細胞應答類型(活化與抑制)以及這種應答的強度和持續時間方面是關鍵性的，並且受來自例如B7蛋白家族的共刺激分子的正以及負信號來調節。
如在此使用，術語「B7」多肽是指會共刺激T細胞的B7蛋白家族的成員，包括但不局限於 B7-1、B7-2、B7-DC、B7-H5、B7-H1、B7-H2、B7-H3、B7-H4、B7-H6、B7-S3 以及其生物活性片段和/或變體。代表性生物活性片段包括會共刺激T細胞的細胞外域或細胞外域片段。
如在此使用，「炎症分子」是指誘導炎症應答(直接或間接地)的分子，包括但不局限於細胞因子以及金屬蛋白酶，例如包括但不局限於IL-1 β、TNF-α、TGF-β、IFN-Y、 IL-17、IL-6、IL-23、IL-22, IL-21 以及 MMP。
如在此使用，「載體」是另一個DNA片段可插入其中以便引起所插入片段複製的複製子，例如質粒、噬菌體或粘粒。在此描述的載體可為表達載體。如在此使用，「表達載體」 是包含一個或多個表達控制序列的載體。
如在此使用，「表達控制序列」是控制並且調節另一個DNA序列的轉錄和/或翻譯的DNA序列。
「可操作地連接」是指其中所描述的部件經過配置以便進行其常用或預期功能的元件安排。因此，可操作連接在一起的兩個不同多肽在物理上連接在一起的同時保持其相應的生物功能。
如在此使用，「效價」是指每個分子可利用的結合位點的數量。
如在此使用，「變體」多肽與對應野生型多肽的胺基酸序列相比含有至少一個胺基酸序列改變。
如在此使用，「保守」胺基酸取代是其中取代的胺基酸具有類似結構或化學特性的取代。如在此使用，術語「宿主細胞」是指重組載體可引入其中的原核和真核細胞。
如在此使用，「轉 化的」以及「轉染的」包括通過在本領域中已知的許多技術將核酸(例如載體)引入細胞中。
如在此使用，術語「免疫性(immunologic)」、「免疫學(immunological)」或「免疫 (immune)」應答是在接受患者體內針對肽的有益的體液性(抗體介導)和/或細胞性(由抗原特異性T細胞或其分泌產物介導)應答的發展。這種應答可為通過給予免疫原來誘導的主動應答或通過給予抗體或致敏T-細胞來誘導的被動應答。不希望受單一假設限制，細胞免疫應答通過結合I類或II類MHC分子來呈遞多肽表位以便活化抗原特異性CD4+T輔助細胞和/或CD8+細胞毒性T細胞來引起。該應答還可涉及單核細胞、巨噬細胞、NK細胞、嗜鹼性粒細胞、樹突狀細胞、星形細胞、小神經膠質細胞、嗜酸性粒細胞的活化、嗜中性粒細胞或先天性免疫的其他組分的活化或募集。細胞介導的免疫應答的存在可通過增殖測定(CD4+T 細胞)或CTL (細胞毒性T淋巴細胞)測定來確定。體液和細胞應答對於免疫原的保護或治療效果的相對貢獻可通過單獨地將抗體以及T-細胞從免疫接種的同系動物中分離並且測量在第二受試者中的保護或治療效果來區分。
「免疫劑」或「免疫原」能夠在任選地結合佐劑來給予至哺乳動物時誘導針對本身的免疫應答。
如在此使用，術語「C10RF32」是指由在此報告的H19011_1_T8 (SEQ ID號1)、 H19011_1_T9 (SEQ ID號2)轉錄物中的任何一個所編碼的蛋白，尤其指如在H19011_1_P8 (SEQ ID 號4)、H19011_1_P8_V1(SEQ ID 號:5)、H19011_1_P9(SEQ ID 號6)或 H19011_l_ P9_V1 (SEQ ID號34)中任何一個所闡明的蛋白、其變體及片段，這些蛋白對於免疫相關病症可以具有治療效果。如在此使用，術語C10RF32片段和/或C10RF32變體和/或C10RF32 同源物是指包括具有抑制T細胞活化的生物活性的胺基酸序列的C10RF32部分。
如在此使用，術語「可溶性C10RF32」或「可溶性胞外域(E⑶)」或「胞外域」或「可溶性C10RF32蛋白/分子」是指包括C10RF32多肽的細胞外域的一部分或全部、並且缺乏細胞內和/或跨膜域的一部分或全部的C10RF32片段，其中所述片段保持抑制T細胞活化的生物活性。在一個實施方案中，可溶性C10RF32多肽片段包括C10RF32多肽的整個細胞外域。在其他實施方案中，C10RF32多肽的可溶性片段包括細胞外域的片段。
如在此使用，術語「可溶性C10RF32」或「可溶性胞外域(E⑶)」或「胞外域」或「可溶性C10RF32蛋白/分子」進一步是指非細胞表面結合的(即循環的)C10RF32分子或C10RF32 分子的任何部分，包括但不局限於C10RF32多肽、其片段或融合蛋白；其中C10RF32的細胞外域融合至使得融合分子可溶的免疫球蛋白(Ig)部分的融合蛋白、或其片段及衍生物； C10RF32的細胞外域與例如乳頭狀瘤病毒E7基因產物、黑素瘤相關抗原p97或HIV包膜蛋白的生物活性或化學活性蛋白的一部分融合或連接的蛋白、或其片段及衍生物；例如 C10RF32多肽的雜合(嵌合)融合蛋白、其片段或融合蛋白，或其片段及衍生物。「可溶性 C10RF32蛋白/分子」還包括跨膜域被去除以便使得蛋白可溶的C10RF32分子、或其片段及衍生物；以及可溶性C10RF32突變分子。用於本發明方法中的可溶性C10RF32分子可包括或可不包括信號(前導)肽序列。
術語C10RF32的「可溶性胞外域(E⑶)」或「胞外域」或「可溶性」形式還指編碼 C10RF32 「可溶性胞外域(E⑶)」或「胞外域」或 「可溶性C10RF32蛋白/分子」的對應蛋白的核酸序列。任選地，C10RF32ECD是指以下多肽序列或其片段中的任何一個
>H19011_1_P8 (SEQ ID 號4)殘基 21 至 186，與以下 SEQ ID 號14 中描繪的胺基酸序列對應
LQVTVPDKKKVAMLFQPTVLRCHFSTSSHQPAVVQWKFKSYCQDRMGESLGMSSTRAQSLSKRNLEWD PYLDCLDSRRTVRVVASKQGSTVTLGDFYRGREITIVHDADLQIGKLMWGDSGLYYCIITTPDDLEGKNEGSLGLL VLGRTGLLADLLPSFAVEIMPE ；
>H19011_1_P8_V1 (SEQ ID 號5)殘基 21-186，與以下 SEQ ID 號35 中描繪的胺基酸序列對應 LQVTVPDKKKVAMLFQPTVLRCHFSTSSHQPAVVQWKFKSYCQDRMGESLGMSSTRAQSLSKRNL EWDPYLDCLDSRRTVRVVASKQGSTVTLGDFYRGREITIVHDADLQIGKLMWGDSGLYYCIITTPDDLEGKNEDSVE LLVLGRTGLLADLLPSFAVEIMPE ；
>H19011_1_P9 (SEQ ID 號6)殘基 21 至 169，與以下 SEQ ID 號15 中描繪的胺基酸序列對應
LQVTVPDKKKVAMLFQPTVLRCHFSTSSHQPAVVQWKFKSYCQDRMGESLGMSSTRAQSLSKRNLEWD PYLDCLDSRRTVRVVASKQGSTVTLGDFYRGREITIVHDADLQIGKLMWGDSGLYYCIITTPDDLEGKNEGSLGLL VLEffV ；
>H19011_1_P9_V1 (SEQ ID 號34)殘基 21 至 169，與以下 SEQ ID 號36 中描繪的胺基酸序列對應
LQVTVPDKKKVAMLFQPTVLRCHF STS SHQPAVVQWKFKSYCQDRMGESLGMSSTRAQSLSKRNLEW DPYLDCLDSRRTVRVVASKQGSTVTLGDFYRGREITIVHDADLQIGKLMWGDSGLYYCIITTPDDLEGKNEDSVELL VLEffV ；
>H19011_1_P8_V1 (SEQ ID 號5)殘基 I 至 184，與以下 SEQ ID 號19 中描繪的胺基酸序列對應
MDRVLLRffISLFWLTAMVEGLQVTVPDKKKVAMLFQPTVLRCHFSTSSHQPAVVQffKFKSYCQDRMGES LGMSSTRAQSLSKRNLEWDPYLDCLDSRRTVRVVASKQGSTVTLGDFYRGREITIVHDADLQIGKLMWGDSGLYYCI ITTPDDLEGKNEDSVELLVLGRTGLLADLLPSFAVEIM ；
>H19011_1_P8 (SEQ ID號4)殘基I至184，與以下SEQ ID號37中描繪的胺基酸序列對應
MDRVLLRWISLFWLT·AMVEGLQVTVPDKKKVAMLFQPTVLRCHFSTSSHQPAVVQWKFKSYCQDRMGES LGMSSTRAQSLSKRNLEWDPYLDCLDSRRTVRVVASKQGSTVTLGDFYRGREITIVHDADLQIGKLMWGDSGLYYCI ITTPDDLEGKNEGSLGLLVLGRTGLLADLLPSFAVEIM ；
>H19011丄P9 (SEQ ID號6)殘基1-169，與以下SEQ ID號:28中描繪的胺基酸序列對應
MDRVLLRffISLFWLTAMVEGLQVTVPDKKKVAMLFQPTVLRCHFSTSSHQPAVVQffKFKSYCQDRMGE SLGMSSTRAQSLSKRNLEWDPYLDCLDSRRTVRVVASKQGSTVTLGDFYRGREITIVHDADLQIGKLMWGDSGLYY ClITTPDDLEGKNEGSLGLLVLEffV ；
H19011丄P9_V1 (SEQ ID 號34)殘基 1-169，與以下 SEQ ID 號30 中描繪的胺基酸序列對應
MDRVLLRffISLFWLTAMVEGLQVTVPDKKKVAMLFQPTVLRCHFSTSSHQPAVVQffKFKSYCQDRMGE SLGMSSTRAQSLSKRNLEWDPYLDCLDSRRTVRVVASKQGSTVTLGDFYRGREITIVHDADLQIGKLMWGDSGLYY CIITTPDDLEGKNED SVELLVLEffV, <0}
以及其具有與其至少80%序列一致性、更優選至少90%序列一致性並且甚至更優選與其至少95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的變體。根據至少一些實施方案，與包含 H19011_1_P8(SEQ ID 號4)、H19011_1_P8_V1(SEQ ID 號5)、H19011_1_P9(SEQ ID 號:6) 或H19011_1_P9_V1 (SEQ ID號34)的細胞外域的全部或一部分的多肽至少80%、90%、95%、 96%、97%、98%或99%同源的分離的多肽具有如在實例I中在此描述的至少一種SNP變化。
C10RF32細胞外域可含有來自C10RF32的信號肽或假定跨膜域的一個或多個胺基酸。在分泌期間，裂解的信號肽的胺基酸數量可取決於表達系統以及宿主而變化。另外或可替代地，失去C-末端或N-末端的一個或多個胺基酸的保持結合至C10RF32受體的能力的C10RF32細胞外域的片段可用作所披露融合蛋白的融合伴侶。
C10RF32多肽的變體
這類C10RF32多肽的有用變體包括如在此描述的任何測定所指示增加生物活性， 或增加該蛋白的半衰期或穩定性的那些變體。可溶性C10RF32多肽以及其具有C10RF32活性的C10RF32片段或融合物可經過工程化以便增加生物活性。在一個進一步的實施方案中，C10RF32多肽或融合蛋白是通過增加該分子與免疫細胞，例如T細胞的結合併且將一個抑制信號傳輸至該T細胞中的至少一種胺基酸取代、缺失或插入來修飾的。
其他任選的變體是經過工程化以便相對於其他免疫細胞選擇性地結合至一種類型T細胞的那些C10RF32多肽。例如，C10RF32多肽可經過工程化以便任選地結合至Treg、 ThO、Thl、Thl7、Th2或Th22細胞。優先結合是指對於一種類型的細胞超過另一種類型的細胞至少 10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95% 或更大的結合。
C10RF32的又其他變體可經過工程化以便相對於野生型C10RF32具有降低的與免疫細胞的結合。這些變體可與具有更強的結合特性的變體組合使用以便以中度影響來調節免疫應答。
還任選地，變體C10RF32多肽可經過工程化以便相對於野生型具有增加的半衰期。這些變體通常經過修飾以便抵抗酶性降解。示例性修飾包括抵抗酶性降解的修飾的胺基酸殘基以及修飾的肽鍵。實現這一目的的各種修飾是本領域中已知的。
融合蛋白
根據至少一些實施方案，C10RF32融合多肽具有包括C10RF32蛋白的全部或一部分的第一融合伴侶，該第一融合伴侶融合至第二多肽，融合是直接的或經由適用於連接這兩種蛋白的連接物肽序列或化學連接物的。C10RF32多肽可任選地融合至第二多肽以便形成在此描述的融合蛋白。該第二多肽的存在可改變C10RF32融合多肽的溶解性、穩定性、親和力和/或效價。如在此使用，「效價」是指每個分子可利用的結合位點的數量。在一個實施方案中，該第二多肽是來自不同來源或不同蛋白的多肽。
根據至少一些實施方案，C10RF32蛋白或片段針對其在此描述的治療免疫相關病症的活性來加以選擇。
在一個實施方案中，第二多肽含有一個免疫球蛋白重鏈恆定區的一個或多個域， 該恆定區優選地具有與人免疫球蛋白Cy1、Cy2、Cy3*Cy4鏈的鉸鏈、CH2以及CH3區或與鼠免疫球蛋白C Y 2a鏈的鉸鏈、CH2以及CH3區對應的胺基酸序列。SEQ ID號20提供人免疫 球蛋白C Y I的鉸鏈、CH2以及CH3區的示例性序列。
根據至少一些實施方案，該融合蛋白是一種二聚體融合蛋白。在一個任選的二聚體融合蛋白中，二聚體由兩個Ig重鏈的鉸鏈區中的Cys殘基的共價鍵結產生，這些Cys殘基是二聚化的正常Ig重鏈中以二硫鍵連接的相同Cys殘基。這類蛋白被稱為C10RF32多肽、其片段或融合蛋白。
在一個實施方案中，免疫球蛋白恆定域可含有增強C10RF32多肽、其融合蛋白或片段的與具體細胞類型的結合、增加其生物利用度或增加其穩定性的一個或多個胺基酸插入、缺失或取代。適合的胺基酸取代包括如上所述的保守以及非保守取代。
這些融合蛋白 任選地含有起作用以便使兩個或更多個融合蛋白二聚化或多聚化的一個域。肽/多肽連接物域可為一個單獨的域，亦或可替代地可包含於融合蛋白的一個其他域(C10RF32多肽或第二多肽)中。同樣地，起作用以便使融合蛋白二聚化或多聚化的這個域可為一個單獨的域，亦或可替代地可包含於融合蛋白的一個其他域(C10RF32多肽、 第二多肽或肽/多肽連接物域)中。在一個實施方案中，二聚化/多聚化域以及肽/多肽連接物域是相同的。二聚化/多聚化域以及連接物的進一步的具體、說明性以及非限制實例在下文給出。
根據本發明的至少一些實施方案在此披露的融合蛋白具有化學式1: N-R1-R2-R3-C，其中「N」代表融合蛋白的N-末端，「C」代表融合蛋白的C-末端。在進一步的實施方案中，「R1」是C10RF32多肽，「R2」是任選的肽/多肽或化學連接物域，並且「R3」 是第二多肽。可替代地，R3可為C10RF32多肽並且Rl可為第二多肽。
任選地，融合蛋白包含任選地通過具有一個或多個胺基酸的連接物肽(例如GS)融合至一個或多個「半衰期延長部分」的在此描述的C10RF32多肽片段。「半衰期延長部分」 是在附接至蛋白上時延長這種蛋白在受試者體內(例如受試者血漿內)的體內半衰期的任何部分，例如多肽、小分子或聚合物。例如，半衰期延長部分在本發明的一個實施方案中是聚乙二醇(PEG)、單甲氧基PEG (mPEG)或免疫球蛋白(Ig)。在本發明的一個實施方案中， PEG是5、10、12、20、30、40或50kDa部分或更大或包含約12000個乙二醇單元(PEG12000)。
二聚化或多聚化可經由二聚化或多聚化域在兩個或更多個融合蛋白之間發生。可替代地，融合蛋白的二聚化或多聚化可通過化學交聯來發生。形成的二聚體或多聚體可為同源二聚體/同源多聚體或異源二聚體/異源多聚體。C10RF32融合多肽中的第二多肽「伴侶」可包括一個或多個在此描述的其他蛋白、蛋白片段或肽，包括但不局限於任何免疫球蛋白(Ig)蛋白或其一部分，優選地Fe區，或例如乳頭狀瘤病毒E7基因產物、黑素瘤相關抗原 P97、以及HIV包膜蛋白(gpl20)的生物學或化學活性蛋白的一部分。「伴侶」可任選地選擇以便提供可溶性二聚體/多聚體和/或針對在此描述的一種或多種其他生物活性加以選擇。
二聚化或多聚化可經由 二聚化或多聚化域在兩個或更多個融合蛋白之間發生，這些二聚化或多聚化域包括如上所述的那些域。可替代地，融合蛋白的二聚化或多聚化可通過化學交聯發生。融合蛋白二聚體可為同源二聚體或異源二聚體。融合蛋白多聚體可為同源多聚體或異源多聚體。如在此披露的融合蛋白二聚體具有化學式II
N-R1-R2-R3-C
N-R4-R5-R6-C或替代地具有化學式II1:
N-R1-R2-R3-C
C-R4-R5-R6-N，其中化學式II提供的二聚體的融合蛋白被定義為處於平行取向並且化學式III提供的二聚體的融合蛋白被定義為處於反平行取向。平行和反平行二聚體又分別稱為順式和反式二聚體。"N」和「C」分別代表融合蛋白的N-和C-末端。融合蛋白成分「R1」、「R2」以及「R3」如上文關於化學式I所定義。關於化學式II和化學式III而言， 「R4」是C10RF32多肽或第二多肽，「R5」是任選的肽/多肽連接物域，並且「R6」是C10RF32 多肽或第二多肽，其中當「R4」是第二多肽時，「R6」是C10RF32多肽，並且當「R4」是C10RF32 多肽時，「R6」是第二多肽。在一個實施方案中，「R1」為C10RF32多肽，「R4」也為C10RF32 多肽，並且「R3」和「R6」均為第二多肽。
當「Rl」= 「R4」，「R2」= 「R5」並且「R3」= 「R6」時，具有化學式II的融合蛋白二聚體定義為同源二聚體。同樣地，當「Rl」= 「R6」、「R2」= 「R5」並且「R3」= 「R4」時，具有化學式III的融合蛋白二聚體定義為同源二聚體。當出於任何原因不滿足這些條件時，融合蛋白二聚體被定義為異源二聚體。例如，異源二聚體可含有滿足這些條件(即，對於根據化學式II的二聚體而言，「R1」和「R4」均為C10RF32多肽，「R2」和「R5」均為肽/多肽連接物域並且「R3」和「R6」均為第二多肽)的域取向，然而這些域中的一個或多個域的種類並不相同。例如，雖然「R3」和「R6」可均為C10RF32多肽，但是一種多肽可含有野生型C10RF32 胺基酸序列，而另一種多肽可為變體C10RF32多肽。示例性變體C10RF32多肽為經過修飾而具有增加或減少的與靶細胞的結合、增加的對於免疫細胞的活性、增加或減少的半衰期或穩定性的C10RF32多肽。含有一種免疫球蛋白的CHI或CL區作為多肽連接物域的一部分的融合蛋白二聚體優選地形成這樣的異源二聚體，其中二聚體的一個融合蛋白含有CHI 區並且二聚體的另一個融合蛋白含有CL區。
融合蛋白也可用於形成多聚體。與二聚體一樣，多聚體可為平行多聚體，其中多聚體的所有融合蛋白以相對於其N-和C-末端的相同取向來對齊。多聚體可為反平行多聚體，其中多聚體的融合蛋白可替代地以相對於其N-和C-末端的相反取向來對齊。多聚體 (平行或反平行)可為同源多聚體或異源多聚體。融合蛋白任選地以二聚體形式產生；更優選地，融合如下所述在基因水平來進行，方法為連接與兩個(或更多個)蛋白、蛋白部分和/ 或肽對應的多核苷酸序列，以使得由細胞根據連接的多核苷酸序列來產生連接或融合的蛋白。製備這種融合蛋白的描述參照Linsley (林斯雷)等的美國專利號5，851，795來描述， 該專利只作為非限制性實例通過引用結合在此，其引用程度如同完全在此闡明一樣。
融合蛋白也可任選地通過化學合成方法來製備並且在合成或合成後期間以化學方法實現「連接」。可任選地使用交聯以及其他這類方法(任選地還使用以上描述的基因水平融合方法)，如例如在Wallner (瓦爾納)等的美國專利號5，547，853中描述，該專利只作為非限制性實例通過引用結合在此，其引用程度如同完全在此闡明一樣。
根據本發明，融合蛋白可用本發明的蛋白通過與包含一種免疫球蛋白的恆定區的免疫球蛋白的一部分融合來製備。更優選地，該免疫球蛋白的該部分包含任選地並且更優選地為人重鏈恆定區的重鏈恆定區。該重鏈恆定區最優選地為IgG重鏈恆定區，並且任選地以 及最優選地為Fe鏈，最優選地為包含鉸鏈、CH2以及CH3域的IgG Fe片段。該Fe鏈可任選地為已知或「野生型"Fe鏈，或替代地可以是突變或截短的。融合蛋白的Fe部分可任選地按照同種型或子類而不同，可以是嵌合體或雜合體，和/或可經過修飾以便例如改進效應子功能、控制半衰期、組織可接近性、增進生物物理特性例如穩定性，並且改進產生效率(並且成本更小)。適用於構建所披露融合蛋白的許多修飾以及其製造方法是本領域中已知的， 參見例如 Mueller (穆勒)等人,分子免疫學(Mol. Tmmun. ) , 34(6) : 441-452 (1997), Swann(斯萬)等人，當前免疫學觀點(Cur. Opin.1mmun. ) , 20:493-499 (2008)，以及Presta (帕斯塔)，當前免疫學觀點(Cur. Opin.1mmun. ) 20:460-470 (2008)。在一些實施方案中，該Fe 區為原生IgGl、IgG2或IgG4Fc區。在一些實施方案中，該Fe區是雜合體，例如由IgG2/ IgG4Fc恆定區組成的嵌合體。
該Fe區的修飾包括但不局限於IgG4被修飾以便防止與Fe Y受體以及補體的結合，IgGl被修飾以便改進與一個或多個Fe Y受體的結合,IgGl被修飾以便最小化效應子功能(胺基酸變化)，IgGl具有改變的聚糖/沒有聚糖(通常通過改變表達宿主)，並且IgGl具有改變的與FcRn的pH依賴性結合。該Fe區可包括整個鉸鏈區，或不足整個鉸鏈區。
在另一個實施方案中，Fe域可含有一個或多個胺基酸插入、缺失或取代，這些插入、缺失或取代減少與低親和力抑制性Fe受體⑶32B (Fe Y RIIB)的結合併且保持野生型水平的與低親和力活化Fe受體⑶16A (Fe Y RIIIA)的結合或增強與之的結合。
另一個實施方案包括IgG2_4雜合體和IgG4突變體，它們具有降低的與FcR (Fe 受體)的結合，從而增加其半衰期。代表性IgG2-4雜合體和IgG4突變體描述於Angal (安蓋爾)，S.等人，分子免疫學(Molecular Immunology) , 30 (I) : 105-108 (1993) ；Mueller (穆勒)，J.等人，分子免疫學(Molecular Immunology), 34 (6) :441-452 (1997);以及 Wang (王)等的美國專利號6，982，323中。在一些實施方案中，IgGl和/或IgG2域被缺失；例如， Angal (安蓋爾)等描述具有絲氨酸241替換為脯氨酸的IgGl和IgG2。
在一個進一步的實施方案中，Fe域含有胺基酸插入、缺失或取代，這些插入、缺失或取代增強與⑶16A的結合。增加與⑶16A的結合併且減少與⑶32B的結合的人IgGl的 Fe域中的很多取代是本領域中已知的並且描述於Stavenhagen (斯塔文哈根)等人,癌症研究(Cancer Res. ),57(18) :8882-90 (2007年)中。具有降低的與CD32B的結合和/或增加的與CD16A的結合的人IgGlFc域的示例性變體含有F243L、R929P、Y300L、V305I或P296L 取代。這些胺基酸取代可按任何組合存在於人IgGlFc域中。
在一個實施方案中，該人IgGlFc域變體含有F243L、R929P以及Y300L取代。在另一個實施方案中，人IgGlFc域變體含有F243L、R929P、Y300L、V305I以及P296L取代。 在另一個實施方案中，人IgGlFc域變體含有N297A/Q取代，因為這些突變消除Fe Y R結合。非限制、說明性、示例性類型的突變描述於2006年2月16日公開的美國專利申請號 20060034852中，該申請通過引用結合在此，其引用程度如同完全在此闡明一樣。術語「Fe 鏈」還任選地包括任何類型的Fe片段。
已經鑑定對於IgG子類中的抗體恆定區介導的活性而言重要的幾個特定胺基酸殘基。因此，包含、取代或排除這些特定胺基酸允許包含或排除特定免疫球蛋白恆定區介導的活性。此外，特定變化可產生例如去糖基化和/或Fe鏈的其他所希望變化。可任選地產生至少一些變化以便阻斷被認為不合需要的Fe功能，例如不合需要的免疫系統效應，如下文更詳細描述的。
可產生以調節融合蛋白的活性的Fe突變的非限制性、說明性實例包括以下變化 (根據Kabat (卡巴特)EA等具有免疫學重要性的蛋白的序列(Sequences of Proteins of Immunological Interest),美國衛生和公眾服務部(US Department of Health and Human Services), NIH，1991，參照如Kabat(卡巴特)給出的Fe序列命名法來給出)220C->S ； 233-238ELLGGP->EAEGAP ；265D->A,優選地結合 434N_>A ；297N->A (例如用於阻斷 N-糖基化);318-322EYKCK->AYACA ；330-331AP->SS ;或其組合(參見例如 M. Clark (克拉克)，「化學免疫學與抗體工程化(Chemical Tmmunol and Antibody Engineering)」,第 1-31 頁以便獲得這些突變及其效果的描述)。特徵為以上變化的Fe鏈的構建體任選地並且優選地包括鉸鏈區與CH2和CH3域的組合。
以上突變可任選地實施以便增強所希望的特性或替代地阻斷不希望的特性。例如，已顯示抗體的去糖基化可在阻斷T-細胞的耗盡或觸發細胞因子釋放的同時維持所希望的結合功能性，此舉可任選地為不希望有的功能(參見M. Clark, 「化學免疫學與抗體工程化(Chemical Tmmunol and Antibody Engineering)」,第 1-31 頁)。將 331 腦氨酸取代為絲氨酸可阻斷活化補體的能力，此舉可任選地被認為是不希望有的功能(參見M. Clark (克拉克)，「化學免疫學與抗體工程化(Chemical Tmmunol and Antibody Engineering)」,第 1-31頁)。結合此變化將330丙氨酸改變成絲氨酸也可增強阻斷活化補體的能力的所希望的效果。
已顯示殘基235和237涉及到抗體依賴性細胞介導的細胞毒性(ADCC)，使得如果 ADCC被認為是不合需要的功能，如所描述改變233-238殘基區塊也可阻斷這種活性。
殘基220通常是來自IgGl的Fe的半胱氨酸，它是重鏈與輕鏈形成共價鍵的位點。 任選地，此殘基可改變為絲氨酸，以避免任何類型的共價鍵(參見M. Clark (克拉克)，「化學免疫學與抗體工程化(Chemical Tmmunol and Antibody Engineering)」,第 1-31 頁)。
殘基265和434的以上變化可任選地實施以便減少或阻斷與Fe受體的結合，這可任選地阻斷Fe的與其免疫系統功能相關的不希望有的功能(參見「人IgGl上的Fe受體結合位點(Binding site on Human IgGlfor Fe Receptors)」, Shields(希爾茲)等人,第 276 卷，第 6591-6604 頁，2001 年)。
以上變化只用來說明任選的變化並且不欲以任何方式具有限制性。此外，以上解釋只出於描述目的而提供，而不希望受單一假設限制。
示例性融合蛋白在SEQ ID號8、22、23、38、29中闡明。
前述示例性融合蛋白可合併有在此描述的變體的任何組合。在另一個實施方案中，前述示例性融合蛋白的末端賴氨酸被刪除。
所披露的融合蛋白可使用標準分子生物學技術來分離。例如，將含有編碼 C10RF32多肽、其片段或融合蛋白的DNA序列的表達載體通過磷酸鈣沉澱而轉染至293 細胞中並且在無血清DMEM中培養。在72h收集上清液並且通過蛋白G、或優選地蛋白 A SEPHAROSE 管柱(Pharmacia公司，烏普薩拉(Uppsala),瑞典)來純化融合蛋白。任選地，將編碼C10RF32多肽、其片段或融合蛋白的DNA序列轉染至GPEx 逆轉錄病毒載體中並且在四輪逆轉錄病毒載體轉導之後，在CHO-S細胞中表達。該蛋白通過使用蛋白A色譜法從上清液中淨化。
在另一個實施方 案 中，第二多肽可具有一個偶聯域，通過該偶聯域另外的分子可結合至這些C10RF32融合蛋白。在一個這樣的實施方案中，被偶聯的分子能夠將融合蛋白靶向輸送至特定器官或組織；這類靶向域和/或分子的進一步的具體、說明性、非限制性實例在下文給出。
在另一個這樣的實施方案中，被偶聯的分子是可增強或增進C10RF32融合蛋白的效果的另一種免疫調節劑。在另一個實施方案中，被偶聯的分子是聚乙二醇(PEG)。
肽或多肽連接物域
所披露的C10RF32融合蛋白任選地含有將C10RF32多肽與第二多肽分離開的肽或多肽連接物域。在一個實施方案中，該連接物域含有一種免疫球蛋白的鉸鏈區。在一個進一步的實施方案中，該鉸鏈區來源於人免疫球蛋白。該鉸鏈可來源自的適合的人免疫球蛋白包括IgG、IgD以及IgA。在一個進一步的實施方案中，鉸鏈區來源於人IgG。免疫球蛋白鉸鏈區以及其他域的胺基酸序列在本領域中是熟知的。在一個實施方案中，C10RF32融合多肽含有與以下SEQ ID號20中闡明的胺基酸序列具有至少85%、90%、95%、99%或100%序列同源性的人免疫球蛋白C Y I鏈的鉸鏈、CH2以及CH3區
EPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEV TCWVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEV HNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQ VSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQK SLSLSPGK
鉸鏈可進一步縮短以便去除SEQ ID號20的胺基酸1、2、3、4、5或其組合。在一個實施方案中，SEQ ID號20的胺基酸1-5被缺失。
在另一個實施方案中，C10RF32融合多肽含有與在以下SEQ ID號21中闡明的胺基酸序列具有至少85%、90%、95%、99%或100%序列同源性的人免疫球蛋白C Y I鏈的CH2以及CH3區
APELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNST YRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSD IAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
在另一個實施方案中，C10RF32融合多肽含有與以下SEQ ID號31中闡明的胺基酸序列具有至少85%、90%、95%、99%或100%序列同源性的鼠免疫球蛋白C Y 2a鏈的鉸鏈、 CH2以及CH3區
EPRGPTIKPCPPCKCPAPNLLGGPSVFIFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVDVSEDDPDVQISWFVNNVE VHTAQTQTHREDYNSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLPAPIERTISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTK KQVTLTCMVTDFMPEDIYVEWTNNGKTELNYKNTEPVLDSDGSYFMYSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHNHHT TKSFSRTPGK.在另一個實施方案中，該連接物域含有如上所述的一種免疫球蛋白的鉸鏈區， 並且進一步包含一個或多個另外的免疫球蛋白域。
其他適合的肽/多肽連接物域包 含天然發生或非天然發生的肽或多肽。肽連接物序列具有至少2個胺基酸的長度。任選地，肽或多肽域是柔性肽或多肽。「柔性連接物」 在此是指含有由一個或多個肽鍵相連接的兩個或更多個胺基酸殘基的肽或多肽，這與在不存在該柔性連接物的情況下的兩個連接的多肽相比，為由此連接的兩個多肽提供增加的轉動自由度。這種轉動自由度允許由該柔性連接物連接的兩個或更多個抗原結合位點各自更有效地接近一個或多個目標抗原。示例性柔性肽/多肽包括但不局限於胺基酸序列 Gly-Ser (SEQ ID 號24)、Gly-Ser-Gly-Ser (SEQ ID 號25)、Ala-Ser (SEQ ID 號26)、 Gly-Gly-Gly-Ser (SEQ ID 號27)、Gly4_Ser (SEQ ID 號39)、(Gly4-Ser) 2 (SEQ ID 號40)、(Gly4-Ser) 3 (SEQ ID 號32)以及(Gly4-Ser)4 (SEQ ID 號33)。額外的柔性肽/多肽序列在本領域中是熟知的。
二聚化、多聚化以及靶向域
在此披露的融合蛋白任選地含有起作用以便使兩個或更多個融合蛋白二聚化或多聚化的一個二聚化或多聚化域。起作用以便使融合蛋白二聚化或多聚化的該域可為一個單獨的域，或可替代地可包含於融合蛋白的一個其他域(C10RF32多肽、第二多肽、或肽/多肽連接物域)中。
「 二聚化域」通過至少兩個胺基酸殘基或至少兩個肽或多肽(可具有相同或不同的胺基酸序列)的締合來形成。肽或多肽可經由共價和/或非共價締合來彼此相互作用。任選的二聚化域含有能夠與伴侶融合蛋白上的半胱氨酸形成分子間二硫鍵的至少一個半胱氨酸。二聚化域可含有一個或多個半胱氨酸殘基以使得可在伴侶融合蛋白之間形成一個或多個二硫鍵。在一個實施方案中，二聚化域含有一個、兩個或三個至約十個半胱氨酸殘基。 在一個進一步的實施方案中，二聚化域是一種免疫球蛋白的鉸鏈區。
另外的示例性二聚化域可以是本領域中已知的任何一種並且包括但是不局限於捲曲螺旋、酸補丁、鋅指、鈣手、CHl-CL對、如在美國專利號5，821，333中描·述的具有經過工程化的「突起(knob)」和/或「隆起(protruberance)」的「界面」、亮氨酸拉鏈(例如來自jun 和 / 或 fos)(美國專利號 5，932，448)、SH2 (src 同源性 2)、SH3 (src 同源性 3) (VI dal (威代爾)等人，生物化學(Biochemistry), 43, 7336-44 ((2004))、磷酸酪氨酸結合(PTB)(Zhou (周)等人，自然(Nature), 378:584-592(1995) (Sudol (薩杜爾)，生物物理學與分子生物學進展(Prog, Biochys. MoLBio. ),65:113-132(1996) )、PDZ (Kim (金姆)等人，自然 (Nature), 378:85-88(1995) ;Komau (考茅)等人，科學(Science), 269. 1737-1740 (1995)) 14-3-3、WD40 (Hu5 等人，生物化學雜誌(J Biol Chem. )，273，33489-33494 (1998) ) EH、 Lim、異亮氨酸拉鏈、受體二聚體對(例如白介素-8受體(IL-8R);以及整聯蛋白異源二聚體例如LFA-1和GPIIIb/IIIa)，或其二聚化區、二聚體配體多肽(例如神經生長因子(NGF)、 神經營養因子-3 (NT-3)、白介素-8 (IL-8)、血管內皮生長因子(VEGF)、VEGF-C、VEGF-D、 I3DGF成員，以及腦源性神經營養因子(BDNF) (Arakawa (荒川)等人，生物化學雜誌(J Biol. Chem. )，269 (45) : 27833-27839 (1994)以及 Radziejewski (拉切耶夫斯基)等人，生物化學(Biochem. ),32(48):1350 (1993))並且還可為其中親和力發生改變的這些域的變體。這些多肽對可通過本領域中已知的方法，包括酵母雙雜交篩選來鑑定。酵母雙雜交篩選描述於美國專利號5，283，173以及6，562，576中。一對相互作用域之間的親和力可使用在本領域中已知的方法,包括如Katahira (片平)等人，生物化學雜誌(J. Biol Chem), 277,9242-9246 (2002年)中所描述來確定。可替代地，可針對異源二聚化，例如使用在 W001/00814中描述的方法來篩選肽序列文庫。蛋白-蛋白相互作用的有用方法還描述於美國專利號6，790,624中。
「多聚化域」是經由共價和/或非共價締合引起三個或更多個肽或多肽彼此相互作用的域。適合的多聚化域包括但不局限於捲曲螺旋域。捲曲螺旋是具有間隔開3個和4個殘基的主要疏水性殘基的連續型式的肽序列，通常呈七個胺基酸(七價重複)或十一個胺基酸(十一價重複)的序列形式的，這些胺基酸組裝(摺疊)以形成多聚體螺旋束。還涵蓋具有包含3個和4個殘基間隔的某種不規則分布的序列的捲曲螺旋。疏水性殘基具體來說是疏水性胺基酸Val、He、Leu、Met、Tyr、Phe以及Trp。「主要疏水性」是指至少50%的殘基必須選自所提到的疏水性胺基酸。
捲曲螺旋域可來源於層粘連蛋白。在細胞外空間中，異源三聚體捲曲螺旋蛋白層粘連蛋白在基底膜的形成中發揮重要作用。顯然地，多官能低聚結構是層粘連蛋白功能所要求的。捲曲螺旋域還可來源於其中連接三個(TSP-1和TSP-2)或五個(TSP-3、TSP-4 以及TSP-5)鏈的血小板反應蛋白，或來源於摺疊成平行五鏈捲曲螺旋的COMP (COMPcc) (Guo (郭)等人，EMBO J, 1998，17:5265-5272) (Malashkevich (馬拉舍科維奇)等人，科學(Science), 274:761-765(1996))。來源於其他蛋白的另外捲曲螺旋域，以及介導多肽多聚化的其他域是本領域中已知的並且適用於所披露的融合蛋白。
在另一個實施方案中，可通過結合至例如抗體的第二多價多肽來誘導C10RF32多肽、其融合蛋白或片段以便形成多聚體。適合於用於使C10RF32多肽、其融合蛋白或片段多聚化的抗體包括但不局限於IgM抗體以及交聯的多價IgG、IgA、IgD或IgE複合物。
靶向域
C10RF32多肽和融合蛋白可含有用於將分子靶向至體內特定位點的一個靶向域。 任選的靶向域將分子靶向輸送至炎症區域。示例性靶向域是對於發炎組織或促炎症細胞因子具有特異性的抗體或其抗原結合片段，所述細胞因子包括但不局限於IL17、IL-4、IL-6、 IL-12、IL-21、IL-22以及IL-23。在神經學病症，例如多發性硬化的情況下，靶向域可將分子靶向至CNS或可結合至血管上皮上的VCAM-1。另外的靶向域可以是對於促炎症分子具有特異性的肽適體。在其他實施方案中，C10RF32融合蛋白可包括對於展示於例如T細胞的免疫細胞的表面上的多肽具有特異性的結合伴侶。仍然在其他實施方案中，靶向域特異性地靶向活化的免疫細胞。被靶向的任選的免疫細胞包括ThO、Thl、Thl7、Th2以及Th22T細胞、分泌或引起其他細胞分泌炎症分子的其他細胞，這些炎症分子包括但不局限於IL-1 β、 TNF-α ,TGF-β、IFN-Y、IL-17、IL-6、IL-23、IL-22、IL-21 以及 MMP，以及 Trego 例如，Treg 的靶向域可特異性地結合至⑶25。
術語「個體」、「宿主」、「受試者」，以及「患者」在此可互換使用，並且是指任何人類或非人類動物。術語「非人類動物」包括所有脊椎動物，例如，哺乳動物和非哺乳動物，例如非人靈長類、綿羊、犬、貓、馬、牛、雞、兩棲動物、爬行動物、等。
本發明的不同方面在以下小節中進一步詳細描述。
核酸
「核酸片段」或「寡核苷酸」或「多核苷酸」在此可互換使用以指代核酸殘基的聚合物。本發明的多核苷酸序列是指單或雙鏈核酸序列，它以RNA序列、互補多核苷酸序列 (cDNA)、基因組多核苷酸序列和/或複合多核苷酸序列(例如，以上的組合)形式分離和提供。
因此，本發明涵蓋在上文中描述的核酸序列；其片段、與其雜交的序列、與其同源的序列[例如與在此闡明的核酸序列至少90%、至少95%、96%、97%、98%或99%或更大程度一致、編碼具有不同密碼子使用的類似多肽的序列、以一個或多個核苷酸的天然發生的或者隨機亦或以靶向方式人工誘導的突變為特徵的改變序列，所述突變例如缺失、插入或取代。 本發明還涵蓋包括本發明的多核苷酸獨特的序列區的同源核酸序列(即，形成本發明的多核苷酸序列的一部分)。
如果本發明的多核苷酸序列編碼先前未鑑定的多肽，本發明還涵蓋由在上文中描述的分離的多核苷酸以及其相應核酸片段和/或其簡併變體所編碼的新穎多肽或其部分。
因此，本發明還涵蓋由本發明的多核苷酸序列編碼的多肽。本發明還涵蓋這些多肽的同系物，這類同系物可與以下闡明的胺基酸序列至少90%、至少95%、96%、97%、 98%或99%或更大程度同源，如可使用國家生物技術信息中心(National Center of Biotechnology Information ;NCBI)的BlastP軟體使用預設參數來確定的。最後,本發明還涵蓋以上描述的多肽以及具有一個或多個胺基酸的天然發生的隨機亦或以靶向方式人工誘導的突變的多肽的片段，所述突變例如缺失、插入或取代。
如在上文中提到的，本發明的生物分子序列可有效地用作組織或病理標誌以及作為治療或預防疾病的假定藥物或藥物靶標。
被設計成針對在此提供的任何序列來進行本發明方法(如上所述來設計)的寡核苷酸可根據在本領域中已知的任何寡核苷酸合成法，例如酶促合成或固相合成來產生。進行固相合成的設備和試劑例如從美國應用生物系統公司(Applied Biosystems)可購得。也可使用這類合成的任何其他手段；寡核苷酸的實際合成完全在本領域技術人員的能力範圍內。
根據本發明的這一方面使用的寡核苷酸是具有選自從約10至約200個鹼基、優選地從約15至約150個鹼基、更優選地從約20至約100個鹼基、最優選地從約20至約50個鹼基的範圍的長度的那些寡核苷酸。
本發明的寡核苷酸可包含由嘌呤和嘧啶鹼基組成的雜環核苷，這些鹼基以3』至 5』磷酸二酯鍵來鍵結。
優選的寡核苷酸是在骨架、核苷間鍵或鹼基中經過修飾的那些寡核苷酸，如下文中廣泛描述。這類修飾可時常促進寡核苷酸吸收以及對於細胞內條件的抵抗性。
根據本發明的這一方面適用的優選寡核苷酸的具體實例包括含有經過修飾的骨架或非天然核苷間鍵的寡核苷酸。具有修飾的骨架的寡核苷酸包括在骨架中保持磷原子的那些寡核苷酸，如在以下美國專利號中所披露的4，469, 863 ;4，476，301 ;5，023，243 ； 5，177，196 ;5，188，897 ;5，264，423 ;5，276，019 ;5，278，302 ;5，286，717 ;5，321，131 ； 5，399，676 ;5，405，939 ;5，453，496 ;5，455，233 ;5，466,677 ;5，476，925 ;5，519，126 ； 5，536，821 ;5，541，306 ;5，550，111 ;5，563，253 ;5，571，799 ;5，587，361 ;以及 5，625，050。
優選的修飾的寡核苷酸骨架包括例如硫代磷酸酯、手性硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯、磷酸三酯、氨基烷基磷酸三酯、甲基以及其他烷基膦酸酯(包括3』-亞烷基膦酸酯以及手性膦酸酯)、亞膦酸酯、氨基磷酸酯(包括3』-氨基氨基磷酸酯以及氨基烷基氨基磷酸酯)、 硫代氨基磷酸酯、硫代烷基膦酸酯、硫代烷基膦酸三酯，以及具有正常3』 -5』鍵、這些鍵的 2』-5』連接類似物的硼烷磷酸酯，以及具有其中相鄰對的核苷單位以3』-5』至5』-3』或 2』-5』至5』-2』來連接的反向極性的那些硼烷磷酸酯。也可使用不同鹽、混合鹽以及游離酸形式。
可替代地，其中不包括磷原子的修飾的寡核苷酸骨架具有通過短鏈烷基或環烷基核苷間鍵、混合雜原子以及烷基或環烷基核苷間鍵、或一個或多個 短鏈雜原子或雜環核苷間鍵形成的骨架。這些骨架包括具有嗎啉鍵(部分地由核苷的糖部分形成)的那些骨架； 矽氧烷骨架；硫化物、亞碸以及碸骨架；甲醯基以及硫代甲醯基骨架；亞甲基甲醯基以及硫代甲醯基骨架；含有烯烴的骨架；氨基磺酸酯骨架；亞甲基亞氨基以及亞甲基肼基骨架； 磺酸酯以及磺醯胺骨架；醯胺骨架；以及具有混合N、O、S以及CH2組成部分的其他骨架， 如在美國專利號 5,034，506 ;5，166,315 ;5，185,444 ;5，214，134 ;5，216，141 ;5，235,033 ；5，264，562 ;5，264，564 ;5，405，938 ;5，434，257 ;5，466，677 ;5，470，967 ;5，489，677 ； 5，541，307 ;5，561，225 ;5，596，086 ;5，602, 240 ;5，610, 289 ;5，602, 240 ;5，608, 046 ； 5，610，289 ;5，618，704 ;5，623,070 ;5，663，312 ;5，633，360 ;5，677，437 ;以及 5，677，439 中所披露。
根據本發明可使用的其他寡核苷酸是核苷酸單位的糖和核苷間鍵(S卩，骨架)替換為新穎的基團而修飾的那些寡核苷酸。保持鹼基單位以便與適當的多核苷酸目標互補。這類寡核苷酸模擬物的實例包括肽核酸(PNA)。PNA寡核苷酸是指其中糖-骨架替換為含有醯胺的骨架，特別是氨乙基甘氨酸骨架的寡核苷酸。鹼基得以保持並且直接或間接地結合至骨架的醯胺部分的氮雜氮原子。傳授PNA化合物的製備的美國專利包括但不局限於美國專利號5，539，082 ;5，714，331 ;以及5，719，262，它們各自通過引用結合在此。可用於本發明中的其他骨架修飾披露於美國專利號6，303，374中。
本發明的寡核苷酸還可包括鹼基修飾或取代。如在此使用，「未修飾的」或「天然」 鹼基包括嘌呤鹼基腺嘌呤(A)和鳥嘌呤(G)，以及嘧啶鹼基胸腺嘧啶(T)、胞嘧啶(C)以及尿嘧啶(U)。修飾鹼基包括但不局限於其他合成以及天然鹼基例如5-甲基胞嘧啶(5-me-C)、 5-羥甲基胞嘧啶、黃嘌呤、次黃嘌呤、2-氨基腺嘌呤、腺嘌呤和鳥嘌呤的6-甲基以及其他烷基衍生物、腺嘌呤和鳥嘌呤的2-丙基以及其他烷基衍生物、2-硫尿嘧啶、2-硫代胸腺嘧啶以及2-硫代胞嘧啶、5-滷代尿嘧啶以及胞嘧啶、5-丙炔基尿嘧啶以及胞嘧啶、6-偶氮尿嘧啶、胞嘧啶以及胸腺嘧啶、5-尿嘧啶(假尿嘧啶)、4_硫尿嘧啶、8-滷基、8-氨基、8-氫硫基、8-硫烷基、8-羥基以及其他8-取代腺嘌呤和鳥嘌呤、5-滷基尤其5-溴、5-三氟甲基以及其他5-取代的尿嘧啶和胞嘧啶、7-甲基鳥嘌呤和7-甲基腺嘌呤、8-氮鳥嘌呤和8-氮腺嘌呤、7-脫氮鳥嘌呤和7-脫氮腺嘌呤、以及3-脫氮鳥嘌呤和3-脫氮腺嘌呤。另外的鹼基包括在美國專利號3，687，808中披露的那些鹼基、在聚合物科學與工程簡明百科全書(The Concise Encyclopedia Of Polymer Science and Engineering),第 858-859 頁， Kroschwitz (克洛舍維奇)，J.1.編著，約翰威利出版公司(John Wiley&Sons)，1990年中披露的那些鹼基、在Englisch等人,應用化學(Angewandte Chemie),國際版，1991, 30,613 中披露的那些鹼基、以及在Sanghvi (賽格維)，Y. S.，第15章,反義研究與應用(Antisense Research and Applications),第 289-302 頁，Crooke (克魯克)，S.T.和 Lebleu (拉布列)，B.編著，CRC出版社，1993中披露的那些鹼基。這類鹼基尤其適用於增加本發明的低聚化合物的結合親和力。這些鹼基包括5-取代嘧啶、6-氮嘧啶以及N-2、N-6以及0-6取代嘌呤，包括2-氨基丙基腺嘌呤、5-丙炔基尿嘧啶以及5-丙炔基胞嘧啶。已顯示5-甲基胞嘧啶取代可將核酸雙鏈穩定性增加0. 6-1. 2。C [Sanghvi YS (賽格維)等人(1993)反義研究與應用(Antisense Research and Applications), CRC 出版社，波卡拉頓(Boca Raton) 276-278]並且是目前優選的鹼基取代，在與2』-O-甲氧基乙基糖修飾相結合時甚至更特別如此。
本發明的寡核 苷酸的另一種修飾涉及將增強寡核苷酸的活性、細胞分布或細胞吸收的一種或多種部分或偶聯物化學連接至該寡核苷酸。
這類部分包括但不局限於脂質部分(例如膽固醇部分)、膽酸、硫醚(例如己基-S-三苯甲基硫醚)、巰基膽固醇、脂肪鏈(例如十二烷二醇或i^一基殘基)、磷脂(例如二 -十六基-rac-甘油或1，2- 二 -O-十六基-rac-甘油-3-H-膦酸三乙基銨)、多胺或聚乙二醇鏈，或金剛烷乙酸、棕櫚基部分，或十八烷基胺或己基氨基-羰基-羥膽固醇部分，如美國專利號6，303，374中所披露。
不需要給定寡核苷酸分子中的所有位置被均勻地修飾，並且事實上多於一種的上述修飾可併入單一化合物中或甚至一個寡核苷酸內的單一核苷處。
肽
術語「多肽」、「肽」及「蛋白」在此可互換使用以指胺基酸殘基的聚合物。這些術語適用於其中一個或多個胺基酸殘基是對應天然發生胺基酸的類似物或模擬物的胺基酸聚合物，以及天然發生的胺基酸聚合物。多肽可例如通過添加碳水化合物殘基以便形成糖蛋白來修飾。術語「多肽」、「肽」以及「蛋白」包括糖蛋白，連同非糖蛋白。
多肽產物可例如通過使用標準固相技術來生化合成。這類方法包括排阻固相合成、部分固相合成方法、片段縮合、經典溶液合成。這些方法優選地當肽相對較短(即， IOkDa)和/或當它不能通過重組技術來產生(B卩，未由核酸序列來編碼)並且因此涉及不同化學時使用。
固相多肽合成程序在本領域中是熟知的，並且進一步由John Morrow Stewart (約翰莫羅斯圖爾特)以及Janis Dillaha Young(詹尼斯迪拉哈楊)，固相肽合成(Solid Phase Peptide Syntheses)(第 2 版,Pierce Chemical Company 公司，1984)描述。
合成多肽可通過製備型高效液相色譜來純化[Creighton (克雷頓)Τ· (1983年) 蛋白、結構以及分子原則(Proteins, structures and molecular principles)WH Freeman (弗裡曼)和Co. N. Y.]並且其組成可經由胺基酸測序來確認。
如果希望有大量多肽，它可使用例如以下文獻描述的重組技術來產生Bitter (比特爾)等人，(1987)酶學方法(Methods in Enzymo1. ) 153:516-544, Studier (斯圖迪爾) 等人(1990 年)酶學方法(Methods inEnzymol. ) 185:60-89,Brisson (布裡松)等人(1984 年)自然(Nature) 310:511-514，Takamatsu (高松)等人(1987 年)EMBO J. 6:307-311, Coruzzi (科魯茲)等人(1984 年)EMBO J. 3:1671-1680 以及 fcogli (布羅意)等人，(1984 年)科學(Science) 224:838-843，Gurley (葛爾萊)等人(1986年)分子細胞生物學報 (Mol. Cell. Biol. ) 6:559-565 以及 Weissbach (懷斯巴赫)&Weissbach, 1988,植物分子生物學方法(Methods for Plant Molecular Biology),學術出版社(Academic Press),紐約(NY),第VIII部分，第421-463頁。
將理解，根據本發明的傳授內容鑑定的肽可以是降解產物、合成肽或重組肽以及擬肽物，通常是作為肽類似物的合成肽以及類肽以及半類肽，它們可具有例如使得肽在處於體內時更穩定或更能夠滲透至細胞中的修飾。這類修飾包括但不局限於N末端修飾、C 末端修飾、肽鍵修飾(包括但不局限於CH2-NH、CH2-S、CH2_S=0、O=C-NH, CH2-0、CH2-CH2、 S=C-NH、CH=CH或CF=CH)、 骨架修飾以及殘基修飾。用於製備擬肽物化合物的方法在本領域中是熟知的，並且在例如定量藥物設計(Quantitative Drug Design), C. A. Ramsden (拉姆斯登)Gd·,第17. 2章，F. Choplin Pergamon Press出版社(1992)中加以規定,該文獻通過引用結合在此，如同完全在此闡明一樣。此方面的進一步細節提供於下文。
肽內的肽鍵(-C0-NH-)可例如被以下鍵取代N-甲基化鍵(_N(CH3)-C0-)、酯鍵 (-C (R) H-C-0-0-C (R) -N-)、酮亞甲基鍵(-C0-CH2-)、α -氮雜鍵(-NH-N (R) -CO-)(其中 R 是任何烷基例如甲基)、carba鍵(-CH2-NH-)、羥基亞乙基鍵(-CH (OH) -CH2-)、硫代醯胺鍵(-CS-NH-)、烯系雙鍵(-CH=CH-)、逆向醯胺鍵(-NH-CO-)、肽衍生物(-N (R) -CH2-C0-)，其中 R是天然地呈現於碳原子上的「正常」側鏈。
這些修飾可 沿著肽鏈在任何鍵處出現並且甚至同時在若干(2-3)個鍵處出現。
天然芳香族胺基酸Trp、Tyr以及Phe可由合成非天然酸來取代，所述合成非天然酸例如苯甘氨酸、TIC、萘基丙氨酸(Nol)、Phe的環甲基化衍生物、Phe的滷化衍生物或o_甲基-Tyr0
除了上述以外，本發明的肽還可包含一種或多種修飾胺基酸或一種或多種非胺基酸單體(例如脂肪酸，複合碳水化合物等)。
如在此說明書以及以下權利要求部分中使用，術語「胺基酸(amino acid)」或「胺基酸(amino acids)」應理解為包括20種天然發生的胺基酸；經常在體內翻譯後修飾的那些胺基酸，包括例如羥基脯氨酸、磷酸絲氨酸以及磷酸蘇氨酸；以及其他獨特胺基酸，包括但不局限於2-氨基己二酸、羥基賴氨酸、異鎖鏈賴氨素、正纈氨酸、正亮氨酸以及鳥氨酸。 此外，術語「胺基酸」包括D-以及L-胺基酸。
由於本發明的肽優選地用於要求肽呈可溶性形式的治療劑中，本發明的肽優選地包含一種或多種非天然或天然極性胺基酸，這些胺基酸包括但不局限於歸因於其含羥基的側鏈而能夠增加肽溶解性的絲氨酸和蘇氨酸。
如果希望大量本發明的肽，本發明的肽可使用例如以下文獻描述的重組技術來產生Bitter (比特爾)等人,(1987 年)酶學方法(Methods in Enzymo1. ) 153:516-544， Studier (斯圖迪爾)等人(1990 年)酶學方法(Methods in Enzymo1. )185:60-89,Brisson (布裡松)等人(1984)自然(Nature) 310:511-514, Takamatsu (高松)等人(1987 年) EMBO J. 6:307-311,Coruzzi 等人(1984 年)EMBO J. 3:1671-1680 以及 Brogli (布羅意)等人，(1984年)科學(Science) 224:838-843，Gurley (葛爾萊)等人(1986年)分子細胞生物學報(Mol. Cell. Biol. ) 6:559-565 以及 Weissbach(懷斯巴赫)&Weissbach, 1988 年， 植物分子生物學方法(Methods for Plant Molecular Biology),學術出版社(Academic Press),紐約(NY),第 VIII 部分，第 421-463 頁。
表達系統
為了使得本發明的多核 苷酸能夠進行細胞表達，可使用根據本發明的核酸構建體，它包括以上核酸序列之一的至少一個編碼區，並且進一步包括至少一種順式作用調控元件。如在此使用，短語「順式作用調控元件」是指結合反式作用調控子並且調控位於其下遊的編碼序列的轉錄的多核苷酸序列，優選為啟動子。
任何適合的啟動子序列可由本發明的核酸構建體來使用。
優選地，本發明的核酸構建體使用的啟動子在所轉化的具體細胞群中是活性的。 細胞類型特異性和/或組織特異性啟動子的實例包括具有肝特異性的啟動子，例如白蛋白 [Pinkert (平克特)等人，(1987年)基因和發育(Genes Dev. )1:268-277]、淋巴特異性啟動子[Calame (卡拉姆)等人，(1988年)免疫學進展(Adv.1mmunol. ) 43:235-275];尤其 T-細胞受體[Winoto(溫諾託)等人，(1989年)EMBO J. 8:729-733]和免疫球蛋白的啟動子； [Banerji (巴納基)等人(1983年)細胞(Cell) 33729-740]、神經元特異性啟動子，例如神經微絲啟動子[Byrne(伯恩)等人(1989年)美國國家科學院學報(Proc. Natl. Acad. Sc1.) USA86:5473-5477]、胰腺特異性啟動子[Edlunch(艾德倫齊)等人(1985)科學(Science)230:912-916]或乳腺特異性啟動子，例如乳清啟動子(美國專利號4，873，316以及歐洲申請公布號264，166)。本發明的核酸構建體可進一步包括增強子，該增強子可相鄰於或遠離啟動子序列並且可起作用以便上調由其進行的轉錄。
本發明的核酸構建體優選地進一步包括一個適當的選擇標記和/或複製起點。優選地，所使用的核酸構建體是穿梭載體，它可在大腸桿菌中繁殖(其中該構建體包含適當的選擇標記和複製起點)並且適合於在細胞中繁殖、或整合於所選擇的基因和組織之中。根據本發明的構建體可以是例如質粒、杆粒、噬菌粒、粘粒、噬菌體、病毒或人工染色體。
適合的構建體的實例包括但不局限於pcDNA3、pcDNA3.1 (+/-)、pGL3、 PzeoSV2 (+/_) > pDisplay> pEF/myc/cyto> pCMV/myc/cyto,它們各自可購自英傑生命技術有限公司(Invitrogen Co. ) (www.1nvitrogen.com)。逆轉錄病毒載體以及包裝系統的實例是由加利福尼亞州聖地牙哥Clontech公司(Clontech, San Diego (聖地牙哥)，Calif.(加利福尼亞州))出售的那些，包括Retro-X載體pLNCX以及pLXSN，這些載體允許克隆至多個克隆位點中並且該轉基因從CMV啟動子來轉錄。還包括來源於Mo-MuLV的載體，例如pBabe，其中該轉基因將從5』 LTR啟動子來轉錄。
目前優選的體內核酸轉移技術包括用病毒或非病毒構建體來轉染，所述構建體例如腺病毒、慢病毒、單純性皰疹I病毒，或腺伴隨病毒(AAV)以及基於脂質的系統。用於基因的脂質介導的轉移的有用脂質是例如D0TMA、D0PE以及DC-Choi [Tonkinson (託金森)等人，癌症研究(Cancer Investigation)，14 (I) : 54-65 (1996)]。用於基因療法中的最優選構建體是病毒，最優選為腺病毒、AAV、慢病毒、或逆轉錄病毒。例如逆轉錄病毒構建體的病毒構建體包含至少一種轉錄啟動子/增強子或基因座界定元件，或通過例如選擇性剪接、 核RNA輸出或信使的翻譯後修飾的其他手段來控制基因表達的其他元件。這類載體構建體還包括一個包裝信號、多個長末端重複序列(LTR)或其部分，以及適合於所用病毒的正和負鏈引物結合位點，除非它已經存在於病毒構建體中。此外，這種構建體典型地包括用於使肽從它所安放的宿主細胞中分泌的一個信號序列。優選地，用於這一目的的信號序列是哺乳動物信號序列或本發明的多肽的信號序列。任選地，該構建體還可包括引導多聚腺苷酸化的一個信號，以及一個或多個限制位點和一個翻譯終止序列。例如，這類構建體通常包括一個5』LTR、tRNA結合位點、包裝信號、第二鏈DNA合成的起點，以及3' LTR或其一部分。可使用非病毒性的其他載體，例如陽離子脂質、聚賴氨酸，以及樹枝狀化合物。
重組表達載體和宿主細胞
本發明的另一個方面涉及含有編碼本發明的蛋白、或其衍生物、片段、類似物或同源物的核酸的載體，優選地是表達載體。如在此使用，術語「載體」是指能夠運輸它所連接的另一種核酸的核酸分子。一種類型的載體是「質粒"，是指另外DNA片段可連接至其中的一個圓形雙鏈DNA環。另一種類型的載體是病毒載體，其中另外DNA片段可連接至病毒基因組中。某些載體能夠在它們被引入至其中的宿主細胞中 自主複製(例如，具有細菌複製起點的細菌載體以及附加型哺乳動物載體)。其他載體(例如，非附加型哺乳動物載體)在引入至宿主細胞中時被整合進該宿主細胞的基因組中，並且由此與宿主基因組一起複製。此外， 某些載體能夠引導它們可操作連接的基因的表達。這類載體在此稱為「表達載體」。一般而言，可用於重組DNA技術中的表達載體經常呈質粒形式。在本說明書中，「質粒」和「載體」 可互換地使用，因為質粒是載體的最通常使用形式。然而，本發明旨在包括充當同等功能的這類其他形式的表達載體，例如病毒載體(例如，複製缺陷型逆轉錄病毒、腺病毒以及腺伴隨病毒)。
本發明的重組表達載體包括呈適合於在宿主細胞中表達核酸的形式的本發明的核酸，這意味著這些重組表達載體包括基於待用於表達的宿主細胞來選擇的一種或多種調控序列，這些調控序列可操作地連接至待表達的核酸序列。在重組表達載體中，「可操作地連接」旨在表示所感興趣的核苷酸序列以允許表達該核苷酸序列的方式連接至調控序列 (例如，在體外轉錄/翻譯系統中或在載體被引入宿主細胞中時在該宿主細胞中)。
術語「調控序列」旨在包括啟動子、增強子以及其他表達控制元件(例如多聚腺苷酸化信號)。這類調控序列描述於例如Goeddel (戈德爾)，基因表達技術酶學方法(Gene Expression Technology:Methods in Enzymology) 185,學術出版社(Academic Press), 聖地牙哥(San Diego),加利福尼亞州(Calif. ) (1990年)中。調控序列包括引導一個核苷酸序列在許多類型的宿主細胞中的組成性表達的那些序列以及引導該核苷酸序列只在某些宿主細胞中表達的那些序列(例如，組織特異性調控序列)。本領域技術人員將理解，表達載體的設計可取決於諸如待轉化的宿主細胞的選擇、所希望的蛋白表達水平等的因素。本發明的表達載體可引入宿主細胞中，從而產生由在此描述的核酸編碼的蛋白或肽，包括融合蛋白或肽。
本發明的重組表達載體可被設計成在原核或真核細胞中產生變體蛋白。例如，本發明的蛋白可表達於例如大腸桿菌的細菌細胞、昆蟲細胞(使用杆狀病毒表達載體)、酵母細胞或哺乳動物細胞中。適合的宿主細胞進一步討論於Goeddel (戈德爾)，基因表達技術酶學方法(Gene Expression Technology:Methods in Enzymology) 185,學術出版社 (Academic Press),聖地牙哥(San Diego),加利福尼亞州(Calif. ) (1990年)中。可替代地，重組表達載體可在體外例如使用T7啟動子調控序列以及T7聚合酶來轉錄和翻譯。
蛋白在原核生物中的表達最經常在大腸桿菌中用含有引導融合或非融合蛋白的表達的組成性或可誘導性啟動子的載體來進行。融合載體將許多胺基酸添加至其中所編碼的蛋白，添加至重組蛋白的氨基或C末端。這類融合載體通常用於三個目的(i)增加重組蛋白的表達；(ii)增加重組蛋白的溶解性；以及(iii)通過在親和力純化中充當配體來幫助純化重組蛋白。經常，在融合表達載體中，將蛋白裂解位點引入至融合部分與重組蛋白的接合處以使得能夠在純化融合蛋白之後將重組蛋白與融合部分分離。這 類酶、以及其同源識別序列包括因子Xa、凝血酶、PreScission、TEV以及腸激酶。典型的融合表達載體包括 pGEX(Pharmacia Biotech Inc;史密斯和詹森(Smith and Johnson), 1988.基因(Gene) 67:31-40)、pMAL (紐英倫生物技術公司(New England Biolabs),貝弗利(Beverly)，麻薩諸塞州(Mass·))以及pRIT5 (Pharmacia公司，皮斯卡塔韋(Piscataway)，新澤西州 (N. J.))，它們分別將穀胱甘肽S-轉移酶(GST)、麥芽糖E結合蛋白或蛋白A融合至目標重組蛋白。
適合的可誘導性非融合大腸桿菌表達載體的實例包括pTrc (Amrann (阿姆蘭)等人，(1988年)基因(Gene)69:301-315)以及pETlld (Studier (斯圖迪爾)等人，基因表達技術酶學方法(Gene Expression Technology:Methods in Enzymology)185,學術出版社(Academic Press),聖地牙哥(San Diego),力口利福尼亞州(Calif. ) (1990 年)60-89)-不精確地，pETlla-d具有N末端T7標籤。
將大腸桿菌中的重組蛋白表達最大化的一種策略是在蛋白裂解重組蛋白的能力被削弱的細菌宿主中表達該蛋白。參見例如Gottesman (高特斯曼)，基因表達技術酶學方法(Gene Expression Technology:Methodsin Enzymology) 185,學術出版社(Academic Press),聖地牙哥(San Diego),加利福尼亞州(Calif. ) (1990) 119-128。另一種策略是改變待插入表達載體中的核酸的核酸序列以使得每個胺基酸的單獨密碼子是在大腸桿菌使用的那些優選密碼子(參見例如Wada (和田)等人，1992.核酸研究(Nucl. Acids Res.) 20:2111-2118)。本發明的核酸序列的這種改變可通過標準DNA合成技術來進行。解決密碼子偏愛的另一種策略是使用BL21-密碼子加上細菌菌株(英傑生命技術有限公司 (Invitrogen))或Rosetta菌株(諾華公司(Novagen)),這些菌株含有罕見大腸桿菌tRNA基因的額外副本。
在另一個實施方案中，編碼本發明的蛋白的表達載體是一種酵母表達載體。用於在酵母釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)中表達的載體的實例包括pYepSecl (Baldari (班得瑞)等人，1987. EMBO J. 6:229_234)、pMFa (Kurjan (庫爾揚)和 Herskowitz (赫斯克維茨)，1982.細胞(Cell)30:933-943)、pJRY88 (Schultz (舒爾茨)等人，1987.基因(Gene) 54:113_123)、pYES2 (英傑生命技術有限公司(Invitrogen Corporation),聖地牙哥(San Diego),加利福尼亞州(Calif.))以及picZ (英傑生命技術有限公司，聖地牙哥,加利福尼亞州)。
可替代地，本發明的多肽可在昆蟲細胞中使用杆狀病毒表達載體來產生。可用於蛋白在所培養的昆蟲細胞(例如SF9細胞)中表達的杆狀病毒載體包括pAc系列(史密斯(Smith)等人，1983.分子細胞生物學(Mol. Cell. Biol. ) 3:2156-2165)以及 pVL 系列 (Lucklow (路克勞)和 Summers (薩默斯)，1989.病毒學(Virology) 170:31-39)。
在又一個實施方案中，本發明的核酸在哺乳動物細胞中使用哺乳動物表達載體來表達。哺乳動物表達載體的實例包括PCDM8 (Seed (希德)，1987.自然(Nature) 329:840) 以及 pMT2PC (Kaufman 等人，1987. EMBO J. 6:187-195),pIRESpuro (Clontech)、pUB6 (英傑生命技術有限公司(Invitrogen))、pCEP4 (英傑生命技術有限公司)、pREP4 (英傑生命技術有限公司)、pcDNA3 (英傑生命技術有限公司)。當用於哺乳動物細胞中時，表達載體的控制功能經常由病毒調控元件來提供。例如，通常使用的啟動子來源於多瘤病毒、腺病毒2、巨細胞病毒、勞斯肉瘤病毒以及猿病毒40。關於用於原核和真核細胞的其他適合的表達系統，參見例如薩姆布魯克(Sambrook)等人，分子克隆實驗手冊(Molecular Cloning:A Laboratory Manual.)第2版，冷泉港實驗室，冷泉港實驗室出版社，冷泉港，紐約州 (Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N. Y. ) , 19 89 的第 16 和 17 章。
在另一個實施方案中，重 組哺乳動物表達載體能夠引導核酸優先在特定細胞類型中表達(例如，使用組織特異性調控元件來表達核酸)。組織特異性調控元件是本領域中已知的。適合的組織特異性啟動子的非限制實例包括白蛋白啟動子(肝特異性；Pinkert (平克特)等人，1987基因和發育(Genes Dev. ) 268-277)、淋巴特異性啟動子(Calame (卡拉姆)和Eaton (伊頓)，1988免疫學進展(Adv.1mmunol. ) 43:235-275)、尤其T細胞受體 (Winoto (溫諾託)和Baltimore (巴爾的摩)，1989EMB0 J. 8:729-733)和免疫球蛋白的啟動子(Banerji 等人 1983 細胞(Cell)33:729-740 ;Queen(昆)和 Baltimore(巴爾的摩)，1983.細胞(Cell) 33:741-748)、神經元特異性啟動子(例如神經微絲啟動子；Byrne (伯恩)和 Ruddle (拉德爾)1989 美國國家科學院學報(Proc. Natl. Acad. Sc1. )USA86:5473-5477)、胰腺特異性啟動子(Edlunch ((艾德倫齊)等人1985科學(Science)230:912-916)或乳腺特異性啟動子(例如乳清啟動子；美國專利號4，873，316以及歐洲申請公布號264，166)。還涵蓋發育調控啟動子，例如鼠hox啟動子(Kessel (凱塞爾)和Gruss (格魯斯)，1990年.科學(Science) 249:374-379)以及α -胎蛋白啟動子(Campes (康拍斯)和Tilghman (蒂爾曼)，1989年·基因和發育3:537-546) ·
本發明在至少一些實施方案中進一步提供一種重組表達載體，它包括以反義取向克隆至該表達載體中的本發明的DNA分子。也就是說，該DNA分子以允許表達(通過DNA分子的轉錄)與編碼本發明的蛋白的mRNA呈反義的RNA分子的方式可操作地連接至調控序列。可操作地連接至以反義取向克隆的核酸的調控序列可被選擇成引導反義RNA分子在各種細胞類型中的連續表達，例如病毒啟動子和/或增強子，或調控序列可被選擇成引導反義RNA的組成性、組織特異性或細胞類型特異性表達。反義表達載體可呈重組質粒、噬菌粒或減毒病毒形式，其中反義核酸在一個高效率調控區的控制下產生，該高效率調控區的活性可由將載體引入其中的細胞類型來確定。關於使用反義基因來調控基因表達的討論， 參見例如Weintraub (溫特勞布)等人,「作為基因分析的分子工具的反義RNA (Antisense RNA as a molecular tool for genetic analysis)」遺傳學趨勢評論(Reviews-Trends in Genetics),第 I (I)卷 1986 年。
本發明的另一個方面涉及本發明的重組表達載體已引入其中的宿主細胞。術語 「宿主細胞」和「重組宿主細胞」在此可互換地使用。應理解這類術語不僅涉及具體對象細胞，而且涉及這種細胞的子代或潛在子代。因為某些變化可在後代中由於突變或環境影響而發生，這種子代可能在事實上與親代細胞不同，但是仍然包括在如在此使用的術語範圍內。
宿主細胞可為任何原核或真核細胞。例如，本發明的蛋白可在例如大腸桿菌的細菌細胞、昆蟲細胞、酵母、植物或哺乳動物細胞(例如中國倉鼠卵巢細胞(CHO)或COS或293 細胞)中產生。其他適合的宿主細胞是本領域技術人員已知的。
載體DNA可經由常規轉化或轉染技術而引入原核或真核細胞中。如在此使用，術語「轉化」和「轉染」用來指用於將外來核酸(例如，DNA)引入宿主細胞中的各種本領域認可的技術，包括磷酸鈣或氯化鈣共沉澱、DEAE-葡聚糖介導轉染、脂質轉染、或電穿孔。用於轉化或轉染宿主細胞的合適方法可發現於薩姆布魯克(Sambrook)等人(分子克隆實驗手冊 (Molecular Cloning:A Laboratory Manual.)第2版，冷泉港實驗室,冷泉港實驗室出版社，冷泉港，紐約州(Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N. Y. ) , 1989)以及其他實驗手冊中。
為了穩定轉染哺乳動物細胞，已知取決於所使用的表達載體以及轉染技術， 只有小部分的細胞可將外來DNA併入其基因組中。為了鑑定並且選擇這些構成組分 (integrant)，通常將編碼選擇標記(例如，抗生素抗性)的基因與所感興趣的基因一起引入宿主細胞中。各種選擇標記包括賦予對於例如G418、潮黴素、嘌呤黴素、殺稻瘟菌素以及甲氨喋呤的藥物的抗性的那些標記。編碼選擇標記的核酸可在與編碼本發明蛋白的核酸相同的載體上被引入至宿主細胞中 或可引入獨立載體中。用所引入的核酸穩定轉染的細胞可通過藥物選擇來鑑定(例如，併入有選擇標記基因的細胞將存活，而其他細胞將死亡)。
培養中的本發明的宿主細胞，例如原核或真核宿主細胞,可用於產生(即,表達)本發明的蛋白。因此，本發明在至少一些實施方案中進一步提供使用本發明的宿主細胞來產生本發明蛋白的方法。在一個實施方案中，該方法包括在適合的培養基中培養本發明的宿主細胞(編碼本發明的蛋白的重組表達載體已引入其中)以使得產生本發明的蛋白。在另一個實施方案中，該方法進一步包括將本發明的蛋白從該培養基或宿主細胞中分離。
為了有效產生蛋白，最好將編碼本發明的蛋白的核苷酸序列置於針對在所希望宿主中的表達予以優化的表達控制序列的控制之下。例如，這些序列可包括優化的轉錄和/ 或翻譯調控序列(例如改變的Kozak序列)。
應注意，根據本發明的至少一些實施方案，如在此描述的C10RF32多肽可任選地分離為天然發生的多肽，或從不論天然、合成、半合成或重組的任何來源而分離。因此， C10RF32蛋白可以從任何物種，特別是哺乳動物，包括牛、羊、豬、鼠、馬，並且優選是人類，被分離為天然發生的蛋白。可替代地，C10RF32蛋白可以被分離為在原核生物或真核生物宿主細胞中表達的重組多肽，或分離為化學合成的多肽。
本領域技術人員可容易地使用標準分離方法來獲得分離的C10RF32蛋白。分離的性質和程度取決於所分離分子的來源以及期望的用途。
基因療法
根據本發明的至少一些實施方案，編碼在此描述的可溶性C10RF32多肽的核酸序列可用於治療在此描述的任何免疫相關病症的基因療法中。
如在此使用，「基因療法」是通過基因操縱以使得一個核酸序列轉移至一個細胞中，該細胞然後表達由該核酸編碼的任何基因產物來治療疾病的過程。例如，如本領域技術人員熟知的，核酸轉移可通過經由各種方法離體或在體外將含有所感興趣的核酸的表達載體插入細胞中來進行，這些各種方法包括例如磷酸鈣沉澱、二乙氨基乙基葡聚糖、聚乙二醇 (PEG)、電穿孔、直接注射、脂質轉染或病毒感染(薩拉布魯克(Sambrook)等人，分子克隆 實驗手冊(Molecular Cloning:A Laboratory Manual)(冷泉港實驗室出版社(Cold Spring Harbor Laboratory Press) 1989年)；Kriegler (克裡格勒)M.基因轉移和表達實驗手冊(Gene Transfer ad Expression:A Laboratory Manual) (ff. H.弗裡曼公司，紐約市，紐約州(W. H. Freeman and Co, New York, N. Y. )，1993)以及 Wu (吳)，酶學方法(Methods in Enzymology)(學術出版社，紐約市(Academic Press, New York), 1993)。可替代地，所感興趣的核酸序列可在體內在各種載體中以及通過各種方法轉移至細胞中，這些各種方法包括例如將核酸直接給予至受試者體內，或將核酸插入病毒載體中並用該病毒感染受試者。用於體內轉移的其他方法包括將核酸封裝至脂質體中，以及將脂質體、或與紅血球凝集性仙臺病毒(Sendai virus)組合的脂質體直接轉移至受試者。轉染或感染的細胞表達由核酸編碼的蛋白產物以便改進疾病或疾病症狀。
蛋白化學修飾
在本發明中，本發明的蛋白的任何部分可任選地化學修飾，即通過添加官能團來改變。例如，出現在原生序列中的側胺基酸殘基可任選地修飾，但是替代地如下所述，除了側胺基酸殘基以外或代替側胺基酸殘基，蛋白的其他部分可任選地修飾。如果遵循一個化學合成過程，可任選地在分子合成期間進行修飾，例如通過添加化學修飾的胺基酸。然而，已經存在於分子中的胺基酸的化學修飾(「原位」修飾)也是可能的。
該分子的任何序列區的胺基酸可任選地根據以下示例性類型的修飾中的任何一種(在概念地被視為「化學修飾」的肽中)來修飾。非限制性示例性類型的修飾包括羧甲基化、醯化、磷酸化、糖基化或脂肪醯化。醚鍵可任選地用於將絲氨酸或蘇氨酸羥基連接至糖的羥基。醯胺鍵可任選地用於將穀氨酸或天冬氨酸羧基連接至糖上的氨基(Garg (蓋爾格)和Jeanloz (揚洛茲)，碳水化合物化學與生物化學進展(Advances in Carbohydrate Chemistry and Biochemistry),第 43 卷，學術出版社(Academic Press) (1985) ；Kunz(JL 茲)，應用化學(Ang. Chem.)國際版英語26:294-308(1987年))。縮醛和縮酮鍵也可任選地形成於胺基酸與碳水化合物之間。可任選地例如通過游離氨基(例如賴氨酸)的醯化來製成脂肪酸醯基衍生物(Toth(託斯)等人，肽化學、結構以及生物學(Peptides:Chemistry, Structure and Biology), Rivier (裡維爾)和 Marshal (馬歇爾)，編著，ESCOM Publ.,萊頓(Leiden)，1078-1079(1990 年))。
如在此使用，術語「化學修飾」，在關於根據本發明的蛋白或肽時是指其中它的胺基酸殘基中的至少一個殘基通過天然過程，例如加工或其他翻譯後修飾，亦或通過本領域中熟知的化學修飾技術來修飾的蛋白或肽。許多已知修飾的實例通常包括但不局限於乙醯化、醯化、醯胺化、ADP-核糖基化、糖基化、GPI錨定物形成、脂質或脂質衍生物的共價連接、甲基化、十四烷基化、聚乙二醇化、異戊烯化、磷酸化、泛素化，或任何類似過程。
其他類型的修飾任選地包括添加環烷烴部分至生物分子，例如像在PCT申請號 W02006/050262中描述的蛋白，該申請通過引用結合在此，如同完全在此闡明一樣。這些部分被設計成與生物分子一起使用並且可任選地用於向蛋白賦予不同特性。
此外，任選地在蛋白上的任何點可被修飾。例如，蛋白上的糖基化部分的聚乙二醇化可任選地進行，如PCT申請號W02006/050247中所描述，該申請通過引用結合在此，如同完全在此闡明一樣。一個或多個聚乙二醇(PEG)基團可任選地添加至O-連接和/或N-連接的糖基化。PEG基團可任選地為分支的或直鏈的。任選地，任何類型的水溶性聚合物可經由糖基連接物連接至蛋白上的糖基化位點。
改變的糖基化蛋白修飾
本發明的蛋白可被修飾以便具有改變的糖基化型式(B卩，從原始或原生糖基化型式改變)。如在此使用，「改變」是指具有一個或多個碳水化合物部分缺失，和/或具有至少一個糖基化位點添加至原始蛋白。
蛋白的糖基化通常是N-連接亦或O-連接的。N-連接是指碳水化合物部分附接至天冬醯胺殘基的側鏈。其中X為除脯氨酸以外的任何胺基酸的三肽序列，天冬醯胺-X-絲氨酸以及天冬醯胺-X-蘇氨酸，是將碳水化合物部分酶促附接至天冬醯胺側鏈的識別序列。 因此，在多肽中的這些三肽序列中的任何一個的存在產生潛在糖基化位點。O-連接糖基化是指將糖N-乙醯半乳糖胺、半乳糖或木糖中的一個附接至羥基胺基酸，最通常為絲氨酸或蘇氨酸，但是也可使用5-羥基脯氨酸或5-羥基賴氨酸。
添加糖基化位點至本發明的蛋白便利地通過改變蛋白的胺基酸序列以使得它含有一個或多個上述三肽序列來完成(對於N-連接糖基化位點)。改變也可通過原始蛋白的序列中的一個或多個絲氨酸或蘇氨酸殘基的添加或取代來造成(對於O-連接糖基化位點)。 蛋白的胺基酸序列也可通過引入DNA水平上的變化來改變。
增加蛋白上的碳水化合物部分的數量的另一種手段是通過將糖苷以化學或酶法偶聯至蛋白的胺基酸殘基。取決於所使用的偶聯模式，糖可連接至(a)精氨酸和組氨酸， (b)游離羧基，(c)游離巰基，例如半胱氨酸的那些，(d)游離羥基，例如絲氨酸、蘇氨酸或羥基脯氨酸的那些，(e)芳香族殘基，例如苯丙氨酸、酪氨酸或色氨酸的那些，或(f)穀氨醯胺的醯胺基。這些方法描述於W087/05330以及Aplin (艾波林)和Wriston (裡斯頓)，CRC生物化學關鍵評論(CRC Crit. Rev. Biochem. )，22:259-306(1981 年)中。
去除存在於本發明的蛋白上的任何碳水化合物部分可以化學、酶法或通過引入 DNA水平上的變化來完成。化學去糖基化要求將蛋白暴露於三氟甲磺酸，或等效化合物。這種治療導致除連接糖(N-乙醯葡糖胺或N-乙醯半乳糖胺)以外的大多數或所有糖裂解，留下胺基酸序列為完整的。
化學去糖基化由Hakimuddin (哈吉姆丁)等人，生物化學與生物物理學檔案 (Arch. Biochem. Biophys. ), 259 :52 (1987)；以及 Edge (艾什)等人，分析生物化學(Anal. Biochem. ),118:131 (1981年)描述。蛋白上的碳水化合物部分的酶促裂解可使用各種內切和外切糖苷酶如Thotakura (索塔庫拉)等人，酶學方法(Meth. EnzymoL), 138:350(1987 年)中描述來實現。〈
治療方法
如在上文中提到，本發明的C10RF32蛋白和多肽、或其核酸序列或片段，尤其 C10RF32蛋白的胞外域或分泌形式，可以用於治療在此描述的任何免疫相關病症。
因此，根據本發明的一個另外方面，提供了一種治療免疫相關病症的方法。
如在此使用，術語「治療」是指預防、延緩發病、治癒、逆轉、減弱、減輕、最小化、抑制或阻止以上描述疾病、病症或病狀的有害影響。它還包括管理如上所述的疾病。「管理」 是指降低疾病的嚴重度、降低疾病發作頻率、減少這類發作的持續時間、降低這類發作的嚴重度等。
根據本發明，治療可通過特異性地上調本發明的至少一種多肽在受試者體內的量和/或表達來實現。
任選地，上調可通過向受試者給予在此描述的本發明的至少一種多肽(例如，重組或合成的)或其活性部分來實現。然而，因為較大多肽的生物利用率可能由於高降解率以及低滲透率而潛在地相對較小，多肽的給予優選地被限制於小肽片段(例如，約100個胺基酸)。多肽或肽可以任選地作為藥用組合物的一部分來給予，以下更詳細描述。
將理解，根據本發明的至少一些實施方案的以上描述疾病的治療可與在此描述的在本領域中已知的其他治療方法組合(即，組合療法)。
因此，使用根據本發明的至少一些實施方案的藥劑來治療多發性硬化可與例如治療多發性硬化的任何已知治療劑或方法組合。治療多發性硬化的這種已知治療劑或方法的非限制實例包括幹擾素類、 IFN- β -1a ( REBIF 、 AV0NEX 以及 CiNNOVEX )以及 IFN- β -1b (BETASERON 、EXTAV1A 、BETAFERON ，ZIFER0N ); 乙酸格拉替雷(COPAXONE )，一種多肽；那他珠單抗(TYSABRI );以及米託蒽醌(NOVANTRONE )，一種細胞毒性劑，氨吡啶(AMPYRA )。其他藥物包括皮質類固醇、甲氨喋呤、環磷醯胺、硫唑嘌呤，以及靜脈內免疫球蛋白(IVIG)、肌苷、奧瑞珠單抗(Ocrelizumab ;R1594)、米留斯(Mylinax ;Caldribine)、阿來組單抗(alemtuzumab ； Campath)、達利珠單抗(daclizumab ;Zenapax)、PanacIar/ 延胡索酸二甲酯(BG-12)、特立氟胺(Teriflunomide ;HMR1726)、芬戈莫德(fingolimod ;FTY720)、拉喹莫德(Iaquinimod ； ABR216062),以及造血幹細胞移植、Neurovax、利妥昔單抗(Rituximab ;Rituxan)、BCG疫苗、低劑量納曲酮(naltrexone)、驅蟲療法、血管成形術、靜脈支架，以及替代療法，例如維生素D、多不飽和脂肪、醫用大麻。
因此，使用根據本發明的至少一些實施方案的藥劑來治療類風溼性關節炎可與例如治療類風溼性關節炎的任何已知治療劑或方法組合。治療類風溼性關節炎的這類已知治療劑或方法的非限制實例包括糖皮質激素、非類固醇抗炎症藥物(NSAID)例如水楊酸酯，或環氧酶_2抑制劑、布洛芬(ibuprofen)和萘普生(naproxen)、雙氯芬酸 (diclofenac)、口引哚美辛(indomethacin)、依託度酸(etodolac)、疾病改進抗風溼藥物 (DMARD) —口服 DMARD :金諾芬(Auranof in ;Ridaura)、硫唑嘌呤(Azathioprine ；Imuran)> 環孢素(山地明(Sandimmune)、金格福(Gengraf )、內奧拉爾(Neoral),通用名稱)、D-青黴胺(Cuprimine)、輕氯喹(Plaquenil )、IM金硫代蘋果酸金鈉(Myochrysine)、金硫葡糖 (Solganal)、來氟米特(Arava)、甲氨喋呤(Rheumatrex)、二甲胺四環素(Minocycline) (美滿黴素(Minocin))、金黃色葡萄球菌蛋白A免疫吸附(Prosorba管柱)、柳氮磺胺批P定 (Sulfasalazine, Azulfidine)ο 生物DMARD TNF- α 阻斷劑，包括阿達木單抗(Adalimumab ； Humira)、依那西普(Etanercept ;Enbrel )、英利昔單抗(Infliximab ;Remicade)、戈利木單抗(golimumab ;Simponi)、塞妥珠單抗(certolizumab pegol ；Cimzia),以及其他生物 DMARD,例如阿那白滯素(Anakinra ;Kineret)、利妥昔單抗(Rituximab ;Rituxan)、託珠單抗(Tocilizumab ；Actemr. a), CD28 抑制劑，包括阿巴西普(Abatacept ；Orencia)以及貝拉西普(Be Iatacept )。
因此，使用根據本發明的至少一些實施方案的藥劑來治療IBD可以與例如治療 IBD的任何已知治療劑或方法組合。治療IBD的這類已知治療劑或方法的非限制實例包括控制症狀的免疫抑制，例如潑尼松(prednisone)、美沙拉嗪(Mesalazine ;包括安薩科 (Asacol )、頗得斯安(Pentasa)、Lialda> Aspiro)、硫唑嘌呤(Azathioprine, Imuran)、甲氨喋呤或6-巰基嘌呤、類固醇、昂丹司瓊(Ondansetron)、TNF-α阻斷劑(包括英利昔單抗、阿達木單抗、戈利木單抗、塞妥珠單抗)、奧瑞希納(Orencia ;阿巴西普(abatacept))、 烏泰努單抗(ustekinumab ;Ste丨ai』a )、必克努單抗(Briakinumab ;ABT_874)、塞妥珠單抗(Certolizumab pegol, Cimzia )、ITF2357 (吉韋斯他(givinostat))、那他珠單抗 (Natalizumab ;Tysabri )、非拉司特(Firategrast ;SB_683699)、英利昔單抗(Remicade ； infliximab)、維多珠單抗(vedolizumab ；MLN0002)，其他藥物包括 GSK1605786CCX282-B (Traf icet-EN)、AJM300、Stelara (烏泰努單抗)、塞馬莫德(Semapimod ;CNI_1493)、他斯替米(tasocitinib ;CP_690550)、LMW 肝素 MMX、布地縮松(Budesonide) MMX、Simponi (戈 利木單抗)、MultiStem .、加衛苗(Gardasil) HPV疫苗、愛巴蘇(Epaxal Berna ;病毒體A型肝炎疫苗)，手術，例如腸切除、狹部成形術或臨時或持久結腸造口術或迴腸造口術；抗真菌藥物，例如制黴菌素(一種廣譜消化道抗真菌劑)以及伊曲康唑(itraconazole ;斯皮仁諾 (Sporanox))或氟康唑(fluconazole ;大扶康(Diflucan));替代藥物、益生元以及益生菌、 大麻，驅蟲療法或豬鞭蟲卵子。
因此，使用根據本發明的至少一些實施方案的藥劑來治療牛皮癬可以與例如治療牛皮癬的任何已知治療劑或方法組合。治療牛皮癬的這類已知治療劑的非限制實例包括通常用於輕微疾病的外用劑、用於中度疾病的光線療法，以及用於嚴重疾病的全身劑。 外用劑的非限制實例沐浴溶液和保溼劑、礦物油以及凡士林油；含有以下物質的藥膏和乳膏煤焦油、蒽三酹(蒽啉)、皮質類固醇如去輕米松(desoximetasone, Topicort)、倍他米松(Betamethasone)、氟輕鬆乙酸酯(fluocinonide)、維生素D3類似物(例如卡泊三醇 (calcipotriol)),以及維甲酸。光線療法的非限制實例日光；311_313nm的波長、補骨脂素以及紫外線A光線療法(PUVA)。全身劑的非限制實例生物製劑，例如白介素拮抗齊[J, TNF- α阻斷劑,包括抗體,例如英利昔單抗(Remicade)、阿達木單抗(Humira)、戈利木單抗、塞妥珠單抗，以及重組TNF誘餌受體、依那西普(Enbrel);靶向T細胞的藥物，例如伊法利單抗(efalizumab ;Xannelim/Raptiva)、阿法賽特(alefacept ;Ameviv)、樹突狀細胞諸如伊法利單抗；靶向細胞因子的單克隆抗體(MAb)，包括抗-1L-12/IL-23 (烏泰努單抗(商標Stelara))以及抗-白介素_17 ;必克努單抗(ABT-874);小分子，包括但不局限於ISA247 ;免疫抑制劑，例如甲氨喋呤、環孢素；維生素A以及維甲酸(維生素A的合成形式)；以及替代療法，例如改變飲食和生活方式、禁食期、低能量飲食以及素食飲食、補充富含維生素A和維生素D的魚油(例如魚肝油)、富含兩種Ω-3脂肪酸二十碳五烯酸(EPA)和二十二碳六烯酸酸(DHA)的魚油並且含有維生素E的飲食、魚療(Ichthyotherapy)、催眠術療法、大麻。
因此，使用根據本發明的至少一些實施方案的藥劑來治療I型糖尿病可以與例如治療I型糖尿病的任何已知治療劑或方法組合。治療I型糖尿病的這類已知治療劑的非限制實例包括胰島素、胰島素類似物、胰島移植、幹細胞療法，包括PROCHYMAL ， 非胰島素療法，例如IL-1 β抑制劑，包括阿那白滯素(Kineret )、阿巴西普 (Orencia )、戴艾米(Diamyd)、阿法賽特(Ameviv )、奧西珠單抗(Otelixizumab)、 DiaP印277 (Hsp60衍生肽)、α1-抗胰蛋白酶、潑尼松、硫唑嘌呤、環孢素、El-1NT (包含表皮生長因子類似物和胃泌素類似物的可注射胰島再生療法)，他汀類藥物，包括 Z.ocoi· .、Si ml up . Simcard > Simvacor 西他列汀(Sitagliptin ; 二肽基肽酶 (DPP-4)抑制劑)、抗-⑶3mAb (例如替麗珠單抗(Teplizumab)) ;CTLA4_Ig (阿巴西普)、抗 IL-1 β (康納單抗(Canakinumab))、抗-⑶20mAb (例如,利妥昔單抗)。
因此，使用根據本發明的至少一些實施方案的藥劑來治療葡萄膜炎可以與例如治療葡萄膜炎的任何已知治療劑或方法組合。治療葡萄膜炎的這類已知治療劑的非限制實例包括皮質類固醇、外用睫狀肌麻痺劑，例如阿託品(atropine)或後馬託品(homatropine), 或PSTTA注射劑(後眼筋膜囊下乙酸去炎松(posterior subtenon triamcinolone acetate))、抗代謝物藥物,例如甲氨喋呤、TNF- α阻斷劑(包括英利昔單抗、阿達木單抗、依那西普、戈利木單抗、塞妥珠單抗)。
因此，使用根據本發明的至少一些實施方案的藥劑來治療舍格倫氏症候群可以與例如治療舍格倫氏症候群的任何已知治療劑或方法組合。治療 舍格倫氏症候群的這類已知治療劑的非限制實例包括環孢素、匹魯卡品(pilocarpine ；Salagen)以及西維美林 (cevimeline ;Evoxac)、輕氯喹(Plaquenil)、可的松(cortisone ;潑尼松以及其他)和/或硫唑嘌呤(Imuran )或環磷醯胺(Cytoxan )、地塞米松、沙立度胺、去氫表雄酮、NGX267、瑞巴派特(Rebamipide)、FID114657、依那西普(Etanercept)、Raptiva、貝利木單抗、MabThera (利妥昔單抗)；阿那白滯素、靜脈內免疫球蛋白(IVIG)、異體骨髓間充質幹細胞(AlloMSC)、 「Saliwell Crown」的自動神經電刺激。
因此，使用根據本發明的至少一些實施方案的藥劑來治療全身性紅斑狼瘡可以與例如治療全身性紅斑狼瘡的任何已知治療劑或方法組合。治療全身性紅斑狼瘡的這類已知治療劑的非限制實例包括皮質類固醇以及疾病改進抗風溼藥物(DMARD)、通常抗患瘧疾藥物例如普拉奎尼(Plaquenil)以及免疫抑制劑(例如甲氨喋呤和硫唑嘌呤)、羥氯喹、細胞毒性藥物(例如環磷醯胺和黴酚酸酯)、羥氯喹(HCQ)、Benlysta (貝利木單抗)、非類固醇抗炎症藥物、潑尼松、騎悉(Cellcept )、普樂可復(Prograf)、阿塞西普(Atacicept)、Lupuzor、靜脈內免疫球蛋白(IVIG)、CellCept (黴酹酸酯)、奧瑞希納 (Orencia)、CTLA4_IgG4m (RG2077)、利妥昔單抗、奧瑞珠單抗、依帕珠單抗、CNT0136、西法木單抗(Sifalimumab ;MEDI_545)、A-623 (以前 AMG623)、AMG557、羅利珠單抗、帕喹莫德 (paquinimod ;ABR_215757)、LY2127399、CEP-33457、去氫表雄酮、左旋甲狀腺素、阿貝莫司鈉(abetimus sodium ;LJP394)、美金剛、阿片類藥物、雷帕黴素、腎移植、幹細胞移植。
本發明在至少一些實施方案中還涵蓋連同治療免疫系統疾病的其他藥劑一起使用根據至少一些實施方案的本發明的組合物。例如，MS疾病可用本發明的分子結合但是不局限於以下物質來治療免疫抑制劑，例如皮質類固醇、環孢菌素、潑尼松、硫唑嘌呤、甲氨喋呤、TNF- α阻斷劑或拮抗劑，或靶向任何炎症細胞因子的任何其他生物製劑、非類固醇抗炎症藥物/Cox-2抑制劑、輕氯喹、柳氮磺批唳(sulphasalazopryine)、金鹽、依那西普、英利昔單抗、雷帕黴素、黴酚酸酯、硫唑嘌呤、他克莫司、巴利昔單抗、癌得星(Cytoxan)、幹擾素β-la、幹擾素β-lb、乙酸格拉替雷、米託蒽醌鹽酸鹽、阿那白滯素和/或其他生物製劑。 C10RF32多肽、其片段或融合蛋白也可結合一種或多種以下調控免疫應答的藥劑來使用 可溶性gp39 (又稱為⑶40配體(⑶40L)、⑶154、T-BAM、TRAP)、可溶性⑶29、可溶性⑶40、 可溶性CD80 (例如ATCC68627)、可溶性CD86、可溶性CD28 (例如68628)、可溶性CD56、可溶性Thy-1、可溶性CD3、可溶性TCR、可溶性VLA-4、可溶性VCAM-1、可溶性LECAM-1、可溶性 ELAM-1、可溶性 CD44、與 gp39 反應的抗體(例如 ATCC HB-10916、ATCC HB-12055 以及 ATCC HB-12056)、與CD40反應的抗體(例如ATCC HB-9110)、與B7反應的抗體(例如ATCC HB-253、 ATCC CRL-2223、ATCCCRL-2226、ATCC HB-30UATCC HB-11341 等)、與 CD28 反應的抗體(例如 ATCC HB-11944 或 mAb9. 3)、與 LFA-1 反應的抗體(例如 ATCCHB-9579 和 ATCC TIB-213)、與 LFA-2反應的抗體、與IL-2反應的抗體、與IL-12反應的抗體、與IFN- Y反應的抗體、與⑶2 反應的抗體、與⑶48反應的抗體、與任何ICAM反應的抗體(例如ICAM-1 (ATCCCRL-2252)、 ICAM-2以及ICAM-3)、與CTLA4反應的抗體(例如ATCCHB-304)、與Thy-1反應的抗體、與 CD56反應的抗體、與CD3反應的抗體、與CD29反應的抗體、與TCR反應的抗體、與VLA-4反應的抗體、與VCAM-1反應的抗體、與LECAM-1反應的抗體、與ELAM-1反應的抗體、與CD44 反應的抗體。在某些實施方案中，單克隆抗體是優選的。在其他實施方 案中，抗體片段是優選的。如本領域技術人員將容易理解，組合可包括C10RF32多肽、其片段或融合蛋白與一種其他免疫抑制劑、與兩種其他免疫抑制劑、與三種其他免疫抑制劑等。確定優化組合以及劑量可使用本領域中熟知的方法來確定並優化。
C10RF32多肽、其片段或融合蛋白也可結合一種或多種以下藥劑來使用L104EA29YIg, CD80 單克隆抗體(mAb)、CD86mAb、gp39mAb、CD40mAb、CD28mAb ;抗-LFAlmAb、 靶向免疫系統機制例如⑶52 (阿來組單抗)、⑶25 (達利珠單抗)、VLA-4 (那他珠單抗)、 CD20 (利妥昔單抗)、IL2R (達利珠單抗)以及MS4A1 (奧瑞珠單抗)的抗體或其他藥劑；新的口服免疫調節劑已表明可防止淋巴細胞從淋巴器官再循環，例如芬戈莫德(fingolimod; FTY720)或導致淋巴細胞耗盡，例如米留斯(口服克拉屈濱(cladribine))或特立氟胺 (teriflunomide);以及防止免疫活化的藥劑,例如panaclar (延胡索酸二甲酯BG-12)或拉喹莫德(ABR216062)。其他組合將容易由本領域技術人員認識到並且理解。
可溶性C10RF32多肽、其片段或融合蛋白可作為單獨活性成分或連同免疫調節方案中的其他藥物或其他抗炎症劑一起給予例如用於治療或預防同種異體或異種移植急性或慢性排斥反應或炎症性或自身免疫病症，或誘導耐受性。例如，它可與以下物質組合使用鈣調磷酸酶抑制劑，例如環孢菌素A或FK506 ;免疫抑制大環內酯類，例如雷帕黴素或其衍生物；例如40-0-(2-羥基)乙基-雷帕黴素、淋巴細胞歸巢劑，例如FTY720或其類似物、皮質類固醇；環磷醯胺；咪唑硫嘌呤；甲氨喋呤；來氟米特或其類似物；咪唑立賓；麥可酚酸；黴酚酸酯；15-脫氧精胍菌素或其類似物；免疫抑制單克隆抗體，例如白細胞受體的單克隆抗體，例如 MHC、CD2、CD3、CD4、CDlla/CD18、CD7、CD25、CD27、B7、CD40、CD45、CD58、 CD137、I COS, CD150 (SLAM)、0X40、4_1BB或其配體；或其他免疫調節化合物，例如CTLA4/ CD28-1g，或其他粘附分子抑制劑，例如mAb或低分子量抑制劑，包括LFA-1拮抗劑、選擇蛋白拮抗劑以及VLA-4拮抗劑。
當C10RF32多肽、其片段或融合蛋白結合例如在上文中指定的其他免疫抑制/免疫調節或抗炎症療法來給予時，共同給予的免疫抑制劑、免疫調節或抗炎症化合物的劑量當然取決於所使用的共用藥物的類型(例如它是類固醇或是環孢菌素)、所使用的具體藥物、所治療的病狀等等而變化。
治療使用的方法
在此披露的C10RF32多肽，或其片段或融合作為治療劑是有用的。根據至少一些實施方案，免疫細胞，優選地T細胞，可在體內或離體與C10RF32融合多肽接觸以便降低或抑制免疫應答，包括但不局限於炎症。與C10RF32融合多肽接觸的T細胞可以是表達T細胞受體，包括α/β以及Y / δ T細胞受體的任何細胞。T-細胞包括表達⑶3的所有細胞， 包括還表達⑶4和⑶S的T-細胞子集。T-細胞包括初始和記憶細胞以及效應細胞，例如 CTLo T-細胞還包括例如 Thl、Tel、Th2、Tc2、Th3、Thl7、Th22、Treg 以及 Trl 細胞的細胞。 T-細胞還包括NKT-細胞以及T-細胞譜系的相似獨特類別。例如，這些組合物可用於調節 ThU Thl7、Th22或分泌或引起其他細胞分泌炎症分子的其他細胞，這些炎症分子包括但不局限於 IL-1 β、TNF-a、TGF-β、IFN-Y、IL-17、IL-6、IL-23、IL-22、IL-21 以及 MMP。這些組合物也可用於增加或促進Treg的活性、增加Treg的例如IL-10細胞因子的產生、增加 Treg的分化、增加Treg的數量或增加Treg的存活。這些組合物也可用於增加或促進Th2 細胞的活性、增加Th2細胞的例如IL-10或IL-4細胞因子的產生、增加Th2細胞的分化、增加Th2細胞的數量或增加Th2細胞的存活。
在一些實施方案中，所披露的C10RF32多肽，其片段或融合物結合第二治療劑來給予。組合療法可以適用於免疫調節。在一些實施方案中，C10RF32多肽，或片段，或融合物可用於減弱或逆轉促炎症性藥物的活性，和/或限制這類藥物的不良影響。可以用所披露的C10RF32多肽、其片段或融合物來治療的其他免疫細胞包括T細胞前體、抗原呈遞細胞 (例如樹突狀細胞和單核細胞或其前體)、B細胞或其組合。C10RF32組合物可用於調節B細胞的抗體產生，方法是通過使B細胞與有效量的C10RF32組合物接觸以便相對於對照來抑制或減少B細胞的抗體產生。C10RF32組合物也可調節B細胞的細胞因子產生。
治療炎症應答的方法
C10RF32多肽、其片段或融合蛋白抑制T細胞活化，如T細胞增殖以及細胞因子分泌所表明的。確切地，這些蛋白抑制Thl和Thl7應答，同時促進Th2應答。
C10RF32多肽、其片段或融合蛋白潛在地用於治療要求下調共刺激通路和/或因此要求下調Thl和/或Thl7應答的疾病。
另一個實施方案提供治療或減輕炎症的一個或多個症狀的方法。在一個進一步的實施方案中，所披露的這些組合物以及方法可以用於治療慢性並且持續的炎症。炎症一般可以使用所披露的C10RF32多肽或其片段或融合物來治療。
可抑制或降低受試者(優選為人類)的免疫應答(包括炎症)，方法是給予有效量的 C10RF32多肽或其片段或融合物以便抑制或減少免疫細胞的生物活性或減少炎症部位的促炎症分子的量。示例性促炎症分子包括但不局限於IL-1 β、TNF-a、TGF_ β、IFN-Y、IL-17、 IL-6、IL-23、IL-22、IL-21以及MMP。Thl和Thl7是可以被C10RF32多肽、其融合蛋白或片段靶向而抑制以便抑制或減少炎症的示例性T細胞。
不希望受關於此生物機制或在此描述的任何其他生物機制的單一假設限制， C10RF32多肽、其片段或融合蛋白可以用於通過任何或所有以下機制來治療炎症抑制或減少Thl、Thl7、Th22和/或分泌或引起其他細胞分泌炎症分子的其他細胞的分化，這些炎症分子包括但不局限於 IL-1 β、TNF-a , TGF- β、IFN1、IL-17、IL-6、IL-23、IL-22、IL-21 以及MMP ;抑制或減少Thl、Thl7、Th22和/或分泌或引起其他細胞分泌炎症分子的其他細胞的活性，這些炎症分子包括但不局限於IL-1 β、TNF-a、TGF-β、IFN1、IL-17, IL-6, IL-23、IL-22、IL-21以及MMP ;抑制或減少Thl和/或Thl7通路；抑制或減少ThU Thl7、 Th22和/或分泌或引起其他細胞分泌炎症分子的其他細胞的細胞因子產生和/或分泌，這些炎症分子包括但不局限於 IL-1 β、TNF-a、TGF-β、IFN1、IL-17, IL-6IL-23、IL-22, IL-21以及MMP ;抑制或減少Thl、Thl7、Th22和/或分泌或引起其他細胞分泌炎症分子的其他細胞的增殖，這些炎症分子包括但不局限於IL-1 β、TNF-a、TGF-β、IFN- y , IL-17, IL-6、IL-23、IL-22、IL-21 以及 MMP。
額外地，C10RF32多肽、其片段或融合蛋白還可以增強Th2免疫應答。C10RF32多肽、其片段或融合蛋白還可以直接作用於Th2細胞以便促進或增強IL-4、IL-5或IL-10的產生，或增加Th2細胞的數量，從而導致Thl和/或Thl7的抑制，以及經由Thl/Th2轉變的免疫調節。
額外地，C10RF32多肽、其片段或融合蛋白可導致Treg對於免疫應答具有增強的抑制作用。Treg可抑制Thl、Thl7、Th22和/或分泌或引起其他細胞分泌炎症分子的其他細胞的分化、增殖、活性和/或細胞因子產生和/或分泌，這些炎症分子包括但不局限於 IL-1 β、TNF-a ,TGF-β、IFN-Y、IL-17、IL-6、IL-23、IL-22、IL-21 以及 MMP。例如，C10RF32 多肽、其片段或融合蛋白可引起Treg對於Thl和/或Thl7細胞具有增強的抑制作用以便相應地減少所產生的IFN-Y和IL-17水平。C10RF32多肽、其片段或融合蛋白還可直接作用於Treg以便促進或增強IL-10的產生，從而抑制Thl和/或Thl7通路，和/或增加Treg 的數量。
額外 地，C10RF32多肽、其片段或融合蛋白可以引起Th2對於免疫應答具有增強的調節作用。Th2細胞可調節Thl、Thl7、Th22和/或分泌或引起其他細胞分泌炎症分子的其他細胞的分化、增殖、活性和/或細胞因子產生和/或分泌，這些炎症分子包括但不局限於 IL-1 β , TNF- a , TGF- β、IFN1、IL-17、IL-6、IL-23、IL-22、IL-21 以及 MMP。例如， C10RF32多肽、其片段或融合蛋白可引起Th2細胞對於Thl和/或Thl7細胞具有增強的調節作用，以便相應地減少所產生的IFN-Y和IL-17的水平。C10RF32多肽、其片段或融合蛋白還可直接作用於Th2細胞以便促進或增強IL-10的產生，從而抑制Thl和/或Thl7通路，和/或增加Th2細胞的數量。
不希望受單一假設限制，據信C10RF32多肽、其片段或融合蛋白作用於多個T細胞通路中的多個點。例如，C10RF32多肽、其片段或融合蛋白可抑制初始T細胞分化成Thl或 Thl7細胞。可替代地，C10RF32多肽、其片段或融合蛋白可與Thl細胞或Thl7細胞或這兩種細胞相互作用以便抑制或減少促炎症分子的產生。
額外地，C10RF32多肽、其片段或融合蛋白可增加Th2分化和/或促進Th2應答，導致對於Thl和/或Thl7通路的免疫調節作用，從而減少所產生的INF- Y和/或IL-17的水平。C10RF32多肽、其片段或融合蛋白增強IL-10從細胞(例如Th2和/或Treg)產生，這進而抑制Thl和/或Thl7細胞的活性。
額外地，C10RF32多肽、其片段或融合蛋白可以影響Treg，以便對於Thl和/或 Thl7通路具有增強的抑制作用，從而減少所產生的INF-γ和/或IL-17的水平。額外地， C10RF32多肽、其片段或融合蛋白可以增強對Thl和/或Thl7細胞活性進行抑制的IL-10的產生。
抑制Thl應答
a.抑制Thl發育
抑制或減少炎症的一種方法包括給予有效量的C10RF32多肽、其融合蛋白、變體或其片段，以便抑制對其有需要的受試者的Thl發育。可通過給予C10RF32多肽、其融合蛋白、片段或其變體來阻斷初始T細胞分化成Thl細胞，從而抑制或降低炎症。在一個實施方案中，C10RF32多肽或其融合蛋白可抑制或減少Thl細胞的增殖。C10RF32多肽、其片段或融合蛋白也可通過阻斷抗原呈遞細胞成熟來減少初始T細胞分化成Thl細胞。可替代地，C10RF32多肽、其片段或融合蛋白增加Th2細胞分化並且由此減少受試者的Thl細胞數。通過限制可以在受試者體內發育的Thl細胞的數量，可以降低或遏制促炎症分子，例如 INF-γ的量。INF-γ刺激包括IL-Ιβ、TNF-a以及MMP的其他促炎症分子的產生或釋放。 因此，通過控制受試者中的Thl細胞數，可以控制這些其他促炎症分子的水平，由此減少炎症應答。
b.抑制促炎症分子
另一個實施方案提供一種通過向受試者給予有效量的C10RF32多肽、其融合蛋白或其片段，以便抑制或減少Thl細胞的促炎症分子產生，來抑制或減少受試者中的炎症的方法。
Thl細胞產生的示例性促炎症分子包括IFN- Y。在此實施方案中，C10RF32多肽、其融合蛋白或其片段可以直接與Thl細胞相互作用並且抑制或減少Thl細胞的IFN-Y產生。在此實施方案中，調控促炎症分子的量而非Thl細胞的群體。
抑制Th 17應答
a.抑制Th 17發育
還可通過給予有效量的C10RF32多肽、其片段或融合物以便抑制或阻斷初始T細胞發育成Thl7細胞來抑制或減少受試者中的炎症。在一個實施方案中，C10RF32多肽或融合蛋白將Treg對於初始T細胞分化成Thl7細胞的抑制活性增加了足以減少受試者的Thl7 細胞數的量。可替代地，C10RF32多肽或其融合蛋白抑制或減少Thl7細胞的增殖。C10RF32 多肽或其融合蛋白也可以通過阻斷抗原呈遞細胞成熟來減少初始T細胞分化成Thl7細胞。 通過減少受試者的Thl7細胞群，可以減少IL-17，以及IL-22和IL-21的量。IL-17是引起其他促炎症分子，例如IL-1 β、TNF-α以及MMP增加的促炎症細胞因子。因此，通過減少 IL-17的量，可減少這些其他促炎症分子，從而減少或抑制炎症。
b.抑制 IL-17 產生
仍另一個實施方案提供一種通過給予有效量的C10RF32多肽、其融合蛋白或其片段以便抑制Thl7細胞的IL-17以及IL-22和IL-21產生來治療受試者中炎症的方法。在此實施方案中，C10RF32多肽或融合蛋白可以直接作用於Thl7細胞，例如通過結合至Thl7 細胞，導致抑制那些Thl7細胞的IL-17 (或IL-22和IL-21)產生。如以上提及，抑制或減少IL-17 (以及IL-22或IL-21)導致減少其他促炎症分子，由此減少或抑制炎症。
抑制Thl和Th 17應答
所披露的C10RF32多肽、其融合蛋白以及片段可以用於同時抑制Thl和Thl7通路。使用一種抗炎症劑來抑制兩種單獨通路提供了免疫應答的更魯棒抑制或減少。
促進Th2應答和IL-10產生。
還可通過將C10RF32多肽、其融合蛋白或其片段以有效增強Th2應答以及IL-10 產生細胞的抑制活性、並且增強對於Thl和/或Thl7通路的抑制或調節活性的量給予至受試者來治療炎症。在此實施方案中，所披露的C10RF32多肽以及融合蛋白引起對於IFN-Y 和/或IL-17產生的增加的抑制作用。另一個實施方案提供一種通過給予有效量的C10RF32 多肽、其融合蛋白或其片段以便增加Th2、Treg或其他免疫細胞的IL-10產生來治療炎症的方法。
增加的IL-10產生導致Thl7細胞的IL-17產生降低以及Thl細胞的IFN-Y產生降低。在此實施方案中，C10RF32多肽、其融合蛋白以及片段可以直接與免疫細胞相互作用以便增加IL-10產生。
仍另一個實施方案提供一種通過給予有效量的C10RF32多肽、其融合蛋白及其片段以便抑制或幹擾Thl通路和Thl7通路、並且增強Th2細胞對於Thl和/或Thl7通路的抑制作用來治療炎症的方法。
C10RF32多肽、其融合蛋白及其片段還可按有效增加Th2細胞群或數量的量給予至受試者。
可以通過使Th2細 胞、Treg或其他免疫細胞與有效量的C10RF32多肽、C10RF32融合蛋白或其具有C10RF32活性的片段接觸以便相對於對照來增加IL-10產生。該增加可以在體外或在體內發生。
待治療的炎症性疾病
在此描述了可使用C10RF32融合多肽來治療的免疫相關疾病和病症。
C10RF32作為主要調控因子而作用於炎症通路中的多個點以便控制效應細胞因子，例如IFN- Y和TNF- α的表達和/或活性。因此，在此描述的C10RF32組合物在治療對於TNF-α阻斷劑,例如Enbrel、英利昔單抗、賽妥珠單抗以及阿達木單抗不起反應的患者， 或在TNF-α阻斷劑不安全或無效時特別有用。另外，由於其在炎症通路中作為主要調控因子的活性，所披露的C10RF32組合物特別適用於治療慢性並且持續的炎症。在一個進一步的實施方案中，在此描述的C10RF32組合物用於治療復發性和/或緩解性多發性硬化。
抑制表位擴展
表位擴展是指B和T細胞免疫應答在從自身抗原上的單一決定子到許多位點的特異性水平上，並且在V基因使用水平上發生多樣化的能力(Monneaux (曼努斯)，F.等人，關節炎和風溼症(Arthritis Rheumatism), 46 (6) : 1430-1438 (2002 年))。表位擴展不局限於全身性自身免疫疾病。它已經在人類，以及具有各種髓磷脂蛋白的EAE誘導實驗動物中的的T細胞依賴性器官特異性疾病，例如I型糖尿病和多發性硬化中得到描述。
表位擴展涉及相同自身分子中的新的表位連同存在於相同大分子複合物中有關的蛋白中的表位的獲得性識別。表位擴展可通過測量延遲型過敏(DTH)應答來評估，其方法是本領域中已知的。
一個實施方案提供一種通過向受試者給予有效量的C10RF32多肽、其片段或融合蛋白來抑制或減少受試者的表位擴展的方法。在一個進一步的實施方案中，C10RF32多肽、 其片段或融合蛋白抑制患有多發性硬化的個體的表位擴展。優選地，C10RF32多肽或其融合物抑制或阻斷炎症通路的多個點。
仍另一個實施方案提供一種通過向受試者給予有效量的C10RF32多肽、其片段或融合蛋白以便抑制或減少Thl、Thl7、Th22和/或分泌或引起其他細胞分泌炎症分子的其他細胞的分化、增殖、活性和/或細胞因子產生和/或分泌來抑制或減少患有多發性硬化的受試者的表位擴展的方法，這些炎症分子包括但不局限於IL-1 β、TNF-a ,TGF-β、IFN_ Y、 IL-17、IL-6、IL-23、IL-22、IL-21以及MMP。另一個實施方案提供一種通過向受試者給予有效量的C10RF32多肽、其片段或融合蛋白以便與Treg相互作用、增強Treg活性、促進或增強Treg的IL-10分泌、增加Treg數量、增加Treg的抑制能力或其組合來治療多發性硬化的方法。另一個實施方案提供一種通過向受試者給予有效量的C10RF32多肽、其片段或融合蛋白以便與Th2細胞相互作用、增強Th2活性、促進或增強Th2細胞的IL-10分泌、增加Th2細胞數、增加Th2細胞的免疫調節能力或其組合來治療多發性硬化的方法。
誘導免疫耐受性
在一個實施方案中，本發明提供一種通過向受試者給予有效量的C10RF32多肽、 其片段或融合蛋白來誘導或重建受試者的免疫耐受性的方法。 在一個進一步的實施方案中，C10RF32多肽、其片段或融合蛋白誘導患有免疫相關疾病的個體的耐受性。在一個具體實施方案中，C10RF32多肽、其片段或融合蛋白誘導患有多發性硬化的個體的耐受性。優選地，C10RF32多肽或其融合物抑制或阻斷炎症通路的多個點。在另一個具體實施方案中， C10RF32多肽、其片段或融合蛋白誘導患有類風溼性關節炎的個體的耐受性。另一個實施方案提供一種通過向受試者給予有效量的C10RF32多肽、其片段或融合蛋白以便與Treg相互作用、增強Treg活性、增加Treg數量、增加Treg的抑制能力或其組合來誘導免疫耐受性而治療免疫相關疾病的方法。另一個實施方案提供一種通過向受試者給予有效量的C10RF32 多肽、其片段或融合蛋白以便促進或增強免疫細胞的IL-10分泌來治療免疫相關疾病的方法。
組合療法
C10RF32融合多肽可單獨或與另外治療劑組合來使用。該另外治療劑包括但不局限於免疫抑制劑(例如針對其他淋巴細胞表面標記(例如CD40、α -4整聯蛋白)或針對細胞因子的抗體)，其他融合蛋白(例如CTLA-4-lg ( Orencia )、TNFR-1g ( Enbrel ))， TNF-α阻斷劑，例如Enbrel、英利昔單抗、賽妥珠單抗以及阿達木單抗，環磷醯胺(CTX)(即 Encloxan 、Cytoxan 、Neosai' 、Proc>4ox 、Rev immune ),甲氨喋呤(MTX)(即Rheumatrex 、Trexall )，貝利木單抗(即Benlysta )，或其他免疫抑制藥物(例如環孢菌素A、FK506樣化合物、雷帕黴素化合物或類固醇)，抗增殖劑，細胞毒性劑，或可以有助於免疫抑制的其他化合物。
在一個進一步的實施方案中，該額外治療劑起作用以便通過單獨通路來抑制或減少T細胞活化。在一種這樣的實施方案中，該額外治療劑為CTLA-4融合蛋白，例如 CTLA-4-1g (阿巴西普)。CTLA-4-1g融合蛋白與T細胞上的共刺激受體⑶28競爭以便結合至抗原呈遞細胞上的⑶80/⑶86(Β7-1/Β7-2)，並且因此起作用來抑制T細胞活化。在另一個實施方案中，該另外治療劑是被稱為貝拉西普的CTLA-4-1g融合蛋白。貝拉西普含有在體內顯著地增加其對於⑶86的親合力的兩個胺基酸取代(L104E和A29Y)。在另一個實施方案中，該額外治療劑是Maxy-4 (馬克西_4)。
在另一個實施方案中，第二治療劑為環磷醯胺(CTX)。環磷醯胺 (Cyclophosphamide) ( Endoxan ，Cytoxan 、Neosai·1 、Procytox 、Rev immune 的通用名稱)，又稱為環磷醯胺(cytophosphane),是來自卩惡唑弗林(oxazophorine)組的氮芥烷基化劑。它用於治療不同類型的癌症以及一些自身免疫病症。在一個進一步的實施方案中，C10RF32多肽、其片段或融合蛋白與CTX以預防或治療慢性自身免疫疾病或病症， 例如全身性紅斑狼瘡(SLE)的有效量共同給予。環磷醯胺(CTX)是用於患有腎狼瘡的患者的瀰漫增生性腎小球腎炎的主要藥物。在一些實施方案中，組合療法以減少抗-雙鏈 DNA(抗-ds DNA)自身抗體的血液或血清水平和/或減少對其有需要的患者的蛋白尿的有效量來給予。
在另一個實施方案中，第二治療劑增加血清中的腺苷量，參見例如W008/147482。 在一個進一步的實施方案中，第二治療劑為增加⑶73表達的⑶73-1g、重組⑶73或另一種藥劑(例如細胞因子或單克隆抗體或小分子)，參見例如W004/084933。在另一個實施方案中，第二治療劑為幹擾素_β。在另一個實施方案中，第二治療劑為那他珠單抗或用於MS 的另一種治療劑。在一個進一步的實施方案中，C10RF32多肽、其片段或融合蛋白與那他珠單抗循環使用或在藥物假期期間使用，以便允許第二治療劑給藥的頻率更低並且減少副作用，例如PML的風險並防止對於第二治療劑的抗性。
在另一個實施方案中，第二治療劑優先治療慢性炎症，由此治療方案靶向急性和慢性炎症。在一個進一步的實施方案中，第二治療劑是TNF-α阻斷劑。
在另一個實施方案 中，第二治療劑是抑制或減少Thl、Thl7、Th22和/或分泌或引起其他細胞分泌炎症分子的其他細胞的分化、增殖、活性和/或細胞因子產生和/或分泌的小分子，這些炎症分子包括但不局限於IL-1 β、TNF-α、TGF-β、IFN-Y、IL-17、IL-6, IL-23、IL-22、IL-21以及MMP。在另一個實施方案中，第二治療劑是與Treg相互作用、增強Treg活性、促進或增強Treg的IL-10分泌、增加Treg數量、增加Treg的抑制能力或其組合的小分子。
典型地有用的小分子是有機分子，優選地是具有大於100並且小於約2，500道爾頓，更優選地在100與2000之間，更優選地在約100與約1250之間，更優選地在約100與約 1000之間，更優選地在約100並約750之間，更優選地在約200與約500道爾頓之間的分子量的小有機化合物。小分子包括與蛋白結構性相互作用所必需的官能團，特別是氫鍵合，並且典型地至少一個胺、羰基、羥基或羧基，優選地包括這些官能化學基團的至少兩種。小分子經常包括用一個或多個以上官能團取代的環狀碳或雜環結構和/或芳族或多芳環結構。 小分子還包括生物分子，包括肽類、糖類、脂肪酸類、類固醇類、嘌呤類、嘧啶類、衍生物類、 結構類似物或其組合。在一個實施方案中，小分子是視黃酸或其衍生物。以下實例證明視黃酸抑制或減少ThI7細胞的分化和/或活性。在一個進一步的實施方案中，這些組合物與增加Treg活性或產生的化合物組合或順次使用。示例性Treg增強劑包括但不局限於糖皮質激素氟替卡松(glucocorticoid fluticasone)、沙美特羅(salmeterol)、IL-12、IFN- Y 以及IL-4的抗體；維生素D3，以及地塞米松及其組合。其他促炎症分子的抗體也可與所披露的C10RF32多肽、其融合蛋白或片段組合或交替使用。優選的抗體結合至IL-6、IL-23、 IL-22 或 IL-21。
如在此使用，術語「雷帕黴素化合物」包括中性三環化合物雷帕黴素、雷帕黴素衍生物、雷帕黴素類似物，以及被認為具有與雷帕黴素相同的作用機制(例如，抑制細胞因子功能)的其他大環內酯類化合物。措辭「雷帕黴素化合物」包括具有與雷帕黴素結構相似性的化合物，例如具有被修飾以便增強其療效的相似大環結構的化合物。示例性雷帕黴素化合物是本領域中已知的。措辭「FK506樣化合物」包括FK506，以及FK506衍生物和類似物， 例如具有與FK506結構相似性的化合物，例如具有被修飾以便增強其療效的相似大環結構的化合物。FK506樣化合物的實例包括例如W000101385中描述的那些化合物。優選地，如在此使用的措辭「雷帕黴素化合物」不包括FK506樣化合物。
其他適合的治療劑包括但不局限於抗炎症劑。抗炎症劑可為非類固醇、類固醇或其組合。一個實施方案提供含有約1% (w/w)至約5% (w/w)、通常約2.5% (w/w)抗炎症劑的口服組合物。非類固醇抗炎症劑的代表性實例包括但不局限於昔康類藥物 (oxicams),例如卩比羅昔康(piroxicam)、伊索昔康(isoxicam)、替諾昔康(tenoxicam)、舒多昔康(sudoxicam);水楊酸酯類，例如阿斯匹林、雙水楊酸酯製劑(disalcid)、貝諾酯 (^611(^713七6)、三水楊酸膽鹼鎂(11'；[1丨83七6)、沙發樸林(83€3。1711)、索樸林(80]^1'；[11)、雙氟尼酸(difIunisal)以及芬多沙(fendosal)；乙酸衍生物,例如雙氯芬酸(diclofenac)、 芬氯酸(fenclofenac)、卩引哚美辛(indomethacin)、舒林酸(sulindac)、託美汀 (10111161；[11)、伊索克酸(丨8( 6。30)、呋羅芬酸(；1!\11'(^61^0)、硫平酸(1；[(^；[1^0)、齊多美辛 (zidometacin)、阿西美辛(acemetacin)、芬替酸(fentiazac)、佐美酸(zomepirac)、克侖達那(clm danac)、奧昔平酸(oxepinac)、吩布默克(felbmac)以及酮咯酸(ketorolac)； 芬那酯衍生物類(fenamates),例如甲滅酸(mefenamic)、甲氯芬那酸(meclofenamic)、氟滅酸(flufenamic)、尼氟滅(niflumic)以及託芬那酸酸(tolfenamic acid);丙酸衍生物，例如布洛芬(ibuprofen)、萘普生(naproxen)、苯惡洛芬(benoxaprofen)、氟比洛芬 (flurbiprofen)、酮洛芬(ketoprofen)、非諾洛芬(fenoprofen)、芬布芬(fenbufen)、口引哚洛芬(indoprofen)、卩比洛芬(pirprofen)、卡洛芬(carprofen)、奧沙普秦(oxaprozin)、 普拉洛芬(pranoprofen)、咪洛芬(miroprofen)、硫惡洛芬(tioxaprofen)、舒洛芬 (suprofen)、阿明洛芬(alminoprofen)以及噻洛芬酸(tiaprofenic);卩比唑，例如苯基丁氮酮(phenylbutazone)、輕保松(oxyphenbutazone)、非潑拉酮(feprazone)、阿扎丙酮 (azapropazone),以及三甲保泰松(trimethazone)。也可以釆用這些非類固醇抗炎症劑的混合物。
類固醇抗炎症藥物的代表性實例包括但不局限於皮質類固醇類，例如氫可的松(hydrocortisone)、輕基-曲安西龍(hydroxyl-triamcinolone)、α -甲基地塞米松(alpha-methyldexamethasone)、地塞米松憐酸酯(dexamethasone-phosphate)、 二丙酸倍氯米松(beclomethasone dipropionate)、氯倍他索戊酸酯(clobetasol valerate)、輕潑尼縮松(desonide)、去氧米松(desoxymethasone)、乙酸去氧皮質酮 (desoxycorticosterone acetate)、地塞米松、雙氯松(dichlorisone)、雙氟拉松雙乙酸 Ih (diflorasone diacetate)、雙氟米松戊酸酯(diflucortolone valerate)、 氟氫縮松(fluadrenolone)、氟氯縮松(fluclorolone acetonide)、氟氫可的松(fludrocortisone)、氟米松特戊酸酯(flumethasone pivalate)、游離氟輕鬆 (fIuosinolone &06如111(16)、氟輕鬆乙酸酯([1110(3；!_110111(16)、氟氯可汀丁基酯(fIucortine butylesters)、氟可龍(fluocortolone)、氟潑尼定(fIuprednidene ；fIuprednyIidene) 乙酸酯、氟雄諾龍(flurandrenolone)、哈西縮松(halcinonide)、乙酸氫化可的松 (hydrocortisone acetate)、氫可的松丁酸酯(hydrocortisone butyrate)、甲基潑尼松龍(methy lpredni so lone)、曲安奈德(triamcinolone acetonide)、可的松(cortisone)、 可託多松(cortodoxone)、膚輕鬆(flucetonide)、氟氫可的松(fludrocortisone)、二氟若松雙乙酸酯(difluorosone diacetate)、氟若卓龍(fluradrenolone)、氟氫可的松(fludrocortisone)、二氟樂松雙乙酸酯(diflurosone diacetate)、氟若卓龍安奈德 (fluradrenolone acetonide)、甲輕鬆(medrysone)、安西那飛(amcinafel)、安西非特 (amcinafide)、倍他米松(betamethasone)以及其平衡酯、氯潑尼松(chloroprednisone)、 克洛潑尼龍乙酸酯(chlorprednisone acetate)、可洛替龍(clocortelone)、可洛西龍(clescinolone)、雙氯松(dichlorisone)、二氟潑耐酯(diflurprednate)、氟氯奈德(flucloronide)、氟尼縮松(flunisolide)、氟米 % (f Iuoromethalone)Λ 氟培龍(fluperolone)、氟潑尼龍(fluprednisolone)、氫可的松戊酸酉旨(hydrocortisone valerate)、氫可的松環戊丙酸酯(hydrocortisone cyclopentylpropionate)、氫可松氨酯(hydrocortamate)、甲潑尼松(meprednisone)、帕拉米松(paramethasone)、波尼松龍(prednisolones)、潑尼松(prednisone)、二丙酸倍氯米松(beclomethasone dipropionate)、曲安西 龍(triamcinolone)及其混合物。
藥用組合物
本發明在一些實施方案中的特徵在於一種包含治療有效量的根據本發明的治療劑的藥用組合物。根據本發明，該治療劑可為可溶性C10RF32蛋白、C10RF32胞外域、或其片段或變體、或融合蛋白或對應核酸編碼序列中的任何一個。根據本發明的藥用組合物進一步用於治療自身免疫性並且優選地用於治療在此描述的免疫相關病症。本發明的治療劑可以單獨，或作為它們與藥學上可接受的載體混合於其中的藥用組合物的一部分來提供給受試者。
如在此使用，「藥學上可接受的載體」包括生理相容的任何以及所有溶劑、分散介質、塗層、抗細菌和抗真菌劑、等滲和吸收延緩劑等。優選地，載體適合於靜脈內、肌肉內、 皮下、腸胃外、脊柱或表皮給予(例如通過注射或輸注)。取決於給予途徑，根據本發明的至少一些實施方案的活性化合物，即可溶性C10RF32蛋白、C10RF32胞外域、或其片段或變體、 或融合蛋白、或對應的編碼藥用化合物的核酸序列，可以包括一種或多種藥學上可接受的鹽。「藥學上可接受的鹽」是指保留母體化合物的所希望生物活性並且不賦予任何不希望有的毒性效應的鹽(參見例如Berge (貝爾熱)，S.M.等人(1977年)藥理學雜誌(J. Pharm. Sc1. ) 66:1-19)。這類鹽的實例包括酸加成鹽以及鹼加成鹽。酸加成鹽包括來源於無毒無機酸的那些鹽，這些無機酸例如鹽酸、硝酸、磷酸、硫酸、氫溴酸、氫碘酸、磷酸等等，以及來源於無毒有機酸的鹽，這些有機酸例如脂族單羧酸和二羧酸、苯基取代鏈烷酸、羥基鏈烷酸、芳族酸類、脂族以及芳族磺酸等等。鹼加成鹽包括來源於鹼土金屬的那些鹽，這些鹼土金屬例如鈉、鉀、鎂、鈣等等，以及來源於無毒有機胺的鹽，這些有機胺例如N，N』-二苄基乙二胺、N-甲基葡萄糖胺、氯普魯卡因(chloroprocaine)、膽鹼、二乙醇胺、乙二胺、普魯卡因(procaine)等等。
根據本發明的至少一些實施方案的藥用組合物還可以包括藥學上可接受的抗氧化劑。藥學上可接受的抗氧化劑的實例包括(I)水溶性抗氧化劑，例如抗壞血酸、半胱胺酸鹽酸鹽、硫酸氫鈉、焦亞硫酸鈉、亞硫酸鈉等等；(2)油溶性抗氧化劑，例如抗壞血酸棕櫚酸酯、丁羥茴醚(BHA)、丁羥甲苯(BHT)、卵磷脂、沒食子酸丙酯、α-生育酚等等；以及(3) 金屬螯合劑，例如檸檬酸、乙二胺四乙酸(EDTA)、山梨糖醇、酒石酸、磷酸、以及類似物。根據本發明的至少一些實施方案的藥用組合物還可包含添加劑，例如清潔劑和增溶劑(例如， TWEEN20 (聚山梨醇酯-20)，TWEEN80 (聚山梨醇酯-80))以及防腐劑(例如硫柳汞、苯甲醇) 以及增量物質(例如乳糖、甘露糖醇)。
可用於根據本發明的至少一些實施方案的藥用組合物中的適合的水性和非水性載體的實例包括水、不同緩衝內容物(例如Tris-HCl、乙酸鹽、磷酸鹽)、pH以及離子強度的緩衝鹽水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇、聚乙二醇等等)、以及其適合的混合物、植物油， 例如橄欖油，以及可注射有機酯，例如油酸乙酯。
適當流動性可例如通過使用塗層材料，例如卵磷脂，在分散液的情況下通過維持所要求粒徑，以及通過使用表面活性劑來維持。
這些組合物還可含有佐劑，例如防腐劑、潤溼劑、乳化劑以及分散劑。預防存在微生物可通過上述滅菌程序，以及通過包含不同抗細菌和抗真菌劑，例如對羥苯甲酸酯 (paraben)、氯代丁醇、苯酚山梨酸、以及類似物來確保。可能還希望將等滲劑，例如糖、氯化鈉、以及類似物包括於組合物中。另外，可通過包含延遲吸收的試劑，例如單硬脂酸鋁以及明膠來實現可注射藥物形式的延 長的吸收。
藥學上可接受的載體包括無菌水溶液或分散液以及用於臨時製備無菌可注射溶液或分散液的無菌粉末。這些介質和試劑對於藥學活性物質的使用在本領域中是已知的。除非任何常規介質或試劑與活性化合物不相容，否則考慮其在根據本發明的至少一些實施方案的藥用組合物中的用途。輔助活性化合物也可以併入組合物中。
治療組合物典型地必須在製造以及儲存條件下是無菌並且穩定的。組合物可配製為溶液、微乳液、脂質體，或適合於高藥物濃度的其他有序結構。載體可以為含有例如水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇，以及液體聚乙二醇等等)以及其合適混合物的溶劑或分散介質。適當流動性可例如通過使用塗層，例如卵磷脂，在分散液的情況下通過維持所希望粒徑，以及通過使用表面活性劑來維持。在許多情況下，可取的是將等滲劑，例如糖、多元醇 (例如甘露糖醇、山梨糖醇)或氯化鈉包括在組合物中。可通過在組合物中包括例如單硬脂酸鹽以及明膠的延遲吸收的試劑來實現可注射組合物的延長的吸收。無菌可注射溶液可通過將所需量的活性化合物根據需要與以上列舉的成分中的一個或其組合一起併入適當溶劑中，隨後滅菌微濾來製備。總體上,分散液通過將活性化合物併入無菌媒介物中來製備, 該無菌媒介物含有一種基礎分散介質以及來自以上列舉的那些成分的所需其他成分。在製備無菌可注射溶液的無菌粉末的情況下，優選製備方法是真空乾燥以及冷凍乾燥(凍幹)， 這從先前無菌過濾的溶液產生活性成分加上任何另外所需成分的粉末。
無菌可注射溶液可通過將所需量的活性化合物根據需要與以上列舉的成分中的一個或其組合一起併入適當溶劑中，隨後滅菌微濾來製備。總體上，分散液通過將活性化合物併入無菌媒介物中來製備，該無菌媒介物含有一種基礎分散介質以及來自以上列舉的那些成分的所需其他成分。在製備無菌可注射溶液的無菌粉末的情況下，優選製備方法是真空乾燥以及冷凍乾燥(凍幹)，這從先前無菌過濾的溶液產生活性成分加上任何另外所需成分的粉末。
可與載體材料組合以產生單一劑型的活性成分的量取決於所治療的受試者以及具體給予模式而變化。可與載體材料組合以便產生單一劑型的活性成分的量總體上是產生治療效果的組合物的量。總體上，在一百個百分數中，此量在從約0.01百分數至約九十九百分數的活性成分的範圍內，優選地從約O.1百分數至約70百分數，最優選地從約 I百分數至約30百分數的活性成分以及藥學上可接受的載體。
將劑量方案加以調整以便提供最佳所希望應答(例如治療應答)。例如，可以給予單次丸劑，可隨著時間的推移來給予多個分次劑量或劑量可按治療情況的緊急狀態指示來按比例減少或增加。尤其有利的是將腸胃外組合物配製成劑量單位形式以實現方便給予以及劑量均勻性。如在此使用的劑量單位形式是指適合作為用於待治療的受試者的單一劑量的物理上離散單位；每個單位含有預定數量的經過計算結合所需藥用載體可產生所希望治療效果的活性化合物。根據本發明的至少一些實施方案的劑量單位形式的規格由以下因素支配以及直接取決於以下因素(a)活性化合物的獨特特徵以及待達到的特定治療效果， 以及(b)調配這種活性化合物以便治療個體的感受性的領域中固有的限制。
本發明的組合物可經由一種或多種給予途徑、使用在本領域中已知的各種方法中的一種或多種來給予。如本領域技術人員將認識到，給予途徑和/或模式取決於所希望結果而變化。根據本發明的至少一些實施方案的治療劑的優選給予途徑包括血管內遞送(例如注射或輸注)、靜脈內、肌肉內、真皮內、腹膜內、皮下、脊柱、口服、腸內、直腸、肺部(例如吸入)、鼻腔、外用(包括經皮膚、口 腔以及舌下)、膀胱內、玻璃體內、腹膜內、陰道、大腦遞送 (例如腦室內、大腦內以及對流增強擴散)、CNS遞送(例如鞘內、髓周以及脊柱內)或腸胃外(包括皮下、肌肉內、腹膜內、靜脈內(I V )以及真皮內)、經皮膚(被動地或使用離子電滲或電穿孔)、經黏膜(例如舌下給予、鼻腔、陰道、直腸或舌下)給予或經由植入物給予，或其他腸胃外給予途徑，例如通過注射或輸注，或在本領域中已知的其他遞送途徑和/或給予形式。 如在此使用的短語「腸胃外給予」是指除腸內以及局部給予以外的通常通過注射實現的給予模式，並且包括(不局限於)靜脈內、肌肉內、動脈內、鞘內、囊內、眶內、心臟內、真皮內、腹膜內、經氣管、皮下、表皮下、關節內、包膜下、蛛網膜下、脊柱內、硬膜上以及胸骨內注射和輸注或使用可生物蝕解的插入物，並且可配製成適合於每一種給予途徑的劑型。在一個具體實施方案中，根據本發明的至少一些實施方案的蛋白、治療劑或藥用組合物可腹膜內或靜脈內給予。
本發明的組合物在以具有小於約5微米的氣體動力學直徑的氣溶膠亦或噴霧乾燥顆粒形式遞送時，可以在吸入時被遞送至肺並且橫穿肺上皮襯裡到達血流。可使用被設計成經肺部遞送治療產品的廣泛範圍的機械裝置，包括但不局限於霧化器、計量劑量吸入器以及粉末吸入器，這些全部是本領域技術人員所熟悉的。可購得裝置的一些具體實例是Ultravent霧化器(馬林克羅製藥公司(Mallinckrodt Inc.),密蘇裡州聖路易斯(St. Louis, Mo. )) ;Acorn II 霧化器(Marquest Medical Products,科羅拉多州恩格爾伍德 (Englewood, Colo. )) ；Ventolin計量劑量吸入器(Glaxo Inc.,北卡羅來納州研究三角園 (Research Triangle Park, N. C.));以及 Spinhaler 粉末吸入器(Fisons Corp.公司，麻薩諸塞州貝德福德(Bedford, Mass. ))。Nektar、Alkermes以及Mannkind都具有經過批准或處於臨床試驗中的可吸入胰島素粉末製劑，其中這種技術可應用於在此描述的配製品。
在一些體內方法中，在此披露的組合物以治療有效量給予至受試者。如在此使用， 術語「有效量」或「治療有效量」是指足以治療、抑制或減輕所治療的病症的一個或多個症狀或以其他方式提供所希望藥理和/或生理效應的劑量。確切劑量將根據各種因素，例如受試者依賴變量(例如年齡、免疫系統健康狀況、等)、疾病以及所實現的治療而變化。對於在此披露的多肽組合物以及編碼它們的核酸，在進行進一步研究時，關於治療不同患者的不同病狀的適當劑量水平的信息將出現，並且本領域普通技術人員，考慮到接受者的治療情況、年齡以及一般健康狀況，將能夠確定適當劑量。選擇的劑量取決於所希望的治療效果、 給予途徑以及所希望治療的持續時間。對於多肽組合物，通常將每天O. 0001至100mg/kg體重的劑量水平給予至哺乳動物並且更通常為0. 001至20mg/kg。例如，劑量可為0. 3mg/kg 體重、lmg/kg體重、3mg/kg體重、5mg/kg體重或10mg/kg體重或在Ι-lOmg/kg範圍內。示例性治療方案必須每周給予一次、每兩周一次、每三周一次、每四周一次、每月一次、每3個月一次或每3至6個月一次。通常，對於靜脈內注射或輸注，劑量可以更低。劑量方案經過調整以便提供最佳所希望應答(例如治療應答)。例如，可給予單次丸劑，可隨著時間的推移來給予若干分次劑量或劑量可按治療情況的緊急狀態指示來按比例減少或增加。尤其有利的是將腸胃外組合物配製成劑量單位形式，以實現方便給予以及劑量均勻性。如在此使用的劑量單位形式是指適合作為用於待治療的受試者的單一劑量的物理上離散單位；每個單位含有預定數量的經過計算結合所需藥用載體以產生所希望治療效果的活性化合物。根據本發明的至少一些實施方案的劑量單位形式的規格由以下因素支配以及直接取決於以下因素(a)活性化合 物的獨特特徵以及待達到的特定治療效果，以及(b)調配這種活性化合物以便治療個體的感受性的領域中固有的限制。
任選地，根據任何適合的定時方案，多肽製劑可以O. 0001至100mg/kg患者體重/ 天之間的量給予，優選為O. 001至20. Omg/kg/天之間。根據本發明的至少一些實施方案的治療組合物可例如每天三次、每天兩次、每天一次、每周三次、每周兩次或每周一次、每兩周或3、4、5、6、7或8周一次來給予。此外，組合物可給予短或長時期(例如I周、I月、I年、5 年)。
可替代地，治療劑可以持續釋放配製品形式給予，在此情況下所要求的給予頻率更小。劑量和頻率取決於治療劑在患者體內的半衰期而變化。總體上，人類抗體展示最長半衰期，隨後為人源化抗體、嵌合抗體以及非人類抗體。融合蛋白的半衰期可廣泛地變化。給予劑量和頻率可取決於治療是預防性或是治療性而變化。在預防性應用中，相對較低劑量以相對稀少的間隔在長時期內給予。一些患者在其餘生繼續接受治療。在治療性應用中， 有時要求相對較短間隔下的相對較高劑量直到疾病進展減少或終止為止，並且優選地直到患者展示疾病症狀的部分或完全改進為止。此後，可向患者給予預防方案。
本發明的藥用組合物中的活性成分的實際劑量水平可改變以便獲得對於具體患者、組合物以及給予模式可有效實現所希望治療應答，而對患者無毒的活性成分的量。選擇的劑量水平取決於各種藥代動力學因素，包括所使用的本發明的具體組合物的活性、給予途徑、給予時間、所使用的具體化合物的排洩速率、治療持續時間、與所使用的具體組合物組合使用的其他藥物、化合物和/或材料、所治療的患者的年齡、性別、體重、病狀、一般健康狀況以及以前病史，以及醫學領域熟知的類似因素。
「治療有效劑量」的C10RF32可溶性蛋白或C10RF32胞外域或含有它們的C10RF32 融合蛋白優選地引起疾病症狀的嚴重度降低、無病症期的頻率以及持續時間增加、壽命增加、疾病緩解，或預防或減少歸因於疾病折磨的損害或傷殘。
本領域普通技術人員將能夠基於諸如受試者體型、受試者症狀的嚴重度以及所選擇的具體組合物或給予途徑的因素來確定治療有效量。
在某些實施方案中，多肽組合物例如通過直接注射至待治療的部位來局部給予。 典型地，該注射引起多肽組合物的局部濃度增加，它大於可通過全身給予而獲得的濃度。例如，在如多發性硬化的神經病症的情況下，蛋白可局部給予至CNS附近的部位。在另一個實例中，如在如類風溼性關節炎的關節病症的情況下，蛋白可局部給予至患病關節中的滑膜。 多肽組合物可與如上所述的基質組合以便通過減少多肽從待治療的部位中被動擴散出來而幫助建立多肽組合物的增加的局部濃度。
本發明的藥用組合物可用在本領域中已知的醫學裝置來給予。例如，在一個任選的實施方案中，根據本發明的至少一些實施方案的藥用組合物可用針皮下注射裝置來給予，例如美國專利號 5，399，163 ;5，383,851 ;5，312，335 ;5，064，413 ;4，941,880 ； 4，790，824 ;或4，596，556中披露的裝置。適用於本發明的熟知植入物以及模塊的實例包括美國專利號4，487，603，它披露用於以受控速率分配藥物的可植入微輸注泵；美國專利號4，486，194，它披露經由皮膚給予藥物的治療裝 置；美國專利號4，447，233，它披露以精確輸注速率遞送藥物的藥物輸注泵；美國專利號4，447，224，它披露用於連續藥物遞送的變速流可植入輸注設備；美國專利號4，439，196，它披露具有多腔室隔室的滲透藥物遞送系統；以及美國專利號4，475，196，它披露滲透藥物遞送系統。這些專利通過引用結合在此。許多其他這類植入物、遞送系統以及模塊是本領域技術人員已知的。
活性化合物可用保護化合物以便避免快速釋放的載體來製備，例如受控釋放製劑，包括植入物、經皮貼片以及微囊化遞送系統。可以使用可生物降解的、生物相容的聚合物，例如乙烯-乙酸乙烯酯、聚酐、聚乙醇酸、膠原、聚原酸酯以及聚乳酸。製備這類製劑的許多方法是授予專利的或通常是本領域技術人員已知的。參見例如持續以及受控釋放藥物遞送系統(Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems), J. R. Robinson (羅賓遜)編著，Marcel Dekker, Inc.公司，紐約市(New York)，1978。
治療組合物可用在本領域中已知的醫學裝置來給予。例如，在一個任選的實施方案中，根據本發明的至少一些實施方案的治療組合物可用針皮下注射裝置來給予，例如美國專利號 5，399，163 ;5，383，851 ;5，312，335 ;5，064，413 ;4，941，880 ;4，790，824 ；或 4，596，556中披露的裝置。適用於本發明的熟知植入物以及模塊的實例包括美國專利號 4，487，603，它披露用於以受控速率分配藥物的可植入微輸注泵；美國專利號4，486，194， 它披露經由皮膚給予藥物的治療裝置；美國專利號4，447，233，它披露以精確輸注速率遞送藥物的藥物輸注泵；美國專利號4，447，224，它披露用於連續藥物遞送的變速流可植入輸注設備；美國專利號4，439，196，它披露具有多腔室隔室的滲透藥物遞送系統；以及美國專利號4，475，196，它披露滲透藥物遞送系統。這些專利通過引用結合在此。許多其他這類植入物、遞送系統以及模塊是本領域技術人員已知的。
在某些實施方案中，根據本發明的至少一些實施方案的C10RF32可溶性蛋白、 C10RF32胞外區、C10RF32融合蛋白、其他蛋白或其他治療劑可經過配製以便確保在體內的適當分布。例如，血腦屏障(BBB)排除許多高度親水性化合物。為了確保根據本發明的至少一些實施方案的治療化合物穿過BBB (如果希望)，它們可例如在脂質體中進行配製。製造脂質體的方法參見例如美國專利號4，522，811 ;5，374，548;以及5，399，331。脂質體可以包括被選擇性運輸至特定細胞或器官中，由此增強靶向藥物遞送的一個或多個部分(參見例如 V. V. Ranade (蘭納德)(1989)臨床藥理學雜誌(J. Clin. Pharmacol. ) 29:685)。示例性靶向部分包括葉酸或生物素(參見例如Low (勞)等的美國專利號5，416，016);甘露糖苷(Umezawa (梅澤)等人，(1988)生物化學和生物物理研究通訊(Biochem. Biophys. Res. Commun. )153:1038);抗體(P. G. Bloeman (布羅曼)等人(1995)歐洲生物化學學會聯盟快訊 (FEBS Lett. )357:140 ；M. Owais (歐維斯)等人(1995)抗微生物製劑和化療(Antimicrob. Agents Chemother. ) 39:180);表面活性劑蛋白A受體(Briscoe (布裡斯科)等人(1995) 美國生理學雜誌(Am. J Physiol. ) 1233:134)；pl20 (Schreier (施雷爾)等人(1994)生物化學雜誌(J. Biol. Chem. ) 269:9090);也參見 K. Keinanen (凱納門);M. L. Laukkanen (勞卡南)(1994)歐洲生物化學學會聯盟快訊(FEBS Lett. ) 123 ；J. J. Killion (基萊恩);1. J. Fidler (菲德勒)(1994)免疫方法(Immunomethods) 4:273。
腸胃外給予的配製品
在一個進一步的實施方案中，在此披露的組合物，包括含有肽和多肽的那些，以水溶液形式通過腸胃外注射來給予。這種製劑也可呈懸浮液 或乳液形式。通常，所提供的藥用組合物包含有效量的肽或多肽，並且任選地包括藥學上可接受的稀釋劑、防腐劑、增溶劑、乳化劑、佐劑和/或載體。這類組合物任選地包括以下物質中的一種或多種稀釋劑、無菌水、不同緩衝內容物(例如Tris-HCl、乙酸鹽、磷酸鹽)、pH以及離子強度的緩衝鹽水；以及添加劑，例如清潔劑和增溶劑(例如，TWEEN20 (聚山梨醇酯-20)，TWEEN80 (聚山梨醇酯-80 ))、抗氧化劑(例如水溶性抗氧化劑，例如抗壞血酸、焦亞硫酸鈉、半胱胺酸鹽酸鹽、硫酸氫鈉、焦亞硫酸鈉、亞硫酸鈉；油溶性抗氧化劑，例如抗壞血酸棕櫚酸酯、丁羥茴醚 (BHA)、丁羥甲苯(BHT)、卵磷脂、沒食子酸丙酯、α-生育酚；以及金屬螯合劑，例如檸檬酸、 乙二胺四乙酸(EDTA)、山梨糖醇、酒石酸、磷酸，以及防腐劑(例如硫柳汞、苯甲醇)以及增量物質(例如乳糖、甘露糖醇)。非水性溶劑或媒介物的實例是乙醇、丙二醇、聚乙二醇、植物油 (例如橄欖油和玉米油)、明膠，以及可注射有機酯，例如油酸乙酯。這些製劑可冷凍乾燥(凍幹)或真空乾燥並且在即將使用之前再溶解/再懸浮。這種製劑可通過例如經由細菌保留過濾器來過濾，將滅菌劑併入組合物中，照射組合物，或加熱組合物來滅菌。
局部給予的配製品
在此披露的C10RF32多肽、片段、融合多肽、核酸以及載體可以局部應用。局部給予對於大多數肽配製品並不能良好地起作用，但是如果應用至肺、鼻腔、口腔(舌下、頰腔)、 陰道或直腸黏膜，它可以是尤其有效的。
組合物在以具有小於約5微米的氣體動力學直徑的氣溶膠或噴霧乾燥顆粒形式遞送時可在吸入時被遞送至肺並且橫穿肺上皮襯裡到達血流。
可使用被設計成經肺部遞送治療產品的廣泛範圍的機械裝置，包括但不局限於霧化器、計量劑量吸入器以及粉末吸入器，這些全部是本領域技術人員所熟悉的。可購得裝置的一些具體實例是Ultravent霧化器(馬林克羅製藥公司(Mallinckrodt Inc.),密蘇裡州聖路易斯(St. Louis, Mo. )) ;Acorn II 霧化器(Marquest Medical Products,科羅拉多州恩格爾伍德(Englewood, Colo. )) ;Ventolin計量劑量吸入器(Glaxo Inc.公司，北卡羅來納州研究三角園(Research Triangle Park, N. C.));以及 Spinhaler 粉末吸入器(Fisons Corp.公司,麻薩諸塞州貝德福德(Bedford, Mass. ))。Nektar>Alkermes 以及 Mannkind 都具有經過批准或處於臨床試驗中的可吸入胰島素粉末製劑，其中這種技術可應用於在此描述的配製品。
給予至黏膜的配製品典型地將是噴霧乾燥的藥物顆粒，它們可併入片劑、凝膠劑、 膠囊劑、懸浮液或乳液中。標準藥用賦形劑從任何配方設計師處可獲得。口服製劑可呈口香糖、凝膠條、片劑或錠劑形式。
還可製備經皮配製品。這些通常是軟膏、洗劑、噴霧劑或貼片，全部可使用標準技術來製備。經皮配製品需要包括滲透促進劑。
控制遞送聚合物基質
在此披露的C10RF32多肽、片段、融合多肽、核酸以及載體也可以在受控釋放配製品中給予。可製造受控釋放聚合物裝置以便在植入聚合物裝置(杆、圓柱體、膜、盤)或注射 (微粒)之後全身性長期釋放。基質可呈例如微球的微粒形式，其中肽分散於固體聚合物基質或微膠囊中，其中核心具有與聚合物外殼不同的材料，並且肽是分散或懸浮於在性質上可為液體或固體的核心中。除非在此明確定義，否則微粒、微球以及微膠囊可互換使用。可替代地，聚合物可鑄造成從數納米至四釐米範圍內的薄板或膜、通過研磨或其他標準技術產生的粉末，或甚至例如水凝膠的凝膠。
可使用不可生物降解亦或可生物降解的基質遞送多肽或編碼多肽的核酸，但是可生物降解基質是優選的。這些基質可以為天然或合成聚合物，但是合成聚合物由於降解以及釋放概況的更好表徵而為優選的。該聚合物是基於所希望的釋放時段來選擇的。在一些情況下，線性釋放可為最有用的，但是在其他情況下脈衝釋放或「整體釋放」可提供更有效的結果。聚合物可以呈水凝膠(通常吸收多達按重量計約90%的水)形式，並且可任選地與多價離子或聚合物交聯。
基質可通過溶劑蒸發、噴霧乾燥、溶劑萃取以及本領域技術人員已知的其他方法來形成。可生物蝕解的微球可使用開發用於製造微球以便進行藥物遞送的任何方法來製備，這些方法例如由Mathiowitz (馬西威茲)和Langer (朗格爾)，受控釋放雜誌(受控釋放雜誌)(J. Controlled Release)，5:13-22 (1987) ；Mathiowitz (馬西威茲)等人，反應性聚合物(Reactive Polymers), 6:275-283 (1987);以及 Mathiowitz (馬西威茲)等人，應用高分子科學雜誌(J. Appl Polymer ScL)，35:755-774 (1988)來描述。
這些裝置可經過配製用於局部釋放來治療植入或注射區域一通常遞送比用於治療整個身體或全身遞送的劑量少得多的劑量。這些裝置可被植入或注射至皮下、肌內、脂肪或被吞咽。
C10RF32的診斷用途
根據本發明的至少一些實施方案的可溶性多肽也可用能夠直接或間接地提供可檢測信號的標記來修飾，該標記包括但不局限於放射性同位素以及螢光化合物。這類經過標記的多肽可用於不同用途，包括但不局限於疾病和/或指示病狀的預後、預測、篩選、早期診斷、確定進展、療法選擇以及治療監測，如以上詳述。
根據至少一些實施方案，本發明提供一種對器官或組織成像的方法，該方法包括 (a)向需要這種成像的受試者給予一種經過標記的多肽；以及(b)檢測該經過標記的多肽以便確定經過標記的多肽集中於受試者體內的位置。當用於成像應用中時，根據本發明的至少一些實施方案的經過標記的多肽通常具有與其共價或非共價附接的成像劑。適合的成像劑包括但不局限於放射性核素、可檢測標籤、螢光團、螢光蛋白、酶蛋白、以及類似物。本領域技術人員熟悉將成像劑連接至多肽的其他方法。例如，成像劑可經由部位特異性偶聯來附接，例如，將成像劑共價附接至肽連接物，例如存在於Fe融合分子的羧基末端的具有五個至七個精氨酸的聚精氨酸部分。成像劑還可直接經由非位點特異性偶聯來連接，例如， 將成像劑共價附接至存在於多肽中的伯胺基團。本領域技術人員認識到成像劑還可經由非共價相互作用(例如離子鍵、疏水性相互作用、氫鍵、範德華力、雙極子-雙極子鍵等)來結合至蛋白。
在某些情況下，通過將放射性核素直接附接至多肽來將多肽用放射性核素進行放射性標記。在某些其他實例中，放射性核素結合至螯合劑或附接至多肽的螯合劑-連接物。 用於直接偶聯的合適放射性核素包括但不局限於18F、1241、1251、131I及其混合物。與螯合劑一起使用的合適放射性核素包括但不局限於、47Sc、64Cu、67Cu、89Sr、86Y、87Y、90Y、 105Rh、lllAg、lllIn、117m Sn、149Pm、153Sm、166Ho、177Lu、186Re、188Re、211At、212Bi 及其混合物。優選地，結合至螯合劑的放射性核素是64Cu、90Y、IllIn或其混合物。適合的螯合劑包括但不局限於DOTA、BAD、TETA, DTPA, EDTA、NTA, HDTA、其膦酸酯類似物及其混合物。 本領域技術人員熟悉將放射性核素、螯合劑以及螯合劑-連接物附接至本發明的多肽的 方法。具體地說，附接可便利地使用例如可購得的雙官能連接基團(通常為異雙官能連接基團)來完成，這些連接基團可附接至存在於多肽的無幹擾位置中的官能團，並且然後進一步連接至放射性核素、螯合劑或螯合劑-連接物。
適合於用作成像劑的螢光團或螢光染料的非限制實例包括Alexa Fluor 染料(英傑生命技術有限公司(Invitrogen Corp.);加利福尼亞州卡爾斯巴德 (Carlsbad, Calif.))、突光素、異硫氰酸突光素(FITC)、OregonGreen ;若丹明、德克薩斯紅、異硫氰酸四若丹明(TRITC)、CyDye 螢光劑(例如C Y 2、C Y 3、C Y 5)等等。
適合於用作成像劑的螢光蛋白的實例包括但不局限於綠色螢光蛋白、紅色螢光蛋白(例如DsRed)、黃色螢光蛋白、青色螢光蛋白、藍色螢光蛋白以及其變體(參見例如美國專利號6，403，374、6，800，733以及7，157,566)。GFP變體的具體實例包括但不局限於增強型GFP (EGFP)、去穩定EGFP、描述於Doan (道安)等人，分子微生物學(Mol. Microbiol. ), 55:1767-1781 (2005)中的GFP變體、描述於Crameri (克萊默裡)等人，自然生物技術(Nat. Biotechnol. )，14:315-319(1996)中的 GFP 變體、描述於 Rizzo (裡佐)，自然生物技術(Nat. Biotechnol), 22:445 (2004)以及Tsien (錢)，生物化學綜合年刊(Annu. Rev. Biochem. ),67:509(1998)中的蔚藍色螢光蛋白，以及描述於Nagal (內格爾)等人， 自然 生物技術(Nat. Biotechnol. ),20:87-90(2002)中的黃色螢光蛋白。DsRed變體描述於例如 Shaner (謝恩)等人，自然生物技術(Nat. Biotechnol. )，22:1567-1572 (2004) 中並且包括 mStrawberry、mCherry、morange、mBanana、mHoneydew 以及 mTangerine。另外的DsRed變體描述於例如Wang (王)等人，美國國家科學院學報(Proc. Natl. Acad. Sc1. )U. S. A.，101:16745-16749(2004)中並且包括 mRaspberry 和 mPlum。DsRed 變體的另外實例包括描述於Fischer (菲舍爾)等人，歐洲生物化學學會聯盟快訊(FEBS Lett. )，577:227-232(2004)中的mRFPmars以及描述於Fischer (菲舍爾)等人，歐洲生物化學學會聯盟快訊(FEBS Lett. )，580:2495-2502(2006)中的 mRFPruby。
在其他實施方案中，結合至根據本發明的至少一些實施方案的多肽的成像劑包括可檢測標籤，例如像生物素、抗生物素蛋白、鏈黴抗生物素蛋白或中性鏈親和素。在其他實施方案中，成像劑包括酶蛋白，包括但不局限於螢光素酶、氯黴素乙醯轉移酶、半乳糖苷酶、β -葡糖醛酸酶、辣根過氧物酶、木聚糖酶、鹼性磷酸酶、以及類似物。
在本領域中已知用於檢測受試者體內的放射性核素的放射性發射的任何裝置或方法是適用於本發明的。例如，像使用旋轉Y射線攝像機來檢測單光子Y-發射放射性核素的輻射的單光子發射計算機控制斷層攝影術(SPECT)，以及使用閃爍Y射線攝像機來獲得放射性核素在組織、器官或身體系統中的分布的一個圖像或一系列連續圖像的放射性 核素閃爍照相法的方法，可以用於檢測從本發明的放射性標記多肽發出的輻射。正電子發射斷層術(PET)是用於檢測受試者體內的輻射的另一種合適技術。旨在用於醫學用途的微型並且靈活的輻射檢測器由Intra-Medical LLC (加利福尼亞州聖塔莫尼卡(Santa Monica, Calif.))生產。磁共振成像(MRI)或本領域技術人員已知的任何其他成像技術也適合於檢測放射性核素的放射性發射。不管所使用的方法或裝置為何，這種檢測旨在確定經過標記的多肽集中於受試者體內的位置，並且這種濃度是疾病活性的指標。
動物和人類的非侵入性螢光成像還可提供體內診斷信息並且用於多種臨床專科中。例如，多年以來已開發出用於在UV激發之後進行簡單眼部觀察直至使用先進設備進行複雜光譜成像的技術(參見例如Andersson (安德森)-Engels (恩格斯)等人，醫學和生物學中的物理學(Phys.Med.Biol. ),42:815-824(1997))。在本領域中已知的用於體內檢測例如來自螢光團或螢光蛋白的螢光的特定裝置或方法包括但不局限於體內近紅外螢光(參見例如Frangioni (弗蘭基尼)，化學生物學目前觀點 (Curr. Opin. Chem. Biol. ) ,7:626-634(2003) )、Maestro 體內螢光成像系統(美國劍橋科研儀器公司(Cambridge Research&Instrumentation, Inc.);麻薩諸塞州沃本市 (Woburn, Mass.))、使用飛點掃描器的體內突光成像(參見例如Ramanujam (拉馬努詹)等人，電氣和電子工程師學會生物醫學工程學會報(IEEE Transactions on Biomedical Engineering) , 48:1034-1041 (2001)、等。
用於檢測光學應答的其他方法或裝置包括但不局限於目視檢查、CXD攝像機、視頻攝像機、攝影膠片、雷射掃描裝置、螢光計、光電二極體、量子計數器、落射螢光顯微鏡、掃描顯微鏡、流式細胞儀、螢光酶標儀或使用光電倍增器管的信號放大。
本發明進一步由以下與C10RF32抗原、其域以及表達數據相關的實例連同描述其完全人類抗體的製造的預測實例來說明。此信息以及實例是說明性的並且不應被視為進一步限制。貫穿本申請引用的所有圖以及所有參考文獻、專利以及公開專利申請的內容明確地通過引用結合在此。
實例
實例I
H19011_l 簇(H19011)的描述
本發明涉及C10RF32多肽、以及基於其的診斷劑和治療劑。
應當指出的是這些變體最初披露於與本申請共同擁有的PCT申請號 W02009/032845中，該申請通過弓I用結合在此，如同完全在此闡明一樣。
H19011_l簇(內部ID76432827)特徵為所感興趣的2個轉錄物和5個片段，其名稱分別在表I和2中給出。選擇的蛋白變體在表3中給出。
表1-所感興趣的轉錄物
權利要求
1.一種包括能夠抑制T細胞活化的可溶性C10RF32多肽或其片段或變體的分離的多肽用於治療以下疾病中的一種或多種的用途良性多發性硬化、復發緩解性多發性硬化、繼發性進行性多發性硬化、原發性進行性多發性硬化、進行性復發多發性硬化、慢性進行性多發性硬化、過渡性/進行性多發性硬化、快速惡化性多發性硬化、臨床確診的多發性硬化、 又稱為馬爾堡變種(Marburg’s Variant)的惡性多發性硬化，以及急性多發性硬化,或選自下組的與多發性硬化有關的病狀，該組由以下各項組成德維克氏病(Devic’s disease), 又稱為視神經脊髓炎；急性散播性腦脊髓炎、急性脫髓鞘性視神經炎、脫髓鞘橫貫性脊髓炎、米勒_費歇爾症候群(Miller-Fisher syndrome)、腦脊髓神經根神經病、急性脫髓鞘多神經病、腫脹性多發性硬化以及Balo同心圓性硬化；或以下疾病中的一種或多種痛風以及假性痛風、幼年特發性關節炎、幼年類風溼性關節炎、斯提耳氏病(Still’s disease)、 強直性脊柱炎、類風溼性脈管炎，或選自下組的與類風溼性關節炎有關的病狀，該組由以下各項組成骨關節炎、肉狀瘤病、亨-舍二氏紫癜(Henoch-Schonlein purpura)、牛皮癬性關節炎、反應性關節炎、脊柱關節病、膿毒性關節炎、血色病、肝炎、脈管炎、韋格納氏肉芽腫病(Wegener’s granulomatosis)、萊姆氏病(Lyme disease)、家族性地中海熱、具有回歸熱的高免疫球蛋白血症D、TNF受體相關周期性症候群，以及與炎症性腸病相關的腸病性關節炎；或以下疾病中的一種或多種前葡萄膜炎(或虹膜睫狀體炎)、中間葡萄膜炎(扁平部睫狀體炎)、後葡萄膜炎(或脈絡膜視網膜炎)以及全葡萄膜炎形式；或以下疾病中的一種或多種克羅恩氏病(Crohn’s disease)、潰瘍性結腸炎(UC)、膠原性結腸炎、淋巴細胞性結腸炎、缺血性結腸炎、改道性結腸炎、貝切特氏病(Behcet’s disease)、未確定的結腸炎； 或以下疾病中的一種或多種非膿皰性牛皮癬，包括尋常性牛皮癬以及牛皮癬性紅皮症(紅皮性牛皮癬)；膿皰性牛皮癬，包括泛發性膿皰性牛皮癬(宗布希膿皰性牛皮癬(pustular psoriasis of von Zumbusch))、掌妬膿皰病(永久性掌妬膿皰病、理髮師類型的膿皰性牛皮癖(pustular psoriasis ofthe Barber type)、四肢膿皰性牛皮癖)、環狀膿皰性牛皮癬、持續性肢端皮炎、皰疹樣膿皰病；藥物誘導的牛皮癬、皮褶牛皮癬、尿布區牛皮癬、脂溢性皮炎樣牛皮癬、滴狀牛皮癬、指甲牛皮癬、牛皮癬性關節炎；或以下疾病中的一種或多種 胰島素依賴性糖尿病、特發性糖尿病、幼年I型糖尿病、青春晚期糖尿病、成人隱匿性自身免疫性糖尿病、妊娠糖尿病；神經病變，包括多神經病變、單神經病變、周圍神經病變以及自主神經病變；青光眼、白內障或視網膜病變；或以下疾病中的一種或多種原發性舍格倫氏症候群(Primary Sjogren’s syndrome),繼發性舍格倫氏症候群(Secondary Sjogren’s syndrome),結締組織疾病,例如類風溼性關節炎,全身性紅斑狼瘡，硬皮病，肺炎，肺纖維化，間質性腎炎，腎臟過濾器周圍組織的炎症，腎小球性腎炎，腎小管性酸中毒，腕管症候群，周圍神經病變，顱神經病變，原發性膽汁性肝硬變(PBC)，肝硬化，食道、胃、胰腺以及肝臟(包括肝炎)的炎症，多肌炎，雷諾氏現象(Raynaud’s phenomenon),脈管炎，自身免疫甲狀腺問題，淋巴瘤；以下疾病中的一種或多種盤狀狼瘡、狼瘡性關節炎、狼瘡性肺炎、狼瘡性腎炎，或選自下組的與全身性紅斑狼瘡有關的病狀，該組由以下各項組成骨關節結核、 抗磷脂抗體症候群、心臟各個部分的炎症(例如心包炎、心肌炎以及心內膜炎)、肺和胸膜炎症、胸膜炎、胸膜腔積液、慢性彌散性間質性肺病、肺動脈高壓、肺栓塞、肺出血，以及肺萎縮症候群、狼瘡性頭痛、格-巴二氏症候群(Guillain-Barre syndrome)、無菌性腦膜炎、脫髓鞘性症候群、單神經病變、多發性單神經炎、重症肌無力、脊髓病變、顱神經病變、多神經病變、脈管炎。
2.根據權利要求1所述的蛋白的用途，其中該C10RF32多肽直接或間接地經由一個連接物肽、多肽序列或化學連接物融合至一個異源序列。
3.如權利要求1或2所述的用途，其中該C10RF32多肽包括C10RF32的細胞外域、或其片段或變體，或包括 H19011_1_P8 (SEQ ID 號4)、H19011_1_P8_V1 (SEQ ID 號5)、 H19011丄P9 (SEQ ID號6)或H19011_1_P9_V1 (SEQ ID號34)的細胞外域的多肽、或其片段或變體或同源物。
4.如權利要求3所述的用途，其中該C10RF32多肽選自下組，該組由包含與以下胺基酸殘基具有至少95%序列一致性的胺基酸殘基序列的多肽組成與在SEQ ID號14中描繪的胺基酸序列對應的H19011_1_P8(SEQID號4)的胺基酸殘基21-186，或與在SEQ ID號35 中描繪的胺基酸序列對應的H19011_1_P8_V1(SEQ ID號5)的殘基21-186，或與在SEQ ID 號15中描繪的胺基酸序列對應的H19011_1_P9(SEQ ID號:6)的殘基21-169，或與在SEQ ID號:36中描繪的胺基酸序列對應的H19011_1_P9_V1 (SEQ ID號:34)的殘基21-169， 或與在SEQ ID號37中描繪的胺基酸序列對應的序列H19011_1_P8 (SEQ ID號4)的殘基1-184，或與在SEQ ID號19中描繪的胺基酸序列對應的序列H19011丄P8_V1 (SEQ ID 號5)的殘基1-184，或與在SEQ ID號28中描繪的胺基酸序列對應的H19011_1_P9 (SEQ ID號:6)的殘基1-169，或與在SEQ ID號:30中描繪的胺基酸序列對應的H19011_1_P9_V1 (SEQ ID 號:34)的殘基 1-169。
5.如權利要求2所述的用途，其中該異源序列包括一個免疫球蛋白恆定域的至少一部分。
6.如權利要求5所述的用途，其中該融合蛋白包括對應於選自下組的抗體同種型的一個免疫球蛋白重鏈恆定區，該組由以下各項組成IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgM、IgE、IgA以及 IgD0
7.如權利要求6所述的用途，其中該免疫球蛋白恆定域包括選自下組的一個人IgG免疫球蛋白的鉸鏈、CH2以及CH3區，該組由以下各項組成Cy1、Cy2、Cy3以及Cy4鏈。
8.如權利要求1至7中任一項所述的用途，其中該融合蛋白進一步包括介導該融合蛋白的二聚化或多聚化以便形成同源二聚體、異源二聚體、同源多聚體或異源多聚體的一個域。
9.如權利要求8所述的用途，其中該介導二聚化或多聚化的域選自下組，該組由以下各項組成能夠與伴侶融合蛋白上的半胱氨酸形成分子間二硫鍵的一個或多個半胱氨酸、 一個捲曲螺旋域、一個酸補片、一個鋅指域、一個鈣手性域、一個CHI區、一個CL區、一個亮氨酸拉鏈域、一個SH2 (src同源性2)域、一個SH3 (src同源性3)域、一個PTB (磷酸酪氨酸結合)域、一個Wff域、一個PDZ域、一個14-3-3域、一個WD40域、一個域、一個Lim域、 一個異亮氨酸拉鏈域，以及一個受體二聚體對的二聚化域。
10.如權利要求2至9中任一項所述的用途，其中該融合蛋白包括SEQID號8、22、23、 38、29中任何一種的多肽。
11.如以上權利要求中任一項所述的用途，其中該融合蛋白是包括如權利要求2至10 中任一項所述的第一和第二融合蛋白的一個二聚體蛋白，其中這些第一與這些第二融合蛋白通過共價或非共價鍵彼此結合以便形成一個二聚體。
12.如權利要求2至11中任一項所述的用途，其中這些融合蛋白通過二硫鍵結合在一起。
13.如以上權利要求中任一項所述的用途，其中該蛋白以適配成用於治療免疫相關病症的一種藥用組合物，以及一種藥學上可接受的稀釋劑或載體的形式來給予。
14.如以上權利要求中任一項所述的用途，其中該蛋白附接至一個可檢測或治療部分。
15.如以上權利要求中任一項所述的用途，其中向該受試者給予一個有效量的該蛋白或藥用組合物抑制或減少選自下組的一種免疫細胞的分化、增殖、活性和/或細胞因子產生和/或分泌，該組由以下各項組成Thl、Thl7、Th22、分泌或引起其他細胞分泌炎症分子的其他細胞。
16.如權利要求15所述的用途，其中該蛋白或藥用組合物以抑制或減少Thl、Thl7和/ 或Th22細胞的分化、增殖、活性和/或細胞因子產生和/或分泌的一個有效量來給予。
17.如權利要求15或16所述的用途，其中該蛋白或藥用組合物以增強Treg和/或Th2 細胞對於Thl或Thl7細胞的抑制或免疫調節作用的一個有效量來給予。
18.如權利要求15至17中任一項所述的用途，其中該蛋白或藥用組合物以促進或增強 IL-10產生的一個有效量來給予。
19.如權利要求15至18中任一項所述的用途,其中該蛋白或藥用組合物以增加Treg 和/或Th2細胞中任何一種的細胞數或增加其群體的一個有效量來給予。
20.如權利要求15至19中任一項所述的用途，其中該蛋白或藥用組合物以抑制Thl和 /或Thl7通路並且增強Treg和/或Th2細胞對於這些Thl和Thl7通路的活性和/或促進或增強IL-10分泌的一個有效量來給予。
21.如權利要求15至20中任一項所述的用途，其中該蛋白或藥用組合物以減少一個受試者中的促炎症分子產生的一個有效量來給予。
22.如以上權利要求中任一項所述的用途，進一步包括給予有效治療免疫相關病症的一種第二治療劑。
23.如以上權利要求中任一項所述的用途，其中治療包括預防、治癒、管理、逆轉、減弱、 減輕、最小化、抑制、管理或阻止以上描述疾病的有害影響中的一個或多個。
24.如權利要求23所述的用途，其中該治療包括在沒有整體免疫抑制的情況下治療免疫相關病症。
25.如權利要求23或24所述的用途，其中免疫相關病症的該治療包括誘導免疫耐受性。
26.如權利要求23至25中任一項所述的用途，其中該治療包括抑制反應性T淋巴細胞浸潤至中樞神經系統中。
27.如權利要求23至26中任一項所述的用途，其中該治療包括預防對中樞神經系統中的神經細胞的髓磷脂外層的損傷。
28.如權利要求23至27中任一項所述的用途，其中治療包括降低疾病的嚴重度、降低疾病發作頻率、減少這類發作的持續時間，或降低這類發作的嚴重度或它們的一個組合。
29.如權利要求23至28中任一項所述的用途，其中該受試者先前對用TNF阻滯劑的治療無應答。
全文摘要
本發明涉及一種蛋白C1ORF32以及其變體以及片段以及其融合蛋白，以及其用於免疫療法和藥物開發的方法，包括但不局限於作為免疫調節劑以及用於免疫療法，包括用於自身免疫病症。
文檔編號A61P25/28GK103068399SQ201180038162
公開日2013年4月24日 申請日期2011年6月30日 優先權日2010年6月30日
發明者艾裡斯·赫克特, 加利特·羅特曼, 朱裡特·萊文, 史蒂芬·D·米勒, 約瑟夫·R·波多伊爾 申請人:卡姆普根有限公司