一種用於宮頸癌預警檢查的方法
2023-11-03 19:49:47 3
專利名稱：一種用於宮頸癌預警檢查的方法
技術領域：
本發明涉及生物技術領域，具體涉及一種用於宮頸癌預警檢查的方法。
背景技術：
婦女人數佔到全人類人數的一半，婦女健康不僅關係到婦女自身切身利益，同時也關係到人類後代的繁衍。宮頸癌是嚴重危害婦女健康的疾病，通過廣泛的調查後發現，在全世界範圍內幾乎所有婦女宮頸癌患者的組織中均檢測出人乳頭瘤病毒(human papillomvirus HPV)。HPV作為婦女致病微生物，可能感染婦女的皮膚上皮細胞，引起婦女生殖器官多種良性、惡性腫瘤病變，嚴重威脅婦女健康，各國婦產科專家普遍認為，人乳頭瘤病毒感染，已被流行病學和生物學證明是宮頸癌及其癌前病變的重要因素。
人乳頭瘤病毒作為人類致病微生物已嚴重威脅著人類健康，目前已有100多種不同型別的人乳頭瘤病毒被鑑別，不同型別的HPV可導致不同的疾病，對HPV進行檢測及分型是一種有效的可靠的宮頸癌篩查方法，現在對HPV常用的檢查方法是通過形態學、免疫學以及分子生物學方法對其進行檢測，如巴氏塗片法，液基細胞學檢查、陰道鏡檢查、組織病理學檢查，電鏡直接觀察病毒顆粒等，免疫學方法有放射免疫沉澱、酶聯免疫吸附法，這些檢測方法普遍存在的問題是(1)靈敏度和特異性不夠理想檢測過程中會出現較高的假陽性率和假陰性率，(2)不利於針對性的治療只有針對性的治療才有較好的效果，但現在還不能對HPV進行準確的分型，因為目前常用的分型檢查方法有核酸雜交法、聚合酶聯反應、線樣探針分析、基因晶片等，這些方法易發生交叉感染，假陽性高，不夠準確，(3)不適合進行大量人群的篩查因為目前的各種方法操作都較為繁瑣、時間長，因此價格昂貴，不能進入一般體檢的檢查項目中，因此不適用於宮頸癌的篩查。(4)檢測條件要求高由於檢測需要分泌物作為檢查原料，因此需要相應的器械和環境，對檢查場所的要求較高，因此很多地方不具備檢測的條件。
發明內容
本發明要克服現有技術存在的靈敏度和特異性不夠理想，不利於針對性的治療，不適合進行大量人群的篩查和檢測條件要求高的問題。
為克服現有技術存在的問題，本發明的技術方案是一種用於宮頸癌預警檢查的方法，是通過對血清中人乳頭瘤病毒抗體進行分型檢測完成。
上述方案中對血清中人乳頭瘤病毒抗體進行分型檢測所使用的晶片上設置有用HPV各分型基因利用基因工程技術構建的HPV各分型抗原工程菌，經培養、誘導、純化製備的特異性探針。
本發明研究認為，由於宮頸癌是一種由HPV引起的感染性疾病，通過HPV抗體檢查，應該可以對宮頸癌進行早期篩查，我們用蛋白晶片檢測方法對HPV抗體分型檢測，結果發現宮頸癌可以用來進行抗體檢查，而且通過大量的臨床和正常婦女的對照檢查，發現符合率很高，臨床上宮頸癌的陽性率達到了90％以上。
與現有技術相比，本方法具有操作簡單，特異性、敏感性高、快速、方便、價格低廉的優點，特別適用於宮頸癌的早期篩查。具體體現是1、特異性、敏感性高血清中人乳頭瘤病毒抗體分型檢測用於宮頸癌早期檢查方法，可以一次檢測常見類型的HPV(例如16、18、31、33、52、58、68等)大大提高了HPV的檢測效率，縮短檢測時間。
2、利於進行針對性治療血清中人乳頭瘤病毒抗體分型檢測用於宮頸癌早期檢查方法，操作簡單，一次檢測不僅可以判斷血清中是否有，而且可以鑑別屬於何種型別的感染抗體。便於對患者進行針對性的治療。
3、避免漏檢、誤檢血清中人乳頭瘤病毒抗體分型檢測用於宮頸癌早期檢查的方法針對性強，對血清中的特異性HPV抗體檢測，可以檢測出HPV潛伏感染，克服了傳統方法漏檢、誤檢的缺陷，從而實現宮頸癌早期檢查。
4、適合對大量人群進行篩查本發明是一種全新的檢查方法，只需要血清即可進行檢查，成本低，對HPV的致病機理、抗體形成、疾病診斷有重要意義。
5、檢測結果可靠血清中人乳頭瘤病毒抗體分型檢測用於宮頸癌早期檢查方法敏感性高、特異性強、利用HPV分型基因通過基因工程技術表達特異性抗原為探針，同時設計陽性對照、陰性對照和空白，對檢測質量監控、排除假陽性、假陰性，使檢測結果更可靠。
6、檢測結果準確性高檢測結果可觀性強，運用計算機軟體對反映結果進行掃描分析和數據處理，大大降低了分析結果判斷過程中的主觀因素。
具體實施方案下面將結合實施例對本發明做詳細的說明。
一種用於宮頸癌預警檢查的方法，是通過對血清中人乳頭瘤病毒抗體進行分型檢測完成。檢測中所使用的晶片上設置有用HPV各分型基因利用基因工程技術構建的HPV各分型抗原工程菌，經培養、誘導、純化製備的特異性探針。
分型抗體蛋白晶片的製作方法，依次包括下述步驟1、將用HPV各分型基因利用基因工程技術構建的HPV各分型抗原工程菌，經培養、誘導、純化製備特異性探針(通過點樣法製作的中低密度蛋白晶片，可以根據需要設計晶片探針，製備出適合於各地域需要的晶片)；2、將各相應的抗原按組陣方式點樣；3、室溫乾燥；4、用0.1mol/lPBST封閉10min；5、用0.1mol/LPBST清洗10min；6、室溫乾燥；
7、4℃保存。
檢測操作的過程是(1)樣本要求常規方法採集新鮮末梢血清或靜脈血清，體積不少於300μl，溶血樣本和高脂血樣本不宜。
(2)操作步驟a)在晶片上標記上樣品編號。
b)將玻璃瓶中免疫膠體金倒入塑料瓶中。
c)在晶片盒窗口內滴加4滴洗滌液，使膜表面完全浸溼。
d)待完全滲入後，加待檢血清200ul。
e)待血清完全滲入後，放置一分鐘，再逐滴加入8滴洗滌液。
f)待洗滌液完全滲入後，逐滴加入8滴免疫膠體金。
g)待試劑C完全滲入後，最後逐滴加入6滴洗滌液。
h)反應完畢後30分鐘內，將晶片放入晶片閱讀系統進行分析。
(3)結果判定取出檢測磁卡，刷卡進入檢測系統，將晶片放入閱讀系統，單擊「插入」項，然後點擊「圖像」，確定後「掃描」，再進行「計算」，系統將自動判定結果。
權利要求
1.一種用於宮頸癌預警檢查的方法，是通過對血清中人乳頭瘤病毒抗體進行分型檢測完成。
2.如權利要求1所述的一種用於宮頸癌預警檢查的方法，其特徵在於對所使用的晶片上設置有將HPV各分型基因利用基因工程技術構建的HPV各分型抗原工程菌，經培養、誘導、純化製備的特異性探針。
全文摘要
本發明涉及生物技術領域，具體涉及一種進行宮頸癌預警檢查的方法。本發明要克服現有技術存在的靈敏度和特異性不夠理想，不利於針對性的治療，不適合進行大量人群的篩查和檢查條件要求高的問題。為克服現有技術存在的問題，本發明的技術方案是一種用於宮頸癌預警檢查的方法，是通過對血清中人乳頭瘤病毒抗體進行分型檢測完成。該方法的優點是具有操作簡單，特異性、敏感性高，快速、方便、價格低廉，特別適用於宮頸癌的早期篩查。
文檔編號C12Q1/02GK1952660SQ20061010488
公開日2007年4月25日 申請日期2006年11月9日 優先權日2006年11月9日
發明者馬秦榮, 陶東, 王紹坤, 謝峰 申請人:西安聯爾科技有限公司