一種溶劑結晶法製備高純度積雪草苷的工藝的製作方法

2023-11-04 13:46:27 1

專利名稱：一種溶劑結晶法製備高純度積雪草苷的工藝的製作方法
技術領域：
本發明涉及一種溶劑結晶法製備高純度積雪草苷的工藝。
背景技術：
積雪草6^^//""^^/(^(1^ )UrBan為傘形科植物，植物學家林奈(Li皿aeus: Carolus)於1764年將積雪草歸入天胡荽屬(/f^/raa i)Ve)，並定名為ffydraco0^e w/art'cfl L.。在1879年，德國人UrBan根據花瓣的排列以及果實的稜數將其從 天胡荽屬中的獨立出來並建立積雪草屬(<^"^//一，積雪草歸入該屬並更名為 Cewte〃aoy/a"ca(L.)Urb.。積雪草主要分布於南北半球熱帶和亞熱帶地區，主產 地為南非、印度、斯裡蘭卡、馬來西亞、印度尼西亞、澳大利亞、日本等，我 國亦產積雪草。積雪草在中國的藥用歷史已達二千多年之久，民間常用於治療 感冒、扁桃腺炎、傳染性肝炎、痢疾、跌打損傷、疔瘡腫毒、外傷出血等。積 雪草現代藥理學研究和應用有了很大發展，表明積雪草可用於治療抑鬱症、皮
膚創傷、胃潰瘍、傳染性肝炎、皮膚病和流行性腦脊髓膜炎等。
積雪草的化學成分複雜，主要有三萜類、黃酮類、揮髮油類、多炔烯類等。 其中三萜類化合物是主要的藥效成分，包括積雪草苷、積雪草苷A、波熱模苷、 波熱米苷、參枯尼苷、異參枯尼苷、積雪草酸、羥基積雪草波熱米酸、馬達積 雪草酸等。積雪草總苷是從積雪草中提取得到的皂苷類物質的總稱，主要由三 萜苷類物質組成，其中代表性成分主要有積雪草苷(Aisaticoside， CAS No.: 16830-15-2)、積雪草苷A(Asaiticoside A; Madecassoside， CAS No.: 34540曙22國2) 和積雪草苷B (AsaiticosideB， CASNo.: 125265-68-1)。積雪草苷A也叫羥基 積雪草苷，積雪草苷B和積雪草苷A是一對同分異構體。積雪草苷A和積雪草 苷B與積雪草苷相比多了一個羥基，極性差異較大，積雪草苷A和積雪草苷B 的差異只在於其中一個甲基歸屬不同，且兩個不同的歸屬處於鄰位關係，極性 差異較小。
積雪草苷(a)、積雪草苷A(b)與積雪草苷B(c)的結構式如下formula see original document page 4
研究表明積雪草苷具有促進傷口癒合，治療疤痕的藥理作用。 積雪草苷在醫藥、化妝品等領域已有廣泛的應用前景，而目前大多採用柱 層析方法從積雪草總苷中分離製備積雪草苷，該方法存在操作周期長、溶劑消 耗多、成本高等缺點，導致高純度積雪草苷價格高，所以非常有必要尋找高效 分離製備積雪草苷的工藝方法來改變現有積雪草苷的製備方法，以降低其生產 成本並提高其生產效率。

發明內容
本發明的目的是克服現有技術的不足，提供一種溶劑結晶法製備高純度積 雪草苷的工藝。
包括如下步驟
1) 積雪草總苷用溶劑I溶解後進行固液分離，得到積雪草總苷溶液；
2) 積雪草總苷溶液中加入溶劑II進行結晶，然後經固液分離後得到固形物 與結晶母液兩部分，最後固形物經真空乾燥後得到高純度積雪草苷產品。
步驟l)中溶劑I為甲醇或二甲基甲醯胺(DMF)，加入量為2.5-100 mL / g積 雪草總苷。步驟2)中溶劑II為丙酮、乙腈、乙醚、乙酸乙酯或水，加入量為溶 劑I加入量的0.5~10倍。步驟l)和步驟2)中固液分離方法為過濾或離心。
本發明中的高純度積雪草苷是指純度大於90%的積雪草苷產品，通過一次 結晶製備得到，積雪草苷收率可達80%以上。溫度對結晶過程的影響不大，可 在室溫進行，結晶時間通常在12小時以上。若需要更高純度的積雪草苷產品， 可採用多次結晶的方式，例如經兩次結晶可得到95%以上純度的積雪草苷產品。 另外，結晶母液富含積雪草苷A與積雪草苷B，可進一步加以利用。
本發明具有過程簡單、生產成本低、汙染少、產品積雪草苷收率和純度高 等優點，適合於工業化生產。


附圖是一種溶劑結晶法製備高純度積雪草苷的工藝流程簡圖。
具體實施例方式
以下用實施例對本發明的工藝方法作進一步的說明。本發明的保護範圍不 受實施例的限制，本發明的保護範圍由權利要求書決定。
積雪草總苷原料購自廣西昌洲天然藥業有限公司，經檢測其中積雪草苷質
量含量為30.0%,積雪草苷A與積雪草苷B質量含量合佔49.5%。 實施例中所用的分析條件如下
薄層色譜(TLC)分析條件矽膠G254薄板，展開劑為正丁醇一乙酸乙酯 一水=4: 1: 5 (取上層溶液使用)，顯色劑為10%的濃硫酸乙醇溶液。
高效液相色譜(HPLC)分析條件AgilentllOO液相色譜分析系統，色譜柱為 Phenomenex C-18 column SynergiTM Fusion - RP 80A (4jx, 150 mmx4.60 mm ID), 流動相乙腈一水(50:50)，流速lmL/min,柱溫3(TC，紫外檢測波長205nm。 實施例1
取10g積雪草總苷原料加入燒杯中，加入1000mL二甲基甲醯胺(100mL 溶劑I/g積雪草總苷)，溶解後過濾得到積雪草總苷溶液；積雪草總苷溶液中加 入5000mL丙酮(溶劑I加入量的5倍)於室溫下進行結晶，24h後經過濾得到 固形物，固形物經真空乾燥後得到l.lg積雪草苷產品，經HPLC檢測，純度為 93%,積雪草苷收率為31%。 實施例2
取10 g積雪草總苷原料加入燒杯中，加入200 mL甲醇(20 mL溶劑1/ g積 雪草總苷)，溶解後過濾得到積雪草總苷溶液；積雪草總苷溶液中加入800mL 水(溶劑I加入量的4倍)於30'C進行結晶，18h後經過濾得到固形物，固形物 經真空乾燥後得到2.2g積雪草苷產品，經HPLC檢測，純度為92%，積雪草苷 收率為67%。 實施例3
取10g積雪草總苷原料加入燒杯中，加入lOOmL二甲基甲醯胺(lOmL溶 劑l/g積雪草總苷)，溶解後過濾得到積雪草總苷溶液；積雪草總苷溶液中加入 300 mL水(溶劑I加入量的3倍)於室溫下進行結晶，12h後經過濾得到固形 物，固形物經真空乾燥後得到2.2§積雪草苷產品，經HPLC檢測，純度為92%， 積雪草苷收率為68%。 實施例4取10g積雪草總苷原料加入燒杯中，加入50mL甲醇(5mL溶劑I/g積 雪草總苷)，溶解後過濾得到積雪草總苷溶液；積雪草總苷溶液中加入100mL 乙腈(溶劑I加入量的2倍)於室溫下進行結晶，8h後經過濾得到固形物，固 形物經真空乾燥後得到2.6g積雪草苷產品，經HPLC檢測，純度為94%，積雪 草苷收率為83%。 實施例5取10g積雪草總苷原料加入燒杯中，加入33mL二甲基甲醯胺(3.3 mL溶 劑l/g積雪草總苷)，溶解後過濾得到積雪草總苷溶液；積雪草總苷溶液中加入 33mL丙酮(溶劑I加入量的1倍)於室溫下進行結晶，6h後經過濾得到固形 物，固形物經真空乾燥後得到3.0g積雪草苷產品，經HPLC檢測，純度為90%， 積雪草苷收率為91%。 實施例6取10g積雪草總苷原料加入燒杯中，加入25mL甲醇(2.5 mL溶劑I/g積 雪草總苷)，溶解後過濾得到積雪草總苷溶液；積雪草總苷溶液中加入12.5 mL 乙酸乙酯(溶劑I加入量的0.5倍)於室溫下進行結晶，6h後經過濾得到固形物， 固形物經真空乾燥後得到3.2g積雪草苷產品，經HPLC檢測，純度為85%，積 雪草苷收率為92%。 實施例7取10g積雪草總苷原料加入燒杯中，加入25mL二甲基甲醯胺(2.5 mL溶 劑l/g積雪草總苷)，溶解後過濾得到積雪草總苷溶液；積雪草總苷溶液中加入 150mL乙酸乙酯(溶劑I加入量的6倍)於室溫下進行結晶，6h後經過濾得到 固形物，固形物經真空乾燥後得到2.9g積雪草苷產品，經HPLC檢測，純度為 84%，積雪草苷收率為82°/。。 實施例8取10 g積雪草總苷原料加入燒杯中，加入33 mL甲醇(3.3 mL溶劑I/g積 雪草總苷)，溶解後過濾得到積雪草總苷溶液；積雪草總苷溶液中加入200mL 水(溶劑I加入量的6倍)於室溫下進行結晶，8h後經過濾得到固形物，固形 物經真空乾燥後得到2.7g積雪草苷產品，經HPLC檢測，純度為92%，積雪草 苷收率為83%。 實施例9取10g積雪草總苷原料加入燒杯中，加入50mL二甲基甲醯胺(5mL溶 劑l/g積雪草總苷)，溶解後過濾得到積雪草總苷溶液；積雪草總苷溶液中加入350 mL水(溶劑I加入量的7倍)於室溫下進行結晶，10h後經過濾得到固形 物，固形物經真空乾燥後得到2.9g積雪草苷產品，經HPLC檢測，純度為91%， 積雪草苷收率為89%。 實施例10取10g積雪草總苷原料加入燒杯中，加入100 mL甲醇(10mL溶劑I/g積 雪草總苷)，溶解後過濾得到積雪草總苷溶液；積雪草總苷溶液中加入800mL 水(溶劑I加入量的8倍)於室溫下進行結晶，10h後經過濾得到固形物，固形 物經真空乾燥後得到2.8g積雪草苷產品，經HPLC檢測，純度為87%，積雪草 苷收率為81%。實施例11取10g積雪草總苷原料加入燒杯中，加入200mL二甲基甲醯胺(20mL溶 劑l/g積雪草總苷)，溶解後過濾得到積雪草總苷溶液；積雪草總苷溶液中加入 1800 mL乙醚(溶劑I加入量的9倍)於室溫下進行結晶，12h後經過濾得到固 形物，固形物經真空乾燥後得到3.3 g積雪草苷產品，經HPLC檢測，純度為83%， 積雪草苷收率為91%。 實施例12取10g積雪草總苷原料加入燒杯中，加入1000 mL甲醇(100 mL溶劑1/g 積雪草總苷)，溶解後過濾得到積雪草總苷溶液；積雪草總苷溶液中加入10000 mL水(溶劑I加入量的10倍)於室溫下進行結晶，36h後經過濾得到固形物， 固形物經真空乾燥後得到1.7g積雪草苷產品，經HPLC檢測，純度為80%，積 雪草苷收率為45%。 實施例13取10 g積雪草總苷原料加入燒杯中，加入200 mL甲醇(20 mL溶劑1/ g積 雪草總苷)，溶解後過濾得到積雪草總苷溶液；積雪草總苷溶液中加入800mL 丙酮(溶劑I加入量的4倍)於冰水浴下進行結晶，12h後經過濾得到固形物， 固形物經真空乾燥後得到2.2§積雪草苷產品，經HPLC檢測，純度為92%，積 雪草苷收率為67%。 實施例14取10g積雪草總苷原料加入燒杯中，加入lOOmL二甲基甲醯胺(lOmL溶 劑l/g積雪草總苷)，溶解後過濾得到積雪草總苷溶液；積雪草總苷溶液中加入 300mL丙酮(溶劑I加入量的3倍)於室溫下進行結晶，10h後經過濾得到固 形物，固形物經真空乾燥後得到2.2 g積雪草苷產品，經HPLC檢測，純度為92%，積雪草苷收率為68%。 實施例15取10g積雪草總苷原料加入燒杯中，加入33mL二甲基甲醯胺(3.3 mL溶 劑l/g積雪草總苷)，溶解後過濾得到積雪草總苷溶液；積雪草總苷溶液中加入 33mL乙腈(溶劑I加入量的1倍)於室溫下進行結晶，4h後經過濾得到固形 物，固形物經真空乾燥後得到3g積雪草苷產品，經HPLC檢測，純度為90%， 積雪草苷收率為91%。 實施例16取10 g積雪草總苷原料加入燒杯中，加入25 mL甲醇(2.5 mL溶劑I/g積 雪草總苷)，溶解後過濾得到積雪草總苷溶液；積雪草總苷溶液中加入12.5 mL 乙腈(溶劑I加入量的0.5倍)於室溫下進行結晶，24h後經過濾得到固形物， 固形物經真空乾燥後得到3.2￡積雪草苷產品，經HPLC檢測，純度為85%，積 雪草苷收率為92%。 實施例17取10g積雪草總苷原料加入燒杯中，加入33mL甲醇(3.3 mL溶劑I/g積 雪草總苷)，溶解後過濾得到積雪草總苷溶液；積雪草總苷溶液中加入200mL 乙酸乙酯(溶劑I加入量的6倍)於室溫下進行結晶，18h後經過濾得到固形物， 固形物經真空乾燥後得到2.7g積雪草苷產品，經HPLC檢測，純度為92%,積 雪草苷收率為83%。 實施例18取10g積雪草總苷原料加入燒杯中，加入50mL二甲基甲醯胺(5mL溶 劑l/g積雪草總苷)，溶解後過濾得到積雪草總苷溶液；積雪草總苷溶液中加入 350mL乙酸乙酯(溶劑I加入量的7倍)於室溫下進行結晶，12h後經過濾得 到固形物，固形物經真空乾燥後得到2.9g積雪草苷產品，經HPLC檢測，純度 為91%,積雪草苷收率為89°/。。 實施例19取10g積雪草總苷原料加入燒杯中，加入100mL甲醇(10mL溶劑I/g積 雪草總苷)，溶解後過濾得到積雪草總苷溶液；積雪草總苷溶液中加入800mL 乙醚(溶劑I加入量的8倍)於4(TC進行結晶，14h後經過濾得到固形物，固形 物經真空乾燥後得到2.8g積雪草苷產品，經HPLC檢測，純度為87%，積雪草 苷收率為81%。 實施例20取10g積雪草總苷原料加入燒杯中，加入1000mL二甲基甲醯胺(lOOmL 溶劑I/g積雪草總苷)，溶解後過濾得到積雪草總苷溶液；積雪草總苷溶液中加 入3000mL乙醚(溶劑I加入量的3倍)於45匸進行結晶，24h後經過濾得到 固形物，固形物經真空乾燥後得到1.4g積雪草苷產品，經HPLC檢測，純度為 73°/。，積雪草苷收率為35%。 實施例21取10g積雪草總苷原料加入燒杯中，加入lOOmL二甲基甲醯胺(lOmL溶 劑l/g積雪草總苷)，溶解後過濾得到積雪草總苷溶液；積雪草總苷溶液中加入 300mL丙酮(溶劑I加入量的3倍)於室溫下進行結晶，8h後經過濾得到固形 物，固形物經真空乾燥後得到2.2g積雪草苷產品，經HPLC檢測，純度為92%， 積雪草苷收率為68%。將得到的2.9g積雪草苷產品加入燒杯中，加入30mL二甲基甲醯胺，溶解 後加入90mL丙酮於室溫下進行二次結晶，8h後經過濾得到固形物，固形物經 真空乾燥後得到1.8g積雪草苷產品。經HPLC檢測，純度為96%，積雪草苷總 收率為59%。 實施例22取10 g積雪草總苷原料加入燒杯中，加入33 mL甲醇(3.3 mL溶劑1/ g積 雪草總苷)，溶解後過濾得到積雪草總苷溶液；積雪草總苷溶液中加入200mL 水(溶劑I加入量的6倍)於室溫下進行結晶，12h後經過濾得到固形物，固形 物經真空乾燥後得到2.7g積雪草苷產品，經HPLC檢測，純度為92%，積雪草 苷收率為83%。將得到的2.8g積雪草苷產品加入燒杯中，加入10 mL甲醇，溶解後加入60 mL水於室溫下進行二次結晶，12h後經過濾得到固形物，固形物經真空乾燥後 得到2.2 g積雪草苷產品。經HPLC檢測，純度為96%，積雪草苷總收率為69%。 實施例23取10 g積雪草總苷原料加入燒杯中，加入33 mL甲醇(3.3 mL溶劑1/ g積 雪草總苷)，溶解後過濾得到積雪草總苷溶液；積雪草總苷溶液中加入200mL 乙酸乙酯(溶劑I加入量的6倍)於室溫下進行結晶，12h後經過濾得到固形物， 固形物經真空乾燥後得到2.7g積雪草苷產品，經HPLC檢測，純度為92%，積 雪草苷收率為83%。將得到的2.7 g積雪草苷產品加入燒杯中，加入9 mL甲醇，溶解後加入54 mL 乙酸乙酯於室溫下進行二次結晶，12h後經過濾得到固形物，固形物經真空乾燥後得到2.1 g積雪草苷產品。經HPLC檢測，純度為97%,積雪草苷總收率為66%。 實施例24取10g積雪草總苷原料加入燒杯中，加入1000mL二甲基甲醯胺(lOOmL 溶劑I/g積雪草總苷)，溶解後過濾得到積雪草總苷溶液；積雪草總苷溶液中加 入3000 mL乙醚(溶劑I加入量的3倍)於室溫下進行結晶，12h後經過濾得到 固形物，固形物經真空乾燥後得到3.4g積雪草苷產品，經HPLC檢測，純度為 80%，積雪草苷收率為90%。將得到的3.4g積雪草苷產品加入燒杯中，加入340mL二甲基甲醯胺，溶 解後加入1020mL乙醚於室溫下進行二次結晶，12h後經過濾得到固形物，固形 物經真空乾燥後得到2.4g積雪草苷產品。經HPLC檢測，純度為97%，積雪草 苷總收率為85%。 實施例25取10g積雪草總苷原料加入燒杯中，加入50mL甲醇(5mL溶劑I/g積 雪草總苷)，溶解後過濾得到積雪草總苷溶液；積雪草總苷溶液中加入100mL 乙腈(溶劑I加入量的2倍)於室溫下進行結晶，12h後經過濾得到固形物，固 形物經真空乾燥後得到2.6g積雪草苷產品，經HPLC檢測，純度為94%，積雪 草苷收率為83%。將得到的2.6g積雪草苷產品加入燒杯中，加入15 mL甲醇，溶解後加入105 mL乙腈於室溫下進行二次結晶，12h後經過濾得到固形物，固形物經真空乾燥 後得到2.3 g積雪草苷產品。經HPLC檢測，純度為97%，積雪草苷總收率為77%。
權利要求
1.一種溶劑結晶法製備高純度積雪草苷的工藝，其特徵在於包括如下步驟1)積雪草總苷用溶劑I溶解後進行固液分離，得到積雪草總苷溶液；2)積雪草總苷溶液中加入溶劑II進行結晶，然後經固液分離後得到固形物與結晶母液兩部分，最後固形物經真空乾燥後得到高純度積雪草苷產品。
2. 根據權利要求1所述的一種溶劑結晶法製備高純度積雪草苷的工藝，其 特徵在於所述步驟l)中溶劑I為甲醇或二甲基甲醯胺。
3. 根據權利要求1所述的一種溶劑結晶法製備高純度積雪草苷的工藝，其 特徵在於所述步驟l)中溶劑I的加入量為2.5-100 mL/g積雪草總苷。
4. 根據權利要求1所述的一種溶劑結晶法製備高純度積雪草苷的工藝，其 特徵在於所述步驟l)和步驟2)中固液分離方法為過濾或離心。
5. 根據權利要求1所述的一種溶劑結晶法製備高純度積雪草苷的工藝，其 特徵在於所述步驟2)中溶劑II為丙酮、乙腈、乙醚、乙酸乙酯或水。
6. 根據權利要求1所述的一種溶劑結晶法製備高純度積雪草苷的工藝，其 特徵在於所述步驟2)中溶劑II的加入量為溶劑I加入量的0.5~10倍。
全文摘要
本發明公開了一種溶劑結晶法製備高純度積雪草苷的工藝，工藝步驟如下1)積雪草總苷用溶劑I溶解後進行固液分離，得到積雪草總苷溶液；2)積雪草總苷溶液中加入溶劑II進行結晶，然後經固液分離後得到固形物與結晶母液兩部分，最後固形物經真空乾燥後得到高純度積雪草苷產品。本發明一次結晶可製備純度大於90％的積雪草苷產品，積雪草苷收率可達80％以上。若需要更高純度的積雪草苷產品，可採用多次結晶的方式，例如經兩次結晶可得到95％以上純度的積雪草苷產品。另外，結晶母液富含積雪草苷A與積雪草苷B，可進一步加以利用。本發明具有過程簡單、生產成本低、汙染少、產品積雪草苷收率和純度高等優點，適合於工業化生產。
文檔編號A61P17/00GK101407536SQ20081016221
公開日2009年4月15日 申請日期2008年11月27日 優先權日2008年11月27日
發明者呂秀陽, 鄭興芳 申請人:浙江大學