Crmp-1基因核酸原位雜交檢測試劑盒和檢測方法和應用的製作方法

2023-12-03 22:19:41

專利名稱：Crmp-1基因核酸原位雜交檢測試劑盒和檢測方法和應用的製作方法
技術領域：
本發明涉及生物檢測和疾病診斷領域，更具體地涉及癌症的基 因檢測技術。
背景技術：
根據國內外權威機構提供的資料，我國每年癌症的新增人數170萬，死 亡人數近160萬，患者600萬，全球每年新增癌症患者800萬，死亡人數接 近800萬，患者約有8400萬人，到2020年以上人數將翻一番，這是一組可 怕的數字。
2005年美國衛生研究院、癌症研究院、疾控中心等多家單位做了一個 年度報告，"認為人類在抗癌大戰中是失敗"，也就是說癌症死亡率沒有降低， 其列舉出造成抗癌大戰失敗的幾個因素是l.腫瘤細胞異質性；2.腫瘤細胞 耐藥性；3.抗癌藥物設計思路不完善等。同時，該報告中亦提出應重新審視 現有診治癌症的措施。前段時間財經雜誌的文章報導大標題中國在抗癌戰 鬥中大潰敗。
本發明人在研究中發現，導致癌症死亡率不降的另二個重要原 因是1.不能做到真正的早期診斷;2.轉移的病理機制不清楚。依照 傳統的醫學影像及和其它生化(如蛋白標記物)指標來診斷癌症， 認為佔位性癌塊在2公分下是屬於早期癌症的診斷(更小些有時無 症狀體徵)，這一概念值得認真討論。影像醫學的2公分以下癌塊 屬早期這一界定科學性是不夠嚴謹的，從細胞學角度，l公分的腫 塊約有一億個腫瘤細胞，2公分的腫塊其三維空間的細胞疊加數遠 不止2億個腫瘤細胞，從癌變前期到單克隆癌細胞產生及形成2公分的癌塊，其病理演變過程相當長，可能是一年或兩年、甚至三 年以上，很難證實的是在這個過程中，腫塊是癌症唯一的發生地和 單獨的病灶。臨床上已證實 一旦形成腫塊的同時，其他癌細胞通 過不同途徑遷移到其他部位克隆生長； 一旦切除原發灶後，其他器 官復發灶或多發癌塊灶先後形成或轉移。因此，在臨床上以2公分 以下的腫塊大小來界定早期與否，不夠嚴謹，這時已經是晚期了， 這是導致癌症死亡率不降的真正原因。美國的健康機構都認為早期 診斷是降低死亡率和降到醫療成本的關鍵。
癌症的發生演變過程和癌基因得能、抑癌基因的失能以及癌症 轉移基因的得能和癌症轉移抑制基因的失能有關，也是多基因疾 病。隨著分子生物學技術日益完善，功能基因組學，疾病基因組學 和癌症基因組學研究的深入開展，至今，有可能在基因水平上做到 更科學的早期診斷，特別是在癌變前期或癌細胞形成(單克隆時)、
突破血管壁早期轉移時，就能做到早期預測診斷。
DNA重組技術的發展使正常細胞內的基因被發現如控制細胞生長、 移動、發育分化、及信號傳導等原癌基因和腫瘤抑制基因；以及腫瘤轉移基 因和腫瘤轉移抑制基因。在某些情況下，這些基因調節改變和表達異常而引 起正常細胞表現為腫瘤生長行為，直至腫瘤惡變和腫瘤細胞轉移。至今為止， 已知100多種癌基因和30多種腫瘤抑制基因，及數種腫瘤轉移抑制基因。 根據其功能特徵，可分為不同種類(l)細胞生長因子和生長因子受體；(2) 存在細胞質和細胞核之間的細胞內信號轉錄通路信使及與細胞內移動有關 的細胞內因子；(3)影響基因表達和DNA複製的調節蛋白，以及仍在研究 證實中的其它功能性因子。
惡性腫瘤(癌症)如果不轉移，大致可由外科手術切除、化學、放射等 療發治癒。但癌症如果己轉移，擴散到其它組織或器官，就變得難以治癒。 事實上，癌症轉移所造成的死亡率超過90%以上。癌症的轉移是個複雜的過 程，癌細胞內原發腫瘤脫落，進入細胞外基質和血管或淋巴管，並在適宜的組織器官中生長，腫瘤細胞在轉移中必須突破腫瘤細胞原發部位的細胞外基
質(extra cellular matrix)所形成的屏障結構。對於癌症形成過程醫學界已有 相當的認識，但對癌症的轉移機制，至今仍然不是很了解，但有資料證實由 部分基因表達異常或細胞內信息傳導失調等因素有關。初步認為是由於機體 在基因水平上抗癌，抑制轉移與細胞在基因水平上癌變，癌細胞轉移的綜合 平衡失調所致。關於腫瘤轉移抑制基因已有不少發現，除了 CRMP-1基因外， RhoGDI2、 TWIST、 WDNM、 Kall、 Timp-l、 NM23等基因均與腫瘤轉移 抑制相關，推測其機制與等位基因缺失，CPG過度甲基化及P53基因的調 控有關，研究腫瘤轉移的機制以及腫瘤轉移抑制基因之間的關係是新世紀生 命科學的一大任務，此難題的攻克有望帶來癌症的徹底治癒。
根據財富雜誌的調查，從1972年至2004年，美國國家癌症研究院的資助 項目中，只有不到0.5%的項目研究癌症轉移。2003年該研究院資助項目有 8900個，其中92%甚至沒有提及癌轉移，特別是現有腫瘤的動物設計方案模 型，大都偏離了癌症轉移相關的機制。本發明提供腫瘤轉移抑制基因CRMP-1 的診斷試劑盒，其靶基因是CRMP-1，位於染色體4pl6.1-p15，核苷酸序列 為全長1220bp，與細胞分裂內移動功能有關的基因。我們研究發現它與各種 惡性腫瘤均有關係，在各種類型癌症及癌症轉移患者中表達明顯下降，甚至 喪失。這是它與其它腫瘤轉移抑制基因不同之處，在人類各種類型癌症轉移 過程中扮演了一個重要的角色。CRMP-1是一種新的腫瘤轉移抑制功能的基 因，與細胞分裂內移動功能有關，CRMP-1在正常人體組織或器官中廣泛表 達。研究發現CRMP-1基因增殖細胞形態由長條形變成圓形，且細胞失去 tilopodia (此為細胞表面突出的絲狀的actin，已知與細胞活動力有關)，以熒 光顯微鏡觀察發現CRMP-1在細胞周期(cell cycle)的各階段中，有相當動 態的變化，在細胞周期間期(interphase)時，CRMP-1大部分位於細胞質， 少部分在細胞核內；在細胞分裂前段(prophase)時，有些CRMP-1蛋白質 聚集在中心體( ceninosomes); 細胞分裂中期(metaphase) CRMP-l位於中 心體及紡錘絲體(mitotic sindle);在後期(anaphase)時，CRMP-l蛋白質仍然與紡錘絲相關聯，在末期(letophase)， CRMP-1在中體(midbody)。上 述的CRMP-1在細胞周期中的變化，顯示CRMP-1在細胞分裂過程中可能扮 演重要的角色。
本發明基於CRMP-1基因的腫瘤轉移抑制功能，其在人體內的表達量與 腫瘤轉移抑制功能密切相關，它不同於其它轉移抑制基因的作用局限性，在 人類各種腫瘤的表達量均降低或缺失。採用原位雜交技術對癌症轉移抑制功 能進行檢測，動態觀察腫瘤轉移抑制基因CRMP-1在腫瘤轉移過程中動態的 表達量，指導醫師或臨床對腫瘤病人的腫瘤轉移抑制基因功能狀態全面了 解，對病人的整體治療方案起到科學的指導作用。本發明屬於創新型發現。
本發明採用核酸原位雜交技術，檢測正常人血液標本和各種類型癌症及 癌症轉移患者的血液樣本，對CRMP-1基因的表達量進行統計分析研究，結 果表明，正常人該基因的表達量約為50%，各種類型癌症轉移病患表達量約 10%以下，大多數癌症轉移病患是零表達。同種癌症病人的轉移程度與該基 因的表達量成正比關係，CRMP-1表達量低者，其臨床分期較晚，容易導致 淋巴系統的轉移，術後易復發，生存期較短。CRMP-1表達量高者，情況正 好相反，結果表明CRMP-1表達量與癌症病人轉移和預後有關，這亦證明 CRMP-1基因是一個癌症轉移抑制基因。用本發明的原位雜交方法檢測各種 類型癌症及癌症轉移患者的CRMP-1基因表達量，能幫助臨床醫師對癌症患 者術前和術後實施更有效、更科學、更經濟的治療方案，也可以豐富癌症預 測醫學的手段。
已往對CRMP-1基因的研究都採用高通量基因晶片技術，而這 些方法多用於科研方面，不適應臨床應用，特別是個性化的應用在 我國現階段沒有報導。
中國專利文獻CN1556221公開了"IC53基因及其相關產物診斷和治療 結腸癌的用途及一種診斷結腸癌的試劑盒"。中國專利文獻CN1769485公開 了"櫛孔扇貝病原類立克次氏體的原位雜交檢測方法及其試劑盒"。中國專利 文獻CN1556410公開了"一種魚類病毒的檢測試劑盒及其檢測方法"。中國專利文獻CN1680597公開了"一種用於定量檢測C型肝炎病毒(HCV)的螢光 定量PCR試劑盒"。中國專利文獻CN2918435，公開了"一種檢測肥胖相關 基因SNP的寡核苷酸晶片及試劑盒"。但是，關於CRMP-1基因的原位雜交 檢測試劑盒及其檢測技術未見報導。
本發明採用核酸原位雜交技術在單細胞水平上觀察CRMP-1 基因的表達量和表達程度，及對臨床各類癌症的血液標本進行檢測 分析，發現該基因與癌症患者的病理演變和轉移有密切相關，從 CRMP-1基因表達量的變化，早期從基因水平來檢測癌基因的表達 情況，對臨床各類癌症的病理演變過程和轉移的診斷有非常重要的 臨床意義。

發明內容
為實現本發明的目的，本發明的技術方案如下 本發明首先提供一種原位雜交檢測試劑盒，其包括雜交探針和
標記物，其中，所述的雜交探針分別具有序列表SEQIDNO: l所 示。序列位於染色體4pl6.1-p15，核苷酸序列為全長1220bp，探針分別 為CRMP-1基因的DNA或RNA序列。其中，所述的標記物選自 放射性核素或非放射性標記物，所述的放射性核素選自3H、 35S、 1251或"P中的一種，所述的非放射性標記物選自生物素、地高辛、 鹼性磷酸酶、辣根過氧化酶或螢光素中的一種，所述的非放射性標記物 優選自地高辛，所述的增效劑是鹼性磷酸酶抗體。
本發明的CRMP-1基因診斷試劑盒，應用價值在基因水平，及 早對癌症的病理演變過程做檢測， 一旦病理演變到癌症轉移、復發 及病理程度差時，就採取相應的治療方案，降低癌症的死亡率和發 病率。
本發明還提供一種CRMP-1基因原位雜交的檢測方法，包括以 下步驟(1) 在上面所述的雜交探針與靶序列可形成穩定雜交複合體
的條件下，將底物中待測RNA與雜交探針接觸，形成雜交複合體； 禾口
(2) 檢測所述雜交複合體。 本發明所述的檢測方法，其中優選地是，所述的可形成穩定雜
交複合體的條件為核酸雜交的溫度為42"C;核酸雜交的時間為16—24 小時。
本發明所述的檢測方法，其中優選地是，所述的底物選用人的 血液白細胞標本或其他器官組織細胞標本。更優選地是，所述的血 液標本或腫瘤組織細胞標本。
本發明所述的檢測方法，對象是各類癌症病人。
本發明的檢測試劑盒是採用核酸雜交技術和組化免疫方法相 結合，以CRMP-1基因為檢測對象，合成探針是CRMP-1基因的 DNA或RNA序列，檢測的底物是人體血液標本白細胞或腫瘤組織 細胞的RNA的表達量。原位雜交技術的顯示方法能提供CRMP-1 基因的半定量或定量表達程度判定。根據雜交後免疫組化顯色判定 以上基因的表達量，正常人CRMP-1基因高表達，即深顯色， CRMP-1基因在癌症病人低表達或不表達，即淺顯色或不顯色，該 基因在很多癌症都不表達，有特異和廣譜性，臨床意義非常重大。
本發明的診斷試劑盒的組份是由雜交探針，雜交液，顯色劑， 增效劑等組成。本試劑盒的核酸雜交原理是分子生物學業內人士均 熟知，具體操作步驟是標本處理、預雜交、雜交、免疫組化染色、 鏡下進行定量分析、結果報告。
1.儀器操作
1) .將待測標本放入反應槽中；
2) .儀器自動棄去液體，自動加消化液；
3) .儀器自動棄去液體，自動後固定；4) .儀器自動棄去液體，自動預雜交(42°C);
5) .儀器自動棄去液體，自動清洗；
6) .儀器自動棄去液體，自動雜交(42°C);
7) .儀器自動棄去液體，自動清洗；
8) .儀器自動棄去液體，自動與DIG抗體培養(室溫)；
9) .儀器自動棄去液體，自動清洗，顯色；
10) .取出封片鏡檢。
本核酸原位雜交的流程圖是分子生物學業內人士均熟知的雜交探針的 製作、標本處理、預雜交、雜交、結果檢測分析的全過程。


圖1是本發明實施例中肝癌病人的CRMP-1基因表達圖片。 圖2是本發明實施例中肺癌病人CRMP-1基因表達圖片。 圖3是本發明實施例中正常人CRMP-1基因表達圖片。
具體實施例方式
下面將根據流程圖過程，展開實施的步驟，更具體地說明本發明的內容。 應該理解，下面的實施例用於說明而非限定本發明內容，任何形式上的改變 或變通將落入本發明的保護範圍。 實施例1
按照常規方法製備本實施例的原位雜交試劑盒，該試劑盒包括以 CRMP-1基因為檢測目的基因設計的雜交探針、標記物、說明書，其中
本實施例的探針標記物選用地高辛。
試劑盒組成
消化液 100nL/管 l管/盒 無色透明液體
保護液 10(HiL/管 l管/盒 無色透明液體預雜交液1300pL滑2管/盒無色透明液體
正義雜交液l管/盒無色透明液體
反義雜交液lO^L/管l管/盒無色透明液體
封閉液lOOO^L/管l管/盒無色透明液體
鹼性磷酸酶抗體lpL/管1管/盒無色透明液體
顯色劑A175pL/管l管/盒黃色液體
顯色劑B320nL/管l管/盒無色透明液體
緩衝液I 10x90mL/瓶1瓶/盒淺黃色或無色透明液體
緩衝液n iox80mL/瓶1瓶/盒淺黃色或無色透明液體
緩衝液m iox20mL/瓶3瓶/盒淺黃色或無色透明液體
緩衝液IV 10x90mL/瓶1瓶/盒淺黃色或無色透明液體
固定液90mL/瓶l瓶/盒無色透明液體
陽性對照標本6片/盒
上述試劑成分說明(所有試劑購自SIGMA)
1. 消化液:20mg/mL蛋白酶K, 100mg蛋白酶K，加DEPC-H20 5mL;
2. 保護液0.2g的glycine加入ImL的lx緩衝液I;
3. 預雜交液lx緩衝液II7.5mL 50xD 3mL
10mg/ml yest t-RNA 750uL
1 lmg/ml SALMON TESTES DNA 682uL
0.04M EDTA 3mL
50% formamide 15mL
4. 封閉液0.03g的bloking (購買自羅氏公司)加入ImL lx緩衝 液III;
5. lOx緩衝液I: (PH7.1-7.4) NaCl 80g
Na2HP04.12H20 360gKC1 2g KH2P04 2g
加三蒸水至1L,並高壓滅菌；
6. 10x緩衝液II: (PH7.0) NaCl 175.3g
檸檬酸鈉88.2g HC1幾滴
加三蒸水至1L，並高壓滅菌；
7. 緩衝液III: (PH7.9) Tris 121 .lg
NaCl 87.66g HC160rnL左右
加三蒸水至1L，並高壓滅菌；
8. 緩衝液IV:
lMTris-HCl(PH9.5): Tirs 121.1g加HC1 3ml左右，加水900mL，調PH 至9.5，加水至1L，並高壓滅菌；
1MNaCl: NaCl 58.44加水至1L，並高壓滅菌； 0.5MMgCl2: 101.65gMgCl2.6H20加水至1L，並高壓滅菌；
9. 固定液多聚甲醛40g加lx緩衝液I至1 L，稍加熱(約50-60度)攪 拌至溶解；
10. 顯色劑A: NBTlg加70。/。DMF11.44mL;
11. 1顯色劑B: BCIP lg加100%DMF30mL。
實施例2
標本處理
l).用10ml的離心管，裝4.5ml淋巴細胞分離液，再將3 ml抗凝血緩慢 加入含有淋巴細胞分離液(血淋巴細胞分離液=1:1.5)的離心管中,2000r/min離心10min
2) .吸取中間層白細胞至另一離心管中,再在此管中加入約兩倍的lx緩衝 液I，混勻，1500g/min離心10 min
3) .棄上清.沉澱加入約兩倍的lx緩衝液I，混勻,1500g/min離心10min
4) .棄上清，並把試管口多餘的液體用擦手紙吸去。再將沉澱製成懸液， 滴在玻片上推片,自然乾燥。(有條件的醫院可以用製片機製片。)3 ml血， 可以做4張片子。
5) .用40ml 4%固定液,在玻璃缸中，固定30min，再用lx緩衝液I洗5min。 每缸可以放16片。
6) 標本可保存在-2(TC ，或繼續做實驗。
實施例3
將試劑盒中試劑配製成使用濃度
1) .將10x緩衝液I用三蒸水按1:10稀釋成lx緩衝液I ;
2) .將20x緩衝液II用三蒸水按1:10稀釋成2x緩衝液n ;
按1:100稀釋成0.2x緩衝液II;按1:200稀釋成0.1 x緩衝液II;
3) .將lOx緩衝液III用三蒸水按1:10稀釋成lx緩衝液m;
4) .10x緩衝液IV用三蒸水按1:10稀釋成x緩衝液IV (取1#， 2#， 3#各 lOmL,加水至100mL既可)。
實施例4
實驗步驟
1) .取每位待檢者標本兩張，(另外兩張留作複查用)及陽性對照標本兩 張(每次實驗做一對陽性對照)。
2) .在玻璃缸裡加消化液(消化液100ul加lx緩衝液199.9ml，即為使用濃 度)20 ml。 37-C水浴預熱10分鐘。放進16張玻片，37'C處理12 min,再用 lx緩衝液I洗5min.3) .用0.2%的保護液(保護液lml力B lx緩衝液I99ml即為使用濃度)洗 10min，三蒸水洗5min，以上過程都在玻璃缸進行。玻片自然乾燥。
4) .將玻片放入保溼盒內,加預雜交液20ul/片.蓋上蓋玻片，蓋緊保溼盒，放 在42。C恆溫水浴箱中3h以上。
5) .取出玻片，棄去蓋玻片,將玻片放入玻璃缸內,用70°/。,90%,95%的乙醇 各洗2min，自然千燥
6) .將玻片放入保溼盒內，每位病人標本兩張， 一張加正義雜交液20ul/片， 另一張加反義雜交液20ul/片.蓋上蓋玻片，蓋緊保溼盒，放在42'C恆溫水浴 箱中16-24h。
7) .取出玻片,棄去蓋玻片,將玻片放入玻璃缸內 在42"C恆溫水浴箱中用2x緩衝液II洗兩次,每次15min 在42'C恆溫水浴箱中用0.2x緩衝液II洗一次，每次15min 在42'C恆溫水浴箱中用O.lx緩衝液n洗兩次,每次15min
8) .用lx緩衝液III洗30s，取出玻片,自然乾燥
9) .將玻片放入保溼盒內，加0.5%1封閉液(lml封閉液加5mllx緩衝液m) 100ul/片，蓋緊保溼盒，在室溫下作用30min。
10) .取出玻片,用lx緩衝液III洗30s，自然乾燥
11) .將玻片放入保溼盒內，加鹼性磷酸酶抗體(加入1.8mllx緩衝液 ni)100ul/片，蓋緊保溼盒在室溫下作用30min
12) .取出玻片，用lx緩衝液III洗3次，每次15min
13) .lx緩衝液IV洗2min，加顯色劑(顯色劑A73.3ul，顯色劑B157.5ul加到 30mllx緩衝液IV中，混勻)，室溫避光12h以上
14) .用三蒸水洗5min，自然乾燥，(用甘油加10%的lx緩衝液I混勻)封片 鏡檢。
實施例5
結果判斷在光鏡下計數100-300個細胞，計算染上紫色細胞的百分比。 陽性對照標本加反義雜交液的應該80%以上染上紫色。 所有加正義雜交液的陰性內對照應無色。
本發明的一個優選實施例的方案是以CRMP-1基因為目的基因合成的 核酸探針用地高辛標記(地高辛標記的cDNA、 RNA和寡核苷酸探針，不 但探針的具有生物素標記優點，還克服了生物素標記的探針在原位雜交過程 中受組織內源性生物素幹憂等缺點)，將該雜交探針與人體血液白細胞的待 測RNA核酸進行雜交，再用免疫組化的方法顯色，在光鏡下觀察mRNA的 存在和定位，根據染色的細胞數，判斷目的基因的表達量。從而獲得癌症的 診斷信息。 一個試劑盒可以多人份使用或一人份使用。
實施例6
肝癌10名，肺癌病人5名，正常對照組10名。抽所有待檢人 的外周血3-5毫升(分離白細胞)做原位雜交。結果表示，所有癌 症患者CRMP-1基因有過度表達，細胞染色；正常對照組CRMP-1 基因不表達，細胞無染色。具體結果請見圖1是肝癌病人的CRMP-1 基因表達圖，圖2是肺癌病人CRMP-1基因表達圖片，圖3是正常 人CRMP-1基因表達圖片。
本發明的診斷試劑盒與臨床上其它檢測癌胚蛋白標誌物，以及 影像醫學檢査有顯著不同。本發明可以在基因水平上(癌變前期或 癌細胞增殖)檢測CRMP-1基因異常表達，在影像醫學檢査及其它 檢査未發現佔位性癌塊轉移病灶之前，癌症生化指標未產生異常之 前，亦未形成腫塊之前，能及早做到以上基因表達異常的信息採集， 給臨床癌症病患一個真正的早期診斷。這樣才有可能實施癌症的早 期診斷、早期預防、早期治療，有可能從源頭上徹底根除癌症惡疾。
此外，本發明提供的試劑盒具有靈敏度高、特異性強的特點， 且檢測方法操作方便、簡單，能在區級'以上醫院使用和推廣。序列表
SEQUENCE LISTING 芮屈生物技術(上海)有限公司
CRMP-l基因核酸原位雜交檢測試劑盒和檢測方法與應用 /
200710171747.3 2007-11-30
1
Patentln version 3. 3
1
<211〉 1530
<212〉 DM
Homo sapiens
1
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actgcggctg atgacttctt ccaagggacc agggcggcac tggtgggcgg gaccacgatg 120
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gcccagaUg atgacaacaa tcccaggcgc accggccacc gcstcgtggc gccccctggt 1500
ggccgctcca acatcaccag cctcggttga 1530
權利要求
1. 一種CRMP-1基因核酸原位雜交檢測試劑盒，包括雜交探針、標記物，其特徵在於所述的雜交探針序列如SEQ ID NO1所示。
2. 根據權利要求1所述的試劑盒，其特徵在於所述的雜交探針序列如SEQIDNO: 1所示的RNA序列。
3. 根據權利要求1或2所述的試劑盒，其特徵在於所述的標 記物選自放射性核素或非放射性標記物。
4. 根據權利要求3所述的試劑盒，其特徵在於所述的放射性 核素選自3H、 35S、 1251或32P中的一種。
5. 根據權利要求3所述的試劑盒，其特徵在於所述的非放射性標記物選自生物素、地高辛、鹼性磷酸酶、辣根過氧化酶或螢光素中的一 種。
6. 根據權利要求5所述的試劑盒，其特徵在於所述的非放射性標記物優選自地高辛。
7. 根據權利要求1或2所述的試劑盒，其特徵在於還包括增效劑，所述的增效劑是鹼性磷酸酶抗體。
8. —種CRMP-1基因的原位雜交檢測方法，其特徵在於，該方 法包括以下步驟a、 將權利要求1或2所述試劑盒中的雜交探針與底物中待測RNA 接觸，形成雜交複合體；b、 檢測a步驟得到的雜交複合體。
9. 根據權利要求8所述的檢測方法，其特徵在於a步驟中形 成雜交複合體的條件為核酸雜交的溫度為42°C;核酸雜交的時間為 16 — 24小時，所述的底物選用血液細胞標本或組織細胞標本。
10. 根據權利要求1或2所述的試劑盒在製備檢測癌症早期疾病藥 物中的應用。
全文摘要
本發明涉及一種癌症早期的原位雜交檢測試劑盒，所述的試劑盒包括雜交探針、標記物、增效劑，其中所述的雜交探針序列如SEQ ID NO1所示。本發明還提供了一種CRMP-1基因的原位雜交檢測方法，該方法包括以下步驟a.將試劑盒中的雜交探針與底物中待測RNA接觸，形成雜交複合體；b.檢測a步驟得到的雜交複合體。本發明還提供了試劑盒在製備檢測癌症早期疾病藥物中的應用。本發明優點在於試劑盒具有靈敏度高、特異性強的特點；檢測方法操作方便、簡單；能在區級以上醫院普遍使用和推廣。
文檔編號C12Q1/68GK101429553SQ20081017960
公開日2009年5月13日 申請日期2008年11月25日 優先權日2007年11月30日
發明者張雲福, 裘建英 申請人:芮屈生物技術(上海)有限公司