從橄欖葉中提取羥基酪醇的方法與流程
2023-12-05 20:08:51 2
本發明屬於生物工程技術領域，特別涉及一種從橄欖葉中提取羥基酪醇的方法。
背景技術：
橄欖油在國際上有「液體黃金」，「美女之油」，「地中海甘露」等美譽。在西方國家，無論是營養學家，醫學家，食品科學研究人員，還是消費者都公認橄欖油是健康之油。許多疾病的發展都涉及到大量的脂肪飲食，一些實驗室研究已經指出橄欖油中的酚類和其他同族物質水解產生具有強抗癌活性的小酚類組分。酚類物質有非常多的生物學作用，特別是羥基酪醇對低密度脂蛋白(LDL)具有有效的抗氧化保護作用、抑制血小板凝集。羥基酪醇是一種天然多酚類化合物，具有多種生物和藥理活性，應用於美容產品保健品，能有效增強皮膚彈性和潤澤，具除皺抗衰老之功效；有助於人體對礦物質的吸收，無需補鈣，自然吸收，保持骨密度，減少骨骼疏鬆，同時提高內分泌系統功能，促進新陳代謝，促進傷口癒合，消除體內自由基，恢復人體臟腑器官的健康狀態，防止腦衰，延緩衰老，保持青春活力；可以防治肺癌、乳腺癌、子宮癌、前列腺癌等，促進癌症後期恢復和提高化療效果；防治因吸菸導致的多種病變；對動脈硬化、高血壓、心臟病、腦溢血等的預防與治療有奇效，優於同類藥品；此外，羥基酪醇可作為天然的抗菌、抗病毒和殺真菌產品用於農業和蟲害控制用途。因此具有巨大的醫療作用前景。
羥基酪醇可以來源於橄欖葉、橄欖油和加工橄欖油產生的廢水中。而相對橄欖油，橄欖葉的來源更加豐富，但是橄欖葉中的羥基酪醇含量相對橄欖油中少很多，這是個技術難題。因此，如何提高工藝，從橄欖葉中提取高純度的羥基酪醇是目前研究的重點。
技術實現要素：
本發明所要解決的技術問題是提供從橄欖葉中提取羥基酪醇的方法該方法製備得到的羥基酪醇提取率和純度高，擴充了羥基酪醇的來源，充分利用資源。
為實現上述目的，本發明所要解決的技術方案為：
本發明提供從橄欖葉中提取羥基酪醇的方法，包括以下製備步驟：
1)取橄欖葉，除雜洗淨，烘乾，粉碎；
2)向粉碎的橄欖葉中加入水，在50～70MPa和30～40℃下高壓微射流超微粉碎進行處理，得到膏狀漿液；
3)再向膏狀漿液中加入同等重量的乙醇溶液，在350～550W功率下微波提取12～24min，得到提取液；
4)提取液進大孔吸附樹脂柱層析，以乙酸乙酯溶液為洗脫劑進行洗脫，收集洗脫液；
5)將洗脫液過截留分子量為16～28萬的中空纖維膜，得到濃縮液；
6)乾燥，得到羥基酪醇。
本發明所述步驟1)中，將橄欖葉烘乾至含水量至40～60％。烘乾有利於粉碎。
本發明所述步驟1)中，粉碎至120～200目。在這裡細度下有利於後面的步驟處理，製備得到的羥基酪醇純度比較高。
本發明所述步驟2)中，高壓微射流超微粉碎進行處理4～9min。高壓微射流超微粉碎設備處理得到的溶液顆粒粒徑分布均勻，壓力高達100～200MPa，細化效果可達0.lum甚至以下，具有操作簡單、無汙染、可在線清潔消毒、可高效率進行細胞破壁等諸多優點，同時縮短後面提取的時間，縮短製備周期。
本發明所述步驟2)中，加入橄欖葉重量12～18倍水。在這個料液比下，處於飽和狀態，達到最佳的配比。
本發明所述步驟3)中，乙醇溶液的體積濃度為55～75％。乙醇溶液的體積濃度過高，不利於羥基酪醇的提取，過低提取不完。
本發明所述步驟4)中，乙酸乙酯溶液的用量為樹脂柱床體積的3～6倍。在這個用量的下，羥基酪醇比較容易洗脫出來。
本發明所述步驟6)中，真空冷凍乾燥，有利於保持羥基酪醇的生物活性。
本發明通過使用高壓微射流超微粉碎技術處理柿子原料，利用高壓微射流超微粉碎設備產生擠壓力、剪切力、衝擊力，經過液-液、液-固之間的高速撞擊、高剪切、空穴作用等，使物料的分子結構發生變化；再進行微波處理，條件溫和，最大限度提高羥基酪醇的提取率和純度，同時有利於保護有效成分不被破壞，同時通過大孔吸附樹脂柱層析進一步提高純度，過中空纖維膜有利於提高羥基酪醇的生物活性，本發明方法製備得到的羥基酪醇提取得率和產物純度均較高，有效擴充了羥基酪醇的來源。
具體實施方式
以下結合實施例對本發明作進一步說明，但本發明並不局限於這些實施例。
實施例1
從橄欖葉中提取羥基酪醇的方法，包括以下製備步驟：
1)取橄欖葉，除雜洗淨，烘乾至含水量至40％，粉碎至200目；
2)向粉碎的橄欖葉中加入橄欖葉重量12倍水，在70MPa和30℃下高壓微射流超微粉碎進行處理9min，得到膏狀漿液；
3)再向膏狀漿液中加入同等重量的體積濃度為55％的乙醇溶液，在550W功率下微波提取12min，得到提取液；
4)提取液進大孔吸附樹脂柱層析，以樹脂柱床體積的4倍的乙酸乙酯溶液為洗脫劑進行洗脫，收集洗脫液；
5)將洗脫液過截留分子量為16萬的中空纖維膜，得到濃縮液；
6)真空冷凍乾燥，得到羥基酪醇，HPLC檢測，羥基酪醇純度達99.8％，提取率為92.6％。
實施例2
從橄欖葉中提取羥基酪醇的方法，包括以下製備步驟：
1)取橄欖葉，除雜洗淨，烘乾至含水量至45％，粉碎至180目；
2)向粉碎的橄欖葉中加入橄欖葉重量15倍水，在65MPa和35℃下高壓微射流超微粉碎進行處理7min，得到膏狀漿液；
3)再向膏狀漿液中加入同等重量的體積濃度為60％的乙醇溶液，在500W功率下微波提取15min，得到提取液；
4)提取液進大孔吸附樹脂柱層析，以樹脂柱床體積的6倍的乙酸乙酯溶液為洗脫劑進行洗脫，收集洗脫液；
5)將洗脫液過截留分子量為19萬的中空纖維膜，得到濃縮液；
6)真空冷凍乾燥，得到羥基酪醇，HPLC檢測，羥基酪醇純度達99.6％，提取率為91.6％。
實施例3
從橄欖葉中提取羥基酪醇的方法，包括以下製備步驟：
1)取橄欖葉，除雜洗淨，烘乾至含水量至50％，粉碎至160目；
2)向粉碎的橄欖葉中加入橄欖葉重量14倍水，在60MPa和35℃下高壓微射流超微粉碎進行處理6min，得到膏狀漿液；
3)再向膏狀漿液中加入同等重量的體積濃度為60％的乙醇溶液，在450W功率下微波提取18min，得到提取液；
4)提取液進大孔吸附樹脂柱層析，以樹脂柱床體積的5倍的乙酸乙酯溶液為洗脫劑進行洗脫，收集洗脫液；
5)將洗脫液過截留分子量為22萬的中空纖維膜，得到濃縮液；
6)真空冷凍乾燥，得到羥基酪醇，HPLC檢測，羥基酪醇純度達99.7％，提取率為90.2％。
實施例4
從橄欖葉中提取羥基酪醇的方法，包括以下製備步驟：
1)取橄欖葉，除雜洗淨，烘乾至含水量至55％，粉碎至140目；
2)向粉碎的橄欖葉中加入橄欖葉重量16倍水，在55MPa和40℃下高壓微射流超微粉碎進行處理5min，得到膏狀漿液；
3)再向膏狀漿液中加入同等重量的體積濃度為65％的乙醇溶液，在400W功率下微波提取21min，得到提取液；
4)提取液進大孔吸附樹脂柱層析，以樹脂柱床體積的4倍的乙酸乙酯溶液為洗脫劑進行洗脫，收集洗脫液；
5)將洗脫液過截留分子量為25萬的中空纖維膜，得到濃縮液；
6)真空冷凍乾燥，得到羥基酪醇，HPLC檢測，羥基酪醇純度達99.9％，提取率為93.1％。
實施例5
從橄欖葉中提取羥基酪醇的方法，包括以下製備步驟：
1)取橄欖葉，除雜洗淨，烘乾至含水量至60％，粉碎至120目；
2)向粉碎的橄欖葉中加入橄欖葉重量18倍水，在50MPa和30℃下高壓微射流超微粉碎進行處理4min，得到膏狀漿液；
3)再向膏狀漿液中加入同等重量的體積濃度為75％的乙醇溶液，在350W功率下微波提取24min，得到提取液；
4)提取液進大孔吸附樹脂柱層析，以樹脂柱床體積的3倍的乙酸乙酯溶液為洗脫劑進行洗脫，收集洗脫液；
5)將洗脫液過截留分子量為28萬的中空纖維膜，得到濃縮液；
6)真空冷凍乾燥，得到羥基酪醇，HPLC檢測，羥基酪醇純度達99.8％，提取率為92.1％。