一種藍莓組培方法與流程
2023-11-10 17:12:37 1
本發明屬於植物培養領域，具體地說，涉及一種藍莓組培方法。
背景技術：
藍莓，也稱越橘，是越橘科越橘屬(Vaccinium)灌木或小喬木，藍莓在分類學上屬杜鵑花科(Ericaceae)越橘屬(Vaccinium spp.)，是該屬多年生落葉或常綠灌木的總稱。
藍莓的營養價值極為豐富，可溶性固形物含量平均12％左右，除常規水果共有的糖、酸外，還含有其它水果所不具備的大量對人體健康有益的物質，如：大量的水溶性酚類色素有15種之多，藥理研究發現藍莓總花色素苷成分具有促進人視網膜上視紅素再合成、改善循環、抗潰瘍、抗炎症等多種功能。
藍莓原產於北美，其商業栽培歷史僅有100多年，我國雖然在20世紀的50年代就對篤斯藍莓進行了栽培，但主要用來釀酒，基本沒有鮮食的品種。直到80年代才國外引進栽培，而進入21世紀之後，藍莓產業在我國得到了較快的發展，成為一個新興的水果產業，在促進農村產業結構、農民增收、農業增效等方面發揮了十分總要的作用。
藍莓的繁殖主要有種子播種、扦插繁殖、組培繁殖幾類。其中種子繁殖存在苗木變異大、進入結果期晚、品種易退化等不利因素；扦插繁殖又存在繁殖係數低、枝條用量大、對樹體損害大的弊端；而利用組培技術，則可以克服以上繁殖方法的弊端，達到使用較少的材料，獲得比常規育苗繁殖更大量、更優質的種苗，同時可通過組培技術，對藍莓進行脫毒處理，保證品種不受病毒的浸染及引起的退化，提高了苗木的成活率和生長的整齊度。因此，藍莓的組培技術是一種見效快、成本低、效果好的繁殖手段，目前已在生產上大量應用。藍莓組培繁殖的主要過程是通過獲得外殖體(健壯的枝條)，經過消毒滅菌後，將外殖體移植到培養基中，建立無菌系，在無菌系建立以後，對其進行增殖及繼代培養，當繼代培養達到一定規模以後，對其進行生根培養。通過瓶內生根培養或瓶外生根培養，從而培養出符合要求的藍莓組培苗。
在現有的藍莓組培技術中，普遍採用單一的培養基，這種技術方法存在的一個重要問題是繁殖係數較低，根據培養基中激素濃度的不同，繁殖係數一般在3～12之間，由於繁殖係數較低，導致了生產效率低，成本較高等問題。
技術實現要素：
有鑑於此，本發明針對上述的問題，提供了一種藍莓組培方法。
為了解決上述技術問題，本發明公開了一種藍莓組培方法，包括以下步驟：
1)外植體處理：選取當年生營養枝的幼嫩莖段或莖尖，在實驗室內先剪去葉片，用蒸餾水將灰塵清洗乾淨，將莖段或莖尖進行消毒，消毒結束後，將莖段或莖尖剪成2cm的莖段待用；
2)無菌系建立：將消毒後的莖段移入放有固體培養基的廣口瓶中，無菌系建立用MS培養基，每瓶培養基數量為30～40ml，每瓶移入的藍莓莖段或莖尖為8～10個，然後密封，再將培養瓶放進培養室培養；同時要控制好培養室周邊的環境，避免外界對組培是的汙染；對出現汙染的莖段和培養基及時清理；
3)繼代增殖：通過60～80天培養保存，藍莓的無菌系基本建成，此時進入繼代培養過程；繼代培養所用培養基為WPM培養基，所用激素為玉米素，不另外使用其他激素，激素的濃度為2mg/升，每瓶接入無菌系的莖段2個，每瓶培養基為50ml，密封后放入培養室進行繼代培養，每周對培養室進行1次消毒，20～25天更換1次培養基，通過一個周期的繼代，每瓶的有效苗達30苗以上，增殖係數達15以上；
4)生根培養：繼代結束的組培苗就進入生根培養階段，生根培養採用瓶內生根方式，培養基採用WPM，激素使用IBA，濃度為0.5mg/L，生根培養25～30天；
5)組培苗的過渡：將生根後的組培苗移入過渡大棚用過渡基質進行過渡，移植時，先將組培苗根上的培養基清洗乾淨，然後將其移栽在基質上，移植完後蓋上小拱棚，過渡培養15～20d。
進一步地，步驟1)中的莖段或莖尖用質量百分濃度為75％的酒精消毒30秒，然後用質量百分濃度為0.05％-0.15％的升汞消毒20～60分鐘。
進一步地，步驟2)中的培養室培養條件為：培養室溫度控制在24-26℃，光照時間為12小時，光照強度為1000Lx。
進一步地，步驟3)中的繼代培養條件為：培養室溫度控制在24-26℃，每天光照12小時，關照強度1200Lx。
進一步地，步驟4)中的生根培養條件為：生根培養的溫度為25～28℃，光照時間每天12小時，光照強度1400Lx。
進一步地，步驟5)中的過渡培養基質為：質量比例為3-8:1-3:1-3:1的草泥炭、腐殖土、膨脹珍珠巖和紅土，基質的PH值調整為5.0～5.5。
進一步地，步驟5)中的小拱棚內溫度25～28℃，相對溼度85％～90％，移植後的前5天每隔2h噴霧一次，以後每天噴霧2次。
與現有技術相比，本發明可以獲得包括以下技術效果：
1)與其他的藍莓組培技術相比，本發明的基本培養基為MS培養基與WPM結合，而不是僅單純採用WPM培養基，其激素的濃度也進行了優化，促進了不定芽的形成，增殖係數可達到14.6～22.3，大大增加了繁殖數量和節約了生產成本；
2)在組培苗過渡的基質配方上，基質材料採用膨脹珍珠巖、紅土、草泥炭、腐殖土等按一定比例配合，用檸檬酸調整PH值到5.0～5.5，然後將組培苗扦插在基質上，扣上小拱棚，保持棚內溫度25～28℃，相對溼度85％～90％，經過15～20d的過渡，其生根率可達85％以上，移栽成活率可達90％以上。
當然，實施本發明的任一產品並不一定需要同時達到以上所述的所有技術效果。
具體實施方式
以下將配合實施例來詳細說明本發明的實施方式，藉此對本發明如何應用技術手段來解決技術問題並達成技術功效的實現過程能充分理解並據以實施。
本發明提供一種藍莓組培方法，包括以下步驟：
1)外植體處理：
選取當年生營養枝的幼嫩莖段或莖尖，在實驗室內先剪去葉片，用蒸餾水將灰塵等清洗乾淨，將莖段或莖尖用質量百分濃度為75％的酒精消毒30秒，然後用質量百分濃度為0.05％-0.15％的升汞消毒20～60分鐘(根據外植體成熟程度確定時間，越嫩的枝條或芽消毒時間越短)，消毒結束後，將莖段或莖尖剪成2cm左右的莖段待用；
2)無菌系建立：
將消毒後的莖段移入放有固體培養基的廣口瓶中，無菌系建立用MS培養基，每瓶培養基數量為30～40ml，每瓶移入的藍莓莖段或莖尖為8～10個，然後密封，再將培養瓶放進培養室培養。培養室溫度控制在25℃(±1℃)，光照時間為12小時，光照強度為1000Lx。同時要控制好培養室周邊的環境，避免外界對組培是的汙染。對出現汙染的莖段和培養基及時清理。
3)繼代增殖：
通過60～80天培養保存，藍莓的無菌系基本建成，此時可以進入繼代培養過程。繼代培養所用培養基為WPM培養基，所用激素為玉米素(ZT)，不另外使用其他激素，激素的濃度為2mg/升，每瓶接入無菌系的莖段2個，每瓶培養基為50ml，密封后放入培養室進行繼代培養，培養室溫度控制在25℃(±1℃)，每天光照12小時，關照強度1200Lx，每周對培養室進行1次消毒，20～25天更換1次培養基，通過一個周期的繼代，每瓶的有效苗可達30苗以上。增殖係數可達15以上。
4)生根培養
繼代結束的組培苗就進入生根培養階段，生根培養採用瓶內生根方式，培養基採用WPM，激素使用IBA，濃度為0.5mg/L,生根培養的溫度為25～28℃，光照時間每天12小時，光照強度1400Lx，通過25～30天的生根培養，95％的組培苗生根，生根率98％以上。
5)組培苗的過渡
將生根後的組培苗移入過渡大棚進行過渡，過渡用基質為草泥炭、腐殖土、膨脹珍珠巖和紅土，其比例為3-8:1-3:1-3:1，基質的PH值調整為5.0～5.5，移植時，先將組培苗根上的培養基清洗乾淨，然後將其移栽在基質上，移植完後蓋上小拱棚，保持棚內溫度25～28℃，相對溼度85％～90％，移植後的前5天每隔2h噴霧一次，以後每天噴霧2次，經過15～20d的過渡，其生根率可達85％以上，移栽成活率可達90％以上。
實施例1
一種藍莓組培方法，包括以下步驟：
1)外植體處理：
選取當年生營養枝的幼嫩莖段或莖尖，在實驗室內先剪去葉片，用蒸餾水將灰塵等清洗乾淨，將莖段或莖尖用質量百分濃度為75％的酒精消毒30秒，然後用質量百分濃度為0.1％的升汞消毒20～60分鐘(根據外植體成熟程度確定時間，越嫩的枝條或芽消毒時間越短)，消毒結束後，將莖段或莖尖剪成2cm左右的莖段待用；
2)無菌系建立：
將消毒後的莖段移入放有固體培養基的廣口瓶中，無菌系建立用MS培養基，每瓶培養基數量為30～40ml，每瓶移入的藍莓莖段或莖尖為8～10個，然後密封，再將培養瓶放進培養室培養。培養室溫度控制在25℃(±1℃)，光照時間為12小時，光照強度為1000Lx。同時要控制好培養室周邊的環境，避免外界對組培是的汙染。對出現汙染的莖段和培養基及時清理。
3)繼代增殖：
通過60～80天培養保存，藍莓的無菌系基本建成，此時可以進入繼代培養過程。繼代培養所用培養基為WPM培養基，所用激素為玉米素(ZT)，不另外使用其他激素，激素的濃度為2mg/升，每瓶接入無菌系的莖段2個，每瓶培養基為50ml，密封后放入培養室進行繼代培養，培養室溫度控制在25℃(±1℃)，每天光照12小時，關照強度1200Lx，每周對培養室進行1次消毒，20～25天更換1次培養基，通過一個周期的繼代，每瓶的有效苗可達30苗以上。增殖係數可達15以上。
4)生根培養
繼代結束的組培苗就進入生根培養階段，生根培養採用瓶內生根方式，培養基採用WPM，激素使用IBA，濃度為0.5mg/L,生根培養的溫度為25～28℃，光照時間每天12小時，光照強度1400Lx，通過25～30天的生根培養，95％的組培苗生根，生根率98％以上。
5)組培苗的過渡
將生根後的組培苗移入過渡大棚進行過渡，過渡用基質為草泥炭、腐殖土、膨脹珍珠巖和紅土，其比例為5:2:2:1，基質的PH值調整為5.0～5.5，移植時，先將組培苗根上的培養基清洗乾淨，然後將其移栽在基質上，移植完後蓋上小拱棚，保持棚內溫度25～28℃，相對溼度85％～90％，移植後的前5天每隔2h噴霧一次，以後每天噴霧2次，經過15～20d的過渡，其生根率可達85％以上，移栽成活率可達90％以上。
實施例2
一種藍莓組培方法，包括以下步驟：
1)外植體處理：
選取當年生營養枝的幼嫩莖段或莖尖，在實驗室內先剪去葉片，用蒸餾水將灰塵等清洗乾淨，將莖段或莖尖用75％的酒精消毒30秒，然後用0.15％的升汞消毒20分鐘(根據外植體成熟程度確定時間，越嫩的枝條或芽消毒時間越短)，消毒結束後，將莖段或莖尖剪成2cm左右的莖段待用；
2)無菌系建立：
將消毒後的莖段移入放有固體培養基的廣口瓶中，無菌系建立用MS培養基，每瓶培養基數量為30ml，每瓶移入的藍莓莖段或莖尖為10個，然後密封，再將培養瓶放進培養室培養。培養室溫度控制在25℃(±1℃)，光照時間為12小時，光照強度為1000Lx。同時要控制好培養室周邊的環境，避免外界對組培是的汙染。對出現汙染的莖段和培養基及時清理。
3)繼代增殖：
通過60天培養保存，藍莓的無菌系基本建成，此時可以進入繼代培養過程。繼代培養所用培養基為WPM培養基，所用激素為玉米素(ZT)，不另外使用其他激素，激素的濃度為2mg/升，每瓶接入無菌系的莖段2個，每瓶培養基為50ml，密封后放入培養室進行繼代培養，培養室溫度控制在25℃(±1℃)，每天光照12小時，關照強度1200Lx，每周對培養室進行1次消毒，20天更換1次培養基，通過一個周期的繼代，每瓶的有效苗可達30苗以上。增殖係數可達15以上。
4)生根培養
繼代結束的組培苗就進入生根培養階段，生根培養採用瓶內生根方式，培養基採用WPM，激素使用IBA，濃度為0.5mg/L,生根培養的溫度為25～28℃，光照時間每天12小時，光照強度1400Lx，通過25天的生根培養，95％的組培苗生根，生根率98％以上。
5)組培苗的過渡
將生根後的組培苗移入過渡大棚進行過渡，過渡用基質為草泥炭、腐殖土、膨脹珍珠巖和紅土，其比例為3:1:1:1，基質的PH值調整為5.0，移植時，先將組培苗根上的培養基清洗乾淨，然後將其移栽在基質上，移植完後蓋上小拱棚，保持棚內溫度25℃，相對溼度85％，移植後的前5天每隔2h噴霧一次，以後每天噴霧2次，經過15d的過渡，其生根率可達85％以上，移栽成活率可達90％以上。
實施例3
一種藍莓組培方法，包括以下步驟：
1)外植體處理：
選取當年生營養枝的幼嫩莖段或莖尖，在實驗室內先剪去葉片，用蒸餾水將灰塵等清洗乾淨，將莖段或莖尖用75％的酒精消毒30秒，然後用0.15％的升汞消毒60分鐘(根據外植體成熟程度確定時間，越嫩的枝條或芽消毒時間越短)，消毒結束後，將莖段或莖尖剪成2cm左右的莖段待用；
2)無菌系建立：
將消毒後的莖段移入放有固體培養基的廣口瓶中，無菌系建立用MS培養基，每瓶培養基數量為40ml，每瓶移入的藍莓莖段或莖尖為8個，然後密封，再將培養瓶放進培養室培養。培養室溫度控制在25℃(±1℃)，光照時間為12小時，光照強度為1000Lx。同時要控制好培養室周邊的環境，避免外界對組培是的汙染。對出現汙染的莖段和培養基及時清理。
3)繼代增殖：
通過80天培養保存，藍莓的無菌系基本建成，此時可以進入繼代培養過程。繼代培養所用培養基為WPM培養基，所用激素為玉米素(ZT)，不另外使用其他激素，激素的濃度為2mg/升，每瓶接入無菌系的莖段2個，每瓶培養基為50ml，密封后放入培養室進行繼代培養，培養室溫度控制在25℃(±1℃)，每天光照12小時，關照強度1200Lx，每周對培養室進行1次消毒，25天更換1次培養基，通過一個周期的繼代，每瓶的有效苗可達30苗以上。增殖係數可達15以上。
4)生根培養
繼代結束的組培苗就進入生根培養階段，生根培養採用瓶內生根方式，培養基採用WPM，激素使用IBA，濃度為0.5mg/L,生根培養的溫度為25～28℃，光照時間每天12小時，光照強度1400Lx，通過25～30天的生根培養，95％的組培苗生根，生根率98％以上。
5)組培苗的過渡
將生根後的組培苗移入過渡大棚進行過渡，過渡用基質為草泥炭、腐殖土、膨脹珍珠巖和紅土，其比例為8:3:3:1，基質的PH值調整為5.5，移植時，先將組培苗根上的培養基清洗乾淨，然後將其移栽在基質上，移植完後蓋上小拱棚，保持棚內溫度28℃，相對溼度90％，移植後的前5天每隔2h噴霧一次，以後每天噴霧2次，經過20d的過渡，其生根率可達85％以上，移栽成活率可達90％以上。
該方法與其他方法相比，具有較為明顯優勢，一是繁殖係數較高，同等的材料可以獲得更多的組培苗，二是單位成本明顯下降，三是組培苗過渡成活容易，風險較小。從下面的表1和表2的實驗對比數據就可以充分說明該方法的優勢。
表1 不同培養基和激素濃度對藍莓增殖的影響
表2 不同基質及環境條件對藍莓過渡苗成活的影響
上述說明示出並描述了發明的若干優選實施例，但如前所述，應當理解發明並非局限於本文所披露的形式，不應看作是對其他實施例的排除，而可用於各種其他組合、修改和環境，並能夠在本文所述發明構想範圍內，通過上述教導或相關領域的技術或知識進行改動。而本領域人員所進行的改動和變化不脫離發明的精神和範圍，則都應在發明所附權利要求的保護範圍內。