適於治療或預防結核的脂質體製劑的製作方法

2023-11-11 10:18:37 1

適於治療或預防結核的脂質體製劑的製作方法
【專利摘要】本發明提供了包含結核分枝桿菌複合群菌株之片段的脂質體製劑，還提供了結核分枝桿菌複合群菌株，其片段可摻入選定的所述脂質體製劑的實施方案中。本發明還提供了包含所述脂質體製劑的懸液和藥物組合物。此外，公開了脂質體製劑的用途，其用於治療人或動物體的方法，特別是用於治療或預防結核的方法，例如預防潛伏期結核或預防結核，並任選地用於聯合治療中。本發明的製劑含有蔗糖並且/或者平均粒度低於結核治療的基於脂質體的常規藥劑，導致更高的生物利用度和效力。
【專利說明】適於治療或預防結核的脂質體製劑
[0001]引言和【背景技術】【技術領域】
[0002]本發明提供了包含來自結核分枝桿菌(Mycobacterium tuberculosis)複合菌株的脂質體製劑，以及包含這些製劑的懸液和藥物組合物及其在治療方法(特別是治療或預防結核)中的相應用途。本發明的製劑含有蔗糖和/或平均顆粒尺寸低於結核治療的基於脂質體的常規藥劑，導致更高的生物利用度和效力。
【背景技術】 [0003]結核是由結核分枝桿菌複合群(Mycobacteriumtuberculosis-complex, MTB-C,其包括分枝桿菌M.tuberculosis、M.bovis、M.microti和M.africanum)桿菌導致的慢性感染性疾病。分枝桿菌細胞包膜的主要獨特特徵是厚且為蠟質的細胞壁。細胞壁屏障的特性還促進該生物的胞內存活，這是通過作為宿主與MTB-C桿菌之間免疫反應的直接調節劑來實現的。包膜由兩個不同部分組成:質膜，及其周圍的壁。細胞壁是由共價連接的肽聚糖結構形成的骨架，具有通過磷酸二酯鍵附著的支鏈多糖——阿拉伯半乳聚糖。阿拉伯半乳聚糖的遠端被高分子量脂肪酸(分枝菌酸，具有分枝菌的獨特大小和結構)酯化。
[0004]據世界衛生組織稱，全世界每年有9，000, 000例人感染該疾病的新病例記錄在案，約2，000, 000人死亡。全世界的感染人數被認為超過2，700, 000, 000，每年又產生九百萬至一千萬的新感染。
[0005]本領域中已經描述了多種基於有毒力或無毒力分枝桿菌菌株細胞壁片段的針對結核的疫苗。目前用於對結核進行預防性處理的疫苗是基於稱為BCG (卡介苗，M.bovis的一種減毒變體)菌株的細菌。還已知，疫苗組合物中使用的佐劑能極大地影響其有效性。
[0006]海藻糖分枝菌酸酯(特別是海藻糖二分枝菌酸酯)是結核分枝桿菌提取物中最具生物活性的脂質，其誘導影響肉芽腫形成的促炎性級聯。應該指出，關於結核分枝桿菌細胞壁中這些化合物的存在量，並沒有生物學數據。來自該物種的任何樣品都具有高度生物複雜性。因此，為了實施定量分析，將需要激進的、複雜的並且漫長的純化步驟，導致用於進行進一步結構分析的純化化合物的量過低。這正是沒有關於結核分枝桿菌細胞壁中每種化合物確切百分比的已公開數據的原因。一些糖脂是MTB-C細胞的典型組分，例如脂阿拉伯甘露聚糖。脂阿拉伯甘露聚糖與MTB-C毒力有關。
[0007]E.Ribi et al.，Naturel963, 198，1214-1215 頁描述了用包含無毒力卡介苗(BCG)菌株細胞壁片段和礦物油的組合物進行的免疫測定。所述片段通過在礦物油中對所述菌株的培養物進行勻漿而獲得。該組合物比常規疫苗(BCG)更有效。儘管如此，同一文章中還描述了所述細胞壁片段當在水中勻漿並且不存在礦物油時不誘導免疫應答。
[0008]D.P.Pal et al., Indian J.Med.Res.1977，65，340-345 頁描述了用有毒力的H37Rv菌株的細胞壁片段和礦物油製備的疫苗。在這種情況下，細胞壁片段通過在水相中對死細胞進行勻漿而獲得，然後向組合物中加入礦物油。還描述了，在水相中勻漿的細胞壁片段無免疫原性，必須存在礦物油才能使疫苗有效。
[0009]G.K.Khuller et al.，Folia Microbiol.，1992，37，407-412 頁描述了結核分枝桿菌的無毒力H37Ra菌株的細胞壁的不同級分的保護性效力，所述級分與弗氏不完全佐劑(也包括礦物油)配製在一起。
[0010]E.M.Agger et al.，Scand.J.1mmunol.，2OO2, 56，443_447 頁描述了包含有毒力的H37Rv菌株的細胞壁片段的疫苗，其在包含陽離子型表面活性劑二甲基雙十八烷基溴化銨作為佐劑的情況下有效。還描述了，用不包含所述佐劑的勻漿結核分枝桿菌進行的測定在小鼠模型中不產生針對結核的抗性水平。
[0011]1.M.0rme Vaccine，2006，24，2-19頁是一篇結核疫苗的綜述文章，其描述了，基於常規卡介苗(BCG)的疫苗在為成年人提供針對結核的保護中基本無效。
[0012]可能受益於涉及結核的治療或預防的個體可分為以下亞組:
[0013](I)未接觸該疾病的個體。預防性疫苗接種可防止這些個體發生感染。
[0014](II)已接觸該疾病但尚未感染的個體。皮膚結核菌素測試(TST)為陰性。初級預防(primary prophylaxis)能防止這些個體發生感染。
[0015](III)具有潛伏期結核的未發病的個體。可通過施用化學治療來降低疾病爆發的風險。化學治療還提供了使這些個體基本停止作為高風險感染源的優點。
[0016](IV)患病個體，即患有該疾病，通常是該疾病的原發形式，但沒有或基本沒有傳染性。化學治療避免這些個體變成傳染性。
[0017]感染開始後，本領域描述了多種用於在感染個體(即具有潛伏期結核的個體)中防止發生活動性結核的治療。
[0018]例如，在專利申請EP2196473A1中描述了，為了治療感染個體中的結核可以在長至數月的時間中向尚未發病以及已經發病的個體施用多種藥物，包括異煙肼。
[0019]在專利申請ES2231037A1中描述了免疫治療劑，其包含結核分枝桿菌複合群(MTB-C)的有毒力菌株的細胞片段，用於製備與其他藥物(如異煙肼或利福黴素)聯合用於治療感染個體中的結核的藥物。該專利申請還描述了用於製備包含MTB-C菌株之細胞壁片段的免疫治療劑的方法。
[0020]如W02010/031883A1所指出，潛伏期結核感染的傳播主要通過吸入被結核分枝桿菌感染的氣溶膠而發生。因此，與患肺結核並因此能夠散播感染氣溶膠的患者直接接觸的人(例如與他們住在一起或者有任何類型的充分或頻繁接觸的人)被認為是風險群體。
[0021]因此，通常向1組個體(見上文)施用的感染初級預防是基於每天施用5mg/kg劑量的異煙肼(不超過300mg/天)的初級化學預防。該處理適用於與感染個體住在一起和/或任何類型密切接觸的任何年齡的所有TST陰性個體。在這種情況下，化學預防需要在停止接觸感染源後或感染源不具感染性後維持三個月。然而，化學預防在一些情況下可導致繼發性的不良效果，如 Martinez et al., Arch.Bronchoneumo1., 2005, 41 (I), 27-33 所述。
[0022]包含有毒力結核分枝桿菌複合群(MTB-C)片段的藥物已經描述於例如EP1690549BUEP2090318A1 和 PCT/ES2009/000436。EP2090318A1 和 PCT/ES2009/000436 描述了包含有毒力結核分枝桿菌複合群(MTB-C)片段的藥物組合物，其作為適於預防性防止結核(任選地與其他藥物組合)的藥物。另一方面，EP1690549B1描述了適於治療結核的藥物組合物，其包含任選地與其他藥物組合的MTB-C片段。[0023]專利申請EP2090318A1中報導，施用包含基於有毒力MTB-C菌株細胞壁片段之藥劑的藥物能夠誘導針對結核分枝桿菌特異性抗原的產生幹擾素-Y的Thl型應答。所述抗原包括Ag85B和Ag85A，它們是複合體Ag85的部分，後者由一系列低分子量蛋白組成，這些蛋白在細胞壁的生物合成中發揮決定作用，並且在細菌培養處於指數生長(log)期時以可觀的量產生。EP2090318A1還報導了，基於常規卡介苗(BCG)的疫苗不產生針對複合體Ag85的免疫保護應答。特定淋巴細胞產生的幹擾素-Y發揮關鍵作用:它使得感染的巨噬細胞能夠終止桿菌的生長(North&Young, Ann.Rev.Tmmunol., 2004, 22:599-623)。
[0024]世界衛生組織認識到，與無HIV感染的人相比，患有HIV的人發生結核(TB)的風險估計要高 20-37 倍。「Guidelines for intensifiedtuberculosis case-finding andisoniazid preventive therapy for people living withHIV in resource-constrainedsettings^ffHO Guidelines2011, ISBN:9789241500708)中給出了概況。然而，異煙肼預防性治療不是會為HIV陽性個體提供持久保護的疫苗接種。相反，異煙肼必須定期施用，並且異煙肼抗性也降低了該療法。因此，仍然需要提供用於HIV陽性人受試者的強有力的預防和治療性處理。
[0025]發明目的
[0026]本發明的目的是提供改進的藥劑，其在HIV陽性和HIV陰性人受試者中都適於預防或治療結核，例如預防潛伏期結核、初級預防和/或治療潛伏期或活動性結核。另一個目的是提供適於製備所述藥劑的MTB-C菌株。製備該藥劑的方法是本發明的另一個目的。
[0027]定義
[0028]「FCMtb」代表來自結核分枝桿菌複合群(MTB-C)菌株的片段。
[0029]如果沒有另外指明，則「顆粒尺寸」(亦稱「粒度」)指顆粒的直徑。當顆粒尺寸無法準確測定時，則指近似顆粒尺寸。
[0030]「z-平均」是如「材料和方法」章節中所述測定的平均顆粒尺寸。
[0031]纏H
[0032]AIDS 獲得性免疫缺陷症候群
[0033]BCG卡介苗
[0034]CFU 集落形成單位
[0035]DP藥物產品
[0036]DS藥物物質
[0037]ELISA 酶聯免疫吸附測定
[0038]ELISP0T酶聯免疫點測定
[0039]EMEA 歐洲藥品管理局
[0040]FCMtb 結核分枝桿菌細胞的片段
[0041]FIM 首次在人中
[0042]HIV 人免疫缺陷病毒
[0043]IFN- Y 幹擾素 Y
[0044]IGTIP Germ ans Trias i Pujol 的衛生科學研究所
[0045]IMP 研究性藥物產品
[0046]IPC過程控制(In process controls)[0047]LCS 脂質體濃縮物懸液
[0048]LTBI潛伏期結核感染
[0049]LPS脂多糖
[0050]Mtb結核分枝桿菌(Mycobacterium tuberculosis)
[0051]Mtb結核分枝桿菌複合群(Mycobacterium tuberculosis-complex)
[0052]NZB紐西蘭黑
[0053]NZff紐西蘭白
[0054]PPD蛋白純化衍生物
[0055]q.s.適量
[0056]TB結核
[0057]TST結核皮膚測試
[0058]WHO世界衛生組織
[0059]w/v重量/體積
[0060]w/w重量/重量`
【發明內容】

[0061]本發明提供了脂質體製劑，其包含來自結核分枝桿菌複合群(MTB-C)菌株的片段(FCMtb)和脂質體形成劑。
[0062]在一個具體實施方案中，顆粒的Z-平均尺寸(通過動態光散射測定)為120nm或更小，優選IlOnm或更小,更優選95nm或更小,最優選80nm或更小。在一個備選實施方案中，所述脂質體製劑包含1-20% (w/v)的鹿糖,優選2-12% (w/v)的鹿糖,更優選3-8% (w/v)的鹿糖，最優選4-6%(w/v)的蔗糖。重要的是要注意，儘管這兩個實施方案的每一個都可以獨立實現，但這些實施方案不視為互斥的，而是完全可以組合。
[0063]在一個具體實施方案中，上述脂質體製劑的Z-平均顆粒尺寸為40_120nm，優選50-1 IOnm,更優選 55_95nm,最優選 55_80nm。
[0064]在另一個具體實施方案中，上述脂質體製劑的平均顆粒尺寸可以更小，使得該脂質體製劑為乳劑，即，該具體實施方案中顆粒的Z-平均尺寸優選小於40nm。
[0065]在上述實施方案中任何一種或更多種的優選實施方案中，所述脂質體製劑是顆粒多分散性指數為0.4或更小(優選0.3或更小)的脂質體製劑。
[0066]在任何上述實施方案的一個更優選實施方案中，所述結核分枝桿菌複合群(MTB-C)菌株是有毒力的結核分枝桿菌複合群(MTB-C)菌株。
[0067]在任何上述實施方案中，還優選(a)所述來自結核分枝桿菌複合群(MTB-C)菌株的片段與(b)所述脂質體形成劑之間的比例為0.01:1至1:1，優選0.06:1至0.1:1。
[0068]在任何上述實施方案的一個更優選實施方案中，所述脂質體製劑還包含:(d)表面活性物質(tensioactive agent)。在一個甚至更優選的實施方案中，包含(d)表面活性物質的脂質體製劑是這樣的脂質體製劑，其中(a)與(d)的比值為0.1:1至10:1 (w/w)，優選 0.5:1 至 2:1 (w/w),最優選 0.6:1 至 0.8:1 (w/w)。
[0069]在上述實施方案的一個具體實施方案中，所述脂質體製劑中的脂質體形成劑是磷月旨，優選卵磷脂，更優選選自蛋卵磷脂或大豆卵磷脂，最優選大豆卵磷脂，其中每一種都可以是氫化的，部分氫化的或非氫化的。
[0070]在含有表面活性劑的脂質體製劑的一個優選實施方案中，所述表面活性物質選自膽酸鹽、脫氧膽酸鹽、膽固醇和膽固醇琥拍酸單酯(cholesterol hemisuccinate)。
[0071]在一個更優選的實施方案中，上述脂質體製劑是這樣的脂質體製劑，其中MTB-C細胞的片段是細胞壁片段或者包含細胞壁片段。
[0072]在另一個更優選的實施方案中，上述脂質體製劑包含MTB-C菌株NCTC13536的片段，該菌株在2010年保藏於倫敦的NCTC。該菌株也稱為511，因此NCTC13536和511這兩種名稱可互換使用。
[0073]在一個甚至更優選的實施方案中，上述脂質體製劑包含以下的至少兩項，優選三項，更優選四項，最優選全部:
[0074](i)第一多肽，其分子量為約70kDa，與結核分枝桿菌HSP70蛋白(Rv0350)的質量指紋圖譜相似，
[0075](ii)第二多肽，其分子量為約38kDa，與結核分枝桿菌38kDa蛋白(Rv0934)的質量指紋圖譜相似，
[0076](iii)第三多肽，其分子量為約30kDa，與結核分枝桿菌Ag85B蛋白(Rvl866c)的質量指紋圖譜相似，和
[0077](iv)第四多肽，其分子量為約IOkDa,與結核分枝桿菌CFPlO蛋白(Rv3874)的質量指紋圖譜相似，和
[0078](V)第五多妝,其分子量為約6kDa,與結核分枝桿菌ESAT-6蛋白(Rv3875)的質量指紋圖譜相似。`
[0079]在另一個更優選的實施方案中，所述脂質體製劑包含分子量約19kDa的脂多肽，其與與結核分枝桿菌19kDa脂蛋白抗原前體LpqH (Rv3763)的質量指紋圖譜相似。
[0080]甚至更優選地，上述脂質體的特徵還在於存在以下結核分枝桿菌抗原的至少一種或其片段:HSP70、38kDa蛋白和Ag85B。這裡的「片段」是指任何這些多肽的任何部分，例如降解產物。
[0081]在一個更優選的實施方案中，上述脂質體製劑包含通常可見於結核分枝桿菌中的脂質或其衍生物，例如綴合產物如糖綴合脂質。還優選的是，包含一種或更多種分枝菌酸，優選1、III或IV型中的任何一種或更多種。作為替代或補充，該製劑中可包含糖綴合的分枝菌酸酯，優選海藻糖二分枝菌酸酯。作為替代或補充，還優選的是，本發明的脂質體製劑中存在至少一種MTB-C衍生糖脂，一種優選的糖脂是脂阿拉伯甘露聚糖。
[0082]上述脂質體製劑還可包含一種或更多種表面活性劑，其優選來自非離子型表面活性劑組。
[0083]在另一個優選的實施方案中，前述任一權利要求的脂質體製劑還包含一種或更多種鹽或其溶液，其中優選的鹽是氯化鈉。
[0084]在任何上述實施方案的一個甚至更優選的實施方案中，本發明的脂質體製劑是凍幹的。
[0085]本發明還提供懸液，其中任一前述權利要求的脂質體製劑重構於溶劑中。在一個優選的實施方案中，該懸液的的溶劑是含水溶劑，優選是生理血清或者包含生理血清。
[0086]本發明還提供藥物組合物，其包含上述任何一個或更多個實施方案所述的脂質體製劑或者上述任何一個或更多個實施方案所述的懸液，以及可藥用載體或稀釋劑或賦形劑，其中可以施用任何適於作為載體、稀釋劑或賦形劑的物質。在其一個優選實施方案中，該藥物組合物還包含可藥用佐劑。
[0087]本發明還提供用於治療人或動物體的方法中的產品。即，提供上述任何一個或更多個實施方案的脂質體製劑、上述任何一個或更多個實施方案的懸液或上述任何一個或更多個實施方案的藥物組合物，其用於治療人或動物體的方法中。在一個具體實施方案中，本發明提供用於注射的該脂質體製劑、懸液或藥物組合物。在另一具體實施方案中，本發明提供用於結核治療或預防方法中的該脂質體製劑、懸液或藥物組合物。這些具體實施方案可以單獨或組合實現。
[0088]在一個更具體的實施方案中，本發明提供上文就其在人體治療方法中的用途描述的脂質體製劑、懸液或藥物組合物，其特徵還在於，其用於以包含I至1000、優選3至250、更優選4至80、最優選約5、約25或約50 μ g/劑FCMtb的劑量施用於人體。
[0089]在又三個具體實施方案中(a)至(C)中，上文就其在人體治療方法中的用途描述的脂質體製劑、懸液或藥物組合物是(a)用於在具有潛伏期結核感染的個體中預防活動性結核的方法中，(b)用於結核初級預防方法中，以防止已接觸疾病單尚未感染的個體發生感染，或(C)用於治療或預防潛伏期結核的方法中。
[0090]上述脂質體製劑、懸液或藥物組合物用於人或動物體治療方法的一個優選實施方案是其用於聯合治療或輔助治療(adjunctive therapy)中。輔助治療是與首要治療(primary treatment)結合的額外治療或第二治療,其提高治療疾病的有效性。聯合治療的一個具體實施方案是這樣的，其中所述聯合治療包含抗生素，優選異煙肼和利福黴素中的一種或更多種，其中安沙黴素是最優選的利福黴素。在本發明的一個具體實施方案中，輔助治療適用於HIV陽性人受試 者，優選25 μ g FCMtb的單劑量。
[0091]本發明還提供用於製備任何所述藥劑(所述脂質體製劑、懸液或藥物組合物)的方法。
[0092]本發明還提供2010年保藏於倫敦NCTC的MTB-C菌株NCTC13536。
[0093]發明詳沭
[0094]本發明提供脂質體製劑，其包含來自結核分枝桿菌複合群(MTB-C)菌株的片段(FCMtb)和脂質體形成劑。
[0095]除非另外指明，否則本申請上下位中使用的術語「包含」均表示除了以「包含」引入的成員列表之外還可任選地包含其他成員。但是，作為本發明的一個具體實施方案，術語「包含」也包括不存在其他成員的可能性，即對於該實施方案而言，「包含」應理解成具有「由……組成」的含義。
[0096]本發明詳述公開了本發明各個特徵的具體和/或優選變化方案。作為特別優選的實施方案，本發明還考慮通過將針對本發明兩個或更多特徵描述的兩個或更多個具體和/或優選變化方案組合而產生的那些實施方案。
[0097]公認的是,脂質體形成(Iiposoformation)過程產生脂質環境,提高溶解度並產生物質(如FCMtb)的懸液。本發明意義上的脂質體可以是單層的、多層的或其組合。
[0098]FCMtb可以是來自MTB-C菌株的任何類型的物質，其中來自蛋白質和/或脂質的片段是優選的。本申請意義上的FCMtb通常是來自MTB-C細胞的不同蛋白質抗原和脂質的混合物。細胞片段可通過本領域技術人員已知的任何適於破碎微生物或細菌細胞(例如特別是MTB-C細胞)的方法(如勻漿)來獲得。勻漿可通過超聲處理來進行，或通過將直徑約0.1mm的小珠(例如二氧化矽或氧化鋯/ 二氧化矽珠)與機械勻漿機一起使用來進行。可以使用的機械勻漿機例如BioSpec BeadBeater?型。通過這種勻漿過程破碎mtb-c細胞，從而獲得小的細胞片段，通常包括小細胞壁片段。細胞片段製造中的特別重要的特徵是通過脫脂作用對細胞壁片段進行「脫毒」，脫脂作用是本領域技術人員熟知的允許除去內毒素樣分子的方法。因此，優選對FCMtb進行脫毒和巴氏消毒，其後所得的脂質體製劑是無菌並無內毒素的。細胞片段在緩衝液中的分散體可以任選地凍幹，以利於其保存。為此，將分散體分配到瓶中並在約-15°C至-120°c的溫度(例如-45°c)下以真空(例如0.1至0.5mbar)凍幹。
[0099]本發明的脂質體的尺寸分布通常為至少99.9% (以數量計)小於I μ m。在一個具體實施方案中，顆粒的Z-平均尺寸(通過動態光散射測定的)為120nm或更小,優選IlOnm,更優選IlOnm或更小,更優選95nm或更小,最優選80nm或更小。在動態光散射中，z_平均參數被認為是可通過該技術獲得的穩定且重要的數字，以及優選用於質量控制目的的尺寸數字。優選地，本發明製劑中的脂質體是單峰(monomodal)的，即，它們在動態光散射測定中僅顯示一個峰。更優選地，本發明製劑中的脂質體是球狀的，這可通過對該脂質體製劑的冷凍破碎製備物進行電子顯微術來測試，如實施例9所示。由此，球狀是指對於至少90%的脂質體顆粒(以數目計)而言，各個顆粒的所有表面點距離脂質體的中心都具有相似或相同的距離，即，這種顆粒的最小半徑與同一顆粒的最大半徑相比關係為0.6或更高，0.7或更高，0.8或更高或0.9或更高。本發明的脂質體製劑可包含多層或單層脂質體或其混合物。與本領域技術人員的標準知識一致，動態光散射測量應在合適的緩衝液(即本身不導致脂質體破碎、崩解或融合以任何方式使它們顯著不穩定的緩衝液)中進行。根據經驗，任何緩衝液都可以是合適的，只要離子強度和PH值都與形成所述脂質體的緩衝液相當。優選地，使用與形成所述脂質體的緩衝液在組成上相似或相同的緩衝液。
[0100]在另一實施方案中，脂質體製劑還包含1-20%(w/v)的蔗糖，優選2-12%(w/v)的蔗糖，更優選3-8%(w/v)的鹿糖 ,最優選4-6%(w/v)的鹿糖。約5%的鹿糖是特別優選的。
[0101]重要的是要注意，儘管這些實施方案(一個涉及具體的顆粒尺寸，另一個涉及蔗糖的存在情況)的每一個都可以獨立實現，但這些實施方案不視為互斥的，而是完全可以組
口 O
[0102]在一個具體實施方案中，上述脂質體製劑的Z-平均顆粒尺寸為40_120nm，優選50-1 IOnm,更優選55_95nm,最優選55_80nm。z_平均顆粒尺寸優選通過動態光散射測定,如上文的一般描述和下文「材料和方法」章節中的詳細描述。
[0103]在另一個具體實施方案中，上述脂質體製劑的Z-平均顆粒尺寸可以更小，使得該脂質體製劑為乳劑，即，該具體實施方案中顆粒的Z-平均尺寸優選小於40nm。
[0104]在上述實施方案中任何一種或更多種的優選實施方案中，本發明製劑中的脂質體還是單分散的，這意味著觀察不到顯著的尺寸分布寬度。這在技術上通過以動態光散射測定的低多分散性指數(PDI)來測試，如0.4或更小，優選0.3或更小。因此，所述脂質體製劑是這樣的脂質體製劑，其中通過動態光散射測定的顆粒多分散性指數為0.4或更小，優選0.3或更小，最優選0.25或更小。[0105]來自結核分枝桿菌複合群(MTB-C)菌株的片段可通過包含上遊方法和下遊方法的方法獲得。出於舉例目的，本文簡要描述了五個主要步驟，實施該方法的具體模式在下文實施例2和3給出。
[0106]上遊方法(實施例2):
[0107]步驟1:培養結核分枝桿菌，
[0108]步驟2:收穫結核分枝桿菌並冷凍粗提取物。
[0109]下遊方法(實施例3):
[0110]步驟3:細胞破碎和脫脂，
[0111]步驟4:巴氏消毒，
[0112]步驟5:凍幹(任選的)。
[0113]在任何上述實施方案的一個更優選實施方案中，所述結核分枝桿菌複合群(MTB-C)菌株是有毒力的結核分枝桿菌複合群(MTB-C)菌株。毒力是指致病性和/或桿菌侵入宿主組織的能力。所述有毒力菌株可以是屬於MTB-C物種的任何有毒力菌株，但屬於結核分枝桿菌的菌株是優選的。本發明的MTB-C菌株可通過接種在本領域技術人員熟知的培養基(如Middlebrook7H10或7H11瓊脂、Sauton』 s培養基或Proskauer-Beck培養基)中來進行培養。所述有毒力菌株的培養優選在長時間中進行，例如等於或大於3周的時間，優選3周至4周。培養溫度優選維持在34°C至38°C。培養結束後，使用本領域技術人員熟知的技術(如專利申請ES2231037-A1中描述的那些)收穫和分離細胞。
[0114]脂質體製劑中的脂質體劑優選是氫化的、部分氫化的或非氫化的磷脂。所用磷脂可以是(或包含)例如磷脂醯膽鹼、磷脂醯絲`氨酸和磷脂醯肌醇。最典型的是磷脂醯膽鹼，它可以是合成的或分離自多種天然來源。優選地，所述脂質體形成劑是(或包含)卵磷脂(lecithin),其選自蛋卵磷脂(egg lecithin)和大豆卵磷脂(soy lecithin)。大豆卵磷脂是磷脂(尤其是包括磷脂醯膽鹼)的混合物，並且是特別優選的。還可包含在所述製劑中(作為脂質體形成劑本身或者作為其他組分)的典型脂質是磷酸二鯨蠟酯(DCP)、二肉豆蘧醯磷脂醯膽鹼(DMPC)、二肉豆蘧醯磷脂醯甘油(DMPG)、二油醯磷脂醯膽鹼(DOPc)、二油醯磷脂醯乙醇胺(DOPE)、二油醯磷脂醯絲氨酸(DOPS)、二棕櫚醯磷脂醯膽鹼(DPPC)、二棕櫚醯磷脂醯甘油(DPPG)、磷脂醯膽鹼(PC)和/或磷脂醯絲氨酸(PS)，其中每種脂質可以是氫化的，部分氫化的或者非氫化的。所述脂質體可使用本領域技術人員熟知的輔助脂質(auxiliary lipids)和技術(如專利申請ES2231037-A1中所述)形成。
[0115]還優選的是，在任何上述實施方案中，(a)結核分枝桿菌複合群(MTB-C)菌株的片段與(b)脂質體形成劑的比值為0.01:1至1:1，優選0.06:1至0.1:1。
[0116]在任何上述實施方案的一個更優選實施方案中，所述脂質體製劑還包含:(d)表面活性物質。通常，所有類型的能夠改變表面張力值的試劑都可用作本發明意義上的表面活性物質，但要排除的是落入上文給出的脂質體形成劑定義之中的化合物。有多種類型的表面活性物質為本領域技術人員所知，並可用於本發明的脂質體製劑中。如本領域技術人員所知，表面活性物質通常是具有極性-非極性結構的化合物。不希望受限於任何特定理論，表面活性物質通常具有定位於顆粒表面的傾向，由此在界面上產生降低表面張力值的單分子層。在含有表面活性劑的脂質體製劑的一個優選實施方案，表面活性物質選自固醇及其衍生物，例如膽固醇，和或膽汁鹽(biIe salt),例如膽酸鹽(cholate)。特別優選的實施方案是其中表面活性物質選自膽酸鹽、脫氧膽酸鹽、膽固醇和膽固醇琥珀酸單酯。實施本發明的一個優良(但非限制性)的模式是其中製劑的脂質體同時包含大豆衍生的卵磷脂和膽酸鈉。
[0117]在一個甚至更優選的實施方案中，包含(d)表面活性物質的脂質體製劑是這樣的脂質體製劑，其中(a)與(d)之間的比值為0.05:1至3:5(?/?)。如本領域技術人員所熟知，可以使用多種類型的脂質體形成劑。
[0118]脂質體可任選地含有提高其穩定性的添加劑，例如維生素E，其據信發揮脂質體抗氧化劑作用。
[0119]在一個更優選的實施方案中，上述脂質體製劑是這樣的脂質體製劑，其中MTB-C細胞的片段是(或包括)細胞壁片段。 [0120]可以使用任何屬於MTBC的菌株,優選任何屬於結核分枝桿菌(Mycobacteriumtuberculosis)的菌株。在另一個更優選的實施方案中，上述脂質體製劑包含2010年保藏於倫敦NCTC的MTB-C菌株NCTC13536的片段(實施例1)。另一個可以使用(因此在脂質體製劑中包含其片段)的菌株稱為H37Rv，其可得自例如英國倫敦國家典型培養物中心(NCTC)(保藏號NC007416)，並且經常為本領域研究者使用。還可以使用多於一種菌株，即，脂質體製劑包含多種(例如兩種、三種或多於三種)菌株的片段。
[0121]考慮到結核分枝桿菌包含約4000種推定抗原，針對全部這些蛋白來分析藥物物質是不可能的。儘管如此，某些MTB-C蛋白已經顯示出與期望的免疫應答相關。它們是近似大小為6、10、30、38和70kDa的五個蛋白質條帶(Renshaw, et al.，2005，EMBOJournal24, 2491-2498;Singh, et al., 2005, Clin.Diagn.Lab.Tmmunol.12(2), 354-358)。因此，在一個甚至更優選的實施方案中，上述脂質體製劑包含以下的至少兩項，優選三項，更優選四項，最優選全部:
[0122](i)第一多肽，其在十二烷基硫酸鈉(SDS)聚丙烯醯胺凝膠電泳後測量的分子量為約70kDa,其中所述第一多肽的質量指紋圖譜(massfingerprint)與結核分枝桿菌HSP70蛋白(Rv0350)的質量指紋圖譜相似，
[0123](ii)第二多肽，其在十二烷基硫酸鈉(SDS)聚丙烯醯胺凝膠電泳後測量的分子量為約38kDa，其中所述第二多肽的質量指紋圖譜與結核分枝桿菌38kDa蛋白(Rv0934)的質量指紋圖譜相似，
[0124](iii)第三多肽，其在十二烷基硫酸鈉(SDS)聚丙烯醯胺凝膠電泳後測量的分子量為約30kDa，其中所述第三多肽的質量指紋圖譜與結核分枝桿菌Ag85B蛋白(Rvl866c)的質量指紋圖譜相似，和
[0125](iv)第四多肽，其在十二烷基硫酸鈉(SDS)聚丙烯醯胺凝膠電泳後測量的分子量為約IOkDa,其中所述第四多肽的質量指紋圖譜與結核分枝桿菌CFPlO蛋白(Rv3874)的質量指紋圖譜相似，和
[0126](V)第五多肽，其在十二烷基硫酸鈉(SDS)聚丙烯醯胺凝膠電泳後測量的分子量為約6kDa，其中所述第五多肽的質量指紋圖譜與結核分枝桿菌ESAT-6蛋白(Rv3875)的質量指紋圖譜相似。
[0127]在另一個更優選的實施方案中，所述脂質體製劑還包含分子量(在十二烷基硫酸鈉(SDS)聚丙烯醯胺凝膠電泳後測量)約19kDa的脂多肽，其中所述脂多肽與結核分枝桿菌19kDa脂蛋白抗原前體LpqH (Rv3763)的質量指紋圖譜相似。相應條帶可通過本領域已知方法(如銀染)來顯現。本發明的研究者意想不到地發現，該多肽誘導高全IgG體液應答，其可以是製劑的全部抗原中最高的體液應答。
[0128]如何鑑定多肽或脂多肽的實例在實施例4中給出。
[0129]甚至更優選地，上述脂質體製劑的特徵還在於存在以下結核分枝桿菌抗原的至少一種或其片段:HSP70、38kDa蛋白和Ag85B，最優選HSP70、38kDa和Ag85B中至少之一。這裡的「片段」是指任何這些多肽的任何部分，例如降解產物。可以使用多種方法獲得這些片段，例如化學或酶水解，由此，破碎是否有意發生、在脂質體形成之前或之後發生並不重要。優選的是，相應片段可以歸因於其相應來源，例如由於胺基酸序列顯著重疊，例如至少5、至少10、至少20個連續胺基酸。
[0130]本發明的片段優選得自在飢餓、低氧和低pH脅迫條件下培養的桿菌。低氧是由於在培養期(例如21天)中密封在氣密袋中的平板上細菌的生長，導致微氧環境。低pH的解釋如下:培養開始時PH值為7.0-6.8，結束時(通常在培養21天後)，pH值為6.4-6.5。在這些條件下，細菌的代謝較慢，導致穩定生長。應該理解，這使得桿菌對脅迫的抗性更高。在這些條件下，培養的桿菌產生與LTBI (潛伏期結核感染)中體內潛伏期桿菌相似的特徵。因此，預計FCMtb中存在的抗原會觸發針對潛伏期桿菌之抗原(所謂的「結構」抗原)以及脅迫應答相關的抗原的新免疫應答。
[0131]分枝桿菌糖脂長期以來就被認為具有免疫調節活性，特別是誘導肉芽腫應答和發揮強佐劑樣效應。因此，在另一個優選的實施方案中，上述脂質體製劑包含通常可見於結核分枝桿菌中的脂質或其衍生物，例如綴合脂質如糖綴合脂質。已經在結核分枝桿菌樣品中鑑定出一些免疫原性脂質組分(Brennan, Tuberculosis (Edinburgh), 2003, 83 (1-3), 91-97)，並開發了用於其測定的分析方法(電泳、SDS-PAGE、薄層層析)。儘管每種脂質組分的分離將需要如此激進的處理以致於很難獲得MTB-C提取物或脂質體製劑中每種可檢測組分的定量數據或百分比，但定量表徵將用於表徵本發明的更優選實施方案。根據這一優選實施方案，包含一種或更多種分枝菌酸，優選屬於1、III或IV型中的任何一種或更多種。作為替代或補充，製劑中可包含糖綴合分枝菌酸酯，優選海藻糖二分枝菌酸酯。作為替代或補充，製劑中可包含脂阿拉伯甘露聚糖(LAM)這種糖脂。此外，相信所述片段的多抗原性性質(多抗原性蛋白質混合物加脂質，而不是僅有純化的抗原)是有利的，因此本領域技術人員能夠改動細胞破碎過程以允許獲得最佳細胞抗原混合物。
[0132]MTB-C細胞的勻漿在一種或更多種表面活性劑(優選非離子型表面活性劑)存在下進行。因此，上述脂質體製劑還可包含一種或更多種這些表面活性劑。大量這種表面活性劑在本領域技術人員的標準知識中。優選地，所用的非離子型表面活性劑選自乙氧基化烷基酚和乙氧基化山梨糖醇酯。更優選地，所述非離子型表面活性劑選自乙氧基化辛基酚。甚至更優選地，使用具有包含7至8摩爾環氧乙烷含量的乙氧基辛基酚，該表面活性劑以Triton X-114?這一名稱銷售。對含有細胞壁片段的勻漿物進行常規處理以分離並移除未破碎細胞和溶解組分。ES223 1037-A1描述了例如可以使用不同速度的離心和用緩衝液進行的洗滌。進行上述純化過程後獲得含有細胞壁片段的沉澱。將所述沉澱分散在磷酸鹽緩衝液(PBS)中並進行常規處理，以確保在破碎和純化過程後可能仍保留活力的MTB-C細胞完全失活。所述處理可以是化學處理，例如用甲醛處理，或者是物理處理，例如高壓滅菌或巴氏消毒處理。下文實施例5給出了脂質表徵的實例。
[0133]在另一優選實施方案中，上述脂質體製劑還包含一種或多種鹽或其溶液，其中優選的鹽是氯化鈉。
[0134]在任何上述實施方案的一個甚至更優選的實施方案中，所述脂質體製劑是凍幹的。可以對所述脂質體進行凍幹以由此獲得凍幹脂質體形式的免疫治療劑。為此，可將分散體分配到瓶中並在低溫(如約_15°C至_120°C的溫度，例如_45°C)下以真空(例如0.1至0.5mbar)凍幹。凍幹後得到的瓶中含有適於作為免疫治療劑的脂質體製劑，它們優選保存在極低的溫度下，例如_70°C。
[0135]本發明還提供懸液，其中任一前述權利要求的脂質體製劑重構在溶劑中。在一個優選的實施方案中，該懸液的溶劑是含水溶劑，更優選並且最優選是(或包含)生理血清。將脂質體製劑懸浮在溶劑中的方法為本領域技術人員所熟知。本發明製劑的一個特別有利的特性是，其能夠比包含MTB-C片段的常規脂質體製劑更快地懸浮(見實施例9)。
[0136]本發明的一個目的是提供用於製備藥物組合物的包含MTB-C菌株細胞壁片段的藥劑，其中所述藥劑是(或包含)上文任何所述實施方案中所述的脂質體製劑或其組合。藥物物質的藥物製劑/蓋倫製劑(galenic formulation)的主要範圍是獲得懸液,其有效性和穩定性足以被細胞充分識別，並具有在人或動物體中觸發相關細胞免疫應答的潛力。為此，本發明還提供藥物組合物，其包含上述任何一個或更多個實施方案中描述的脂質體製劑或懸液，以及可藥用載體、賦形劑或稀釋劑。多種這樣的載體、賦形劑和稀釋劑為本領域技術人員所知，它們絕不受限於本公開內容。相反，任何適於作為載體、賦形劑或稀釋劑的物質均可使用。在一個優選的實施方案中，該藥物組合物還包含可藥用佐劑。由此，佐劑應理解為本發明該實施方案中包含的一種物質，其中所述佐劑是能夠在適用於人或動物體時刺激免疫系統應答於靶抗原的物質，其中所述佐劑本身不賦予免疫力。不限於任何具體的佐劑物質，優選的實施方案是其中佐劑是鋁鹽例如氯化鋁，或者礦物油或含有礦物油的組合物例如弗氏不完全佐劑(IFA)或弗氏完全佐劑(CFA)，或者滷化銨如溴化烷基銨，例如溴化二甲基雙十八烷基銨。
[0137]本發明還提供用於人或動物體治療方法的產品。即，提供用於人或動物體治療方法的任何上述一個或更多個實施方案的脂質體製劑、任何所述一個或更多個實施方案的懸液或任何上述一個或更多個實施方案的藥物組合物。
[0138]所述藥物可在黏膜中施用，例如眼、鼻內、口、胃、腸、陰道或尿道的黏膜，或者腸胃外施用，例如皮下、皮內、肌內、靜脈內或腹膜內施用。優選腸胃外施用。在一個具體實施方案中，本發明提供用於注射的該脂質體製劑、懸液或藥物組合物。
[0139]在另一具體實施方案中，本發明提供用於結核治療或預防方法中的該脂質體製劑、懸液或藥物組合物。這些具體實施方案可以單獨或組合實現。本研究的發明人發現，本發明的製劑導致提高的細胞免疫應答，還控制常見的再感染過程(否則這可在潛伏期結核感染中發生)，這是通過加強針對生長中桿菌的免疫力和誘導針對非複製桿菌的免疫力來實現的。
[0140]上文就其在人或動物體治療方法中的用途描述的脂質體製劑、懸液或藥物組合物的合適劑量取決於若干參數，包括施用方法和受治者。在一個優選實施方案中，其用於對人體施用。在其一個優選實施方案中，這以I至1000、優選3至250、更優選4至80、最優選約5、約25或約50 μ g/劑FCMtb的劑量實現。特別優選25 μ g的劑量。
[0141]在又三個具體實施方案中(a)至(C)中，上文就其在人或動物體治療方法中的用途描述的脂質體製劑、懸液或藥物組合物是(a)用於在具有潛伏期結核感染的個體中預防活動性結核的方法中。在另一更優選的實施方案中，(b)用於結核初級預防方法中，以防止已接觸疾病單尚未感染的個體發生感染，或(C)用於治療或預防潛伏期結核的方法中。
[0142]用於人或動物體治療方法中的脂質體製劑、懸液或藥物組合物可以單劑量形式施用，或者同以某時間間隔重複而以多劑量(如2、3、4、5或多於5)施用。優選地，以2至5周(優選3至4周)的間隔分開使用兩劑。
[0143]實施例8、10和12是怎樣將本發明脂質體製劑施用於人或動物受試者的實例。
[0144]上述物質的一個優選實施方案是用於聯合治療或輔助治療的脂質體製劑、懸液或藥物組合物。醫學從業者經常使用輔助治療以獲得更好的治癒率或針對首要治療更快的應答。聯合治療或輔助治療包括使用多於一種藥物來治療人或動物體。聯合治療的第一個具體實施方案是其中所述聯合治療包含抗生素，優選異煙肼和安沙黴素，其中所述安沙黴素最優選是利福黴素。其第二個具體實施方案是其中所述聯合治療包含其他針對結核的預防性疫苗，例如 S.H.E.Kaufmann, Nature Rev.Tmmunol., 2006, 6, 699-704 頁中提到的那些,例如卡介苗(BCG)疫苗、亞單位疫苗或重組BCG疫苗。第一個和第二個具體實施方案可以組
八 [0145]在聯合治療或輔助治療中，這兩種(或更多種)物質的施用可以是同時的，或者可以以在時間上分開的兩次(或更多次)接種中完成。接種之間的時間甚至可以是若干年。在聯合治療的情況中，接種在時間上分開進行，首先優選施用針對結核的預防性疫苗，隨後施用包含有毒力MTB-C菌株之細胞壁片段的藥物，其作為先接種疫苗的再刺激劑(加強劑)。在一個實施方案中，僅對人受試者施用單劑量，該劑量優選為25 μ g FCMtb。
[0146]或者，在輔助治療中同時使用若干不同治療策略或處置類型。在本發明的一個具體實施方案中，將輔助治療施用於免疫系統受損的人受試者(例如患HIV的個體),或者任何由於其他原因而易於感染結核和/或需要這種治療的個體。輔助治療中也可以施用異煙肼。此外，輔助治療可包括施用治療受損免疫系統(例如治療HIV感染)的任何藥物或藥物組合。治療HIV感染的典型藥物是抗病毒藥,其非限制性綜述可見於「Antiretroviraltherapy for HIV infection in adults and adolescents Recommendations for apublic health approach:2010 年版」，作者:World Health Organization, ISBN:9789241599764。
[0147]因此，本發明人為向HIV陽性人受試者提供有效結核保護(如疫苗接種)的需求提供了解決方案。
[0148]可以通過允許檢測待測個體體液中人免疫缺陷病毒(HIV)——導致獲得性免疫缺陷症候群(AIDS)的病毒一存在情況的任何測試來測試個體是被認為HIV陽性或否(SPHIV陰性)，其中體液通常是選自血清、唾液或尿中的任何一種。這種測試可檢測抗體、抗原或 RNA。合適的篩查測試的概況在 Chou et al., Ann.1ntern.Med.2005Jul5; 143 (I): 55-73中給出。
[0149]本發明的發明人意想不到地發現，對HIV陽性人受試者施用的25 μ gFCMtb單劑量提供了強應答。[0150]25 μ g FCMtb單劑量在施用於HIV陰性人受試者時也是強有力的。本發明人顯示，這在患有潛伏期結核的受試者中特別有用(實施例12)。因此，本發明的一個優選實施方案是要向HIV陽性或HIV陰性個體施用的25 μ g FCMtb單劑量。
[0151]本發明還提供製造方法，其特徵在於，該方法適於獲得任何上述一個或更多個實施方案的脂質體製劑以及懸液和包含它們的藥物組合物。一個非限制性實例在下文實施例11中給出。
[0152]本發明還提供2010年保藏於倫敦NCTC的MTB-C菌株NCTC13536。該菌株具有低遺傳多態性。因此，包含NCTC13536之片段的製劑由於這種低遺傳多態性而具有可重複性極聞的優點。
[0153]實施本發明的優選模式
[0154]優選的是，使用50 μ g FCMtb/劑或25 μ g FCMtb/劑或5 μ g FCMtb/劑的具體劑量。例如，劑量為50 μ g FCMtb時，在一瓶製劑中存在表1中給出的量/物質:
[0155]
【權利要求】
1.脂質體製劑，其包含: (a)來自結核分枝桿菌複合群(MTB-C)菌株的片段， (b)脂質體形成劑， I至20% (w/v)的鹿糖,優選2至12% (w/v)的鹿糖,更優選3至8% (w/v)的鹿糖,最優選4至6% (w/v)的鹿糖,其中顆粒的Z-平均尺寸為120nm或更小。
2.權利要求1的脂質體製劑，其中所述顆粒的Z-平均尺寸為40至llOnm，更優選55至 95nm。
3.權利要求1或2中任一項的脂質體製劑，其中所述脂質體製劑為乳劑，並且其中顆粒的Z-平均尺寸優選小於40nm。
4.前述權利要求中任一項的脂質體製劑，其中顆粒的多分散性指數為0.4或更小，優選 0.3。
5.前述權利要求中任一項的脂質體製劑，其中所述結核分枝桿菌複合群(MTB-C)菌株是有毒力的結核分枝桿菌複合群(MTB-C)菌株，優選為2010年保藏於倫敦NCTC的MTB-C菌株 NCTC13536。
6.前述權利要求中任一項的脂質體製劑，其還包含 Cd)表面活性物質， 和/或 Ce) 一種或更多種非離子型表面活性劑。`
7.前述權利要求中任一項的脂質體製劑，其中所述MTB-C細胞的片段是細胞壁片段或者包含細胞壁片段。
8.權利要求6的脂質體製劑，其中(a)與(d)的比值為0.05:1至l:5(w/w)。
9.前述權利要求中任一項的脂質體製劑，其中所述脂質體形成劑是氫化的、部分氫化的或非氫化的磷脂，優選卵磷脂，最優選大豆卵磷脂。
10.權利要求10至12中任一項的脂質體製劑，其中所述表面活性物質選自膽酸鹽、脫氧膽酸鹽、膽固醇和膽固醇琥珀酸單酯。
11.前述權利要求中任一項的脂質體製劑，其中所述MTB-C細胞的片段是細胞壁片段或者包含細胞壁片段。
12.前述權利要求中任一項的脂質體製劑，其包含2010年保藏於倫敦NCTC的MTB-C菌株NCTC13536的片段。
13.前述權利要求中任一項的脂質體製劑，其包含以下的至少兩項，優選三項，更優選四項，最優選全部: (i)第一多肽，其在十二烷基硫酸鈉(SDS)聚丙烯醯胺凝膠電泳後測量的分子量為約70kDa，其中所述第一多肽的質量指紋圖譜與結核分枝桿菌HSP70蛋白(Rv0350)的質量指紋圖譜相似， (ii)第二多肽，其在十二烷基硫酸鈉(SDS)聚丙烯醯胺凝膠電泳後測量的分子量為約38kDa，其中所述第二多肽的質量指紋圖譜與結核分枝桿菌38kDa蛋白(Rv0934)的質量指紋圖譜相似， (iii)第三多肽，其在十二烷基硫酸鈉(SDS)聚丙烯醯胺凝膠電泳後測量的分子量為約30kDa，其中所述第三多肽的質量指紋圖譜與結核分枝桿菌Ag85B蛋白(Rvl866c)的質量指紋圖譜相似，和 (iv)第四多肽，其在十二烷基硫酸鈉(SDS)聚丙烯醯胺凝膠電泳後測量的分子量為約IOkDa,其中所述第四多肽的質量指紋圖譜與結核分枝桿菌CFPlO蛋白(Rv3874)的質量指紋圖譜相似，和 (i)第五多肽，其在十二烷基硫酸鈉(SDS)聚丙烯醯胺凝膠電泳後測量的分子量為約6kDa，其中所述第五多肽的質量指紋圖譜與結核分枝桿菌ESAT-6蛋白(Rv3875)的質量指紋圖譜相似。
14.前述權利要求中任一項的脂質體製劑，其中存在以下結核分枝桿菌抗原的至少一種或其片段:HSP70、38kDa蛋白和Ag85B。
15.前述權利要求中任一項的脂質體製劑，其包含一種或更多種分枝菌酸和/或糖綴合分枝菌酸酯優選海藻糖二分枝菌酸酯，和/或糖脂優選脂阿拉伯甘露聚糖。
16.前述權利要求中任一項的脂質體製劑，其還包含一種或更多種非離子型表面活性劑。
17.前述權利要求中任一項的脂質體製劑，其還包含一種或更多種鹽或其溶液，其中所述鹽優選為氯化鈉。
18.前述權利要求中任一項的脂質體製劑，其中所述脂質體製劑是凍幹的。
19.懸液，其中前述權利要求中任一項的脂質體製劑重構於溶劑中，其中所述溶劑優選為含水溶劑，更優選為生理血清或包含生理血清。
20.藥物組合物，其包含權利要求1至18中任一項的製劑或權利要求19的懸液，以及可藥用載體或稀釋劑，和/或可藥用佐劑。
21.權利要求1至18中任一項的脂質體製劑、權利要求19的懸液或權利要求20的藥物組合物，其用於治療人或動物體的方法中。
22.權利要求21的脂質體製劑、懸液或藥物組合物，其用於治療或預防結核的方法中。
23.權利要求22的脂質體製劑、懸液或藥物組合物，其選自以下: a)用於在具有潛伏期結核感染的個體中預防活動性結核的方法中； b)用於結核的初級預防方法中，以防止接觸過該疾病但尚未感染的個體發生感染，或 c)用於治療或預防潛伏期結核的方法中。
24.權利要求21至23中任一項的脂質體製劑、懸液或藥物組合物，其用於以包含I至1000、優選3至250、更優選4至80、最優選約5、約25或約50 μ g/劑FCMtb的劑量施用於人體。
25.權利要求21至23中任一項的脂質體製劑、懸液或藥物組合物，其用於以25μ gFCMtb的單次接種劑量施用於人體。
26.權利要求21至25中任一項的脂質體製劑、懸液或藥物組合物，其用於聯合治療中，所述聯合治療優選包含抗生素，更優選異煙肼和安沙黴素中的一種或更多種，其中所述安沙黴素最優選是利福黴素。
27.權利要求125的脂質體製劑、懸液或藥物組合物，其用於輔助治療中。
28.權利要求27的脂質體製劑、懸液或藥物組合物，其用於在輔助治療中施用於HIV陽性人受試者。
29.權利要求25的脂質體製劑、懸液或藥物組合物，其用於施用於HIV陰性人受試者。
【文檔編號】A61K31/06GK103796640SQ201280011787
【公開日】2014年5月14日 申請日期:2012年1月4日 優先權日:2011年1月4日
【發明者】佩爾·喬娜·卡唐娜·伊傑勒塞斯, 伊莎貝爾·艾瑪特·裡拉, 布蘭卡·雷耶斯, 艾瑞德納·瑟格, 梅爾斯·艾瑪特 申請人:阿爾西維爾法爾瑪公司