枸杞水煎液在製備治療海洛因視網膜組織損傷藥物中的用途的製作方法

2023-11-12 04:52:32

本發明涉及一種中藥水煎液，尤其涉及一種枸杞水煎液在製備治療海洛因視網膜組織損傷藥物中的用途。

背景技術：

海洛因即二乙醯嗎啡，是一種嚴重危害生命的阿片類物質，極易透過血腦屏障與中樞神經系統和周圍組織中的阿片受體結合，具有較強的鎮痛作用，並對中樞神經有強烈的激動作用，如果長期使用或使用不當，會產生嚴重的藥物依賴，過度興奮中樞神經系統，幹擾機體抗氧化系統的平衡和相關特異蛋白的正常表達，對機體組織結構有病理性損傷。因此，研究中草藥對動物或人體的保護作用，研發對機體無毒副作用和抗藥物損傷的中藥製劑，對於醫學事業的發展具有重要意義。

目前，海洛因等興奮劑濫用、亂用現象較普遍，不良反應事件屢有發生，嚴重影響人類健康和社會穩定。現國內外普遍使用美沙酮、可樂定等藥用來消除興奮劑成癮或戒斷症狀，但這些藥物本身存在著一定的成癮性和耐藥性問題，因此選取毒副作用小、依賴性小及耐藥性小的中藥，對於減少或降低興奮性藥物對機體組織器官造成的損傷具有重要意義。目前還沒有特殊療效的抗海洛因視網膜組織損傷的中藥物。

技術實現要素：

本發明提供一種抗海洛因視網膜組織損傷的枸杞水煎液，以達到抗海洛因損傷、保護組織細胞、促進組織細胞修復的目的。

為此，所採用的技術方案為：

枸杞水煎液在製備治療海洛因視網膜組織損傷藥物中的用途。

含生藥量為0.2~0.4g/ml的枸杞水煎液在製備治療海洛因視網膜組織損傷藥物中的用途。

本發明的生產製備工藝簡單，易於規模化生產；枸杞藥食兼用，無汙染，投資少，藥物價廉，取材方便；毒理學實驗未發現有毒副反應；對海洛因視網膜組織損傷有顯著的保護作用。

枸杞水煎液可提高組織細胞的sod活力，抑制細胞脂質過氧化和炎症反應，抑制細胞inos活性，減弱組織結構損傷，減小bax、caspase-3、tnf-α、nf-κb蛋白的表達，增加細胞活力，具有抗氧化、抗炎和保護視網膜等作用，能有效減緩或減輕海洛因對視網膜組織的損傷。

附圖說明

圖1為本發明小鼠視網膜組織結構的變化；

gcl.節細胞層，inl.內核層，onl.外核層；rcl.視錐視杆層；↑.神經節細胞空泡化；*.內核層疏鬆紊亂；※.外核層疏鬆紊亂；he染色，標尺=25μm（下同）

a.空白對照組15d小鼠視網膜組織結構，視網膜組織結構完整，各層細胞清晰可見；

b.實驗對照組15d小鼠視網膜組織結構，gcl層神經節細胞減少並出現空泡樣變性，inl和onl結構紊亂、疏鬆成網狀；

c-d.枸杞1，2組15d小鼠視網膜組織結構，視網膜組織損傷明顯改善，視網膜gcl層空泡化減輕，inl和onl層排列較為整齊、緊密。

圖2為本發明小鼠視網膜組織bax蛋白表達的變化；

a.空白對照組15d小鼠視網膜組織bax蛋白的表達；

b.實驗對照組15d小鼠視網膜組織bax蛋白的表達；

c-d.枸杞1，2組15d小鼠視網膜組織bax蛋白的表達．

圖3為本發明小鼠視網膜組織caspase-3蛋白表達的變化

a.空白對照組15d小鼠視網膜組織caspase-3蛋白的表達；

b.實驗對照組15d小鼠視網膜組織caspase-3蛋白的表達；

c-d.枸杞1，2組15d小鼠視網膜組織caspase-3蛋白的表達．

圖4為本發明小鼠視網膜組織tnf-α蛋白表達的變化

a.空白對照組15d小鼠視網膜組織tnf-α蛋白的表達；

b.實驗對照組15d小鼠視網膜組織tnf-α蛋白的表達；

c-d.枸杞1，2組15d小鼠視網膜組織tnf-α蛋白的表達．

圖5為本發明小鼠視網膜組織nf-κb蛋白表達的變化；

a.空白對照組15d小鼠視網膜組織nf-κb蛋白的表達；

b.實驗對照組15d小鼠視網膜組織nf-κb蛋白的表達；

c-d.枸杞1，2組15d小鼠視網膜組織nf-κb蛋白的表達．

具體實施方式

下面結合實施例進一步說明本發明。

本發明藥液的製備方法

按照傳統中藥煎劑製備方法，取寧夏枸杞100g，加水1l浸泡1h後煮沸30min，濾過藥汁，藥渣再加水煎煮30min濾過藥汁，合併兩次藥液，再用旋轉蒸發儀將該煎劑濃縮製成0.2~0.4g/ml的生藥水煎液用於以下試驗。

枸杞水煎液對海洛因視網膜損傷的保護作用

選出生10d的昆明小鼠120隻，隨機分為空白對照組、實驗對照（海洛因）組和枸杞水煎液（海洛因+枸杞）1、2組。實驗對照組和枸杞水煎液1、2組採用遞增劑量（2.0g/l、3.0g/l、4.0g/l）海洛因溶液連續（1~5d，6~10d，11~15d）腹腔注射15d，每次注射0.2ml(每天兩次)，注射海洛因1h後，枸杞水煎液1、2組再分別灌胃0.2g/ml、0.4g/ml的枸杞水提液，實驗對照組灌胃等量的生理鹽水，空白對照組腹腔注射和灌胃等量的生理鹽水。在實驗5d、10d和15d時，處死各組小鼠，用比色法檢測小鼠視網膜組織超氧化物歧化酶（sod）、誘導型一氧化氮合酶（inos）活性和丙二醛（mda）含量及血漿血漿穀胱甘肽（gsh）含量和乳酸脫氫酶（ldh）活性，用石蠟包埋法和he染色法觀察小鼠視網膜組織結構的病理變化，用免疫組織化學法檢測小鼠視網膜組織bax、caspase-3、tnf-α、nf-κb蛋白表達量的變化，用image-proplus6.0圖像分析軟體檢測bax、caspase-3、tnf-α、nf-κb蛋白在小鼠視網膜組織中陽性反應產物的平均光密度，實驗數據用spss13.0進行統計分析，結果以平均值±標準差(mean±sd)表示，研究枸杞水煎液對海洛因致視網膜組織損傷的影響。實驗發現實驗對照組小鼠視網膜組織sod活性極顯著降低(p<0.01)，inos活性和mda含量極顯著升高(p<0.01)；血漿gsh含量極顯著降低(p<0.01)，ldh活性顯著升高(p<0.01或p<0.05)；視網膜組織病理性損傷明顯，節細胞層（gcl）細胞減少並出現空泡樣變性，內核層（inl）和外核層（onl）結構紊亂、疏鬆成網狀，染色不均勻；視網膜組織bax、caspase-3、tnf-α、nf-κb蛋白陽性表達的平均光密度值明顯增大，染色加深(p<0.01或p<0.05)。枸杞（海洛因+枸杞）1、2組小鼠視網膜組織sod活性又升高，inos活性和mda含量降低，10d、15d時差異顯著或極顯著(p<0.01或p<0.05)；視網膜組織損傷有明顯改善，視網膜gcl層空泡化減輕，inl和onl層排列較為整齊、緊密，染色較均勻；血漿gsh含量又升高，ldh活性降低，10d、15d時差異顯著(p<0.05或p<0.01)；視網膜組織bax、caspase-3、tnf-α、nf-κb蛋白陽性表達的平均光密度值明顯減小，染色減弱(p<0.01或p<0.05)。結果見圖1~5，表1~3。

綜上所述，枸杞水煎液能有效提高組織細胞的抗氧化活性，減少自由基對視網膜組織細胞的損傷，增加細胞膜穩定性，促進視網膜組織細胞代謝，抑制或中和炎性因子的活性，能明顯降低海洛因致損傷小鼠血漿ldh活性和視網膜組織丙二醛（mda）含量（表1，2），明顯減輕視網膜組織細胞變性（圖1），抑制或減少bax、caspase-3、tnf-α、nf-κb蛋白在視網膜組織細胞中的表達（圖2，3，4，5，表3），增加細胞活力，從而減輕海洛因所致的組織損傷和細胞凋亡。同時，枸杞水煎液還具有安全、無依賴、無毒的作用。