抗生素fki-1778及其生產方法

2023-11-01 04:05:07

專利名稱：：抗生素fki-1778及其生產方法抗生素FKI-1778及其生產方法發明領域本發明涉及新的抗生素FKI-1778，其用於具有針對例如線蟲和節肢動物的生長抑制活性的藥物、動物藥物、農業化學品和呈現針對癌細胞的生長抑制活性的藥物，以及涉及該抗生素的生產方法。本發明中，抗生素FKI-1778意味著總的名稱，包括FKI-1778A物質、FKI-1778B物質、FKI-1778C物質和FKI-1778D物質。
背景技術：
：至今，已經發現了大量通過微生物生產的抗生素，以及一些抗生素，如青黴素、鏈黴素、兩性黴素B、泰樂菌素、莫能菌素、伊維菌素、殺稻瘟菌素S和多氧菌素，在實踐中用於藥物、動物藥物和農業化學品領域中，或在實踐中用於藥物領域抗癌劑如絲裂黴素C、爭光黴素、阿德裡亞黴素、阿克拉黴素A和阿黴素中(UENO,Yoshio和0國RA，Satoshi編輯，"MicrobialMedicinalChemistry"，修訂版第3版，179-227頁，NankodoPub.，1995)。這些抗生素存在一些問題如毒性、副作用和抗性，因此強烈需要開發解決這些問題的新抗生素。
發明內容為了獲得可以解決毒性、副作用和抗性角度上各種問題的抗生素，我們從微生物的培養物質研究和持續開發抗生素，並發現真菌FKI-1778菌林生產的由下式[I]表示的抗生素其中R是—CH=rC—COOH—CH=C—CH2OH一h—=ch2ohch3或其具有針對節肢動物的生長抑制活性和針對癌細胞的細胞周期Gl期的終止活性，並基於這樣的認識，我們完成了本發明。本發明的目的是提供可以解決毒性、副作用和抗性多種問題的新抗生素FKI-1778，及其生產方法。我們持續專門研究微生物產生的代謝物，並發現具有生長抑制活性的物質在從土壤中新分離的微生物，FKI-1778菌林，的培養物中產生。隨後，作為從培養物分離和純化活性物質的結果，我們發現了具有下文所示式[II]、[III]、[IV]和[V]表示的化學結構的物質。由於這樣的物質在之前是從未知道的，因此將這些命名為抗生素FKI-1778A、抗生素FKI-1778B、抗生素FKI-1778C和抗生素FKI-1778D。根據這樣的認識已經完成了本發明，並提供由下式[n]表示的抗生素FKI-1778A:formulaseeoriginaldocumentpage7本發明還提供了由下式[III]表示的抗生素FKI-1778B:formulaseeoriginaldocumentpage7本發明進一步提供了由下式[IV]表示的抗生素FKI-1778C:formulaseeoriginaldocumentpage8[IV]本發明進一步提供了由下式[V]表示的抗生素FKI-1778D:formulaseeoriginaldocumentpage8[V]iih3gZ、ch2oh本發明進一步提供了生產抗生素FKI-1778的方法，包括培養屬於真菌並具有在培養基中產生抗生素FKI-1778能力的微生物，在培養物中累積抗生素FKI-1778，並從所述培養物中分離FKI-1778。本發明進一步提供了生產抗生素FKI-1778的方法，包括培養屬於真菌並具有在培養基中產生抗生素FKI-1778A和/或抗生素FKI-1778B和/或FKI-1778C和/或抗生素FKI-1778D能力的微生物，在培養物中累積抗生素FKI-1778A和/或抗生素FKI-1778B和/或FKI-1778C和/或抗生素FKI-1778D，並從所述培養物中分離FKI-1778A和/或抗生素FKI-1778B和/或FKI-1778C和/或抗生素FKI-1778D。此外，本發明提供了屬於真菌並具有產生抗生素FKI-1778能力的微生物，其中所述微生物是A1bophomasp.FKI-1778FERMBP-08668。具有產生之前式[II]、[III]、[IV]和[V]所表示的抗生素FKI-1778A、抗生素FKI-1778B、FKI-1778C和抗生素FKI-1778D能力的微生物(下文中命名為"生產FKI-1778物質的微生物")屬於真菌，並且是具有產生本發明物質能力的微生物，且不受限制。用於生產本發明抗生素FKI-1778的微生物菌林的優選實例是真菌FKI-1778菌林，其是由本發明者從奄美大島，鹿兒島，日本的土壤樣本中新分離的。本發明Albophomasp.FKI-1778菌林的分類學性質如下。1.形態學特徵該菌株顯示出在土豆葡萄糖瓊脂培養基、麥芽提取物瓊脂培養基，玉米粉瓊脂培養基和Miura瓊脂培養基中的良好生長，還顯示出分生孢子在土豆葡萄糖培養基、玉米粉瓊脂培養基和Miura瓊脂培養基中的良好生長。麥芽提取物瓊脂培養基中，分生孢子的形成受到輕微抑制。分生孢子果的顏色是白色的且有時覆蓋有氣生菌絲。分生孢子果由交織的菌絲之薄網狀結構組織構成並觀察到沒有孔口。形狀是球形至近球形，在培養基上生長的大小為100-300Mm。分生孢子果中，觀察到許多分生孢子具有大小為1.6-2.2pm的無色球形的形態。2.多種瓊脂培養基上的培養性質土豆葡萄糖瓊脂培養基、麥芽提取物培養基、玉米粉瓊脂培養基和Miura瓊脂培養基上25X:培養2周的肉眼觀察結果顯示於表1中。表ltableseeoriginaldocumentpage103.生理學性質(1)最佳生長條件菌林的最佳生長條件是pH4.0-7.0，溫度15.0-28.5'C。(2)生長範圍菌抹的生長範圍是pH3.0-8.0，溫度是7.5-34.0匸。(3)需氧或厭氧性需氧。基於菌抹FKI-1778上述的分類性質、培養性質和生理學性質，將這些性質與已知微生物菌林相比較，認為本菌株為屬於Albophomasp.屬的菌抹並命名為Albophomasp.FKI-1778。該菌抹以Albophomasp.FKI-1778的名稱於2004年3月22日保藏於國際專利生物保藏中心，國家發展工業科學和技術研究所，日本AISTTsulubaCentral6,l-l,Higashil-Chome,Tsukuba-shi,Ibaraki-ken，305-8566並給予永久保藏號FERMBP-08668。儘管在本發明生產抗生素FKI-1778的微生物中，將Albophomasp.FKI-1778菌林描述為優選的產生微生物菌林，公知微生物是非常容易突變的且因為微生物的一般屬性，分類性質不是維持不變的，通過天然或常用的人工突變來突變更多的微生物，例如，紫外線照射或使用突變誘導劑如N-甲基-N，-硝基-N-亞硝基胍，曱磺酸乙酯等。因此，包括這樣人工突變菌林和天然突變菌林的所有屬於真菌並具有生產上文通式[I]所示抗生素FKI-1778能力的微生物菌林可以用於本發明中。本發明抗生素FKI-1778的生產中，將屬於真菌的生產抗生素FKI-1778的菌抹在培養基中培養，並分離和純化抗生素FKI-1778。用於生產抗生素FKI-1778的優選營養源實例是可用於真菌的營養源原料。例如，氮源(如可購得的蛋白腖、肉浸骨、玉米漿、棉花籽油、花生粉、大豆粉、酵母提取物、NZ-胺、酪蛋白水解產物、硝酸鈉、硝酸銨和硫酸銨)，碳水化合物(如甘油、澱粉、葡萄糖、半乳糖和甘露糖)，碳源(如脂肪)，以及無機鹽(如氯化鈉、磷酸鹽、碳酸鉤和硫酸鎂)，可以單獨使用或組合使用。如果需要，可以加入微量金屬鹽和消泡劑如動物、植物或矽酮油。這些物質可以是通過生產微生物生產抗生素FKI-1778的底物，且可以使用用於培養真菌的所有已知原料。對於抗生素FKI-1778的大量生產，優選液體培養，且可以使用的培養溫度在生產微生物生長並產生抗生素FKI-1778的範圍內。可以根據使用上述條件的生產抗生素FKI-1778微生物的性質來有利地選擇培養條件。可以通過與水不混溶的有機溶劑(如氯仿和乙酸乙酯)從培養液中提取抗生素FKI-1778。除了上述提取方法，用於分離親脂物質的已知方法，例如，吸收色語、凝膠過濾色傳、從薄層色鐠挖出、離心逆流色鐠和高效液相色i普可以結合使用或重複使用來分離純化的產物。抗生素FKI-1778A、抗生素FKI-1778B、抗生素FKI-1778C和抗生素FKI-1778D的物化性質如下。[I]抗生素FKI-1778A(1)性質淺黃色粉末(2)分子量501(M+H，快速原子轟擊質譜)(3)分子式:C29H40O7(4)紫外線吸收光譜在曱醇中測得的UV光譜顯示於圖l中，並在294nm具有特定的吸收峰入max。(5)紅外線吸收光鐠通過KBr片測得的IR光鐠顯示於圖2中，並在3430、2960、1687、1564、1450、1390、1259、1097、1036和806cnT1具有特定的吸收峰入max。(6)質子核磁共振光語氚化甲醇(ppra)中的化學位移和旋轉耦合常數(Hz)顯示如下1.89m(lH)、1.35m(lH)、1.84m(lH)、1.73m(1H)、4.87m(lH)、1.84br.d(lH,2)、1.56m(lH)、1.35m(lH)、2.47dt(1H,J=6.0,i4.0)、2.lObr.d(lH，J-14.0)、2.20m(lH)、2.78t(1H,J=12.6)、2.6idd(lH,J=4.2,12.6)、4.52m(lH)、4.25m(lH)、1.02s(3H)、0.93s(3H)、1.42m(lH)、1.26m(lH)、2.22m(lH)、2.18m(lH)、6.73t(1H,J=7.3)、1.82s(3H)、1.93s(3H)、2.21s(3H)、2.05s(3H)。s:單峰，d:雙峰，t:三峰，q:四峰，m:多峰，br:寬，H:質子的數量，J:旋轉耦合常數(Hz)。(7)13C核磁共振光鐠氚化甲醇(ppm)中的化學位移顯示如下。35.Ot、25.lt、7T.3t、41.3t、40.4d、23.8t、32.lt、149.7s、56.2d、38.6s、22,6t、110.6t、23.6q、18.6q、37.2t、23.5t、143.7d、128.7's、171.6s、12.3q、168.ls、104.0s、167.7s、108.7s、156.9s、10.4q、17.2q、172.&s、21.1q0(8)溶劑中的溶解性溶於氯仿、乙酸乙酯、丙酮、甲醇和乙腈。微溶於水和正己烷。(9)顏色反應硫酸中的顏色為褐色。[II]抗生素FKI-1778B(1)性質淺黃色粉末(2)分子量487(M+H，快速原子轟擊質譜)(3)分子式C29H4206(4)紫外線吸收光譜在甲醇中測得的UV光譜顯示於圖3中，並在297認具有特定的吸收峰入max。(5)紅外線吸收光謙通過KBr片測得的IR光鐠顯示於圖4中並在3430、2938、2360、1725、1673、1563、1448、1388、1247、1146、1028和887cn^具有特定的吸收峰Amax。(6)質子核磁共振光i普氚化甲醇中的(ppm)化學位移和旋轉耦合常數(Hz)顯示如下1.85m(lH)、1.34m(lH)、1.87m(lH)、1.71m(1H)、4.87dd(lH,J=2.4，15.6)、1.85dd(lH,J=2.4,15.6)、1.56m(lH)、1.36m(lH)、2.46dt(1H,J=5.4,13.8)、2.06br.d(lH,J=13.8)、2.20m(lH)、2.77t(1H,J-12.6)、2.60dd(1H,J=4.8,12.6)、4.51m(lH)、4.23m(lH)、1.01s(3H)、0.91s(3H)、1.38m(lH)、1.22m(1H)、2.09m(lH)、2.07m(lH)、5.36t(1H,J=7.2)、3.91s(2H)、1.66s(3H)、1.93s(3H)、2.21s(3H)、2.03q(3H)。(7)13C核磁共振光鐠氚化甲醇(ppm)中的化學位移顯示如下。35.Ot、25.lt、77.5t、41.2t、40.4d、23.8t、32.1t、149.9s、56.2d、38.6s、22.4t、110.6t、23.6q、18.7q、38.5t、22.5t、126.8d、135.9s、69.Ot、13.6q、168.ls、104.Os、167.7s、108.7s、156.9s、10.4q、17.2q、172.6s、21.1q0(8)溶劑中的溶解性溶於氯仿、乙酸乙酯、丙酮、甲醇和乙腈。微溶於水和正己烷。(9)顏色反應硫酸中的顏色為褐色。[III]抗生素FKI-1778C(1)性質淺黃色粉末(2)分子量485(M+H，快速原子轟擊質譜)(3)分子式C29H4206(4)紫外線吸收光譜在甲醇中測得的UV光譜顯示於圖5中，並在293nm具有特定的吸收峰入max。(5)紅外線吸收光鐠通過KBr片測得的IR光鐠顯示於圖6中並在3430、2940、2327、1678、1558、1461、1390、1254、1081、1037和808cn^具有特定的吸收峰入max。(6)質子核磁共振光譜氚化曱醇(ppm)中的化學位移和旋轉耦合常數(Hz)顯示如下1.87br.d(lH,J=13.2)、1.34m(lH)、1.82m(1H)、1.72m(1H)、4.76m(1H)、1.77br.d(1H,J=12.6)、1.57m(lH)、1.37m(lH)、2.44dt(1H,J=5.8,14.0)、2.08br.d(1H,J=13.2)、2.17dd(lH,J=3.6，12.6)、2.77t(1H,J=12.0)、2.59dd(lH,J=3.6,12.0)、4.51m(lH)、4.23m(lH)、1.00s(3H)、0.91s(3H)、1.37m(lH)、1.13m(1H)、155m(1H)、1.49m(1H)、3.87t(1H,J=6.0)、1.69s(3H)、4.89m(lH)、4.83m(1H)、1.93s(3H)、2.20s(3H)、2.02s(3H)。(7)"C核磁共振光語氚化甲醇(ppm)中的化學位移顯示如下。35.0t、25.lt、77.7t、41.5t、40.6d、23.8t、32.lt、150-0s、56.2d、38.6s、22.5t、110.6t、23.7q、18.8q、35.lt、29.3t、77.8d、148.8s、17.5q、111.9s、168.4s、104.ls、167.9s、108.7s、157.0s、10.4q、17.2q、172.7s、21(8)溶劑中的溶解性溶於氯仿、乙酸乙酯、丙酮、甲醇和乙腈。微溶於水和正己烷。(9)顏色反應硫酸中的顏色為褐色。[IV]抗生素FKI-1778DU)性質淺黃色粉末(2)分子量487(M+H，快速原子轟擊質鐠)(3)分子式C29H4206(4)紫外線吸收光傳在甲醇中測得的UV光鐠顯示於圖7中，並在295mn具有特定的吸收峰入max。(5)紅外線吸收光鐠通過KBr片測得的IR光鐠顯示於圖8中，並在3430、2933、2358、1677、1563、1450、1388、1257、1197、1085、1033和806cm—i具有特定的吸收峰入max。(6)質子核磁共振光譜氚化甲醇中的(ppm)化學位移和旋轉耦合常數(Hz)顯示如下1.82m(lH)、1.34m(lH)、1.87m(lH)、1.71m(1H)、4.86dd(lH,J=4.2,11.4)、1.82m(lH)、1.56m(lH)、1.36m(lH)、2.46dt(1H,J=4.8,13.2)、2.09br.d(lH,J=13.2)、2,19m(lH)、2.77dd(lH,J-12.0，12.6)、2.59dd(lH,J=4.2，12.6)、4.51m(lH)、4.23m(lH)、1.Ols(3H)、0.91s(3H)、1.33m(1H)、1.19m(1H)、2.1Om(lH)、2.08m(lH)、5.23t(1H,J=7.2)、4.07s(2H,J=12.0,16.2)、1.76s(3H)、1.93s(3H)、2.21s(3H)、2.03q(3H)o(7)13C核磁共振光語氚化甲醇(ppm)中的化學位移顯示如下,35.Ot、25.lt、77.5t、41.2t、40.4d、23.8t、32.lt、149.9s、56.2d、38.6s、22.4t、110.6t、23.6q、18.7q、38.5t、21.8t、127.5d、134.4s、60.0t、20.3q、168.ls、104.0s、167.7s,108.7s、156.9s、10.4q、17.2q、172.6s、211q0(8)溶劑中的溶解性溶於氯仿、乙酸乙酯、丙酮、甲醇和乙腈微溶於水和正己烷。(9)顏色反應硫酸中的顏色為褐色。接著，抗生素FKI-1778A、抗生素FKI-1778B、抗生素FKI-1778C和抗生素FKI-1778D針對多種微生物的抑菌圏直徑顯示於表2中。表2tableseeoriginaldocumentpage17從表2可以看出，本發明的抗生素FKI-1778A、抗生素FKI-1778B、抗生素FKI-1778C和抗生素FKI-1778D呈現出沒有針對多種微生物的生長抑制活性。接著，下文中描述了本發明的抗生素FKI-1778的抗節肢動物活性。將每種抗生素FKI-1778的甲醇溶液放入微量平板中(96孔)(CorningCorp.，U.S.)。在真空中蒸去甲醇後，加入250ul測試培養基(卵磷脂0.01%,碳酸氫鈉7.5mM,氯化鉀7.5mM，二水合氯化鈞7.5mM和七水合硫酸鎂7.5mM)並攪拌15分鐘。將含有一些數量的節肢動物Artemiasalina無節幼體的50jh1緩沖溶液加入每個孔中，這些無節幼體在緩沖液中孵育(Tris20mM，氯化鈉440mM，氯化鎂23mM，碳酸鈉1.9mM，硫酸鎂53mM和氯化鉤10mM)，並在2天後用顯微鏡觀察情況。結果顯示於表3中。表3_tableseeoriginaldocumentpage18從表3可以看出，本發明的抗生素FKI-1778呈現出針對節肢動物的生長抑制活性並可以用作藥物如殺幼蟲劑。節肢動物具有分節的身體，每節具有附肢。所有節肢動物覆蓋由幾丁質、多糖構成的硬外殼，節肢動物包括蜈蚣、蟎蟲、蜘蛛、螃蟹和蝦。此外，如下解釋本發明抗生素FKI-1778針對癌細胞細胞周期Gl期的終止活性。使用96孔微量平板(CorningCorp.,U.S.),將人白血病細胞菌林Jurkat細胞，5xlS個細胞/孔，接種於200ja1RPMI1640培養基中(I區ICorp.，日本)，含有10%胎牛血清和1%青黴素(10，000單位/ml)-鏈黴素(10mg/ml)(InvitrogenInc.，U.S.)的混合物，並培養。向其中加入5jug抗生素FKI-1778，並將混合物在37。C5%C02大氣下孵育24小時，丟棄培養物上清液。將細胞懸浮於0.1%檸檬酸鈉水溶液(200jul)中，溶液中含有0.002%核糖酶A(SigmaCorp.，U.S.)，0.005%碘丙錠(SigmaCorp.，U.S.)和0.3ml/100mlIGEPAL-CA-630(SigmaCorp.,U.S.)。使細胞懸浮液靜置2小時或更長時間後，使用流式細胞計數儀(FACSCalbur,Becton，DickinsonandCompany,U.S.)測量10，000個細胞中的DNA含量，然後使用軟體CellQuest(Calbur,Becton，DickinsonandCompany,U.S.)測量G1期、S期和G2/M期細胞的DM含量。結果顯示於表4中。表4tableseeoriginaldocumentpage19如表4中所證明的，由於抗生素FKI-1778呈現出針對人白血病細胞菌林Jurkat細胞的細胞周期Gl期的終止活性，因此可以用作抗癌劑。圖1顯示了本發明抗生素FKI-1778A的紫外線吸收光鐠。圖2顯示了本發明抗生素FKI-1778A的紅外線吸收光譜。圖3顯示了本發明抗生素FKI-1778B的紫外線吸收光i普。圖4顯示了本發明抗生素FKI-1778B的紅外線吸收光鐠。圖5顯示了本發明抗生素FKI-1778C的紫外線吸收光語。圖6顯示了本發明抗生素FKI-1778C的紅外線吸收光謙。圖7顯示了本發明抗生素FKI-1778D的紫外線吸收光譜。圖8顯示了本發明抗生素FKI-1778D的紅外線吸收光語。實施發明的最佳模式通過提及的實施例來解釋本發明，但是不構成限制於實施例的範圍內。實施例將一菌環培養於瓊脂斜面上的Albophomasp.FKI-1778FERMBP-08668的菌林接種於500ml錐形燒瓶中的100ml液體培養基中(pH6.0)，培養基由葡萄糖2.0%，多聚蛋白腖(NihonSeiyakuCo.,Japan)0.5%,酵母提取物(OrientalYeastCo.，日本)0.2%，瓊脂0.1%，磷酸二氫鉀0.1%和七水合硫酸鎂0.05%組成，並在27。C振蕩培養3天。將lml培養的種子培養液體接種於每個500ml錐形燒瓶中，總共60個燒瓶，每個燒瓶含有100ffll液體培養基，培養基由甘油3.0%,麥片2.0%，乾酵母1.0%，磷酸氫鉀1.0%，磷酸氬二鈉1.0%和七水合硫酸鎂0.05%組成，並在27。C振蕩培養6天。通過離心將培養物分成上清液和菌絲體，用乙酸乙酯提取上清液並真空濃縮來獲得粗製物質I814mg。將該物質溶解於甲醇中並將可溶級分用作己烷-甲醇(2:1)兩層系統中的上層固定床和下層移動床。將溶液裝載於液體-液體分配色諍(MikiK.K.，日本)並用標準的洗脫液來洗脫。將級分在真空中濃縮來獲得粗製物質FKI-1778，98.3mg。將FKI-1778接受HPLC(Xtera0DS，019x100mm，WatersInc.，U.S.)，使用40°/。乙腈的流動相併收集峰值，並將收集的級分在真空中濃縮來分離FKI-1778A，4.4mg，FKI-1778B，18.6mg，FKI-1778C，2.5mg，和FKI-1778D，3.6mg。工業應用如上所解釋的，將屬於真菌並具有產生抗生素FKI-1778能力的微生物在培養基中培養，並在培養基中累積抗生素FKI-1778，然後從培養物中收集抗生素FKI-1778。因此所獲得的抗生素FKI-1778是新的抗生素，可用作殺蟲劑或抗癌劑。從真菌FKI-1778菌林產生該抗生素，並期望用作藥物、動物藥物和農業化學品。權利要求1.由下式[I]表示的抗生素FKI-1778:formulaseeoriginaldocumentpage2其中R是formulaseeoriginaldocumentpage2,或formulaseeoriginaldocumentpage22.組合物FKI-1778，包含由下式[II]表示的FKI-1778A:formulaseeoriginaldocumentpage2和/或由下式[III]表示的FKI-1778B:formulaseeoriginaldocumentpage3和/或由下式[IV]表示的FKI-1778C:formulaseeoriginaldocumentpage3和/或由下式[V]表示的FKI-1778D:formulaseeoriginaldocumentpage33.生產抗生素FKI-1778的方法，包括培養屬於真菌並具有產生抗生素FKI-1778能力的微生物，在培養物中累積抗生素FKI-1778,並從所述培養物中分離抗生素FKI-1778。4.生產FKI-1778的組合物的方法，包括培養屬於真菌並具有產生抗生素FKI-1778A和/或抗生素FKI-1778B和/或抗生素FKI-1778C和/或抗生素FKI-1778D能力的微生物，在培養物中累積抗生素抗生素FKI-1778A和/或抗生素FKI-1778B和/或抗生素FKI-1778C和/或抗生素FKI-1778D，並從所述培養物中分離抗生素抗生素FKI-1778A和/或抗生素FKI-1778B和/或抗生素FKI-1778C和/或抗生素FKI-1778D。5.—種微生物，其中屬於真菌並具有產生抗生素FKI-1778能力的孩i生物是Albophomasp.FKI-1778FERMBP-08668，及其突變體。全文摘要本發明包括培養屬於真菌並具有產生抗生素FKI-1778A和/或抗生素FKI-1778B和/或抗生素FKI-1778C和/或抗生素FKI-1778D能力的微生物，在培養物中累積抗生素抗生素FKI-1778A和/或抗生素FKI-1778B和/或抗生素FKI-1778C和/或抗生素FKI-1778D，並從所述培養物中分離抗生素抗生素FKI-1778A和/或抗生素FKI-1778B和/或抗生素FKI-1778C和/或抗生素FKI-1778D。因此期望將所獲得的物質作為藥物、動物藥物和農業化學品，或作為具有針對癌細胞的生長抑制活性的藥物。文檔編號C12P17/06GK101124211SQ20048003039公開日2008年2月13日申請日期2004年3月24日優先權日2004年3月24日發明者供田洋,增間碌郎,大村智申請人:社團法人北裡研究所