一種細辛腦脂質毫微球及其製備方法
2023-11-01 13:38:22 1
專利名稱：一種細辛腦脂質毫微球及其製備方法
技術領域：
本發明涉及到一種可注射用的細辛腦脂質毫微球及其製備方法，屬於藥品技術領 域。
背景技術：
細辛腦又名α-細辛腦及α-細辛醚，主要存在於石菖蒲等植物的揮髮油中。自60 年代起，國內外對細辛腦進行了廣泛的研究，已證實其有很強的藥理活性，研究結果表明， 該藥可對抗組胺、乙醯膽鹼，緩解支氣管痙攣起到平喘作用，對咳嗽中樞也有較強的抑制作 用；可引起分泌物增加，起到祛痰的作用；有類似氨茶鹼的作用，對離體支氣管平滑肌有松 弛作用；能通過提高大腦皮質的電刺激閥，抑制點刺激的突觸傳導及癲癇性電的擴散，治療 癲癇發作等；同時對肺炎雙球菌、金黃葡萄球菌和大腸桿菌也有不同程度的抑制作用。臨床 應用上，該藥主要應用於肺炎、支氣管哮喘、慢性阻塞性肺疾病及癲癇發作的治療。該藥已上市劑型有片劑、膠囊劑和注射劑。由於細辛腦為脂溶性化合物，難溶於 水，口服給藥吸收差，絕對生物利用度僅為2% 10%，而市售細辛腦注射液採用聚乙二 醇與丙二醇或吐溫為溶劑，易導致嚴重的不良反應(如溶血等)，不利於臨床治療，針對 上述一系列問題，已有部分文獻和專利報導了解決方法，如一種細辛腦脂微球製劑及其 製備方法，專利申請號200510020878. 2，細辛腦注射乳劑及其製備方法，專利申請號為 200510130064. 4，細辛腦幹乳劑及製備方法與應用，專利申請號為2006100211M. 4，細辛腦 亞微乳製劑及製備方法，專利申請號為200610092037. 7，細辛腦脂肪乳劑及其製備方法，專 利號為200510045827. 5，在以上申請的專利技術方案中，藥物細辛腦均被製成可注射用的 水包油型脂質微球製劑(脂肪乳)，與口服給藥相比提高了生物利用度，與現有上市注射液 相比也解決了細辛腦注射液存在的不良反應問題，但是以上專利均為常規注射脂微球或脂 質乳劑，從公開的處方、工藝和發明內容的技術方案看，製劑平均粒徑一般大於150nm，多數 在200nm以上，屬於脂質微球或亞微乳範圍，溶液不透明或不能過濾除菌，不屬於脂質毫微 球範圍。同時這些發明的技術方案均未涉及到藥物組織代謝分布內容，這些技術方案也未 表明其發明的製劑能夠增加靶器官肺組織的藥物濃度，減少肝組織的藥物濃度。我們通過 大量實驗發現，常規注射乳劑，即較大粒徑細辛腦亞微乳乳劑注射入血後絕大部分迅速被 肝臟所攝取，在靶器官肺組織分布較少，不能更好的發揮療效，同時，由於細辛腦對肝臟具 有一定的毒性，分布較多，將不利於製劑的安全性。而本發明的小粒徑細辛腦脂質毫微球可 以顯著提高肺組織的藥物攝取量，而降低肝臟組織的藥物攝取量，從而既可以避免了大粒 徑(平均粒徑大於IOOnm)的常規注射乳劑過多的被肝組織攝取，無法到達靶治療組織更好 的發揮藥效，又可以降低臨床上長期用藥引起的肝毒性或大劑量給藥的潛在用藥毒性。本 發明的細辛腦脂質毫微球制可以降低毒性，增加療效。我們通過對處方組成和工藝的調整，通過對藥物細辛腦、注射用油、磷脂、HS15、甘 油、滅菌注射用水的共同組合考察，製備出小粒徑(平均粒徑小於IOOnm)的細辛腦脂質毫 微球製劑，對比文件專利 200510020878. 2、專利 200610021154. 4、專利 200610092037. 7、專
3利200510130064. 4製備的傳統亞微乳劑，其粒徑將大於150nm，而專利200510045827. 5，雖 然在專利中羅列了包括藥物細辛腦、注射用油、大豆卵磷脂、HS15、純水、甘油組合，但目的 是為了製備幹乳，因此加入了大量凍幹保護劑和採用了凍幹工藝，從而使其乳劑粒徑不可 能小於lOOnm，並且在該專利中，沒有特別指出只有本發明的這種處方組合能夠達到脂質毫 微球小粒徑的這種效果
發明內容
本發明的目的是提供在了一種小粒徑的細辛腦脂質毫微球製劑及其製備方法，其 粒徑小於lOOnm，產品更為穩定，可以過濾除菌，臨床上可以降低潛在肝毒性，更好的發揮藥 效，尤其是在肺部的靶向性顯著提高。通過研究發現，傳統脂肪乳處方，即大豆油與蛋黃卵磷脂、甘油，可以得到 150-1000nm的亞微乳劑，為了得到小粒徑的脂質毫微球，本發明人進行了大量實驗處方考 察，發現只有包含細辛腦、大豆油或中鏈油、卵磷脂、聚乙二醇-12羥基硬脂酸酯(HS15)、甘 油合適比例組合時，經過均化才可製備成穩定的小粒徑的脂質毫微球，其中含有細辛腦脂 肪乳處方中必須含有HS15成分。實驗還發現在這個處方中再加入一些保護劑或上述對比 文件專利中含有的其他成分，或者經過凍幹復溶過程後，乳劑系統將被破壞，不能形成穩定 的小粒徑脂質毫微球。研究證明，這種小粒徑的脂質毫微球在小鼠藥代動力學組織分布的 試驗中，肺組織有較多藥物分布，肝組織分布減少。為了解決上述技術問題，本發明是通過如下技術方案實現的一種細辛腦脂質毫微球，它是由下述原料按重量份數比經均化製備而成細辛腦 0. 2 1. O份，中鏈油或大豆油或它們的混合物5 15份，卵磷脂0. 5 5份，聚乙二醇-12 羥基硬脂酸酯1 30份，甘油1 4份，注射用水40-100份。所述的細辛腦脂質毫微球，它是由下述原料按重量份數比經均化製備而成細辛 腦0. 4 0. 8份，中鏈油或大豆油或它們的混合物8 12份，卵磷脂1 3份，聚乙二醇-12 羥基硬脂酸酯1 10份，甘油2 3份，注射用水70-88份。所述的中鏈油為辛/癸酸甘油酯(簡稱中鏈三甘油酯MCT)。所述的細辛腦脂質毫微球的粒徑在IOOnm以下。所述的卵磷脂為大豆卵磷脂或蛋黃卵磷脂的一種或其混合物。一種細辛腦脂質毫微球的製備方法，按上述重量比分別取細辛腦、中鏈油或大豆 油或它們的混合物、磷脂和聚乙二醇-12羥基硬脂酸酯放入高速勻漿機中在55-65°C混溶， 形成油相；然後按上述重量比分別取甘油和55-65°C注射用水，向該油相加入已分散甘油 的注射用水，以15000 20000rpm均質3 5分鐘形成初乳；然後，使用高壓均質機，在 20 100MP的壓力下，通N2保護，經過4 6次循環，形成均一的乳劑，調節pH至6. 8-7. 2， 製備成乳劑，將乳劑除菌，除菌是先使用0. 45 μ m的微孔濾膜加壓過濾，再採用0. 22 μ m微 孔濾膜過濾，既得。所述的除菌由下述步驟替代，將乳劑分裝後採用熱壓滅菌法進行滅菌。本發明的優點和效果如下本發明製備的細辛腦脂質毫微球製劑，與常規注射乳劑相比較，具有更小的粒徑， 可以達到IOOnm以下，透明，可以採用過濾除菌的方法除菌，減少因熱壓滅菌高溫造成主藥的降解，提高製劑的物理化學穩定性。同時，按照藥代動力學理論，IOOnm以下小粒徑乳劑更 有利於在肺組織存留，減少毒性靶器官肝組織藥物濃度，有利於通過血腦屏障。動物藥代動 力學試驗證實，本發明的脂質毫微球製劑與市售細辛腦注射液及大粒徑乳劑相比，在肺部 的靶向性顯著提高，肝組織分布量卻明顯降低，從而可以降低潛肝毒性，更好的發揮藥效。
圖1是實施例1中處方粒徑圖。圖2是實施例2中處方粒徑圖。圖3是實施例3中處方粒徑圖。圖4是實施例4中處方粒徑圖。圖5是實施例5中處方粒徑圖。圖6是實施例6中處方粒徑圖。圖7是實施例14中幹乳凍幹前後粒徑圖。
具體實施例方式下面結合實施例對本發明做進一步詳細說明，但本發明的保護範圍不受實施例所 限。實施例1 細辛腦脂質毫微球的製備所用原料細辛腦4g，蛋黃卵磷脂12g，大豆油50g，中鏈油50g，甘油24g，聚乙 二醇-12羥基硬脂酸酯35g，按上述重量比分別取細辛腦、中鏈油、大豆油、磷脂和聚乙二 醇-12羥基硬脂酸酯(HS 15)放入高速勻漿機中在60°C混溶，形成油相；然後按上述重 量比取甘油，取60°C注射用水，向該油相加入已分散甘油的注射用水825g，以15000 20000rpm均質3 5分鐘形成初乳；然後，使用高壓均質機，在20 100MP的壓力下，通N2 保護，經過4 6次循環，形成均一的乳劑，調節pH至7，製備好的乳劑首先使用0. 45 μ m的 微孔濾膜加壓過濾，再採用0. 22μπι微孔濾膜過濾；或分裝封口，熱壓滅菌，既得。經測定 平均粒徑73nm，結果見圖1。本實施例所製備的細辛腦脂質毫微球粒徑測定方法，取細辛腦脂質毫微球0. Iml, 加純化水(預先用孔徑為0. 22μπι濾膜過濾)稀釋成5000倍，混勻，做為供試液，採用馬爾 文Nano^S 90粒度測定儀測定。經測定平均粒徑73nm，結果見圖1。本實施例中的中鏈油為辛/癸酸甘油酯(簡稱中鏈三甘油酯MCT)實施例2 細辛腦脂質毫微球的製備所用原料細辛腦2g，大豆油30g，中鏈油70g，蛋黃卵磷脂2g、大豆卵磷脂3g，聚 乙二醇-12羥基硬脂酸酯20g，甘油Mg，加滅菌注射用水至IOOOmL,按照實施例1工藝方法 製備。本實施例所製備的細辛腦脂質毫微球粒徑測定方法是取細辛腦脂質毫微球 0. 1ml，加純化水(預先用孔徑為0. 22μπι濾膜過濾)稀釋成5000倍，混勻，做為供試液，採 用馬爾文NanoIS 90粒度測定儀測定。平均粒徑94nm，結果見圖2。
本實施例中的中鏈油為辛/癸酸甘油酯(簡稱中鏈三甘油酯MCT)實施例3 細辛腦脂質毫微 球的製備所用原料細辛腦5g，中鏈油150g，蛋黃卵磷脂50g，聚乙二醇-12羥基硬脂酸酯 300g，甘油22g，加滅菌注射用水至IOOOmL,按照實施例1工藝方法製備。本實施例所製備的細辛腦脂質毫微球粒徑測定方法是取細辛腦脂質毫微球 0. 1ml，加純化水(預先用孔徑為0. 22μπι濾膜過濾)稀釋成5000倍，混勻，做為供試液，採 用馬爾文Nano-ZS 90粒度測定儀測定。經測定平均粒徑35nm，結果見圖3。本實施例中的中鏈油為辛/癸酸甘油酯(簡稱中鏈三甘油酯MCT)。實施例4 細辛腦脂質毫微球的製備處方細辛腦8g，大豆油150g，蛋黃卵磷脂50g，聚乙二醇-12羥基硬脂酸酯100g， 甘油30g，加滅菌注射用水至IOOOmL,按照實施例1工藝方法製備，熱壓滅菌。本實施例所製備的細辛腦脂質毫微球粒徑測定方法是取細辛腦脂質毫微球 0. 1ml，加純化水(預先用孔徑為0. 22μπι濾膜過濾)稀釋成5000倍，混勻，做為供試液，採 用馬爾文Nano-ZS 90粒度測定儀測定。經測定平均粒徑87nm，結果見圖4。實施例5 細辛腦脂質毫微球的製備所用原料細辛腦10g，大豆油75g，中鏈油75g，大豆卵磷脂50g，聚乙二醇-12羥 基硬脂酸酯200g，甘油26g，加滅菌注射用水至IOOOmL,按照實施例1工藝方法製備。本實施例所製備的細辛腦脂質毫微球粒徑測定方法是取細辛腦脂質毫微球 0. 1ml，加純化水(預先用孔徑為0. 22μπι濾膜過濾)稀釋成5000倍，混勻，做為供試液，採 用馬爾文Nano-ZS 90粒度測定儀測定。經測定平均粒徑45nm，結果見圖5。本實施例中的中鏈油為辛/癸酸甘油酯(簡稱中鏈三甘油酯MCT)。實施例6 細辛腦脂質毫微球的製備所用原料細辛腦4g，大豆卵磷脂18g，大豆油15g，癸酸甘油酯35g，甘油24g，聚 乙二醇-12羥基硬脂酸酯10g，加滅菌注射用水至IOOOmL,按照實施例1工藝方法製備。本實施例所製備的細辛腦脂質毫微球粒徑測定方法是取細辛腦脂質毫微球 0. 1ml，加純化水(預先用孔徑為0. 22μπι濾膜過濾)稀釋成5000倍，混勻，做為供試液，採 用馬爾文Nano-ZS 90粒度測定儀測定。經測定平均粒徑95nm，結果見圖6。實施例7 HPLC法測定細辛腦脂質毫微球中的藥物含量對照品的配製取α-細辛腦對照品10mg，精密稱定，至IOmL棕色容量瓶中，加無 水乙醇溶液並稀釋至刻度，精密量取該溶液ImL至IOmL棕色容量瓶中，加無水乙醇稀釋至 刻度，製成100 μ g/mL對照品溶液(1)，0. 45 μ m膜濾過，備用。供試品的配置精密移取實施例1方法製得α -細辛腦脂質毫微球0. 2mL至IOmL 棕色容量瓶中，加入無水乙醇破乳得到澄清透明溶液，無水乙醇稀釋至刻度，搖勻，0. 45 μ m 膜濾過，備用。
含量測定用十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑；以甲醇-水(72 28)為流動相； 檢測波長為313nm ；柱溫30°C;流速為lmL/min ；精密量取供試品溶液和對照品溶液各20 μ 1 注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標法以峰面積計算，即得含量。實施例8 HPLC法測定生物樣品中α-細辛腦的含量。內標液的配置取吲哚美辛對照品10mg，精密稱定，至IOmL棕色容量瓶中，加乙 腈溶液並稀釋至刻度，精密量取該溶液ImL至IOmL棕色容量瓶中，加乙腈稀釋至刻度，製成 100 μ g/mL內標溶液(2)，0. 45 μ m膜濾過，備用。對照品的配置分別精密量取實施例3中(1)溶液與內標溶液(2)適量，無水 乙醇稀釋至刻度，製成每ImL中含有α -細辛腦與吲哚美辛對照品各20 μ g/mL的溶液， 0. 45 μ m有機膜濾過，備用。組織中α -細辛腦的含量測定用十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑；以甲醇-水 (色譜級磷酸調PH至3. 0) (72 28)為流動相；檢測波長為313nm ；柱溫30°C;流速為ImL/ min ；精密量取對照品溶液及組織樣品離心提取液各20 μ 1注入液相色譜儀，記錄色譜圖， 按內標法以峰面積計算，即得含量。血漿中α -細辛腦的含量測定用十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑；以甲醇-水 (色譜級磷酸調PH至3. 0) (69 31)為流動相；檢測波長為313nm ；柱溫30°C ；流速為ImL 每分鐘；精密量取對照品溶液及組織樣品離心提取液各20 μ 1注入液相色譜儀，記錄色譜 圖，按內標法以峰面積計算，即得含量。主要試劑與輔料來源雞卵清蛋白(OVA)(Sigma) ； α -細辛腦(哈爾濱三聯藥 業)；α -細辛腦注射液(遼寧玉皇藥業)；磷脂(Ε80，S75) (Lipoid) ；HS15 (巴斯夫)實施例9 實施例1製備的細辛腦脂質毫微球(LMS-2)的組織分布實驗肺炎模型動物的準備預先腹腔注射OVA與氫氧化鋁的生理鹽水混懸液，2周後給予小鼠OVA-生理鹽水 溶液體外霧化激發，連續三天，每天一次，經肺組織病理切片結果驗證，M小時後得到間質 性肺炎模型小鼠。將實驗動物(間質性肺炎模型小鼠)隨即分成三組，給藥前禁食12小時，自由飲 水，分別尾靜脈注射S (細辛腦注射液)、LMS-I (基本處方製備，粒徑205nm)、LMS-2 (73nm)， 給藥劑量為40mg/kg，給藥後分別於0. 5,1. 0,5. 0、10、15、30分鐘處死小鼠，取出心、肝、脾、 肺、腎、腦，生理鹽水洗淨，濾紙吸去分，精密稱定各組織質量，適當比例加入生理鹽水勻漿， 取出IOOuL組織勻漿液，加入無水乙醇及內標液後加入200uL乙腈沉澱蛋白並提取藥物，低 溫離心，取上清液，進樣分析，矩形法計算各給藥組的不同組織中的AUC值，得出數據如下
權利要求
1.一種細辛腦脂質毫微球，其特徵在於它是由下述原料按重量份數比經均化製備而 成細辛腦0. 2 1. 0份，中鏈油或大豆油或它們的混合物5 15份，卵磷脂0. 5 5份， 聚乙二醇-12羥基硬脂酸酯1 30份，甘油1 4份，注射用水40-100份。
2.根據權利要求1所述的細辛腦脂質毫微球，其特徵在於它是由下述原料按重量份數 比經均化製備而成細辛腦0. 4 0. 8份，中鏈油或大豆油或它們的混合物8 12份，卵磷 脂1 3份，聚乙二醇-12羥基硬脂酸酯1 10份，甘油2 3份，注射用水70-88份。
3.根據權利要求1或2所述的細辛腦脂質毫微球，其特徵在於所述的中鏈油為辛癸/ 酸甘油酯。
4.根據權利要求1或2所述的細辛腦脂質毫微球，其特徵在於所述的細辛腦脂質毫微 球的粒徑在IOOnm以下。
5.根據權利要求1或2所述的細辛腦脂質毫微球，其特徵在於所述的卵磷脂為大豆卵 磷脂或蛋黃卵磷脂的一種或其混合物。
6.一種權利要求1或2所述的細辛腦脂質毫微球的製備方法，按上述重量比分別取細 辛腦、中鏈油或大豆油或它們的混合物、磷脂和聚乙二醇-12羥基硬脂酸酯放入高速勻漿 機中在55-65°C混溶，形成油相；然後按上述重量比分別取甘油和55-65°C注射用水，向該 油相加入已分散甘油的注射用水，以15000 20000rpm均質3 5分鐘形成初乳；然後，使 用高壓均質機，在20 100MP的壓力下，通N2保護，經過4 6次循環，形成均一的乳劑， 調節PH至6. 8-7. 2，製備成乳劑，將乳劑除菌，除菌是先使用0. 45 μ m的微孔濾膜加壓過濾， 再採用0. 22 μ m微孔濾膜過濾，既得。
7.根據權利要求6所述的細辛腦脂質毫微球的製備方法，其特徵在於除菌由下述步驟 替代，將乳劑分裝後採用熱壓滅菌法進行滅菌。
全文摘要
本發明公開了一種細辛腦脂質毫微球及其製備方法，屬於藥品技術領域。細辛腦脂質毫微球，它是由下述原料按重量份數比經均化製備而成細辛腦0.2～1.0份，中鏈油或大豆油或它們的混合物5～15份，卵磷脂0.5～5份，聚乙二醇-12羥基硬脂酸酯1～30份，甘油1～4份，注射用水40-100份。製備時將水相加入油相，攪拌形成粗品，調節pH值，過均質機，反覆均化得到終產品。該脂質毫微球的平均粒徑小於100nm，本發明的脂質毫微球製劑與市售細辛腦注射液及大粒徑乳劑相比，在肺部的靶向性顯著提高，肝組織分布量卻明顯降低，從而可以降低潛在的肝毒性，更好的發揮藥效。
文檔編號A61P25/08GK102085183SQ200910220358
公開日2011年6月8日 申請日期2009年12月3日 優先權日2009年12月3日
發明者李樂, 艾莉, 董英傑 申請人:瀋陽萬嘉生物技術研究所有限公司