治療阿爾茨海默病的新療法的製作方法

2023-12-10 07:45:37

本申請為國際申請pct/ep2010/066510於2012年7月3日進入中國國家階段、申請號為201080060454.8、發明名稱為「治療阿爾茨海默病的新療法」的分案申請。本發明涉及治療阿爾茨海默病(alzheimer’sdisease，ad)和相關病症的組合物和方法。更具體而言，本發明涉及阿爾茨海默病和相關病症的新的組合療法。本發明具體涉及單獨或者組合起來可以有效地調節突觸功能和/或血管生成和/或細胞應激反應的化合物。本發明還涉及選擇治療阿爾茨海默病的藥物或藥物組合的方法與治療阿爾茨海默病或相關病症的方法。
背景技術：
：ad為典型皮質性痴呆，其特徵為皮質相關區域受累造成的記憶減退，並伴隨言語困難(語言病症，其中存在說話和言語理解受損)、運動障礙(在沒有運動或感覺損傷的情況下不能協調和執行某些有意的動作和姿勢)和失認(認知物體、人、聲音、形狀或氣味的能力)。還會涉及諸如痙攣性下肢輕癱(影響下肢的虛弱症)等特殊症狀(1-4)。阿爾茨海默病的發病隨著年齡急劇增長。目前ad是痴呆症的最常見原因，它的臨床特徵在於認知功能總體下降，其發展緩慢並使晚期患者臥床、失禁且依賴於監護。平均來說，死亡發生在診斷後9年(5)。ad的發病率隨著年齡急劇增長。據聯合國人口規劃項目估計，到2050年80歲以上的人數將達到3.7億。目前，據估計，50％的85歲以上老人患有ad。因此，50年內世界上將有超過1億人患有痴呆症。需要長久護理和其他服務的巨額人數將嚴重影響醫療、財政和人力資源(6)。記憶損傷是該疾病的早期特點且涉及情景記憶(對於日常事件的記憶)。在該疾病的晚期涉及語義記憶(對於言語和視覺意義的記憶)。相反，直到晚期還保持工作記憶(涉及用於短期存儲和處理信息的結構和過程的短期記憶)和程序記憶(無意識記憶，即技巧和程序的長期記憶)。隨著疾病進展，顯現出語言損傷、視覺感知和空間缺損、失認和失用的其他特點。阿爾茨海默病的經典情況具有足夠的特徵性，允許鑑別約80％的病例(7)。然而，確實存在著臨床異質性，這不僅對於臨床管理來說是重要的，而且為不同的功能形式提供了進一步的特定藥物治療啟示(8)。ad的病理標誌物包括含有β-澱粉樣蛋白(aβ)的澱粉樣斑塊、含有τ的神經元纖維纏結(nft)以及神經元和突觸功能障礙和喪失(9-11)。最近十年，關於ad的病因已經提出了兩種主要假說：「澱粉樣蛋白級聯假說」，其認為神經退行性過程是由澱粉樣蛋白前體蛋白(app)的異常加工所觸發的一系列事件(12)，以及「神經元細胞骨架退化假說」(13)，其提出細胞骨架改變是觸發事件。解釋ad發展的最廣為接受的理論仍然是澱粉樣蛋白級聯假說(14-16)，並且ad研究人員主要集中於確定潛藏在與aβ蛋白質相關的毒性之後的機制。相反地，由於基礎和實踐兩方面的考慮，τ蛋白所受到的製藥工業的關注比澱粉樣蛋白少得多。此外，與其它兩者相比，突觸密度改變是與認知受損最相關的病變。研究顯示，澱粉樣蛋白病變似乎以神經遞質特異性方式發展，其中膽鹼能末梢表現得最易受損，其次是穀氨酸能末梢，最後是gaba能末梢(11)。技術實現要素：本發明的目的是提供治療ad和相關病症的新的治療方法。發明人已經鑑定出若干藥物，其單獨或者組合起來可以有效地影響參與ad的途徑，並且可以代表治療ad和相關病症的新的有效的療法。因此，本發明提供治療ad病和相關病症的新的組合物和方法。更具體而言，本發明涉及用於治療阿爾茨海默病或相關病症的組合物，其包括選自下列至少兩種化合物的組合：氨基己酸、阿坎酸鹽、氨氯地平、阿加曲班、巴氯芬、西洛他唑、西那卡塞、氯吡格雷、二羥丙茶鹼、非諾多泮、來氟米特、米帕林、甲巰咪唑、苯乙雙胍、丙胺卡因、利福布汀、磺胺異噁唑、他達拉非、特比萘芬、桂利嗪、環匹羅司、依普利酮、甘珀酸、舒洛地特、乙胺嗪(carbamazine)、異戊巴比妥、頭孢替坦、丁四硝酯、甲氯噻嗪、利塞膦酸鹽、恩丙茶鹼、膽茶鹼、甲乙雙酮、頭孢甲肟、安搏律定、依託咪酯、米格列奈、貝尼地平、左西孟旦和唑尼沙胺、或者其鹽或藥物前體或衍生物或緩釋製劑。本發明的另一個目的涉及用於同時、分別或順序給藥的組合物，其包括選自下列至少兩種化合物的組合：氨基己酸、阿坎酸鹽、氨氯地平、阿加曲班、巴氯芬、西洛他唑、西那卡塞、氯吡格雷、二羥丙茶鹼、非諾多泮、來氟米特、米帕林、甲巰咪唑、苯乙雙胍、丙胺卡因、利福布汀、磺胺異噁唑、他達拉非、特比萘芬、桂利嗪、環匹羅司、依普利酮、甘珀酸、舒洛地特、乙胺嗪、異戊巴比妥、頭孢替坦、丁四硝酯、甲氯噻嗪、利塞膦酸鹽、恩丙茶鹼、膽茶鹼、甲乙雙酮、頭孢甲肟、安搏律定、依託咪酯、米格列奈、貝尼地平、左西孟旦和唑尼沙胺、或者其鹽或藥物前體或衍生物或緩釋製劑。最優選的藥物組合包括2、3、4或5種不同的藥物，進而更優選2或3種。此外，以上藥物組合還可以用於與目前被用於ad的其他藥物或治療進一步組合。本發明還涉及治療阿爾茨海默病或相關病症的方法，該方法包括對有需要的對象同時、分別或順序施用上面所公開的藥物組合。本發明的另一目的是治療阿爾茨海默病或相關病症的方法，該方法包括對有需要的對象同時、分別或順序施用調節突觸功能的藥物組合和/或調節血管生成的藥物和/或調節細胞應激反應的藥物。本發明的另一目的在於製備用於治療阿爾茨海默病或相關病症的藥物的方法，該方法包括檢測候選藥物對於突觸功能和血管生成以及細胞應激反應的活性和選擇改善突觸功能、減輕血管生成調節異常和調節細胞應激反應的候選藥物的步驟。本發明還涉及製備用於治療阿爾茨海默病或相關病症的組合物的方法，該方法包括製備調節突觸功能的藥物和/或減輕血管生成調節異常的藥物和/或調節細胞應激反應的藥物的組合，用於向有需要的對象同時、分別或順序給藥。附圖說明圖1：在β-澱粉樣蛋白中毒的大鼠原代皮質神經元培養物中所選藥物對軸突生長的影響。p<0.01；p<0.00001：與介質差異顯著。*：p<0.05；****：p<0.0001：與aβ25-35差異顯著。雙側student’st檢驗。20μmaβ25-35產生顯著中毒，比用介質處理的神經元高25％。阿坎酸鹽(圖1a)或唑尼沙胺(圖1b)顯著阻止這種中毒。圖2：在β-澱粉樣蛋白中毒的大鼠原代皮質神經元培養物中苯乙雙胍對軸突生長的影響。p<0.01：與介質差異顯著。**：p<0.001：與aβ25-35差異顯著。雙側student’st檢驗。20μmaβ25-35產生顯著中毒，比用介質處理的神經元高25％。苯乙雙胍顯著阻止這種中毒。圖3：所選藥物對於β-澱粉樣肽對從大鼠腦內皮細胞釋放ldh的毒性的保護作用。p<0.05：與介質差異顯著。**：p<0.01；***：p<0.0001；****：p<0.00001：與aβ25-35差異顯著。雙側student’st檢驗。30μmaβ25-35產生中度但顯著的中毒(圖3a至d)。來氟米特(圖3a)、特比萘芬(圖3b)、磺胺異噁唑(圖3c)或巴氯芬(-)(圖3d)顯著阻止這種中毒。此外，來氟米特和特比萘芬不僅阻止澱粉樣損害作用，而且也減少培養基中的自發性細胞死亡。圖4：在β-澱粉樣蛋白中毒的中毒後，所選藥物對ngf所分化的pc12的存活率的影響。p<0.00001：與介質差異顯著。**：p<0.01；***：p<0.0001：與aβ25-35差異顯著。雙側student’st檢驗。10μmaβ25-35產生顯著中毒，比用介質處理的神經元高25％(圖4a和4b)。丙胺卡因(prilocain)(fig4a)或氨氯地平(fig4b)顯著阻止這種中毒。圖5：在β-澱粉樣蛋白中毒的大鼠原代皮質神經元培養物中，所選藥物對於ldh釋放的影響。p<0.000001：與介質差異顯著。*：p<0.05；***：p<0.001：與aβ25-35差異顯著。雙側student’st檢驗。20μmaβ25-35產生顯著中毒，比用介質處理的神經元高25％。(圖5a和b)。唑尼沙胺(圖5a)或磺胺異噁唑(圖5b)或來氟米特(圖5c)顯著阻止這種中毒。圖6：在hbmec中所選藥物預處理對人aβ1-42損傷的影響。a)用於藥物篩選的實驗模型的驗證：10nmvegf預處理1小時顯著保護毛細血管網免受這種澱粉樣損傷(與澱粉樣中毒相比+78％毛細血管網)。*：p<0.05：與對照(沒有中毒)差異顯著。p<0.05：與澱粉樣中毒差異顯著(anova+dunettpost-hoc檢驗)。如圖6b、圖6c、圖6d、圖6e、圖6f、圖6g、圖6h中的劑量-響應實驗分別所示，磺胺異噁唑、左西孟旦、特比萘芬、巴氯芬、氨基己酸、舒洛地特或非諾多泮顯著阻止該中毒。p<0.05：與下一劑量差異顯著。*：p<0.05：與澱粉樣中毒差異顯著(anova+dunettpost-hoc檢驗)。圖7：在人aβ1-42對大鼠原代皮質細胞的毒性中，所選藥物預處理對ldh釋放的影響。a)用於藥物篩選的實驗模型的驗證：bdnf(50ng/ml)預處理1小時顯著保護神經元免受該澱粉樣損傷(-62％)，其被作為神經保護的陽性對照。*：p<0.05：與對照(沒有中毒)差異顯著。p<0.05：與澱粉樣中毒差異顯著(anova+dunettpost-hoc檢驗)。對於所有實驗，與用介質處理的神經元相比，aβ1-42產生顯著中毒。巴氯芬(-86％)(b)、磺胺異噁唑(-42％)(c)、左西孟旦(-133％)(d)、依託咪酯(-50％)(e)、甘珀酸(-39％)(f)和桂利嗪(-50％)(g)顯著阻止這種中毒。對於所有實驗，p<0.05：與aβ1-42中毒差異顯著(anova+dunettpost-hoc檢驗)。圖8：在β-澱粉樣蛋白中毒的hbmec培養物中，磺胺異噁唑和左西孟旦組合治療對毛細血管網總長度的影響。p<0.05，與aβ1-42差異顯著。*：p<0.05與介質差異顯著。anova+dunettpost-hoc檢驗。聚集的人澱粉樣肽(2.5μmaβ1-42)產生顯著中毒，比用介質處理的神經元高40％。磺胺異噁唑和左西孟旦的組合顯著阻止這種中毒(a)，而在那些濃度下，左西孟旦(b)和磺胺異噁唑(c)單獨使用對中毒沒有顯著影響。圖9：在β-澱粉樣蛋白中毒的hbmec培養物中，磺胺異噁唑和特比萘芬組合治療對毛細血管網總長度的影響。p<0.05，與aβ1-42差異顯著。*：p<0.05，與介質差異顯著。anova+dunettpost-hoc檢驗。聚集的人澱粉樣肽(2.5μmaβ1-42)產生顯著中毒，比用介質處理的神經元高40％。磺胺異噁唑和左西孟旦的組合顯著阻止這種中毒(a)，而在那些濃度下，磺胺異噁唑(b)和特比萘芬(c)單獨使用對中毒沒有顯著影響。圖10：在β-澱粉樣蛋白中毒的hbmec培養物中，巴氯芬和左西孟旦組合治療對毛細血管網總長度的影響。p<0.05，與aβ1-42差異顯著。*：p<0.05，與介質差異顯著。anova+dunettpost-hoc檢驗。聚集的人澱粉樣肽(2.5μmaβ1-42)產生顯著中毒，比用介質處理的神經元高40％。巴氯芬和左西孟旦的組合顯著阻止這種中毒(a)，而在那些濃度下，左西孟旦(b)和巴氯芬(c)單獨使用對中毒沒有顯著影響。圖11：在β-澱粉樣蛋白中毒的hbmec培養物中，特比萘芬和氨基己酸組合治療對毛細血管網總長度的影響。p<0.05，與aβ1-42差異顯著。*：p<0.05，與介質差異顯著。anova+dunettpost-hoc檢驗。聚集的人澱粉樣肽(2.5μmaβ1-42)產生顯著中毒，比用介質處理的神經元高40％。特比萘芬和氨基己酸的組合顯著阻止這種中毒(a)，而在那些濃度下，氨基己酸(b)和特比萘芬(c)單獨使用對中毒沒有顯著影響。圖12：在β-澱粉樣蛋白中毒的hbmec培養物中，氨基己酸和左西孟旦組合治療對毛細血管網總長度的影響。p<0.05，與aβ1-42差異顯著。*：p<0.05，與介質差異顯著。anova+dunettpost-hoc檢驗。聚集的人澱粉樣肽(2.5μmaβ1-42)產生顯著中毒，比用介質處理的神經元高40％。左西孟旦和氨基己酸的組合顯著阻止這種中毒(a)，而在那些濃度下，氨基己酸(b)和左西孟旦(c)單獨使用對中毒沒有顯著影響。圖13：在β-澱粉樣蛋白中毒的hbmec培養物中，特比萘芬和左西孟旦組合治療對毛細血管網總長度的影響。p<0.05，與aβ1-42差異顯著。*：p<0.05，與介質差異顯著。anova+dunettpost-hoc檢驗。聚集的人澱粉樣肽(2.5μmaβ1-42)產生顯著中毒，比用介質處理的神經元高40％。特比萘芬和氨基己酸的組合顯著阻止這種中毒(a)，而在那些濃度下，特比萘芬(b)和左西孟旦(c)單獨使用對中毒沒有顯著影響。發明詳述本發明提供治療ad和相關病症的新療法。本發明公開了藥物或藥物組合的新用途，其允許有效矯治這些疾病並可以用於患者治療。術語「ad相關病症」包括ad型老年痴呆(sdat)、帕金森病、路易體痴呆、血管性痴呆、輕度認知損傷(mci)、年齡相關記憶損傷(aami)和與衰老有關的問題、腦炎後帕金森綜合症、肌萎縮性側索硬化(als)、多發性硬化(ms)和唐氏綜合症。如本文所用，病症的「治療」包括由病症引發的症狀的治療、阻止、預防、延遲或減少。術語治療具體包括控制疾病發展和相關症狀。術語「改善」，當涉及突觸功能時，包括與對象的現有功能相比突觸功能的任何提高。這樣的改善可以包括恢復、即達到正常水平，或者較低的但仍足以改善患者狀況的提高。如在實驗部分中所描述的，這樣的改善可以使用已知的生物學檢驗評估或驗證。術語「增加」，當涉及血管生成時，包括與對象的現有水平相比血管生成的任何增加。這樣的改善可以包括包括恢復、即達到正常水平，或者較低的但仍足以改善患者狀況的增加。如在實驗部分中所描述的，這樣的改善可以使用已知的生物學檢驗評估或驗證。術語「抑制」，當涉及細胞應激反應(「csr」)時，包括與對象的現有活性相比csr的任何減少。這樣的減少包括足以改善患者狀況的部分減少、如5-20％，以及更大量的減少，如20-50％或更完全的抑制，如50％以上。如在實驗部分中所描述的，這樣的抑制可以使用已知的生物學檢驗評估或驗證。此外，在本發明的情形中，具體化合物的指定意在不僅包括具體指出的分子，而且也包括其任何純度的藥用可接受的鹽、水合物、酯、醚、異構體、外消旋體、結合物或前體藥物。術語「組合或組合治療/療法」指向對象共同施用至少兩種或更多種藥物以產生生物學效應的治療。在根據本發明的組合治療中，所述至少兩種藥物可以一起或分別、同時或順序施用。此外，所述至少兩種藥物可以通過不同途徑或方案施用。因此，雖然其可以配製在一起，但組合的藥物也可以分別配製。如上所述，本發明涉及使用改善突觸功能和/或增加血管生成和/或抑制細胞應激反應的特定藥物或藥物組合，對於有需要的對象治療阿爾茨海默病和相關病症的組合物和方法。通過全面整合包括描述阿爾茨海默病的不同方面的細胞生物學研究、表達譜實驗和遺傳關聯性研究結果的實驗數據，以及細胞信號轉導和功能途徑中存在的聯繫，發明人已經發現，突觸功能、血管生成和細胞應激反應代表在患有ad的對象中發生改變的重要機制。通過進一步的實驗研究，如實施例中所述，發明人已經選出有效改變這些途徑且有效改善ad的藥物或藥物組合。因而這些藥物和組合代表治療ad和相關病症的新方法。用下述標準選擇位於所述功能網絡中並且牽涉阿爾茨海默病的基因：(1)-與作為病因造成阿爾茨海默病的家族性病例的基因(app、apoe、早老素、τ蛋白)直接相互作用，(2)-用標準(1)選出的基因的功能性配偶體，(3)-用標準(2)選出的基因的最接近的功能性配偶體。通過該方法，發明人已經確定，負責突觸功能、血管生成和細胞應激反應的網絡是影響阿爾茨海默病的主要功能性網絡。發明人已經更具體地確定，突觸喪失是阿爾茨海默病的功能相關標誌，其最終導致進行性認知衰退、記憶喪失和痴呆症。重要的是，與在神經原纖維纏結的形成或澱粉樣斑塊的沉積中所出現的其他ad特異性細胞病變標誌相比，突觸喪失與阿爾茨海默病狀的特徵性認知缺損的相關性更好。因此，突觸組織和突觸塑性代表了在阿爾茨海默病情況下的治療幹預的重要靶點。app蛋白是由軸突轉運並在突觸前末梢中加工的，其導致aβ在突觸中高度積累。aβ42的寡聚體以及澱粉樣斑塊本身對於抑制長期加深來說是重要的，並且是造成ad患者的記憶損傷的主要原因。我們的數據整合過程揭示出一組基因，其牽涉ad中的突觸變形，並且在形式上可以分為三個主要的功能組：參與突觸後緻密物(「psd」)的組織和突觸後膜處神經信號正確傳遞的蛋白質；確保神經遞質釋放的蛋白質；以及參與軸突生長和突觸結構發育成熟的蛋白質。因此，在具體實施方案中，本發明認識到，對於ad的有效治療，重要的是改善參與突觸後緻密物的蛋白質的活性。在我們的分析所鑑別出的基因中，dlg2基因代表特別的目標，其編碼maguk家族的蛋白質且在成簇的膜結合受體、細胞粘合分子和基於肌動蛋白的細胞骨架之間產生界面(17-18)。發明人已經鑑別出一大族離子型/代謝型穀氨酸和生長因子受體，其與在興奮性突觸處的dlg2蛋白或dlg2/psd95蛋白複合體直接相互作用，並且因此可以被作為治療阿爾茨海默病的治療靶點。因此，在另一個具體實施方案中，本發明還認識到，對於ad的有效治療，重要的是改善參與調節突觸前膜處神經遞質釋放的蛋白質的活性。神經遞質在突觸前質膜的受限的且高度特化的活性區域處的釋放由動作電位觸發，並且受到電壓依賴性鈣cav通道、maxik/bk通道(大電導鈣激活鉀通道)和cgmp依賴性prkg蛋白激酶的組合作用的控制，如我們的分析所表明的，所述因素全部與阿爾茨海默病的發展密切相關。除了這些涉及神經遞質釋放的功能模塊外，發明人已經確定了另外一組蛋白質，其與阿爾茨海默病進程中的突觸神經遞質失調有關，負責突觸小泡(例如，stx2、stxbp6、bin1、rab3b、unc13c和rims1/2骨架蛋白)的成熟、停靠和融合。因此，這些功能途徑被優先列為治療阿爾茨海默病的合適的治療靶點。在另一種具體實施方案中，本發明進一步認識到，對於ad的有效治療，重要的是改善參與調節軸突生長和導向的蛋白質的活性。參與調節軸突生長和導向的蛋白質允許神經元前體細胞和軸突向適合的目的地遷移，從而確保正確的定位和連接；它們也參與新形成的突觸的發育成熟以及ad病中軸突和突觸的降解。這些過程對於認知功能的執行發揮了重要作用，並且似乎對aβ沉積的毒性效應極為易感。軸突生長和導向的連續步驟受到細胞外或膜連接的導蛋白、腦信號蛋白、肝配蛋白、dll和slit分子與其各自的功能受體的組合作用的緊密控制，它們中大多數是通過我們的數據挖掘過程揭示出來的。大部分軸突生長受體的激活的功能性結果與其差異性調節小gtpaserhoa、rac1和cdc42的活性的能力、與主要負責軸突退縮和生長錐萎陷的rhoagtpase密切相關(19)。這些信號途徑已經被認為是治療阿爾茨海默病的合適的治療靶點。因此，本發明認識到，對於ad的有效治療，重要的是通過調節上述靶基因和蛋白質，改善在阿爾茨海默病和其他神經發生障礙中所改變的突觸功能。通過數據挖掘過程，發明人也已經確定，負責血管生成的網絡代表在阿爾茨海默病中被影響的另一主要功能網絡。血管生成在確保組織穩態和對環境和生理挑戰、如缺氧或傷口癒合的適應性響應中發揮了重要作用；其功能障礙促成從心血管併發症到腫瘤生長和轉移的眾多和不同病變的發病機理。雖然阿爾茨海默病傳統上被認為是伴隨側枝血管病變的神經退行性病症，但我們的分析允許重新評定血管失調的發病機理影響，並認為血管生成途徑在這種疾病的病因中有重要的且可能為病因性的作用。發明人已經發現調節血管生成的基因在牽涉阿爾茨海默病的信號網絡中極度富集。這一結論對於預防和治療阿爾茨海默病具有深遠意義，並為這種複雜的神經退行性疾病的組合治療提供了新的指導方針。在密切牽涉與阿爾茨海默病有關的血管重塑的信號途徑中，已經鑑別出由vegfr1、erbb4、notch、dcc、cd44、肝配蛋白受體和鈣粘蛋白所介導的若干功能模塊。如我們的數據挖掘過程所揭示的，可能參與形成在阿爾茨海默病中所出現的血管缺陷的其他靶蛋白包括il20r、leptr、nrp1與nrp2、以及內皮素ednra受體、參與胞外基質的組織和重塑的蛋白質(thbs2、lama1、col4a2、adamts12和adam10)或者在諸如催乳素、生長激素和胎盤催乳素等公知的血管生成調節因子的功能加工中發揮重要作用的蛋白質(例如tll2)(20)。此外，我們還發現了，與阿爾茨海默病有關的若干基因代表被amp激活的激酶的上遊調節因子和下遊效應子、血管系統的重要調節子(例如，瘦素和cntf受體、凝血酶信號途徑、camkk2β和lkb1激酶)(21-24)。這一發現允許我們將ampk介導的信號網絡確定為治療阿爾茨海默病的合理治療靶點。磷脂酸(pa)、溶血磷脂酸(lpa)和鞘氨醇1-磷酸(s1p)是具有強信號特點的天然磷脂。值得注意的是，這些磷脂生長因子對於內皮細胞的血管生成潛力顯示出不同作用(25)。利用我們的數據挖掘過程，我們鑑別出了參與lpa代謝或通過lpa信號進行調節並且與阿爾茨海默病的發展潛在相關的許多基因(mtr、mat2b、cubn、atp10a、them2、pitpnc1、enppg、sgpp2、agpat、dgkh、dgkb、mgst2、pld2和drd2)。因此，我們推斷該信號網絡代表治療阿爾茨海默病的合適的治療靶點。本發明還強調了通過調節上述靶基因和蛋白質，增強在阿爾茨海默病和其他神經退行性疾病中被改變的血管生成的重要性。最後，我們已經確定，負責細胞應激反應的網絡是在阿爾茨海默病中被影響的第三主要功能網絡。我們已經更具體確定，細胞應激反應是阿爾茨海默病的功能相關標誌。如上所述，發明人已經在細胞應激反應網絡中鑑別出三個蛋白質家族，其與阿爾茨海默病的發生和控制在功能上相關，並且代表組合治療的有價值的靶點。更具體而言，這些蛋白質組是參與鈣穩態、蛋白質摺疊和執行細胞凋亡的蛋白質。在具體實施方案中，本發明更具體涉及利用調節參與鈣穩態的蛋白質的活性的藥物組合的組合物和方法。鈣是最重要的胞內信使之一，其在神經元和內皮細胞中介導細胞過程的多效性，包括突觸可塑性、血管生成和細胞凋亡。胞內鈣水平是由質膜和內質網中的一系列鈣通透性通道、鈣泵和鈣交換體的協同作用精確調節的(26-27)。我們已經鑑別出牽涉鈣穩態途徑的基因網絡，其功能可以被突變的早老蛋白或阿爾茨海默病進程中的毒性β-澱粉樣蛋白改變。其中，ip3r(itpr1)和ryr3受體、在er水平調節鈣穩態的atp2a3(serca3ca2+atpase)、從真核細胞中逆濃度梯度驅出鈣離子的質膜atpaseatp2b1和電壓門控na+通道代表治療阿爾茨海默病的潛在治療靶點的特別目標。在另一個具體實施方案中，本發明更具體涉及利用調節參與蛋白質摺疊或聚集的蛋白質的活性的藥物組合的組合物和方法。蛋白質聚集是ad的主要細胞病理現象。阿爾茨海默病的兩個主要細胞標誌出現在神經原纖維纏結(nfts)的形成和澱粉樣斑塊的沉積中，其分別由聚集的超磷酸化τ蛋白和app蛋白的aβ片段構成。容易聚集的另一個蛋白質——α-突觸核蛋白更被認為是帕金森病的特殊標誌物，但是，在散發性或家族性形式的阿爾茨海默病的大多數病例中，其可以在澱粉樣斑塊中被檢測出來。我們已經確定牽涉調節摺疊、翻譯後修飾和阿爾茨海默病相關蛋白聚集體的每個主要成分的加工的若干基因，作為治療阿爾茨海默病的適當的治療靶點，——例如與app相互作用並調節其穩定性和功能的apba1和apba2bp蛋白，或者牽涉α-突觸核蛋白的清除的park2泛素-蛋白連接酶(28)。同樣地，在阿爾茨海默病的進程中gsk-3β激酶可能在蛋白質錯摺疊的病變中發揮尤其重要的作用。我們的發現，即調節gsk-3β激酶活性的一些信號模塊及其與τ蛋白-wwox(29)、透明質酸(hyaluronan)cd44受體、wnt受體fz2/ror2和胰島素受體/ptprg磷酸酶複合體(30)的相互作用與阿爾茨海默病的進展有關，增強了這一結論。在另一個具體實施方案中，本發明涉及利用抑制細胞凋亡的藥物組合的組合物和方法，在阿爾茨海默病中所述細胞凋亡被認為是負責細胞喪失的主要細胞機制。如我們的分析所鑑別出的，阿爾茨海默病情況下的細胞凋亡最有可能是通過典型的p53依賴性途徑而進行的。可以通過翻譯後修飾和通過與正和負調節因子的相互作用調控p53蛋白。我們已經鑑別出了若干這樣的調節蛋白-wwox、mdm1、hipk2和pml，這證實了關於在阿爾茨海默病中p53蛋白在執行細胞死亡中的關鍵作用的提議(31-33)。在可能直接並具體涉及誘導阿爾茨海默病情況下的細胞凋亡的受體系統中，參與軸突導向和血管生成的unc5c(unc-5同系物c)和dcc(在結腸癌中缺失)導蛋白受體代表具體目標。這些受體被認為是推定的條件性腫瘤抑制子，因為，在不存在其配體時，它們作為誘導細胞凋亡的導蛋白依賴性受體起作用(34)。導蛋白-1與這些受體的結合抑制依賴p53的細胞凋亡，而p53直接參與導蛋白-1與其受體的轉錄調節(33)。此外，已知dcc受體是由早老素加工，這表明了其在阿爾茨海默病發展中的重要作用(35)。因此，我們的數據挖掘表明，除了由被破壞的鈣穩態和過量ros生產所激發的更為非特異性的促凋亡程序外，導蛋白受體依賴性和p53介導的程序性細胞死亡也可能是牽涉阿爾茨海默病情況下的病理性細胞喪失的特異性促凋亡途徑之一。在具體實施方案中，本發明更具體涉及利用抑制參與鈣穩態、蛋白質摺疊和執行細胞凋亡的至少兩種不同蛋白質的活性的藥物組合的組合物和方法。在優選的實施方案中，本發明提出了新的組合物，其通過調節上述靶基因和蛋白質，可以用於抑制阿爾茨海默病和其他神經退行性疾病中所引發的細胞應激反應。如上所述，本發明涉及對於有需要的對象治療阿爾茨海默病或相關病症的組合物和方法，其利用改善突觸功能和/或增加血管生成和/或抑制細胞應激反應的藥物的組合。更具體地，發明人已經選出並檢驗了許多改變一種或者優選全部上述途徑的藥物或藥物組合。如實施例中所公開的，這些藥物組合對於阿爾茨海默病具有強烈作用，並且代表該病的新療法。這些藥物組合尤其有利，因為它們影響不同的途徑並因而更加有效。此外，由於其有效性和作用模式，可以低劑量使用該藥物組合，這是另一個非常重要的優勢。以下表1中列出了最優選的藥物。表1在這方面，本發明的優選的目的涉及組合物，其包括選自氨基己酸、阿坎酸鹽、氨氯地平、阿加曲班、巴氯芬、西洛他唑、西那卡塞、氯吡格雷、二羥丙茶鹼、非諾多泮、來氟米特、米帕林、甲巰咪唑、苯乙雙胍、丙胺卡因、利福布汀、磺胺異噁唑、他達拉非、特比萘芬、桂利嗪、環匹羅司、依普利酮、甘珀酸、舒洛地特、乙胺嗪、異戊巴比妥、頭孢替坦、丁四硝酯、甲氯噻嗪、利塞膦酸鹽、恩丙茶鹼、膽茶鹼、甲乙雙酮、頭孢甲肟、安搏律定、依託咪酯、米格列奈、貝尼地平、左西孟旦和唑尼沙胺的至少兩種化合物、或者其任何純度的鹽或藥物前體或衍生物或者其緩釋製劑的組合，用於同時、分別或順序給藥。在具體實施方案中，本發明涉及組合物，其包括選自氨基己酸、桂利嗪、環匹羅司、依普利酮、甘珀酸、舒洛地特、乙胺嗪、異戊巴比妥、頭孢替坦、丁四硝酯、甲氯噻嗪、利塞膦酸鹽、恩丙茶鹼、膽茶鹼、甲乙雙酮、頭孢甲肟、安搏律定、依託咪酯、米格列奈、貝尼地平和左西孟旦的至少一種化合物、或者其鹽或前體藥物或衍生物或緩釋製劑，與選自阿坎酸鹽、氨氯地平、阿加曲班、巴氯芬、西洛他唑、西那卡塞、氯吡格雷、二羥丙茶鹼、非諾多泮、來氟米特、米帕林、甲巰咪唑、苯乙雙胍、丙胺卡因、利福布汀、磺胺異噁唑、他達拉非、特比萘芬和唑尼沙胺的至少一種化合物、或者其鹽或前體藥物或衍生物或緩釋製劑組合，用於同時、分別或順序給藥。如實施例中所公開的，使用以上所列藥物中至少2種的組合療法致使阿爾茨海默病的有效矯治。根據本發明的療法可以單獨或作為藥物組合進行。在優選的實施方案中，以用於合併、分別或順序給藥的組合使用本發明的藥物，從而提供最有效的作用。在這方面，根據本發明的治療阿爾茨海默病的組合物使用改善突觸功能的藥物和減輕血管生成的藥物和/或抑制細胞應激反應的藥物。更具體而言，為了用於治療阿爾茨海默病或相關病症，根據本發明的組合物可以選自包括下列藥物組合中至少一種的組合物：-ampk的調節劑(優選苯乙雙胍)和鈉通道scn1a的抑制劑與bk通道的激活劑(優選唑尼沙胺)或者bk通道的調節劑(優選甲氯噻嗪)，-ampk的調節劑(優選苯乙雙胍)和gaba能和穀氨酸能受體活性的調節劑(優選選自阿坎酸鹽、依託咪酯和安搏律定)，-ampk的調節劑(優選苯乙雙胍)和ednra內皮素受體的拮抗劑(優選磺胺異噁唑)，-鈉通道scn1a的抑制劑與bk通道的激活劑(優選唑尼沙胺)或bk通道的調節劑(優選甲氯噻嗪)以及ryr3蘭尼鹼受體的調節劑(優選丙胺卡因)，-gabbr2受體的調節劑(優選巴氯芬)和rhoa的調節劑(優選選自特比萘芬和利塞膦酸鹽)，-gabbr2受體的調節劑(優選巴氯芬)和ednra內皮素受體的拮抗劑(優選磺胺異噁唑)，-gabbr2受體的調節劑(優選巴氯芬)和鈉通道scn1a的抑制劑與bk通道的激活劑(優選唑尼沙胺)或bk通道的調節劑(優選甲氯噻嗪)，-gabbr2受體的調節劑(優選巴氯芬)和has1-3透明質酸合成酶的調節劑(優選來氟米特)，-鈉通道scn1a的抑制劑與bk通道的激活劑(優選唑尼沙胺)或bk通道的調節劑(優選甲氯噻嗪)以及腺苷受體adora1/2/3的調節劑(優選二羥丙茶鹼)，-鈉通道scn1a的抑制劑與bk通道的激活劑(優選唑尼沙胺)或bk通道的調節劑(優選甲氯噻嗪)以及ednra內皮素受體的拮抗劑(優選磺胺異噁唑)-rhoa的調節劑(優選選自特比萘芬和利塞膦酸鹽)和ednra內皮素受體的拮抗劑(優選磺胺異噁唑)，-rhoa的調節劑(優選選自特比萘芬和利塞膦酸鹽)和磷脂酶pla1a和pla2的抑制劑(優選米帕林)，-rhoa的調節劑(優選選自特比萘芬和利塞膦酸鹽)和gaba能和穀氨酸能受體活性的調節劑(優選選自阿坎酸鹽、依託咪酯和安搏律定)，-rhoa的調節劑(優選選自特比萘芬和利塞膦酸鹽)和化學伴侶(優選利福布汀)，-ampk的調節劑(優選苯乙雙胍)和pde11a與pde4a、pde5a磷酸二酯酶的抑制劑(優選選自他達拉非、恩丙茶鹼和膽茶鹼)，-鈉通道scn1a的抑制劑與bk通道的激活劑(優選唑尼沙胺)或bk通道的調節劑(優選甲氯噻嗪)以及凝血酶受體f2r信號轉導的調節劑(優選阿加曲班和頭孢甲肟)，-ampk的調節劑(優選苯乙雙胍)和嘌呤能受體p2ry1和p2ry12的調節劑(優選氯吡格雷)，-gaba能和穀氨酸能受體活性的調節劑(優選選自阿坎酸鹽、依託咪酯和安搏律定)和casr的調節劑(優選西那卡塞)，-ednra內皮素受體的拮抗劑(優選磺胺異噁唑)和casr的調節劑(優選西那卡塞)，-rhoa的調節劑(優選選自特比萘芬和利塞膦酸鹽)和凝血酶受體f2r信號轉導的調節劑(優選選自阿加曲班和頭孢甲肟)，-gabbr2受體的調節劑(優選巴氯芬)和嘌呤能受體p2ry1和p2ry12的調節劑(優選氯吡格雷)，-rhoa的調節劑(優選選自特比萘芬和利塞膦酸鹽)和嘌呤能受體p2ry1和p2ry12的調節劑(優選氯吡格雷)，-鈉通道scn1a的抑制劑與bk通道的激活劑(優選唑尼沙胺)或bk通道的調節劑(優選甲氯噻嗪)和電壓門控鈣cacna通道的拮抗劑(優選選自桂利嗪、貝尼地平、甲乙雙酮和氨氯地平)，-gaba能和穀氨酸能受體活性的調節劑(優選選自阿坎酸鹽、依託咪酯和安搏律定)和電壓門控鈣cacna通道的拮抗劑(優選選自桂利嗪、貝尼地平、甲乙雙酮和氨氯地平)，-鈉通道scn1a的抑制劑與bk通道的激活劑(優選唑尼沙胺)或bk通道的調節劑(優選甲氯噻嗪)和hif1a信號轉導的調節劑(優選環匹羅司)，-gaba能和穀氨酸能受體的調節劑(優選選自阿坎酸鹽、依託咪酯和安搏律定)和hif1a信號轉導的調節劑(優選環匹羅司)，-ednra內皮素受體的拮抗劑(優選磺胺異噁唑)和氧化磷酸化作用的調節劑(優選選自異戊巴比妥和甲巰咪唑)，-鈉通道scn1a的抑制劑與bk通道的激活劑(優選唑尼沙胺)或bk通道的調節劑(優選甲氯噻嗪)和氧化磷酸化作用的調節劑(優選選自異戊巴比妥和甲巰咪唑)，-ednra內皮素受體的拮抗劑(優選磺胺異噁唑)和維生素k代謝的調節劑(優選頭孢替坦)，-鈉通道scn1a的抑制劑與bk通道的激活劑(優選唑尼沙胺)或bk通道的調節劑(優選甲氯噻嗪)和維生素k代謝的調節劑(優選頭孢替坦)，-gaba能和穀氨酸能受體活性的調節劑(優選選自阿坎酸鹽、依託咪酯和安搏律定)和prkg1的調節劑(優選丁四硝酯)，-鈉通道scn1a的抑制劑與bk通道的激活劑(優選唑尼沙胺)或bk通道的調節劑(優選甲氯噻嗪)和prkg1的調節劑(優選丁四硝酯)，-ednra內皮素受體的拮抗劑(優選磺胺異噁唑)和prkg1的調節劑(優選丁四硝酯)，-kcnj11的調節劑(優選選自米格列奈和左西孟旦)和prkg1的調節劑(優選丁四硝酯)，-kcnj11的調節劑(優選選自米格列奈和左西孟旦)和-鈉通道scn1a的抑制劑與bk通道的激活劑(優選唑尼沙胺)或bk通道的調節劑(優選甲氯噻嗪)，-kcnj11的調節劑(優選選自米格列奈和左西孟旦)和-rhoa的調節劑(優選選自特比萘芬和利塞膦酸鹽)。在最優選的實施方案中，本發明涉及選自氨基己酸、阿坎酸鹽、氨氯地平、阿加曲班、巴氯芬、西洛他唑、西那卡塞、氯吡格雷、二羥丙茶鹼、非諾多泮、來氟米特、米帕林、甲巰咪唑、苯乙雙胍、丙胺卡因、利福布汀、磺胺異噁唑、他達拉非、特比萘芬、桂利嗪、環匹羅司、依普利酮、甘珀酸、舒洛地特、乙胺嗪、異戊巴比妥、頭孢替坦、丁四硝酯、甲氯噻嗪、利塞膦酸鹽、恩丙茶鹼、膽茶鹼、甲乙雙酮、頭孢甲肟、安搏律定、依託咪酯、米格列奈、貝尼地平、左西孟旦和唑尼沙胺的化合物、或者其鹽或藥物前體或衍生物或緩釋製劑的任何組合，用於治療阿爾茨海默病或相關病症。在具體的實施方案中，用於治療阿爾茨海默病或相關病症的本發明的組合物包括選自氨基己酸、桂利嗪、環匹羅司、依普利酮、甘珀酸、舒洛地特、乙胺嗪、異戊巴比妥、頭孢替坦、丁四硝酯、甲氯噻嗪、利塞膦酸鹽、恩丙茶鹼、膽茶鹼、甲乙雙酮、頭孢甲肟、安搏律定、依託咪酯、米格列奈、貝尼地平和左西孟旦的至少一種化合物、或者其鹽或藥物前體或衍生物或緩釋製劑，與選自阿坎酸鹽、氨氯地平、阿加曲班、巴氯芬、西洛他唑、西那卡塞、氯吡格雷、二羥丙茶鹼、非諾多泮、來氟米特、米帕林、甲巰咪唑、苯乙雙胍、丙胺卡因、利福布汀、磺胺異噁唑、他達拉非、特比萘芬和唑尼沙胺的至少一種化合物、或者其鹽或藥物前體或衍生物或緩釋製劑相組合。本發明的另一個特別優選的實施方案涉及用於對有需要的對象治療阿爾茨海默病(ad)或相關病症的組合物，其至少包括氨基己酸、或者其鹽或藥物前體或衍生物或緩釋製劑。在具體的實施方案中，將氨基己酸與優選選自阿坎酸鹽、氨氯地平、阿加曲班、巴氯芬、西洛他唑、西那卡塞、氯吡格雷、二羥丙茶鹼、非諾多泮、來氟米特、米帕林、甲巰咪唑、苯乙雙胍、丙胺卡因、利福布汀、磺胺異噁唑、他達拉非、特比萘芬、桂利嗪、環匹羅司、依普利酮、甘珀酸、舒洛地特、乙胺嗪、異戊巴比妥、頭孢替坦、丁四硝酯、甲氯噻嗪、利塞膦酸鹽、恩丙茶鹼、膽茶鹼、甲乙雙酮、頭孢甲肟、安搏律定、依託咪酯、米格列奈、貝尼地平、左西孟旦和唑尼沙胺的至少一種其他化合物、或者其鹽或藥物前體或衍生物或緩釋製劑組合使用，用於合併、分別或順序給藥。本發明的優選組合物包括氨基己酸、或者其鹽或藥物前體或衍生物或緩釋製劑，和選自巴氯芬、磺胺異噁唑、特比萘芬和左西孟旦的至少一種其他化合物、或者其鹽或藥物前體或衍生物或緩釋製劑，用於合併、分別或順序給藥。這樣的組合物本身也代表了本發明的具體目的。本發明還涉及對有需要的對象治療阿爾茨海默病(ad)或相關病症的方法，其包括向所述對象施用有效量的氨基己酸、或者其鹽或藥物前體或衍生物或緩釋製劑，優選如上所述組合施用。本發明的另一個特別優選的實施方案涉及用於對有需要的對象治療阿爾茨海默病(ad)或相關病症的組合物，其至少包括左西孟旦、或者其鹽或藥物前體或衍生物或緩釋製劑。在具體的實施方案中，將左西孟旦與優選選自氨基己酸、阿坎酸鹽、氨氯地平、阿加曲班、巴氯芬、西洛他唑、西那卡塞、氯吡格雷、二羥丙茶鹼、非諾多泮、來氟米特、米帕林、甲巰咪唑、苯乙雙胍、丙胺卡因、利福布汀、磺胺異噁唑、他達拉非、特比萘芬、桂利嗪、環匹羅司、依普利酮、甘珀酸、舒洛地特、乙胺嗪、異戊巴比妥、頭孢替坦、丁四硝酯、甲氯噻嗪、利塞膦酸鹽、恩丙茶鹼、膽茶鹼、甲乙雙酮、頭孢甲肟、安搏律定、依託咪酯、米格列奈、貝尼地平和唑尼沙胺的至少一種另外的化合物、或者其鹽或藥物前體或衍生物或緩釋製劑組合使用，用於合併、分別或順序給藥。本發明的優選的組合物包括左西孟旦、或者其鹽或藥物前體或衍生物或緩釋製劑，和選自氨基己酸、巴氯芬、磺胺異噁唑和特比萘芬的至少一種另外的化合物、或者其鹽或藥物前體或衍生物或緩釋製劑，用於合併、分別或順序給藥。這樣的組合物本身也代表了本發明的具體目的。本發明還涉及對有需要的對象治療阿爾茨海默病(ad)或相關病症的方法，其包括向所述對象施用有效量的左西孟旦、或者其鹽或藥物前體或衍生物或緩釋製劑，優選如上所述組合施用。本發明的另一個特別優選的實施方案涉及用於對有需要的對象治療阿爾茨海默病(ad)或相關病症的組合物，該組合物至少包括依普利酮、甘珀酸、舒洛地特、桂利嗪或乙胺嗪、或者其鹽或藥物前體或衍生物或緩釋製劑。在具體的實施方案中，將依普利酮、甘珀酸、舒洛地特、桂利嗪或乙胺嗪與優選選自左西孟旦、氨基己酸、阿坎酸鹽、氨氯地平、阿加曲班、巴氯芬、西洛他唑、西那卡塞、氯吡格雷、二羥丙茶鹼、非諾多泮、來氟米特、米帕林、甲巰咪唑、苯乙雙胍、丙胺卡因、利福布汀、磺胺異噁唑、他達拉非、特比萘芬、桂利嗪、環匹羅司、依普利酮、甘珀酸、舒洛地特、乙胺嗪、異戊巴比妥、頭孢替坦、丁四硝酯、甲氯噻嗪、利塞膦酸鹽、恩丙茶鹼、膽茶鹼、甲乙雙酮、頭孢甲肟、安搏律定、依託咪酯、米格列奈、貝尼地平和唑尼沙胺的至少一種另外的化合物、或者其鹽或藥物前體或衍生物或緩釋製劑組合使用，用於合併、分別或順序給藥。本發明的優選的組合物包括依普利酮、甘珀酸、舒洛地特、桂利嗪或乙胺嗪、或者其鹽或藥物前體或衍生物或緩釋製劑，和選自左西孟旦、氨基己酸、巴氯芬、磺胺異噁唑和特比萘芬的至少一種另外的化合物、或者其鹽或藥物前體或衍生物或緩釋製劑，用於合併、分別或順序給藥。這樣的組合物本身也代表了本發明的具體目的。本發明還涉及對有需要的對象治療阿爾茨海默病(ad)或相關病症的方法，其包括向所述對象施用有效量的依普利酮、甘珀酸、舒洛地特、桂利嗪或乙胺嗪、或者其鹽或藥物前體或衍生物或緩釋製劑，優選如上所述組合施用。最優選地，為了對有需要的對象組合治療阿爾茨海默病(ad)或相關病症，本發明的組合物包括用於合併、分別或順序給藥的下列藥物組合中的至少一種：-苯乙雙胍和唑尼沙胺，-苯乙雙胍和甲氯噻嗪，-苯乙雙胍和阿坎酸鹽，-苯乙雙胍和磺胺異噁唑，-巴氯芬和氨基己酸，-巴氯芬和左西孟旦，-巴氯芬和特比萘芬，-巴氯芬和利塞膦酸鹽，-巴氯芬和磺胺異噁唑，-巴氯芬和唑尼沙胺，-巴氯芬和甲氯噻嗪，-巴氯芬和磺胺異噁唑，-巴氯芬和來氟米特，-氨基己酸和磺胺異噁唑，-氨基己酸和特比萘芬，-氨基己酸和左西孟旦，-左西孟旦和磺胺異噁唑，-左西孟旦和特比萘芬，-唑尼沙胺和二羥丙茶鹼，-甲氯噻嗪和二羥丙茶鹼，-唑尼沙胺和丙胺卡因，-甲氯噻嗪和丙胺卡因，-唑尼沙胺和磺胺異噁唑，-苯乙雙胍和氯吡格雷-阿坎酸鹽和西那卡塞-磺胺異噁唑和西那卡塞-特比萘芬和阿加曲班，-特比萘芬和頭孢甲肟，-巴氯芬和氯吡格雷-特比萘芬和氯吡格雷-利塞膦酸鹽和氯吡格雷，-唑尼沙胺和桂利嗪-阿坎酸鹽和丁四硝酯-磺胺異噁唑和丁四硝酯-米格列奈或左西孟旦和丁四硝酯，-米格列奈或左西孟旦和唑尼沙胺，-米格列奈或左西孟旦和特比萘芬，-米格列奈或左西孟旦和利塞膦酸鹽.-米格列奈或左西孟旦和甲氯噻嗪，-甲氯噻嗪或唑尼沙胺和磺胺異噁唑，-特比萘芬或利塞膦酸鹽和磺胺異噁唑，-特比萘芬或利塞膦酸鹽和米帕林，-特比萘芬或利塞膦酸鹽和阿坎酸鹽，-特比萘芬或利塞膦酸鹽和利福布汀，-他達拉非或恩丙茶鹼或膽茶鹼和苯乙雙胍，-唑尼沙胺或甲氯噻嗪和阿加曲班或頭孢甲肟，-利塞膦酸鹽和阿加曲班或頭孢甲肟，-唑尼沙胺或甲氯噻嗪和桂利嗪或貝尼地平或甲乙雙酮或氨氯地平，-阿坎酸鹽和桂利嗪或貝尼地平或甲乙雙酮或氨氯地平，-唑尼沙胺或甲氯噻嗪和環匹羅司，-磺胺異噁唑和異戊巴比妥，-唑尼沙胺或甲氯噻嗪和異戊巴比妥，-磺胺異噁唑和頭孢替坦，-唑尼沙胺或甲氯噻嗪和頭孢替坦，-唑尼沙胺或甲氯噻嗪和丁四硝酯。本發明的優選組合物的具體實例包括用於合併、分別或順序給藥的下列藥物組合中的一種：-巴氯芬和氨基己酸，-巴氯芬和左西孟旦，-氨基己酸和磺胺異噁唑，-氨基己酸和特比萘芬，-氨基己酸和左西孟旦，-左西孟旦和磺胺異噁唑，-左西孟旦和特比萘芬，-依普利酮和左西孟旦，-依普利酮和磺胺異噁唑，-依普利酮和非諾多泮，-舒洛地特和左西孟旦，-舒洛地特和磺胺異噁唑，-舒洛地特和非諾多泮，或-依普利酮和舒洛地特。如實驗部分所描述的，至少包括氨基己酸或左西孟旦的組合物提供了顯著的治療和生物作用從而改善人類對象中的阿爾茨海默病。這些組合物有效阻止了澱粉樣b蛋白或肽對人類細胞的毒性效應，並代表了治療這種疾病的新的強效的方法。在另一個優選實施方案中，為了同時、分別或順序給藥以對有需要的對象組合治療阿爾茨海默病(ad)或相關病症，根據本發明的組合物包括至少三種化合物、或者其任何純度的鹽或藥物前體或衍生物、或者緩釋製劑的組合。根據本發明的治療方法可以單獨使用藥物或使用與其他靶向相同途徑或作用方式不同的治療聯合的藥物組合。在具體實施方案中，本發明的組合物還可以包括已經存在或者可能被開發的藥物，其與由選自以下的基因所編碼的蛋白質結合或者調節其活性：abat、abca1、abi1、abl1、acat、acc2、accn1、adamts12、adcy2、adipoq、adipor1/r2、adora1/2a/2b、adra1a/2、adrb1/2、agpat5、aip4、akap2、akr1c2、akt、aldh2、alox12、alox5、ang2、ank1、ankra、anxa1、apba1、apba2bp、apoa1、apoer2、arhgap17、arhgap26、atg5/7/12、atm、atp10a、atp1a1、atp2a3、atp2b1、atp6v1c1、atr、auh、bace1、bad、bai3、bassoon、bax、bcar1、bcl2、bdnf、beclin1、bin1、bk通道(kcnma1、kcnmb1)、bmp3a、brca1、ca10、cacna1c/2d3/2d4、cadps2、calm1-5(鈣調素)、camk1d、camkk2、cask、casr、cast、cbl、cd36、cd44、cdc2、cdc42、cdc42bpb、cdc42ep3、cdh1/2/13、cdk5、cdkn1a、chat、chk1、chrm1-5、chrna1-7/9/10、cit(枸櫞)、ck1、cngb3、cntfr、col4a2、cpt、cram、creb、crmp、csh1、ctnna2、ctnnb1、cttn(皮層肌動蛋白)、cubn、cullin1、cyp7b1、cysltr1/r2、dab1、dcc、depdc2、dgkb/h/z、dhcr7、dhfr、dlg2/4、dnajb9、dock3、drd2/5、dyn1/3、edg1-8、edn1/2、ednra/b、efna1/2/4/5/7(肝配蛋白a)、efnb1/2/3(肝配蛋白b)、ehhadh、elavl2、enpp2(自分泌運動因子)、enpp6、epha3、ephbr1/2/3/4/6、erbb2/4、erk1/2、esrrg、etfa、ezr、f2、f2r、fas、fdps、fes、fgf1/2、fkbp12/12.6、flna、flt1(vegfr1)、flt4、foxo1/3a、frap(mtor)、fto、fyn、fz2、gabbr1/2、gabra2/g2、gadd45、gat1、gata3、gh1、gipc1/2、glra1、glud1、gna12/13、gnptab、gpc5、gphn(橋尾蛋白)、gria2/3、grid1/2、grik1/2、grin2b/3a、grip1/2、grk2/5、grm3/5/6/7/8、grp170、gsk3b、hapln1、has1-3、hcrtr2、hif1a、hipk2、hk2、hmox1、homer1/2/3、hsd11b1、hsp90b1、hspa5、htr1a/1b/1d、hyal1/2/3、ide、il20ra/b、il6st、il8、impdh1/2、ins、insr、irf1、itb1、itga1/6、itgb1、itpr1、jnk1、kalrn(鉀蛋白)、kcna2/d2、kcnh2、kcnip1/2、kcnj11、kcnj12、kcnj3、kcnma1、kcnmb1-4、kdr(vegfr2)、ktn1、kynu、lama1、ldlr、lep(瘦素)、lepr、lifr、lin7a/b/c(veli1/2/3)、lipl2、lkb1、lrp1、lrp2(巨蛋白)、ltbp2、lyn、mad1l1、maml3、maoa/b、mat2b、mcc1、mdm1、me1、met、mgst2、mint1、mllt4(絲狀肌動蛋白結合蛋白)、mmp2、mmp9、moesin、mtr、muc1、munc13/18a、myo6、myol、nadph氧化酶、nav1、nbea、ncam1、nck1/2、nedd9、nf2(merlin)、nfkb1、nfkbib、ngef(ephexin)、ngf、ngfr、nherf、nil16、nlgn1、noc2、nos1/2a/3、notch1/2/3、npc1/2、npist、nr1i2、nr3c1、nr3c2、nrg1/3、nrp1/2、nrx3、ntf3/5、ntn1(導蛋白1)、ntrk2(trkb)、nwasp、opcml、oprk1、oprm、oprs1、osbpl3/10、p2ry1、p2ry12、paelr、pai1/2、pak1/6/7、palld、pap1、park2、pc、pcaf、pctp、pde11a、pde1a、pde3a/3b、pde4a/4b/4d、pde5a、pde6d、pdgfa/b、pdgfra/b、pi3k、pias1、picalm、pick1、pik3c3、pip5k、pitpnc1、pkca、pkcd、pla1a/2、plat、plau、plcb1、pld1/2、plexa1、plg、pln、plxdc2、pml、pop2、ppara、ppard、pparg、ppargc1b、ppfibp1、ppp1ca、ppp3ca(神經鈣蛋白)、prdx5/6、prkaa(ampk)、prkaca、prkg1、prl、ptger1、ptgfr、ptgs2、ptn、ptp1b、ptpn11、ptprf、ptprg、ptprm、pvrl1、pxn(樁蛋白)、pyk2、rab3b、rac1、rack1、rap1、rasgrf2、rbpj、rdx(根蛋白)、reln、rgnef、rheb、rhoa、rhog、rim2、rims1/2、robo2、rock1/2、ror2、rph3a(rab親和蛋白)、rph3al、rps6ka1、rps6kb2、rtn1、rxr/rar、ryr3、sacm1l、sapap、sapk3、scarb1、schip1、scn1a/1b、scnn1d/1g、sec24d、sema3a/3c/3e/4c、sgpp2、sh3bp5、siah1a、sil1、slc12a1/2/5、slc1a2、slc25a21、slc6a1/a18、slc8a1/a2/a3、slc9a1、slit1、sln、smad3/4、snap25、snca、sncaip、sorbs2、sorcs2、spla2、spock1、spp1(骨橋蛋白)、src、srd5a1、srebf1/f2、srgap3、stat3、stx1a/2(突觸融合蛋白)、stxbp6、sum1、sv2c、syn1、synj1/2(突觸伸蛋白)、syt12、sytl4(粒親蛋白)、tace、tacr1、tbr1、tbxa2r、tgfbr1/r2/r3、thbs1/2、them2、thra/b、tiam1、timp2、tll2、top2a、tp53、tp63、trio、trpc3/4/5、tsc1/2、tspo、ube2a、ulk4、unc13c、unc5c、vamp2/5、vcl(vinculin)、vdac1、vegfa/c、vegfr1、vmat、vps15、waspip、wave、wnt1a/5a、wwox、xanthine氧化酶、yap和yes1。以上所列的所有基因和蛋白質的序列可以從基因文庫中獲得，並且可以用本領域已知技術分離。也可以用本領域已知技術評定這些基因或蛋白質的活性。本發明也描述了可以用於調節靶基因和蛋白質的這些輔助藥物。我們已經鑑別出單獨或者組合起來調節上述途徑且可以用於治療阿爾茨海默病或相關病症的具體藥物。在優選的實施方案中，本發明的組合物可以進一步包括選自以下的至少一種藥物：抑制劑abat，(優選氨己烯酸)，和/或抑制劑abl1(優選伊馬替尼)，和/或acat的抑制劑(優選橙皮素)，和/或adcy2的調節劑(優選阿糖腺苷)，和/或腺苷adora1/2a/3受體的調節劑(優選選自氯法拉濱和去纖苷酸)，和/或腎上腺素能adra受體的調節劑(優選選自哌氰嗪、甲氧異丁嗪、美芬丁胺和地匹福林)，和/或腎上腺素能adrb受體的調節劑(優選選自胍乙啶、苄二甲胍、比託特羅和丙卡特羅)，和/或alox5/12的抑制劑(優選選自二乙基乙胺嗪和馬索羅酚)，和/或atp1a1的抑制劑(優選去乙醯毛花苷和奧美拉唑)，和/或自噬作用的激活劑(優選海藻糖)，和/或ca10的抑制劑(優選醋甲唑胺)，和/或鈣化作用的調節劑(優選選自膦甲酸鈉、硝酸鎵、鈣二醇、降鈣素、鈣三醇、氯瞵酸、二氫速甾醇、依降鈣素、依替膦酸、伊普黃酮和醋酸特立帕肽)，和/或calm1的調節劑(鈣調素)(優選安搏律定)，和/或cd44的調節劑(優選選自依氟鳥氨酸和苯溴馬隆)，和/或化學伴侶(優選選自阿拉伯糖醇和甘露醇)，和/或毒蕈鹼chrm受體的調節劑(優選選自環噴託酯、羥苯環嘧、曲司胺和異氟磷)，和/或不能穿過血腦屏障的菸鹼乙醯膽鹼chrna受體的拮抗劑(優選選自泮庫溴銨、哌庫溴銨、瑞庫溴銨、羅庫溴銨、琥珀膽鹼、維庫溴胺、阿曲庫銨、順阿曲庫銨、杜什庫銨、美加明、美多寇林、美維庫銨和新黴素)，和/或cngb3的抑制劑(優選阿米洛利)，和/或cysltr1/2、ptger1、ptgfr和tbxa2r類十二烷酸受體的調節劑(優選選自曲伏前列素、孟魯司特、西路斯特、氨來呫諾、卡前列素氨基丁三醇、比馬前列素和利多瑞爾)，和/或dhfr的抑制劑(優選乙胺嘧啶和三氨蝶呤)，和/或多巴胺drd2受體的調節劑(優選選自雙氫麥角胺和卡麥角林)，和/或多巴胺受體drd5的激動劑(優選非諾多泮)，和/或ednra的抑制劑(優選選自磺胺甲惡唑和慶大黴素)，和/或enpp2(自分泌運動因子)的調節劑(優選l-組氨酸)，和/或erbb2的抑制劑(優選拉帕替尼)，和/或f2凝血酶的調節劑(優選選自舒洛地特、希美加曲、華法林、苯丙香豆醇、依諾肝素、阿他肝素、磺達肝癸、拉氧頭孢、桿菌肽、噻氯匹定和厄多司坦)，和/或fdps的抑制劑(優選阿侖唑奈)，和/或gabra2的調節劑(優選選自苯巴比妥、美索比妥、頭孢替安、氯美噻唑、硫噴妥、魯比前列酮和氨曲南)，和/或grik1的拮抗劑(優選託吡酯)，和/或gsk3b活性的調節劑(優選選自沙丁胺醇和間羥胺)，和/或hif1a信號的調節劑(優選選自美洛昔康、託泊替康、去鐵胺、地衣酸、肼苯噠嗪、去鐵酮、二苯甲醯甲烷、阿伏苯宗、地諾前列酮、依前列醇、2-酮戊二酸和含羞草鹼)，和/或hk2(己糖激酶ii)的抑制劑(優選選自奎寧、加貝酯、聯苯苄唑和克黴唑)，和/或hmox1的調節劑(優選選自金諾芬、血色素/血晶質和精氨酸血紅素)，和/或htr1b/1d受體的調節劑(優選選自麥角胺和依立曲坦)，和/或impdh1和impdh2的抑制劑(優選硫鳥嘌呤)，和/或整合素itga/b的調節劑(優選雷貝拉唑)，和/或kcnd2鉀通道的抑制劑(優選利多卡因)，和/或kcnh2鉀通道的抑制劑(優選伊布利特)，和/或kcnma1的調節劑(優選選自色甘酸鹽、炔己蟻胺、託康唑、氯唑沙宗、烏諾前列酮、橙皮素、苄氟噻嗪、苯噻嗪、氯噻嗪、環噻嗪、氯甲苯噻嗪、氫氟甲噻、喹乙宗和三氯甲噻嗪)，和/或mgst2的調節劑(優選巴柳氮)，和/或mmp2和mmp9的調節劑(優選坎沙曲)，和/或線粒體通透性轉換孔形成的調節劑(優選選自甘珀酸和環丙沙星)，和/或mtor的抑制劑(優選雷帕黴素)，和/或nos1/2a/3的調節劑(優選選自丙基硫尿嘧啶、硫乙拉嗪和酮替芬)，和/或nr3c1受體信號的調節劑(優選選自甲吡酮和莫米松)，和/或nr3c2受體的調節劑(優選選自依普利酮和氟氫可的松)，和/或nrp2的抑制劑(優選哌加他尼)，和/或opcml的調節劑(優選阿芬太尼)，和/或oprk1和oprs1的調節劑(優選選自丁丙諾啡和戊唑辛)，和/或oprm(優選烯丙左嗎喃)，和/或氧化磷酸化作用的調節劑(優選選自阿米三嗪、紅黴素、卡那黴素和淺藍菌素)，和/或p2ry1和/或p2ry12受體的抑制劑(優選替羅非班)，和/或pde11a、pde4a和pde5a磷酸二酯酶的抑制劑(優選選自松葉菊鹼、米利酮和阿那格雷)，和/或pde3a/3b和pde4a/4b磷酸二酯酶的抑制劑和bk通道的激活劑(優選西洛他唑)，和/或pdgfra/b受體的調節劑(優選選自貝卡普勒明、鏈黴素、花翠素、花青素和煙麴黴素)，和/或pla2的調節劑(優選選自尼氟酸、氫可他酯和奈替米星)，和/或plat的調節劑(優選苯丁酸鈉)，和/或pld2的調節劑(優選安立生坦)，和/或plg的抑制劑(優選氨基己酸)，和/或ppard的調節劑(優選二十碳五烯酸)，和/或pparg的調節劑(優選丁酸苯酯)，和/或prkg1的調節劑(優選選自硝普鹽、硝化甘油和帕立骨化醇)，和/或ptp1b的抑制劑(優選替魯膦酸鹽)，和/或rhoa/rac的調節劑(優選選自氯噻酮、氫氯噻嗪、氯莫環素、賴甲環素、遊黴素、兩性黴素b、頭孢氨苄、頭孢噻啶、頭孢呋辛、雙氯西林)，和/或rxr/rar的調節劑(優選他佐羅汀)，和/或scn1a/b鈉通道的拮抗劑(優選磷苯妥英)，和/或slc12a1的抑制劑(優選布美他尼)，和/或slc6a1的抑制劑(優選噻加賓)，和/或slc9a1的調節劑(優選布克利嗪)，和/或srd5a1的抑制劑(優選度他雄胺)，和/或tacr1的拮抗劑(優選選自阿瑞吡坦和伐普肽)，和/或tgfb信號的調節劑(優選阿利吉侖)，和/或thra/b的調節劑(優選選自碘塞羅寧)，和/或top2a的抑制劑(優選硫蒽酮)，和/或tspo的調節劑(優選選自氟硝基安定和羥基安定)，和/或vdac1的調節劑(優選二羥基鋁)，和/或vegfr1的抑制劑(優選蘇尼替尼)，和/或維生素k代謝的調節劑(優選選自頭孢美唑、頭孢孟多和頭孢哌酮)，和/或vmat的抑制劑(優選選自四苯喹嗪、地舍平和尼替西農)，和/或電壓門控鈣通道(cacna)的抑制劑(優選選自樂卡地平、普加巴林、米拉地爾、阿雷地平、巴米地平(bamidipine)、苄環烷、苄普地爾、克侖硫卓、依福地平、依高地平、依他苯酮、芬地林、氟桂嗪、加洛帕米、依拉地平、拉西地平、利多氟嗪、洛美利嗪、馬尼地平、尼卡地平、尼伐地平、尼莫地平、尼索地平、尼群地平、哌克昔林、普尼拉明、司莫第爾和特羅地林)，和/或yes1、src和epha3的抑制劑(優選達沙替尼)。與根據本發明的藥物或藥物組合聯合使用的其他治療可以包括改善阿爾茨海默病症狀的一種或多種藥物或者可以用於阿爾茨海默病的姑息性治療的藥物。優選地，所述一種或多種藥物選自3aps、aab-001、abt-089、abt-126、ac-3933、acc-001、對乙醯氨基酚、affitopead01、affitopead02、α-硫辛酸、α-生育酚、an1792、抗aβ、aqw051、阿立哌唑、阿託西汀、阿託伐他汀、ave1625、avp-923、azd0328、azd3480、巴品珠單抗、bay94-9172(zk6013443)、bifeprunox、黑胡椒素、bms-708163、brl-049653、苔蘚蟲素、cad106、塞來昔布、cere-110、腦活素、chf5074、膽鹼、circadin、西酞普蘭、輔酶q、銅、cts21166、薑黃素、cx516(安帕來斯)、cx717、cyclophosphamate、dcb-ad1、右旋安非他命、dha(二十二碳六烯酸)、地高辛、dimebon(latrepirdine)、雙丙戊酸鈉、dmxb-a、多奈哌齊、多西環素、egb761、eht0202tazolate、elnd005(鯊肌醇)、epax1050tg、甲磺酸二氫麥角鹼、表沒食子兒茶素沒食子酸酯、異地普倫、雌二醇、雌激素、依那西普、evp-6124、evt101、艾斯能、魚油、fk962、florpiraminef18、葉酸+維生素b6+維生素b21、加巴噴丁、加蘭他敏、吉非羅齊、銀杏(ginkgobiloba)提取物(例如egb761或cp401)、銀杏的改良提取物(例如活性成分富集的或汙染物減少的)或者含有銀杏提取物的藥物(例如達納康或靜可福t)、葡萄糖、l-穀氨酸、gsi136、gsi-953、gsk239512、gsk933776a、氟哌丁苯、hf0220、石杉鹼a、氫可酮/apap、布洛芬、ifn-α2a、吲哚美辛、胰島素、靜脈用免疫球蛋白、ketasyn、樂考唑坦、亮丙瑞林、左旋多巴、硫辛酸、鋰、蘿拉西泮、洛伐他汀、葉黃素、ly2062430(索拉珠單抗)、ly2811376、ly450139、ly451395、mabt5102a、蘋果酸鹽、馬賽替尼(ab1010)、甲孕酮、褪黑素、mem1003、mem3454、美金剛、亞甲基藍、哌醋甲酯、米非司酮、mk0249、mk0677、mk0952、mk0952、mk3328、莫達非尼、mpc-7869、nadh、萘普生、奈非西坦、海王磷蝦油、奈拉美生、nic5-15、nicoderm貼片、煙醯胺(維生素b3)、novasoy、np031112、ns2330、nsa-789、nsaids、奧氮平、ω-3多不飽和脂肪酸(epa+dha)、ono-2506po、羥丁酸鹽、人參、paz-417、pbt2、羥哌氯丙嗪、pf-04360365、pf-04447943、pf-04494700、苯羥基丙氨酸、磷脂醯絲氨酸、匹伐他汀、posiphen、ppi-1019(apan)、帕伐他汀、哌唑嗪、潑尼松、黃體酮、prx-03140、pym50028、喹硫平、r1450、雷洛昔芬、雷米普利、雷沙吉蘭、加蘭他敏、白藜蘆醇、利福黴素、利哌利酮、利凡斯的明、rn1219、ro5313534、羅非考昔、羅西格列酮、洋蘇草(鼠尾草)、sam-315、sam-531、sam-760、sb-742457、硒、舍曲林、sgs-742、辛伐他汀、sk-pc-b70m、索拉珠單抗、sr57667b、sra-333、sra-444、ssr180711c、st101、t-817ma、塔克林、tarenflurbil、睪酮、tramiprosate(3aps)、曲唑酮、trx0014(亞甲基藍)、色氨酸、v950、丙戊酸鹽、瓦尼克林、維生素c、維生素e、vp4896、扎利落登、玉米黃質、唑吡坦、和zt-1(debio-9902sr)。本發明還涉及治療阿爾茨海默病或相關病症的方法，該方法包括向有需要的對象同時、分別或順序施用如上所述的藥物組合。本發明的另一個目的是治療阿爾茨海默病或相關病症的方法，該方法包括向有需要的對象同時、分別或順序施用調節突觸功能的藥物和/或調節血管生成的藥物和/或調節細胞應激反應的藥物的組合。本發明的另一個目的在於選擇用於組合治療阿爾茨海默病或相關病症的藥物的方法，該方法包括檢測候選藥物對於突觸功能和/或血管生成和/或細胞應激反應的活性並選擇改善突觸功能、減輕血管生成調節異常和調節細胞應激反應的藥物的步驟。在另一個實施方案中，本發明涉及選擇用於治療阿爾茨海默病或相關病症的組合物的方法，該方法包括製備改善突觸功能的藥物和/或減輕血管生成調節異常的藥物和/或調節細胞應激反應的藥物的組合，用於向有需要的對象同時、分別或順序施用。在另一個優選實施方案中，本發明涉及治療阿爾茨海默病或相關病症的方法，該方法包括向有需要的對象同時、分別或順序施用調節突觸功能的藥物和/或調節血管生成的藥物和/或調節細胞應激反應的藥物。可以向所述對象重複施用本發明的組合物。本發明的組合物通常包括一種或若干種可藥用的載體或賦形劑。治療的持續時間取決於受治療的疾病的階段、所使用的組合物、患者的年齡和狀況、以及患者對治療的反應。可以獨立地控制組合中各種成分的施用劑量、頻率和方式。例如，可以口腔施用一種藥物而肌內施用第二種藥物。可以採用包括休息期間的間歇式周期(on-and-offcycle)給予組合治療，使得患者的身體有機會從尚且無法預見的副作用中恢復。還可以將藥物配製在一起，使得一次給藥可以給予全部藥物。可以用任何合適的方法施用組合中的各種藥物，所述方法致使藥物的濃度與其他成分組合起來能夠矯治ad中所牽涉途徑的發揮功能。雖然有可能將組合中的活性成分作為純化學品施用，但優選將其作為藥物組合物提供，這種情形下也稱為藥物製劑。可能的組合物包括適合於經口、直腸、局部(包括透皮、經頰和舌下)、或胃腸外(包括皮下、肌內、靜脈內和真皮內)給藥的組合物。更通常，將這些藥物製劑以「患者包」的形式開給患者，所述患者包在單個包裝、通常為泡罩包裝中含有一定數量的劑量單位或者用於以計量的單位劑量給藥的其它方式，以供在一個明確的治療階段期間使用。與藥劑師從整體供給品中分出患者的藥物供應的傳統處方相比，患者包的優勢在於，患者總是能夠得到患者包中含有的包裝說明書，而這在傳統處方中通常是沒有的。包含包裝說明書已經顯示出可以改善患者對醫生指導的遵從性。因此，本發明還包括本文前述的藥物製劑，其與適合於所述製劑的包裝材料組合。在這樣的患者包中，可以從說明書、能力、條件、適應症和/或其他手段推斷出用於組合治療的製劑的預期使用方法，有助於以最適合於治療的方式使用製劑。這樣的措施使患者包特別適合於和適用於使用本發明的組合的治療。藥物可以任何合適的量包含在任何合適的載體物質中，並且可以組合物總重量的1-99重量％的量存在。可以用適合於經口、胃腸外(例如靜脈內、肌內)、直腸、皮膚、鼻、陰道、吸入、皮膚(貼片)或眼給藥途徑的劑型提供該組合物。因此，組合物可以是例如片劑、膠囊、丸劑、粉劑、顆粒、懸浮劑、乳液、溶液、包括水凝膠在內的凝膠劑、糊劑、軟膏、霜劑、膏藥、飲劑、滲透給藥裝置、栓劑、灌腸劑、注射劑、植入劑、噴霧劑或氣霧劑的形式。可以按照常規製藥實踐(例如參見《remington：製藥科學與實踐》(第20版)，a.r.gennaro主編，lippincottwilliams&wilkins，2000與《製藥技術全書》，j.swarbrick和j.c.boylan主編，1988-1999,marceldekker,紐約)配製藥物組合物。可以將本發明的藥物組合物配製為在給藥時基本立即或者在給藥後的任何預定時間或時期內釋放活性藥物。控釋製劑包括(i)在較長時期內在體內產生基本恆定的藥物濃度的製劑；(ii)在預定的延遲時間後在較長時期內在體內產生基本恆定的藥物濃度的製劑；(iii)通過在體內維持相對恆定、有效的藥物水平同時使與活性藥物物質的血漿水平波動相關的不良副作用最小化，在預定的時期內維持藥物作用的製劑；(iv)通過例如將控釋組合物在空間上置於患病組織或器官附近或其中，使藥物作用局部化的製劑；以及(v)通過使用載體或化學衍生物將藥物遞送到特定的目的細胞類型從而使藥物作用定向的製劑。在下述情況下尤其優選施用控釋製劑形式的藥物，所述情況中具有(i)狹窄的治療指數(即產生有害副作用或毒性反應的血漿濃度與產生治療效果的血漿濃度之間的差異小；一般而言，將治療指數ti定義為半數致死劑量(ld50)與半數有效劑量(ed50)的比值)；(ii)狹窄的胃腸道吸收窗；或(iii)非常短的生物半衰期，使得為了將血漿水平維持在治療水平需要在一天中頻繁用藥。為了達到所研究藥物的釋放速率超過代謝速率的控制釋放，可以採取許多策略中的任何策略。可以通過適當選擇各種配製參數和成分、包括例如各種類型的控釋組合物和包衣來達到控制釋放。因此，使用合適的賦形劑將藥物配製成為在給藥時以受控方式釋放藥物的藥物組合物(單個或多個單位的片劑或膠囊組合物、油溶液、懸浮液、乳液、微膠囊、微球、納米顆粒、貼片和脂質體)。用於經口使用的固體劑型用於經口使用的製劑包括含有活性成分與無毒性的藥用可接受的賦形劑的混合物的片劑。這些賦形劑可以是例如惰性稀釋劑或填充劑(例如蔗糖、微晶纖維素、包括馬鈴薯澱粉在內的澱粉、碳酸鈣、氯化鈉、磷酸鈣、硫酸鈣或磷酸鈉)；造粒劑和崩解劑(例如包括微晶纖維素在內的纖維素衍生物、包括馬鈴薯澱粉在內的澱粉、交聯羧甲基纖維素鈉、藻酸鹽或藻酸)；粘合劑(例如阿拉伯樹膠、藻酸、藻酸鈉、明膠、澱粉、預膠化澱粉、微晶纖維素、羧甲基纖維素鈉、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、乙基纖維素、聚乙烯吡咯烷酮或聚乙二醇)；以及潤滑劑、助流劑和抗粘附劑(例如硬脂酸、二氧化矽或滑石粉)。其他藥用可接受的賦形劑可以是著色劑、調味劑、增塑劑、保溼劑、緩衝劑等。片劑可以是未包衣的，或者它們可以用已知技術包衣，以任選延遲在胃腸道中的崩解和吸收，從而在較長時期內提供持續作用。可以使包衣適應於以預定方式釋放活性藥物物質(例如為了獲得控釋製劑)或者可以使其適應於直到通過胃之後才釋放活性藥物物質(腸溶包衣)。包衣可以是糖包衣、薄膜包衣(例如基於羥丙基甲基纖維素、甲基纖維素、甲基羥乙基纖維素、羥丙基纖維素、羧甲基纖維素、丙烯酸酯共聚物、聚乙二醇、和/或聚乙烯吡咯烷酮)或腸溶包衣(例如基於甲基丙烯酸共聚物、乙酸鄰苯二甲酸纖維素、鄰苯二甲酸羥丙基甲基纖維素、乙酸琥珀酸羥丙基甲基纖維素、鄰苯二甲酸聚乙酸乙烯酯、蟲膠和/或乙基纖維素)。可以使用延時材料，例如單硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯)。固體片劑組合物可以包括適合於保護組合物免於不想要的化學變化(例如在釋放活性藥物物質前的化學降解)的包衣。可以採用與《製藥技術全書》中所描述的相似方式將包衣塗覆在固體劑型上。若干種藥物可以在片劑中混合在一起，或者可以是分開的。例如，在片劑的裡面含有第一種藥物，而第二種藥物在外面，使得在釋放第一種藥物之前釋放相當部分的第二種藥物。經口使用的製劑也可以提供成為可咀嚼片劑，或者其中活性成分與惰性固體稀釋劑(例如馬鈴薯澱粉、微晶纖維素、碳酸鈣、磷酸鈣或高嶺土)混合的硬明膠膠囊，或者其中活性成分與水或油介質例如液體石蠟或橄欖油混合的軟明膠膠囊。可以使用上述片劑和膠囊中的成分以常規方式製備粉劑或顆粒。可以將經口使用的控釋組合物構建成為例如通過控制活性藥物物質的溶解和/或擴散來釋放活性藥物。可以通過藥物的片劑、膠囊、丸劑或顆粒製劑的適當包衣，或者通過將藥物摻入到適當的基質中，從而實現溶解或擴散控釋。控釋包衣可以包括上述一種或多種包衣物質，和/或例如蟲膠、蜂蠟、glycowax、蓖麻蠟、巴西棕櫚蠟、硬脂醇、單硬脂酸甘油酯、二硬脂酸甘油酯、棕櫚酸硬脂酸甘油酯、乙基纖維素、丙烯酸類樹脂、dl-聚乳酸、乙酸丁酸纖維素、聚氯乙烯、聚乙酸乙烯酯、乙烯吡咯烷酮、聚乙烯、聚甲基丙烯酸酯、甲基丙烯酸甲酯、2-羥基甲基丙烯酸酯、甲基丙烯酸酯水凝膠、1,3-丁二醇、甲基丙烯酸乙二醇酯和/或聚乙二醇。在控釋基質製劑中，基質材料還可以包括例如水合甲基纖維素、巴西棕櫚蠟和硬脂醇、卡巴浦爾934、有機矽、三硬脂酸甘油酯、丙烯酸甲酯-甲基丙烯酸甲酯、聚氯乙烯、聚乙烯和/或滷代氟烴。含有所宣稱的組合中的一種或多種藥物的控釋組合物還可以採用漂浮片劑或膠囊的形式(即在經口給藥時，在胃內容物頂部漂浮一定時期的片劑或膠囊)。可以通過將藥物與賦形劑和20-75％w/w的水膠體諸如羥乙基纖維素、羥丙基纖維素或羥丙基甲基纖維素的混合物造粒從而製備藥物的漂浮片製劑。然後可以將所獲得的顆粒壓製成片劑。在與胃液接觸時，片劑在其表面周圍形成基本上不透水的凝膠屏障。這種凝膠屏障參與維持密度小於1，從而允許片劑保持漂浮在胃液中。用於經口給藥的液體適合於通過添加水製備水混懸劑的粉劑、可分散粉劑或顆粒是用於經口給藥的便利劑型。作為混懸劑的製劑提供了活性成分與分散或溼潤劑、助懸劑和一種或多種防腐劑的混合物。合適的助懸劑是例如羧甲基纖維素鈉、甲基纖維素、藻酸鈉等。胃腸外組合物藥物組合物也可以通過以劑型、製劑或藉助含有常規的無毒的可藥用的載體和佐劑的合適給藥裝置或植入物的形式通過注射、輸注、或植入(靜脈內、肌內、皮下等)進行胃腸外給藥。這樣的組合物的配製和製備對於藥物製劑領域的技術人員來說是公知的。胃腸外使用的組合物可以提供成單位劑量形式(例如單劑安瓿甁)或者含有若干劑並且可以添加合適的防腐劑(參見下文)的小瓶。組合物可以採用溶液、混懸劑、乳液、輸注裝置或用於植入的遞送裝置的形式，或者將其作為乾粉提供，以在使用前用水或其他合適的介質復溶。除了活性藥物外，組合物還可以包括合適的胃腸外可接受的載體和/或賦形劑。可以為了受控釋放將活性藥物摻入到微球、微膠囊、納米顆粒、脂質體等中。組合物可以包括助懸劑、增溶劑、穩定劑、ph調節劑和/或分散劑。根據本發明的藥物組合物可以採用適合於無菌注射的形式。為了製備這樣的組合物，將合適的活性藥物溶解或懸浮在胃腸外可接受的液體介質中。在可以使用的可接受介質和溶劑中包括水、通過加入適量鹽酸、氫氧化鈉或合適的緩衝劑調整到合適ph的水、1,3-丁二醇、林格液和等滲氯化鈉溶液。水性製劑也可以含有一種或多種防腐劑(例如對羥基苯甲酸的甲酯、乙酯或正丙酯)。在一種藥物僅僅少量或微溶於水的情況下，可以加入溶解增強劑或助溶劑，或者溶劑可以包括10-60％w/w的丙二醇等。控釋胃腸外組合物可以採用水性混懸劑、微球、微膠囊、磁性微球、油溶液、油混懸劑或乳液的形式。或者，可以將活性藥物摻入生物相容的載體、脂質體、納米顆粒、植入物或輸注裝置中。用於製備微球和/或微膠囊的材料是例如可生物降解/可生物侵蝕的聚合物，如丙交酯乙交酯共聚物、聚(氰基丙烯酸異丁酯)、聚(2-羥基乙基-l-穀氨醯胺)。在配製控釋胃腸外製劑時可以使用的生物相容載體是碳水化合物類(例如葡聚糖)、蛋白質(例如白蛋白)、脂蛋白或抗體。用於植入物的材料可以是不可生物降解的(例如聚二甲基矽氧烷)或可生物降解的(例如聚己內酯、聚乙醇酸、或聚原酸酯)。直腸組合物對於直腸應用，組合物的合適的劑型包括栓劑(乳液或混懸液型)和直腸明膠膠囊(溶液或混懸液)。在典型的栓劑製劑中，將活性藥物與適當的藥用可接受的栓劑基質諸如可可酯、酯化的脂肪酸、甘油化的明膠和各種水溶性的或水可分散的基質如聚乙二醇組合。可以摻入各種添加劑、增強劑或表面活性劑。經皮和局部組合物藥物組合物也可以作為含有常規的無毒的可藥用的載體和賦形劑的劑型或製劑局部施用在皮膚上，用於經皮吸收，所述載體和賦形劑包括微球和脂質體。所述製劑包括霜劑、軟膏、洗液、搽劑、凝膠、水凝膠、溶液、混懸劑、藥棒、噴霧劑、糊劑、膏藥或其他類型的經皮藥物遞送系統。可藥用的載體或賦形劑可以包括乳化劑、抗氧化劑、緩衝劑、防腐劑、保溼劑、滲透增強劑、螯合劑、凝膠形成劑、軟膏基質、香料和護膚劑。乳化劑可以是天然存在的樹膠(例如阿拉伯樹膠或黃耆樹膠)防腐劑、保溼劑、滲透增強劑可以是對羥苯甲酸酯，例如對羥基苯甲酸的甲酯或丙酯，以及苯扎氯銨、甘油、丙二醇、脲等。上述用於局部施用在皮膚上的藥物組合物也可以用於局部施用在身體待治療部分上或其附近的情況下。組合物可以適用於直接應用或利用專門的藥物遞送裝置諸如敷料或者石膏、襯墊、海綿、條或其他適合的柔性材料形式進行應用。治療的劑量和持續時間應該理解，組合的藥物可以在相同或不同的藥物製劑中同時施用或者順序施用。如果是順序施用，施用第二種(或者另外的)活性成分的延後不應當導致喪失活性成分組合的有效作用的益處。對於根據本發明的組合的最低要求是，該組合應當旨在以具有活性成分組合的有效作用的益處來組合使用。組合的預期使用可以通過能力、條件、適應症和/或有助於使用本發明的組合的其他方式推斷出來。雖然本發明的活性藥物可以分劑施用，例如每日兩次或三次，但是優選組合中的每種藥物每日單次劑量，最優選單一藥物組合物(單位劑量形式)中的所有藥物每日單次劑量。術語「單位劑量形式」指適合作為人類對象的單位劑量的物理上分立的單位(如膠囊、片劑或裝藥的注射器筒)，每個單位含有根據計算能夠產生所需療效的預定量的活性物質以及所需的藥物載體。給藥可以每日一次至幾次，持續幾天至幾年，甚至可以是患者終生。在多數情況下表明需要長期或至少定期重複地長期給藥。此外，關於特定患者的藥物基因組學(基因型對治療的藥物動力學、藥效學或療效情況的影響)信息可以影響所使用的劑量。除了對於特別受損害的ad病例可能需要較高劑量來產生響應之外，組合中每種藥物的優選劑量通常在不超過長期維持治療的通常處方劑量或者在3期臨床研究中被證明安全的劑量範圍內。本發明的一個顯著優點是，在組合治療中可以低劑量使用每種化合物，同時組合起來對患者產生顯著的臨床益處。在化合物單獨沒有顯著作用的劑量下，組合治療確實是有效的。因此，本發明的特殊優點在於使用各種化合物的亞適劑量的能力，所述亞適劑量即低於通常所開出的治療劑量的劑量，優選治療劑量的1/2，更優選1/3、1/4、1/5，或者甚至更優選治療劑量的1/10至1/100。在這樣的亞適劑量下，化合物單獨基本沒有活性，而根據本發明的組合完全有效。優選的劑量相當於長期維持治療的通常處方劑量的1％直至50％的量。最優選的劑量相當於長期維持治療的通常處方劑量的1％直至10％的量。以下提供本發明中所使用的藥物劑量的具體實例：-氨基己酸每天約0.05至15g-左西孟旦每天約0.05至4mg-口服氨氯地平每天約0.05至1mg-口服氯吡格雷每天約0.75至7.5mg，-口服他達拉非每天約0.05至0.5mg，-口服西洛他唑每天約1至10mg，-口服特比萘芬約2.5至25mg，每天一次或兩次，-口服來氟米特每天約0.25至2.5mg，-口服西那卡塞每天約0.3至3mg，-口服阿坎酸鹽約7至70mg，每天三次，-口服甲巰咪唑每天約0.05至1.5mg-口服米帕林每天約3至30mg，-口服苯乙雙胍每天約0.5至5mg，-口服巴氯芬每天約0.4至8mg，分二或三劑服用，-口服利福布汀每天約6至60mg，-口服異戊巴比妥每天約0.06至15mg，-口服頭孢替坦每天約0.01至0.4mg，-口服二羥丙茶鹼每天約6至60mg，分2或3劑，-口服甲氯噻嗪每天約0.025至1mg，-口服利塞膦酸鹽每天約0.05至3mg，-口服依託咪酯每天約0.6至6mg，-口服唑尼沙胺每天約1至40mg.應該理解，實際施用的藥物的量將由醫生根據相關情況包括所治療的病症、所施用的具體組合物、個體患者的年齡、體重和反應、患者症狀的嚴重性以及所選擇的給藥途徑決定。因此，上述劑量範圍旨在為本文的教導提供一般性指導和支持，而不是限制本發明的範圍。具體實施方式給出以下實施例，其是用於說明的目的而不是限制。實施例i.化合物與其組合物預防aβ25-35肽的毒性在這第一系列實驗中，已經檢測了候選化合物對於預防或減輕aβ25-35肽的毒性作用的能力。首先單個檢測藥物，隨後檢測其組合作用。在多種細胞類型上測定其作用，從而進一步說明化合物的活性。在ad中，app蛋白形成纖維狀aβ蛋白(澱粉樣蛋白)的不溶性β摺疊層的聚集體。從可溶性到纖維狀形態的構象變化似乎是隨aβ濃度升高而增加的自發事件，因此任何大於正常量的aβ的產生(或者較大的、較難溶形態的aβ的產生)會導致斑塊形成增加。一旦開始形成aβ斑塊，其它分子可以與新生的斑塊相互作用從而最終產生成熟的斑塊和相關的神經細胞死亡區域。考慮到這一點，我們已經優先檢測藥物對暴露於澱粉樣β蛋白的細胞的存活率的影響。i.1對抗aβ25-35肽對皮質神經元的毒性的保護作用細胞培養按照singer等1999的描述培養原代大鼠皮質神經元。簡單來說，將妊娠15天的雌性大鼠通過頸椎脫位處死(ratswistar；janvier)，並從子宮中取出胎畜。取出皮質並置於用冰冷的含有1％青黴素-鏈黴素(ps；invitrogen)和1％牛血清白蛋白(bsa；sigma)的leibovitz培養基(l15；invitrogen)中。在37℃下用在不含鈣和鎂的pbs中稀釋的胰蛋白酶(胰蛋白酶edta1x；invitrogen)處理20分鐘使皮質解離。通過加入含有ii級dnaasei(0.1mg/ml；rochediagnostic)和10％胎牛血清(fcs；invitrogen)的dulbecco改良eagle培養基(dmem；invitrogen)終止反應。然後通過使細胞3次通過10mg移液管使細胞機械脫開。然後將細胞在10℃下以180xg離心10分鐘。捨棄上清液，將細胞團重新懸浮在指定培養基中，所述培養基由補充有b27(2％；invitrogen)、l-穀氨醯胺(0.2mm；invitrogen)、1％ps溶液和10ng/ml腦源神經營養因子(bdnf，panbiotech)的神經元基礎培養基(invitrogen)組成。在neubauer細胞計數器上使用錐蟲藍排斥實驗對活細胞進行計數。將細胞以30000細胞/孔的密度接種在96孔板(孔用聚l-賴氨酸(10μg/ml；sigma)預包覆)中，並在37℃下在潮溼空氣(95％)/co2(5％)氣氛下培養，培養6天後，將細胞與藥物(5種濃度)溫育。1小時後，在不含bdnf但具有藥物的指定培養基中用20μmβ-澱粉樣蛋白(25-35；sigma)使細胞中毒。使皮質神經元中毒2天。每種條件進行兩份獨立的培養物，每種條件6個孔。軸突長度定量用冷的乙醇(95％)和乙酸(5％)溶液將細胞固定10分鐘。將細胞用0.1％皂角苷通透化之後，用含有10％山羊血清的pbs阻斷2小時。然後將細胞與針對微管相關蛋白2(map-2；sigma)的單克隆抗體溫育。該抗體特異性地顯現出細胞體和軸突。所使用的二級抗體是alexafluor488山羊抗小鼠igg(分子探針)。用螢光染料(hoechst溶液，sigma)顯示神經元的核。使用incellanalyzertm1000(gehealthcare)，以20×放大倍數對每個孔拍攝20張照片。在相同條件下拍攝全部照片。使用developer軟體(gehealthcare)定量軸突長度。結果圖1中所顯示的結果是從兩個獨立的培養物中提取出來的，每種條件6個孔。所有值均表示為平均值±平均值標準誤差。對原始數據進行了雙側student'st檢驗分析。結果表示為與對照(介質)相比的軸突長度百分比。在持續2天的20μmaβ25-35中毒之前，將藥物與大鼠原代皮質神經元溫育1小時(36)。在該溫育2天後，對反映軸突細胞生長的軸突長度的網絡進行定量。結果表明被檢測藥物明顯發揮出對抗aβ25-35中毒的神經保護作用(圖1和圖2)。i.2對抗aβ25-35肽對腦內皮細胞的毒性的保護作用細胞培養對0代大鼠腦內皮細胞的原代培養物(vect-horussas，marseille)進行培養。在匯合時，用胰蛋白酶edta(panbiotech編號：p10-023100)使內皮細胞松解。將細胞以25000細胞/孔的密度接種在96孔板(孔預先包覆30μl1.5mg/ml的i型大鼠膠原蛋白，vect-horussas，marseill)中，並在補充有1％微管生長補充物(mvgs，s-005-25，invitrogen)的mcbd131培養基(m-131-500，invitrogen)中培養細胞。在37℃下在潮溼空氣(95％)/co2(5％)氣氛下培養細胞。隔日將一半培養基用新鮮培養基更換。4天後，將溶解在0.1％dmso或水中的藥物以不同濃度添加到細胞培養基中。在含有dulbecco改良eagle培養基(dmem，panbiotech編號：p04-03600)、補充有2％胎牛血清(fbs；invitrogen編號16000-036)、1％l穀氨醯胺(panbiotech編號p04-80100)、1％青黴素-鏈黴素(ps；panbiotech編號p06-07100)、0.1mg/ml肝素(sigma)、10ng/ml內皮生長因子(egf，invitrogen)和10ng/ml血管內皮生長因子(vegf，phg0146，invitrogen)的培養基中，進行1小時預溫育。然後，在相同培養基中用30μmβ-澱粉樣蛋白(25-35；sigma)和藥物一起使細胞中毒。接著使細胞中毒3天。乳酸脫氫酶(ldh)活性測定中毒3天後，對於每個培養物收集上清液並用細胞毒性檢測試劑盒(ldh，rocheappliedsciences)進行分析。這種細胞死亡定量的比色法測定是基於測定從受損細胞的細胞溶質中釋放到上清液中的乳酸脫氫酶(ldh)的活性。用分光光度計在492nm波長處採用多次掃描裝置(thermo，refascent)評定光密度(do)。結果圖3中所顯示的結果是從兩個獨立的培養物中提取出來的，每種條件6個孔。所有值均表示為平均值±平均值標準誤差。對原始數據進行了雙側student'st檢驗分析。結果表示為與對照(介質)相比的細胞存活率的百分比。在持續3天的30μmaβ25-35中毒之前，將藥物與大鼠原代腦內皮細胞溫育1小時。該溫育後3天，對反映細胞死亡水平的培養基中的ldh釋放進行定量。所顯示的結果清楚表明所檢測的化合物發揮出對抗這種aβ25-35中毒的有力保護作用(圖3)。i.3對抗aβ25-35肽對嗜鉻細胞瘤細胞的毒性的保護作用pc12細胞培養在37℃水中將來自atcc(atcccrl-1721)的pc12(大鼠嗜鉻細胞瘤，atcc編號：crl-1721)細胞迅速解凍。立即將上清液放入含有dulbecco改良eagle培養基dmem-f12(panbiotech編號：p04-41450)與15％熱滅活馬血清(nvitrogen編號：16050-130)、2.5％胎牛血清(fbs；invitrogen編號：16000-036)、1％10.000u/ml的青黴素和10mg/ml的鏈黴素(ps；panbiotech編號：p06-07100)以及1％200mm的l-穀氨醯胺(panbiotech編號：p04-80100)的9mlpc12增殖培養基中。將細胞離心(800轉/分，4℃，5分鐘)並將其加入5mlpc12增殖培養基中，用malassez細胞採用中性紅排斥檢測(sigma)對活細胞進行計數。然後將細胞以每cm23.104細胞接種到pc12增殖培養基中，所述培養基在用聚l-賴氨酸(10μg/ml,sigma編號：p2636)預包覆的75cm2塑料瓶(greiner編號：658175)中。隔日更換培養基。培養3天後，當細胞達到80％匯合時，將其在沒有鈣和鎂的hbss(panbiotech編號：p06-33500)中清洗，並在胰蛋白酶edta(0.05％,panbiotech編號：p10-023100)中溫育。用添加了0.5mg/ml2級dnase1(panbiotech編號：t60-37780100)的pc12增殖培養基終止酶反應。然後，將pc12離心(800轉/分，4℃，10分鐘)，並將細胞以2.9104/cm2的密度接種到用聚l-賴氨酸預包覆的175cm2培養瓶中(greiner編號：661195)。中毒和mtt存活率測定將pc12細胞(#2代)以3300細胞/cm2的基準接種到96孔板(greiner編號655180)上，所述96孔板被用含有b27(2％,invitrogen,編號21103049)、青黴素(50u/ml)-鏈黴素(50μg/ml)和穀氨醯胺(1％)以及50ng/ml的ngf(sigma編號n1408)的聚l-賴氨酸(sigma)神經元基礎培養基(invitrogen,編號21103049)預包覆。ngf允許pc12分化為交感(sympatic)神經元樣細胞。培養5天後，將培養基更換為添加了ngf(50ng/ml)、沒有抗氧化劑的b27、穀氨醯胺和抗生素的神經元基礎培養基。24小時後，將細胞與5種濃度的藥物溫育1小時，每種條件6孔。預溫育1小時後，在細胞培養基中用10μmβ-澱粉樣蛋白(25-35；sigma)和藥物使細胞中毒。24小時後，用pbs(panbiotech,編號p04-36100)將細胞清洗一次，並用mtt(3,[4,5-二甲基噻唑-2-基]-2,5二苯基溴化四唑)存活率檢驗評價pc12細胞的存活率。皮質神經元細胞培養如singer等1999所述培養原代大鼠皮質神經元。簡單來說，將妊娠15天的雌性大鼠通過頸椎脫位(ratswistar；janvier)處死，並從子宮中取出胎畜。取出皮質並置於用冰冷的含有1％青黴素-鏈黴素(ps；invitrogen)和1％牛血清白蛋白(bsa；sigma)的leibovitz培養基(l15；invitrogen)中。在37℃下用在不含鈣和鎂的pbs中稀釋的胰蛋白酶(胰蛋白酶edta1x；invitrogen)處理20分鐘使皮質松解。通過加入含有ii級dnaasei(0.1mg/ml；rochediagnostic)和10％胎牛血清(fcs；invitrogen)的dulbecco改良eagle培養基(dmem；invitrogen)終止反應。然後通過使細胞3次通過10mg移液管使細胞機械脫開。然後在10℃下以180×g離心10分鐘。捨棄上清液，將細胞團重新懸浮在指定培養基中，所述培養基由補充有b27(2％；invitrogen)、l-穀氨醯胺(0.2mm；invitrogen)、1％ps溶液和10ng/ml腦源神經營養因子(bdnf,panbiotech)的神經元基礎培養基(invitrogen)組成。在neubauer細胞計數器上使用錐蟲藍排斥實驗對活細胞進行計數。將細胞以30000細胞/孔接種在96孔板(孔用聚l-賴氨酸(10μg/ml；sigma)預包覆)中，並在37℃下在潮溼空氣(95％)/co2(5％)氣氛下培養，培養6天後，將細胞與藥物(5種濃度)溫育。1小時後，用在不含bdnf但具有藥物的指定培養基中的20μmβ-澱粉樣蛋白(25-35；sigma)使細胞中毒。使皮質神經元中毒2天。乳酸脫氫酶(ldh)活性測定培養2天後，收集上清液並用細胞毒性檢測試劑盒(ldh,rocheappliedsciences)進行分析。這種細胞死亡定量的比色法測定是基於測定從受損細胞的細胞溶質中釋放到上清液中的乳酸脫氫酶(ldh)的活性。採用多次掃描裝置(thermo,編號ascent)在492nm波長處用分光光度計測定光密度(do)。結果表示為與陰性對照(介質)相比較的細胞存活率的百分比。結果圖4和圖5中所顯示的結果是從兩個獨立的培養物中提取出來的，每種條件6個孔。所有值均表示為平均值±平均值標準誤差。對原始數據進行了雙側student'st檢驗分析。結果表示為與對照(介質)比較的軸突長度的百分比。在持續24小時的10μmaβ25-35中毒之前1小時，將ngf分化的pc12細胞與藥物溫育。在該溫育1天後，使用mtt測定法對ngf分化的pc12的存活率進行定量。結果清楚表明丙胺卡因(pilocain)和氨氯地平發揮出對抗這種aβ25-35中毒的強烈的神經保護作用(圖4)。在持續2天的10μmaβ25-35中毒之前1小時，還將大鼠原代皮質神經元與本發明的化合物進行溫育。在該溫育兩天後，對培養基中反應細胞死亡水平的ldh釋放進行定量。所顯示的結果表明本發明中所使用的化合物發揮出對於這種aβ25-35中毒的顯著保護作用(圖5)。i.4藥物組合的活性還用調節突觸功能和/或血管生成和/或細胞應激反應的若干藥物組合進行了體外測定。在如上所述的相同試驗條件下將藥物進行溫育(參見i.1-i.3部分)。表2中總結了作用於目標的最有效的藥物組合。表2+表明對於aβ25-35中毒的正性神經保護作用。ii.預防人aβ1-42毒性的化合物在該另一系列實驗中，已經檢測了候選化合物預防或降低人aβ1-42毒性作用的能力。人aβ1-42是構成在罹患ad的人類患者的活檢組織中發現的聚集體的全長肽。首先單個檢測藥物，隨後檢測其組合作用。在多種細胞類型上測定作用，從而進一步說明化合物的活性。ii.1對抗aβ1-42肽對人腦微血管內皮細胞模型的毒性的保護作用使用人腦微血管內皮細胞培養物研究候選化合物對於aβ1-42毒性所提供的保護。在+37℃水浴中將人腦微血管腦內皮細胞(hbmec，sciencell編號：1000，在第10代冷凍)迅速解凍。立即將上清液放入9ml含有10％胎牛血清(fcs；gibco編號10270-106)的dulbecco改良eagle培養基(dmem；panbiotech編號：p04-03600)中。在+4℃下將細胞懸浮液以180×g離心10分鐘並且將沉澱團懸浮在有1.6％無血清rocketfuel(cellsystem，編號：sf-4z0-500-r，批次54102)、2％10.000u/ml的青黴素和10mg/ml的鏈黴素(ps；panbiotech編號：p06-07100批次133080808)的csc無血清培養基((csc無血清，cellsystem，編號：sf-4z0-500-r，批次51407-4)中，並將其以每孔20000個細胞的密度和100μl的終體積接種在96孔板(基質凝膠層生物塗層血管生成系統，bd，編號354150，batcha8662)中。在基質凝膠支持物上，腦內皮細胞自發啟動毛細血管網形態發生的過程(47)。每種條件進行3個獨立的培養物，每種條件6孔。候選化合物與人澱粉樣蛋白-β1-42處理簡單來說，在20μm(母液)的指定培養基中復溶aβ1-42肽(bachem，編號：h1368，批次1010533)，並為了聚集在37℃下和黑暗中將其緩慢震蕩3天。在相同條件下製備對照培養基。3天後，對於在對照培養基中稀釋的2.5μm的hbmec使用該聚集的人澱粉樣肽(最佳溫育時間)。在hbmec接種到基質凝膠上後2小時將aβ1-42肽加入，進行18小時溫育。在hbmec接種到基質凝膠上後1小時，將待測化合物和vegf-165溶解在培養基(+0.1％dmso)中，然後在施加aβ1-42前將其與hbmec預溫育1小時(每個培養孔的終體積為100μl)。待測化合物或vegf溫育後1小時(細胞接種到基質凝膠上後2小時)，在有待測化合物或vegf(總體積200μl/孔)存在下加入100μlaβ1-42肽，直到終濃度為在對照培養基中稀釋的2.5μm，以避免進一步的藥物稀釋。培養板的組織在該研究中對於所有實驗使用已知為vegf-a的促血管生成異構體的vegf-165作為參照化合物。vegf-165是參與血管生成的最豐富的vegf異構體。使用10nmvegf作為參照待測化合物。評價以下條件：●陰性對照：單獨的培養基+0.1％dmso●中毒：澱粉樣蛋白-β1-4.2.(2.5μm)18小時●陽性對照：vegf-165(10nm)(1參照化合物/培養)在加入aβ1-42(2.5μm)前1hr，溫育時間18h。●待測化合物：待測化合物在加入aβ1-42(2.5μm)前1hr，溫育時間18h。毛細血管網定量對於每個孔，在光透射下使用incellanalyzertm1000(gehealthcare)用4×鏡頭拍攝2張照片。在相同條件下拍攝全部圖像。用developer軟體(gehealthcare)完成血管生成網的分析。評定毛細血管網的總長度。數據處理所有值表示為3個培養物的平均值±平均值標準誤差(每種條件n＝6)。對不同條件執行anova，然後在允許的情況下進行dunnett檢驗(statview軟體5.0版)，來完成統計分析。圖片上插入的值(作為％)顯示澱粉樣蛋白毒性發展。事實上，將澱粉樣蛋白毒性作為100％，將待測化合物的作用計算為該澱粉樣蛋白毒性的％。結果圖6和表3中顯示了結果，它們表明藥物單獨產生了對於aβ肽1-42所導致的毒性的顯著保護作用。-低劑量、例如160nm的氨基己酸單獨產生強烈的保護作用；-低至8nm劑量的左西孟旦產生強烈的保護作用。ii.2對抗aβ1-42對原代皮質神經元細胞的毒性的保護作用待測化合物和人澱粉樣蛋白-β1-42處理如前所述培養原代大鼠皮質神經元。簡單來說，在40μm(母液)的指定培養基中復溶aβ1-42肽，並且在+37℃下在黑暗中緩慢震蕩3天以聚集。在相同條件下製備對照培養基。3天後，如下將該溶液用於原代皮質神經元：神經元培養10天後，將藥物溶解在培養基(+0.1％dmso)中，然後在應用aβ1-42(每個培養孔的終體積為100μl)前與神經元預溫育1小時。藥物溫育後1小時加入100μlaβ1-42肽，使得終濃度在有藥物存在下稀釋為10μm，從而避免進一步的藥物稀釋。使皮質神經元中毒24小時。每種條件進行3個獨立的培養物，每種條件6孔。用bdnf(50ng/ml)和雌二醇-β(100和150nm)分別作為陽性對照和參照化合物。每種條件進行3個獨立的培養物，每個條件12孔。培養板的組織用100和150nm的雌二醇-β作為參照待測化合物，用50ng/ml的bdnf作為陽性對照。將bdnf和雌二醇-β溶解在培養基中，在應用聚集的aβ1-42前預溫育1h。評價以下條件：-1對照板：12孔/條件●陰性對照：單獨培養基+0.1％dmso●中毒：澱粉樣蛋白-β1-4.2.(10μm)24小時●陽性對照：bdnf(50ng/ml)1小時，隨後澱粉樣蛋白-β1-42(10μm)24小時。●參照化合物：雌二醇(150nm)1小時，隨後澱粉樣蛋白-β1-42(10μm)24小時。-1藥物板：6孔/條件●陰性對照：單獨培養基+0.1％dmso●中毒：澱粉樣蛋白-β1-4.2.(10μm)24小時●藥物1：藥物1-1小時，隨後澱粉樣蛋白-β1-42(10μm)24小時。●藥物2：藥物2-1小時，隨後澱粉樣蛋白-β1-42(10μm)24小時。乳酸脫氫酶(ldh)活性測定中毒24小時後，去掉上清液並且用細胞毒性檢測試劑盒(ldh，rocheappliedscience，編號：11644793001，批次：11800300)分析。用於定量細胞毒性的這種比色法是基於測定從死亡細胞的細胞溶質釋放到上清液的乳酸脫氫酶(ldh)的活性。數據處理所有值表示為3個培養物的平均值±平均值標準誤差(每種條件n＝6)。對不同條件進行統計分析(anova，然後在允許的情況下進行dunnett檢驗，statview軟體5.0版)。結果表3和圖7中顯示了在對於原代皮質神經元細胞的毒性測定中所獲得的每個所選藥物的結果。表3ii.3組合治療對抗人aβ1-42肽對人hbme細胞的毒性的作用在人類細胞上評估本發明的藥物組合的療效。在這些測定中所使用的方案與以上ii.1部分中所述的相同。結果在人類大腦微血管內皮細胞上檢測了下列藥物組合：-巴氯芬和氨基己酸，-巴氯芬和左西孟旦，-氨基己酸和磺胺異噁唑，-氨基己酸和特比萘芬，-氨基己酸和左西孟旦，-左西孟旦和磺胺異噁唑，-左西孟旦和特比萘芬，-依普利酮和左西孟旦，-依普利酮和磺胺異噁唑，-依普利酮和非諾多泮，-舒洛地特和左西孟旦，-舒洛地特和磺胺異噁唑，-舒洛地特和非諾多泮，或-依普利酮和舒洛地特。如下表中所示和圖8-13中所示例的，全部所檢測的藥物組合在hbmec模型中顯示出對抗人aβ1-42肽的毒性的保護作用。表4iii.左西孟旦和磺胺異噁唑組合治療有效保護神經元對抗人aβ1-42毒性在該實施例中，評價使用左西孟旦和磺胺異噁唑的組合治療預防或降低人aβ1-42毒性作用的能力。在實施例ii.1中所公開的實驗條件下檢測所述組合治療。如ii.1中所公開的，使用人腦微血管內皮細胞培養物，並且將其與藥物組合同時或順序溫育。圖8中顯示了結果，其清楚表明，聚集的人澱粉樣肽(aβ1-42，2.5μm)產生顯著的中毒作用，比用介質處理的神經元高40％。磺胺異噁唑和左西孟旦的組合顯著預防這種中毒作用(圖8a)，而在那些濃度下，左西孟旦(圖8b)和磺胺異噁唑(圖8c)單獨對於中毒作用沒有顯著影響。iv.特比萘芬和磺胺異噁唑組合治療有效保護神經元對抗人aβ1-42毒性在該實施例中，評價使用特比萘芬和磺胺異噁唑的組合治療預防或降低人aβ1-42毒性作用的能力。在實施例ii.1中所公開的實驗條件下檢測所述組合治療。如ii.1中所公開的，使用人腦微血管內皮細胞培養物，並且將其與藥物組合同時或順序溫育。圖9中顯示了結果，其清楚表明，聚集的人澱粉樣肽(aβ1-42，2.5μm)產生顯著的中毒作用，比用介質處理的神經元高40％。特比萘芬和磺胺異噁唑的組合顯著預防這種中毒作用(圖9a)，而在那些濃度下，磺胺異噁唑(圖9b)和特比萘芬(圖9c)單獨對於中毒作用沒有顯著影響。v.左西孟旦和巴氯芬組合治療有效保護神經元對抗人aβ1-42毒性在該實施例中，評價使用左西孟旦和巴氯芬的組合治療預防或降低人aβ1-42毒性作用的能力。在實施例ii.1中所公開的實驗條件下檢測所述組合治療。如ii.1中所公開的，使用人腦微血管內皮細胞培養物，並且將其與藥物組合同時或順序溫育。圖10中顯示了結果。其清楚表明，聚集的人澱粉樣肽(aβ1-42，2.5μm)產生顯著的中毒作用，比用介質處理的神經元高40％。左西孟旦和巴氯芬的組合顯著預防這種中毒作用(圖10a)，而在那些濃度下，左西孟旦(圖10b)和巴氯芬(圖10c)單獨對於中毒作用沒有顯著影響。vi.氨基己酸和特比萘芬組合治療有效保護神經元對抗人aβ1-42毒性在該實施例中，評價使用氨基己酸和特比萘芬的組合治療預防或降低人aβ1-42毒性作用的能力。在實施例ii.1中所公開的實驗條件下檢測所述組合治療。如ii.1中所公開的，使用人腦微血管內皮細胞培養物，並且將其與藥物組合同時或順序溫育。圖11中顯示了結果。其清楚表明，聚集的人澱粉樣肽(aβ1-42，2.5μm)產生顯著的中毒作用，比用介質處理的神經元高40％。氨基己酸和特比萘芬的組合顯著預防這種中毒作用(圖11a)，而在那些濃度下，氨基己酸(圖11b)和特比萘芬(圖11c)單獨對於中毒作用沒有顯著影響。vii.氨基己酸和左西孟旦組合治療有效保護神經元對抗人aβ1-42毒性在該實施例中，評價使用氨基己酸和左西孟旦的組合治療預防或降低人aβ1-42毒性作用的能力。在實施例ii.1中所公開的實驗條件下檢測所述組合治療。如ii.1中所公開的，使用人腦微血管內皮細胞培養物，並且將其與藥物組合同時或順序溫育。圖12中顯示了結果。其清楚表明，聚集的人澱粉樣肽(aβ1-42，2.5μm)產生顯著的中毒作用，比用介質處理的神經元高40％。氨基己酸和左西孟旦的組合顯著預防這種中毒作用(圖12a)，而在那些濃度下，氨基己酸(圖12b)和左西孟旦(圖12c)單獨對於中毒作用沒有顯著影響。viii.特比萘芬和左西孟旦組合治療有效保護神經元對抗人aβ1-42毒性在該實施例中，評價使用特比萘芬和左西孟旦的組合治療預防或降低人aβ1-42毒性作用的能力。在實施例ii.1中所公開的實驗條件下檢測所述組合治療。如ii.1中所公開的，使用人腦微血管內皮細胞培養物，並且將其與藥物組合同時或順序溫育。圖13中顯示了結果。其清楚表明，聚集的人澱粉樣肽(aβ1-42，2.5μm)產生顯著的中毒作用，比用介質處理的神經元高40％。特比萘芬和左西孟旦的組合顯著預防這種中毒作用(圖13a)，而在那些濃度下，特比萘芬(圖13b)和左西孟旦(圖13c)單獨對於中毒作用沒有顯著影響。ix.體內活性在阿爾茨海默病的體內模型中檢測在體外檢測中有活性的化合物與其組合物。在許多研究中，在充當ad病模型的轉基因小鼠的大腦中，與阿爾茨海默病相關的突變的人類澱粉樣β蛋白前體(app)轉基因的過表達已經是促進aβ沉積的最可靠的方法。當它們衰老時，這些突變app小鼠形成穩固的澱粉樣蛋白病變和其他ad樣特點，包括突觸密度降低、反應性神經膠質增生和一些認知缺陷。許多突變app小鼠模型很少顯示出明顯的神經元喪失和神經元纖維纏結(nft)病變的跡象。對於該bri-aβ42轉基因為半合子的小鼠能夠存活並可生育，具有正常壽命。轉基因的bri-aβ42mrna以小鼠朊病毒蛋白啟動子的特徵性模式表達；在小腦顆粒細胞和海馬中檢測出最高的轉基因表達水平，其次是皮質、腦橋、丘腦和中腦。在轉基因融合蛋白中，在弗林蛋白酶樣切割位點處將aβ1-42融合到bri蛋白c末端，使得切割導致有效分泌aβ1-42到細胞腔和細胞外空間中。因此，這些小鼠特異性地表達aβ1-42異構體。半合子的bri-aβ42小鼠隨年齡積累不能用去汙劑溶解的澱粉樣蛋白-β，並早在3月齡時就在小腦中形成有核斑塊，隨後發生前腦病變的形成，直到12月齡時細胞外aβ斑塊才一致地出現在海馬和內嗅/梨狀皮質中。早在3個月時在轉基因小鼠的小腦分子層中就可以觀察到澱粉樣蛋白β沉積(有核斑塊)，其隨年齡變得更加明顯；在6月齡時，在內嗅/梨狀皮質和海馬中看到了偶發的細胞外斑塊，但是直到>12月齡時才能一致地發現。最老的小鼠在小腦、皮質、海馬和嗅球中顯示出廣泛分布的有核且彌散斑塊的病變。細胞外澱粉樣斑塊顯示出緻密的澱粉樣蛋白核心，並具有輻射狀的纖絲；在這些斑塊周圍觀察到了許多束營養不良的軸突。反應性神經膠質增生與斑塊有關。藥物處理已經從jackson實驗室(http：//jaxmice.jax.org/strain/007002.html)獲得轉基因tg(prnp-itm2b/app695*42)a12emc小鼠(37)。已經在混合的b6c3背景上維持被發現具有最高的aβ42血漿水平的小鼠，bri-aβ42a(12e)系。成年雄性轉基因小鼠可以自由接近食物和水。按照得到批准的研究動物護理和使用委員會議定書，將小鼠稱重並腹膜內注射或強餵對照溶液(安慰劑)或製備成不同劑量的本發明的藥物或表2的藥物組合，每日一次，連續進行10到20周。存活率分析使用kaplan–meier方法分析存活率。對於所有成對多重比較檢驗使用了holm–sidak方法(事後)。對無關的死亡進行檢查。所有比較在同窩仔畜間進行，從而限定來自背景種系差異的任何潛在的混雜效應。行為測試按照由若干作者發表的方法(38-41)設計和進行行為測試。morris水迷宮(mww)中的空間學習和記憶在直徑90cm、由白色塑料製成並裝填有乳白色水的圓形水池中進行本實驗。將直徑8cm的由透明塑料製成的逃離平臺浸沒在水平面下0.5cm。視覺線索由印刷成a4大小的字母的不同幾何形狀提供，並放置在周圍的四個壁上(距離水池50到70cm)。在4天內，每天對每隻小鼠進行四次試驗(試驗之間的間隔為5到7分鐘，總共16次試驗)。從四個不同起始點之一進行每個試驗。使用videotrack軟體(viewpoint)監測小鼠的運動。測定了找到逃離平臺所花費的時間(逃離潛伏期，最高60秒)。在找到平臺後，允許小鼠在其上停留15秒。將不能在60秒內找到平臺的小鼠引導到平臺，並允許其在上面停留15秒。對於這種情況，在記錄中輸入逃離潛伏期為60秒。除了第1天的第一次試驗之外，對每天的所有四次試驗進行平均，用於統計學分析。在第9天(最後一次訓練後5天)，對小鼠進行60秒的探索試驗，其中將平臺去除並讓小鼠搜尋它。記錄每隻動物在每個象限中花費的時間(象限搜索時間)。使用了3、7、10和12月齡的若干組雄性小鼠。少數一些小鼠表現出強烈幹擾測試的僵滯行為(例如，不動地躺在水中且拒絕遊泳)，從數據分析中排除這些動物。在安靜和弱光環境下進行所有行為實驗。輻射臂水迷宮中的工作記憶測試由在直徑100cm、裝有水的水池(也用於morris水迷宮和平臺識別任務)中安裝有鋁製插件以產生6個輻射狀分布的遊泳臂所組成的裝置的幫助下，獲得了這種基於認知的工作記憶靈敏性測定。測試由每天5次1分鐘的試驗、持續9-12天構成。在每天的測試開始時，將透明的被浸沒的平臺放置在6個遊泳臂之一的末端(隨機選擇、每天改變)。對於前四次習得試驗中的每次，將動物置於一個不含有平臺的臂中(隨機順序)，並允許其搜尋平臺。在60秒試驗期間，每次動物進入另一個不含平臺的臂，則將其輕輕放回到其起始位置並記錄錯誤。在4次試驗後，允許動物休息30分鐘，然後進行第5次(記憶力)試驗，其從最後的不含平臺的遊泳臂開始。對於每個試驗，記錄錯誤(臂選擇不正確)的次數和逃離潛伏期(到達平臺的時間，最多60秒)。在圓形平臺測試中的空間參照學習和記憶在由直徑69cm的圓形平臺沿圓周等距離間隔地有16個「逃離」孔所組成的裝置的幫助下進行基於認知的任務測試。將逃離庇護區安裝在一個孔的下方，並用黑色幕簾圍住平臺，幕簾上放置有各種視覺提示。在單次5分鐘試驗開始時，將動物置於平臺中央並提供令其厭惡的刺激(亮光、鼓風)。記錄錯誤(頭伸入非逃離孔)的總次數和逃離潛伏期(到達逃離孔的時間)。在平臺認知測試中的認知能力這種基於認知的搜索任務評估物體分辨和認識能力。目標物體由直徑9cm、安裝有10cm×40cm黑旗的圓形平臺組成，其位於直徑100cm的圓形水池的水面上方0.8cm處。測試由每天4次60s的試驗、連續進行4天構成。在每一天，對於每次試驗，將目標物體置於水池的不同象限中，對於所有4次試驗，在沿著水池圓周的相同位置處釋放動物。對於每次試驗記錄總潛伏期(最多60s)。修改的irwin檢測使用了從irwin修改的全面篩選來測定任何小鼠是否表現出與其基因型相關的生理、行為或感覺運動障礙。為了調查運動技能、協調性和肌肉力量，將小鼠置於緊系在兩個30cm高的柱子之間的線上，並評估它們在線上的平衡能力。此外，測定了它們用四隻爪子握緊並懸掛在線上至少5秒和爬回到線上的能力。血管澱粉樣蛋白沉積的定量為了對腦澱粉樣蛋白血管病變(caa)進行定量，在4℃下用生物素化-ab9抗體(抗aβ1-16，1:500)將以30μm間隔貫穿頂葉或小腦皮質軟腦膜的5μm的石蠟包埋切片免疫染色過夜(每個年齡組每種基因型n＝5-7隻小鼠，每隻小鼠n＝6個切片)。用修改的vonsattel評分系統(42)目測評估陽性染色的血管。通過將caa血管數量乘以caa嚴重性等級計算caa嚴重性分值。組織學：免疫組織化學和免疫螢光將3到12月齡的tg和wt小鼠麻醉，並用0.9％nacl和4％多聚甲醛的0.1mol/l磷酸緩衝鹽水(pbs)(ph7.4)溶液、或10％福馬林和4％多聚甲醛的0.1mol/lpbs(ph7.4)溶液相繼進行穿過心臟的灌注。取出腦和脊髓，並儲存在4％多聚甲醛中。將一些樣品包埋在石蠟中，並在滑動切片機上以10μm的厚度切片。在低溫恆溫器上切出冷凍切片(14μm)，並安放在鉻釩包被的載玻片上。通過用含有0.3％h2o2的甲醇處理切片30分鐘，淬滅內源性過氧化物酶。將切片在10％馬血清中阻斷。在4℃下在有1％馬血清存在下使用第一抗體溫育過夜。所有生物素化或螢光素偶聯、德克薩斯紅偶聯和amca偶聯的二級抗體、螢光染料、abc試劑盒和作為過氧化物酶活性的發色團的3，3'-二氨基聯苯胺都來自vetorlaboratories公司。與二級抗體的溫育在室溫下持續1小時。使用磷酸緩衝鹽水(0.1mol/lpbs，ph7.4)或tris緩衝鹽水(0.1mol/ltris，0.15mol/lnacl，ph7.4)進行所有清洗步驟(3-10分鐘)和抗體稀釋。按照製造商的手冊進行與abc複合物的溫育和用3，3'-二氨基聯苯胺的檢測。按照標準步驟進行蘇木精復染色。每次測定使用每種基因型、年齡和性別的小鼠至少3隻(43)。腦提取物的製備在最後一次注射後90到120分鐘之間，將大腦快速收穫在冰上並在-80℃下冷凍。在冷凍後稱重來自每隻小鼠的右側腦半球。採用中值絕對偏差的半球質量分析允許我們排除與組中其他樣品相比超過4個中值絕對偏差的樣品。將腦半球勻漿化，並按照製造商的說明書製備含有全部蛋白的細胞裂解物，用於酶測定試劑盒(r&dsystems，inc.)。簡單來說，將腦皮質在800μl含有低鹽的1×提取緩衝液(r&d試劑盒)中勻漿化，並在冰上溫育10分鐘。然後將勻漿液在4℃下以13,000g離心15分鐘。按照源自雙縮脲的測定法(pierce)估算每種樣品中的蛋白濃度。用western免疫印跡和夾心elisa技術測定app、aβ40和aβ42的水平。此外，從相同的提取物中測定α、β-和γ-分泌酶的活性。小鼠腦皮質提取物中總app水平的測定在每塊凝膠中上樣相等蛋白量的腦提取物，每種樣品每道30μg。每塊凝膠包含8種處理：對照；17.5mg/kg劑量的藥物1；若干種劑量的藥物2。為了使得凝膠內偏差最小化，每塊凝膠包括三套所有處理組。用22c11抗體探測每個印跡。還用β-肌動蛋白抗體探測每個印跡，以對轉移效率進行歸一化。將app條帶信號的強度用β-肌動蛋白的強度進行歸一化。將兩個「對照」樣品上樣在每個凝膠/印跡中，以測試印跡之間的偏差。用兩種方法進行印跡分析：逐個印跡(n＝3)，以測試凝膠間偏差；以及如(38-39)中所述的組合印跡(n＝9或10)。使用n＝3進行的逐個印跡分析與使用n＝9或10進行的最終分析顯示出相同的趨勢。提供了組合分析的結果。aβ夾心elisa對於腦aβelisa來說，獨立地測定了前腦和後腦的aβ水平，且分析中不包含嗅球。對於血漿aβ分析來說，在心臟穿刺後將血液收集在edta塗層的管中。在4℃下將血樣以3000rpm離心10分鐘，並將血漿分成等份並在使用前儲存在-80℃下。用末端特異性夾心elisa測定aβ水平，用ab9(抗aβ1-16ab)作為aβ40的捕獲ab，用13.1.1-hrp(抗aβ35-40ab)作為aβ40的檢測ab，且用ab9-hrp作為aβ42的檢測ab(每個年齡組中每種基因型n＝5-7個小鼠)。如(46)中所述，用相同小鼠組作為內部對照，將aβ水平針對以前的結果歸一化，從而使可能的elisa變異性最小化。western印跡在含有1％蛋白酶抑制劑混合物(roche)的放射免疫沉澱測定(ripa)緩衝液(bostonbioproducts，worcester，ma)中將速凍的前腦樣品勻漿。在4℃下將勻漿液以100,000×g離心1h。用bca蛋白測定法(pierce)測定上清液中的蛋白濃度。在bis-tris12％xt凝膠或bis-tris4–12％凝膠(bio-rad，hercules，ca)上運行蛋白樣品(20μg)，並將其轉移到0.2μm的硝酸纖維素膜上。如(46)中所述，將印跡在0.1mpbs中微波處理2分鐘，共兩次，並用ab82e1(抗aβ1-16，1:1000；ibl，gunma，日本)和抗appc末端20個胺基酸的抗體(1:1000)進行探測。將印跡切成條，並用抗β-肌動蛋白抗體(1:1000；sigma)作為上樣對照重新探測。使用imagej軟體計算相對條帶強度。實質澱粉樣蛋白沉積的定量將半腦在10％福馬林中浸泡固定並進行石蠟包埋處理。將腦組織切片(5μm)用抗總aβ抗體(ab)進行免疫染色。將切片用蘇木精復染色。將每個腦的通過海馬、梨狀皮質(前囪，-1.70到-2.80mm)或小腦(副絨球、crusansifrom和簡單小葉；前囪-5.40到-6.36mm)的6個切片用於定量(每個年齡組每種基因型n＝5-7隻小鼠)。使用metamorph軟體(moleculardevices，paloalto，ca)測定aβ斑塊負荷。對於有核斑塊的定量，將那些用於aβ負荷分析的連續切片用硫黃素s(thios)染色，並對海馬、內嗅/梨狀皮質或小腦中的硫黃素陽性斑塊的數量進行計數。以不知情方式進行所有上述分析。體內數據的統計學分析使用statistica8.0(statsoft)分析來自所有實驗的結果。使用anova以及holm-sidak事後多重比較檢驗或雙尾student'st檢驗分析aβ水平、澱粉樣斑塊負荷和caa嚴重性。如果數據組不滿足參數檢驗假設，則執行kruskal–wallis檢驗然後是dunn's事後多重比較或mann–whitney秩和檢驗。為了檢驗雙轉基因小鼠中的aβ水平是否與單轉基因同窩仔畜中的aβ水平的累加和一致，使用了不含截距檢驗的多重線性回歸。所有的比較在同窩仔畜間進行。排除對照(0mg/kg)樣品後進行藥物反應模擬。ed50對應於在實驗中誘導出最大藥物誘導反應的50％所需的劑量(mg/kg)。它是使用用於ed50對數的hill方程模型來計算。對於候選藥物組合進行體內實驗。以下表5中列出了學習和空間記憶的陽性結果。表5藥物morris水迷宮實驗中的結果特比萘芬和左西孟旦+特比萘芬和磺胺異噁唑+巴氯芬和左西孟旦+磺胺異噁唑和左西孟旦+氨基己酸和左西孟旦+氨基己酸和特比萘芬+參考文獻目錄1.crookr.,verkkoniemia.,etal.(1998).avariantofalzheimer'sdiseasewithspasticparaparesisandunusualplaquesduetodeletionofexon9ofpresenilin1.natmed.4(4)：452-5.2.houldenh.,bakerm.,etal.(2000).variantalzheimer'sdiseasewithspasticparaparesisandcottonwoolplaquesiscausedbyps-1mutationsthatleadtoexceptionallyhighamyloid-betaconcentrations.annneurol.48(5)：806-8.3.kwokj.b.,taddeik.,etal.(1997).twonovel(m233tandr278t)presenilin-1mutationsinearly-onsetalzheimer'sdiseasepedigreesandpreliminaryevidenceforassociationofpresenilin-1mutationswithanovelphenotype.neuroreport.8(6)：1537-42.4.verkkoniemia.,kalimoh.,etal.(2001).variantalzheimerdiseasewithspasticparaparesis：neuropathologicalphenotype.jneuropatholexpneurol.60(5)：483-92.5.citronm.(2004).strategiesfordiseasemodificationinalzheimer'sdisease.natrevneurosci.5(9)：677-85.6.suhy.h.andcheclerf.(2002).amyloidprecursorprotein,presenilins,andalpha-synuclein：molecularpathogenesisandpharmacologicalapplicationsinalzheimer'sdisease.pharmacolrev.54(3)：469-525.7.blackerd.,albertm.s.,etal.(1994).reliabilityandvalidityofnincds-adrdacriteriaforalzheimer'sdisease.thenationalinstituteofmentalhealthgeneticsinitiative.archneurol.51(12)：1198-204.8.rossorm.n.,foxn.c.,etal.(1996).clinicalfeaturesofsporadicandfamilialalzheimer'sdisease.neurodegeneration.5(4)：393-7.9.glennerg.g.,wongc.w.,etal.(1984).theamyloiddepositsinalzheimer'sdisease：theirnatureandpathogenesis.applpathol.2(6)：357-69.10.ballatorec.,leev.m.,etal.(2007).τ-mediatedneurodegenerationinalzheimer'sdiseaseandrelateddisorders.natrevneurosci.8(9)：663-72.11.bellk.f.andclaudiocuelloa.(2006).alteredsynapticfunctioninalzheimer'sdisease.eurjpharmacol.545(1)：11-21.12.hardyj.a.andhigginsg.a.(1992).alzheimer'sdisease：theamyloidcascadehypothesis.science.256(5054)：184-5.13.braakh.andbraake.(1991).neuropathologicalstageingofalzheimer-relatedchanges.actaneuropathol.82(4)：239-59.14.goldet.e.(2005).theabetahypothesis：leadingustorationally-designedtherapeuticstrategiesforthetreatmentorpreventionofalzheimerdisease.brainpathol.15(1)：84-7.15.hardyj.andselkoed.j.(2002).theamyloidhypothesisofalzheimer'sdisease：progressandproblemsontheroadtotherapeutics.science.297(5580)：353-6.16.selkoed.j.(2000).thegeneticsandmolecularpathologyofalzheimer'sdisease：rolesofamyloidandthepresenilins.neurolclin.18(4)：903-22.17.huangy.z.,wons.,etal.(2000).regulationofneuregulinsignalingbypsd-95interactingwitherbb4atcnssynapses.neuron.26(2)：443-55.18.naruses.,thinakarang.,etal.(1998).effectsofps1deficiencyonmembraneproteintraffickinginneurons.neuron.21(5)：1213-21.19.leeuwenf.n.,kainh.e.,etal.(1997).theguaninenucleotideexchangefactortiam1affectsneuronalmorphology；opposingrolesforthesmallgtpasesracandrho.jcellbiol.139(3)：797-807.20.geg.,fernándezc.a.,etal.(2007).bonemorphogeneticprotein1processesprolactintoa17-kdaantiangiogenicfactor.procnatlacadsciusa.104(24)：10010-5.21.hardied.g.(2007).amp-activated/snf1proteinkinases：conservedguar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