治療或預防膽固醇相關疾病的方法與流程

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本申請為分案申請，原申請的申請日為2012年5月10日，申請號為201280034417.9(pct/us2012/037394)，發明名稱為「治療或預防膽固醇相關疾病的方法」。本申請要求於2012年5月3日提交的美國臨時申請號61/642,363、於2012年3月22日提交的美國臨時申請號61/614,417、於2012年2月6日提交的美國臨時申請號61/595,526、於2011年11月21日提交的美國臨時申請號61/562,303、於2011年5月10日提交的美國臨時申請號61/484,610的權益，以上所有申請以引用方式併入本文。參考序列表本申請連同序列表以電子格式一同提交。所述序列表以命名為a-1635-wo-pct_sequence_listing.txt、創建於2012年5月10日、大小為315kb的文件來提供。所述序列表的電子格式中的信息以引用的方式整體併入本文。發明領域本發明涉及使用針對前蛋白轉化酶枯草桿菌蛋白酶/kexin型9(pcsk9)的抗原結合蛋白(包括抗體)來治療或預防膽固醇相關疾病(如高膽固醇血症、高脂血症或血脂異常)的方法。還描述了藥物製劑及產生所述製劑的方法。背景「膽固醇相關疾病」(其包括」血清膽固醇相關疾病」)包括以下任何一種或多種：高膽固醇血症、高脂血症、心臟病、代謝症候群、糖尿病、冠心病、中風、心血管疾病、阿茲海默症(alzheimer'sdisease)以及(一般來說)血脂異常，其可表現為例如總血清膽固醇升高、ldl升高、甘油三酯升高、vldl升高和/或低hdl。實際上，高膽固醇血症為人類冠心病(chd)的一個已確定的風險因素。降低低密度脂蛋白膽固醇(ldl-c)會使心血管風險降低並且是針對chd的藥物療法的主要目標。他汀類(statin)(羥甲基戊二醯基輔酶a[hmgcoa]還原酶抑制劑)為當前用於高膽固醇血症治療的首選。然而，新出現的數據指示更積極的高膽固醇血症治療伴有更低的chd事件風險。此外，一部分患者不耐受他汀類療法或不對他汀類療法充分起反應。因此，可單獨或與現有藥劑組合使用來更有效地降低ldl-c的新型療法可能有用。充分確定的是肝細胞表面低密度脂蛋白受體(ldlr)的再循環通過調控血漿ldl-c水平而在維持細胞和全身膽固醇平衡方面起關鍵作用。更近來，已經顯示前蛋白轉化酶枯草桿菌蛋白酶/kexin型9(pcsk9)在ldlr的再循環及調控方面起重要作用。pcsk9為絲氨酸蛋白酶的枯草桿菌蛋白酶家族的成員並且主要在肝臟中表達。在分泌之後，它通過涉及直接結合ldlr的機制使肝細胞表面ldlr發生轉譯後下調。肝ldlr的下調又致使循環的ldl-c的水平增加。因此，pcsk9可以代表高膽固醇血症背景下新型治療劑所抑制的目標。所述方法的強有力的理論依據可以從臨床前模型的研究並且從以下研究結果獲得：具有pcsk9功能喪失型突變的人的膽固醇水平低於正常且chd的發病率降低。各種實施方案的概述在本發明的一些方面，提供了一種穩定的製劑，其包含至少一種特異性結合pcsk9的單克隆抗體，其中pcsk9包含胺基酸seqidno1，所述單克隆抗體的含量為約40mg/ml至約300mg/ml；以及含量為約.05mm至約40mm的藥學上可接受的緩衝劑；以及含量為約.01％w/v至約20％w/v的藥學上可接受的表面活性劑；以及至少一種含量為約0.5％w/v至約10％w/v的藥學上可接受的穩定劑，其中所述穩定的製劑具有在約4.0至約6.0之間的ph。在一些實施方案中，上述穩定的製劑包含藥學上可接受的緩衝劑，其選自由以下組成的組：穀氨酸鹽、磷酸鹽、磷酸鹽緩衝鹽水、乙酸鈉、檸檬酸鈉、以及三羥甲基氨基甲烷緩衝劑。在具體的實施方案中，上述穩定的製劑的藥學上可接受的緩衝劑以10mm至20mm的量存在。在一個具體的實施方案中，所述藥學上可接受的緩衝劑是含量為10mm至20mm的乙酸鈉。在一些實施方案中，所述藥學上可接受的表面活性劑是以約0.004％w/v至約0.01％w/v的量存在。在具體的實施方案中，上述穩定的製劑的藥學上可接受的表面活性劑是聚山梨醇酯80或聚山梨醇酯20。在其它的實施方案中，所述藥學上可接受的表面活性劑是以約0.004％w/v至約0.01％w/v的量存在的聚山梨醇酯80或聚山梨醇酯20。在一些實施方案中，上述穩定的製劑的藥學上可接受的穩定劑是選自由以下組成的組：多羥基烴、二糖、多元醇、脯氨酸、精氨酸、賴氨酸、蛋氨酸、牛磺酸以及苯甲醇。在一些實施方案中，所述藥學上可接受的穩定劑是多羥基烴，其選自由以下組成的組：山梨糖醇、甘露糖醇以及甘油。在一個具體的實施方案中，上述穩定的製劑的多羥基烴是山梨糖醇。在一些實施方案中，所述藥學上可接受的穩定劑是二糖，其選自由以下組成的組：蔗糖、麥芽糖、乳糖、果糖以及海藻糖。在一些實施方案中，二糖穩定劑以約9％w/v的量存在。在一些實施方案中，所述二糖是蔗糖。在具體的實施方案中，在上述穩定的製劑中的蔗糖以約9％w/v的量存在。在一些實施方案中，穩定劑是胺基酸，其選自由以下組成的組：脯氨酸、精氨酸、賴氨酸、蛋氨酸以及牛磺酸。在一個具體的實施方案中，所述穩定劑是脯氨酸。在另一個實施方案中，在上述穩定的製劑中的脯氨酸以在約2％w/v與3％w/v之間的量存在。在一些實施方案中，上述穩定的製劑的ph是在約5.0至約5.5之間。在一些實施方案中，上述穩定的製劑包含單克隆抗體，其包含：包含與seqidno:23至少90％相同的胺基酸序列的輕鏈可變區和包含與seqidno:49至少90％相同的胺基酸序列的重鏈可變區；包含與seqidno:12至少90％相同的胺基酸序列的輕鏈可變區和包含與seqidno:67至少90％相同的胺基酸序列的重鏈可變區；包含與seqidno:461至少90％相同的胺基酸序列的輕鏈可變區和包含與seqidno:459至少90％相同的胺基酸序列的重鏈可變區；包含與seqidno:465至少90％相同的胺基酸序列的輕鏈可變區和包含與seqidno:463至少90％相同的胺基酸序列的重鏈可變區；或者包含與seqidno:485至少90％相同的胺基酸序列的輕鏈可變區和包含與seqidno:483至少90％相同的胺基酸序列的重鏈可變區。在一些實施方案中，上述穩定的製劑包含單克隆抗體，其包含：包含胺基酸序列seqidno:23的輕鏈可變區和包含胺基酸序列seqidno:49的重鏈可變區；包含胺基酸序列seqidno:12的輕鏈可變區和包含胺基酸序列seqidno:67的重鏈可變區；包含胺基酸序列seqidno:461的輕鏈可變區和包含胺基酸序列seqidno:459的重鏈可變區；包含胺基酸序列seqidno:465的輕鏈可變區和包含胺基酸序列seqidno:463的重鏈可變區；或者包含胺基酸序列seqidno:485的輕鏈可變區和包含胺基酸序列seqidno:483的重鏈可變區。在一些實施方案中，上述穩定的製劑包含單克隆抗體21b12、31h4、8a3、11f1或8a1。在一些實施方案中，上述穩定的製劑包括在25℃下30cp或更小的粘度。在具體的實施方案中，在上述穩定的製劑中所述單克隆抗體是以約70mg/ml至約150mg/ml存在並且所述穩定的製劑包括在25℃下12cp或更小的粘度。在一些實施方案中，上述穩定的製劑包括在約250mosmol/kg至約350mosmol/kg之間的滲透壓。在一些實施方案中，上述穩定的製劑保持穩定至少3個月、6個月、12個月或24個月。在具體的實施方案中，上述穩定的製劑包含具有與seqidno:465至少90％相同的可變區和與seqidno:463至少90％相同的重鏈可變區的單克隆抗體。在一些實施方案中，上述穩定的製劑包含具有包含胺基酸序列seqidno:465的輕鏈可變區和包含胺基酸序列seqidno:463的重鏈可變區的單克隆抗體，並且其中所述單克隆抗體的量為約150。在一些實施方案中，上述穩定的製劑包含抗體，其包含與seqidno:23至少90％相同的輕鏈可變區和與seqidno:49至少90％相同的重鏈可變區。在一些實施方案中，上述穩定的製劑包含具有包含胺基酸序列seqidno:23的輕鏈可變區和包含胺基酸序列seqidno:49的重鏈可變區的單克隆抗體，並且其中所述單克隆抗體的量為約120mg/ml或140mg/ml。在具體的實施方案中，上述穩定的製劑包含(a)含量為約70mg/ml至約200mg/ml的單克隆抗體，所述單克隆抗體包含：包含胺基酸序列seqidno:23的輕鏈可變區和包含胺基酸序列seqidno:49的重鏈可變區、包含胺基酸序列seqidno:12的輕鏈可變區和包含胺基酸序列seqidno:67的重鏈可變區、包含胺基酸序列seqidno:461的輕鏈可變區和包含胺基酸序列seqidno:459的重鏈可變區、包含胺基酸序列seqidno:465的輕鏈可變區和包含胺基酸序列seqidno:463的重鏈可變區、或者包含胺基酸序列seqidno:485的輕鏈可變區和包含胺基酸序列seqidno:483的重鏈可變區；以及約10mm的乙酸鈉；約9.0％w/v的蔗糖；約0.004％w/v至約0.01％w/v的聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80；以及約5.2的ph。在這方面，所述單克隆抗體可以是21b12、8a3、11f1。在這方面的具體實施方案中，所述單克隆抗體為21b12，並且在上述穩定的製劑中以約140mg/ml的量存在。在這方面的其它實施方案中，要求的穩定的製劑包含約.004％的聚山梨醇酯20。在這方面的其它具體實施方案中，上述穩定的製劑包含的單克隆抗體是8a3，其以約150mg/ml的量存在。在這方面的其它實施方案中，上述穩定的製劑包含的單克隆抗體是11f1，其含量為約140mg/ml、150mg/ml、160mg/ml、170mg/ml、180mg/ml、190mg/ml或200mg/ml。在具體的實施方案中，包含11f1的穩定的製劑還包含約.01％的聚山梨醇酯80。在另一個實施方案中，上述穩定的製劑包含(a)含量為約70mg/ml至約200mg/ml的單克隆抗體，所述單克隆抗體包含：包含胺基酸序列seqidno:23的輕鏈可變區和包含胺基酸序列seqidno:49的重鏈可變區、包含胺基酸序列seqidno:12的輕鏈可變區和包含胺基酸序列seqidno:67的重鏈可變區、包含胺基酸序列seqidno:461的輕鏈可變區和包含胺基酸序列seqidno:459的重鏈可變區、包含胺基酸序列seqidno:465的輕鏈可變區和包含胺基酸seqidno:463的重鏈可變區、或包含胺基酸序列seqidno:485的輕鏈可變區和包含胺基酸序列seqidno:483的重鏈可變區；以及約10mm的乙酸鈉；在約2.0％w/v至3.0％w/v之間的脯氨酸；約0.01％w/v的聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80；以及約5.0的ph。在這方面的一些實施方案中，所述穩定的製劑包含的單克隆抗體是21b12、8a3或11f1。在本發明的另一方面，一種穩定的製劑，其包含含量為約70mg/ml至約200mg/ml的抗pcsk9單克隆抗體，所述單克隆抗體包含：包含與序列seqidno:577有至少90％同一性的胺基酸序列的輕鏈可變區和包含與序列seqidno:576有至少90％同一性的胺基酸序列的重鏈可變區、包含胺基酸序列seqidno:577的輕鏈可變區和包含胺基酸序列seqidno:576的重鏈可變區、包含與序列seqidno:588有至少90％同一性的胺基酸序列的輕鏈可變區和包含與序列seqidno:589有至少90％同一性的胺基酸序列的重鏈可變區、或包含胺基酸序列seqidno:588的輕鏈可變區和包含胺基酸序列seqidno:589的重鏈可變區；以及(b)約10mm的乙酸鈉；(c)約9.0％w/v的蔗糖；(d)約0.004％w/v至約0.01％w/v的聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80；以及(e)約5.2的ph。在本發明的另一方面，一種穩定的製劑，其包含含量為約70mg/ml至約200mg/ml的抗pcsk9單克隆抗體，所述單克隆抗體包含：包含與序列seqidno:577有至少90％同一性的胺基酸序列的輕鏈可變區和包含與序列seqidno:576有至少90％同一性的胺基酸序列的重鏈可變區、包含胺基酸序列seqidno:577的輕鏈可變區和包含胺基酸序列seqidno:576的重鏈可變區、包含與序列seqidno:588有至少90％同一性的胺基酸序列的輕鏈可變區和包含與序列seqidno:589有至少90％同一性的胺基酸序列的重鏈可變區、或包含胺基酸序列seqidno:588的輕鏈可變區和包含胺基酸序列seqidno:589的重鏈可變區；以及(b)約10mm的乙酸鈉；(c)在約2.0％w/v至3.0％w/v之間的脯氨酸；(d)約0.01％w/v的聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80；以及(e)約5.0的ph。在一些方面，所提供的本發明包括一種降低患者的血清ldl膽固醇的方法，其包括向有需要的患者以約10mg至約3000mg的劑量施用至少一種抗pcsk9的抗體，由此使所述血清ldl膽固醇水平如與患者的血清ldl膽固醇的給藥前水平相比降低了至少約15％。在本發明的這方面的一些實施方案中，如與患者的血清ldl膽固醇的給藥前水平相比，所述患者的血清ldl膽固醇水平降低了至少約20％、至少約25％、至少約30％、至少約35％、至少約40％、至少約45％、至少約50％、至少約55％、至少約60％、至少約65％、至少約70％、至少約75％、至少約80％、至少約85％或至少約90％。在本發明的這方面的一些實施方案中，所述抗pcsk9抗體以約35mg至約3000mg、約35mg至約2800mg、約35mg至約2500mg、約35mg至約2000mg、約35mg至約1800mg、約35mg至約1400mg、約25mg至約1200mg、約35mg至約1000mg、約35mg至約700mg、約45mg至約700mg、約45mg至約600mg、約45mg至約450mg、約70mg至約450mg、約105mg至約420mg、約120mg至約200mg、約140mg至約200mg、約140mg至約180mg、或約140mg至約170mg、約420mg至約3000mg、約700mg至約3000mg、約1000mg至約3000mg、約1200mg至約3000mg、約1400mg至約3000mg、約1800mg至約3000mg、約2000mg至約3000mg、約2400mg至約3000mg、或約2800mg至約3000mg的劑量施用至患者。在這方面的一些實施方案中，所述抗pcsk9抗體以約35mg、約45mg、約70mg、約105mg、約120mg、約140mg、約150mg、約160mg、約170mg、約180mg、約190mg、約200mg、約210mg、約280mg、約360mg、約420mg、約450mg、約600mg、約700mg、約1200mg、約1400mg、約1800mg、約2000mg、約2500mg、約2800mg、或約3000mg的劑量施用至患者。在本發明的這方面的一些實施方案中，所述抗pcsk9抗體按照日程安排施用至患者，所述日程安排選自由以下組成的組：(1)每周一次；(2)每兩周一次；(3)每月一次；(4)每隔一月一次；(5)每三個月一次；(6)每六個月一次；以及(7)每十二個月一次。在本發明的這方面的一些實施方案中，所述抗pcsk9抗體是以胃腸外方式施用的。在本發明的這方面的一些實施方案中，所述抗pcsk9抗體是靜脈內施用的。在本發明的這方面的一些實施方案中，所述抗pcsk9抗體是皮下施用的。在本發明的這方面的一些實施方案中，所述抗pcsk9抗體包含：包含與seqidno:23至少90％相同的胺基酸序列的輕鏈可變區和包含與seqidno:49至少90％相同的胺基酸序列的重鏈可變區；包含與seqidno:12至少90％相同的胺基酸序列的輕鏈可變區和包含與seqidno:67至少90％相同的胺基酸序列的重鏈可變區；包含與seqidno:461至少90％相同的胺基酸序列的輕鏈可變區和包含與seqidno:459至少90％相同的胺基酸序列的重鏈可變區；包含與seqidno:465至少90％相同的胺基酸序列的輕鏈可變區和包含與seqidno:463至少90％相同的胺基酸序列的重鏈可變區；包含與seqidno:485至少90％相同的胺基酸序列的輕鏈可變區和包含與seqidno:483至少90％相同的胺基酸序列的重鏈可變區；或包含與seqidno:582至少90％相同的胺基酸序列的輕鏈可變區和包含與seqidno:583至少90％相同的胺基酸序列的重鏈可變區。在本發明的這方面的一些實施方案中，所述抗pcsk9抗體包含：包含胺基酸序列seqidno:23的輕鏈可變區和包含胺基酸序列seqidno:49的重鏈可變區；包含胺基酸序列seqidno:12的輕鏈可變區和包含胺基酸序列seqidno:67的重鏈可變區；包含胺基酸序列seqidno:461的輕鏈可變區和包含胺基酸序列seqidno:459的重鏈可變區；包含胺基酸序列seqidno:465的輕鏈可變區和包含胺基酸序列seqidno:463的重鏈可變區；包含胺基酸序列seqidno:485的輕鏈可變區和包含胺基酸序列seqidno:483的重鏈可變區；或包含胺基酸序列seqidno:582的輕鏈可變區和包含胺基酸序列seqidno:583的重鏈可變區。在本發明的這方面的一些實施方案中，所述抗pcsk9抗體是選自由以下組成的組：21b12、31h4、8a3、11f1以及8a1。在一些方面，本發明包括一種治療或預防具有血清ldl膽固醇水平的患者的膽固醇相關疾病的方法，其包括以約10mg至約3000mg的劑量向有需要的患者施用至少一種抗pcsk9抗體，由此治療或預防患者的膽固醇相關疾病。在這個實施方案的一方面，有待治療或預防的膽固醇相關疾病是家族性高膽固醇血症包括雜合子家族性高膽固醇血症和純合子家族性高膽固醇血症、非家族性高膽固醇血症、脂蛋白(a)升高、心臟病、代謝症候群、糖尿病、冠心病、中風、心血管疾病、阿茲海默症、外周動脈疾病、高脂血症或血脂異常。在這方面的一些實施方案中，如與所述患者的血清ldl膽固醇的給藥前水平相比，所述患者的血清ldl膽固醇水平降低了至少約15％、至少約20％、至少約25％、至少約30％、至少約35％、至少約40％、至少約45％、至少約50％、至少約55％、至少約60％、至少約65％、至少約70％、至少約75％、至少約80％、至少約85％或至少約90％。在本發明的這方面的一些實施方案中，所述抗pcsk9抗體以約35mg至約3000mg、約35mg至約2800mg、約35mg至約2500mg、約35mg至約2000mg、約35mg至約1800mg、約35mg至約1400mg、約25mg至約1200mg、約35mg至約1000mg、約35mg至約700mg、約45mg至約700mg、約45mg至約600mg、約45mg至約450mg、約70mg至約450mg、約105mg至約420mg、約120mg至約200mg、約140mg至約200mg、約140mg至約180mg、或約140mg至約170mg、約420mg至約3000mg、約700mg至約3000mg、約1000mg至約3000mg、約1200mg至約3000mg、約1400mg至約3000mg、約1800mg至約3000mg、約2000mg至約3000mg、約2400mg至約3000mg、或約2800mg至約3000mg的劑量施用至患者。在這方面的一些實施方案中，所述抗pcsk9抗體以約35mg、約45mg、約70mg、約105mg、約120mg、約140mg、約150mg、約160mg、約170mg、約180mg、約190mg、約200mg、約210mg、約280mg、約360mg、約420mg、約450mg、約600mg、約700mg、約1200mg、約1400mg、約1800mg、約2000mg、約2500mg、約2800mg、或約3000mg的劑量施用至患者。在本發明的這方面的一些實施方案中，所述抗pcsk9抗體按照日程安排施用至患者，所述日程安排選自由以下組成的組：(1)每周一次；(2)每兩周一次；(3)每月一次；(4)每隔一月一次；(5)每三個月一次；(6)每六個月一次；以及(7)每十二個月一次。在本發明的這方面的一些實施方案中，所述抗pcsk9抗體是以胃腸外方式施用的。在本發明的這方面的一些實施方案中，所述抗pcsk9抗體是靜脈內施用的。在本發明的這方面的一些實施方案中，所述抗pcsk9抗體是皮下施用的。在本發明的這方面的一些實施方案中，所述抗pcsk9抗體包含：包含與seqidno:23至少90％相同的胺基酸序列的輕鏈可變區和包含與seqidno:49至少90％相同的胺基酸序列的重鏈可變區；包含與seqidno:12至少90％相同的胺基酸序列的輕鏈可變區和包含與seqidno:67至少90％相同的胺基酸序列的重鏈可變區；包含與seqidno:461至少90％相同的胺基酸序列的輕鏈可變區和包含與seqidno:459至少90％相同的胺基酸序列的重鏈可變區；包含與seqidno:465至少90％相同的胺基酸序列的輕鏈可變區和包含與seqidno:463至少90％相同的胺基酸序列的重鏈可變區；包含與seqidno:485至少90％相同的胺基酸序列的輕鏈可變區和包含與seqidno:483至少90％相同的胺基酸序列的重鏈可變區；或包含與seqidno:582至少90％相同的胺基酸序列的輕鏈可變區和包含與seqidno:583至少90％相同的胺基酸序列的重鏈可變區。在本發明的這方面的一些實施方案中，所述抗pcsk9抗體包含：包含胺基酸序列seqidno:23的輕鏈可變區和包含胺基酸序列seqidno:49的重鏈可變區；包含胺基酸序列seqidno:12的輕鏈可變區和包含胺基酸序列seqidno:67的重鏈可變區；包含胺基酸序列seqidno:461的輕鏈可變區和包含胺基酸序列seqidno:459的重鏈可變區；包含胺基酸序列seqidno:465的輕鏈可變區和包含胺基酸序列seqidno:463的重鏈可變區；包含胺基酸序列seqidno:485的輕鏈可變區和包含胺基酸序列seqidno:483的重鏈可變區；或包含胺基酸序列seqidno:582的輕鏈可變區和包含胺基酸序列seqidno:583的重鏈可變區。在本發明的這方面的一些實施方案中，所述抗pcsk9抗體是選自由以下組成的組：21b12、31h4、8a3、11f1以及8a1。在本發明的這方面的一些實施方案中，所述抗pcsk9抗體按照日程安排施用至患者，所述日程安排選自由以下組成的組：(1)每周一次；(2)每兩周一次；(3)每月一次；(4)每隔一月一次；(5)每三個月一次；(6)每六個月一次；以及(7)每十二個月一次。在本發明的這方面的一些實施方案中，所述抗pcsk9抗體是以胃腸外方式施用的。在本發明的這方面的一些實施方案中，所述抗pcsk9抗體是靜脈內施用的。在本發明的這方面的一些實施方案中，所述抗pcsk9抗體是皮下施用的。在本發明的具體的實施方案中，所述抗pcsk9抗體是21b12和31h4。在一些實施方案中，所述抗pcsk9抗體包含：包含與seqidno:23至少90％相同的胺基酸序列的輕鏈可變區和包含與seqidno:49至少90％相同的胺基酸序列的重鏈可變區。在一些實施方案中，所述抗pcsk9抗體包含：包含胺基酸序列seqidno:23的輕鏈可變區和包含胺基酸序列seqidno:49的重鏈可變區。在一些實施方案中，所述抗pcsk9抗體為21b12。在一個具體的實施方案中，其中所述抗pcsk9抗體包含與seqidno:23至少90％相同的胺基酸序列和包含與seqidno:49至少90％相同的胺基酸序列的重鏈可變區或包含包含胺基酸序列seqidno:23的輕鏈可變區和包含胺基酸序列seqidno:49的重鏈可變區；或抗體為21b12，所述抗pcsk9抗體以約21mg至約70mg的劑量每周一次皮下施用至患者，其中患者的血清ldl膽固醇水平降低了至少約15％至50％，持續約3至10天；以約21mg的劑量每周一次皮下施用至患者，其中患者的血清ldl膽固醇水平降低了至少約15％至50％，持續約3至10天；以約35mg的劑量每周一次皮下施用至患者，其中患者的血清ldl膽固醇水平降低了至少約15％至50％，持續約3至10天；以約70mg的劑量每周一次皮下施用至患者，其中患者的血清ldl膽固醇水平降低了至少約15％至50％，持續約3至10天；以約70mg至約280mg的劑量每隔一周一次皮下施用至患者，其中患者的血清ldl膽固醇水平降低了至少約15％至50％，持續約7至14天；以約70mg的劑量每隔一周一次皮下施用至患者，其中患者的血清ldl膽固醇水平降低了至少約15％至50％，持續約7至14天；以約105mg的劑量每隔一周一次皮下施用至患者，其中患者的血清ldl膽固醇水平降低了至少約15％至50％，持續約7至14天；以約120mg的劑量每隔一周一次皮下施用至患者，其中患者的血清ldl膽固醇水平降低了至少約15％至50％，持續約7至14天；以約140mg的劑量每隔一周一次皮下施用至患者，其中患者的血清ldl膽固醇水平降低了至少約15％至50％，持續約7至14天；以約210mg的劑量每隔一周一次皮下施用至患者，其中患者的血清ldl膽固醇水平降低了至少約15％至50％，持續約7至14天；以約280mg的劑量每隔一周一次皮下施用至患者，其中患者的血清ldl膽固醇水平降低了至少約15％至50％，持續約7至14天；以約280mg至約420mg的劑量每四周一次皮下施用至患者，其中患者的血清ldl膽固醇水平降低了至少約15％至50％，持續約21至31天；以約280mg的劑量每四周一次皮下施用至患者，其中患者的血清ldl膽固醇水平降低了至少約15％至50％，持續約21至31天；以約350mg的劑量每四周一次皮下施用至患者，其中患者的血清ldl膽固醇水平降低了至少約15％至50％，持續約21至31天；以約420mg的劑量每四周一次皮下施用至患者，其中患者的血清ldl膽固醇水平降低了15％至50％，持續約21至31天。在另一個具體的實施方案中，其中所述抗pcsk9抗體包含與seqidno:23至少90％相同的胺基酸序列和包含與seqidno:49至少90％相同的胺基酸序列的重鏈可變區或包含包含胺基酸序列seqidno:23的輕鏈可變區和包含胺基酸序列seqidno:49的重鏈可變區；或抗體為21b12，所述抗pcsk9抗體以約420mg至約3000mg的劑量每周一次靜脈內施用至患者，其中患者的血清ldl膽固醇水平降低了15％至50％，持續約3至10天；以約700mg的劑量每周一次靜脈內施用至患者，其中患者的血清ldl膽固醇水平降低了15％至50％，持續約3至10天；以約1200mg的劑量每周一次靜脈內施用至患者，其中患者的血清ldl膽固醇水平降低了15％至50％，持續約3至10天；以大於約1200mg至約3000mg的劑量每周一次靜脈內施用至患者，其中患者的血清ldl膽固醇水平降低了15％至50％，持續約3至10天；以約420mg至約3000mg的劑量每隔一周一次靜脈內施用至患者，其中患者的血清ldl膽固醇水平降低了15％至50％，持續約7至14天；以約700mg的劑量每隔一周一次靜脈內施用至患者，其中患者的血清ldl膽固醇水平降低了15％至50％，持續約7至14天；以約1200mg的劑量每隔一周一次靜脈內施用至患者，其中患者的血清ldl膽固醇水平降低了15％至50％，持續約21至31天；以大於約1200mg至約3000mg的劑量每隔一周一次靜脈內施用至患者，其中患者的血清ldl膽固醇水平降低了15％至50％，持續約7至14天；以約420mg至約3000mg的劑量每四周一次靜脈內施用至患者，其中患者的血清ldl膽固醇水平降低了15％至50％，持續約21至31天；以約700mg的劑量每四周一次靜脈內施用至患者，其中患者的血清ldl膽固醇水平降低了15％至50％，持續約21至31天；以約1200mg的劑量每四周一次靜脈內施用至患者，其中患者的血清ldl膽固醇水平降低了15％至50％，持續約21至31天；以大於約1200mg至約3000mg的劑量每四周一次靜脈內施用至患者，其中患者的血清ldl膽固醇水平降低了15％至50％，持續約21至31天。在另一個具體的實施方案中，其中所述抗pcsk9抗體包含與seqidno:23至少90％相同的胺基酸序列和包含與seqidno:49至少90％相同的胺基酸序列的重鏈可變區或包含包含胺基酸序列seqidno:23的輕鏈可變區和包含胺基酸序列seqidno:49的重鏈可變區；或抗體為21b12，所述抗pcsk9抗體以約21mg的劑量每周一次皮下施用至患者，其中患者的血清ldl膽固醇水平降低了至少約30％至50％，持續約7至10天；以約35mg的劑量每周一次皮下施用至患者，其中患者的血清ldl膽固醇水平降低了至少約30％至50％，持續約7至10天；以約70mg的劑量每周一次皮下施用至患者，其中患者的血清ldl膽固醇水平降低了至少約30％至50％，持續約7至10天；以約70mg的劑量每隔一周一次皮下施用至患者，其中患者的血清ldl膽固醇水平降低了至少約約30％至50％，持續約10至14天；以約105mg的劑量每隔一周一次皮下施用至患者，其中患者的血清ldl膽固醇水平降低了至少約30％至50％，持續約10至14天；以約120mg的劑量每隔一周一次皮下施用至患者，其中患者的血清ldl膽固醇水平降低了至少約30％至50％，持續約10至14天；以約140mg的劑量每隔一周一次皮下施用至患者，其中患者的血清ldl膽固醇水平降低了至少約30％至50％，持續約10至14天；以約210mg的劑量每隔一周一次皮下施用至患者，其中患者的血清ldl膽固醇水平降低了至少約30％至50％，持續約10至14天；以約280mg的劑量每隔一周一次皮下施用至患者，其中患者的血清ldl膽固醇水平降低了至少約30％至50％，持續約10至14天；以約280mg至約420mg的劑量每四周一次皮下施用至患者，其中患者的血清ldl膽固醇水平降低了至少約30％至50％，持續約24至28天；以約280mg的劑量每四周一次皮下施用至患者，其中患者的血清ldl膽固醇水平降低了至少約30％至50％，持續約24至28天；以約350mg的劑量每四周一次皮下施用至患者，其中患者的血清ldl膽固醇水平降低了至少約30％至50％，持續約24至28天；以約420mg的劑量每四周一次皮下施用至患者，其中患者的血清ldl膽固醇水平降低了30％至50％，持續約24至28天。在另一個具體的實施方案中，其中所述抗pcsk9抗體包含與seqidno:23至少90％相同的胺基酸序列和包含與seqidno:49至少90％相同的胺基酸序列的重鏈可變區或包含包含胺基酸序列seqidno:23的輕鏈可變區和包含胺基酸序列seqidno:49的重鏈可變區；或抗體為21b12，所述抗pcsk9抗體以約420mg至約3000mg的劑量每周一次靜脈內施用至患者，其中患者的血清ldl膽固醇水平降低了30％至50％，持續約7至10天；以約700mg的劑量每周一次靜脈內施用至患者，其中患者的血清ldl膽固醇水平降低了30％至50％，持續約7至10天；以約1200mg的劑量每周一次靜脈內施用至患者，其中患者的血清ldl膽固醇水平降低了30％至50％，持續約7至10天；以大於約1200mg至約3000mg的劑量每周一次靜脈內施用至患者，其中患者的血清ldl膽固醇水平降低了30％至50％，持續約7至10天；以約420mg至約3000mg的劑量每隔一周一次靜脈內施用至患者，其中患者的血清ldl膽固醇水平降低了30％至50％，持續約10至14天；以約700mg的劑量每隔一周一次靜脈內施用至患者，其中患者的血清ldl膽固醇水平降低了30％至50％，持續約10至14天；以約1200mg的劑量每隔一周一次靜脈內施用至患者，其中患者的血清ldl膽固醇水平降低了30％至50％，持續約10至14天；以大於約1200mg至約3000mg的劑量每隔一周一次靜脈內施用至患者，其中患者的血清ldl膽固醇水平降低了30％至50％，持續約10至14天；以約420mg至約3000mg的劑量每四周一次靜脈內施用至患者，其中患者的血清ldl膽固醇水平降低了30％至50％，持續約24至28天；以約700mg的劑量每四周一次靜脈內施用至患者，其中患者的血清ldl膽固醇水平降低了30％至50％，持續約24至28天；以約1200mg的劑量每四周一次靜脈內施用至患者，其中患者的血清ldl膽固醇水平降低了30％至50％，持續約24至28天；以大於約1200mg至約3000mg的劑量每四周一次靜脈內施用至患者，其中患者的血清ldl膽固醇水平降低了30％至50％，持續約24至28天。在本發明的具體的實施方案中，所述抗pcsk9抗體為8a3、11f1和8a1。在一些實施方案中，所述抗pcsk9抗體包含：包含與seqidno:465至少90％相同的胺基酸序列的輕鏈可變區和包含與seqidno:463至少90％相同的胺基酸序列的重鏈可變區。在一些實施方案中，所述抗pcsk9抗體包含：包含胺基酸序列seqidno:465的輕鏈可變區和包含胺基酸序列seqidno:463的重鏈可變區。在一些實施方案中，所述抗pcsk9抗體為11f1。在一個具體的實施方案中，其中所述抗pcsk9抗體包含與seqidno:465至少90％相同的胺基酸序列和包含與seqidno:463至少90％相同的胺基酸序列的重鏈可變區或包含包含胺基酸序列seqidno:465的輕鏈可變區和包含胺基酸序列seqidno:463的重鏈可變區；或抗體為11f1，所述抗pcsk9抗體以約45mg的劑量每周一次皮下施用至患者，其中患者的血清ldl膽固醇水平降低了至少約15％至50％，持續約3至10天；以約150mg的劑量每隔一周一次皮下施用至患者，其中患者的血清ldl膽固醇水平降低了至少約15％至50％，持續約7至14天；以約150mg的劑量每四周一次皮下施用至患者，其中患者的血清ldl膽固醇水平降低了至少約15％至50％，持續約21至31天；以大於約150mg至約200mg的劑量每四周一次皮下施用至患者，其中患者的血清ldl膽固醇水平降低了至少約15％至50％，持續約21至31天；以約170mg至約180mg的劑量每四周一次皮下施用至患者，其中患者的血清ldl膽固醇水平降低了至少約15％至50％，持續約21至31天；以約150mg至約170mg的劑量每四周一次皮下施用至患者，其中患者的血清ldl膽固醇水平降低了至少約15％至50％，持續約21至31天；以約450mg的劑量每四周一次皮下施用至患者，其中患者的血清ldl膽固醇水平降低了至少約15％至50％，持續約21至31天；以約150mg的劑量每六周一次皮下施用至患者，其中患者的血清ldl膽固醇水平降低了至少約15％至50％，持續約31至42天；以大於約150mg至約200mg的劑量每六周一次皮下施用至患者，其中患者的血清ldl膽固醇水平降低了至少約15％至50％，持續約31至42天；以約170mg至約180mg的劑量每六周一次皮下施用至患者，其中患者的血清ldl膽固醇水平降低了至少約15％至50％，持續約31至42天；以約150mg至約170mg的劑量每六周一次皮下施用至患者，其中患者的血清ldl膽固醇水平降低了至少約15％至50％，持續約31至42天；以約450mg的劑量每六周一次皮下施用至患者，其中患者的血清ldl膽固醇水平降低了至少約15％至50％，持續約31至42天；以約140mg至約200mg的劑量每八周一次皮下施用至患者，其中患者的血清ldl膽固醇水平降低了15％至50％，持續約45至56天；以約170mg至約180mg的劑量每八周一次皮下施用至患者，其中患者的血清ldl膽固醇水平降低了15％至50％，持續約45至56天；以約150mg至約170mg的劑量每八周一次皮下施用至患者，其中患者的血清ldl膽固醇水平降低了15％至50％，持續約45至56天；以約450mg的劑量每八周一次皮下施用至患者，其中患者的血清ldl膽固醇水平降低了15％至50％，持續約45至56天；以約600mg的劑量每八周一次皮下施用至患者，其中患者的血清ldl膽固醇水平降低了至少約15％至50％，持續約45至56天；以約700mg的劑量每八周一次皮下施用至患者，其中患者的血清ldl膽固醇水平降低了至少約15％至50％，持續約45至56天；以約600mg的劑量每十二周一次皮下施用至患者，其中患者的血清ldl膽固醇水平降低了至少約15％至50％，持續約74至84天；以約700mg的劑量每十二周一次皮下施用至患者，其中患者的血清ldl膽固醇水平降低了至少約15％至50％，持續約74至84天；以約600mg的劑量每十六周一次皮下施用至患者，其中患者的血清ldl膽固醇水平降低了至少約15％至50％，持續約100至112天；以約700mg的劑量每十六周一次皮下施用至患者，其中患者的血清ldl膽固醇水平降低了至少約15％至50％，持續約100至112天。在本發明的一個具體的實施方案中，其中所述抗pcsk9抗體包含與seqidno:465至少90％相同的胺基酸序列和包含與seqidno:463至少90％相同的胺基酸序列的重鏈可變區或包含包含胺基酸序列seqidno:465的輕鏈可變區和包含胺基酸序列seqidno:463的重鏈可變區；或抗體為11f1，所述抗pcsk9抗體以約45mg的劑量每周一次皮下施用至患者，其中患者的血清ldl膽固醇水平降低了至少約30％至50％，持續約7至10天；以約150mg的劑量每隔一周一次皮下施用至患者，其中患者的血清ldl膽固醇水平降低了至少約30％至50％，持續約10至14天；以約150mg的劑量每四周一次皮下施用至患者，其中患者的血清ldl膽固醇水平降低了至少約30％至50％，持續約24至28天；以大於約150mg至約200mg的劑量每四周一次皮下施用至患者，其中患者的血清ldl膽固醇水平降低了至少約30％至50％，持續約24至28天；以約170mg至約180mg的劑量每四周一次皮下施用至患者，其中患者的血清ldl膽固醇水平降低了至少約30％至50％，持續約24至28天；以約150mg至約170mg的劑量每四周一次皮下施用至患者，其中患者的血清ldl膽固醇水平降低了至少約30％至50％，持續約24至28天；以約450mg的劑量每四周一次皮下施用至患者，其中患者的血清ldl膽固醇水平降低了至少約30％至50％，持續約24至28天；以約150mg的劑量每六周一次皮下施用至患者，其中患者的血清ldl膽固醇水平降低了至少約30％至50％，持續約40至41天；以大於約150mg至約200mg的劑量每六周一次皮下施用至患者，其中患者的血清ldl膽固醇水平降低了至少約30％至50％，持續約40至41天；以約170mg至約180mg的劑量每六周一次皮下施用至患者，其中患者的血清ldl膽固醇水平降低了至少約30％至50％，持續約40至41天；以約150mg至約170mg的劑量每六周一次皮下施用至患者，其中患者的血清ldl膽固醇水平降低了至少約30％至50％，持續約40至41天；以約450mg的劑量每六周一次皮下施用至患者，其中患者的血清ldl膽固醇水平降低了至少約30％至50％，持續約40至41天；以約140mg至約200mg的劑量每八周一次皮下施用至患者，其中患者的血清ldl膽固醇水平降低了30％至50％，持續約50至56天；以約170mg至約180mg的劑量每八周一次皮下施用至患者，其中患者的血清ldl膽固醇水平降低了30％至50％，持續約50至56天；以約150mg至約170mg的劑量每八周一次皮下施用至患者，其中患者的血清ldl膽固醇水平降低了30％至50％，持續約50至56天；以約450mg的劑量每八周一次皮下施用至患者，其中患者的血清ldl膽固醇水平降低了30％至50％，持續約50至56天；以約600mg的劑量每八周一次皮下施用至患者，其中患者的血清ldl膽固醇水平降低了至少約30％至50％，持續約50至56天；以約700mg的劑量每八周一次皮下施用至患者，其中患者的血清ldl膽固醇水平降低了至少約30％至50％，持續約50至56天；以約600mg的劑量每十二周一次皮下施用至患者，其中患者的血清ldl膽固醇水平降低了至少約30％至50％，持續約80至84天；以約700mg的劑量每十二周一次皮下施用至患者，其中患者的血清ldl膽固醇水平降低了至少約30％至50％，持續約80至84天；以約600mg的劑量每十六周一次皮下施用至患者，其中患者的血清ldl膽固醇水平降低了至少約30％至50％，持續約105至112天；以約700mg的劑量每十六周一次皮下施用至患者，其中患者的血清ldl膽固醇水平降低了至少約30％至50％，持續約105至112天。在本發明的一個具體的實施方案中，其中所述抗pcsk9抗體包含與seqidno:465至少90％相同的胺基酸序列和包含與seqidno:463至少90％相同的胺基酸序列的重鏈可變區或包含包含胺基酸序列seqidno:465的輕鏈可變區和包含胺基酸序列seqidno:463的重鏈可變區；或抗體為11f1，所述抗pcsk9抗體以約420mg至約3000mg的劑量每周一次靜脈內施用至患者，其中患者的血清ldl膽固醇水平降低了30％至50％，持續約7至10天；以約700mg的劑量每周一次靜脈內施用至患者，其中患者的血清ldl膽固醇水平降低了30％至50％，持續約7至10天；以約1200mg的劑量每周一次靜脈內施用至患者，其中患者的血清ldl膽固醇水平降低了30％至50％，持續約7至10天；以大於約1200mg至約3000mg的劑量每周一次靜脈內施用至患者，其中患者的血清ldl膽固醇水平降低了30％至50％，持續約7至10天；以約420mg至約3000mg的劑量每隔一周一次靜脈內施用至患者，其中患者的血清ldl膽固醇水平降低了30％至50％，持續約10至14天；以約700mg的劑量每隔一周一次靜脈內施用至患者，其中患者的血清ldl膽固醇水平降低了30％至50％，持續約10至14天；以約1200mg的劑量每隔一周一次靜脈內施用至患者，其中患者的血清ldl膽固醇水平降低了30％至50％，持續約10至14天；以大於約1200mg至約3000mg的劑量每隔一周一次靜脈內施用至患者，其中患者的血清ldl膽固醇水平降低了30％至50％，持續約10至14天；以約420mg至約3000mg的劑量每四周一次靜脈內施用至患者，其中患者的血清ldl膽固醇水平降低了30％至50％，持續約24至28天；以約700mg的劑量每四周一次靜脈內施用至患者，其中患者的血清ldl膽固醇水平降低了30％至50％，持續約24至28天；以約1200mg的劑量每四周一次靜脈內施用至患者，其中患者的血清ldl膽固醇水平降低了30％至50％，持續約24至28天；以大於約1200mg至約3000mg的劑量每四周一次靜脈內施用至患者，其中患者的血清ldl膽固醇水平降低了30％至50％，持續約24至28天；以約1000mg至約3000mg的劑量每24周一次靜脈內施用至患者，其中患者的血清ldl膽固醇水平降低了至少約15％至50％，持續約150至168天；以約1000mg至約3000mg的劑量每24周一次靜脈內施用至患者，其中患者的血清ldl膽固醇水平降低了至少約30％至50％，持續約160至168天；以約1000mg至約3000mg的劑量每52周一次靜脈內施用至患者，其中患者的血清ldl膽固醇水平降低了至少約15％至50％，持續約350至365天；以約1000mg至約3000mg的劑量每52周一次靜脈內施用至患者，其中患者的血清ldl膽固醇水平降低了至少約30％至50％，持續約360至365天。在本發明的另一方面，將所述至少一種抗pcsk9抗體在使用至少一種其它膽固醇降低劑之前、之後或同時施用至患者。膽固醇降低劑包括他汀類，包括阿託伐他汀、西立伐他汀、氟伐他汀、洛伐他汀、美伐他汀、匹伐他汀、普伐他汀、瑞舒伐他汀、辛伐他汀；煙酸(尼克酸)、緩釋煙酸(slo-niacin)、拉羅匹侖(cordaptive)、纖維酸(lopid(吉非羅齊)、tricor(非諾貝特)、膽汁酸螯合劑如消膽胺(questran)、考來維侖(welchol)、考來替泊(降膽寧)、膽固醇吸收抑制劑(zetia(依澤替米貝))、脂質改性劑、pparγ激動劑、pparα/γ激動劑、鯊烯合酶抑制劑、cetp抑制劑、抗高血壓藥、抗糖尿病劑包括磺醯脲、胰島素、glp-1類似物、ddpiv抑制劑；apob調節劑、mtp抑制劑和/或動脈硬化閉塞症治療、制瘤素m、雌激素、小檗鹼以及用於免疫相關疾病的治療劑。在一些方面，本發明包括一種降低患者的血清ldl膽固醇水平的方法。所述方法包括以約10mg至約3000mg的劑量向有需要的患者施用至少一種如本文描述的抗pcsk9抗體。在一些實施方案中，劑量為約10mg至約70mg的至少一種抗pcsk9抗體，每周施用一次(qw)。在一些實施方案中，劑量為約14mg至約45mg的至少一種抗pcsk9抗體，每周施用一次。在一些實施方案中，劑量為約14mg至約35mg的至少一種抗pcsk9抗體，每周施用一次。在一些實施方案中，劑量為約70mg至約420mg的至少一種抗pcsk9抗體，每2周施用一次(q2w)。在一些實施方案中，劑量為約70mg至約350mg的至少一種抗pcsk9抗體，每2周施用一次(q2w)。在一些實施方案中，劑量為約105mg至約350mg的至少一種抗pcsk9抗體，每2周施用一次(q2w)。在一些實施方案中，劑量為約140mg至約280mg的至少一種抗pcsk9抗體，每2周施用一次(q2w)。在一些實施方案中，劑量為約250mg至約480mg的至少一種抗pcsk9抗體，每4周施用一次(q4w)。在一些實施方案中，劑量為約280mg至約420mg的至少一種抗pcsk9抗體，每4周施用一次(q4w)。在一些實施方案中，劑量為約350mg至約420mg的至少一種抗pcsk9抗體，每4周施用一次(q4w)。在一些實施方案中，劑量為約420mg至約3000mg的至少一種抗pcsk9抗體，每周施用一次(qw)。在一些實施方案中，劑量為約1000mg至約3000mg的至少一種抗pcsk9抗體，每周施用一次(qw)。在一些實施方案中，劑量為約2000mg至約3000mg的至少一種抗pcsk9抗體，每周施用一次(qw)。在一些實施方案中，劑量為約420mg至約3000mg的至少一種抗pcsk9抗體，每隔一周施用一次(q2w)。在一些實施方案中，劑量為約1000mg至約3000mg的至少一種抗pcsk9抗體，每隔一周施用一次(q2w)。在一些實施方案中，劑量為約2000mg至約3000mg的至少一種抗pcsk9抗體，每隔一周施用一次(q2w)。在一些實施方案中，劑量為約420mg至約3000mg的至少一種抗pcsk9抗體，每個月施用一次(q4w)。在一些實施方案中，劑量為約1000mg至約3000mg的至少一種抗pcsk9抗體，每個月施用一次(q4w)。在一些實施方案中，劑量為約2000mg至約3000mg的至少一種抗pcsk9抗體，每個月施用一次(q4w)。在一些實施方案中，如與給藥前血清ldl膽固醇水平相比，血清ldl膽固醇水平降低了至少約15％。在一些實施方案中，血清ldl膽固醇水平降低了至少約20％。在一些實施方案中，血清ldl膽固醇水平降低了至少約25％。在一些實施方案中，血清ldl膽固醇水平降低了至少約30％。在一些實施方案中，血清ldl膽固醇水平降低了至少約35％。在一些實施方案中，血清ldl膽固醇水平降低了至少約40％。在一些實施方案中，血清ldl膽固醇水平降低了至少約45％。在一些實施方案中，血清ldl膽固醇水平降低了至少約50％。在一些實施方案中，血清ldl膽固醇水平降低了至少約55％。在一些實施方案中，血清ldl膽固醇水平降低了至少約60％。在一些實施方案中，血清ldl膽固醇水平降低了至少約75％。在一些實施方案中，血清ldl膽固醇水平降低了至少約70％。在一些實施方案中，血清ldl膽固醇水平降低了至少約75％在一些實施方案中，血清ldl膽固醇水平降低了至少約80％。在一些實施方案中，血清ldl膽固醇水平降低了至少約85％。在一些實施方案中，血清ldl膽固醇水平降低了至少約90％。在一些方面，本發明包括降低患者的血清ldl膽固醇水平的方法，所述方法包括向有需要的患者施用一定劑量的至少一種抗pcsk9抗體，並且其中所述劑量的抗pcsk9抗體是按照選自由以下組成的組的日程安排施用：(1)每周(qw)至少約14mg；(2)每周(qw)至少約35mg的量；(3)每周(qw)至少約45mg的量；(4)每隔一周(q2w)至少約70mg的量；(5)每兩周或每隔一周(q2w)至少約105mg的量；(6)每兩周或每隔一周(q2w)至少約140mg的量；(7)每兩周或每隔一周(q2w)至少約150mg的量；(8)每兩周或每隔一周(q2w)至少約280mg的量；(9)每四周(q4w)至少約150mg的量；(10)每四周(q4w)至少約160mg的量；(11)每四周(q4w)至少約170mg的量；(12)每四周(q4w)至少約180mg的量；(13)每四周(q4w)至少約190mg的量；(14)每四周(q4w)至少約200mg的量；(15)每四周(q4w)至少約280mg的量；(16)每四周(q4w)至少約350mg的量；(17)每四周(q4w)至少約420mg的量；(18)每四周(q4w)至少約1000mg的量；(19)每四周(q4w)至少約2000mg的量；以及(20)每四周(q4w)至少約3000mg的量。在一些實施方案中，如與給藥前血清ldl膽固醇水平相比，血清ldl膽固醇水平降低了至少約15％。在一些實施方案中，血清ldl膽固醇水平降低了至少約20％。在一些實施方案中，血清ldl膽固醇水平降低了至少約25％。在一些實施方案中，血清ldl膽固醇水平降低了至少約30％。在一些實施方案中，血清ldl膽固醇水平降低了至少約35％。在一些實施方案中，血清ldl膽固醇水平降低了至少約40％。在一些實施方案中，血清ldl膽固醇水平降低了至少約45％。在一些實施方案中，血清ldl膽固醇水平降低了至少約50％。在一些實施方案中，血清ldl膽固醇水平降低了至少約55％。在一些實施方案中，血清ldl膽固醇水平降低了至少約60％。在一些實施方案中，血清ldl膽固醇水平降低了至少約65％。在一些實施方案中，血清ldl膽固醇水平降低了至少約70％。在一些實施方案中，血清ldl膽固醇水平降低了至少約75％。在一些實施方案中，血清ldl膽固醇水平降低了至少約80％。在一些實施方案中，血清ldl膽固醇水平降低了至少約85％。在一些實施方案中，血清ldl膽固醇水平降低了至少約90％。在一些方面，本發明包括一種降低患者的pcsk9值的方法，所述方法包括向有需要的患者施用一定劑量的至少一種抗pcsk9抗體，並且其中所述劑量的抗pcsk9抗體是根據選自由以下組成的組的日程安排施用：(1)每周(qw)至少約14mg；(2)每周(qw)至少約35mg的量；(3)每周(qw)至少約45mg的量；(4)每隔一周(q2w)至少約70mg的量；(5)每隔一周(q2w)至少約105mg的量；(6)每隔一周(q2w)至少約140mg的量；(7)每兩周或每隔一周(q2w)至少約150mg的量；(8)每兩周或每隔一周(q2w)至少約280mg的量；(9)每四周(q4w)至少約150mg的量；(10)每四周(q4w)至少約160mg的量；(11)每四周(q4w)至少約170mg的量；(12)每四周(q4w)至少約180mg的量；(13)每四周(q4w)至少約190mg的量；(14)每四周(q4w)至少約200mg的量；(15)每四周(q4w)至少約280mg的量；(16)每四周(q4w)至少約350mg的量；(17)每四周(q4w)至少約420mg的量；(18)每四周(q4w)至少約1000mg的量；(19)每四周(q4w)至少約2000mg的量；以及(20)每四周(q4w)至少約3000mg的量。在一些實施方案中，如與給藥前血清pcsk9值相比，所述血清pcsk9值降低了至少約60％。在一些實施方案中，血清pcsk9值降低了至少約65％。在一些實施方案中，血清pcsk9值降低了至少約70％。在一些實施方案中，血清pcsk9值降低了至少約75％。在一些實施方案中，血清pcsk9值降低了至少約80％。在一些實施方案中，血清pcsk9值降低了至少約85％。在一些實施方案中，血清pcsk9值降低了至少約90％。在一些方面，本發明包括一種降低患者的總膽固醇水平的方法，所述方法包括向有需要的患者施用一定劑量的至少一種抗pcsk9抗體，並且其中所述劑量的抗pcsk9抗體是根據選自由以下組成的組的日程安排施用：(1)每周(qw)至少約14mg；(2)每周(qw)至少約35mg的量；(3)每周(qw)至少約45mg的量；(4)每隔一周(q2w)至少約70mg的量；(5)每兩周(q2w)至少約105mg的量；(6)每隔一周(q2w)至少約140mg的量；(7)每兩周或每隔一周(q2w)至少約150mg的量；(8)每兩周或每隔一周(q2w)至少約280mg的量；(9)每四周(q4w)至少約150mg的量；(10)每四周(q4w)至少約160mg的量；(11)每四周(q4w)至少約170mg的量；(12)每四周(q4w)至少約180mg的量；(13)每四周(q4w)至少約190mg的量；(14)每四周(q4w)至少約200mg的量；(15)每四周(q4w)至少約280mg的量；(16)每四周(q4w)至少約350mg的量；(17)每四周(q4w)至少約420mg的量；(18)每四周(q4w)至少約1000mg的量；(19)每四周(q4w)至少約2000mg的量；以及(20)每四周(q4w)至少約3000mg的量。在一些實施方案中，如與給藥前總膽固醇水平相比，所述總膽固醇水平降低了至少約20％。在一些實施方案中，總膽固醇水平降低了至少約25％。在一些實施方案中，總膽固醇水平降低了至少約30％。在一些實施方案中，總膽固醇水平降低了至少約35％。在一些實施方案中，總膽固醇水平降低了至少約40％。在一些實施方案中，總膽固醇水平降低了至少約45％。在一些實施方案中，總膽固醇水平降低了至少約50％。在一些實施方案中，總膽固醇水平降低了至少約55％。在一些實施方案中，總膽固醇水平降低了至少約60％。在一些方面，本發明包括一種降低患者的非hdl膽固醇水平的方法，所述方法包括向有需要的患者施用一定劑量的至少一種抗pcsk9抗體，並且其中所述劑量的抗pcsk9抗體是根據選自由以下組成的組的日程安排施用：(1)每周(qw)至少約14mg；(2)每周(qw)至少約35mg的量；(3)每周(qw)至少約45mg的量；(4)每隔一周(q2w)至少約70mg的量；(5)每兩周(q2w)至少約105mg的量；(6)每隔一周(q2w)至少約140mg的量；(7)每兩周或每隔一周(q2w)至少約150mg的量；(8)每兩周或每隔一周(q2w)至少約280mg的量；(9)每四周(q4w)至少約150mg的量；(10)每四周(q4w)至少約160mg的量；(11)每四周(q4w)至少約170mg的量；(12)每四周(q4w)至少約180mg的量；(13)每四周(q4w)至少約190mg的量；(14)每四周(q4w)至少約200mg的量；(15)每四周(q4w)至少約280mg的量；(16)每四周(q4w)至少約350mg的量；(17)每四周(q4w)至少約420mg的量；(18)每四周(q4w)至少約1000mg的量；(19)每四周(q4w)至少約2000mg的量；以及(20)每四周(q4w)至少約3000mg的量。在一些實施方案中，如與給藥前非hdl膽固醇水平相比，所述非hdl膽固醇水平降低了至少約30％。在一些實施方案中，非hdl膽固醇水平降低了至少約35％。在一些實施方案中，非hdl膽固醇水平降低了至少約40％。在一些實施方案中，非hdl膽固醇水平降低了至少約45％。在一些實施方案中，非hdl膽固醇水平降低了至少約50％。在一些實施方案中，非hdl膽固醇水平降低了至少約55％。在一些實施方案中，非hdl膽固醇水平降低了至少約60％。在一些實施方案中，非hdl膽固醇水平降低了至少約65％。在一些實施方案中，非hdl膽固醇水平降低了至少約70％。在一些實施方案中，非hdl膽固醇水平降低了至少約75％。在一些實施方案中，非hdl膽固醇水平降低了至少約80％。在一些實施方案中，非hdl膽固醇水平降低了至少約85％。在一些方面，本發明包括一種降低患者的apob水平的方法，所述方法包括向有需要的患者施用一定劑量的至少一種抗pcsk9抗體，並且其中所述劑量的抗pcsk9抗體是根據選自由以下組成的組的日程安排施用：(1)每周(qw)至少約14mg；(2)每周(qw)至少約35mg的量；(3)每周(qw)至少約45mg的量；(4)每隔一周(q2w)至少約70mg的量；(5)每兩周(q2w)至少約105mg的量；(6)每隔一周(q2w)至少約140mg的量；(7)每兩周或每隔一周(q2w)至少約150mg的量；(8)每兩周或每隔一周(q2w)至少約280mg的量；(9)每四周(q4w)至少約150mg的量；(10)每四周(q4w)至少約160mg的量；(11)每四周(q4w)至少約170mg的量；(12)每四周(q4w)至少約180mg的量；(13)每四周(q4w)至少約190mg的量；(14)每四周(q4w)至少約200mg的量；(15)每四周(q4w)至少約280mg的量；(16)每四周(q4w)至少約350的量；(17)每四周(q4w)至少約420mg的量。在一些實施方案中，如與給藥前apob水平相比，所述apob水平降低了至少約20％。在一些實施方案中，apob水平降低了至少約25％。在一些實施方案中，apob水平降低了至少約30％。在一些實施方案中，apob水平降低了至少約35％。在一些實施方案中，apob水平降低了至少約40％。在一些實施方案中，apob水平降低了至少約45％。在一些實施方案中，apob水平降低了至少約50％。在一些實施方案中，apob水平降低了至少約55％。在一些實施方案中，apob水平降低了至少約60％。在一些實施方案中，apob水平降低了至少約65％。在一些實施方案中，apob水平降低了至少約70％。在一些實施方案中，apob水平降低了至少約75％。在一些方面，本發明包括一種降低患者的脂蛋白a(「lp(a)」)水平的方法，所述方法包括向有需要的患者施用一定劑量的至少一種抗pcsk9抗體，並且其中所述劑量的抗pcsk9抗體是根據選自由以下組成的組的日程安排施用：(1)每周(qw)至少約14mg；(2)每周(qw)至少約35mg的量；(3)每周(qw)至少約45mg的量；(4)每隔一周(q2w)至少約70mg的量；(5)每兩周(q2w)至少約105mg的量；(6)每隔一周(q2w)至少約140mg的量；(7)每兩周或每隔一周(q2w)至少約150mg的量；(8)每兩周或每隔一周(q2w)至少約280mg的量；(9)每四周(q4w)至少約150mg的量；(10)每四周(q4w)至少約160mg的量；(11)每四周(q4w)至少約170mg的量；(12)每四周(q4w)至少約180mg的量；(13)每四周(q4w)至少約190mg的量；(14)每四周(q4w)至少約200mg的量；(15)每四周(q4w)至少約280mg的量；(16)每四周(q4w)至少約350的量；(17)每四周(q4w)至少約420mg的量；(18)每四周(q4w)至少約1000mg的量；(19)每四周(q4w)至少約2000mg的量；以及(20)每四周(q4w)至少約3000mg的量。在一些實施方案中，如與給藥前lp(a)水平相比，所述lp(a)水平降低了至少約10％。在一些實施方案中，lp(a)水平降低了至少約15％。在一些實施方案中，lp(a)水平降低了至少約20％。在一些實施方案中，lp(a)水平降低了至少約25％。在一些實施方案中，lp(a)水平降低了至少約30％。在一些實施方案中，lp(a)水平降低了至少約35％。在一些實施方案中，lp(a)水平降低了至少約40％。在一些實施方案中，lp(a)水平降低了至少約45％。在一些實施方案中，lp(a)水平降低了至少約50％。在一些實施方案中，lp(a)水平降低了至少約55％。在一些實施方案中，lp(a)水平降低了至少約60％。在一些實施方案中，lp(a)水平降低了至少約65％。在一些方面，本發明包括一種治療或預防患者的膽固醇相關疾病的方法，所述方法包括向有需要的患者施用約10mg至約3000mg劑量的至少一種本文所述的抗pcsk9抗體。在一些實施方案中，劑量為約10mg至約70mg的至少一種抗pcsk9抗體，每周施用一次(qw)。在一些實施方案中，劑量為約14mg至約45mg的至少一種抗pcsk9抗體，每周施用一次。在一些實施方案中，劑量為約14mg至約35mg的至少一種抗pcsk9抗體，每周施用一次。在一些實施方案中，劑量為約70mg至約420mg的至少一種抗pcsk9抗體，每2周施用一次(q2w)。在一些實施方案中，劑量為約70mg至約350mg的至少一種抗pcsk9抗體，每2周施用一次(q2w)。在一些實施方案中，劑量為約105mg至約350mg的至少一種抗pcsk9抗體，每2周施用一次(q2w)。在一些實施方案中，劑量為約140mg至約280mg的至少一種抗pcsk9抗體，每2周施用一次(q2w)。在一些實施方案中，劑量為約150mg至約280mg的至少一種抗pcsk9抗體，每兩周施用一次(q2w)。在一些實施方案中，劑量為約150mg至約200mg的至少一種抗pcsk9抗體，每兩周施用一次(q2w)。在一些實施方案中，劑量為約150mg至約480mg的至少一種抗pcsk9抗體，每四周施用一次(q4w)。在一些實施方案中，劑量為約150mg至約200mg的至少一種抗pcsk9抗體，每四周施用一次(q4w)。在一些實施方案中，劑量為約200mg至約480mg的至少一種抗pcsk9抗體，每四周施用一次(q4w)。在一些實施方案中，劑量為約250mg至約480mg的至少一種抗pcsk9抗體，每四周施用一次(q4w)。在一些實施方案中，劑量為約280mg至約420mg的至少一種抗pcsk9抗體，每四周施用一次(q4w)。在一些實施方案中，劑量為約350mg至約420mg的至少一種抗pcsk9抗體，每四周施用一次。在一些實施方案中，劑量為每四周(q4w)約1000mg。在一些實施方案中，劑量為每四周(q4w)約2000mg。在一些實施方案中，劑量為每四周(q4w)約3000mg。在一些實施方案中，如與給藥前血清ldl膽固醇水平相比，所述血清ldl膽固醇水平降低了至少約15％。在一些實施方案中，所述血清ldl膽固醇水平降低了至少約20％。在一些實施方案中，所述血清ldl膽固醇水平降低了至少約25％。在一些實施方案中，血清ldl膽固醇水平降低了至少約30％。在一些實施方案中，血清ldl膽固醇水平降低了至少約35％。在一些實施方案中，血清ldl膽固醇水平降低了至少約40％。在一些實施方案中，血清ldl膽固醇水平降低了至少約45％。在一些實施方案中，血清ldl膽固醇水平降低了至少約50％。在一些實施方案中，血清ldl膽固醇水平降低了至少約55％。在一些實施方案中，血清ldl膽固醇水平降低了至少約60％。在一些實施方案中，血清ldl膽固醇水平降低了至少約65％。在一些實施方案中，血清ldl膽固醇水平降低了至少約70％。在一些實施方案中，血清ldl膽固醇水平降低了至少約75％。在一些實施方案中，血清ldl膽固醇水平降低了至少約80％。在一些實施方案中，血清ldl膽固醇水平降低了至少約85％。在一些實施方案中，血清ldl膽固醇水平降低了至少約90％。在一些實施方案中，膽固醇相關疾病是雜合子家族性高膽固醇血症、純合子家族性高膽固醇血症、非家族性高膽固醇血症、高脂血症或血脂異常。在一些方面，本發明包括一種治療或預防患者的膽固醇相關疾病的方法，所述方法包括向有需要的患者施用一定劑量的至少一種抗pcsk9抗體，並且其中所述劑量的抗pcsk9抗體是根據選自由以下組成的組的日程安排施用：(1)每周(qw)至少約14mg；(2)每周(qw)至少約35mg的量；(3)每周(qw)至少約45mg的量；(4)每隔一周(q2w)至少約70mg的量；(5)每兩周(q2w)至少約105mg的量；(6)每隔一周(q2w)至少約140mg的量；(7)每兩周或每隔一周(q2w)至少約150mg的量；(8)每兩周或每隔一周(q2w)至少約280的量；(9)每四周(q4w)至少約150mg的量；(10)每四周(q4w)至少約160mg的量；(11)每四周(q4w)至少約170mg的量；(12)每四周(q4w)至少約180mg的量；(13)每四周(q4w)至少約190mg的量；(14)每四周(q4w)至少約200mg的量；(15)每四周(q4w)至少約280mg的量；(16)每四周(q4w)至少約350的量；(17)每四周(q4w)至少約420mg的量；(18)每四周(q4w)至少約1000mg的量；(19)每四周(q4w)至少約2000mg的量；以及(20)每四周(q4w)至少約3000mg的量。在一些實施方案中，如與給藥前血清ldl膽固醇水平相比，所述血清ldl膽固醇水平降低了至少約15％。在一些實施方案中，所述血清ldl膽固醇水平降低了至少約20％。在一些實施方案中，所述血清ldl膽固醇水平降低了至少約25％。在一些實施方案中，血清ldl膽固醇水平降低了至少約30％。在一些實施方案中，血清ldl膽固醇水平降低了至少約35％。在一些實施方案中，血清ldl膽固醇水平降低了至少約40％。在一些實施方案中，血清ldl膽固醇水平降低了至少約45％。在一些實施方案中，血清ldl膽固醇水平降低了至少約50％。在一些實施方案中，血清ldl膽固醇水平降低了至少約55％。在一些實施方案中，血清ldl膽固醇水平降低了至少約60％。在一些實施方案中，血清ldl膽固醇水平降低了至少約65％。在一些實施方案中，血清ldl膽固醇水平降低了至少約70％。在一些實施方案中，血清ldl膽固醇水平降低了至少約75％。在一些實施方案中，血清ldl膽固醇水平降低了至少約80％。在一些實施方案中，血清ldl膽固醇水平降低了至少約85％。在一些實施方案中，血清ldl膽固醇水平降低了至少約90％。在一些實施方案中，抗pcsk9抗體為21b12、26h5、31h4、8a3、11f1和/或8a1。在一些實施方案中，所述膽固醇相關疾病是雜合子家族性高膽固醇血症、純合子家族性高膽固醇血症、非家族性高膽固醇血症、高脂血症或血脂異常。在一些方面，本發明包括藥物製劑，其包含至少一種選自由21b12、26h5、31h4、8a3、11f1及8a1組成的組的抗pcsk9抗體。本發明的其它實施方案將易於根據本文提供的公開顯而易知。附圖簡述圖1a描述pcsk9的成熟形式的胺基酸序列，其中前結構域加下劃線。圖1b1-1b4描述pcsk9的胺基酸和核酸序列，其中前結構域加下劃線且信號序列用粗體表示。圖2a-2d為不同抗原結合蛋白的各種輕鏈的序列比較表。圖2c接續圖2a中開始的序列。圖2d接續圖2b上開始的序列。圖3a-3d為不同抗原結合蛋白的各種重鏈的序列比較表。圖3c接續圖3a中開始的序列。圖3d接續圖3b上開始的序列。圖3e-3jj描述抗原結合蛋白的一些實施方案的可變域的胺基酸和核酸序列。圖3kk描述各種恆定域的胺基酸序列。圖3ll-3bbb描述抗原結合蛋白的一些實施方案的可變域的胺基酸和核酸序列。圖3ccc-3jjj為抗原結合蛋白的一些實施方案的各種重鏈及輕鏈的序列比較表。圖4a為抗原結合蛋白與人類pcsk9的結合曲線。圖4b為抗原結合蛋白與人類pcsk9的結合曲線。圖4c為抗原結合蛋白與食蟹獼猴pcsk9的結合曲線。圖4d為抗原結合蛋白與食蟹獼猴pcsk9的結合曲線。圖4e為抗原結合蛋白與小鼠pcsk9的結合曲線。圖4f為抗原結合蛋白與小鼠pcsk9的結合曲線。圖5a描述涉及pcsk9及不同抗原結合蛋白的sdspage實驗的顯示蛋白質的相對純度和濃度的結果。圖5b和5c描述21b12的來自biacore溶液平衡測定的圖。圖5d描述來自biacore捕捉測定的動力學的圖。圖5e描述描繪3種abp的分級(binning)結果的柱狀圖。圖6a為體外pcsk9:ldlr結合測定中針對pcsk9的抗原結合蛋白31h4igg2的抑制曲線。圖6b為體外pcsk9:ldlr結合測定中針對pcsk9的抗原結合蛋白31h4igg4的抑制曲線。圖6c為體外pcsk9:ldlr結合測定中針對pcsk9的抗原結合蛋白21b12igg2的抑制曲線。圖6d為體外pcsk9:ldlr結合測定中針對pcsk9的抗原結合蛋白21b12igg4的抑制曲線。圖7a為細胞ldl攝取測定中抗原結合蛋白31h4igg2的抑制曲線，其顯示abp降低pcsk9的ldl攝取阻斷效應的作用。圖7b為細胞ldl攝取測定中抗原結合蛋白31h4igg4的抑制曲線，其顯示abp降低pcsk9的ldl攝取阻斷效應的作用。圖7c為細胞ldl攝取測定中抗原結合蛋白21b12igg2的抑制曲線，其顯示abp降低pcsk9的ldl攝取阻斷效應的作用。圖7d為細胞ldl攝取測定中抗原結合蛋白21b12igg4的抑制曲線，其顯示abp降低pcsk9的ldl攝取阻斷效應的作用。圖8a為描述abp31h4在小鼠中降低血清膽固醇的能力的圖，其中變化是相對於igg對照治療的小鼠(*p<0.01)。圖8b為描述abp31h4在小鼠中降低血清膽固醇的能力的圖，其中變化是相對於時間＝0小時(#p，0.05)。圖8c為描述abp31h4對c57bl/6小鼠的hdl膽固醇水平的影響的圖(*p<0.01)。圖8d為描述abp31h4對c57bl/6小鼠的hdl膽固醇水平的影響的圖(#p<0.05)。圖9描述在各個時間點之後abp31h4增加存在的肝臟ldlr蛋白的量的能力的蛋白質印跡分析。圖10a為描述抗原結合蛋白31h4降低野生型小鼠的總血清膽固醇的能力(相對值)的圖。圖10b為描述抗原結合蛋白31h4降低野生型小鼠的hdl的能力的圖。圖10c為描述不同抗原結合蛋白31h4和16f12降低血清膽固醇的能力的圖。圖11a描述用於測試抗原結合蛋白降低血清膽固醇的持續時間及能力的注射方案。圖11b為描述圖11a中的方案的結果的圖。圖12a描述hepg2細胞中響應於他汀類與abp21b12的組合的ldlr水平。圖12b描述hepg2細胞中響應於他汀類與abp31h4的組合的ldlr水平。圖12c描述hepg2細胞中響應於他汀類與abp25a7.1(一種非中和性抗體)(與中和性抗體「25a7」不同)的組合的ldlr水平。圖12d描述過度表達pcsk9的hepg2細胞中響應於他汀類與abp21b12的組合的ldlr水平。圖12e描述過度表達pcsk9的hepg2細胞中響應於他汀類與abp31h4的組合的ldlr水平。圖12f描述過度表達pcsk9的hepg2細胞中響應於他汀類與abp25a7.1(一種非中和性抗體)(與中和性抗體「25a7」不同)的組合的ldlr水平。圖13a描述針對pcsk9的不同abp的各種輕鏈胺基酸序列。點(.)指示無胺基酸。圖13b描述針對pcsk9的不同abp的輕鏈支序圖。圖13c描述針對pcsk9的不同abp的各種重鏈胺基酸序列。點(.)指示無胺基酸。圖13d描述針對pcsk9的不同abp的重鏈樹狀圖。圖13e描述輕鏈cdr和重鏈cdr的比較以及對產生共有序列的群組的指定。圖13f描述群組1和2的共有序列。圖13g描述群組3和4的共有序列。圖13h描述群組1和2的共有序列。點(.)指示一致殘基。圖13i描述群組2的共有序列。點(.)指示一致殘基。圖13j描述群組3和4的共有序列。點(.)指示一致殘基。圖14為展示接受多劑量的抗pcsk9抗體(21b12)的患者的ldl-c水平降低的圖。圖15為展示接受多劑量的抗pcsk9抗體(21b12)的服用低至中等及高劑量他汀類的患者的ldl-c水平降低的圖。圖16為展示接受多劑量的抗pcsk9抗體(21b12)的患者的apob水平降低的圖。圖17為展示接受多劑量的抗pcsk9抗體(21b12)的服用低至中等及高劑量他汀類的患者的脂蛋白a(「lp(a)」)水平降低的柱狀圖。圖18為展示接受多劑量的抗pcsk9抗體(21b12)的患有雜合子家族性高膽固醇血症(「hefh」)的患者的ldl-c水平降低的圖。圖19為展示接受多劑量的抗pcsk9抗體(21b12)的患有雜合子家族性高膽固醇血症(「hefh」)的患者的pcsk9水平降低的圖。圖20為展示接受多劑量的抗pcsk9抗體(21b12)的患有雜合子家族性高膽固醇血症(「hefh」)的患者的總膽固醇水平降低的圖。圖21為展示接受多劑量的抗pcsk9抗體(21b12)的患有雜合子家族性高膽固醇血症(「hefh」)的患者的非hdl膽固醇水平降低的圖。圖22為展示接受多劑量的抗pcsk9抗體(21b12)的患有雜合子家族性高膽固醇血症(「hefh」)的患者的apob水平降低的圖。圖23為展示接受多劑量的抗pcsk9抗體(21b12)的患有雜合子家族性高膽固醇血症(「hefh」)的患者的脂蛋白a(「lp(a)」)降低的柱狀圖。圖24a為展示與患者的ldl-c降低相關的集合數據的圖，所述患者來自實施例22-25中所述的四個研究且歷經12周每隔一周(q2w)接受不同劑量的抗pcsk9抗體(21b12)。圖24b為展示與患者的ldl-c降低相關的集合數據的圖，所述患者來自實施例22-25中所述的四個研究且歷經12周每四周(q4w)接受不同劑量的抗pcsk9抗體(21b12)。圖25a為展示與患者的lp(a)降低相關的集合數據的柱狀圖，所述患者來自實施例22-25中所述的四個研究且歷經12周每隔一周(q2w)或每4周(q4w)接受不同劑量的抗pcsk9抗體(21b12)。圖25b為展示與患者的hdl-c降低相關的集合數據的柱狀圖，所述患者來自實施例22-25中所述的四個研究且歷經12周每隔一周(q2w)或每4周(q4w)接受不同劑量的抗pcsk9抗體(21b12)。圖25c為展示與患者的甘油三酯降低相關的集合數據的柱狀圖，所述患者來自實施例22-25中所述的四個研究且歷經12周每隔一周(q2w)或每4周(q4w)接受不同劑量的抗pcsk9抗體(21b12)。圖25d為展示與患者的vldl-c降低相關的集合數據的柱狀圖，所述患者來自實施例22-25中所述的四個研究且歷經12周每隔一周(q2w)或每4周(q4w)接受不同劑量的抗pcsk9抗體(21b12)。圖26為展示含有不同穩定劑/賦形劑的抗pcsk9抗體(21b12)製劑的粘度的柱狀圖。圖27為展示穩定劑/賦形劑脯氨酸能夠降低具有高蛋白質濃度的抗pcsk9抗體(21b12)製劑的粘度的圖。圖28a為展示不同濃度的抗pcsk9抗體21b12在包含10mm乙酸鈉及9％蔗糖(ph5.2)的製劑中在25℃及40℃下的粘度的圖。圖28b為展示不同濃度的抗pcsk9抗體21b12在包含10mm乙酸鈉及9％蔗糖(ph5.2)的製劑中在25℃及40℃下，相較於在包含10mm乙酸鈉、125mm精氨酸及3％蔗糖(ph5.0)的製劑中在25℃及40℃下的粘度的圖。圖28c為展示不同濃度的抗pcsk9抗體21b12在包含10mm乙酸鈉及9％蔗糖(ph5.2)的製劑中在25℃及40℃下，相較於在包含10mm乙酸鈉、100mm蛋氨酸及4％蔗糖(ph5.0)的製劑中在25℃及40℃下的粘度的圖。圖28d為展示不同濃度的抗pcsk9抗體21b12在包含10mm乙酸鈉及9％蔗糖(ph5.2)的製劑中在25℃及40℃下，相較於在包含10mm乙酸鈉及250mm脯氨酸(ph5.0)的製劑中在25℃及40℃下的粘度的圖。圖29a為展示歷經6個月10μm粒子在抗pcsk9抗體(即21b12)製劑的不同製劑中的數目的柱狀圖。圖29b為展示歷經6個月25μm粒子在抗pcsk9抗體(即21b12)製劑的不同製劑中的數目的柱狀圖。圖30a為展示歷經4個月10μm粒子在抗pcsk9抗體(即11f1)製劑的不同製劑中的數目的柱狀圖。圖30b為展示歷經4個月25μm粒子在抗pcsk9抗體(即11f1)製劑的不同製劑中的數目的柱狀圖。圖31為說明競爭測定中11f1與pcskp、pcsk2、pcsk1、pcsk7及弗林蛋白酶的結合特異性的圖，其中od450繪製在垂直軸上且pcsk9的濃度(ug/ml)繪製在水平軸上。圖32為展示競爭測定中11f1抑制ldlr:d374ypcsk9結合的劑量反應曲線的圖，其中od450繪製在垂直軸上且log[11f1](pm)繪製在水平軸上。圖33為描述競爭測定中11f1抑制ldlr:wtpcsk9結合的劑量反應曲線的圖，其中od450繪製在垂直軸上且log[11f1](pm)繪製在水平軸上。圖34為描述11f1阻斷hepg2細胞中由人類d374ypcsk9介導的ldl攝取降低的能力的劑量反應曲線的圖，其中相對螢光單位(×104)繪製在垂直軸上且log[11f1](nm)繪製在水平軸上。圖35為描述11f1阻斷hepg2細胞中由人類wtpcsk9介導的ldl攝取降低的能力的劑量反應曲線的圖，其中相對螢光單位繪製(×104)在垂直軸上且log[11f1](nm)繪製在水平軸上。圖36為描述11f1和8a3對由aav表達人類pcsk9的小鼠的血清非hdl膽固醇的影響的柱狀圖，其中非hdl-c血清濃度(mg/ml)繪製在垂直軸上且注射後時間(天)繪製在水平軸上。圖37為描述11f1和8a3對由aav表達人類pcsk9的小鼠的血清總膽固醇的影響的柱狀圖，其中血清總膽固醇(mg/ml)繪製在垂直軸上且注射後時間(天)繪製在水平軸上。圖38為描述11f1和8a3對由aav表達人類pcsk9的小鼠的血清hdl膽固醇(hdl-c)的影響的柱狀圖，其中hdl-c(mg/ml)繪製在垂直軸上且注射後時間(天)繪製在水平軸上。圖39為描述由aav表達人類pcsk9的小鼠的igg2、8a3及11f1抗體濃度概況的圖，其中血清抗體濃度(ng/ml)繪製在垂直軸上且以天計的注射後時間繪製在水平軸上。圖40為概述由aav表達人類pcsk9的小鼠的igg2、11f1及8a3的pk參數的表。圖41為描述單次皮下施用抗klh抗體(對照)、21b12、8a3及11f1對食蟹獼猴的血清ldl濃度(ldl-c)的影響的圖，其中ldl-c(mg/dl)繪製在垂直軸上且以天計的施用後時間在水平軸上。圖42為描述單次皮下施用抗klh抗體(對照)、21b12、8a3及11f1對食蟹獼猴的血清總膽固醇的影響的圖，其中總膽固醇濃度(mg/dl)繪製在垂直軸上且以天計的施用後時間在水平軸上。圖43為描述單次皮下施用抗klh抗體(對照)、21b12、8a3及11f1對食蟹獼猴的血清hdl膽固醇的影響的圖，其中hdl-c(mg/dl)繪製在垂直軸上且以天計的施用後時間在水平軸上。圖44為描述單次皮下施用抗klh抗體(對照)、21b12、8a3及11f1對食蟹獼猴的血清甘油三酯的影響的圖，其中血清甘油三酯濃度(mg/dl)繪製在垂直軸上且以天計的施用後時間在水平軸上。圖45為描述單次皮下施用抗klh抗體(對照)、21b12、8a3及11f1對食蟹獼猴的載脂蛋白b(apob)的影響的圖，其中apob濃度(mg/dl)繪製在垂直軸上且以天計的施用後時間在水平軸上。圖46為描述抗klh抗體(對照)、21b12、8a3及11f1在食蟹獼猴中的平均藥物動力學概況的圖，其中抗體濃度(ng/ml)繪製在垂直軸上且以天計的施用後時間在水平軸上。圖47為概述抗klh抗體(對照)、21b12、8a3及11f1在食蟹獼猴中的pk參數的表。圖48a描述了8a1、8a3及11f1的輕鏈胺基酸序列的比較，以及來源於所述比較的共有序列。cdr序列加下劃線。圖48b描述了8a1、8a3及11f1的重鏈胺基酸序列的比較，以及來源於所述比較的共有序列。cdr序列加下劃線。某些示例性實施方案的詳述本文公開了結合pcsk9的抗原結合蛋白(如抗體及其功能性結合片段)。在一些實施方案中，抗原結合蛋白以不同方式結合pcsk9並阻止pcsk9起作用。在一些實施方案中，抗原結合蛋白阻斷或降低pcsk9與其它物質相互作用的能力。舉例來說，在一些實施方案中，抗原結合蛋白以防止或降低pcsk9將結合ldlr的可能性的方式結合pcsk9。在其它實施方案中，抗原結合蛋白結合pcsk9但不阻斷pcsk9與ldlr相互作用的能力。在一些實施方案中，抗原結合蛋白為人類單克隆抗體。如本領域技術人員應了解，根據本公開，改變pcsk9與ldlr之間的相互作用可增加可用於結合ldl的ldlr的量，這又會降低受試者的血清ldl的量，從而使受試者的血清膽固醇水平降低。因而，針對pcsk9的抗原結合蛋白可用於治療血清膽固醇水平升高、處於血清膽固醇水平升高的風險中或可能受益於其血清膽固醇水平降低的受試者的各種方法和製劑中。因此，本文還描述了用於降低血清膽固醇、維持血清膽固醇或防止血清膽固醇增加的各種方法和技術。在一些實施方案中，抗原結合蛋白允許pcsk9與ldlr之間的結合，但抗原結合蛋白防止或降低pcsk9對ldlr的不利活性。在一些實施方案中，抗原結合蛋白防止或降低pcsk9與ldlr的結合。為了方便起見，以下章節總體上概述本文所用術語的各種含義。根據此論述，論述關於抗原結合蛋白的總體方面，之後為顯示抗原結合蛋白的各種實施方案的性質及其可如何採用的具體實施例。定義和實施方案應了解上文一般描述與下文詳細描述均僅具有示例性和說明性而不限制所要求的本發明。在本申請中，除非另外明確陳述，否則使用單數包括複數。在本申請中，除非另外陳述，否則使用「或」意指「和/或」。此外，使用術語「包括(including)」以及其它形式，如「包括(includes)」及「包括(included)」不具有限制性。此外，除非另外明確陳述，否則如「要素」或「組分」的術語涵蓋構成一個單元的要素和組分以及構成一個以上亞單位的要素和組分。此外，使用術語「部分」可包括某一部分的一部分或整個部分。本文中使用的章節標題僅出於組織目的且不應解釋為限制所述主題。本申請中引用的所有文獻或文獻的部分，包括(但不限於)專利、專利申請、文章、書籍及論文，皆據此出於任何目的以引用的方式明確整體併入本文。如根據本公開所使用，除非另外指示，否則以下術語應理解為具有以下含義：術語「前蛋白轉化酶枯草桿菌蛋白酶kexin型9」或「pcsk9」是指如seqidno:1和/或3所示的多肽或其片段、以及相關多肽，包括(但不限於)等位基因變體、剪接變體、衍生變體、取代變體、缺失變體和/或插入變體，包括添加n端蛋氨酸、融合多肽及種間同源物。在某些實施方案中，pcsk9多肽包括末端殘基，如(但不限於)前導序列殘基、靶向殘基、氨基端蛋氨酸殘基、賴氨酸殘基、標籤殘基和/或融合蛋白殘基。「pcsk9」還被稱為fh3、narc1、hchola3、前蛋白轉化酶枯草桿菌蛋白酶/kexin型9及神經細胞凋亡調控的轉化酶1。pcsk9基因編碼屬於分泌性枯草桿菌酶(subtilase)家族的蛋白酶k次家族的前蛋白轉化酶蛋白。術語「pcsk9」表示前蛋白與在前蛋白的自催化之後生成的產物兩者。當僅提及自催化的產物(如對於選擇性結合裂解的pcsk9的抗原結合蛋白)時，所述蛋白可被稱為「成熟」、「裂解的」、「加工的」或「活性」pcsk9。當僅提及非活性形式時，所述蛋白可被稱為「非活性」、「原形式」或「未加工的」形式的pcsk9。如本文所用的術語pcsk9還包括天然存在的等位基因，如突變d374y、s127r及f216l。術語pcsk9還涵蓋並有pcsk9胺基酸序列的轉譯後修飾的pcsk9分子，如已經糖基化、聚乙二醇化的pcsk9序列、信號序列已經裂解的pcsk9序列、前結構域已從催化域裂解但未與催化域分離的pcsk9序列(例如圖1a和1b)。術語「pcsk9活性」包括pcsk9的任何生物效應。在某些實施方案中，pcsk9活性包括pcsk9與底物或受體相互作用或結合的能力。在一些實施方案中，pcsk9活性由pcsk9結合ldl受體(ldlr)的能力表示。在一些實施方案中，pcsk9結合ldlr並催化涉及ldlr的反應。在一些實施方案中，pcsk9活性包括pcsk9改變(例如降低)ldlr的可用性的能力。在一些實施方案中，pcsk9活性包括pcsk9增加受試者的ldl的量的能力。在一些實施方案中，pcsk9活性包括pcsk9降低可用於結合ldl的ldlr的量的能力。在一些實施方案中，「pcsk9活性」包括由pcsk9信號傳導所引起的任何生物活性。示例性活性包括(但不限於)pcsk9結合ldlr、裂解ldlr或其它蛋白質的pcsk9酶活性、pcsk9結合除ldlr以外的促進pcsk9作用的蛋白質、pcsk9改變apob分泌(sunx-m等，「evidenceforeffectofmutantpcsk9onapoliproteinbsecretionasthecauseofunusuallyseveredominanthypercholesterolemia」,humanmoleculargenetics14:1161-1169,2005及ouguerramk等，「apolipoproteinb100metabolisminautosomal-dominanthypercholesterolemiarelatedtomutationsinpcsk9」,arteriosclerthrombvascbiol.24:1448-1453,2004)、pcsk9在肝臟再生及神經元細胞分化中的作用(seidahng等，「thesecretoryproproteinconvertaseneuralapoptosis-regulatedconvertase1(narc-1):liverregenerationandneuronaldifferentiation」pnas100:928-933,2003)、以及pcsk9在肝葡萄糖代謝中的作用(costet等，「hepaticpcsk9expressionisregulatedbynutritionalstatusviainsulinandsterolregulatoryelement-bindingprotein1c」j.biol.chem.281(10):6211-18,2006)。如本文所用的術語「高膽固醇血症」是指膽固醇水平升高到所要水平以上的病狀。在一些實施方案中，這表示血清膽固醇水平升高。在一些實施方案中，所要水平慮及本領域技術人員已知(且在本文中描述或提及)的各種「風險因素」。術語「聚核苷酸」或「核酸」包括單鏈核苷酸聚合物與雙鏈核苷酸聚合物兩者。構成聚核苷酸的核苷酸可為核糖核苷酸或脫氧核糖核苷酸或任一類型的核苷酸的修飾的形式。所述修飾包括鹼基修飾，如溴尿苷及肌苷衍生物；核糖修飾，如2',3'-二脫氧核糖；及核苷酸間鍵修飾，如硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯、硒代磷酸酯、二硒代磷酸酯、苯胺硫代磷酸酯、苯胺磷酸酯及磷醯氨酸酯。術語「寡核苷酸」意指包含200個或200個以下核苷酸的聚核苷酸。在一些實施方案中，寡核苷酸的長度為10至60個鹼基。在其它實施方案中，寡核苷酸的長度為12、13、14、15、16、17、18、19或20至40個核苷酸。寡核苷酸可為例如用於構建突變基因的單鏈或雙鏈寡核苷酸。寡核苷酸可為有義或反義寡核苷酸。寡核苷酸可包括標記，包括放射性標記、螢光標記、半抗原或抗原標記，以用於檢測測定。寡核苷酸可例如用作pcr引物、克隆引物或雜交探針。「分離的核酸分子」意指基因組、mrna、cdna或合成來源的dna或rna或其某種組合，其不與在自然界中發現分離的聚核苷酸的聚核苷酸的全部或一部分締合，或其連接於其在自然界中不連接的聚核苷酸。出於本公開的目的，應了解「包含具體的核苷酸序列的核酸分子」不包括完整的染色體。除指定序列之外，「包含」指定核酸序列的分離的核酸分子還可包括多達10種或甚至多達20種其它蛋白質或其部分的編碼序列，或可包括控制所述核酸序列的編碼區的表達的可操作地連接的調控序列，和/或可包括載體序列。除非另外指定，否則本文論述的任何單鏈聚核苷酸序列的左手端為5'端；雙鏈聚核苷酸序列的左手方向稱為5'方向。5'至3'添加初生rna轉錄物的方向被稱為轉錄方向；在具有與rna轉錄物相同的序列的dna鏈上5'至rna轉錄物的5'端的序列區域被稱為「上遊序列」；在具有與rna轉錄物相同的序列的dna鏈上3'至rna轉錄物的3'端的序列區域被稱為「下遊序列」。術語「控制序列」是指可影響其所連接的編碼序列的表達和加工的聚核苷酸序列。所述控制序列的性質可取決於宿主生物體。在具體的實施方案中，原核生物的控制序列可包括啟動子、核糖體結合位點及轉錄終止序列。舉例來說，真核生物的控制序列可包括包含一個或多個轉錄因子的識別位點的啟動子、轉錄增強子序列及轉錄終止序列。「控制序列」可包括前導序列和/或融合配偶體序列。術語「載體」意指用於將蛋白質編碼信息轉移至宿主細胞中的任何分子或實體(例如核酸、質粒、噬菌體或病毒)。術語「表達載體」或「表達構建體」是指適於轉化宿主細胞且含有指導和/或控制(連同宿主細胞一起)與其可操作地連接的一個或多個異源編碼區的表達的核酸序列的載體。表達構建體可包括(但不限於)影響或控制與其可操作地連接的編碼區的轉錄、轉譯且如果存在內含子，則影響所述編碼區的rna剪接的序列。如本文所用，「可操作地連接」意指所述術語所應用的組分呈允許其在適合條件下執行其固有功能的關係。舉例來說，載體中「可操作地連接」於蛋白質編碼序列的控制序列與其連接以便在與控制序列的轉錄活性相容的條件下達成蛋白質編碼序列的表達。術語「宿主細胞」意指已用或能夠用核酸序列轉化並且進而表達目標基因的細胞。所述術語包括親本細胞的子代，不管子代在形態或基因組成方面是否與原始親本細胞一致，只要存在相關基因即可。術語「轉染」意指細胞攝取外來或外源dna，並且當外源dna已引入細胞膜內部時，細胞已被「轉染」。許多轉染技術在本領域中為熟知的且在本文中加以公開。參見例如graham等，1973,virology52:456；sambrook等，2001,molecularcloning:alaboratorymanual，同上；davis等，1986,basicmethodsinmolecularbiology,elsevier；chu等，1981,gene13:197。所述技術可用於將一個或多個外源dna部分引入適合的宿主細胞中。術語「轉化」是指細胞遺傳特徵的變化，並且當細胞已被修飾成含有新的dna或rna時，細胞已被轉化。舉例來說，當細胞通過經由轉染、轉導或其它技術引入新的遺傳物質而自其天然狀態被遺傳修飾時，所述細胞被轉化。在轉染或轉導之後，轉化的dna可通過物理整合至細胞的染色體中來與細胞的dna重組，或可以游離型元件形式短暫維持而不複製，或可以質粒形式獨立複製。當轉化的dna隨細胞分裂複製時，細胞被視為已經「穩定轉化的」。術語「多肽」或「蛋白質」意指具有天然蛋白質(即，由天然存在及非重組細胞產生的蛋白質)的胺基酸序列的大分子；或其由遺傳改造或重組細胞產生，並且包含具有天然蛋白質的胺基酸序列的分子、或缺失天然序列的一個或多個胺基酸、在天然序列中添加一個或多個胺基酸和/或取代天然序列的一個或多個胺基酸的分子。所述術語還包括一個或多個胺基酸為相應的天然存在的胺基酸及聚合物的化學類似物的胺基酸聚合物。術語「多肽」及「蛋白質」明確涵蓋pcsk9抗原結合蛋白、抗體或缺失抗原結合蛋白的一個或多個胺基酸、在抗原結合蛋白中添加一個或多個胺基酸和/或取代抗原結合蛋白的一個或多個胺基酸的序列。術語「多肽片段」是指相較於全長天然蛋白質，具有氨基端缺失、羧基端缺失和/或內部缺失的多肽。相較於天然蛋白質，所述片段還可含有修飾的胺基酸。在某些實施方案中，片段的長度為約5個至500個胺基酸。舉例來說，片段的長度可為至少5個、6個、8個、10個、14個、20個、50個、70個、100個、110個、150個、200個、250個、300個、350個、400個或450個胺基酸。適用的多肽片段包括抗體的免疫功能性片段，包括結合域。在pcsk9結合抗體的情況下，適用的片段包括(但不限於)cdr區、重鏈和/或輕鏈的可變域、抗體鏈的一部分或其僅包括兩個cdr的可變區及其類似物。所提及的術語「分離的蛋白質」意指主題蛋白質(1)不含至少一些通常將與其一起存在的其它蛋白質，(2)基本上不含來自同一來源，例如來自同一物種的其它蛋白質，(3)由來自不同物種的細胞表達，(4)已與至少約50％的在自然界中與其締合的聚核苷酸、脂質、碳水化合物或其它物質分離，(5)可操作地與在自然界中不與其締合的多肽締合(通過共價或非共價相互作用)，或(6)不存在於自然界中。通常，「分離的蛋白質」構成給定樣品的至少約5％、至少約10％、至少約25％或至少約50％。合成來源的基因組dna、cdna、mrna或其它rna或其任何組合可編碼所述分離的蛋白質。優選地，分離的蛋白質實質上不含見於其自然環境中的會干擾其治療、診斷、防治、研究或其它用途的蛋白質或多肽或其它汙染物。術語「胺基酸」包括其在本領域中的通常含義。多肽(例如抗原結合蛋白或抗體)的「變體」包含以下胺基酸序列：其中相對於另一多肽序列，在所述胺基酸序列中插入、缺失和/或取代有一個或多個胺基酸殘基。變體包括融合蛋白。術語「同一性」是指兩個或更多個多肽分子或兩個或更多個核酸分子的序列之間的關係，如通過比對和比較序列所確定。「同一性百分比」意指所比較的分子中的胺基酸或核苷酸之間的相同殘基的百分比並且是基於所比較的分子中最小分子的大小來計算。對於這些計算，優選通過具體的數學模型或電腦程式(即「算法」)處理比對中的空位(如果存在的話)。可用於計算所比對的核酸或多肽的同一性的方法包括以下文獻中所述的方法：computationalmolecularbiology,(lesk,a.m.編),1988,newyork:oxforduniversitypress；biocomputinginformaticsandgenomeprojects,(smith,d.w.編),1993,newyork:academicpress；computeranalysisofsequencedata,parti,(griffin,a.m.和griffin,h.g.編),1994,newjersey:humanapress；vonheinje,g.,1987,sequenceanalysisinmolecularbiology,newyork:academicpress；sequenceanalysisprimer,(gribskov,m.和devereux,j.編),1991,newyork:m.stocktonpress；以及carillo等，1988,siamj.appliedmath.48:1073。在計算同一性百分比時，通常以產生序列間最大匹配的方式比對所比較的序列。可用於測定同一性百分比的電腦程式的一個實例為包括gap的gcg程序包(devereux等，1984,nucl.acidres.12:387；geneticscomputergroup,universityofwisconsin,madison,wi)。計算機算法gap是用於比對有待測定序列同一性百分比的兩個多肽或聚核苷酸。將序列進行比對以實現其各自的胺基酸或核苷酸的最佳匹配(如通過算法所測定的「匹配跨度」)。算法聯合使用空位開放罰分(其根據3×平均對角線來計算，其中「平均對角線」為所用判斷矩陣的對角線的平均值；「對角線」為由具體判斷矩陣指定給各完全胺基酸匹配的分值或數值)；及空位擴展罰分(通常為1/10×空位開放罰分)以及判斷矩陣(如pam250或blosum62)。在某些實施方案中，算法還使用標準判斷矩陣(對於pam250判斷矩陣，參見dayhoff等，1978,atlasofproteinsequenceandstructure5:345-352；對於blosum62判斷矩陣，參見henikoff等，1992,proc.natl.acad.sci.u.s.a.89:10915-10919)。可用於使用gap程序測定多肽或核苷酸序列的同一性百分比的參數的實例為以下參數：●算法：needleman等，1970,j.mol.biol.48:443-453●判斷矩陣：blosum62，來自henikoff等，1992，同上●空位罰分：12(但無末端空位罰分)●空位長度罰分：4●類似性閾值：0用於比對兩個胺基酸序列的某些比對方案僅可使兩個序列的較短區域匹配，並且這個小比對區域可具有極高序列同一性，即使兩個全長序列之間不存在顯著關係。因此，如果需要產生跨越目標多肽的至少50個或其它數目的連續的胺基酸的比對，那麼可調整所選的比對方法(gap程序)。如本文所用，20種常規(例如天然存在)的胺基酸及其縮寫遵循常規用法。參見immunology--asynthesis(第2版，e.s.golub和d.r.gren編，sinauerassociates,sunderland,mass.(1991))，其出於任何目的以引用的方式併入本文。20種常規胺基酸的立體異構體(例如d-胺基酸)、非天然胺基酸(如α,α-雙取代的胺基酸)、n-烷基胺基酸、乳酸及其它非常規的胺基酸也可為本發明多肽的適合組分。非常規的胺基酸的實例包括：4-羥基脯氨酸、γ-羧基穀氨酸、ε-n,n,n-三甲基賴氨酸、ε-n-乙醯賴氨酸、o-磷酸絲氨酸、n-乙醯絲氨酸、n-甲醯蛋氨酸、3-甲基組氨酸、5-羥基賴氨酸、σ-n-甲基精氨酸及其它類似胺基酸及亞胺基酸(例如4-羥基脯氨酸)。在本文所用的多肽記法中，根據標準用法及慣例，左手方向為氨基端方向而右手方向為羧基端方向。類似地，除非另外指定，否則單鏈聚核苷酸序列的左手端為5'端；雙鏈聚核苷酸序列的左手方向稱為5'方向。5'至3'添加初生rna轉錄物的方向稱為轉錄方向；在具有與rna相同的序列的dna鏈上5'至rna轉錄物的5'端的序列區域被稱為「上遊序列」；在具有與rna相同的序列的dna鏈上3'至rna轉錄物的3'端的序列區域被稱為「下遊序列」。保守性胺基酸取代可涵蓋非天然存在的胺基酸殘基，其通常通過化學肽合成而非通過於生物系統中合成而併入。這些包括肽模擬物及胺基酸部分的其它逆向或反向形式。天然存在的殘基可基於共同側鏈性質進行分類：1)疏水性：正亮氨酸、met、ala、val、leu、ile；2)中性親水性：cys、ser、thr、asn、gln；3)酸性：asp、glu；4)鹼性：his、lys、arg；5)影響鏈定向的殘基：gly、pro；以及6)芳族：trp、tyr、phe。舉例來說，非保守性取代可涉及這些類別中的一類的成員交換成另一類的成員。所述取代的殘基可例如引入人類抗體的與非人類抗體同源的區域中或引入分子的非同源區域中。在根據某些實施方案對抗原結合蛋白或pcsk9蛋白作出變化時，可考慮胺基酸的親水指數。已基於各胺基酸的疏水性及電荷特徵對其指定親水指數。它們為：異亮氨酸(+4.5)；纈氨酸(+4.2)；亮氨酸(+3.8)；苯丙氨酸(+2.8)；半胱氨酸/胱氨酸(+2.5)；蛋氨酸(+1.9)；丙氨酸(+1.8)；甘氨酸(-0.4)；蘇氨酸(-0.7)；絲氨酸(-0.8)；色氨酸(-0.9)；酪氨酸(-1.3)；脯氨酸(-1.6)；組氨酸(-3.2)；穀氨酸(-3.5)；穀氨醯胺(-3.5)；天冬氨酸(-3.5)；天冬醯胺(-3.5)；賴氨酸(-3.9)；以及精氨酸(-4.5)。本領域中了解親水胺基酸指數在對蛋白質賦予相互作用性生物功能方面的重要性。kyte等，j.mol.biol.,157:105-131(1982)。已知某些胺基酸可被取代成具有類似親水指數或分值的其它胺基酸且仍然保留類似的生物活性。在某些實施方案中，在基於親水指數作出變化時，包括親水指數在±2內的胺基酸的取代。在某些實施方案中，包括親水指數在±1內的胺基酸的取代，並且在某些實施方案中，包括親水指數在±0.5內的胺基酸的取代。本領域中還應了解，類似胺基酸的取代可基於親水性有效地進行，尤其在由此產生的生物功能性蛋白質或肽旨在用於免疫學實施方案中時，如在本發明的情況下。在某些實施方案中，蛋白質的如受其鄰近胺基酸的親水性管控的最大局部平均親水性與其免疫原性及抗原性相關，即與蛋白質的生物性質相關。以下親水性值已指定給這些胺基酸殘基：精氨酸(+3.0)；賴氨酸(+3.0)；天冬氨酸(+3.0±1)；穀氨酸(+3.0±1)；絲氨酸(+0.3)；天冬醯胺(+0.2)；穀氨醯胺(+0.2)；甘氨酸(0)；蘇氨酸(-0.4)；脯氨酸(-0.5±1)；丙氨酸(-0.5)；組氨酸(-0.5)；半胱氨酸(-1.0)；蛋氨酸(-1.3)；纈氨酸(-1.5)；亮氨酸(-1.8)；異亮氨酸(-1.8)；酪氨酸(-2.3)；苯丙氨酸(-2.5)以及色氨酸(-3.4)。在基於類似親水性值作出變化時，在某些實施方案中，包括親水性值在±2內的胺基酸的取代，在某些實施方案中，包括親水性值在±1內的胺基酸的取代，並且在某些實施方案中，包括親水性值在±0.5內的胺基酸的取代。還可基於親水性從一級胺基酸序列鑑定表位。這些區域又被稱為「表位核心區」。示例性胺基酸取代列舉於表1中。表1胺基酸取代術語「衍生物」是指包括除胺基酸(或核酸)的插入、缺失或取代以外的化學修飾的分子。在某些實施方案中，衍生物包含共價修飾，包括(但不限於)與聚合物、脂質或其它有機或無機部分進行化學鍵結。在某些實施方案中，化學修飾的抗原結合蛋白的循環半衰期可長於未化學修飾的抗原結合蛋白。在某些實施方案中，化學修飾的抗原結合蛋白對所要細胞、組織和/或器官的靶向能力可得以改進。在一些實施方案中，衍生的抗原結合蛋白被共價修飾成包括一個或多個水溶性聚合物連接物，包括(但不限於)聚乙二醇、聚氧乙二醇或聚丙二醇。參見例如以下美國專利號：4,640,835、4,496,689、4,301,144、4,670,417、4,791,192及4,179,337。在某些實施方案中，衍生的抗原結合蛋白包含一種或多種聚合物，包括(但不限於)單甲氧基-聚乙二醇、葡聚糖、纖維素或其它碳水化合物基聚合物、聚-(n-乙烯基吡咯烷酮)-聚乙二醇、丙二醇均聚物、聚環氧丙烷/環氧乙烷共聚物、聚氧乙烯多元醇(例如甘油)及聚乙烯醇、以及所述聚合物的混合物。在某些實施方案中，衍生物被聚乙二醇(peg)亞單位共價修飾。在某些實施方案中，在衍生物的一個或多個特定位置處，例如在氨基端處鍵結一個或多個水溶性聚合物。在某些實施方案中，一種或多種水溶性聚合物隨機連接至衍生物的一個或多個側鏈。在某些實施方案中，peg用於改進抗原結合蛋白的治療能力。在某些實施方案中，peg用於改進人源化抗體的治療能力。某些此類方法例如論述於美國專利號6,133,426中，其據此出於任何目的以引用的方式併入本文。肽類似物通常作為性質類似於模板肽的非肽藥物用於藥物產業中。這些類型的非肽化合物稱為「肽模擬物(peptidemimetic)」或「肽仿真物(peptidomimetic)」。fauchere,j.,adv.drugres.,15:29(1986)；veber和freidinger,tins，第392頁(1985)；及evans等，j.med.chem.,30:1229(1987)，其出於任何目的以引用的方式併入本文。所述化合物常藉助於計算機化分子建模來開發。在結構上類似於治療上適用的肽的肽模擬物可用於產生類似的治療或防治效應。一般來說，肽仿真物在結構上類似於範式多肽(即具有生物化學性質或藥理學活性的多肽)，如人類抗體，但一個或多個肽鍵任選地通過本領域中熟知的方法由選自以下的鍵置換：--ch2nh--、--ch2s--、--ch2-ch2--、--ch＝ch-(順式和反式)、--coch2--、--ch(oh)ch2--及--ch2so--。用相同類型的d-胺基酸系統性取代共有序列的一個或多個胺基酸(例如d-賴氨酸替代l-賴氨酸)可用於某些實施方案中以生成更穩定的肽。此外，可通過本領域中已知的方法(rizo和gierasch,ann.rev.biochem.,61:387(1992)，出於任何目的以引用的方式併入本文中)產生包含共有序列或大致上相同的共有序列變化的限制性肽；例如通過添加能夠形成使肽環化的分子內二硫橋鍵的內部半胱氨酸殘基。如說明書通篇中關於生物物質(如多肽、核酸、宿主細胞及其類似物)使用的術語「天然存在的」是指物質可見於自然界中或為物質的可見於自然界中的某一形式。如本文所用的「抗原結合蛋白」(「abp」)意指結合指定的目標抗原的任何蛋白質。在本申請中，指定的目標抗原為pcsk9蛋白或其片段。「抗原結合蛋白」包括(但不限於)抗體及其結合部分，如免疫功能性片段。肽體為抗原結合蛋白的另一實例。如本文所用的術語抗體或免疫球蛋白鏈(重鏈或輕鏈)抗原結合蛋白的「免疫功能性片段」(或簡稱為「片段」)為一種抗原結合蛋白，其包含抗體的缺乏至少一些存在於全長鏈中的胺基酸但仍然能夠特異性結合抗原的部分(不考慮那個部分如何獲得或合成)。所述片段具有生物活性，因為其結合目標抗原並且可與其它抗原結合蛋白(包括完整抗體)競爭結合給定的表位。在一些實施方案中，片段為中和性片段。在一些實施方案中，片段可阻斷或降低ldlr與pcsk9之間相互作用的可能性。在一方面，所述片段將保留至少一個cdr存在於全長輕鏈或重鏈中，並且在一些實施方案中，將包含單一重鏈和/或輕鏈或其部分。這些生物活性片段可通過重組dna技術產生，或可通過酶促或化學裂解抗原結合蛋白(包括完整抗體)而產生。免疫功能性免疫球蛋白片段包括(但不限於)fab、雙抗體(位於同一條多肽上的重鏈可變域與輕鏈可變域經由短肽接頭連接，所述肽接頭過短以致於不允許同一條鏈上的兩個結構域之間的配對)、fab'、f(ab')2、fv、結構域抗體及單鏈抗體，且可源於任何哺乳動物來源，包括(但不限於)人類、小鼠、大鼠、駱駝科或兔。進一步預期本文公開的抗原結合蛋白的功能性部分(例如一個或多個cdr)可共價結合於第二蛋白質或小分子以生成針對體內具體目標、具有雙功能治療性質或具有延長的血清半衰期的治療劑。如本領域技術人員應了解，抗原結合蛋白可包括非蛋白質組分。在本公開的一些章節中，本文利用「數字/字母/數字」(例如25a7)描述abp的實例。在這些情況下，確切名稱表示具體抗體。即，名為25a7的abp不一定與名為25a7.1的抗體相同(除非其在說明書中明確教導為相同的，例如25a7和25a7.3)。如本領域技術人員應了解，在一些實施方案中，ldlr不為抗原結合蛋白。在一些實施方案中，ldlr的結合子區段(subsection)不為抗原結合蛋白，例如egfa。在一些實施方案中，pcsk9進行體內信號傳導所經由的其它分子不為抗原結合蛋白。所述實施方案將如此被明確鑑定。本文所述的某些抗原結合蛋白為抗體或源於抗體。在某些實施方案中，抗原結合蛋白的多肽結構是基於抗體，包括(但不限於)單克隆抗體、雙特異性抗體、微型抗體、域抗體、合成抗體(在本文中有時稱為「抗體模擬物」)、嵌合抗體、人源化抗體、人類抗體、抗體融合物(在本文中有時稱為「抗體綴合物」)及其各自的片段。在一些實施方案中，abp包含高親和性多聚體(avimer)(緊密結合肽)或由所述高親和性多聚體組成。本文進一步描述這些不同的抗原結合蛋白。「fc」區包含兩個重鏈片段，其包含抗體的ch1及ch2域。這兩個重鏈片段由兩個或更多個二硫鍵及由ch3域的疏水性相互作用固持在一起。「fab片段」包含一條輕鏈以及一條重鏈的ch1和可變區。fab分子的重鏈不能與另一重鏈分子形成二硫鍵。「fab'片段」包含一條輕鏈以及一條重鏈的含有vh域和ch1域及ch1域與ch2域之間的區域的部分，由此可在兩個fab'片段的兩條重鏈之間形成鏈間二硫鍵以形成f(ab')2分子。「f(ab')2片段」含有兩條輕鏈以及含有ch1域與ch2域之間的一部分恆定區的兩條重鏈，由此在兩條重鏈之間形成鏈間二硫鍵。因此，f(ab')2片段由經兩條重鏈之間的二硫鍵固持在一起的兩個fab'片段構成。「fv區」包含來自重鏈與輕鏈兩者的可變區，但缺乏恆定區。「單鏈抗體」為fv分子，其中重鏈和輕鏈可變區已由柔性接頭連接以形成單一多肽鏈，所述多肽鏈形成抗原結合區。單鏈抗體詳細論述於國際專利申請公布號wo88/01649及美國專利號4,946,778及5,260,203中，其公開以引用的方式併入本文。「域抗體」為僅含有重鏈的可變區或輕鏈的可變區的免疫功能性免疫球蛋白片段。在一些情況下，兩個或更多個vh區通過肽接頭共價連接以產生二價域抗體。二價域抗體的兩個vh區可靶向相同或不同的抗原。「二價抗原結合蛋白」或「二價抗體」包含兩個抗原結合位點。在一些情況下，兩個結合位點具有相同的抗原特異性。二價抗原結合蛋白及二價抗體可具有雙特異性，參見下文。在某些實施方案中，除「多特異性」或「多功能性」抗體以外的二價抗體通常應理解為其結合位點的每一者相同。「多特異性抗原結合蛋白」或「多特異性抗體」為靶向一種以上抗原或表位的抗原結合蛋白或抗體。「雙特異性」、「雙重特異性」或「雙功能性」抗原結合蛋白或抗體分別為具有兩個不同抗原結合位點的雜交抗原結合蛋白或抗體。雙特異性抗原結合蛋白及抗體為一種多特異性抗原結合蛋白抗體並且可通過包括(但不限於)雜交瘤融合或連接fab'片段的多種方法產生。參見例如songsivilai和lachmann,1990,clin.exp.immunol.79:315-321；kostelny等，1992,j.immunol.148:1547-1553。雙特異性抗原結合蛋白或抗體的兩個結合位點將結合可駐留於相同或不同蛋白質目標上的兩個不同的表位。當解離常數(kd)≤10-7m時，抗原結合蛋白被稱為「特異性結合」其目標抗原。當kd≤5×10-9m時，abp以「高親和力」特異性結合抗原，並且當kd≤5×10-10m時，abp以「極高親和力」特異性結合抗原。在一個實施方案中，abp的kd≤10-9m。在一個實施方案中，解離速率<1×10-5m。在其它實施方案中，abp結合人類pcsk9的kd將介於約10-9m與10-13m之間，並且在另一實施方案中，abp結合的kd將≤5×10-10m。如本領域技術人員應了解，在一些實施方案中，任何或所有抗原結合片段皆可特異性結合pcsk9。當抗原結合蛋白結合一種目標比其結合第二目標更緊密時，其具有「選擇性」。「抗原結合區」意指特異性結合指定抗原(例如互補位)的蛋白質或蛋白質的一部分。舉例來說，抗原結合蛋白的含有與抗原相互作用且賦予抗原結合蛋白以對抗原的特異性及親和力的胺基酸殘基的那部分被稱為「抗原結合區」。抗原結合區通常包括一個或多個「互補結合區」(「cdr」)。某些抗原結合區還包括一個或多個「框架」區。「cdr」為促成抗原結合特異性及親和力的胺基酸序列。「框架」區可有助於維持cdr的適當構形以促進抗原結合區與抗原之間的結合。在結構上，框架區可位於抗體中的cdr之間。框架區及cdr區的實例展示於圖2a-3d、3ccc-3jjj中。在一些實施方案中，抗體3b6的輕鏈的cdr的序列如下：cdr1tlssgyssyevd(seqidno:279)；cdr2vdtggivgskge(seqidno:280)；cdr3gadhgsgtnfvvv(seqidno:281)，並且fr如下：fr1qpvltqplfasaslgasvtltc(seqidno:282)；fr2wyqqrpgkgprfvmr(seqidno:283)；fr3gipdrfsvlgsglnryltikniqeedesdyhc(seqidno:284)；及fr4fgggtkltvl(seqidno:285)。在某些方面，提供結合pcsk9(例如人類pcsk9)的重組抗原結合蛋白。在此情形下，「重組抗原結合蛋白」為使用重組技術，即經由表達如本文所述的重組核酸製備的蛋白質。產生重組蛋白質的方法和技術在本領域中為熟知的。術語「抗體」是指任何同種型的完整免疫球蛋白或其可與完整抗體競爭特異性結合目標抗原的片段，並且包括例如嵌合抗體、人源化抗體、完全人類抗體及雙特異性抗體。「抗體」為一種抗原結合蛋白。完整抗體通常將包含至少兩個全長重鏈及兩個全長輕鏈，但在一些情況下可包括較少鏈，如天然存在於駱駝科中的可僅包含重鏈的抗體。抗體可僅源於單一來源，或可為「嵌合」抗體，即抗體的不同部分可源於兩種不同抗體，如下文進一步描述。可通過重組dna技術於雜交瘤中，或通過酶促或化學裂解完整抗體來產生抗原結合蛋白、抗體或結合片段。除非另外指示，否則術語「抗體」除包含兩個全長重鏈及兩個全長輕鏈的抗體之外還包括其衍生物、變體、片段及突變蛋白(mutein)，其實例在下文中描述。此外，除非明確排除，否則抗體包括單克隆抗體、雙特異性抗體、微型抗體、域抗體、合成抗體(在本文中有時稱為「抗體模擬物」)、嵌合抗體、人源化抗體、人類抗體、抗體融合物(在本文中有時稱為「抗體綴合物」)及其各自的片段。在一些實施方案中，術語還涵蓋肽體。天然存在的抗體結構單元通常包含四聚體。所述四聚體通常各由兩對相同的多肽鏈構成，每一對具有一條全長「輕」鏈(在某些實施方案中，約25kda)及一條全長「重」鏈(在某些實施方案中，約50-70kda)。每條鏈的氨基端部分通常包括具有約100至110個或更多個胺基酸的通常負責抗原識別的可變區。每條鏈的羧基端部分通常界定可負責效應子功能的恆定區。人類輕鏈通常分類為κ及λ輕鏈。重鏈通常分類為μ、δ、γ、α或ε，並且分別將抗體的同種型定義為igm、igd、igg、iga及ige。igg具有若干子類，包括(但不限於)igg1、igg2、igg3及igg4。igm具有包括(但不限於)igm1及igm2的子類。iga類似地再分成包括(但不限於)iga1及iga2的子類。在全長輕鏈及重鏈內，可變區及恆定區通常由具有約12個或更多個胺基酸的「j」區連接，同時重鏈還包括具有另外約10個胺基酸的「d」區。參見例如fundamentalimmunology，第7章(paul,w.編，第2版ravenpress,n.y.(1989))(出於所有目的以全文引用的方式併入本文)。各輕鏈/重鏈對的可變區通常形成抗原結合位點。可變區通常展現相對保守的框架區(fr)由三個高變區(又稱為互補決定區或cdr)連接的相同一般結構。來自各對的兩條鏈的cdr通常由框架區對準，這可使得能夠結合特定表位。自n端至c端，輕鏈可變區與重鏈可變區兩者通常均包含結構域fr1、cdr1、fr2、cdr2、fr3、cdr3及fr4。通常根據kabatsequencesofproteinsofimmunologicalinterest(nationalinstitutesofhealth,bethesda,md.(1987及1991))；或chothia及lesk,j.mol.biol.,196:901-917(1987)；chothia等，nature,342:878-883(1989)的定義將胺基酸指定給各結構域。在某些實施方案中，抗體重鏈在不存在抗體輕鏈下結合抗原。在某些實施方案中，抗體輕鏈在不存在抗體重鏈下結合抗原。在某些實施方案中，抗體結合區在不存在抗體輕鏈下結合抗原。在某些實施方案中，抗體結合區在不存在抗體重鏈下結合抗原。在某些實施方案中，單個可變區在不存在其它可變區下特異性結合抗原。在某些實施方案中，通過解析抗體的結構和/或解析抗體-配體複合物的結構來達成定義性描述cdr及鑑定構成抗體的結合位點的殘基。在某些實施方案中，可通過本領域技術人員已知的多種技術的任一種，如x射線結晶學來達成這個目的。在某些實施方案中，各種分析方法可用於鑑定或粗略估計cdr區。所述方法的實例包括(但不限於)kabat定義、chothia定義、abm定義及接觸定義。kabat定義為用於編號抗體中的殘基的標準且通常用於鑑定cdr區。參見例如johnson和wu,nucleicacidsres.,28:214-8(2000)。chothia定義類似於kabat定義，但chothia定義慮及某些結構環區的位置。參見例如chothia等，j.mol.biol.,196:901-17(1986)；chothia等，nature,342:877-83(1989)。abm定義使用由oxfordmoleculargroup出品的模型化抗體結構的電腦程式集成套件。參見例如martin等，procnatlacadsci(usa),86:9268-9272(1989)；「abmtm,acomputerprogramformodelingvariableregionsofantibodies」,oxford,uk；oxfordmolecular,ltd。abm定義使用知識資料庫與從頭計算(abinitio)方法的組合從一級序列模型化抗體的三級結構，所述從頭計算方法如由samudrala等，「abinitioproteinstructurepredictionusingacombinedhierarchicalapproach」,proteins,structure,functionandgenetics增刊,3:194-198(1999)所述。接觸定義是基於分析可用複合物晶體結構。參見例如maccallum等，j.mol.biol.,5:732-45(1996)。按照慣例，重鏈中的cdr區通常稱為h1、h2及h3並且沿從氨基端至羧基端的方向依序編號。輕鏈中的cdr區通常稱為l1、l2及l3並且沿從氨基端至羧基端的方向依序編號。術語「輕鏈」包括全長輕鏈及其具有足以賦予結合特異性的可變區序列的片段。全長輕鏈包括可變區結構域vl及恆定區結構域cl。輕鏈的可變區結構域在多肽的氨基端處。輕鏈包括κ鏈和λ鏈。術語「重鏈」包括全長重鏈及其具有足以賦予結合特異性的可變區序列的片段。全長重鏈包括可變區結構域vh以及三個恆定區結構域ch1、ch2及ch3。vh結構域在多肽的氨基端處，且ch結構域在羧基端處，其中ch3最靠近多肽的羧基端。重鏈可為任何同種型，包括igg(包括igg1、igg2、igg3及igg4亞型)、iga(包括iga1及iga2亞型)、igm及ige。雙特異性或雙功能性抗體通常為具有兩個不同重鏈/輕鏈對及兩個不同結合位點的人工雜交抗體。雙特異性抗體可通過多種方法，包括(但不限於)雜交瘤融合或連接fab'片段來產生。參見例如songsivilai等，clin.exp.immunol.,79:315-321(1990)；kostelny等，j.immunol.,148:1547-1553(1992)。一些哺乳動物物種還產生僅具有單一重鏈的抗體。各單個免疫球蛋白鏈通常由若干「免疫球蛋白結構域」構成，所述「免疫球蛋白結構域」各自由大約90至110個胺基酸組成並且具有特徵性摺疊樣式。這些結構域為構成抗體多肽的基本單元。在人類中，iga及igd同種型含有四條重鏈及四條輕鏈；igg及ige同種型含有兩條重鏈及兩條輕鏈；並且igm同種型含有五條重鏈及五條輕鏈。重鏈c區通常包含一個或多個可負責效應子功能的結構域。重鏈恆定區結構域的數目將取決於同種型。舉例來說，igg重鏈含有三個c區結構域，稱為ch1、ch2及ch3。提供的抗體可具有這些同種型及亞型中的任一種。在本發明的某些實施方案中，抗pcsk9抗體為igg2或igg4亞型。術語「可變區」或「可變域」是指抗體的輕鏈和/或重鏈的一部分，通常包括重鏈中大致氨基端120至130個胺基酸及輕鏈中約100至110個氨基端胺基酸。在某些實施方案中，不同抗體的可變區的胺基酸序列廣泛不同，即便在同一物種的抗體間也是如此。抗體的可變區通常決定具體抗體對其目標的特異性。術語「中和性抗原結合蛋白」或「中和性抗體」分別是指結合配體並且防止或降低那個配體的生物效應的抗原結合蛋白或抗體。這可例如通過直接阻斷配體上的結合位點或通過結合配體並經由間接手段(如使配體發生結構或能量改變)改變配體的結合能力來完成。在一些實施方案中，所述術語還可表示阻止其所結合的蛋白質執行生物功能的抗原結合蛋白。在評估抗原結合蛋白，例如抗體或其免疫功能性片段的結合和/或特異性時，當過量抗體使結合配體的結合配偶體的量降低至少約1-20％、20-30％、30-40％、40-50％、50-60％、60-70％、70-80％、80-85％、85-90％、90-95％、95-97％、97-98％、98-99％或99％以上(如在體外競爭性結合測定中所測量)時，抗體或片段可實質上抑制配體與其結合配偶體的結合。在一些實施方案中，在pcsk9抗原結合蛋白的情況下，所述中和性分子可減弱pcsk9結合ldlr的能力。在一些實施方案中，經由競爭測定來表徵和/或描述中和能力。在一些實施方案中，利用ic50或ec50值描述中和能力。在一些實施方案中，abp27b2、13h1、13b5及3c4為非中和性abp，3b6、9c9及31a4為弱中和劑，並且表2中的其餘abp為強中和劑。在一些實施方案中，抗體或抗原結合蛋白通過結合pcsk9並阻止pcsk9結合ldlr(或降低pcsk9結合ldlr的能力)進行中和。在一些實施方案中，抗體或abp通過結合pcsk9且仍然允許pcsk9結合ldlr由此防止或降低pcsk9介導的ldlr降解來進行中和。因此，在一些實施方案中，中和性abp或抗體可仍然允許pcsk9/ldlr結合，但將防止(或降低)後續涉及pcsk9的ldlr降解。術語「目標」是指能夠由抗原結合蛋白結合的分子或分子的一部分。在某些實施方案中，目標可具有一個或多個表位。在某些實施方案中，目標為抗原。在詞語「抗原結合蛋白」中使用「抗原」僅表示構成抗原的蛋白質序列可由抗體結合。在此情形下，不需要蛋白質為外來的或其能夠誘導免疫反應。術語「競爭」在競爭相同表位的抗原結合蛋白(例如中和性抗原結合蛋白或中和性抗體)的情形下使用時意指抗原結合蛋白之間的競爭，如通過所測試的抗原結合蛋白(例如抗體或其免疫功能性片段)阻止或抑制(例如降低)參照抗原結合蛋白(例如配體或參照抗體)與共同抗原(例如pcsk9或其片段)的特異性結合的測定所測定。眾多類型的競爭性結合測定可用於確定一種抗原結合蛋白是否與另一抗原結合蛋白競爭，例如：固相直接或間接放射免疫測定(ria)；固相直接或間接酶免疫測定(eia)；夾心式競爭測定(參見例如stahli等，1983,methodsinenzymology9:242-253)；固相直接生物素-抗生物素蛋白eia(參見例如kirkland等，1986,j.immunol.137:3614-3619)；固相直接標記測定；固相直接標記夾心式測定(參見例如harlow和lane,1988,antibodies,alaboratorymanual,coldspringharborpress)；使用i-125標記進行的固相直接標記ria(參見例如morel等，1988,molec.immunol.25:7-15)；固相直接生物素-抗生物素蛋白eia(參見例如cheung等，1990,virology176:546-552)；以及直接標記ria(moldenhauer等，1990,scand.j.immunol.32:77-82)。通常，所述測定涉及使用與固體表面或攜帶這些固體表面的任一個的細胞結合的純化的抗原、未標記的測試抗原結合蛋白及標記的參照抗原結合蛋白。通過在測試抗原結合蛋白存在下測定與固體表面或細胞結合的標記的量來測量競爭性抑制。通常所述測試抗原結合蛋白是過量存在的。通過競爭測定鑑定的抗原結合蛋白(競爭性抗原結合蛋白)包括與參照抗原結合蛋白結合相同表位的抗原結合蛋白及結合充分接近由參照抗原結合蛋白結合的表位的鄰近表位以產生位阻的抗原結合蛋白。關於測定競爭性結合的方法的其它詳情提供於本文實施例中。通常，當競爭性抗原結合蛋白過量存在時，其將使參照抗原結合蛋白與共同抗原的特異性結合抑制(例如降低)了至少40-45％、45-50％、50-55％、55-60％、60-65％、65-70％、70-75％或75％或75％以上。在一些情況下，結合抑制了至少80-85％、85-90％、90-95％、95-97％或97％或97％以上。術語「抗原」是指能夠由選擇性結合劑，如抗原結合蛋白(包括例如抗體或其免疫功能性片段)結合的分子或分子的一部分。在一些實施方案中，抗原能夠在動物中用於產生能夠結合那個抗原的抗體。抗原可具有一個或多個能夠與不同抗原結合蛋白(例如抗體)相互作用的表位。術語「表位」包括能夠由抗原結合蛋白(如抗體)結合或結合至t細胞受體的任何決定簇。表位為抗原的由靶向那個抗原的抗原結合蛋白結合的區域，並且當抗原為蛋白質時，包括直接接觸抗原結合蛋白的特定胺基酸。最經常地，表位駐留於蛋白質上，但在一些情況下可駐留於其它種類的分子，如核酸上。表位決定簇可包括分子的化學活性表面群組(如胺基酸、糖側鏈、磷醯基或磺醯基)，且可具有特定三維結構特徵和/或特定電荷特徵。一般來說，對具體目標抗原具有特異性的抗體將優先識別蛋白質和/或大分子的複雜混合物中的目標抗原上的表位。如本文所用，「實質上純的」意指所述分子物質種類為存在的主要物質種類，即以摩爾計，其含量大於同一混合物中的任何其它單個物質種類。在某些實施方案中，實質上純的分子為組合物，其中目標物質種類佔存在的所有大分子物質種類的至少50％(以摩爾計)。在其它實施方案中，實質上純的組合物將佔組合物中存在的所有大分子物質種類的至少80％、85％、90％、95％或99％。在其它實施方案中，目標物質種類被純化以達成基本均質性，其中通過常規檢測方法不能檢測出組合物中有汙染性物質種類且因此組合物是由單一可檢測的大分子物質種類組成。術語「試劑」在本文中用於表示化合物、化合物的混合物、生物大分子或從生物材料製得的提取物。如本文所用，術語「標記」或「標記的」是指併入可檢測的標記物，例如通過併入放射性標記的胺基酸或連接於具有可通過標記的抗生物素蛋白(例如含有可通過光學方法或比色方法檢測的螢光標記物或酶促活性的抗生物素蛋白鏈黴親和素(streptavidin))檢測的生物素部分的多肽。在某些實施方案中，標記或標記物還可具有治療性。標記多肽及糖蛋白的各種方法在本領域中為已知的且可使用。用於多肽的標記的實例包括(但不限於)以下：放射性同位素或放射性核素(例如3h、14c、15n、35s、90y、99tc、111in、125i、131i)、螢光標記(例如fitc、羅丹明、鑭系元素磷光體)、酶標記(例如辣根過氧化物酶、β-半乳糖苷酶、螢光素酶、鹼性磷酸酶)、化學發光標記、生物素基、由二次報導體識別的預定多肽表位(例如，亮氨酸拉鏈對序列、二次抗體的結合位點、金屬結合域、表位標籤)。在某些實施方案中，標記由各種長度的間隔臂連接以降低潛在位阻。如本文所用的術語「生物樣品」包括(但不限於)任何量的來自生物(livingthing)或先前為生物的物質。所述生物包括(但不限於)人類、小鼠、猴、大鼠、兔及其它動物。所述物質包括(但不限於)血液、血清、尿、細胞、器官、組織、骨、骨髓、淋巴結及皮膚。如本文所用的術語「藥物劑組合物」(或藥劑或藥物)是指當適當施用於患者時能夠誘導所要治療效應的化合物、組合物、藥劑或藥物。其不一定需要一種以上類型的成分。術語「治療有效量」是指所確定的可在哺乳動物中產生治療反應的pcsk9抗原結合蛋白的量。所述治療有效量易於由本領域的一般技術人員確定。如本文所用的術語「調節劑」為變化或改變分子的活性或功能的化合物。舉例來說，調節劑可致使分子的某一活性或功能的量值相較於在不存在所述調節劑下所觀測到的活性或功能的量值增加或降低。在某些實施方案中，調節劑為降低分子的至少一種活性或功能的量值的抑制劑。分子的某些示例性活性及功能包括(但不限於)結合親和力、酶促活性及信號轉導。某些示例性抑制劑包括(但不限於)蛋白質、肽、抗體、肽體、碳水化合物或小有機分子。肽體描述於例如美國專利號6,660,843(對應於pct申請號wo01/83525)中。術語「患者」及「受試者」可互換使用且包括人類及非人類動物受試者以及疾病經正式診斷者、疾病未經正式認定者、接受醫學關注者、處於顯現疾病的風險中者等。術語「治療(treat)」及「治療(treatment)」包括治療性治療、防治性治療及降低受試者將顯現疾病的風險或其它風險因素的應用。治療不需要完全治癒疾病並且涵蓋減輕症狀或降低潛伏風險因素的實施方案。術語「預防」不需要100％消除事件的可能性。而是，其表示在化合物或方法的存在下，發生事件的可能性已降低。標準技術可用於重組dna、寡核苷酸合成及組織培養和轉化(例如電穿孔、脂質體轉染)。酶促反應及純化技術可根據製造商說明書或如本領域中通常所完成或如本文所述來執行。前述技術及程序可通常根據本領域中熟知的常規方法且如本說明書通篇所引用及論述的各種一般性及更具體的參考文獻中所述來執行。參見例如sambrook等，molecularcloning:alaboratorymanual(第2版，coldspringharborlaboratorypress,coldspringharbor,n.y.(1989))，其出於任何目的以引用的方式併入本文。除非提供特定定義，否則關於本文所述的分析化學、合成有機化學及醫學及藥物化學使用的命名法及本文所述的分析化學、合成有機化學及醫學及藥物化學的實驗室程序及技術為本領域中熟知的並且通常使用的。標準技術可用於化學合成、化學分析、藥物製備、配製及遞送，以及治療患者。針對pcsk9的抗原結合蛋白前蛋白轉化酶枯草桿菌蛋白酶/kexin型9(pcsk9)為一種牽涉於調控低密度脂蛋白受體(ldlr)蛋白的水平的絲氨酸蛋白酶(horton等，2007；seidah和prat,2007)。pcsk9為絲氨酸蛋白酶的枯草桿菌蛋白酶(s8)家族中的一種前激素-前蛋白轉化酶(seidah等，2003)。示例性的人類pcsk9胺基酸序列呈現為圖1a中的seqidno:1(加下劃線表示蛋白質的「前」結構域)及圖1b中的seqidno:3(用粗體表示信號序列且加下劃線表示前結構域)。示例性的人類pcsk9編碼序列呈現為seqidno:2(圖1b)。如本文所述，pcsk9蛋白還可包括全長pcsk9蛋白的片段。pcsk9蛋白的結構由兩個小組解析(cunningham等，naturestructural&molecularbiology,2007，及piper等，structure,15:1-8,2007)，所述兩篇文獻的全文均以引用的方式併入本文。pcsk9包括信號序列、n端前結構域、枯草桿菌蛋白酶樣催化域及c端結構域。本文提供結合pcsk9(包括人類pcsk9)的抗原結合蛋白(abp)。在一些實施方案中，提供的抗原結合蛋白為包含一個或多個如本文所述的互補決定區(cdr)的多肽。在一些抗原結合蛋白中，cdr包埋入「框架」區中，所述框架區使cdr定向以便達成cdr的適當抗原結合性質。在一些實施方案中，本文提供的抗原結合蛋白可幹擾、阻斷、降低或調節pcsk9與ldlr之間的相互作用。所述抗原結合蛋白表示為「中和性」抗原結合蛋白。在一些實施方案中，pcsk9與ldlr之間的結合仍會發生，即使抗原結合蛋白具有中和性且與pcsk9結合。舉例來說，在一些實施方案中，abp防止或降低pcsk9對ldlr的不利影響而不阻斷pcsk9上的ldlr結合位點。因此，在一些實施方案中，abp調節或改變pcsk9引起ldlr降解的能力，而不必阻止pcsk9與ldlr之間的結合相互作用。所述abp可特別描述為「非競爭性中和性」abp。在一些實施方案中，中和性abp以阻止pcsk9結合ldlr的定位和/或方式結合pcsk9。所述abp可特別描述為「競爭性中和性」abp。以上兩種中和劑均可使受試者中存在更大量的游離ldlr，由此引起更多的ldlr結合ldl(進而降低受試者中的ldl的量)。反過來，這使受試者中存在的血清膽固醇的量降低。在一些實施方案中，本文提供的抗原結合蛋白能夠抑制pcsk9介導的活性(包括結合)。在一些實施方案中，結合這些表位的抗原結合蛋白尤其抑制pcsk9與ldlr之間的相互作用及由pcsk9介導的其它生理效應。在一些實施方案中，抗原結合蛋白為針對pcsk9的人類抗體，如完全人類抗體。在一些實施方案中，abp結合pcsk9的催化域。在一些實施方案中，abp結合成熟形式的pcsk9。在一些實施方案中，abp結合於pcsk9的前結構域中。在一些實施方案中，abp選擇性結合成熟形式的pcsk9。在一些實施方案中，abp以使pcsk9不能結合或不能高效結合ldlr的方式結合催化域。在一些實施方案中，抗原結合蛋白不結合催化域的c端。在一些實施方案中，抗原結合蛋白不結合催化域的n端。在一些實施方案中，abp不結合pcsk9蛋白的n端或c端。在一些實施方案中，abp結合由本文論述的抗體結合的任一表位。在一些實施方案中，這可通過本文公開的抗體與其它抗體之間的競爭測定確定。在一些實施方案中，abp結合由表2中所述的一種抗體結合的表位。在一些實施方案中，抗原結合蛋白結合特定構象狀態的pcsk9以便阻止pcsk9與ldlr相互作用。在一些實施方案中，abp結合pcsk9的v結構域。在一些實施方案中，abp結合pcsk9的v結構域並且阻止(或降低)pcsk9結合ldlr。在一些實施方案中，abp結合pcsk9的v結構域，而其不阻止(或降低)pcsk9結合ldlr，abp防止或降低經由pcsk9介導的對ldlr的不利活性。本文公開的抗原結合蛋白具有多種效用。舉例來說，一些抗原結合蛋白適用於特異性結合測定中、親和純化pcsk9(具體來說人類pcsk9)或其配體及用以鑑定具有pcsk9活性的其它拮抗劑的篩選測定中。一些抗原結合蛋白適用於抑制pcsk9與ldlr的結合，或抑制pcsk9介導的活性。抗原結合蛋白可用於如本文所說明的多種治療性應用中。舉例來說，在一些實施方案中，pcsk9抗原結合蛋白適用於治療與pcsk9相關的病狀，如膽固醇相關疾病(或「血清膽固醇相關疾病」)，如高膽固醇血症，如本文進一步所述。抗原結合蛋白的其它用途包括例如診斷pcsk9相關疾病或病狀及用以確定存在或不存在pcsk9的篩選測定。本文所述的一些抗原結合蛋白適用於治療與pcsk9活性相關的後果、症狀和/或病變。在一些實施方案中，提供的抗原結合蛋白包含一個或多個cdr(例如1個、2個、3個、4個、5個或6個cdr)。在一些實施方案中，抗原結合蛋白包含(a)多肽結構及(b)一個或多個插入和/或連接至所述多肽結構的cdr。多肽結構可採用多種不同形式。舉例來說，其可為或包含天然存在的抗體或其片段或變體的框架，或在本質上可為完全合成的。以下進一步描述各種多肽結構的實例。在某些實施方案中，抗原結合蛋白的多肽結構為抗體或源於抗體，包括(但不限於)單克隆抗體、雙特異性抗體、微型抗體、域抗體、合成抗體(在本文中有時稱為「抗體模擬物」)、嵌合抗體、人源化抗體、抗體融合物(有時稱為「抗體綴合物」)及上述每種抗體各自的部分或片段。在一些情況下，抗原結合蛋白為抗體的免疫片段(例如fab、fab'、f(ab')2或scfv)。本文進一步描述並定義各種結構。本文提供的某些抗原結合蛋白特異性和/或選擇性結合人類pcsk9。在一些實施方案中，抗原結合蛋白特異性和/或選擇性結合具有seqidno:3的殘基153-692和/或由seqidno:3的殘基153-692組成的人類pcsk9蛋白。在一些實施方案中，abp特異性和/或選擇性結合具有seqidno:3的殘基31-152和/或由seqidno:3的殘基31-152組成的人類pcsk9。在一些實施方案中，abp選擇性結合如圖1a中所述的人類pcsk9蛋白(seqidno:1)。在一些實施方案中，抗原結合蛋白特異性結合pcsk9蛋白的至少一個片段和/或有或無信號序列的全長pcsk9蛋白。在抗原結合蛋白用於治療性應用的實施方案中，抗原結合蛋白可抑制、幹擾或調節pcsk9的一或多種生物活性。在一個實施方案中，抗原結合蛋白特異性結合人類pcsk9和/或使人類pcsk9與ldlr的結合大致上抑制了至少約20％-40％、40-60％、60-80％、80-85％或85％以上(例如通過在體外競爭性結合測定中測量結合所得)。本文提供的一些抗原結合蛋白為抗體。在一些實施方案中，abp具有的kd小(結合更緊密)於10-7、10-8、10-9、10-10、10-11、10-12、10-13m。在一些實施方案中，abp阻斷ldlr與pcsk9的結合(d374y，高親和力變體)的ic50為小於1μm、1000nm至100nm、100nm至10nm、10nm至1nm、1000pm至500pm、500pm至200pm、小於200pm、200pm至150pm、200pm至100pm、100pm至10pm、10pm至1pm。本發明的抗pcsk9抗體的igg2重鏈恆定域的一個實例具有如圖3kk的seqidno:154所示的胺基酸序列。本發明的抗pcsk9抗體的igg4重鏈恆定域的一個實例具有如圖3kk的seqidno:155所示的胺基酸序列。抗pcsk9抗體的κ輕鏈恆定域的一個實例具有如圖3kk的seqidno:157所示的胺基酸序列。抗pcsk9抗體的λ輕鏈恆定域的一個實例具有如圖3kk的seqidno:156所示的胺基酸序列。免疫球蛋白鏈的可變區通常展現相同的總體結構，包含相對保守的框架區(fr)由三個高變區(更通常稱為「互補決定區」或cdr)連接。來自以上提及的各重鏈/輕鏈對的兩條鏈的cdr通常由框架區對準以形成與目標蛋白質(例如pcsk9)上的特定表位特異性結合的結構。從n端至c端，天然存在的輕鏈可變區與重鏈可變區兩者通常均遵循這些元件的以下順序：fr1、cdr1、fr2、cdr2、fr3、cdr3及fr4。已設計用於對佔據這些結構域的每一個中的位置的胺基酸指定編號的編號系統。這個編號系統定義於kabatsequencesofproteinsofimmunologicalinterest(1987及1991,nih,bethesda,md)或chothia和lesk,1987,j.mol.biol.196:901-917；chothia等，1989,nature342:878-883中。各種重鏈及輕鏈可變區在本文中提供且描述於圖2a-3jj及3ll-3bbb中。在一些實施方案中，這些可變區各自可連接於以上重鏈及輕鏈恆定區以分別形成完整的抗體重鏈及輕鏈。另外，如此生成的重鏈及輕鏈序列各自可組合以形成完整的抗體結構。提供的抗體的輕鏈及重鏈的一些可變區及其相應胺基酸序列的具體實例概述於表2中。表2：示例性重鏈及輕鏈可變區此外，表2中所列的示例性可變重鏈各自可與表2中所示的任何示例性可變輕鏈組合以形成抗體。表2展示見於本文公開的若干抗體中的示例性輕鏈及重鏈對。在一些情況下，抗體包括來自表2中所列的至少一條可變重鏈及一條可變輕鏈。在其它情況下，抗體含有兩條相同輕鏈及兩條相同重鏈。舉例來說，抗體或抗原結合蛋白可包括一條重鏈及一條輕鏈、兩條重鏈、或兩條輕鏈。在一些實施方案中，抗原結合蛋白包含(和/或由以下組成)來自表2中所列的至少一個序列的1個、2個和/或3個重鏈cdr和/或輕鏈cdr(序列的cdr概述於圖2a-3d、及圖3ccc-3jjj及圖15a-15d中的其它實施方案中)。在一些實施方案中，所有6個cdr(來自輕鏈的cdr1-3(cdrl1、cdrl2、cdrl3)及來自重鏈的cdr1-3(cdrh1、cdrh2及cdrh3))皆為abp的一部分。在一些實施方案中，1個、2個、3個、4個、5個或更多個cdr包括在abp中。在一些實施方案中，來自表2中的序列中的cdr的一個重鏈cdr及一個輕鏈cdr包括在abp中(表2中的序列的cdr概述於圖2a-3d中)。在一些實施方案中，其它區段(例如如圖2a-2d、圖3a-3d以及圖3ccc-3jjj及圖15a-15d中的其它實施方案中所描述)也包括在abp中。表2中指示的重鏈及輕鏈的cdr及fr的實例概述於圖2a-3d(及圖3ccc-3jjj及圖15a-15d中的其它實施方案)中。任選的輕鏈可變序列(包括cdr1、cdr2、cdr3、fr1、fr2、fr3及fr4)可選自以下序列：5、7、9、10、12、13、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、26、28、30、31、32、33、35、36、37、38、39、40、42、44、46、421、425、429、433、437、441、445、449、453、457、461、465、469、473、477、481及485。任選的重鏈可變序列(包括cdr1、cdr2、cdr3、fr1、fr2、fr3及fr4)可選自以下序列：74、85、71、72、67、87、58、52、51、53、48、54、55、56、49、57、50、91、64、62、89、65、79、80、76、77、78、83、69、81、60、419、423、427、431、435、439、443、447、451、455、459、463、467、471、475、479及483。在圖2a-3d中的一些條目中，鑑定cdr及fr的序列的變化或替代性邊界。這些替代物用在abp名稱之後的「v1」加以鑑定。因為大多數這些替代物在性質上為次要的，所以在表中僅顯示具有差異的區段。應了解輕鏈或重鏈的其餘區段與其它圖塊中對於基礎abp所示的相同。因此，舉例來說，圖2c中的19h9v1與圖2a中的19h9具有相同的fr1、cdr1及fr2，唯一差異指示於圖2c中。對於三個核酸序列(abp26e10、30b9及31b12)，其它替代性核酸序列提供於圖中。如本領域技術人員應了解，實際上需要至多一個所述序列用於生成抗體或abp。實際上，在一些實施方案中，僅需要存在特定重鏈或輕鏈核酸中的一個或兩個均無需存在。在一些實施方案中，abp由可編碼表2中的任何蛋白質序列的核酸序列編碼。在一些實施方案中，abp選擇性結合pcsk9的結合ldlr的形式(例如分子的自催化形式)。在一些實施方案中，抗原結合蛋白不結合催化域的c端(例如最c端5.5-10個、10-15個、15-20個、20-25個、25-30個、30-40個胺基酸)。在一些實施方案中，抗原結合蛋白不結合催化域的n端(例如最n端5.5-10個、10-15個、15-20個、20-25個、25-30個、30-40個胺基酸)。在一些實施方案中，abp結合pcsk9的成熟形式的胺基酸1-100內的胺基酸。在一些實施方案中，abp結合以下胺基酸內的胺基酸(和/或由以下胺基酸組成的胺基酸序列)：胺基酸31-100、100-200、31-152、153-692、200-300、300-400、452-683、400-500、500-600、31-692、31-449和/或600-692。在一些實施方案中，abp結合催化域。在一些實施方案中，中和性和/或非中和性abp結合前結構域。在一些實施方案中，abp結合催化域與前結構域兩者。在一些實施方案中，abp結合催化域以便阻隔催化域上與前結構域相互作用的區域。在一些實施方案中，abp結合至催化域中與前結構域相互作用的位置或表面，如piper等(structure15:1-8(2007)，其全文據此以引用的方式併入本文，包括其中的結構表示形式)中所概述。在一些實施方案中，abp結合催化域且限制前結構域的運動性。在一些實施方案中，abp結合催化域而不結合前結構域。在一些實施方案中，abp結合催化域，而不結合前結構域，同時阻止前結構域再定向以允許pcsk9結合ldlr。在一些實施方案中，abp結合於與圍繞piper等中的前結構域的殘基149-152的表位相同的表位中。在一些實施方案中，abp結合v結構域上的凹槽(如piper等中所概述)。在一些實施方案中，abp結合接近v結構域上的凹槽的富含組氨酸的區塊(patch)。在一些實施方案中，(結合v結構域的)所述抗體不具有中和性。在一些實施方案中，結合v結構域的抗體具有中和性。在一些實施方案中，中和性abp阻止pcsk9與ldlr結合。在一些實施方案中，中和性abp儘管防止pcsk9降解ldlr，但不阻止pcsk9與ldlr結合(例如abp31a4)。在一些實施方案中，abp結合或阻斷piper等論文的圖4中所述的至少一個組氨酸。在一些實施方案中，abp阻斷pcsk9中的催化三聯體。在一些實施方案中，相較於野生型pcsk9，抗體選擇性結合變異的pcsk9蛋白(例如d374y)。在一些實施方案中，這些抗體對變體的結合強度為對野生型的結合強度的至少兩倍，且優選對突變體的結合強度為對野生型的結合強度的2-5倍、5-10倍、10-100倍、100-1000倍、1000-10,000倍或10,000倍以上(如經由kd所度量)。在一些實施方案中，相較於野生型pcsk9與ldlr相互作用的能力，抗體選擇性抑制變異的d374ypcsk9與ldlr相互作用。在一些實施方案中，這些抗體對變體結合ldlr的能力的阻斷強度大於對野生型的能力的阻斷強度，例如強度為對野生型的至少兩倍，且優選對突變體的阻斷強度為對野生型的阻斷強度的2-5倍、5-10倍、10-100倍、100-1000倍或1000倍以上(如經由ic50所度量)。在一些實施方案中，抗體以類似程度結合併中和野生型pcsk9與pcsk9的變異形式(如d374y)兩者。在一些實施方案中，抗體結合pcsk9以阻止ldlr的變體結合pcsk9。在一些實施方案中，ldlr的變體與人類ldlr至少50％相同。應注意，ldlr的變體為本領域技術人員所知(例如brownms等，「calciumcages,acidbathsandrecyclingreceptors」nature388:629-630,1997)。在一些實施方案中，abp可提升雜合子家族性高膽固醇血症(其中存在ldlr的功能喪失型變體)中的有效ldlr的水平。在一些實施方案中，abp結合(但不阻斷)與圖1a和/或圖1b中所述的pcsk9形式具有至少50％、50-60％、60-70％、70-80％、80-90％、90-95％、95-99％或99％以上同一性百分比的pcsk9變體。在一些實施方案中，abp結合(但不阻斷)與圖1a和/或圖1b中所述的pcsk9的成熟形式具有至少50％、50-60％、60-70％、70-80％、80-90％、90-95、95-99％或99％以上同一性百分比的pcsk9變體。在一些實施方案中，abp結合併阻止與圖1a和/或圖1b中所述的pcsk9形式具有至少50％、50-60％、60-70％、70-80％、80-90％、90-95％、95-99％或99％以上同一性百分比的pcsk9變體與ldlr相互作用。在一些實施方案中，abp結合併阻止與圖1b中所述的pcsk9的成熟形式具有至少50％、50-60％、60-70、70-80％、80-90％、90-95％、95-99％或99％以上同一性百分比的pcsk9變體與ldlr相互作用。在一些實施方案中，pcsk9的變體為人類變體，如在位置474、e620g和/或e670g處的變體。在一些實施方案中，在位置474處的胺基酸為纈氨酸(如其它人類中)或蘇氨酸(如獼猴及小鼠中)。鑑於本文提供的交叉反應性數據，據信本發明抗體將易於結合以上變體。在一些實施方案中，abp結合由表2中所述的一種抗體結合的表位。在一些實施方案中，抗原結合蛋白結合特定構象狀態的pcsk9以便阻止pcsk9與ldlr相互作用。人源化抗原結合蛋白(例如抗體)如本文所述，針對pcsk9的抗原結合蛋白可包含人源化抗體和/或其部分。所述策略的一項重要實際應用為小鼠體液免疫系統的「人源化」。在某些實施方案中，人源化抗體在人類中實質上無免疫原性。在某些實施方案中，人源化抗體對目標的親和力與來自所述人源化抗體所源於的另一物種的抗體大致上相同。參見例如美國專利5,530,101；美國專利5,693,761；美國專利5,693,762；美國專利5,585,089。在某些實施方案中，鑑定抗體可變域的可被修飾而不減弱抗原結合域的天然親和力，同時降低其免疫原性的胺基酸。參見例如美國專利號5,766,886及5,869,619。在某些實施方案中，通過本領域中已知的方法對抗體進行的修飾通常被設計以達成對目標的結合親和力增加和/或降低抗體在接受者中的免疫原性。在某些實施方案中，人源化抗體被修飾以消除糖基化位點以便增加抗體對其同源抗原的親和力。參見例如co等，mol.immunol.,30:1361-1367(1993)。在某些實施方案中，使用如「重構」、「超嵌合」或「鑲飾/表面重修」的技術產生人源化抗體。參見例如vaswami等，annalsofallergy,asthma,&immunol.81:105(1998)；roguska等，prot.engineer.,9:895-904(1996)；及美國專利號6,072,035。在某些所述實施方案中，所述技術通常通過減少外來殘基的數目來降低抗體免疫原性，但不阻止在重複施用抗體之後的抗獨特型反應及抗異型反應。降低免疫原性的某些其它方法例如描述於gilliland等，j.immunol.,62(6):3663-71(1999)中。在某些情況下，使抗體人源化會導致抗原結合能力損失。在某些實施方案中，人源化抗體被「回復突變」。在某些所述實施方案中，人源化抗體被突變成包括一個或多個見於供體抗體中的胺基酸殘基。參見例如saldanha等，molimmunol36:709-19(1999)。在某些實施方案中，針對pcsk9的抗體的輕鏈及重鏈可變區的互補決定區(cdr)可移植至來自相同或另一物種的框架區(fr)中。在某些實施方案中，針對pcsk9的抗體的輕鏈及重鏈可變區的cdr可移植至共有人類fr中。為生成共有人類fr，在某些實施方案中，比對來自若干人類重鏈或輕鏈胺基酸序列的fr以鑑定共有胺基酸序列。在某些實施方案中，針對pcsk9的抗體的重鏈或輕鏈的fr被來自不同重鏈或輕鏈的fr置換。在某些實施方案中，針對pcsk9的抗體的重鏈及輕鏈的fr中的稀有胺基酸不被置換，而其餘的fr胺基酸被置換。稀有胺基酸為在其通常不見於fr中的位置中的特定胺基酸。在某些實施方案中，來自針對pcsk9的抗體的移植的可變區可與不同於針對pcsk9的抗體的恆定區的恆定區一起使用。在某些實施方案中，移植的可變區為單鏈fv抗體的一部分。cdr移植例如描述於美國專利號6,180,370、6,054,297、5,693,762、5,859,205、5,693,761、5,565,332、5,585,089及5,530,101中及jones等，nature,321:522-525(1986)；riechmann等，nature,332:323-327(1988)；verhoeyen等，science,239:1534-1536(1988)；winter,febsletts.,430:92-94(1998)中，其據此出於任何目的以引用的方式併入本文。人類抗原結合蛋白(例如抗體)如本文所述，結合pcsk9的抗原結合蛋白可包含人類(即完全人類)抗體和/或其部分。在某些實施方案中，提供編碼重鏈及輕鏈免疫球蛋白分子的核苷酸序列及構成重鏈及輕鏈免疫球蛋白分子的胺基酸序列，尤其對應於可變區的序列。在某些實施方案中，提供對應於互補決定區(cdr)的序列，特別是來自cdr1至cdr3的序列。根據某些實施方案，提供表達所述免疫球蛋白分子的雜交瘤細胞系。根據某些實施方案，提供表達所述單克隆抗體的雜交瘤細胞系。在某些實施方案中，雜交瘤細胞系是選自表2中所述的至少一種細胞系，例如21b12、16f12及31h4。在某些實施方案中，提供針對人類pcsk9的純化的人類單克隆抗體。可用人類ig基因座的大片段改造小鼠抗體產生有缺陷的小鼠品系預期使所述小鼠將在不存在小鼠抗體下產生人類抗體。大的人類ig片段可保留大的可變基因多樣性以及對抗體產生及表達的適當調控。通過利用小鼠達成抗體多樣化及選擇以及對人類蛋白質缺乏免疫耐受性的機構，在這些小鼠品系中再生的人類抗體譜系可產生針對任何相關抗原(包括人類抗原)的高親和力完全人類抗體。使用雜交瘤技術，可產生並選擇具有所要特異性的抗原特異性人類mab。某些示例性方法描述於wo98/24893、美國專利號5,545,807、ep546073及ep546073中。在某些實施方案中，可使用來自除人類以外的物種的恆定區以及人類可變區。能夠在酵母人工染色體(yac)中克隆並再構建百萬鹼基大小的人類基因座且將其引入小鼠種系中提供一種闡明極大或粗略定位的基因座的功能性組分以及產生適用的人類疾病模型的方法。此外，利用所述技術使得小鼠基因座被其人類等效物取代可提供對在發育期間人類基因產物的表達及調控、其與其它系統的通訊(communication)、及其在疾病誘發及進展中的牽連的理解。人類抗體避免一些與具有鼠類或大鼠可變區和/或恆定區的抗體相關的問題。存在所述鼠類或大鼠源性蛋白質可導致抗體的快速清除或可導致患者產生針對抗體的免疫反應。為避免利用鼠類或大鼠源性抗體，可經由將功能性人類抗體基因座引入齧齒動物、其它哺乳動物或動物中以使得所述齧齒動物、其它哺乳動物或動物產生完全人類抗體來產生完全人類抗體。人源化抗體為儘管最初開始含有不為人類的抗體胺基酸序列，但這些非人類抗體胺基酸序列中的至少一些已被人類抗體序列置換的那些抗體。這不同於抗體由人類具有的基因編碼(或能夠由其編碼)的人類抗體。抗原結合蛋白變體提供的其它抗體為以上所列的通過表2中所示的可變重鏈及可變輕鏈的組合或子部分形成的abp的變體並且包含各自與表2中的序列的胺基酸序列(整個序列或序列的子部分，例如一個或多個cdr)具有至少50％、50-60％、60-70％、70-80％、80-85％、85-90％、90-95％、95-97％、97-99％或99％以上同一性的可變輕鏈和/或可變重鏈。在一些情況下，所述抗體包括至少一條重鏈及一條輕鏈，而在其它情況下，變異形式含有兩條相同輕鏈及兩條相同重鏈(或其子部分)。在一些實施方案中，圖2a-3d(及圖13a-13j，圖15a-15d以及圖48a和48b中的其它實施方案)中的序列比較可用於通過觀測影響結合的那些變化及似乎不影響結合的那些變化來鑑定可被修飾的抗體區段。舉例來說，通過比較類似序列，可鑑定可被修飾的那些區段(例如具體胺基酸)及可如何對其進行修飾而仍然保留(或改進)abp的功能性。在一些實施方案中，abp的變體包括圖13a、13c、13f、13g、13h、13i、13j和/或48a和48b中所述的那些共有組及序列且在圖中鑑定為可變的位置允許變化。圖13a、13c、13f、13g、48a及48b中所示的cdr是基於chothia方法(基於結構環區的位置，參見例如「standardconformationsforthecanonicalstructuresofimmunoglobulins」,bissanal-lazikani,arthurm.lesk和cyruschothia,journalofmolecularbiology,273(4):927-948,11月7日(1997))與kabat方法(基於序列可變性，參見例如sequencesofproteinsofimmunologicalinterest，第五版nih出版號91-3242,kabat等，(1991))的混合組合加以限定。通過任一種方法確定的各殘基包括在最終cdr殘基清單中(且呈現於圖13a、13c、13f、13g以及48a和48b中)。圖13h、13i及13j中的cdr通過單獨kabat方法獲得。除非另外規定，否則圖13h-13j中的已限定的共有序列、cdr及fr將限定並控制圖13中參照的abp的所指示cdr及fr。在某些實施方案中，抗原結合蛋白包含含有可變區的重鏈，所述可變區包含與選自以下至少一種序列的胺基酸序列至少90％相同的胺基酸序列：seqidno:74、85、71、72、67、87、58、52、51、53、48、54、55、56、49、57、50、91、64、62、89、65、79、80、76、77、78、83、69、81及60。在某些實施方案中，抗原結合蛋白包含含有可變區的重鏈，所述可變區包含與選自以下至少一種序列的胺基酸序列至少95％相同的胺基酸序列：seqidno:74、85、71、72、67、87、58、52、51、53、48、54、55、56、49、57、50、91、64、62、89、65、79、80、76、77、78、83、69、81及60。在某些實施方案中，抗原結合蛋白包含含有可變區的重鏈，所述可變區包含與選自以下至少一種序列的胺基酸序列至少99％相同的胺基酸序列：seqidno:74、85、71、72、67、87、58、52、51、53、48、54、55、56、49、57、50、91、64、62、89、65、79、80、76、77、78、83、69、81及60。在一些實施方案中，抗原結合蛋白包含與來自以下至少一種序列中的cdr的一個或多個cdr至少90％、90-95％和/或95-99％相同的序列：seqidno:74、85、71、72、67、87、58、52、51、53、48、54、55、56、49、57、50、91、64、62、89、65、79、80、76、77、78、83、69、81及60。在一些實施方案中，存在1個、2個、3個、4個、5個或6個cdr(各自與以上序列至少90％、90-95％和/或95-99％相同)。在一些實施方案中，抗原結合蛋白包含與來自以下至少一種序列中的fr的一個或多個fr至少90％、90-95％和/或95-99％相同的序列：seqidno:74、85、71、72、67、87、58、52、51、53、48、54、55、56、49、57、50、91、64、62、89、65、79、80、76、77、78、83、69、81及60。在一些實施方案中，存在1個、2個、3個或4個fr(各自與以上序列至少90％、90-95％和/或95-99％相同)。在某些實施方案中，抗原結合蛋白包含含有可變區的輕鏈，所述可變區包含與選自以下至少一種序列的胺基酸序列至少90％相同的胺基酸序列：seqidno:5、7、9、10、12、13、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、26、28、30、31、32、33、35、36、37、38、39、40、42、44及46。在某些實施方案中，抗原結合蛋白包含含有可變區的輕鏈，所述可變區包含與選自以下至少一種序列的胺基酸序列至少95％相同的胺基酸序列：seqidno:5、7、9、10、12、13、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、26、28、30、31、32、33、35、36、37、38、39、40、42、44及46。在某些實施方案中，抗原結合蛋白包含含有可變區的輕鏈，所述可變區包含與選自以下至少一種序列的胺基酸序列至少99％相同的胺基酸序列：seqidno:5、7、9、10、12、13、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、26、28、30、31、32、33、35、36、37、38、39、40、42、44及46。在一些實施方案中，抗原結合蛋白包含與來自以下至少一種序列中的cdr的一個或多個cdr至少90％、90-95％和/或95-99％相同的序列：seqidno:5、7、9、10、12、13、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、26、28、30、31、32、33、35、36、37、38、39、40、42、44及46。在一些實施方案中，存在1個、2個、3個、4個、5個或6個cdr(各自與以上序列至少90％、90-95％和/或95-99％相同)。在一些實施方案中，抗原結合蛋白包含與來自以下至少一種序列中的fr的一個或多個fr至少90％、90-95％和/或95-99％相同的序列：seqidno:5、7、9、10、12、13、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、26、28、30、31、32、33、35、36、37、38、39、40、42、44及46。在一些實施方案中，存在1個、2個、3個或4個fr(各自與以上序列至少90％、90-95％和/或95-99％相同)。根據本公開，熟練技術人員將能夠使用熟知技術確定如本文闡述的abp的適合變體。在某些實施方案中，本領域技術人員可通過靶向據信對活性不重要的區域來鑑定分子的可被改變而不破壞活性的適合區域。在某些實施方案中，可鑑定分子的在類似多肽之間保守的殘基及部分。在某些實施方案中，甚至可對生物活性或結構來說重要的區域也可經受保守性胺基酸取代而不破壞生物活性或不會不利地影響多肽結構。另外，本領域技術人員可回顧鑑定類似多肽中對活性或結構來說重要的殘基的結構-功能研究。鑑於所述比較，可預測蛋白質中與類似蛋白質中對活性或結構來說重要的胺基酸殘基相對應的胺基酸殘基的重要性。本領域技術人員可選擇化學上類似的胺基酸取代所述被預測為重要的胺基酸殘基。本領域技術人員還可相對於類似abp中的結構分析三維結構及胺基酸序列。鑑於此信息，本領域技術人員可預測抗體的胺基酸殘基相對於所述抗體的三維結構的比對。在某些實施方案中，本領域技術人員可選擇不對預測在蛋白質表面上的胺基酸殘基進行根本變化，因為所述殘基可牽涉於與其它分子的重要相互作用中。此外，本領域技術人員可產生在各所要胺基酸殘基處含有單一胺基酸取代的測試變體。然後可使用本領域技術人員已知的活性測定篩選變體。所述變體可用於收集關於適合變體的信息。舉例來說，如果發現具體胺基酸殘基的變化導致活性受破壞、不合乎需要地降低或不適合，那麼可避免具有所述變化的變體。換句話說，基於從所述常規實驗收集的信息，本領域技術人員可易於確定應避免單獨或與其它突變組合進行進一步取代的胺基酸。許多科學出版物已致力於預測二級結構。參見moultj.,curr.op.inbiotech.,7(4):422-427(1996)；chou等，biochemistry,13(2):222-245(1974)；chou等，biochemistry,113(2):211-222(1974)；chou等，adv.enzymol.relat.areasmol.biol.,47:45-148(1978)；chou等，ann.rev.biochem.,47:251-276及chou等，biophys.j.,26:367-384(1979)。此外，電腦程式當前可用於輔助預測二級結構。一種預測二級結構的方法是基於同源模型化。舉例來說，序列同一性大於30％或類似性大於40％的兩個多肽或蛋白質常具有類似結構拓撲。蛋白質結構資料庫(pdb)的新近發展已提供增強的二級結構可預測性，包括多肽或蛋白質結構內的潛在摺疊數目。參見holm等，nucl.acid.res.,27(1):244-247(1999)。已提出(brenner等，curr.op.struct.biol.,7(3):369-376(1997))，給定多肽或蛋白質中的摺疊數目有限並且一旦已解析臨界數目的結構，結構預測即將變得明顯更準確。預測二級結構的其它方法包括「穿線法(threading)」(jones,d.,curr.opin.struct.biol.,7(3):377-87(1997)；sippl等，structure,4(1):15-19(1996))、「概況分析」(bowie等，science,253:164-170(1991)；gribskov等，meth.enzym.,183:146-159(1990)；gribskov等，proc.nat.acad.sci.usa,84(13):4355-4358(1987))、及「進化關聯(evolutionarylinkage)」(參見holm，同上(1999)及brenner，同上(1997))。在某些實施方案中，抗原結合蛋白變體包括糖基化變體，其中相較於親本多肽的胺基酸序列，糖基化位點的數目和/或類型已經改變。在某些實施方案中，相較於天然蛋白質，蛋白質變體包含更大或更小數目的n-連接的糖基化位點。n-連接的糖基化位點由asn-x-ser或asn-x-thr序列表徵，其中指定為x的胺基酸殘基可為除脯氨酸之外的任何胺基酸殘基。用以生成這個序列的胺基酸殘基的取代提供用於添加n-連接的碳水化合物鏈的潛在新位點。或者，消除這個序列的取代將移除現有n-連接的碳水化合物鏈。還提供n-連接的碳水化合物鏈的重排，其中消除一個或多個n-連接的糖基化位點(通常為天然存在的那些位點)且生成一個或多個新的n-連接位點。其它優選抗體變體包括半胱氨酸變體，其中相較於親本胺基酸序列，一個或多個半胱氨酸殘基缺失或被取代成另一胺基酸(例如絲氨酸)。當抗體如在分離不溶性包涵體之後必須再摺疊成生物活性構象時，半胱氨酸變體可為適用的。半胱氨酸變體通常含有比天然蛋白質少的半胱氨酸殘基，且通常具有偶數個半胱氨酸殘基以使由未配對半胱氨酸所致的相互作用最小。根據某些實施方案，胺基酸取代為以下取代：(1)降低對蛋白水解的敏感性的取代，(2)降低對氧化的敏感性的取代，(3)改變形成蛋白質複合物的結合親和力的取代，(4)改變結合親和力的取代，和/或(4)賦予或改變所述多肽的其它物理化學或功能性質的取代。根據某些實施方案，單一或多個胺基酸取代(在某些實施方案中為保守性胺基酸取代)可於天然存在的序列中進行(在某些實施方案中，在多肽的形成分子間接觸的結構域外部的部分中進行)。在某些實施方案中，保守性胺基酸取代通常不能實質上改變親本序列的結構特徵(例如，置換胺基酸不應傾向於打斷親本序列中存在的螺旋，或破壞表徵親本序列的其它類型的二級結構)。領域公認的多肽二級及三級結構的實例描述於proteins,structuresandmolecularprinciples(creighton編，w.h.freemanandcompany,newyork(1984))；introductiontoproteinstructure(c.branden及j.tooze編，garlandpublishing,newyork,n.y.(1991))；及thornton等，nature,354:105(1991)中，其各自以引用的方式併入本文。在一些實施方案中，變體為本文公開的abp的核酸序列的變體。本領域技術人員應了解以上論述可用於鑑定、評價及/產生abp蛋白質變體以及用於可編碼那些蛋白質變體的核酸序列。因此，涵蓋編碼那些蛋白質變體的核酸序列(以及編碼表2中的abp但不同於本文明確公開的核酸序列)。舉例來說，abp變體可與seqidno:152、153、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151中所述的至少一個核酸序列或由seqidno:152、153、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150及151中的核酸序列編碼的至少一至六個(及其各種組合)cdr具有至少80％、80-85％、85-90％、90-95％、95-97％、97-99％或99％以上同一性。在一些實施方案中，如果編碼特定abp的核酸序列(或核酸序列本身)可在嚴格條件下與編碼表2中的蛋白質的任何核酸序列(如(但不限於)seqidno:152、153、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150及151)選擇性雜交，那麼抗體(或編碼其的核酸序列)為變體。在一個實施方案中，適合的中等嚴格條件包括於5×ssc；0.5％sds；1.0mmedta(ph8:0)中預洗滌；用5×ssc在50℃-65℃下雜交過夜或如果存在交叉物種同源性，那麼用0.5×ssc在45℃下雜交；隨後在65℃下持續20分鐘用含有0.1％sds的2×ssc、0.5×ssc及0.2×ssc的每一種洗滌兩次。所述雜交dna序列也在本發明的範圍內，歸因於密碼簡併性，編碼由雜交dna序列編碼的抗體多肽的核苷酸序列及由這些核酸序列編碼的胺基酸序列也在本發明的範圍內。在一些實施方案中，cdr的變體包括與以上指示的序列內的一個或多個cdr(單個cdr可易於根據圖2a-3d及圖3ccc-3jjj及圖15a-15d中的其它實施方案確定)雜交的核酸序列及由那些序列編碼的胺基酸序列。在此情形下提及的詞語「選擇性雜交」意指可檢測及選擇性地結合。本發明的聚核苷酸、寡核苷酸及其片段在使與非特異性核酸的可檢測結合的可觀量最小的雜交及洗滌條件下與核酸鏈選擇性雜交。高嚴格性條件可用於實現如本領域中已知及本文論述的選擇性雜交條件。一般來說，本發明的聚核苷酸、寡核苷酸及片段與相關核酸序列之間的核酸序列同源性將為至少80％，且更通常具有優選遞增的同源性，即至少85％、90％、95％、99％及100％。如果兩個胺基酸序列之間存在部分或完全同一性，那麼這兩個胺基酸序列是同源的。舉例來說，85％同源性意指當比對兩個序列以達成最大匹配時，有85％的胺基酸相同。在最大化匹配中允許存在空位(在所匹配的兩個序列的任一個中)；空位長度優選為5或5以下，其中2或2以下更優選。或者並且優選地，使用具有突變數據矩陣的程序align及6或6以上的空位罰分，如果兩個蛋白質序列(或源於其的長度為至少30個胺基酸的多肽序列)具有5以上的比對分值(以標準偏差單位計)，那麼其為同源的，如此術語在本文中所使用。參見dayhoff,m.o.,atlasofproteinsequenceandstructure，第101-110頁(第5卷，nationalbiomedicalresearchfoundation(1972))及此卷的增刊2，第1-10頁。更優選地，當使用align程序進行最佳比對時，如果兩個序列或其部分的胺基酸同一性大於或等於50％，那麼這兩個序列或其部分同源。術語「對應於」在本文中用於意指聚核苷酸序列與參照聚核苷酸序列的全部或一部分同源(即，是相同的，不是嚴格地進化相關)，或意指多肽序列與參照多肽序列相同。相比而言，術語「與…互補」在本文中用於意指互補序列與參照聚核苷酸序列的全部或一部分同源。舉例來說，核苷酸序列「tatac」對應於參照序列「tatac」並且與參照序列「gtata」互補。製備抗原結合蛋白(例如抗體)在某些實施方案中，抗原結合蛋白(如抗體)是通過用抗原(例如pcsk9)進行免疫而產生的。在某些實施方案中，抗體可通過用全長pcsk9、可溶形式的pcsk9、單獨催化域、圖1a中所示的成熟形式的pcsk9、剪接變異形式的pcsk9或其片段進行免疫而產生。在某些實施方案中，本發明抗體可為多克隆或單克隆抗體，和/或可為重組抗體。在某些實施方案中，本發明抗體為例如通過對能夠產生人類抗體的轉基因動物進行免疫所製備的人類抗體(參見例如pct公布的申請號w093/12227)。在某些實施方案中，某些策略可用於操縱抗體的固有性質，如抗體對其目標的親和力。所述策略包括(但不限於)使用編碼抗體的聚核苷酸分子的位點特異性突變發生或隨機突變發生以生成抗體變體。在某些實施方案中，所述生成之後篩選展現所要變化，例如親和力增加或減小的抗體變體。在某些實施方案中，突變發生策略中所靶向的胺基酸殘基為cdr中的那些胺基酸殘基。在某些實施方案中，靶向可變域的框架區中的胺基酸。在某些實施方案中，所述框架區已顯示有助於某些抗體的目標結合性質。參見例如hudson,curr.opin.biotech.,9:395-402(1999)及其中的參考文獻。在某些實施方案中，較小且更有效篩選的抗體變體文庫是通過將隨機或定點突變發生限制於cdr中的高突變位點而產生，所述位點為對應於在體細胞親和力成熟過程期間傾向於突變的區域的位點。參見例如chowdhury和pastan,naturebiotech.,17:568-572(1999)及其中的參考文獻。在某些實施方案中，某些類型的dna元件可用於鑑定高突變位點，包括(但不限於)某些直接及反向重複序列、某些共有序列、某些二級結構及某些迴文序列。舉例來說，可用於鑑定高突變位點的所述dna元件包括(但不限於)依次包含嘌呤(a或g)、鳥嘌呤(g)、嘧啶(c或t)、腺苷或胸苷(a或t)的四鹼基序列(即a/g-g-c/t-a/t)。可用於鑑定高突變位點的dna元件的另一實例為絲氨酸密碼子a-g-c/t。製備完全人類abp(例如抗體)在某些實施方案中，使用噬菌體展示技術來生成單克隆抗體。在某些實施方案中，所述技術產生完全人類單克隆抗體。在某些實施方案中，編碼單一fab或fv抗體片段的聚核苷酸在噬菌體粒子的表面上表達。參見例如hoogenboom等，j.mol.biol.,227:381(1991)；marks等，jmolbiol222:581(1991)；美國專利號5,885,793。在某些實施方案中，「篩選」噬菌體以鑑定對目標具有親和力的那些抗體片段。因此，某些所述過程經由在絲狀噬菌體的表面上展示抗體片段譜系，且隨後根據噬菌體與目標的結合選擇噬菌體來模擬免疫選擇。在某些所述程序中，分離高親和力的功能性中和性抗體片段。在某些所述實施方案(以下更詳細地論述)中，通過從外周血淋巴細胞克隆天然重排的人類v基因來生成人類抗體的完整基因譜系。參見例如mullinax等，procnatlacadsci(usa),87:8095-8099(1990)。根據某些實施方案，利用轉基因小鼠製備本發明抗體，所述轉基因小鼠已嵌入相當多部分的產生人類抗體的基因組但在內源性鼠類抗體的生產上有缺陷。所述小鼠因而能夠產生人類免疫球蛋白分子及抗體且在鼠類免疫球蛋白分子及抗體的生產上有缺陷。用於達成這個結果的技術公開於本文說明書中公開的專利、申請及參考文獻中。在某些實施方案中，可採用如pct公布申請號wo98/24893或mendez等，naturegenetics,15:146-156(1997)中公開的方法，所述申請及文獻據此出於任何目的以引用的方式併入本文。一般來說，對pcsk9具有特異性的完全人類單克隆abp(例如抗體)可如下產生。用相關抗原(例如pcsk9)免疫接種含有人類免疫球蛋白基因的轉基因小鼠，從所述小鼠獲得表達抗體的淋巴細胞(如b細胞)。所述回收的細胞與骨髓型細胞系融合，以製備永生雜交瘤細胞系，且篩選並選擇所述雜交瘤細胞系，以鑑定產生對相關抗原具有特異性的抗體的雜交瘤細胞系。在某些實施方案中，提供可產生對pcsk9具有特異性的抗體的雜交瘤細胞系的製法。在某些實施方案中，通過在體外將人類脾細胞(b細胞或t細胞)暴露於抗原，接著將暴露的細胞於免疫功能受損的小鼠(例如scid或nod/scid)中重建，來產生完全人類抗體。參見例如brams等，j.immunol.160:2051-2058(1998)；carballido等，nat.med.,6:103-106(2000)。在某些所述方法中，將人類胎兒組織移植入scid小鼠(scid-hu)中會引起長期血細胞生成及人類t細胞發育。參見例如mccune等，science,241:1532-1639(1988)；ifversen等，sem.immunol.,8:243-248(1996)。在某些情況下，所述嵌合小鼠中的體液免疫反應依賴於動物中人類t細胞的共同發育。參見例如martensson等，immunol.,83:1271-179(1994)。在某些方法中，將人類外周血淋巴細胞移植入scid小鼠中。參見例如mosier等，nature,335:256-259(1988)。在某些所述實施方案中，當所述移植細胞用致敏劑(primingagent)(如葡萄球菌腸毒素a(sea))或抗人類cd40單克隆抗體處理時，檢測到更高的b細胞產量。參見例如martensson等，immunol.,84:224-230(1995)；murphy等，blood,86:1946-1953(1995)。因此，在某些實施方案中，完全人類抗體可通過在宿主細胞中表達重組dna或通過在雜交瘤細胞中表達來產生。在其它實施方案中，可使用本文所述的噬菌體展示技術產生抗體。經由利用如本文所述的技術製備本文所述的抗體。所述小鼠因而能夠產生人類免疫球蛋白分子及抗體且在鼠類免疫球蛋白分子及抗體的產生上有缺陷。用於達成上述目的的技術公開於本文背景章節中公開的專利、申請及參考文獻中。然而，具體來說，轉基因產生小鼠及由其產生抗體的一個優選實施方案公開於以下文獻中：1996年12月3日提交的美國專利申請號08/759,620及1998年6月11日公布的國際專利申請號wo98/24893及2000年12月21日公布的wo00/76310中，其公開據此以引用的方式併入本文。還參見mendez等，naturegenetics,15:146-156(1997)，其公開據此以引用的方式併入本文。經由使用所述技術，已產生針對多種抗原的完全人類單克隆抗體。基本上，小鼠的品系用相關抗原(例如pcsk9)免疫，從超免疫的小鼠回收淋巴細胞(如b細胞)，且使回收的淋巴細胞與骨髓型細胞系融合以製備永生雜交瘤細胞系。篩選並選擇這些雜交瘤細胞系以鑑定產生對相關抗原具有特異性的抗體的雜交瘤細胞系。本文提供產生會產生對pcsk9具有特異性的抗體的多個雜交瘤細胞系的方法。另外，本文提供對由所述細胞系產生的抗體的表徵，包括所述抗體的重鏈及輕鏈的核苷酸及胺基酸序列分析。小鼠的品系的產生進一步論述及描述於以下文獻中：1990年1月12日提交的美國專利申請號07/466,008、1990年11月8日提交的美國專利申請號07/610,515、1992年7月24日提交的美國專利申請號07/919,297、1992年7月30日提交的美國專利申請號07/922,649、1993年3月15日提交的美國專利申請號08/031,801、1993年8月27日提交的美國專利申請號08/112,848、1994年4月28日提交的美國專利申請號08/234,145、1995年1月20日提交的美國專利申請號08/376,279、1995年4月27日提交的美國專利申請號08/430,938、1995年6月5日提交的美國專利申請號08/464,584、1995年6月5日提交的美國專利申請號08/464,582、1995年6月5日提交的美國專利申請號08/463,191、1995年6月5日提交的美國專利申請號08/462,837、1995年6月5日提交的美國專利申請號08/486,853、1995年6月5日提交的美國專利申請號08/486,857、1995年6月5日提交的美國專利申請號08/486,859、1995年6月5日提交的美國專利申請號08/462,513、1996年10月2日提交的美國專利申請號08/724,752、1996年12月3日提交的美國專利申請號08/759,620、2001年11月30日提交的美國公布2003/0093820以及美國專利號6,162,963、6,150,584、6,114,598、6,075,181及5,939,598、以及日本專利號3068180b2、3068506b2及3068507b2。還參見1996年6月12日授權公布的歐洲專利號ep0463151b1、1994年2月3日公布的國際專利申請號wo94/02602、1996年10月31日公布的國際專利申請號wo96/34096、1998年6月11日公開的wo98/24893、2000年12月21日公布的wo00/76310。以上引用的專利、申請及參考文獻各自的公開據此以全文引用的方式併入本文。在一種替代性方法中，包括genpharminternational,inc.在內的其他人利用「小基因座(minilocus)」方法。在小基因座方法中，經由納入來自ig基因座的片段(單個基因)來模擬外源性ig基因座。因此，一個或多個vh基因、一個或多個dh基因、一個或多個jh基因、μ恆定區及通常第二恆定區(優選γ恆定區)形成為插入動物中的構建體。這個方法描述於以下文獻中：屬於surani等的美國專利號5,545,807；及皆屬於lonberg和kay的美國專利號5,545,806、5,625,825、5,625,126、5,633,425、5,661,016、5,770,429、5,789,650、5,814,318、5,877,397、5,874,299及6,255,458；屬於krimpenfort和berns的美國專利號5,591,669及6,023.010；屬於berns等的美國專利號5,612,205、5,721,367及5,789,215；以及屬於choi和dunn的美國專利號5,643,763；及1990年8月29日提交的genpharm國際美國專利申請號07/574,748、1990年8月31日提交的07/575,962、1991年12月17日提交的07/810,279、1992年3月18日提交的07/853,408、1992年6月23日提交的07/904,068、1992年12月16日提交的07/990,860、1993年4月26日提交的08/053,131、1993年7月22日提交的08/096,762、1993年11月18日提交的08/155,301、1993年12月3日提交的08/161,739、1993年12月10日提交的08/165,699、1994年3月9日提交的08/209,741，其公開據此以引用的方式併入本文。還參見歐洲專利號0546073b1、國際專利申請號wo92/03918、wo92/22645、wo92/22647、wo92/22670、wo93/12227、wo94/00569、wo94/25585、wo96/14436、wo97/13852及wo98/24884及美國專利號5,981,175，其公開據此以全文引用的方式併入本文。進一步參見taylor等，1992；chen等，1993；tuaillon等，1993；choi等，1993；lonberg等，(1994)；taylor等，(1994)；及tuaillon等，(1995)；fishwild等，(1996)，其公開據此以全文引用的方式併入本。kirin也已證明可由已經由微細胞融合引入染色體的較大片段或整個染色體的小鼠生成人類抗體。參見歐洲專利申請號773288及843961，其公開據此以引用的方式併入本文。另外，已產生kmtm小鼠，其為kirin的tc小鼠與medarex的小基因座(humab)小鼠雜交育種的結果。這些小鼠具有kirin小鼠的人類igh轉染色體及genpharm小鼠的κ鏈轉基因(ishida等，cloningstemcells,(2002)4:91-102)。人類抗體還可通過體外方法獲得。適合實例包括(但不限於)噬菌體展示(cat、morphosys、dyax、biosite/medarex、xoma、symphogen、alexion(先前為proliferon)、affimed)、核糖體展示(cat)、酵母展示及類似方法。在一些實施方案中，本文所述的抗體具有人類igg4重鏈以及igg2重鏈。抗體也可為其它人類同種型，包括igg1。抗體具有高親和力，當通過各種技術測量時，通常具有約10-6至約10-13m或10-13m以下的kd。如應了解，抗體可於除雜交瘤細胞系以外的細胞系中表達。編碼特定抗體的序列可用於轉化適合的哺乳動物宿主細胞。可通過將聚核苷酸引入宿主細胞中的任何已知方法進行轉化，包括例如將聚核苷酸包裝於病毒中(或包裝於病毒載體中)並且用病毒(或載體)或通過本領域中已知的轉染程序轉導宿主細胞，如美國專利號4,399,216、4,912,040、4,740,461及4,959,455所例示(所述專利據此以引用的方式併入本文)。所用轉化程序取決於有待轉化的宿主。用於將異源聚核苷酸引入哺乳動物細胞中的方法在本領域中為熟知的且包括葡聚糖介導的轉染、磷酸鈣沈澱、凝聚胺介導的轉染、原生質體融合、電穿孔、將聚核苷酸囊封於脂質體中以及將dna直接顯微注射於核中。可用作供表達用的宿主的哺乳動物細胞系在本領域中為熟知的且包括許多可自美國模式培養物保藏所(americantypeculturecollection，atcc)獲得的永生化細胞系，包括(但不限於)中國倉鼠卵巢(cho)細胞、hela細胞、幼小倉鼠腎(bhk)細胞、猴腎細胞(cos)、人類肝細胞癌細胞(例如hepg2)、人類上皮腎293細胞以及許多其它細胞系。經由確定哪些細胞系具有高表達水平並且產生具有組成性pcsk9結合性質的抗體來選擇特別優選的細胞系。在某些實施方案中，通過至少一種以下雜交瘤產生抗體和/或abp：21b12、31h4、16f12、表2中列出或實施例中公開的任何其它雜交瘤。在某些實施方案中，抗原結合蛋白結合pcsk9的解離常數(kd)為小於約1nm，例如1000pm至100pm、100pm至10pm、10pm至1pm、和/或1pm至0.1pm或0.1pm以下。在某些實施方案中，抗原結合蛋白包含以下至少一種同種型的免疫球蛋白分子：igg1、igg2、igg3、igg4、ige、iga、igd及igm同種型。在某些實施方案中，抗原結合蛋白包含人類κ輕鏈和/或人類重鏈。在某些實施方案中，重鏈為igg1、igg2、igg3、igg4、ige、iga、igd或igm同種型。在某些實施方案中，抗原結合蛋白已被克隆以便在哺乳動物細胞中表達。在某些實施方案中，抗原結合蛋白包含除以下同種型的任一個恆定區以外的恆定區：igg1、igg2、igg3、igg4、ige、iga、igd及igm同種型。在某些實施方案中，抗原結合蛋白包含人類λ輕鏈及人類igg2重鏈。在某些實施方案中，抗原結合蛋白包含人類λ輕鏈及人類igg4重鏈。在某些實施方案中，抗原結合蛋白包含人類λ輕鏈及人類igg1、igg3、ige、iga、igd或igm重鏈。在其它實施方案中，抗原結合蛋白包含人類κ輕鏈及人類igg2重鏈。在某些實施方案中，抗原結合蛋白包含人類κ輕鏈及人類igg4重鏈。在某些實施方案中，抗原結合蛋白包含人類κ輕鏈及人類igg1、igg3、ige、iga、igd或igm重鏈。在某些實施方案中，抗原結合蛋白包含抗體的可變區連接於既不為igg2同種型的恆定區也不為igg4同種型的恆定區的恆定區。在某些實施方案中，抗原結合蛋白已被克隆以便在哺乳動物細胞中表達。在某些實施方案中，對來自雜交瘤株系21b12、31h4及16f12中的至少一種的抗體的重鏈及輕鏈進行保守性修飾(及對編碼核苷酸進行相應修飾)將產生功能及化學特徵類似於來自雜交瘤株系21b12、31h4及16f12的抗體的針對pcsk9的抗體。相反，在某些實施方案中，針對pcsk9的抗體的功能和/或化學特徵的實質性修飾可通過選擇重鏈及輕鏈的胺基酸序列中的取代來實現，所述取代對維持(a)取代區域中的分子骨架的結構，例如呈薄片或螺旋構象；(b)分子在目標位點處的電荷或疏水性；或(c)側鏈體積的影響顯著不同。舉例來說，「保守性胺基酸取代」可涉及用非天然殘基取代天然胺基酸殘基以使對那個位置處的胺基酸殘基的極性或電荷具有極少影響或無影響。此外，多肽中的任何天然殘基還可被丙氨酸取代，如先前對於「丙氨酸掃描突變發生」所述。所要胺基酸取代(無論保守或非保守)可由本領域技術人員在需要所述取代時確定。在某些實施方案中，胺基酸取代可用於鑑定針對pcsk9的抗體的重要殘基或增加或減小如本文所述的抗體對pcsk9的親和力。在某些實施方案中，本發明抗體可於除雜交瘤細胞系以外的細胞系中表達。在某些實施方案中，編碼特定抗體的序列可用於轉化適合的哺乳動物宿主細胞。根據某些實施方案，可通過將聚核苷酸引入宿主細胞中的任何已知方法進行轉化，包括例如將聚核苷酸包裝於病毒中(或包裝於病毒載體中)且用病毒(或載體)或通過本領域中已知的轉染程序轉導宿主細胞，如美國專利號4,399,216、4,912,040、4,740,461及4,959,455所例示(所述專利據此出於任何目的以引用的方式併入本文)。在某些實施方案中，所用轉化程序可取決於有待轉化的宿主。用於將異源聚核苷酸引入哺乳動物細胞中的方法在本領域中為熟知的並且包括(但不限於)葡聚糖介導的轉染、磷酸鈣沈澱、凝聚胺介導的轉染、原生質體融合、電穿孔、將聚核苷酸囊封於脂質體中以及將dna直接顯微注射於核中。可用作供表達用的宿主的哺乳動物細胞系在本領域中為熟知的且包括(但不限於)許多可從美國模式培養物保藏所(atcc)獲得的永生化細胞系，包括(但不限於)中國倉鼠卵巢(cho)細胞、hela細胞、幼小倉鼠腎(bhk)細胞、猴腎細胞(cos)、人類肝細胞癌細胞(例如hepg2)及許多其它細胞系。在某些實施方案中，可經由確定哪些細胞系具有高表達水平且產生具有組成性hgf結合性質的抗體來選擇細胞系。適用於哺乳動物宿主細胞的表達載體為熟知的。在某些實施方案中，抗原結合蛋白包含一種或多種多肽。在某些實施方案中，多種表達載體/宿主系統的任一種可用於表達編碼包含一種或多種abp組分或abp本身的多肽的聚核苷酸分子。所述系統包括(但不限於)微生物，如用重組噬菌體、質粒或粘質粒dna表達載體轉化的細菌；用酵母表達載體轉化的酵母；用病毒表達載體(例如杆狀病毒)感染的昆蟲細胞系統；用病毒表達載體(例如花椰菜嵌紋病毒(cauliflowermosaicvirus)、camv、菸草嵌紋病毒(tobaccomosaicvirus)tmv)轉染或用細菌表達載體(例如ti或pbr322質粒)轉化的植物細胞系統；或動物細胞系統。在某些實施方案中，包含一種或多種abp組分或abp本身的多肽於酵母中重組表達。某些所述實施方案遵循製造商說明書使用可商購獲得的表達系統，例如畢赤酵母表達系統(invitrogen,sandiego,ca)。在某些實施方案中，所述系統依賴於前原α序列來指導分泌。在某些實施方案中，插入物的轉錄是由醇氧化酶(aox1)啟動子在由甲醇誘導後驅動。在某些實施方案中，包含一種或多種abp組分或abp本身的分泌型多肽是從酵母生長培養基中純化的。在某些實施方案中，用於從酵母生長培養基中純化多肽的方法與用於從細菌及哺乳動物細胞上清液中純化多肽的方法相同。在某些實施方案中，將編碼包含一種或多種abp組分或abp本身的多肽的核酸克隆入杆狀病毒表達載體，如pvl1393(pharmingen,sandiego,ca)。在某些實施方案中，所述載體可根據製造商說明書(pharmingen)用於在sf9無蛋白質培養基中感染草地粘蟲(spodopterafrugiperda)細胞並且產生重組多肽。在某些實施方案中，使用肝素-瓊脂糖管柱(pharmacia)從所述培養基純化並濃縮多肽。在某些實施方案中，包含一種或多種abp組分或abp本身的多肽於昆蟲系統中表達。用於多肽表達的某些昆蟲系統為本領域技術人員所熟知。在一個所述系統中，加洲苜蓿夜蛾核型多角體病毒(autographacalifornicanuclearpolyhedrosisvirus，acnpv)用作在草地粘蟲細胞中或在粉紋夜蛾(trichoplusia)幼蟲中表達外來基因的載體。在某些實施方案中，編碼多肽的核酸分子可插入病毒的非必需基因中，例如插入多角體蛋白(polyhedrin)基因內，且置於啟動子對那個基因的控制下。在某些實施方案中，成功插入核酸分子將致使非必需基因不活化。在某些實施方案中，那種不活化會產生可檢測的特徵。舉例來說，多角體蛋白基因的不活化導致產生的病毒缺乏外殼蛋白。在某些實施方案中，重組病毒可用於感染草地粘蟲細胞或粉紋夜蛾幼蟲。參見例如smith等，j.virol.,46:584(1983)；engelhard等，proc.nat.acad.sci.(usa),91:3224-7(1994)。在某些實施方案中，於細菌細胞中製備的包含一種或多種abp組分或abp本身的多肽在細菌中以不溶性包涵體形式產生。在某些實施方案中，包含所述包涵體的宿主細胞通過離心來收集；於0.15mnacl、10mmtris(ph8)、1mmedta中洗滌；且用0.1mg/ml溶菌酶(sigma,st.louis,mo)在室溫下處理15分鐘。在某些實施方案中，通過超聲處理使溶解產物澄清，且通過在12,000×g下離心10分鐘來沉澱細胞碎片。在某些實施方案中，將含有多肽的沉澱重懸於50mmtris(ph8)及10mmedta中；經50％甘油層化；且在6000×g下離心30分鐘。在某些實施方案中，那個沉澱可重懸於不含mg++及ca++的標準磷酸鹽緩衝鹽水溶液(pbs)中。在某些實施方案中，通過使重懸的沉澱於變性sds聚丙烯醯胺凝膠中份化來進一步純化多肽(參見例如sambrook等，同上)。在某些實施方案中，所述凝膠可浸泡於0.4mkcl中以觀測蛋白質，其可被切除並於缺乏sds的凝膠操作緩衝液中進行電洗脫。根據某些實施方案，穀胱甘肽-s-轉移酶(gst)融合蛋白於細菌中以可溶性蛋白質形式產生。在某些實施方案中，使用gst純化組件(pharmacia)純化所述gst融合蛋白。在某些實施方案中，需要「再摺疊」某些多肽，例如包含一種或多種abp組分或abp本身的多肽。在某些實施方案中，所述多肽是使用本文論述的某些重組系統產生。在某些實施方案中，多肽被「再摺疊」和/或氧化以形成所要三級結構和/或生成二硫鍵。在某些實施方案中，所述結構和/或鍵與多肽的某一生物活性相關。在某些實施方案中，再摺疊是使用本領域中已知的許多程序中的任一種完成。示例性方法包括(但不限於)在離液劑存在下將溶解的多肽試劑暴露於通常超過7的ph下。一種示例性離液劑為胍。在某些實施方案中，再摺疊/氧化溶液還含有還原劑及那種還原劑的氧化形式。在某些實施方案中，還原劑及其氧化形式以將產生允許進行二硫化物改組的特定氧化還原電位的比率存在。在某些實施方案中，所述改組允許形成半胱氨酸橋。示例性氧化還原偶包括(但不限於)半胱氨酸/胱胺、穀胱甘肽/二硫基雙gsh、氯化銅、二硫蘇糖醇dtt/二噻烷dtt、及2-巰基乙醇(bme)/二硫-bme。在某些實施方案中，使用共溶劑來提高再摺疊效率。示例性共溶劑包括(但不限於)甘油、各種分子量的聚乙二醇、及精氨酸。在某些實施方案中，實質上純化包含一種或多種abp組分或abp本身的多肽。某些蛋白質純化技術為本領域技術人員所知。在某些實施方案中，蛋白質純化涉及多肽部分與非多肽部分的粗略份化。在某些實施方案中，使用色譜和/或電泳技術純化多肽。示例性純化方法包括(但不限於)用硫酸銨沉澱；用peg沉澱；免疫沉澱；熱變性之後離心；色譜，包括(但不限於)親和色譜(例如蛋白質-a-瓊脂糖)、離子交換色譜、排阻色譜及逆相色譜；凝膠過濾；羥基磷灰石色譜；等電聚焦；聚丙烯醯胺凝膠電泳；以及所述及其它技術的組合。在某些實施方案中，通過快速蛋白質液相色譜或通過高壓液相色譜(hplc)純化多肽。在某些實施方案中，純化步驟可加以變化或某些步驟可省略，並且仍然獲得適於製備實質上純化的多肽的方法。在某些實施方案中，定量多肽製劑的純化程度。定量純化程度的某些方法為本領域技術人員所知。某些示例性方法包括(但不限於)通過sds/page分析測定製劑的特異性結合活性並評估製劑內的多肽的量。用於評估多肽製劑的純化量的某些示例性方法包括計算製劑的結合活性並將其與初始提取物的結合活性比較。在某些實施方案中，所述計算的結果表述為「純化倍數」。用於表示結合活性的量的單位取決於所進行的具體測定。在某些實施方案中，部分純化包含一種或多種abp組分或abp本身的多肽。在某些實施方案中，部分純化可通過使用較少的純化步驟或通過利用相同的通用純化方案的不同形式來完成。舉例來說，在某些實施方案中，利用hplc裝置進行的陽離子交換管柱色譜將通常產生大於利用低壓色譜系統的相同技術的「純化倍數」。在某些實施方案中，產生較低純化程度的方法可在多肽的總回收率或維持多肽的結合活性方面具有優勢。在某些情況下，多肽的電泳遷移在不同sds/page條件下有時可顯著不同。參見例如capaldi等，biochem.biophys.res.comm.,76:425(1977)。應了解在不同電泳條件下，純化或部分純化的多肽的表觀分子量可不同。示例性表位提供抗pcsk9抗體所結合的表位。在一些實施方案中，由當前公開的抗體結合的表位特別適用。在一些實施方案中，結合由本文所述的抗體結合的任何表位的抗原結合蛋白為適用的。在一些實施方案中，由表2及圖2和圖3中列出的任何抗體結合的表位尤其適用。在一些實施方案中，表位在pcsk9催化域上。在某些實施方案中，pcsk9表位可用於阻止(例如降低)抗pcsk9抗體或抗原結合蛋白與pcsk9的結合。在某些實施方案中，pcsk9表位可用於降低抗pcsk9抗體或抗原結合蛋白與pcsk9的結合。在某些實施方案中，pcsk9表位可用於實質上抑制抗pcsk9抗體或抗原結合蛋白與pcsk9的結合。在某些實施方案中，pcsk9表位可用於分離結合pcsk9的抗體或抗原結合蛋白。在某些實施方案中，pcsk9表位可用於產生結合pcsk9的抗體或抗原結合蛋白。在某些實施方案中，pcsk9表位或包含pcsk9表位的序列可用作產生結合pcsk9的抗體或抗原結合蛋白的免疫原。在某些實施方案中，pcsk9表位可向動物施用，隨後可從所述動物獲得結合pcsk9的抗體。在某些實施方案中，pcsk9表位或包含pcsk9表位的序列可用於幹擾正常pcsk9介導的活性，如pcsk9與ldlr的締合。在一些實施方案中，本文公開的抗原結合蛋白特異性結合n端前結構域、枯草桿菌蛋白酶樣催化域和/或c端結構域。在一些實施方案中，抗原結合蛋白結合pcsk-9的底物結合凹槽(於cunningham等中描述，所述文獻以引用的方式整體併入本文)。在一些實施方案中，含有與抗體接觸或由抗體嵌埋的殘基的結構域/區域可通過使pcsk9(例如野生型抗原)中的特定殘基突變並確定抗原結合蛋白是否可結合突變的或變異的pcsk9蛋白來鑑定。通過進行許多單個突變，可鑑定在結合中起直接作用或足夠緊靠抗體以使得突變可影響抗原結合蛋白與抗原之間的結合的殘基。根據對這些胺基酸的認識，可闡明抗原的含有與抗原結合蛋白接觸或由抗體覆蓋的殘基的結構域或區域。所述結構域可包括抗原結合蛋白的結合表位。這種通用方法的一個具體實例利用精氨酸/穀氨酸掃描方案(參見例如nanevicz,t.等，1995,j.biol.chem.,270:37,21619-21625及zupnick,a.等，2006,j.biol.chem.,281:29,20464-20473)。一般來說，精氨酸及穀氨酸取代(通常單個地取代)野生型多肽中的胺基酸，因為這些胺基酸帶電荷且體積較大且因此有可能在引入突變的抗原區域中破壞抗原結合蛋白與抗原之間的結合。存在於野生型抗原中的精氨酸被穀氨酸置換。獲得多種所述單個突變體並且分析收集的結合結果以確定哪些殘基影響結合。抗原結合蛋白與如本文所用的變異pcsk9之間的結合的改變(例如降低或增加)意味著結合親和力(例如如通過已知方法(如以下在實施例中所述的biacore測試或基於珠粒的測定)所測量)、ec50存在變化和/或抗原結合蛋白的總結合能力存在變化(例如降低)(例如如由抗原結合蛋白濃度對抗原濃度的繪圖中的bmax降低所證實)。結合的顯著改變指示突變的殘基直接牽涉於與抗原結合蛋白的結合中或當結合蛋白與抗原結合時緊靠結合蛋白。在一些實施方案中，結合的顯著降低意味著相對於抗原結合蛋白與野生型pcsk9(例如seqidno:1和/或seqidno:303所示)之間的結合，抗原結合蛋白與突變pcsk9抗原之間的結合親和力、ec50和/或能力降低了大於10％、大於20％、大於40％、大於50％、大於55％、大於60％、大於65％、大於70％、大於75％、大於80％、大於85％、大於90％或大於95％。在某些實施方案中，結合降低至可檢測的極限以下。在一些實施方案中，當抗原結合蛋白與變異pcsk9蛋白的結合小於在抗原結合蛋白與野生型pcsk9蛋白(例如具有seqidno:1和/或seqidno:303的蛋白質)之間觀測的結合的50％(例如小於40％、35％、30％、25％、20％、15％或10％)時表明結合顯著降低。所述結合測量可使用本領域中已知的多種結合測定進行。在一些實施方案中，提供展現對野生型pcsk9蛋白(例如，seqidno:1或seqidno:303)中的殘基由精氨酸或穀氨酸取代的變異pcsk9蛋白的結合顯著較低的抗原結合蛋白。在一些實施方案中，相較於野生型pcsk9蛋白(例如seqidno:1或seqidno:303)，抗原結合蛋白對具有任何一個或多個(例如1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、10個或244個)以下突變的變異pcsk9蛋白的結合顯著降低或增加：r207e、d208r、r185e、r439e、e513r、v538r、e539r、t132r、s351r、a390r、a413r、e582r、d162r、r164e、e167r、s123r、e129r、a311r、d313r、d337r、r519e、h521r及q554r。在此處使用的簡寫記法中，格式為：野生型殘基:多肽中的位置:突變殘基，其中殘基的編號如seqidno:1或seqidno:303中所示。在一些實施方案中，相較於野生型pcsk9蛋白(例如seqidno:1或seqidno:303)，抗原結合蛋白對在如seqidno:1所示的以下位置處具有一個或多個(例如1個、2個、3個、4個、5個或5個以上)突變的突變pcsk9蛋白的結合顯著降低或增加：207、208、185、181、439、513、538、539、132、351、390、413、582、162、164、167、123、129、311、313、337、519、521及554。在一些實施方案中，相較於野生型pcsk9蛋白(例如seqidno:1或seqidno:303)，抗原結合蛋白對在如seqidno:1所示的以下位置處具有一個或多個(例如1個、2個、3個、4個、5個或5個以上)突變的突變pcsk9蛋白的結合降低或增加：207、208、185、181、439、513、538、539、132、351、390、413、582、162、164、167、123、129、311、313、337、519、521及554。在一些實施方案中，相較於野生型pcsk9蛋白(例如seqidno:1或seqidno:303)，抗原結合蛋白對在seqidno:1內的以下位置處具有一個或多個(例如1個、2個、3個、4個、5個或5個以上)突變的突變pcsk9蛋白的結合實質上降低或增加：207、208、185、181、439、513、538、539、132、351、390、413、582、162、164、167、123、129、311、313、337、519、521及554。在一些實施方案中，相較於野生型pcsk9蛋白(例如seqidno:1或seqidno:303)，abp對在seqidno:1或seqidno:303內具有一個或多個(例如1個、2個、3個、4個、5個等)以下突變的突變pcsk9蛋白的結合顯著降低或增加：r207e、d208r、r185e、r439e、e513r、v538r、e539r、t132r、s351r、a390r、a413r、e582r、d162r、r164e、e167r、s123r、e129r、a311r、d313r、d337r、r519e、h521r及q554r。在一些實施方案中，相較於野生型pcsk9蛋白(例如seqidno:1或seqidno:303)，abp對在seqidno:1或seqidno:303內具有一個或多個(例如1個、2個、3個、4個、5個等)以下突變的突變pcsk9蛋白的結合顯著降低或增加：r207e、d208r、r185e、r439e、e513r、v538r、e539r、t132r、s351r、a390r、a413r及e582r。在一些實施方案中，結合降低。在一些實施方案中，結合的降低被觀測為ec50的變化。在一些實施方案中，ec50的變化為ec50的數值增加(且因此為結合降低)。在一些實施方案中，相較於野生型pcsk9蛋白(例如seqidno:1或seqidno:303)，abp對在seqidno:1內具有一個或多個(例如1個、2個、3個、4個、5個等)以下突變的突變pcsk9蛋白的結合顯著降低或增加：d162r、r164e、e167r、s123r、e129r、a311r、d313r、d337r、r519e、h521r及q554r。在一些實施方案中，結合降低。在一些實施方案中，結合的降低被觀測為bmax的變化。在一些實施方案中，bmax的位移為由abp生成的最大信號降低。在一些實施方案中，對於將為表位的一部分的胺基酸，bmax降低了至少10％，例如降低至少任何以下量可在一些實施方案中指示殘基為表位的一部分：20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、98％、99％或100％。儘管剛才所列的變異形式是關於seqidno:1或seqidno:303中所示的野生型序列而提及，但應了解在pcsk9的等位基因變體中，在所指示位置處的胺基酸可不同。還涵蓋顯示對pcsk9的所述等位基因形式的結合顯著較低的抗原結合蛋白。因此，在一些實施方案中，任何以上實施方案皆可與等位基因序列，而非僅與圖1a中所示的野生型序列進行比較。在一些實施方案中，抗原結合蛋白對野生型pcsk9蛋白中所選位置處的殘基突變成任何其它殘基的變異pcsk9蛋白的結合顯著降低。在一些實施方案中，本文所述的精氨酸/穀氨酸置換用於所鑑定的位置。在一些實施方案中，丙氨酸用於所鑑定的位置。如上所指示，可根據掃描結果鑑定直接牽涉於結合中或由抗原結合蛋白覆蓋的殘基。因此，這些殘基可指示seqidno:1(或seqidno:303或seqidno:3)的含有抗原結合蛋白所結合的結合區的結構域或區域。如從實施例39中概述的結果可見，在一些實施方案中，抗原結合蛋白結合含有seqidno:1或seqidno:303的至少一個以下胺基酸的結構域：207、208、185、181、439、513、538、539、132、351、390、413、582、162、164、167、123、129、311、313、337、519、521及554。在一些實施方案中，抗原結合蛋白結合含有seqidno:1或seqidno:303的至少一個以下胺基酸的區域：207、208、185、181、439、513、538、539、132、351、390、413、582、162、164、167、123、129、311、313、337、519、521及554。在一些實施方案中，抗原結合蛋白結合含有seqidno:1或seqidno:303的至少一個以下胺基酸的區域：162、164、167、207和/或208。在一些實施方案中，一個以上(例如2個、3個、4個或5個)鑑定的殘基為由abp結合的區域的一部分。在一些實施方案中，abp與abp21b12競爭。在一些實施方案中，抗原結合蛋白結合含有seqidno:1或seqidno:303的至少一個胺基酸185的區域。在一些實施方案中，abp與abp31h4競爭。在一些實施方案中，抗原結合蛋白結合含有seqidno:1或seqidno:303的至少一個以下胺基酸的區域：439、513、538和/或539。在一些實施方案中，一個以上(例如2個、3個或4個)鑑定的殘基為由abp結合的區域的一部分。在一些實施方案中，abp與abp31a4競爭。在一些實施方案中，抗原結合蛋白結合含有seqidno:1或seqidno:303的至少一個以下胺基酸的區域：123、129、311、313、337、132、351、390和/或413。在一些實施方案中，一個以上(例如2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個或9個)鑑定的殘基為由abp結合的區域的一部分。在一些實施方案中，abp與abp12h11競爭。在一些實施方案中，抗原結合蛋白結合含有seqidno:1或seqidno:303的至少一個以下胺基酸的區域：582、519、521和/或554。在一些實施方案中，一個以上(例如2個、3個或4個)鑑定的殘基為由abp結合的區域的一部分。在一些實施方案中，abp與abp3c4競爭。在一些實施方案中，抗原結合蛋白結合seqidno:1或seqidno:303的片段或全長序列內的前述區域。在其它實施方案中，抗原結合蛋白結合由這些區域組成的多肽。提及「seqidno:1或seqidno:303」表示這些序列的一個或兩個可被採用或相關。所述詞語不表示應僅採用一個。如上所指示，以上描述參照seqidno:1提及特定胺基酸位置。然而，在說明書通篇中通常提及在seqidno:3提供的位置31處開始的pro/cat結構域。如下所指示，seqidno:1及seqidno:303缺乏pcsk9的信號序列。因而，這些不同公開之間的任何比較皆應考慮此編號差異。具體來說，seqidno:1中的任何胺基酸位置皆將對應於向seqidno:3中的蛋白質中再增加30個胺基酸的胺基酸位置。舉例來說，seqidno:1的位置207對應於seqidno:3(全長序列，且通常為用於本說明書中的編號系統)的位置237。表39.6概述參照seqidno:1(和/或seqidno:303)的以上指示位置如何對應於seqidno:3(其包括信號序列)。因此，關於seqidno:1(和/或seqidno:303)所述的任何以上指示的實施方案皆通過指示的相應位置參照seqidno:3加以描述。在一些實施方案中，abp21b12結合包括殘基162-167(例如seqidno:1的殘基d162-e167)的表位。在一些實施方案中，abp12h11結合包括殘基123-132(例如seqidno:1的s123-t132)的表位。在一些實施方案中，abp12h11結合包括殘基311-313(例如seqidno:1的a311-d313)的表位。在一些實施方案中，abp可結合包括這些序列鏈的任一條的表位。競爭性抗原結合蛋白另一方面，提供與所例示的一種結合本文所述的表位的抗體或功能性片段競爭特異性結合pcsk9的抗原結合蛋白。所述抗原結合蛋白還可與本文所例示的一種抗原結合蛋白結合相同表位或重疊表位。預期與所例示的抗原結合蛋白競爭或結合相同表位的抗原結合蛋白及片段會顯示類似的功能性質。所例示的抗原結合蛋白及片段包括以上所述的那些，包括具有表2和/或圖2-3中包括的重鏈和輕鏈、可變區結構域及cdr的那些。因此，作為一個具體實例，提供的抗原結合蛋白包括與具有以下的抗體或抗原結合蛋白競爭的那些：(a)對於圖2-3中列出的抗體所列的所有6個cdr；(b)對於表2中列出的抗體所列的vh及vl；或(c)如對於表2中列出的抗體所指定的兩條輕鏈及兩條重鏈。治療性藥物製劑及施用本發明提供含有針對pcsk9的抗原結合蛋白的藥物製劑。如本文所用，「藥物製劑」為藥學活性藥物(即至少一種針對pcsk9的抗原結合蛋白)的無菌組合物，其適於胃腸外施用(包括(但不限於)靜脈內、肌肉內、皮下、霧化、肺內、鼻內或鞘內施用)於有需要的患者且包括僅藥學上可接受的賦形劑、稀釋劑及由聯邦藥物管理局(federaldrugadministration)或其他外國國家管理局視為安全的其它添加劑。藥物製劑包括可直接施用的液體(例如水性)溶液、及可在施用之前通過添加稀釋劑而復原成溶液的凍乾粉末。術語「藥物製劑」的範圍內明確排除用於表面施用於患者的組合物、用於經口攝取的組合物及用於胃腸外給養的組合物。在某些實施方案中，藥物製劑為穩定的藥物製劑。如本文所用，詞語「穩定的藥物製劑」、「穩定的製劑」或「藥物製劑為穩定的」是指相較於對照配方樣品，當在2-8℃下儲存至少1個月或2個月或3個月或6個月或1年或2年時，展現聚集增加和/或生物活性損失降低不超過5％的生物活性蛋白質的藥物製劑。製劑穩定性可易於由本領域技術人員使用許多標準測定來測定，包括(但不限於)尺寸排阻hplc(「sec-hplc」)、陽離子交換hplc(cex-hplc)、通過光遮蔽進行的在顯微鏡下才可見的粒子檢測(「hiac」)和/或目視檢查。在某些實施方案中，藥物製劑包含表2及圖2和/或圖3以及圖48a和圖48b中所述的針對pcsk9的任何抗原結合蛋白。在某些其它實施方案中，藥物製劑可包含針對pcsk9的其它抗原結合蛋白；即，由輕鏈可變域seqidno:588和重鏈可變域seqidno:589構成的抗體。在一些實施方案中，藥物製劑包含21b12、26h5、31h4、8a3、11f1或8a1中的任一種。在一些實施方案中，藥物製劑包含一種以上針對pcsk9的不同抗原結合蛋白。在某些實施方案中，藥物製劑包含一種以上針對pcsk9的抗原結合蛋白，其中針對pcsk9的抗原結合蛋白結合一個以上表位。在一些實施方案中，不同抗原結合蛋白將不彼此競爭結合pcsk9。在一些實施方案中，表2及圖2和/或圖3中所述的任何抗原結合蛋白皆可一起組合於藥物製劑中。在某些實施方案中，針對pcsk9的抗原結合蛋白和/或治療分子連接於本領域中已知的延長半衰期的媒介物。所述媒介物包括(但不限於)聚乙二醇、糖原(例如abp的糖基化)、以及葡聚糖。所述媒介物例如描述於美國申請號09/428,082(現為美國專利號6,660,843)及公布的pct申請號wo99/25044中，其據此出於任何目的以引用的方式併入本文。在某些實施方案中，可接受的配製材料優選地在所採用的劑量及濃度下對接受者無毒。在一些實施方案中，配製材料是用於皮下(s.c.)和/或靜脈內(i.v.)施用。在某些實施方案中，藥物製劑包含用於改變、維持或保持例如組合物的ph、摩爾滲透壓濃度、粘度、澄清度、顏色、等張性、氣味、無菌性、穩定性、溶解或釋放速率、吸收或滲透的配製材料。在某些實施方案中，適合的配製材料包括(但不限於)胺基酸(如脯氨酸、精氨酸、賴氨酸、蛋氨酸、牛磺酸、甘氨酸、穀氨醯胺或天冬醯胺)；抗微生物劑；抗氧化劑(如抗壞血酸、亞硫酸鈉或亞硫酸氫鈉)；緩衝劑(如硼酸鹽、碳酸氫鹽、磷酸鈉(「naoac」)、tris-hcl、tris緩衝劑、檸檬酸鹽、磷酸鹽緩衝劑、磷酸鹽緩衝鹽水(即pbs緩衝液)或其它有機酸)；膨脹劑(如甘露糖醇或甘氨酸)；螯合劑(如乙二胺四乙酸(edta))；錯合劑(如咖啡因、聚乙烯吡咯烷酮、β-環糊精或羥丙基-β-環糊精)；填充劑；單糖；二糖；及其它碳水化合物(如葡萄糖、蔗糖、果糖、乳糖、甘露糖、海藻糖或糊精)；蛋白質(如血清白蛋白、明膠或免疫球蛋白)；著色劑、調味劑及稀釋劑；乳化劑；親水性聚合物(如聚乙烯吡咯烷酮)；低分子量多肽；成鹽相對離子(如鈉)；防腐劑(如苯扎氯銨、苯甲酸、水楊酸、硫柳汞、苯乙醇、對羥基苯甲酸甲酯、對羥基苯甲酸丙酯、氯己定、山梨酸或過氧化氫)；溶劑(如甘油、丙二醇或聚乙二醇)；糖醇(如甘露糖醇或山梨糖醇)；懸浮劑；表面活性劑或溼潤劑(如普洛尼克(pluronics)、peg、山梨聚糖酯、聚山梨醇酯(如聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯80)、曲通(triton)、氨丁三醇、卵磷脂、膽固醇、泰洛帕(tyloxapal))；穩定性增強劑(如蔗糖或山梨糖醇)；張力增強劑(如鹼金屬滷化物(優選氯化鈉或氯化鉀)、甘露糖醇、山梨糖醇)；遞送媒介物；稀釋劑；賦形劑和/或藥物佐劑。(remington'spharmaceuticalsciences，第18版，a.r.gennaro編，mackpublishingcompany(1995)。在某些實施方案中，最佳藥物製劑將由本領域技術人員根據例如預定施用途徑、遞送形式及所要劑量而確定。參見例如remington'spharmaceuticalsciences，同上。在某些實施方案中，所述製劑可影響本發明抗體的物理狀態、穩定性、體內釋放速率及體內清除速率。一方面，藥物製劑包含高濃度的針對pcsk9的抗原結合蛋白。在某些實施方案中，abp濃度在約70mg/ml至約250mg/ml的範圍內，例如約70mg/ml、約80mg/ml、約90mg/ml、約100mg/ml、約100mg/ml、約120mg/ml、約130mg/ml、約140mg/ml、約150mg/ml、約160mg/ml、約170mg/ml、約180mg/ml、約190mg/ml、約200mg/ml、約210mg/ml、約220mg/ml、約230mg/ml、約240mg/ml或約250mg/ml，並且包括介於之間的所有值。在一些實施方案中，21b12、26h5或31h4的濃度在約100mg/ml至約150mg/ml的範圍內，例如100mg/ml、約100mg/ml、約120mg/ml、約130mg/ml、約140mg/ml或約150mg/ml。在一些實施方案中，8a3、11f1或8a1的濃度在約140mg/ml至約220mg/ml的範圍內，例如140mg/ml、約150mg/ml、約160mg/ml、約170mg/ml、約180mg/ml、約190mg/ml、約200mg/ml、約210mg/ml、約220mg/ml或約250mg/ml。另一方面，藥物製劑包含至少一種緩衝劑，如乙酸鈉、氯化鈉、磷酸鹽、磷酸鹽緩衝鹽水(「pbs」)和/或ph為約7.0-8.5的tris緩衝液。緩衝劑用於維持生理上適合的ph。此外，緩衝劑可用於增強藥物製劑的等張性及化學穩定性。在某些實施方案中，緩衝劑在約0.05mm至約40mm的範圍內，例如約0.05mm、約0.1mm、約0.5mm、約1.0mm、約5.0mm、約10mm、約15mm、約20mm、約30mm、約40mm、約50mm、約60mm、約70mm、約80mm、約90mm或約100nm緩衝劑，包括介於之間的所有值。在某些實施方案中，緩衝劑為naoac。藥物製劑的示例性ph包括約4至約6、或約4.8至約5.8、或約5.0至約5.2、或約5、或約5.2。在某些實施方案中，藥物製劑為等張的，其中重量摩爾滲透壓濃度在介於約250至約350毫滲摩/公斤(miliosmol/kg)之間的範圍內，例如約250mosm/kg、約260mosm/kg、約270mosm/kg、約280mosm/kg、約290mosm/kg、約300mosm/kg、約310mosm/kg、約320mosm/kg、約330mosm/kg、約340mosm/kg或約350mosm/kg，並且包括介於之間的所有值。如本文所用，「重量摩爾滲透壓濃度」為溶質與體積流體的比率的量度。換句話說，其為每公斤溶液的分子及離子(或分子)的數目。重量摩爾滲透壓濃度可在稱為滲壓計的分析儀器，如advancedinstruments2020多樣品滲壓計(norwood,ma)上測量。advancedinstrumetns2020多樣品滲壓計通過使用凝固點下降(freezingpointdepression)法來測量重量摩爾滲透壓濃度。溶液中的滲透溶質增加，溶液將凝固的溫度則下降。也可使用本領域中已知的任何其它方法且在本領域中已知的任何其它裝置中，如使用線性外插法來測量重量摩爾滲透壓濃度。又一方面，藥物製劑包含至少一種表面活性劑，包括(但不限於)聚山梨醇酯-80、聚山梨醇酯-60、聚山梨醇酯-40及聚山梨醇酯-20。在某些實施方案中，藥物製劑包含濃度在製劑的約0.004％至約10％重量/體積(「w/v」)的範圍內的表面活性劑，例如製劑的約0.004％、約0.005％、約0.006％、約0.007％、約0.008％、約0.009％、約0.01％、約0.05％、約0.1％、約0.5％、約1％、約5％或約10％w/v表面活性劑。在某些實施方案中，藥物製劑包含濃度在製劑的約0.004％至約0.1％w/v的範圍內的聚山梨醇酯80。在某些實施方案中，藥物製劑包含濃度在製劑的約0.004％至約0.1％w/v的範圍內的聚山梨醇酯20。在某些實施方案中，藥物製劑包含至少一種穩定劑，如多羥基烴(包括(但不限於)山梨糖醇、甘露糖醇、甘油及半乳糖醇)和/或二糖(包括(但不限於)蔗糖、乳糖、麥芽糖及海藻糖)和/或胺基酸(包括(但不限於)脯氨酸、精氨酸、賴氨酸、蛋氨酸及牛磺酸)和或苯甲醇；所述多羥基烴和/或二糖和/或胺基酸和/或苯甲醇的總量為製劑的約0.5％至約10％w/v。在某些實施方案中，藥物製劑包含濃度為約1％、約2％、約3％、約4％、約5％、約6％、約7％、約8％、約9％或約10％蔗糖的穩定劑。在某些實施方案中，藥物製劑包含濃度為約5％蔗糖的穩定劑。在某些實施方案中，藥物製劑包含濃度為約1％、約2％、約3％、約4％、約5％、約6％、約7％、約8％、約9％或約10％山梨糖醇的穩定劑。在某些實施方案中，藥物製劑包含濃度為約9％山梨糖醇的穩定劑。在某些實施方案中，藥物製劑包含濃度為約1％、約2％、約3％、約4％、約5％脯氨酸、精氨酸、賴氨酸、蛋氨酸和/或牛磺酸的穩定劑。在某些實施方案中，藥物製劑包含濃度介於約2-3％脯氨酸之間的穩定劑。在某些實施方案中，藥物製劑包含濃度為約1％、約2％、約3％、約4％、約5％苯甲醇的穩定劑。在某些實施方案中，藥物製劑包含濃度介於約1-2％苯甲醇之間的穩定劑。一方面，藥物製劑具有小於約30釐泊(cp)的粘度，如在室溫下(即25c)所測量。如本文所用，「粘度」為流體的抗流動性，且可用單位釐泊(cp)或毫帕斯卡-秒(mpa-s)度量，其中在給定剪切速率下，1cp＝1mpa-s。粘度可通過使用粘度計，例如brookfieldengineeringlvt型錶盤式粘度計來測量。粘度還可使用本領域中已知的任何其它方法且在本領域中已知的任何其它裝置中測量(例如絕對、運動或動態粘度或絕對粘度)。在某些實施方案中，藥物製劑的粘度水平小於約25cp、約20cp、約18cp、約15cp、約12cp、約10cp、約8cp、約6cp、約4cp、約2cp、或約1cp。一方面，如通過本領域技術人員已知的至少一種穩定性測定，如檢查生物活性蛋白質隨時間的生物物理或生物化學特徵的測定所測量，藥物製劑為穩定的。如上所提及，本發明的穩定的藥物製劑為相較於對照配方樣品，當在2-8℃下儲存至少1個月或2個月或3個月或6個月或1年或2年時，展現聚集增加和/或生物活性損失降低不超過5％的生物活性蛋白質的藥物製劑。在某些實施方案中，使用尺寸排阻hplc(「sec-hplc」)測量藥物製劑穩定性。sec-hplc基於蛋白質的流體動力學體積的差異分離蛋白質。流體動力學蛋白質體積較大的分子早於體積較小的分子洗脫。在sec-hplc的情況下，相較於對照樣品，穩定的藥物製劑應展現高分子量物質種類增加不超過約5％。在某些其它實施方案中，相較於對照樣品，藥物製劑應展現高分子量物質種類增加不超過約4％、不超過約3％、不超過約2％、不超過約1％、不超過約0.5％。在某些實施方案中，使用陽離子交換hplc(cex-hplc)測量藥物製劑穩定性。cex-hplc基於蛋白質的表面電荷的差異分離蛋白質。在設定ph下，在陽離子交換管柱上分離抗pcsk9abp的帶電荷同工型並使用鹽梯度洗脫。通過紫外吸光度監測洗脫液。通過測定各同工型的峰面積佔總峰面積的百分比來評價帶電荷的同工型分布。在cex-hplc的情況下，相較於對照樣品，穩定的藥物製劑應展現主要同工型峰減少不超過約5％。在某些其它實施方案中，相較於對照樣品，穩定的藥物製劑應展現主要同工型峰減少不超過約3％至約5％。在某些實施方案中，相較於對照樣品，藥物製劑應展現主要同工型峰減少不超過約4％、不超過約3％、不超過約2％、不超過約1％、不超過約0.5％。在某些實施方案中，使用通過光遮蔽進行的在顯微鏡下才可見的粒子檢測(「hiac」)測量藥物製劑穩定性。含有光遮蔽傳感器(hiac/roycohrld-150或等效物)以及液體取樣器的電子液載粒子計數系統(hiac/royco9703或等效物)可定量給定測試樣品中的粒子數目及其尺寸範圍。當液體中的粒子穿過光源與檢測器之間時，其減弱或「遮蔽」落在檢測器上的光束。當粒子的濃度處於傳感器的正常範圍內時，這些粒子逐個被檢測。各粒子穿過檢測區域會減少光檢測器上的入射光並且光檢測器的電壓輸出量瞬間降低。電壓的變化記錄為電脈衝，其由儀器轉換成存在的粒子數目。所述方法為非特異性的且測量不管何種來源的粒子。監測的粒度通常為10um及25um。在hiac的情況下，相較於對照樣品，穩定的藥物製劑應展現每個容器(或單位)不超過6000個10μm粒子。在某些實施方案中，相較於對照樣品，穩定的藥物製劑應展現每個容器(或單位)不超過5000個、不超過4000個、不超過3000個、不超過2000個、不超過1000個10μm粒子。在其它實施方案中，相較於對照樣品，穩定的藥物製劑應展現每個容器(或單位)不超過600個25μm粒子。在某些實施方案中，相較於對照樣品，穩定的藥物製劑應展現每個容器(或單位)不超過500個、不超過400個、不超過300個、不超過200個、不超過100個、不超過50個25μm粒子。在某些實施方案中，使用目視評估測量藥物製劑穩定性。目視評估為一種用於描述樣品的可見物理特徵的定性方法。視所評價的特徵(例如顏色、澄清度、粒子或外來物質的存在)而定，相對於檢查室的黑色和/或白色背景觀察樣品。還相對於乳白色參照標準物及顏色參照標準物來觀察樣品。在目視評估的情況下，相較於對照樣品，穩定的藥物製劑應展現在顏色、澄清度、粒子或外來物質的存在方面無顯著變化。本發明的一方面為一種藥物製劑，其包含：(i)約70mg/ml至約250mg/ml針對pcsk9的抗原結合蛋白；(ii)約0.05mm至約40mm緩衝劑，如乙酸鈉(「naoac」)充當緩衝劑；(iii)約1％至約5％脯氨酸、精氨酸、賴氨酸、蛋氨酸或牛磺酸(又稱為2-氨基乙烷磺酸)和/或0.5％至約5％苯甲醇充當穩定劑；以及(iv)製劑的約0.004％至約10％w/v的非離子表面活性劑(包括(但不限於)聚山梨醇酯-80、聚山梨醇酯-60、聚山梨醇酯-40及聚山梨醇酯-20)；其中所述製劑的ph在約4.0至6.0的範圍內。在某些其它實施方案中，本發明的藥物製劑包含(i)至少約70mg/ml、約100mg/ml、約120mg/ml、約140mg/ml、約150mg/ml、約160mg/ml、約170mg/ml、約180mg/ml、約190mg/ml、約200mg/ml的抗pcsk9抗體；(ii)約10mmnaoac；(iii)約0.01％聚山梨醇酯80；以及(iv)約2％-3％脯氨酸(或約250mm至約270mm脯氨酸)，其中製劑的ph為約5。在某些其它實施方案中，本發明的藥物製劑包含(i)至少約70mg/ml、約100mg/ml、約120mg/ml、約140mg/ml的抗pcsk9抗體21b12、26h5和/或31h4；(ii)約10mmnaoac；(iii)約0.01％聚山梨醇酯80；以及(iv)約2％-3％脯氨酸(或約250mm至約270mm脯氨酸)，其中製劑的ph為約5。在某些其它實施方案中，本發明的藥物製劑包含(i)至少約150mg/ml、約160mg/ml、約170mg/ml、約180mg/ml、約190mg/ml、約200mg/ml的抗pcsk9抗體8a3、11f1和/或8a1；(ii)約10mmnaoac；(iii)約0.01％聚山梨醇酯80；以及(iv)約2％-3％脯氨酸(或約250mm至約270mm脯氨酸)，其中製劑的ph為約5。本發明的一方面為一種藥物製劑，其包含(i)至少約70mg/ml至約250mg/ml的抗pcsk9抗體；(ii)約5mm至約20mm的緩衝劑，如naoac；(iii)製劑的約1％至約10％w/v的多羥基烴(如山梨糖醇)或二糖(如蔗糖)；以及(iv)製劑的約0.004％至約10％w/v的表面活性劑，如聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80；其中所述製劑的ph在約4.8至5.8的範圍內；並且其中藥物製劑任選地包含約80mm至約300mm脯氨酸、精氨酸、賴氨酸、蛋氨酸或牛磺酸和/或0.5％至約5％苯甲醇用於降低粘度。在某些其它實施方案中，本發明的藥物製劑包含(i)至少約70mg/ml至約250mg/ml的抗pcsk9抗體；(ii)約10mmnaoac；(iii)約9％蔗糖；以及(iv)約0.004％聚山梨醇酯20，其中製劑的ph為約5.2。在某些其它實施方案中，本發明的藥物製劑包含(i)至少約70mg/ml、約100mg/ml、約120mg/ml、約140mg/ml、約160mg/ml、約180mg/ml、約200mg/ml的抗pcsk9抗體；(ii)約15mmnaoac；(iii)約9％蔗糖；以及(iv)約0.01％聚山梨醇酯20，其中製劑的ph為約5.2。在某些其它實施方案中，本發明的藥物製劑包含(i)至少約70mg/ml、約100mg/ml、約120mg/ml、約140mg/ml、約160mg/ml、約180mg/ml、約200mg/ml的抗pcsk9抗體；(ii)約20mmnaoac；(iii)約9％蔗糖；以及(iv)約0.01％聚山梨醇酯20，其中製劑的ph為約5.2。在某些其它實施方案中，本發明的藥物製劑包含(i)至少約70mg/ml、約100mg/ml、約120mg/ml、約140mg/ml、約160mg/ml、約180mg/ml、約200mg/ml的抗pcsk9抗體；(ii)約10mmnaoac；(iii)約9％蔗糖；(iv)約0.01％聚山梨醇酯80；以及(v)約250mm脯氨酸，其中製劑的ph為約5。本發明的藥物製劑可以組合療法(即與其它藥劑組合)施用。在某些實施方案中，組合療法包含能夠結合pcsk9的抗原結合蛋白與至少一種抗膽固醇藥劑組合。藥劑包括(但不限於)體外合成製備的化學製劑、抗體、抗原結合區及其組合和綴合物。在某些實施方案中，藥劑可充當激動劑、拮抗劑、變構調節劑或毒素。在某些實施方案中，藥劑可起抑制或刺激其目標的作用(例如受體或酶活化或抑制)，且從而促進ldlr的表達增加或降低血清膽固醇水平。在某些實施方案中，針對pcsk9的抗原結合蛋白可在用膽固醇(血清和/或總膽固醇)降低劑治療之前、同時及之後施用。在某些實施方案中，針對pcsk9的抗原結合蛋白可防治性施用以預防或減緩高膽固醇血症、心臟病、糖尿病和/或任何膽固醇相關疾病的發作。在某些實施方案中，可施用針對pcsk9的抗原結合蛋白用於治療現有高膽固醇血症病狀。在一些實施方案中，abp延遲疾病和/或與疾病相關的症狀的發作。在一些實施方案中，向不存在任一種膽固醇相關疾病或其子組的任何症狀的受試者提供abp。在某些實施方案中，針對pcsk9的抗原結合蛋白與具體治療劑一起用於治療各種膽固醇相關疾病，如高膽固醇血症。在某些實施方案中，鑑於病狀及所要治療程度，可施用兩種、三種或更多種藥劑。在某些實施方案中，所述藥劑可通過包括在同一製劑中一起提供。在某些實施方案中，所述一種或多種藥劑與針對pcsk9的抗原結合蛋白可通過包括在同一製劑中一起提供。在某些實施方案中，所述藥劑可單獨配製且通過包括在治療試劑盒中一起提供。在某些實施方案中，所述藥劑及針對pcsk9的抗原結合蛋白可單獨配製且通過包括在治療試劑盒中一起提供。在某些實施方案中，所述藥劑可單獨提供。在某些實施方案中，包含針對pcsk9的抗原結合蛋白連同或不連同至少一種其它治療劑的製劑可通過混合具有所要純度的所選製劑與任選的配製劑(remington'spharmaceuticalsciences，同上)以凍幹餅塊或水溶液形式製備以供儲存。另外，在某些實施方案中，包含針對pcsk9的抗原結合蛋白連同或不連同至少一種其它治療劑的製劑可使用適當賦形劑配製成凍乾物。在某些實施方案中，當預期胃腸外施用時，治療製劑可呈無熱原質、胃腸外可接受的水溶液形式，其包含針對pcsk9的所要抗原結合蛋白連同或不連同其它治療劑一起於藥學上可接受的媒介物中。在某些實施方案中，用於胃腸外注射的媒介物為針對pcsk9的抗原結合蛋白連同或不連同至少一種其它治療劑一起於其中配製成經過適當防腐的無菌等張溶液的無菌蒸餾水。在某些實施方案中，製備可涉及所要分子與可使產品控制或持續釋放因而所述產品可經由貯庫式注射遞送的試劑，如可注射微球體、生物可侵蝕粒子、聚合化合物(如聚乳酸或聚乙醇酸)、珠粒或脂質體一起配製。在某些實施方案中，還可使用透明質酸，且其可具有促進在循環中的持續時間的作用。在某些實施方案中，可植入的藥物遞送裝置可用於引入所要分子。在某些實施方案中，可配製用於吸入的藥物製劑。在某些實施方案中，針對pcsk9的抗原結合蛋白可連同或不連同至少一種其它治療劑一起配製成用於吸入的乾燥粉末。在某些實施方案中，包含針對pcsk9的抗原結合蛋白連同或不連同至少一種其它治療劑的吸入溶液可與推進劑一起配製以用於氣溶膠遞送。在某些實施方案中，溶液可被霧化吸入。經肺施用進一步描述於pct申請號pct/us94/001875中，所述申請描述經肺遞送化學修飾的蛋白質。在某些實施方案中，藥物製劑可涉及有效量的針對pcsk9的抗原結合蛋白連同或不連同至少一種其它治療劑一起與適於製造片劑的無毒賦形劑混合。在某些實施方案中，通過將片劑溶解於無菌水或另一適當媒介物中，可製備呈單位劑量形式的溶液。在某些實施方案中，適合的賦形劑包括(但不限於)惰性稀釋劑，如碳酸鈣、碳酸鈉或碳酸氫鈉、乳糖或磷酸鈣；或粘合劑，如澱粉、明膠或阿拉伯膠；或潤滑劑，如硬脂酸鎂、硬脂酸或滑石。本領域技術人員將顯而易知其它藥物製劑，包括呈持續或控制遞送製劑形式的涉及針對pcsk9的抗原結合蛋白連同或不連同至少一種其它治療劑的製劑。在某些實施方案中，用於配製多種其它持續或控制遞送工具(deliverymeans)，如脂質體載體、生物可侵蝕性微粒或多孔珠粒及貯庫式注射劑的技術也為本領域技術人員所知。參見例如pct申請號pct/us93/00829，其描述用於遞送藥物製劑的多孔聚合微粒的控制釋放。在某些實施方案中，持續釋放製劑可包括呈成形物品形式的半滲透聚合物基質，例如薄膜或微膠囊。持續釋放基質可包括聚酯、水凝膠、聚乳酸交酯(u.s.3,773,919及ep058,481)、l-穀氨酸與l-穀氨酸γ乙酯的共聚物(sidman等，biopolymers,22:547-556(1983))、聚(甲基丙烯酸2-羥乙酯)(langer等，j.biomed.mater.res.,15:167-277(1981)及langer,chem.tech.,12:98-105(1982))、乙烯乙酸乙烯酯(langer等，同上)或聚-d(-)-3-羥丁酸(ep133,988)。在某些實施方案中，持續釋放製劑還可包括脂質體，其可通過本領域中已知的若干方法中的任一種製備。參見例如eppstein等，proc.natl.acad.sci.usa,82:3688-3692(1985)；ep036,676；ep088,046及ep143,949。有待於體內施用的藥物製劑通常無菌。在某些實施方案中，這可通過經無菌濾膜過濾來完成。在某些實施方案中，當製劑被凍幹時，使用這種方法滅菌可在凍幹及復原之前或之後進行。在某些實施方案中，用於胃腸外施用的製劑可以凍幹形式或以溶液形式儲存。在某些實施方案中，通常將胃腸外製劑置放入具有無菌接取口的容器，例如具有可用皮下注射針刺穿的塞子的靜脈內溶液袋或小瓶中。在某些實施方案中，一旦藥物製劑已被配製，其即可以溶液、混懸液、凝膠劑、乳液、固體形式或以脫水或凍乾粉末形式儲存於無菌小瓶中。在某些實施方案中，所述製劑可以即用形式或以在施用之前復原的形式(例如凍幹形式)儲存。在某些實施方案中，一旦藥物製劑已被配製，其即可以呈即用形式的溶液或混懸液形式儲存於預填充的注射器中。在某些實施方案中，提供用於產生單一劑量施用單元的試劑盒。在某些實施方案中，試劑盒可含有具有乾燥的蛋白質的第一容器與具有水性製劑的第二容器兩者。在某些實施方案中，包括含有單腔室及多腔室的預填充注射器(例如液體注射器及溶解注射器(lyosyringe))的試劑盒。在某些實施方案中，有待在治療上採用的包含針對pcsk9的抗原結合蛋白連同或不連同至少一種其它治療劑的藥物製劑的有效量將例如取決於治療情形及對象。本領域技術人員應了解根據某些實施方案的適當治療劑量水平因此將部分地根據所遞送的分子、針對pcsk9的抗原結合蛋白所針對的適應症、使用或不使用至少一種其它治療劑、施用途徑、及患者的尺寸(體重、體表或器官尺寸)和/或狀況(年齡及總體健康狀況)而變化。在某些實施方案中，臨床醫師可滴定劑量並修改施用途徑以獲得最佳治療效果。在某些實施方案中，製劑可經由植入上面已吸附或囊封有所要分子的膜、海綿或另一適當材料來局部施用。在某些實施方案中，當使用植入裝置時，所述裝置可植入任何適合的組織或器官中，且所要分子的遞送可經由擴散、定時釋放推注或連續施用來達成。劑量及給藥方案表2及圖2和/或圖3和/或圖48a和圖48b中所述的任何針對pcsk9的抗原結合蛋白皆可根據本發明方法施用於患者。在一些實施方案中，針對pcsk9的抗原結合蛋白包括21b12、26h5、31h4、8a3、11f1或8a1。根據本發明方法施用於患者的針對pcsk9的抗原結合蛋白(例如抗pcsk9抗體)的量通常為治療有效量。abp的量可用抗體毫克數(即mg)或每公斤患者體重的抗體毫克數(即mg/kg)表示。在某些實施方案中，pcsk9抗原結合蛋白的典型劑量可在約0.1μg/kg直至約100mg/kg或100mg/kg以上針對pcsk9的抗原結合蛋白的範圍內。在某些實施方案中，劑量可在以下範圍內：0.1μg/kg直至約100mg/kg；或1μg/kg直至約100mg/kg；或5μg/kg直至約100mg/kg針對pcsk9的抗原結合蛋白；或1mg/kg至約50mg/kg針對pcsk9的抗原結合蛋白；或2mg/kg至約20mg/kg針對pcsk9的抗原結合蛋白；或2mg/kg至約10mg/kg針對pcsk9的抗原結合蛋白。在某些實施方案中，針對pcsk9的抗原結合蛋白的量(或劑量)可在以下範圍內：至少約10mg至約1400mg；或約14mg至約1200mg；或約14mg至約1000mg；或約14mg至約800mg；或約14mg至約700mg；或約14mg至約480mg；或約20mg直至約480mg；或約70mg直至約480mg；或約80mg至約480mg；或約90mg至約480mg；或約100mg至約480mg；或約105mg至約480mg；或約110mg至約480mg；或約115mg至約480mg；或約120mg至約480mg；或約125mg至約480mg；或約130mg至約480mg；或約135mg至約480mg；或約140mg至約480mg；或約145mg至約480mg；或約150mg至約480mg；或約160mg至約480mg；或約170mg至約480mg；或約180mg至約480mg；或約190mg至約480mg；或約200mg至約480mg；或約210mg至約480mg；或約220mg至約480mg；或約230mg至約480mg；或約240mg至約480mg；或約250mg至約480mg；或約260mg至約480mg；或約270mg至約480mg；或約280mg至約480mg；或約290mg至約480mg；或約300mg至約480mg；或約310mg至約480mg；或約320mg至約480mg；或約330mg至約480mg；或約340mg至約480mg；或約350mg至約480mg；或約360mg至約480mg；或約370mg至約480mg；或約380mg至約480mg；或約390mg至約480mg；或約400mg至約480mg；或約410mg至約480mg；或約420mg至約480mg；或約430mg至約480mg；或約440mg至約480mg；或約450mg至約480mg；或約460mg至約480mg；或約470mg至約480mg針對pcsk9的抗原結合蛋白。在某些實施方案中，給藥頻率將慮及所用製劑中針對pcsk9的抗原結合蛋白和/或任何其它治療劑的藥物動力學參數。在某些實施方案中，臨床醫師將施用製劑直至達到實現所要效果的劑量。在某些實施方案中，因此，可施用單劑製劑，或隨時間施用兩劑、三劑、四劑或四劑以上(其可能含有或可能不含有相同量的所要分子)製劑，或經由植入裝置或導管以連續輸注形式施用製劑。也可用標準針及注射器皮下或靜脈內遞送製劑。此外，對於皮下遞送，筆遞送裝置以及自動注射器遞送裝置可應用於遞送本發明的藥物製劑。適當劑量的進一步細化由一般技術人員按常規進行且處於由其常規進行的任務範圍內。在某些實施方案中，可經由使用適當劑量-反應數據確定適當劑量。在一些實施方案中，施用的量及頻率可慮及有待獲得的所要膽固醇水平(血清和/或總體)及受試者的當前膽固醇水平、ldl水平和/或ldlr水平，其皆可通過本領域技術人員熟知的方法獲得。在某些實施方案中，一周一次(qw)向有需要的患者施用以下劑量的針對pcsk9的抗原結合蛋白：至少約10mg；或多達約14mg；或多達約20mg；或多達約35mg；或多達約40mg；或多達約45mg；或多達約50mg；或多達約70mg。在一些其它實施方案中，每隔一周(或每兩周)一次(q2w)向有需要的患者施用以下劑量的針對pcsk9的抗原結合蛋白：至少約70mg；或多達約100mg；或多達約105mg；或多達約110mg；或多達約115mg；或多達約120mg；或多達約140mg；或多達約160mg；或多達約200mg；或多達約250mg；或多達280mg；或多達300mg；或多達350mg；或多達400mg；或多達420mg。在某些其它實施方案中，每四周一次(或一個月一次)向有需要的患者施用以下劑量的針對pcsk9的抗原結合蛋白：至少約250mg；或多達約280mg；或多達約300mg；或多達約350mg；或多達約400mg；或多達約420mg；或多達約450mg；或多達480mg。在一些實施方案中，當與給藥前血清ldl膽固醇水平相比，所述血清ldl膽固醇水平降低了至少約15％。在一些實施方案中，血清ldl膽固醇水平降低了至少約20％。在一些實施方案中，血清ldl膽固醇水平降低了至少約25％。在一些實施方案中，血清ldl膽固醇水平降低了至少約30％。在一些實施方案中，血清ldl膽固醇水平降低了至少約40％。在一些實施方案中，血清ldl膽固醇水平降低了至少約50％。在一些實施方案中，血清ldl膽固醇水平降低了至少約55％。在一些實施方案中，血清ldl膽固醇水平降低了至少約60％。在一些實施方案中，血清ldl膽固醇水平降低了至少約65％。在一些實施方案中，血清ldl膽固醇水平降低了至少約70％。在一些實施方案中，血清ldl膽固醇水平降低了至少約75％。在一些實施方案中，血清ldl膽固醇水平降低了至少約80％。在一些實施方案中，血清ldl膽固醇水平降低了至少約85％。在一些實施方案中，血清ldl膽固醇水平降低了至少約90％。在一些實施方案中，當與給藥前血清ldl膽固醇水平相比，所述血清ldl膽固醇水平降低了至少約15％，並且相對於給藥前水平，所述降低持續至少約3天、至少約5天、至少約7天、至少約10天、至少約14天、至少約21天、至少約25天、至少約28天、或至少約31天的時段。在一些實施方案中，當與給藥前血清ldl膽固醇水平相比，所述血清ldl膽固醇水平降低了至少約20％，並且相對於給藥前水平，所述降低持續至少約3天、至少約5天、至少約7天、至少約10天、至少約14天、至少約21天、至少約25天、至少約28天、或至少約31天的時段。在一些實施方案中，當與給藥前血清ldl膽固醇水平相比，所述血清ldl膽固醇水平降低了至少約25％，並且相對於給藥前水平，所述降低持續至少約3天、至少約5天、至少約7天、至少約10天、至少約14天、至少約21天、至少約25天、至少約28天、或至少約31天的時段。在一些實施方案中，當與給藥前血清ldl膽固醇水平相比，所述血清ldl膽固醇水平降低了至少約30％，並且相對於給藥前水平，所述降低持續至少約3天、至少約5天、至少約7天、至少約10天、至少約14天、至少約21天、至少約25天、至少約28天、或至少約31天的時段。在一些實施方案中，當與給藥前血清ldl膽固醇水平相比，所述血清ldl膽固醇水平降低了至少約35％，並且相對於給藥前水平，所述降低持續至少約3天、至少約5天、至少約7天、至少約10天、至少約14天、至少約21天、至少約25天、至少約28天、或至少約31天的時段。在一些實施方案中，當與給藥前血清ldl膽固醇水平相比，所述血清ldl膽固醇水平降低了至少約40％，並且相對於給藥前水平，所述降低持續至少約3天、至少約5天、至少約7天、至少約10天、至少約14天、至少約21天、至少約25天、至少約28天、或至少約31天的時段。在一些實施方案中，當與給藥前血清ldl膽固醇水平相比，所述血清ldl膽固醇水平降低了至少約45％，並且相對於給藥前水平，所述降低持續至少約3天、至少約5天、至少約7天、至少約10天、至少約14天、至少約21天、至少約25天、至少約28天、或至少約31天的時段。在一些實施方案中，當與給藥前血清ldl膽固醇水平相比，所述血清ldl膽固醇水平降低了至少約50％，並且相對於給藥前水平，所述降低持續至少約3天、至少約5天、至少約7天、至少約10天、至少約14天、至少約21天、至少約25天、至少約28天、或至少約31天的時段。在一些實施方案中，當與給藥前血清ldl膽固醇水平相比，所述血清ldl膽固醇水平降低了至少約55％，並且相對於給藥前水平，所述降低持續至少約3天、至少約5天、至少約7天、至少約10天、至少約14天、至少約21天、至少約25天、至少約28天、或至少約31天的時段。在一些實施方案中，當與給藥前血清ldl膽固醇水平相比，所述血清ldl膽固醇水平降低了至少約60％，並且相對於給藥前水平，所述降低持續至少約3天、至少約5天、至少約7天、至少約10天、至少約14天、至少約21天、至少約25天、至少約28天、或至少約31天的時段。在一些實施方案中，當與給藥前血清ldl膽固醇水平相比，所述血清ldl膽固醇水平降低了至少約65％，並且相對於給藥前水平，所述降低持續至少約3天、至少約5天、至少約7天、至少約10天、至少約14天、至少約21天、至少約25天、至少約28天、或至少約31天的時段。在一些實施方案中，當與給藥前血清ldl膽固醇水平相比，所述血清ldl膽固醇水平降低了至少約70％，並且相對於給藥前水平，所述降低持續至少約3天、至少約5天、至少約7天、至少約10天、至少約14天、至少約21天、至少約25天、至少約28天、或至少約31天的時段。在一些實施方案中，當與給藥前血清ldl膽固醇水平相比，所述血清ldl膽固醇水平降低了至少約75％，並且相對於給藥前水平，所述降低持續至少約3天、至少約5天、至少約7天、至少約10天、至少約14天、至少約21天、至少約25天、至少約28、或至少約31天的時段。在一些實施方案中，當與給藥前血清ldl膽固醇水平相比，所述血清ldl膽固醇水平降低了至少約80％，並且相對於給藥前水平，所述降低持續至少約3天、至少約5天、至少約7天、至少約10天、至少約14天、至少約21天、至少約25天、至少約28、或至少約31天的時段。在一些實施方案中，當與給藥前血清ldl膽固醇水平相比，所述血清ldl膽固醇水平降低了至少約85％，並且相對於給藥前水平，所述降低持續至少約3天、至少約5天、至少約7天、至少約10天、至少約14天、至少約21天、至少約25天、至少約28、或至少約31天的時段。在一些實施方案中，當與給藥前血清ldl膽固醇水平相比，所述血清ldl膽固醇水平降低了至少約90％，並且相對於給藥前水平，所述降低持續至少約3天、至少約5天、至少約7天、至少約10天、至少約14天、至少約21天、至少約25天、至少約28天、或至少約31天的時段。某些治療應用如本領域技術人員所應了解，與以下相關、涉及以下或可受以下影響的疾病可由本發明中所述的針對pcsk9的抗原結合蛋白處理：變化的膽固醇、ldl、ldlr、pcsk9、vldl-c、脫輔基蛋白b(「apob」)、脂蛋白a(「lp(a)」)、甘油三酯、hdl-c、非hdl-c及總膽固醇水平。一方面，針對pcsk9的抗原結合蛋白可用於治療和/或預防和/或降低與血清膽固醇水平升高相關或血清膽固醇水平升高有重大意義的疾病的風險的方法中。一方面，針對pcsk9的抗原結合蛋白可用於治療和/或預防和/或降低與pcsk9值升高相關或pcsk9值升高有重大意義的疾病的風險的方法中。一方面，針對pcsk9的抗原結合蛋白可用於治療和/或預防和/或降低與總膽固醇水平升高相關或總膽固醇水平升高有重大意義的疾病的風險的方法中。一方面，針對pcsk9的抗原結合蛋白可用於治療和/或預防和/或降低與非hdl膽固醇水平升高相關或非hdl膽固醇水平升高有重大意義的疾病的風險的方法中。一方面，針對pcsk9的抗原結合蛋白可用於治療和/或預防和/或降低與apob水平升高相關或apob水平升高有重大意義的疾病的風險的方法中。一方面，針對pcsk9的抗原結合蛋白可用於治療和/或預防和/或降低與lp(a)水平升高相關或lp(a)水平升高有重大意義的疾病的風險的方法中。一方面，針對pcsk9的抗原結合蛋白可用於治療和/或預防和/或降低與甘油三酯水平升高相關或甘油三酯水平升高有重大意義的疾病的風險的方法中。一方面，針對pcsk9的抗原結合蛋白可用於治療和/或預防和/或降低與vldl-c水平升高相關或vldl-c水平升高有重大意義的疾病的風險的方法中。一方面，針對pcsk9的抗原結合蛋白用於調節患者的血清ldl膽固醇水平。在一些實施方案中，針對pcsk9的抗原結合蛋白用於使血清ldl膽固醇的量從異常高的水平或甚至正常水平降低。在某些實施方案中，血清ldl膽固醇水平降低了至少約30％。在某些實施方案中，血清ldl膽固醇水平降低了至少約35％。在某些實施方案中，血清ldl膽固醇水平降低了至少約40％。在某些實施方案中，血清ldl膽固醇水平降低了至少約45％。在某些實施方案中，血清ldl膽固醇水平降低了至少約50％。在某些實施方案中，血清ldl膽固醇水平降低了至少約55％。在一些實施方案中，血清ldl膽固醇水平降低了至少約60％。在一些實施方案中，血清ldl膽固醇水平降低了至少約65％。在一些實施方案中，血清ldl膽固醇水平降低了至少約70％。在一些實施方案中，血清ldl膽固醇水平降低了至少約75％。在一些實施方案中，血清ldl膽固醇水平降低了至少約80％。在一些實施方案中，血清ldl膽固醇水平降低了至少約85％。在一些實施方案中，血清ldl膽固醇水平降低了至少約90％。一方面，針對pcsk9的抗原結合蛋白用於調節患者的血清pcsk9值。在某些實施方案中，針對pcsk9的抗原結合蛋白具有中和性。在一些實施方案中，針對pcsk9的抗原結合蛋白用於使pcsk9值從異常高的水平或甚至正常水平降低。在一些實施方案中，血清pcsk9值降低了至少約60％。在一些實施方案中，血清pcsk9值降低了至少約65％。在一些實施方案中，血清pcsk9值降低了至少約70％。在一些實施方案中，血清pcsk9值降低了至少約75％。在一些實施方案中，血清pcsk9值降低了至少約80％。在一些實施方案中，血清pcsk9值降低了至少約85％。在一些實施方案中，血清pcsk9值降低了至少約90％。一方面，針對pcsk9的抗原結合蛋白用於調節患者的總膽固醇水平。在某些實施方案中，針對pcsk9的抗原結合蛋白具有中和性。在一些實施方案中，針對pcsk9的抗原結合蛋白用於使總膽固醇的量從異常高的水平或甚至正常水平降低。在一些實施方案中，總膽固醇水平降低了至少約20％。在一些實施方案中，總膽固醇水平降低了至少約25％。在一些實施方案中，總膽固醇水平降低了至少約30％。在一些實施方案中，總膽固醇水平降低了至少約35％。在一些實施方案中，總膽固醇水平降低了至少約40％。在一些實施方案中，總膽固醇水平降低了至少約45％。在一些實施方案中，總膽固醇水平降低了至少約50％。在一些實施方案中，總膽固醇水平降低了至少約55％。在一些實施方案中，總膽固醇水平降低了至少約60％。一方面，針對pcsk9的抗原結合蛋白用於調節患者的非hdl膽固醇水平。在某些實施方案中，針對pcsk9的抗原結合蛋白具有中和性。在一些實施方案中，針對pcsk9的抗原結合蛋白用於使非hdl膽固醇從異常高的水平或甚至正常水平降低。在一些實施方案中，非hdl膽固醇水平降低了至少約30％。在一些實施方案中，非hdl膽固醇水平降低了至少約35％。在一些實施方案中，非hdl膽固醇水平降低了至少約40％。在一些實施方案中，非hdl膽固醇水平降低了至少約50％。在一些實施方案中，非hdl膽固醇水平降低了至少約55％。在一些實施方案中，非hdl膽固醇水平降低了至少約60％。在一些實施方案中，非hdl膽固醇水平降低了至少約65％。在一些實施方案中，非hdl膽固醇水平降低了至少約70％。在一些實施方案中，非hdl膽固醇水平降低了至少約75％。在一些實施方案中，非hdl膽固醇水平降低了至少約80％。在一些實施方案中，非hdl膽固醇水平降低了至少約85％。一方面，針對pcsk9的抗原結合蛋白用於調節患者的apob水平。在某些實施方案中，針對pcsk9的抗原結合蛋白具有中和性。在一些實施方案中，針對pcsk9的抗原結合蛋白用於使apob的量從異常高的水平或甚至正常水平降低。在一些實施方案中，apob水平降低了至少約25％。在一些實施方案中，apob水平降低了至少約30％。在一些實施方案中，apob水平降低了至少約35％。在一些實施方案中，apob水平降低了至少約40％。在一些實施方案中，apob水平降低了至少約45％。在一些實施方案中，apob水平降低了至少約50％。在一些實施方案中，apob水平降低了至少約55％。在一些實施方案中，apob水平降低了至少約60％。在一些實施方案中，apob水平降低了至少約65％。在一些實施方案中，apob水平降低了至少約70％。在一些實施方案中，apob水平降低了至少約75％。一方面，針對pcsk9的抗原結合蛋白用於調節患者的lp(a)水平。在某些實施方案中，針對pcsk9的抗原結合蛋白具有中和性。在一些實施方案中，針對pcsk9的抗原結合蛋白用於使lp(a)的量從異常高的水平或甚至正常水平降低。在一些實施方案中，lp(a)水平降低了至少約5％。在一些實施方案中，lp(a)水平降低了至少約10％。在一些實施方案中，lp(a)水平降低了至少約15％。在一些實施方案中，lp(a)水平降低了至少約20％。在一些實施方案中，lp(a)水平降低了至少約25％。在一些實施方案中，lp(a)水平降低了至少約30％。在一些實施方案中，lp(a)水平降低了至少約35％。在一些實施方案中，lp(a)水平降低了至少約40％。在一些實施方案中，lp(a)水平降低了至少約45％。在一些實施方案中，lp(a)水平降低了至少約50％。在一些實施方案中，lp(a)水平降低了至少約55％。在一些實施方案中，lp(a)水平降低了至少約60％。在一些實施方案中，lp(a)水平降低了至少約65％。如本領域技術人員所應了解，本發明的針對pcsk9的抗原結合蛋白可在治療上適用於治療和/或預防膽固醇相關疾病。在一些實施方案中，「膽固醇相關疾病」(其包括「血清膽固醇相關疾病」)包括以下任何一種或多種：家族性高膽固醇血症、非家族性高膽固醇血症、高脂血症、心臟病、代謝症候群、糖尿病、冠心病、中風、心血管疾病、阿茲海默症及通常血脂異常，其可表現為例如總血清膽固醇升高、ldl升高、甘油三酯升高、vldl升高和/或低hdl。可使用單獨或與一種或多種其它藥劑組合的abp治療的原發性及繼發性血脂異常的一些非限制性實例包括代謝症候群、糖尿病、家族性混合型高脂血症、家族性高甘油三酯血症、家族性高膽固醇血症(包括雜合子高膽固醇血症、純合子高膽固醇血症)、家族性載脂蛋白b-100缺陷症、多基因性高膽固醇血症、殘粒移去障礙病(remnantremovaldisease)、肝脂肪酶缺乏症、繼發於以下任一種的血脂異常：飲食不慎重、甲狀腺功能低下、藥物(包括雌激素及孕酮療法、β-阻斷劑及噻嗪利尿劑)、腎病症候群、慢性腎衰竭、庫欣氏症候群(cushing'ssyndrome)、原發性膽汁性肝硬化、糖原貯積病、肝癌、膽汁淤積、肢端肥大症、胰島瘤、單純性生長激素缺乏症及酒精誘發的高甘油三酯血症。abp還可適用於預防或治療動脈粥樣硬化疾病，例如像心血管性死亡、非心血管性死亡或全因死亡、冠心病、冠狀動脈疾病、外周動脈疾病、中風(缺血性及出血性)、心絞痛或腦血管疾病及急性冠狀動脈症候群、心肌梗塞及不穩定型心絞痛。在一些實施方案中，abp適用於降低以下的風險：致命性及非致命性心臟病發作、致命性及非致命性中風、某些類型的心臟手術、住院治療心臟衰竭、患有心臟病的患者的胸痛、和/或歸因於已確認的心臟病的心血管事件(如先前心臟病發作、先前心臟手術和/或伴有動脈堵塞跡象的胸痛)和/或移植相關血管疾病。在一些實施方案中，abp適用於預防或降低歸因於crp或hscrp升高的心血管風險。在一些實施方案中，abp及方法可用於降低復發性心血管事件的風險。如本領域技術人員所應了解，通常可經由使用他汀類處理(可治療或可預防)的病症或疾病也可受益於應用本發明抗原結合蛋白。此外，在一些實施方案中，可受益於阻止膽固醇合成或ldlr表達增加的疾病或病症也可用抗原結合蛋白的各種實施方案來治療。此外，如本領域技術人員所應了解，使用抗pcsk9抗體可尤其適用於治療糖尿病。不僅糖尿病為冠心病的風險因素，而且胰島素也會使pcsk9的表達增加。即，糖尿病人具有升高的血漿脂質水平(其可與高pcsk9水平相關)且可受益於降低那些水平。這總體上更詳細地論述於costet等(「hepaticpcsk9expressionisregulatedbynutritionalstatusviainsulinandsterolregulatoryelement-bindingprotein1c」,j.biol.chem.,281:6211-6218,2006)中，其全文以引用的方式併入本文。在一些實施方案中，向患有糖尿病、腹主動脈瘤、動脈粥樣硬化和/或周圍血管疾病者施用抗原結合蛋白以使其血清膽固醇水平降低至更安全的範圍。在一些實施方案中，向處於顯現本文所述的任何疾病的風險中的患者施用抗原結合蛋白。在一些實施方案中，向吸菸或過去吸菸(即，曾吸菸者)、具有高血壓或家族性早期心臟病發作史的受試者施用abp。在一些實施方案中，根據2004ncep治療目標，如果受試者處於中度或更高風險中，那麼向受試者施用abp。在一些實施方案中，如果受試者的ldl膽固醇水平大於160mg/dl，那麼向受試者施用abp。在一些實施方案中，如果受試者ldl膽固醇水平大於130(並且根據2004ncep治療目標，其具有中度或中度高的風險)，那麼施用abp。在一些實施方案中，如果受試者ldl膽固醇水平大於100(並且根據2004ncep治療目標，其具有高或極高風險)，那麼施用abp。在一些實施方案中，如果受試者ldl膽固醇水平大於80mg/dl，那麼施用abp。在一些實施方案中，如果受試者ldl膽固醇水平大於70mg/dl，那麼施用abp。醫師將能夠根據具體患者的個體概況選擇適當的治療適應症及目標脂質水平。指導治療高脂血症的一種充分接受的標準為國家膽固醇教育計劃(ncep)專家組關於成人的高血液膽固醇的檢測、評價及治療最終報告的第三次報告(成人治療組iii)(thethirdreportofthenationalcholesteroleducationprogram(ncep)expertpanelondetection,evaluation,andtreatmentofthehighbloodcholesterolinadults(adulttreatmentpaneliii)finalreport),nationalinstitutesofhealth,nih出版號02-5215(2002)，其印刷出版內容據此以引用的方式整體併入本文。在一些實施方案中，針對pcsk9的抗原結合蛋白用於治療或預防高膽固醇血症、高脂血症或血脂異常和/或製備用於高膽固醇血症、高脂血症或血脂異常和/或其它膽固醇相關疾病(如本文所指示的那些)的藥劑。在某些實施方案中，針對pcsk9的抗原結合蛋白用於治療或預防pcsk9活性正常的病狀，如高膽固醇血症。在所述病狀中，例如pcsk9活性降低至正常活性以下可提供治療作用。組合療法在某些實施方案中，提供治療膽固醇相關疾病，如高膽固醇血症、高脂血症或血脂異常的方法，其包括施用治療有效量的一種或多種針對pcsk9的抗原結合蛋白及另一治療劑。在某些實施方案中，在施用至少一種其它治療劑之前施用針對pcsk9的抗原結合蛋白。在某些實施方案中，與施用至少一種其它治療劑同時施用針對pcsk9的抗原結合蛋白。在某些實施方案中，在施用至少一種其它治療劑之後施用針對pcsk9的抗原結合蛋白。治療劑(除抗原結合蛋白之外)包括(但不限於)至少一種其它膽固醇(血清和/或全身膽固醇)降低劑。在一些實施方案中，藥劑增加ldlr的表達、已觀測到增加血清hdl水平、降低ldl水平或降低甘油三酯水平。示例性藥劑包括(但不限於)他汀類(阿託伐他汀(atorvastatin)、西立伐他汀(cerivastatin)、氟伐他汀(fluvastatin)、洛伐他汀(lovastatin)、美伐他汀(mevastatin)、匹伐他汀(pitavastatin)、普伐他汀(pravastatin)、羅素他汀(rosuvastatin)、辛伐他汀(simvastatin))、菸鹼酸(nicotinicacid)(煙酸(niacin))(尼克爾(niacor)、尼斯潘(niaspan)(緩慢釋放型煙酸)、斯洛-尼克因(slo-niacin)(緩慢釋放型煙酸)、克達匹(cordaptive)(拉羅匹侖(laropiprant)))、纖維酸(洛脂(lopid)(吉非羅齊(gemfibrozil))、曲科(tricor)(非諾貝特(fenofibrate)))、膽汁酸螯合劑(曲斯群(questran)(消膽胺(cholestyramine))、考來維侖(colesevelam)(維爾克爾(welchol))、考來替德(colestid)(考來替潑(colestipol)))、膽固醇吸收抑制劑(艾澤庭(zetia)(依澤替米貝(ezetimibe)))、菸鹼酸與他汀類組合(阿地維科(advicor)(洛伐他汀(lovastatin)及尼斯潘))、他汀類與吸收抑制劑組合(維妥力(vytorin)(左科(zocor)及艾澤庭))和/或脂質調節劑。在一些實施方案中，abp與pparγ激動劑、pparα/γ激動劑、鯊烯合酶抑制劑、cetp抑制劑、抗高血壓劑、抗糖尿病劑(如磺醯脲、胰島素、glp-1類似物、ddpiv抑制劑，例如甲福明(metaformin))、apob調節劑(如米普莫森(mipomersan))、mtp抑制劑和/或動脈硬化阻塞症(arteriosclerosisobliterans)治療組合。在一些實施方案中，abp與增加受試者的ldlr蛋白水平的藥劑，如他汀類、某些細胞激素樣制瘤素m、雌激素和/或某些草本成分(如小檗鹼(berberine))組合。在一些實施方案中，abp與增加受試者的血清膽固醇水平的藥劑(如某些抗精神病藥劑、某些hiv蛋白酶抑制劑、膳食要素(如高果糖、蔗糖、膽固醇或某些脂肪酸)及rxr、rar、lxr、fxr的某些核受體激動劑和拮抗劑)組合。在一些實施方案中，abp與增加受試者的pcsk9水平的藥劑，如他汀類和/或胰島素組合。兩者的組合可使其它藥劑的不合需要的副作用由abp緩和。在某些實施方案中，針對pcsk9的抗原結合蛋白可與至少一種用於炎症的治療劑一起使用。在某些實施方案中，針對pcsk9的抗原結合蛋白可與至少一種用於免疫疾病的治療劑一起使用。用於炎症及免疫疾病的示例性治療劑包括(但不限於)1型環氧酶(cox-1)及2型環氧酶(cox-2)抑制劑；38kda促分裂原活化蛋白激酶(p38-mapk)的小分子調節劑；炎症通路中涉及的細胞內分子的小分子調節劑，其中所述細胞內分子包括(但不限於)jnk、ikk、nf-κb、zap70及lck。用於炎症的某些示例性治療劑例如描述於c.a.dinarello和l.l.moldawerproinflammatoryandanti-inflammatorycytokinesinrheumatoidarthritis:aprimerforclinicians第3版(2001)amgeninc.thousandoaks,ca中。診斷應用在一些實施方案中，abp用作診斷工具。abp可用於分析樣品和/或受試者中存在的pcsk9的量。如本領域技術人員所應了解，所述abp無需為中和性abp。在一些實施方案中，診斷用abp不為中和性abp。在一些實施方案中，診斷用abp結合的表位不同於中和性abp所結合的表位。在一些實施方案中，兩種abp不彼此競爭。在一些實施方案中，本文公開的abp用於或提供於用於檢測哺乳動物組織或細胞中的pcsk9的分析試劑盒和/或方法中以篩選/診斷與pcsk9的水平變化相關的病症或疾病。試劑盒包含結合pcsk9的abp及指示abp與pcsk9的結合(如果存在)及任選地pcsk9蛋白水平的工具。可使用指示abp的存在的各種工具。舉例來說，螢光團、其它分子探針或酶可連接於abp且可以多種方式觀測abp的存在。篩選所述疾病的方法可涉及使用試劑盒，或僅使用一種公開的abp並確定abp是否結合樣品中的pcsk9。如本領域技術人員所應了解，高或升高的pcsk9水平將導致更大量的abp與樣品中的pcsk9結合。因此，abp結合程度可用於確定樣品中存在多少pcsk9。pcsk9的量大於預定量(例如不患有pcsk9相關疾病的人士將具有的量或範圍)的受試者或樣品可表徵為患有pcsk9介導的疾病。在一些實施方案中，向服用他汀類的受試者施用abp以確定他汀類是否已使受試者的pcsk9的量增加。在一些實施方案中，abp為非中和性abp且用於測定接受abp和/或他汀類治療的受試者的pcsk9的量。實施例以下實施例，包括進行的實驗及達成的結果，僅出於說明目的提供且不應被解釋為限制本發明。實施例1免疫及滴定生成抗pcsk9抗體及雜交瘤於為含有人類免疫球蛋白基因的小鼠的小鼠(abgenix,fremont,ca)中產生針對成熟形式的pcsk9(描述為圖1a中的序列，其中前結構域加下劃線)的抗體。兩組小鼠(組1及組2)用於產生針對pcsk9的抗體。組1包括xmg2-kl品系小鼠，其產生完全人類igg2κ及igg2λ抗體。組1小鼠用人類pcsk9免疫。使用基因庫序列作為參照(nm_174936)，利用標準重組技術製備pcsk9。組2包括xmg4-kl品系小鼠，其產生完全人類igg4κ及igg4λ抗體。組2小鼠也用人類pcsk9免疫。兩組小鼠均根據表3中的日程安排用抗原注射11次。在初次免疫時，各小鼠用總計10μg抗原注射，腹膜內遞送至腹部中。隨後用5ug劑量加強且注射方法在腹膜內注射至腹部中與在尾巴根部皮下注射之間交錯。對於腹膜內注射，抗原用金(sigma,目錄號t2684)製備成乳液，且對於皮下注射，抗原與礬(磷酸鋁)及cpg寡聚物混合。在第2至8次及第10次注射時，各小鼠用於佐劑礬凝膠中的總計5μg抗原注射。每隻小鼠5μg抗原的末次注射於磷酸鹽緩衝鹽水中遞送且遞送至2個部位中，50％ip至腹部中且50％sq在尾巴根部。免疫規劃概述於以下所示的表3中。表3用於滴定xenomouse動物的方案如下：costar3368中結合力板用中性鏈親和素(neutravadin)以8ug/ml(50ul/孔)塗布且在4℃下於1×pbs/0.05％疊氮化物中孵育過夜。使用titertek3循環洗滌法用ro水洗滌這些板。各板使用250ul1×pbs/1％牛乳阻斷且在室溫下孵育至少30分鐘。使用titertek3循環洗滌法，用ro水洗去阻斷物。接著捕捉於每孔50ul1×pbs/1％牛乳/10mmca2+(測定稀釋劑)中的2ug/ml的b-人類pcsk9且在室溫下孵育1小時。接著使用titertek3循環洗滌法，用ro水洗滌。對於一抗，一式兩份從1:100開始以1:3滴定血清。這是在每孔50ul測定稀釋劑中進行且在室溫下孵育1小時。接著使用titertek3循環洗滌法，用ro水洗滌。二抗為於每孔50ul測定稀釋劑中的400ng/ml的山羊抗人類iggfchrp。將其在室溫下孵育1小時。其接著使用titertek3循環洗滌法、用ro水洗滌且用紙巾拍幹。對於底物，使用一步tmb溶液(neogen,lexington,kentucky)(50ul/孔)且使其在室溫下顯色30分鐘。elisa測定中遵循的方案如下：對於包含無v5his標籤的b-pcsk9的樣品，採用以下方案：採用costar3368中結合力板(corninglifesciences)。各板用於1×pbs/0.05％疊氮化物中的8μg/ml的中性鏈親和素(50μl/孔)塗布。各板在4℃下孵育過夜。接著使用titertekm384板洗滌器(titertek,huntsville,al)洗滌各板。進行3循環洗滌。各板用250μl1×pbs/1％牛乳阻斷且在室溫下孵育約30分鐘。接著使用m384板洗滌器洗滌各板。進行3循環洗滌。捕捉物為無v5標籤的b-hupcsk9，並且在1×pbs/1％牛乳/10mmca2+中以2μg/ml添加(40μl/孔)。各板接著在室溫下孵育1小時。進行3循環洗滌。一式兩份從1:100開始以1:3滴定血清，且h行是空白的血清。於測定稀釋劑中以每孔50μl的體積進行滴定。在室溫下孵育各板1小時。接著，進行3循環洗滌。添加於1×pbs/1％牛乳/10mmca2+中的100ng/ml(1:4000)的山羊抗人類iggfchrp(50μl/孔)至板中且在室溫下孵育1小時。使用3循環洗滌法，再次洗滌各板。各板接著用紙巾拍幹。最終，添加1步tmb(neogen,lexington,kentucky)(50μl/孔)至板中且在室溫下30分鐘之後用1n鹽酸(50μl/孔)淬滅。使用titertek板讀取器在450nm下即刻讀取od值。用以檢測板結合的pcsk9的陽性對照為可溶性ldl受體(r&dsystems，目錄號2148ld/cf)及一式兩份於測定稀釋劑中從3μg/ml開始以1:3滴定的多克隆兔抗pcsk9抗體(caymenchemical#10007185)。ldlr用山羊抗ldlr(r&dsystems，目錄號af2148)及兔抗山羊iggfchrp在400ng/ml的濃度下檢測；兔多克隆抗體用山羊抗兔iggfc於測定稀釋劑中在400ng/ml的濃度下檢測。陰性對照為一式兩份於測定稀釋劑中從1:100開始以1:3滴定的天然xmg2-kl及xmg4-kl血清。對於包含具有v5his標籤的b-pcsk9的樣品，採用以下方案：採用costar3368中結合力板(corninglifesciences)。各板用於1×pbs/0.05％疊氮化物中的8μg/ml的中性鏈親和素(50μl/孔)塗布。各板在4℃下孵育過夜。接著使用titertekm384板洗滌器(titertek,huntsville,al)洗滌各板。進行3循環洗滌。各板用250μl1×pbs/1％牛乳阻斷且在室溫下孵育約30分鐘。接著使用m384板洗滌器洗滌各板。進行3循環洗滌。捕捉物為具有v5標籤的b-hupcsk9，並且在1×pbs/1％牛乳/10mmca2+中以2μg/ml添加(40μl/孔)。各板接著在室溫下孵育1小時。進行3循環洗滌。一式兩份從1:100開始以1:3滴定血清，且h行是空白的血清。於測定稀釋劑中以每孔50μl的體積進行滴定。在室溫下孵育各板1小時。接著，使用利用3循環洗滌法操作的m384板洗滌器洗滌各板。添加50μl/孔於1×pbs/1％牛乳/10mmca2+中的400ng/ml的山羊抗人類iggfchrp至板中且在室溫下孵育板1小時。使用3循環洗滌法，再次洗滌各板。各板接著用紙巾拍幹。最終，添加1步tmb(neogen,lexington,kentucky)(50μl/孔)至板中且板在室溫下30分鐘的後用1n鹽酸(50μl/孔)淬滅。使用titertek板讀取器在450nm下即刻讀取od值。陽性對照為ldlr、一式兩份於測定稀釋劑中從3μg/ml開始以1:3滴定的兔抗pcsk9。ldlr用山羊抗ldlr(r&dsystems，目錄號af2148)及兔抗山羊iggfchrp在400ng/ml的濃度下檢測；兔多克隆抗體用山羊抗兔iggfc於測定稀釋劑中在400ng/ml的濃度下檢測。人類抗his1.2,3及抗v51.7.1一式兩份於測定稀釋劑中從1μg/ml開始以1:3滴定；兩者均用山羊抗人類iggfchrp於測定稀釋劑中在400ng/ml的濃度下檢測。陰性對照為一式兩份於測定稀釋劑中從1:100開始以1:3滴定的天然xmg2-kl及xmg4-kl血清。通過elisa測定測試如所述用可溶性抗原免疫的小鼠的針對人類pcsk9的抗體的效價。表4概述elisa數據並且指示有一些小鼠似乎對pcsk9具有特異性。參見例如表4。因此，在免疫規劃結束時，選擇10隻小鼠(表4中用粗體表示)加以收穫，且如本文所述，分別從脾及淋巴結分離脾細胞及淋巴細胞。表4elisa結果的概述實施例2回收淋巴細胞、b細胞分離、融合及生成雜交瘤這個實施例概述如何回收免疫細胞以及如何生成雜交瘤。所選免疫過的小鼠通過頸椎脫位術處死且收穫並匯合來自各組的引流淋巴結。通過於dmem中研磨來使b細胞從淋巴組織解離以便從組織釋放細胞，並且將細胞懸浮於dmem中。對細胞計數，且添加每1億個淋巴細胞0.9mldmem至細胞沉澱中以溫和但完全重懸細胞。淋巴細胞與購自atcc的目錄號為crl1580的非分泌性骨髓瘤p3x63ag8.653細胞(kearney等，(1979)j.immunol.123,1548-1550)以1:4的比率混合。通過在400×g下離心4分鐘來溫和沉澱細胞混合物。在傾析上清液之後，使用1ml移液管溫和地混合細胞。在溫和攪拌下經1分鐘緩慢添加預加熱的來自sigma的peg/dmso溶液(目錄號p7306)(每百萬個b細胞1ml)，隨後混合1分鐘。然後在溫和攪拌下經2分鐘添加預加熱的idmem(每百萬個b細胞2ml)(無穀氨醯胺的dmem、l-穀氨醯胺、青黴素/鏈黴素、mem非必需胺基酸(皆來自invitrogen))。最終經3分鐘添加預加熱的idmem(每106個b細胞8ml)。融合細胞在400×g下短暫離心6分鐘且重懸於每百萬個b細胞20ml選擇培養基(dmem(invitrogen)、15％fbs(hyclone)，補充有l-穀氨醯胺、青黴素/鏈黴素、mem非必需胺基酸、丙酮酸鈉、2-巰基乙醇(皆來自invitrogen)、ha-重氮絲氨酸次黃嘌呤及opi(草醯乙酸鹽、丙酮酸鹽、牛胰島素)(均來自sigma)及il-6(boehringermannheim))中。細胞在37c下孵育20-30分鐘，然後重懸於200ml選擇培養基中且於t175燒瓶中培養3-4天，隨後進行96孔接種。因此，產生可產生針對pcsk9的抗原結合蛋白的雜交瘤。實施例3選擇pcsk9抗體本實施例概述如何表徵及選擇各種pcsk9抗原結合蛋白。評估分泌抗體(由在實施例1及2中產生的雜交瘤產生)與pcsk9的結合。基於結合數據及對pcsk9與ldlr結合的抑制以及親和力來選擇抗體。如下所述，通過elisa分析與可溶性pcsk9的結合。使用(表面等離振子共振)定量結合親和力。初級篩選對結合野生型pcsk9的抗體進行初級篩選。對兩個收穫物進行初級篩選。初級篩選包括elisa測定且使用以下方案進行：採用costar3702中結合力384孔板(corninglifesciences)。各板用於1×pbs/0.05％疊氮化物中的4μg/ml濃度的中性鏈親和素以每孔40μl的體積塗布。各板在4℃下孵育過夜。然後使用titertek板洗滌器(titertek,huntsville,al)洗滌各板。進行3循環洗滌。各板用90μl1×pbs/1％牛乳阻斷且在室溫下孵育約30分鐘。然後洗滌各板。再次進行3循環洗滌。捕捉樣品為無v5標籤的生物素化的pcsk9，並且在1×pbs/1％牛乳/10mmca2+中以0.9μg/ml以每孔40μl的體積添加。各板接著在室溫下孵育1小時。接著，使用利用3循環洗滌法操作的titertek板洗滌器洗滌各板。將10μl上清液轉移至40μl1×pbs/1％牛乳/10mmca2+中且在室溫下孵育1.5小時。再次使用利用3循環洗滌法操作的titertek板洗滌器洗滌各板。添加40μl/孔的於1×pbs/1％牛乳/10mmca2+中的100ng/ml(1:4000)濃度的山羊抗人類iggfcpod至板中且在室溫下孵育1小時。使用3循環洗滌法，再次洗滌各板。最終，添加40μl/孔的一步tmb(neogen,lexington,kentucky)至板中且在室溫下30分鐘之後用40μl/孔的1n鹽酸進行淬滅。使用titertek板讀取器在450nm下即刻讀取od值。初級篩選產生從兩個收穫物鑑定的總計3104個抗原特異性雜交瘤。基於最高elisaod，進一步推出每個收穫物1500個雜交瘤以達成總計3000個陽性物。確證性篩選接著針對與野生型pcsk9的結合再篩選3000個陽性物以確認產生穩定的雜交瘤。如下進行篩選：採用costar3702中結合力384孔板(corninglifesciences)。各板用於1×pbs/0.05％疊氮化物中的3μg/ml的中性鏈親和素以每孔40μl的體積塗布。各板在4℃下孵育過夜。接著使用titertek板洗滌器(titertek,huntsville,al)洗滌各板。進行3循環洗滌。各板用90μl1×pbs/1％牛乳阻斷且在室溫下孵育約30分鐘。接著使用m384板洗滌器洗滌各板。進行3循環洗滌。捕捉樣品為無v5標籤的b-pcsk9，並且在1×pbs/1％牛乳/10mmca2+中以0.9μg/ml以每孔40μl的體積添加。各板接著在室溫下孵育1小時。接著，使用3循環洗滌法洗滌各板。將10μl上清液轉移至40μl1×pbs/1％牛乳/10mmca2+中且在室溫下孵育1.5小時。再次使用利用3循環洗滌法操作的titertek板洗滌器洗滌各板。添加40μl/孔的於1×pbs/1％牛乳/10mmca2+中的100ng/ml(1:4000)的濃度的山羊抗人類iggfcpod至板中，且在室溫下孵育板1小時。再次使用利用3循環洗滌法操作的titertek板洗滌器洗滌各板。最終，添加40μl/孔的一步tmb(neogen,lexington,kentucky)至板中且在室溫下30分鐘之後用40μl/孔的1n鹽酸淬滅。使用titertek板讀取器在450nm下即刻讀取od值。在第二篩選中，重現總計2441個陽性物。這些抗體接著用於後續篩選中。小鼠交叉反應性篩選接著針對與小鼠pcsk9的交叉反應性篩選所述組的雜交瘤以確定抗體可結合人類pcsk9與小鼠pcsk9兩者。使用以下方案進行交叉反應性篩選：採用costar3702中結合力384孔板(corninglifesciences)。各板用於1×pbs/0.05％疊氮化物中的3μg/ml下的中性鏈親和素以每孔40μl的體積塗布。各板在4℃下孵育過夜。接著使用titertek板洗滌器(titertek,huntsville,al)洗滌各板。進行3循環洗滌。各板用90μl1×pbs/1％牛乳阻斷且在室溫下孵育約30分鐘。接著使用titertek板洗滌器洗滌各板。進行3循環洗滌。捕捉樣品為生物素化的小鼠pcsk9，並且在1×pbs/1％牛乳/10mmca2+中以1μg/ml以每孔40μl的體積添加。各板接著在室溫下孵育1小時。接著，使用利用3循環洗滌法操作的titertek板洗滌器洗滌各板。將50μl上清液轉移至各板中且在室溫下孵育1小時。再次使用3循環洗滌法洗滌各板。添加40μl/孔的於1×pbs/1％牛乳/10mmca2+中的100ng/ml(1:4000)濃度的山羊抗人類iggfcpod至板中且在室溫下孵育板1小時。使用3循環洗滌法，再次洗滌各板。最終，添加40μl/孔的一步tmb(neogen,lexington,kentucky)至板中且在室溫下30分鐘之後用40μl/孔的1n鹽酸淬滅。使用titertek板讀取器在450nm下即刻讀取od值。觀測到579個抗體與小鼠pcsk9交叉反應。這些抗體接著用於後續篩選中。d374y突變體結合篩選人類群體中的pcsk9中的d374y突變已有文獻記載(例如timmskm等，「amutationinpcsk9causingautosomal-dominanthypercholesterolemiainautahpedigree」,hum.genet.114:349-353,2004)。為確定抗體是否對野生型具有特異性或也結合pcsk9的d374y形式，接著針對與包含突變d374y的突變pcsk9序列的結合篩選樣品。篩選方案如下：使用costar3702中結合力384孔板(corninglifesciences)進行篩選。各板用於1×pbs/0.05％疊氮化物中的4μg/ml的中性鏈親和素以每孔40μl的體積塗布。各板在4℃下孵育過夜。接著使用titertek板洗滌器(titertek,huntsville,al)洗滌各板。進行3循環洗滌。各板用90μl1×pbs/1％牛乳阻斷且在室溫下孵育約30分鐘。接著使用titertek板洗滌器洗滌各板。進行3循環洗滌。各板用於1×pbs/1％牛乳/10mmca2+中的1μg/ml濃度的生物素化的人類pcsk9d374y塗布且在室溫下孵育1小時。接著使用titertek板洗滌器洗滌各板。進行3循環洗滌。晚期衰竭的雜交瘤培養上清液於pbs/牛乳/ca2+中1:5(10ml加40ml)稀釋且在室溫下孵育1小時。接著，將40μl/孔的於1×pbs/1％牛乳/10mmca2+中的1ug/ml的兔抗人類pcsk9(caymanchemical)及人類抗his1.2.3(1:2)滴定於各板上，接著在室溫下孵育各板1小時。接著使用titertek板洗滌器洗滌各板。進行3循環洗滌。添加40μl/孔的於1×pbs/1％牛乳/10mmca2+中的100ng/ml(1:4000)濃度的山羊抗人類iggfchrp至板中且在室溫下孵育板1小時。添加40μl/孔的於1×pbs/1％牛乳/10mmca2+中的100ng/ml(1:4000)濃度下的山羊抗兔iggfchrp至板中且在室溫下孵育板1小時。接著使用titertek板洗滌器洗滌各板。進行3循環洗滌。最終，添加40μl/孔的一步tmb(neogen,lexington,kentucky)至板中且在室溫下30分鐘之後用40μl/孔的1n鹽酸淬滅。使用titertek板讀取器在450nm下即刻讀取od值。超過96％的關於野生型pcsk9的陽性命中物(hit)也結合突變pcsk9。大規模受體配體阻斷篩選為篩選阻斷pcsk9結合ldlr的抗體，開發一種使用d374ypcsk9突變體進行的測定。所述突變體用於這個測定是因為其對ldlr具有更高的結合親和力，從而允許開發靈敏性更高的受體配體阻斷測定。使用以下方案進行受體配體阻斷篩選：使用costar3702中結合力384孔板(corninglifesciences)進行篩選。各板用於1×pbs/0.05％疊氮化物中的2μg/ml的山羊抗ldlr(r&d目錄號af2148)以每孔40μl的體積塗布。各板在4℃下孵育過夜。接著使用titertek板洗滌器(titertek,huntsville,al)洗滌各板。進行3循環洗滌。各板用90μl的1×pbs/1％牛乳阻斷且在室溫下孵育約30分鐘。接著使用titertek板洗滌器洗滌各板。進行3循環洗滌。捕捉樣品為ldlr(r&d，目錄號2148ld/cf)，並且在1×pbs/1％牛乳/10mmca2+中以0.4μg/ml以每孔40μl的體積添加。各板接著在室溫下孵育1小時又10分鐘。同時，20ng/ml的生物素化的人類d374ypcsk9與15微升雜交瘤衰竭上清液一起於nunc聚丙烯板中孵育且衰竭上清液濃度以1:5稀釋。各板接著在室溫下預孵育約1小時又30分鐘。接著，使用利用3循環洗滌法操作的titertek板洗滌器洗滌各板。將50μl/孔的預孵育混合物轉移至經ldlr塗布的elisa板上且在室溫下孵育1小時。為檢測ldlr結合的b-pcsk9，添加40μl/孔的於測定稀釋劑中的500ng/ml的抗生物素蛋白鏈黴親和素hrp至各板中。在室溫下孵育各板1小時。再次使用titertek板洗滌器洗滌各板。進行3循環洗滌。最終，添加40μl/孔的一步tmb(neogen,lexington,kentucky)至板中且在室溫下30分鐘之後用40μl/孔的1n鹽酸淬滅。使用titertek板讀取器在450nm下即刻讀取od值。篩選鑑定出384個抗體充分阻斷pcsk9與ldlr之間的相互作用，100個抗體強烈阻斷相互作用(od<0.3)。這些抗體使pcsk9與ldlr的結合相互作用受到大於90％的抑制(大於90％抑制)。關於阻斷劑子組的受體配體結合測定接著使用突變酶對在第一大規模受體配體抑制測定中鑑定的384個成員的中和劑子組重複進行受體配體測定。在384個成員的阻斷劑子組篩選測定中採用與大規模受體配體阻斷篩選中執行的方案相同的方案。這個重複篩選驗證初始篩選數據。對384個成員的子組的此篩選鑑定出85個抗體使pcsk9突變酶與ldlr之間的相互作用受到大於90％的阻斷。結合野生型pcsk9但不結合d374y突變體的阻斷劑的受體配體結合測定在含3000個供應物(sup)的初始組中，有86個抗體顯示特異性結合野生型pcsk9但不結合hupcsk9(d374y)突變體。測試這86個供應物阻斷野生型pcsk9結合ldlr受體的能力。採用以下方案：使用costar3702中結合力384孔板(corninglifesciences)進行篩選。各板用於1×pbs/0.05％疊氮化物中的10μg/ml的抗his1.2.3以每孔40μl的體積塗布。各板在4℃下孵育過夜。接著使用titertek板洗滌器(titertek,huntsville,al)洗滌各板。進行3循環洗滌。各板用90μl1×pbs/1％牛乳阻斷且在室溫下孵育約30分鐘。接著使用titertek板洗滌器洗滌各板。進行3循環洗滌。ldlr(r&dsystems#2148ld/cf或r&dsystems#2148ld)於1×pbs/1％牛乳/10mmca2+中以5μg/ml以每孔40μl的體積添加。各板接著在室溫下孵育1小時。接著，使用利用3循環洗滌法操作的titertek板洗滌器洗滌各板。同時，生物素化的人類野生型pcsk9與雜交瘤衰竭上清液一起於nunc聚丙烯板中預孵育。將22μl雜交瘤上清液轉移至33ul於1×pbs/1％牛乳/10mmca2+中的583ng/ml濃度的b-pcsk9中，從而產生最終b-pcsk9濃度＝350ng/ml及最終稀釋度為1:2.5的衰竭上清液。各板在室溫下預孵育約1小時又30分鐘。將50μl/孔的預孵育混合物轉移至捕捉ldlr的elisa板上且在室溫下孵育1小時。接著使用titertek板洗滌器洗滌各板。進行3循環洗滌。添加40μl/孔的於測定稀釋劑中的500ng/ml的抗生物素蛋白鏈黴親和素hrp至各板中。在室溫下孵育各板1小時。接著使用titertek板洗滌器洗滌各板。進行3循環洗滌。最終，添加40μl/孔的一步tmb(neogen,lexington,kentucky)至板中且在室溫下30分鐘之後用40μl/孔的1n鹽酸淬滅。使用titertek板讀取器在450nm下即刻讀取od值。篩選結果基於所述測定的結果，若干雜交瘤株系被鑑定為會產生與pcsk9發生所要相互作用的抗體。使用限制稀釋法從各株系分離可處理數目的克隆。克隆由雜交瘤株系編號(例如21b12)及克隆編號(例如21b12.1)表示。一般來說，通過本文所述的功能性測定未檢測到具體株系的不同克隆之間有差異。在少數情況下，從具體株系鑑定出在功能性測定中表達有差異的克隆，例如發現25a7.1不阻斷pcsk9/ldlr但25a7.3(在本文中稱為25a7)具有中和性。分離的克隆各自於50-100ml雜交瘤培養基中擴增且使其生長至衰竭(即細胞活力小於約10％)。如本文所述，通過elisa並通過體外功能性測試測定那些培養物的上清液中的針對pcsk9的抗體的濃度及效能。由於本文所述的篩選，鑑定出針對pcsk9的抗體的效價最高的雜交瘤。所選雜交瘤展示於圖2a-3d及表2中。實施例4.1從雜交瘤產生人類31h4igg4抗體這個實施例總體上描述如何從雜交瘤株系產生一種抗原結合蛋白。所用產生操作為產生50ml衰竭上清液，隨後進行蛋白質a純化。integra產生用於按比例放大且在稍後進行。雜交瘤株系31h4在t75燒瓶中於20ml培養基(integra培養基，表5)中生長。當雜交瘤在t75燒瓶中接近匯合時，將其轉移至integra燒瓶(integrabiosciences,integracl1000，目錄號90005)中。integra燒瓶為由膜分成兩個腔室，即小腔室和大腔室的細胞培養燒瓶。將20-30ml體積的來自31h4雜交瘤株系的雜交瘤細胞於integra培養基(關於integra培養基的組分，參見表5)中，依每毫升1×106個細胞的最小細胞密度放置在integra燒瓶的小腔室中。將單獨integra培養基(1l)放置在integra燒瓶的大腔室中。分隔兩個腔室的膜可讓小分子量的養分滲透，但雜交瘤細胞及由那些細胞產生的抗體則無法滲透。因此，雜交瘤細胞及由那些雜交瘤細胞產生的抗體保留在小腔室中。一周後，從integra燒瓶的兩個腔室除去培養基且更換為新鮮的integra培養基。分開保留從小腔室收集的培養基。在第二周生長之後，再次從小腔室收集培養基。從第1周收集的雜交瘤株系培養基與從第2周收集的雜交瘤株系培養基合併。離心所得收集的雜交瘤株系培養基樣品，以除去細胞及碎片(在3000rpm下15分鐘)且過濾(0.22μm)所得上清液。將經過澄清處理的條件培養基裝載於蛋白質a-瓊脂糖管柱上。任選地，培養基可先被濃縮，接著裝載於蛋白質a瓊脂糖管柱上。通過澈底pbs洗滌來除去非特異性結合物。通過從蛋白質a管柱標準酸性抗體洗脫(如50mm檸檬酸鹽，ph3.0)來回收結合於蛋白質a管柱上的抗體蛋白質。蛋白質a瓊脂糖池中的聚集抗體蛋白質通過尺寸排阻色譜或於陰離子交換劑樹脂(如q瓊脂糖樹脂)上進行的結合離子交換色譜除去。用於31h4蛋白質的特定iex條件為q-瓊脂糖hp，ph7.8-8.0。用在25個管柱體積中10mm-500mm的nacl梯度洗脫抗體。表5培養基組成實施例4.2從轉染的細胞產生重組31h4人類igg2抗體本實施例概述如何從轉染的細胞產生31h4igg2抗體。用編碼31h4重鏈及輕鏈的質粒轉染用於短暫表達的293細胞及用於穩定表達的cho細胞。通過除去細胞及細胞碎片來回收轉染細胞的條件培養基。將經過澄清處理的條件培養基裝載於蛋白質a-瓊脂糖管柱上。任選地，培養基可先被濃縮接著裝載於蛋白質a瓊脂糖管柱上。通過澈底pbs洗滌來除去非特異性結合物。通過從蛋白質a管柱標準酸性抗體洗脫(如50mm檸檬酸鹽，ph3.0)回收結合於蛋白質a管柱上的抗體蛋白質。蛋白質a瓊脂糖池中的聚集抗體蛋白質通過尺寸排阻色譜或於陰離子交換劑樹脂(如q瓊脂糖樹脂)上進行的結合離子交換色譜除去。用於31h4蛋白質的特定iex條件為q-瓊脂糖hp，ph7.8-8.0。用在25個管柱體積中10mm-500mm的nacl梯度洗脫抗體。實施例5從雜交瘤產生人類21b12igg4抗體本實施例概述如何從雜交瘤產生抗體21b12igg4。雜交瘤株系21b12在t75燒瓶中於培養基(integra培養基，表5)中生長。當雜交瘤在t75燒瓶中接近匯合時，將其轉移至integra燒瓶(integrabiosciences,integracl1000，目錄號90005)中。integra燒瓶為由膜分成兩個腔室，即小腔室和大腔室的細胞培養燒瓶。將20-30ml體積的來自31h4雜交瘤株系的雜交瘤細胞於integra培養基(關於integra培養基的組分，參見表5)中依每毫升1×106個細胞的最小細胞密度放置在integra燒瓶的小腔室中。將單獨integra培養基(1l)放置在integra燒瓶的大腔室中。分隔兩個腔室的膜可讓小分子量的養分滲透但雜交瘤細胞及由那些細胞產生的抗體則無法滲透。因此，雜交瘤細胞及由那些雜交瘤細胞產生的抗體保留在小腔室中。一周之後，從integra燒瓶的兩個腔室除去培養基且更換為新鮮的integra培養基。分開保留從小腔室收集的培養基。在第二周生長之後，再次從小腔室收集培養基。從第1周收集的雜交瘤株系培養基與從第2周收集的雜交瘤株系培養基合併。離心所得收集的雜交瘤株系培養基樣品以除去細胞及碎片(在3000rpm下15分鐘)且過濾(0.22μm)所得上清液。將經過澄清處理條件培養基裝載於蛋白質a瓊脂糖管柱上。任選地，培養基先被濃縮接著裝載於蛋白質a瓊脂糖管柱上。通過澈底pbs洗滌來除去非特異性結合物。通過從蛋白質a管柱標準酸性抗體洗脫(如50mm檸檬酸鹽，ph3.0)回收結合於蛋白質a管柱上的抗體蛋白質。蛋白質a瓊脂糖池中的聚集抗體蛋白質通過尺寸排阻色譜或於陰離子交換劑樹脂(如q瓊脂糖樹脂)上進行的結合離子交換色譜除去。用於21b12蛋白的特定iex條件為q-瓊脂糖hp，ph7.8-8.0。用在25個管柱體積中10mm-500mm的nacl梯度洗脫抗體。實施例6從轉染的細胞產生人類21b12igg2抗體本實施例概述如何從轉染的細胞產生21b12igg2抗體。用編碼21b12重鏈及輕鏈的質粒轉染細胞(用於短暫表達的293細胞及用於穩定表達的cho細胞)。通過除去細胞及細胞碎片來回收雜交瘤細胞的條件培養基。將經過澄清處理的條件培養基裝載於蛋白質a-瓊脂糖管柱上。任選地，培養基可先被濃縮接著裝載於蛋白質a瓊脂糖管柱上。通過澈底pbs洗滌來除去非特異性結合物。通過從蛋白質a管柱標準酸性抗體洗脫(50mm檸檬酸鹽，ph3.0)回收結合於蛋白質a管柱上的抗體蛋白質。蛋白質a瓊脂糖池中的聚集抗體蛋白質通過尺寸排阻色譜或於陽離子交換劑樹脂(如sp-瓊脂糖樹脂)上進行的結合離子交換色譜除去。用於21b12蛋白的特定iex條件為sp-瓊脂糖hp，ph5.2。用25個管柱體積的含有於20mm乙酸鈉緩衝液中的10mm-500mm的nacl梯度的緩衝液洗脫抗體。實施例7抗體重鏈及輕鏈的序列分析然後通過sanger(雙脫氧)核苷酸測序來測定以上抗體的輕鏈及重鏈的核酸及胺基酸序列。接著針對核酸序列推斷胺基酸序列。可變域的核酸序列描述於圖3e-3jj中。測定31h4、21b12及16f12的λ輕鏈可變區的cdna序列且分別公開為seqidno:153、95及105。測定31h4、21b12及16f12的重鏈可變區的cdna序列且分別公開為seqidno:152、94及104。λ輕鏈恆定區(seqidno:156)及igg2及igg4重鏈恆定區(seqidno:154及155)展示於圖3kk中。確定從那些cdna序列的每個所預測的多肽序列。預測31h4、21b12及16f12的λ輕鏈可變區的預測多肽序列且分別公開為seqidno:12、23及35，預測λ輕鏈恆定區(seqidno:156)，預測31h4、21b12及16f12的重鏈可變區且分別公開為seq.idno67、49及79。igg2及igg4重鏈恆定區(seqidno:154及155)。fr1、cdr1、fr2、cdr2、fr3、cdr3、fr4劃分展示於圖2a-3d中。基於序列數據，確定各重鏈或輕鏈可變區所源於的生殖系基因。在圖2a-3d中，指示生殖系基因的身分緊鄰於相應的雜交瘤株系且各自由獨特的seqidno表示。圖2a-3d還描述對表徵的其它抗體確定的胺基酸序列。實施例8表徵抗體與pcsk9的結合在已鑑定許多結合pcsk9的抗體後，使用若干種方法來定量並進一步表徵結合性質。在研究的一個方面中，進行biacore親和力分析。在研究的另一方面中，進行親和力分析。這些研究中採用的樣品及緩衝液呈現於下表6中。表6親和力測量根據製造商說明書對針對pcsk9的21b12抗體進行這個實施例中所述的(表面等離振子共振裝置，biacore,inc.,piscataway,nj)親和力分析。簡單來說，使用biacore2000光學生物傳感器(biacore,gehealthcare,piscataway,nj)進行表面等離振子共振實驗。各單個抗pcsk9抗體通過胺偶合以產生不超過200個共振單位(ru)的最大分析物結合反應(rmax)的程度固定於研究級cm5生物傳感器晶片。pcsk9蛋白的濃度以2倍間隔變化(分析物)且注射於固定的抗體表面上(以100μl/min的流速持續1.5分鐘)。補充有0.01％bsa的新鮮hbs-p緩衝液(ph7.4，0.01mhepes、0.15mnacl、0.005％表面活性劑p-20，biacore)用作結合緩衝液。在各別實驗中在ph7.4下測量各抗pcsk9抗體針對人類、小鼠及食蟹獼猴pcsk9蛋白的結合親和力(所用濃度為100、50、25、12.5、6.25、3.125及0nm)。此外，還用補充有0.01％bsa的ph6.0hbs-p緩衝液(ph6.0，0.01mhepes、0.15mnacl、0.005％表面活性劑p-20，biacore)，在ph6.0下測量抗體對人類pcsk9的結合親和力。所得結合信號與溶液中的游離pcsk9成正比。由使用雙重曲線單位點均質結合模型對競爭曲線進行非線性回歸分析(軟體，sapidyneinstrumentsinc.,boise,id)(對於6.0ph操作，n＝1)來獲得解離平衡常數(kd)。令人感興趣的是抗體似乎在較低ph下顯示更緊密的結合親和力(其中31h4、21b12及16f12的kd分別為12.5、7.3及29pm)。使用bia評價3.1電腦程式(biacore,inc.piscataway,nj)確定抗體結合動力學參數，包括ka(締合速率常數)、kd(解離速率常數)及kd(解離平衡常數)。較低的解離平衡常數指示抗體對pcsk9的親和力更大。通過親和力分析確定的kd值呈現於以下所示的表7.1中。表7.1抗體hpcsk9cynopcsk9mpcsk931h4210pm190pm6nm21b12190pm360pm460nm16f12470pm870pm6.4nm表7.2描述kon及koff速率。表7.2親和力測量根據製造商說明書對16f12及31h4進行(sapidyneinstruments,inc.,boise,id)親和力分析。簡單來說，reacti-geltm(6×)(pierce)用人類pcsk9蛋白、經v5標記的食蟹獼猴pcsk9蛋白或經his標記的小鼠pcsk9蛋白中的一種預塗布且用bsa阻斷。10或100pm抗體31h4及一種pcsk9蛋白接著在室溫下在pcsk9蛋白的各種濃度(0.1pm-25nm)下一起孵育8小時，隨後穿過經pcsk9塗布的珠粒。通過經螢光(cy5)標記的山羊抗人類igg(h+l)抗體(jacksonimmunoresearch)定量珠粒結合的31h4的量。結合信號與在結合平衡下的游離31h4的濃度成正比。由使用單位點均質結合模型對兩組競爭曲線進行非線性回歸來獲得平衡解離常數(kd)。使用pro軟體進行分析。這項分析中生成的結合曲線呈現為圖4a-4f。16f12抗體與31h4抗體兩者均顯示對人類pcsk9及食蟹獼猴pcsk9具有類似親和力，但對小鼠pcsk9的親和力約為1/250-1/10。在使用系統測試的兩個抗體中，抗體31h4顯示對人類pcsk9與食蟹獼猴pcsk9兩者的親和力均更高，kd分別為3及2pm。16f12顯示略微較弱的親和力，對於人類pcsk9的kd為15pm且對於食蟹獼猴pcsk9的kd為16pm。親和力分析的結果概述於以下所示的表8.1中。表8.1此外，操作sdspage以檢查樣品的質量及數量且展示於圖5a中。cpcsk9顯示在凝膠上以及根據由測定計算的活性結合濃度減少約50％。因此，mab對cpcsk9的kd調整為當前活性cpcsk9的50％。使用biacore溶液平衡結合測定測量abp21b12的kd值。使用kinexa測定，21b12.1顯示極少信號，因此，應用biacore溶液平衡測定。因為未觀測到關於抗體與固定pcsk9表面結合的顯著結合，所以使用胺偶合以約7000ru的密度將21b12抗體固定於cm5晶片的流槽4上。流槽3用作背景對照。將0.3、1及3nm的人類pcsk9或食蟹獼猴pcsk9與於pbs加0.1mg/mlbsa、0.005％p20中連續稀釋的21b12.1抗體樣品(在0.001至25nm的範圍內)混合。通過注射於21b12.1抗體表面上來測量混合溶液中的游離pcsk9的結合。在溶液中不存在mab下測定21b12.1表面上的100％pcsk9結合信號。pcsk9結合反應隨mab的濃度增加而降低指示pcsk9與溶液中的mab結合，這阻斷pcsk9結合固定的肽體表面。將pcsk9結合信號相對於mab濃度繪圖，於kinexaprotm軟體中使用單位點均質結合模型由三組曲線(0.3、1及3nm固定pcsk9濃度)計算kd。儘管從kinexa測定及sds-凝膠觀測到cpcsk9具有較低的蛋白質濃度，但此處不調整其濃度，因為cpcsk9的濃度不用於計算kd。結果顯示於下表8.2及圖5b-5d中。圖5b描述在3種不同hpcsk9濃度下進行的針對hpcsk9的溶液平衡測定的結果。圖5c描述針對mpcsk9的一組類似結果。圖5d描述以上biacore捕捉測定的結果。表8.2實施例931h4及21b12阻斷d374ypcsk9/ldlr結合的功效這個實施例提供兩種抗體阻斷pcsk9d374y結合ldlr的能力的ic50值。透明384孔板(costar)用2微克/毫升的於緩衝液a(100mm二甲胂酸鈉，ph7.4)中稀釋的山羊抗ldl受體抗體(r&dsystems)塗布。各板用緩衝液a充分洗滌，然後用緩衝液b(含1％牛乳的緩衝液a)阻斷2小時。在洗滌之後，各板與0.4微克/毫升的於緩衝液c(補充有10mmcacl2的緩衝液b)中稀釋的ldl受體(r&dsystems)一起孵育1.5小時。與此孵育同時，20ng/ml生物素化的d374ypcsk9與各種濃度的於緩衝液a中稀釋的31h4igg2、31h4igg4、21b12igg2或21b12igg4抗體、或單獨緩衝液a(對照)一起孵育。洗滌含有ldl受體的板且將生物素化的d374ypcsk9/抗體混合物轉移至其中並在室溫下孵育1小時。通過依次與於緩衝液c中500ng/ml的抗生物素蛋白鏈黴親和素-hrp(biosource)、及tmb底物(kpl)一起孵育來檢測生物素化的d374y與ldl受體的結合。信號用1nhcl淬滅且在450nm下讀取吸光度。這項結合研究的結果展示於圖6a-6d中。概括來說，確定各抗體的ic50值且得知其為31h4igg2199pm(圖6a)、31h4igg4156pm(圖6b)、21b12igg2170pm(圖6c)、及21b12igg4169pm(圖6d)。在這項測定中，抗體還阻斷野生型pcsk9與ldlr的結合。實施例10細胞ldl攝取測定這個實施例證明各種抗原結合蛋白降低細胞攝取ldl的能力。人類hepg2細胞於補充有10％fbs的dmem培養基(mediatech,inc)中以每孔5×105個細胞的濃度接種於黑色透明底部的96孔板(costar)中且在37℃(5％co2)下孵育過夜。為形成pcsk9與抗體的複合物，2μg/mld374y人類pcsk9與各種濃度的於攝取緩衝液(含1％fbs的dmem)中稀釋的抗體或單獨攝取緩衝液(對照)一起在室溫下孵育1小時。在用pbs洗滌細胞之後，將d374ypcsk9/抗體混合物轉移至細胞中，隨後轉移於攝取緩衝液中稀釋的最終濃度為6μg/ml的ldl-bodipy(invitrogen)。在37℃(5％co2)下孵育3小時之後，細胞用pbs充分洗滌且通過safiretm(tecan)在480-520nm(激發)及520-600nm(發射)下檢測細胞螢光信號。細胞攝取測定的結果展示於圖7a-7d中。概括來說，確定各抗體的ic50值且得知其為31h4igg216.7nm(圖7a)、31h4igg413.3nm(圖7b)、21b12igg213.3nm(圖7c)、及21b12igg418nm(圖7d)。這些結果證明所施用的抗原結合蛋白可降低pcsk9(d374y)阻斷細胞攝取ldl的效應。在這項測定中，抗體還阻斷野生型pcsk9的效應。實施例116天研究中31h4抗體的血清膽固醇降低效應為評估經由針對pcsk9蛋白的抗體療法在野生型(wt)小鼠中達成的總血清膽固醇(tc)降低，執行以下程序。在整個實驗持續時間中，向從jacksonlaboratory(barharbor,me)獲得的雄性wt小鼠(c57bl/6品系，9-10周齡，17-27g)餵以正常食物(harland-teklad，膳食2918)。在t＝0時經由小鼠的尾靜脈以10mg/kg的水平向小鼠施用抗pcsk9抗體31h4(2mg/ml於pbs中)或對照igg(2mg/ml於pbs中)。還另設首次接受實驗的小鼠作為首次接受實驗對照組。給藥組及處死時間展示於表9中。表9在表9中所示的預定時間點用co2窒息法處死小鼠。經由腔靜脈將血液收集至eppendorf管中且使其在室溫下凝結30分鐘。樣品接著於臺式離心機中在12,000×g下短暫離心10分鐘以分離血清。使用hitachi912臨床分析儀及roche/hitachitc和hdl-c試劑盒測量血清總膽固醇及hdl-c。實驗的結果展示於圖8a-8d中。概括來說，抗體31h4所施用的小鼠顯示歷經實驗過程血清膽固醇水平降低(圖8a及圖8b)。此外，應注意小鼠還顯示hdl水平降低(圖8c及圖8d)。對於圖8a及圖8c，變化百分比是相對於相同時間點的對照igg(*p<0.01，#p<0.05)。對於圖8b及圖8d，變化百分比是相對於在t＝0小時時測量的首次接受實驗的動物中的總血清膽固醇及hdl水平(*p<0.01，#p<0.05)。就hdl水平降低來說，應注意，本領域技術人員應了解小鼠的hdl降低不指示hdl降低將發生在人類中且僅另外反映生物體中的血清膽固醇水平已降低。應注意小鼠轉運高密度脂蛋白(hdl)粒子中的大多數血清膽固醇，這不同於人類，人類運載ldl粒子上的大多數血清膽固醇。在小鼠中，總血清膽固醇的測量結果最接近類似於血清hdl-c的水平。小鼠hdl含有載脂蛋白e(apoe)，其為ldl受體(ldlr)的配體且使ldl被ldlr清除。因此，在小鼠中，檢查hdl為本實施例的適當指標(應了解並不預期人類的hdl降低)。舉例來說，相反，人類hdl不含apoe且不為ldlr的配體。因為pcsk9抗體使小鼠中的ldlr表達增加，所以肝臟可清除更多hdl且因此降低血清hdl-c水平。實施例126天研究中抗體31h4對ldlr水平的效應本實施例證明如所預測，抗原結合蛋白會隨時間改變受試者的ldlr的水平。進行蛋白質印跡分析以確定抗體31h4對ldlr水平的效應。從實施例13中所述的處死的小鼠獲得的50-100mg肝臟組織於0.3ml含有完全蛋白酶抑制劑(roche)的ripa緩衝液(santacruzbiotechnologyinc.)中均質化。組織勻漿在冰上孵育30分鐘且離心以沉澱細胞碎片。使用biorad蛋白質測定試劑(bioradlaboratories)測量上清液中的蛋白質濃度。使100μg蛋白質在70℃下變性10分鐘且於4-12％bis-trissds梯度凝膠(invitrogen)上分離。將蛋白質轉移至0.45μmpvdf膜(invitrogen)中且在室溫下於含有5％脫脂牛乳的洗滌緩衝液(50mmtris(ph7.5)、150mmnacl、2mmcacl2及0.05％吐溫20(tween20))中阻斷1小時。接著在室溫下用1:2000山羊抗小鼠ldlr抗體(r&dsystem)或1:2000抗β肌動蛋白(actin)(sigma)探測印跡1小時。簡短洗滌印跡且與1:2000牛抗山羊igg-hrp(santacruzbiotechnologyinc.)或1:2000山羊抗小鼠igg-hrp(upstate)一起孵育。在室溫下孵育1小時之後，充分洗滌印跡且使用eclplus試劑盒(amershambiosciences)檢測免疫反應性條帶。蛋白質印跡顯示在抗體31h4存在下，ldlr蛋白水平增加，如圖9中所述。實施例1313天研究中抗體31h4的血清膽固醇降低效應為評估在13天研究中經由針對pcsk9蛋白的抗體療法在野生型(wt)小鼠中達成的總血清膽固醇(tc)降低，執行以下程序。在整個實驗持續時間中，向從jacksonlaboratory(barharbor,me)獲得的雄性wt小鼠(c57bl/6品系，9-10周齡，17-27g)餵以正常食物(harland-teklad，膳食2918)。在t＝0時經由小鼠的尾靜脈以10mg/kg的水平向小鼠施用抗pcsk9抗體31h4(2mg/ml於pbs中)或對照igg(2mg/ml於pbs中)。還另設首次接受實驗的小鼠作為首次接受實驗對照組。給藥組及處死時間展示於表10中。處死動物且如實施例13中一般提取並製備肝臟。表10當將6天實驗擴展至13天研究時，在6天研究中觀測到的相同血清膽固醇降低效應在13天研究中也被觀測到。更具體來說，以10mg/kg給藥的動物顯示在第3天血清膽固醇降低31％，截至第13天，其逐漸返回至給藥前水平。圖10a描述這項實驗的結果。圖10c描述用10mg/kg劑量的31h4及用也為10mg/kg的另一抗體16f12重複以上程序的結果。給藥組及處死時間展示於表11中。表11如圖10c中所示，在僅單次劑量之後，16f12與31h4兩者均致使總血清膽固醇顯著且實質性降低並且持續超過一周(10天或10天以上)提供益處。重複的13天研究的結果與首個13天研究的結果一致，其中觀測到在第3天血清膽固醇水平降低26％。對於圖10a及圖10b，變化百分比是相對於相同時間點時的對照igg(*p<0.01)。對於圖10c，變化百分比是相對於相同時間點時的對照igg(*p<0.05)。實施例1413天研究中抗體31h4對hdl水平的效應還檢查實施例15中的動物的hdl水平。小鼠的hdl水平降低。更具體來說，以10mg/kg給藥的動物顯示在第3天hdl水平降低33％，截至第13天，其逐漸返回至給藥前水平。圖10b描述實驗的結果。在第3天，hdl水平降低34％。圖10b描述重複的13天實驗的結果。如本領域技術人員所應了解，儘管抗體將降低小鼠hdl，但不預期會發生在人類中，因為人類與其它生物體(如小鼠)中存在hdl差異。因此，小鼠hdl的降低不指示人類hdl的降低。實施例15重複施用抗體會產生持續的抗原結合肽益處為驗證以上實施例中獲得的結果可用其它劑量延長以達成進一步益處，用圖11a中所述的給藥日程安排重複實施例15及16中的實驗。結果呈現於圖11b中。如在圖11b中的圖表可見，儘管因為所有小鼠皆接受初始31h4抗原結合蛋白注射，兩組小鼠均顯示總血清膽固醇的顯著降低，但接受額外31h4abp注射的小鼠顯示持續的總血清膽固醇降低，而僅接受對照注射的那些小鼠最終顯示其總血清膽固醇增加。對於圖11，變化百分比是相對於在t＝0小時時的首次接受實驗的動物(*p<0.01，**p<0.001)。這個實施例的結果證明不同於重複用藥會由於受試者的生物調整而導致功效降低的其它膽固醇治療方法，本發明方法在檢查的時期內似乎不遭受這個問題。此外，這表明在先前實施例中觀測的總血清膽固醇或hdl膽固醇水平返回至基線並非歸因於受試者所顯現的某種治療抗性，而是歸因於受試者中抗體可用性的消除。實施例16pcsk9抗體治療膽固醇相關疾病的用途向展現膽固醇相關疾病(其中膽固醇(如血清膽固醇)降低可有益)的人類患者施用治療有效量的pcsk9抗體31h4(或例如21b12)。在治療期間定時監測患者以確定疾病的症狀是否已減弱。在治療之後，發現相較於未治療的患者，經受用pcsk9抗體治療的患者的血清膽固醇水平降低。實施例17pcsk9抗體治療高膽固醇血症的用途向展現高膽固醇血症的症狀的人類患者施用治療有效量的pcsk9抗體，如31h4(或例如21b12)。在治療期間定時監測人類患者以確定血清膽固醇水平是否已降低。在治療之後，發現相較於未接受治療的關節炎患者，接受用pcsk9抗體治療的患者的血清膽固醇水平降低。實施例18pcsk9抗體預防冠心病和/或復發性心血管事件的用途鑑定處於顯現冠心病的風險中的人類患者。向患者單獨、與他汀類(例如辛伐他汀)並行或依序施用治療有效量的pcsk9抗體，如31h4(或例如21b12)。在治療期間定時監測人類患者以確定患者的總血清膽固醇水平是否變化。在整個預防性治療中，發現相較於未接受治療的患者，接受用pcsk9抗體治療的患者的血清膽固醇降低，進而降低其冠心病或復發性心血管事件的風險。實施例19pcsk9抗原結合蛋白預防高膽固醇血症的用途經由家族病史分析和/或生活方式和/或當前膽固醇水平來鑑定展現顯現高膽固醇血症的風險的人類患者。向受試者定期施用(例如每周一次)治療有效量的pcsk9抗體31h4(或例如21b12)。在治療期間定時監測患者以確定血清膽固醇水平是否已降低。在治療之後，發現相較於未治療的受試者，經受用pcsk9抗體預防性治療的受試者的血清膽固醇水平降低。實施例20用以評價人類抗pcsk9抗體在健康受試者中的安全性、耐受性、藥物動力學及藥效學的1期、隨機、雙盲、安慰劑對照的、遞升單次劑量研究這項研究為用以評價人類抗pcsk9抗體(單克隆抗體21b12)在健康受試者中的安全性、耐受性、pk、藥效學(pd)(ldl-c)及免疫原性的隨機、雙盲、安慰劑對照的、遞升單次劑量研究。受試者以3:1比率(21b12:安慰劑；每劑量組8個受試者，7組總計56個受試者)隨機分組以接受7、21、70、210或420mgsc劑量的21b12、或相應安慰劑；或21或420mgiv劑量的21b12、或相應安慰劑。56個受試者被隨機分組且接受研究性產品(42個21b12、14個安慰劑)；40個受試者(30個21b12、10個安慰劑)通過sc施用途徑接受研究性產品，且16個受試者(12個21b12、4個安慰劑)通過iv途徑接受研究性產品。接受研究性產品的56個受試者中的53個(95％)完成所述研究。接受21b12的3個受試者撤消完全同意書且未完成研究。研究群體主要由男性(54[96％])構成且平均年齡為31.2(範圍：20至45)歲。86％的受試者為白人，繼而為9％西班牙人/拉丁美洲人、4％黑人及1％其他人種。治療組之間的平均基線ldl-c值類似且在113至143mg/dl的範圍內。在這項研究中，在單次劑量≥70mgsc下，21b12使ldl-c降低了平均55％至60％，其中效應的持續時間隨劑量而變。在給藥2周內觀測到ldl-c最低點。在單次劑量≥70mgsc下觀測到對pcsk9的完全抑制，這與所見的對循環ldl-c的效應良好相關。pk分析顯示21b12展現非線性(隨濃度而變)消除。平均tmax在4至6天的範圍內。如所預期，最高中值最大觀測濃度(cmax)及從時間0至∞的濃度-時間曲線下面積(auc0-∞)出現在420mgiv組中且分別為139μg/ml及1550天·微克/毫升。報導接受任何劑量的21b12的42個受試者中的29個(69％)及接受安慰劑的14個受試者中的10個(71％)有治療突發性不良事件。受試者不良事件發生率與21b12的劑量之間、或受試者不良事件發生率與21b12的施用途徑(sc對iv)之間無明顯關聯。無不良事件被報導為嚴重不良事件，且無受試者由於不良事件而中止研究。不存在與研究有關的死亡。報導接受21b12的42個受試者中的18個(43％)及接受安慰劑的14個受試者中的10個(71％)有治療相關不良事件。受試者治療相關不良事件發生率與21b12的劑量之間、或受試者治療相關不良事件發生率與21b12的施用途徑(sc對iv)之間無明顯關聯。無趨勢指示21b12對所選實驗室變量、心電圖(ecg)或生命徵象具有臨床重要影響。在這項研究中，在高達420mg的單次sc及iv劑量下，21b12似乎被良好耐受。測試來自這項研究中招募的受試者的血清樣品中抗21b12抗體的存在(基線)或顯現(治療後)。來自接受21b12的所有42個受試者的樣品皆為抗21b12抗體陰性。實施例21用以評價人類抗pcsk9抗體在服用穩定劑量的他汀類的患有高脂血症的受試者中的安全性、耐受性、藥物動力學及藥效學的1期、隨機、雙盲、安慰劑對照的、遞升多次劑量研究這項研究為使用人類抗pcsk9抗體(單克隆抗體21b12)在當前服用穩定劑量的他汀類的高血脂(例如高膽固醇)受試者中進行的1b期、隨機、雙盲、安慰劑對照的、遞升多次劑量研究。所述研究具有7個組。所有組的目標皆包括表徵21b12的安全性、耐受性及免疫原性以及表徵pk和pd(ldl-c及pcsk9)。研究的組1至5表示在服用穩定低至中等劑量的他汀類的高膽固醇受試者中進行的21b12劑量遞增部分。組1至5中的服用穩定每日羅素他汀<40mg、阿託伐他汀<80mg或辛伐他汀20-80mg歷時≥1個月的具有ldl-c(70-200mg/dl)的受試者(n＝每組8個受試者)以3:1比率隨機分組以分別接受5種21b12sc劑量中的一種(14或35mgqw，6次；或140mg或280mgq2w，3次；或420mgq4w，2次)或相應安慰劑。於服用高劑量的他汀類(阿託伐他汀80mg或羅素他汀40mg)的高膽固醇受試者中執行組6。這組中的受試者(n＝12)服用羅素他汀40mg或阿託伐他汀80mg並且以3:1比率隨機分組以分別接受21b12(140mgscq2w，3次)或相應安慰劑。於患有雜合子家族性高膽固醇血症(使用who標準進行鑑定)的受試者中執行組7；這組中的受試者(n＝6)以2:1比率隨機分組以分別接受21b12(140mgscq2w，3次)或相應安慰劑。為清楚起見，組1接受每周一次14mg21b12的sc劑量，6次。組2接受每周一次35mg21b12的sc劑量，6次。組3接受每隔一周一次140mg21b12的sc劑量，3次。組4接受每隔一周一次280mg21b12的sc劑量，3次。組5接受每四周420mg21b12的sc劑量，2次。從已被招募且隨機分組以接受21b12或安慰劑的40個受試者獲得初步結果。在這40個受試者中，28個受試者已接受≥1劑的研究性產品(21b12或安慰劑)且因此表示初步安全性分析組(對治療不知情)。對於皆來自組1至4的這28個受試者可獲得初步盲法安全性數據。尚未報導死亡、嚴重不良事件、或歸因於不良事件的早期退出。總體來說，已報導已接受≥1劑的研究性產品的28個受試者中的15個(54％)有至少1起不良事件。大多數不良事件(對治療不知情)是針對單一受試者報導，其中疲勞、關節痛、便秘及病毒性上呼吸道感染除外，報導28個受試者中的2個(7％)有以上每一種。對於組1、2及3可獲得初步藥效學結果(對治療不知情)。觀測到服用穩定中等劑量的他汀類的受試者的循環ldl-c以隨21b12劑量而變的方式降低。在初始給藥2周內觀測到ldl-c最低點且在組3(140mgq2wsc，3次)中，所述最低點在降低60％至80％的範圍內。在組3中觀測到對pcsk9的近乎完全抑制，這與所見的對循環ldl-c的效應良好相關。在最終結果中，組1-6中的受試者(n＝51)被隨機分組以接受21b12(n＝39)或安慰劑(n＝12)；26個受試者(51％)為男性；平均(sd)年齡為58(7)歲。未報導死亡或嚴重不良事件(ae)且無受試者由於ae而中止研究。未檢測到針對21b12的中和性抗體。組1-5中的服用低至中等劑量的他汀類的受試者的平均ldl-c降低為最大降低多達81％(相對於安慰劑)，且在3次每兩周一次21b12sc給藥之後，在給藥間隔結束時(即在第6周時)降低為75％(相對於安慰劑)，且在2次每4周sc給藥之後，在給藥間隔結束時(即在第8周時)降低為66％(相對於安慰劑)。組1-5中的服用低至中等劑量的他汀類的受試者的最大ldl-c降低為最大降低多達81％(相對於安慰劑)；且在給藥間隔結束時降低為75％(相對於安慰劑)(圖14)。效應的量值及持續時間隨劑量而變。在更高劑量下，不可檢測到血漿pcsk9。類似地，在3次每兩周一次給藥之後，在給藥間隔結束時，服用高劑量他汀類的受試者(組6)的平均ldl-c降低為63％(相對於安慰劑)，且最大ldl-c降低為73％(相對於安慰劑)(圖15)。這些數據顯示取決於給藥方案，歷經6周重複21b12sc給藥使服用低至中等或高劑量他汀類的受試者的循環ldl-c降低多達81％(相對於安慰劑)，且無嚴重ae。高劑量他汀類組與低至中等他汀類劑量組之間21b12的ldl-c降低效應類似。在給藥間隔結束時，組1-5中的服用低至中等劑量的他汀類的受試者的平均pcsk9水平降低多達94％(相對於安慰劑)，數據未示出。在給藥間隔結束時，組1-5中的服用低至中等劑量的他汀類的受試者的平均apob降低多達54％(相對於安慰劑)，並且在研究期間最大降低在48％(35mgqw)至59％的範圍內(140mg及280mgq2w以及420mgq4w)(p<0.001)(圖16)。此外，在給藥間隔結束時，組1-6中的服用低至中等及高劑量的他汀類的受試者的平均lp(a)降低多達43％(相對於安慰劑)(圖17)。在給藥間隔結束時(即第6周，在第三次每兩周一次21b12sc給藥之後2周)，組7中的hefh受試者的平均ldl-c降低為65％(相對於安慰劑)，且最大ldl-c降低為70％(相對於安慰劑)(圖18)。在給藥間隔期間的ldl-c降低與在不患有hefh的受試者中觀測到的ldl-c降低類似。在21b12治療之後，在hefh受試者中不可檢測到循環pcsk9。在給藥間隔結束時(即第6周，在第三次每兩周一次21b12sc給藥之後2周)，組7中的hefh受試者的平均血清pcsk9值降低為78％(相對於安慰劑)(圖19)。在給藥間隔結束時(即第6周，在第三次每兩周一次21b12sc給藥之後2周)，組7中的hefh受試者的平均總膽固醇降低多達42％(相對於安慰劑)，且最大總膽固醇降低為47％(相對於安慰劑)(圖20)。在給藥間隔結束時(即第6周，在第三次每兩周一次21b12sc給藥之後2周)，組7中的hefh受試者的平均非hdl膽固醇降低為61％(相對於安慰劑)，且最大非hdl膽固醇降低為67％(相對於安慰劑)(圖21)。在給藥間隔結束時(即第6周，在第三次每兩周一次21b12sc給藥之後2周)，組7中的hefh受試者的平均apob水平降低多達47％(相對於安慰劑)，且最大apob降低為57％(相對於安慰劑)(圖22)。在給藥間隔結束時(即第6周，在第三次每兩周一次21b12sc給藥之後2周)，組7中的hefh受試者的平均脂蛋白a(lp(a))降低為50％(相對於安慰劑)(圖23)。在組7中，21b12使正在接受照護標準療法的患有hefh及高脂血症的受試者的未結合的pcsk9水平降低且大致上降低其循環ldl-c水平。測試的每兩周一次給藥使hefh受試者的ldl-c降低，這與非hefh受試者的ldl-c降低類似。未報導嚴重ae。實施例22用以評價人類抗pcsk9抗體在患有雜合子家族性高膽固醇血症的患者中的耐受性及功效的雙盲、隨機、安慰劑對照研究這項研究的目標在於相較於安慰劑評價12周皮下(sc)注射人類抗pcsk9抗體(單克隆抗體21b12)對患有雜合子家族性高膽固醇血症(hefh)的受試者的低密度脂蛋白膽固醇(ldl-c)相對於基線的變化百分比的影響。這項研究為評價單克隆抗體21b12在診斷有hefh的受試者中的安全性、耐受性及功效的雙盲、隨機、分層、安慰劑對照的臨床試驗。計劃總計招募150個受試者。滿足所有納入/排除標準的受試者將以相等分配量隨機分成3個治療組：單克隆抗體21b12，350mg或420mgq4wsc(每4周一次，皮下)或安慰劑q4wsc。將通過篩選ldl-c水平(<130mg/dl[3.4mmol/l]對≥130mg/dl)及在基線狀態下的依澤替米貝使用(是對否)來對隨機分組分層。隨機分組應在用於確定合格性的篩選ldl-c評估的5-10天內進行。將對單克隆抗體21b12及安慰劑不知情。研究隨訪在第2、4、8及12周。末次施用單克隆抗體21b12或安慰劑在第8周。研究結束(eos)隨訪及末次脂質評價在第12周。≥18至≤75歲且通過simonbroomeregistergroup(sbrg)的診斷標準診斷有雜合子家族性高膽固醇血症的男性及女性適於這項研究。對於招募，受試者在ldl-c篩選之前必須持續至少4周以針對所有允許的脂質調控藥物的穩定劑量服用核准的他汀類(例如依澤替米貝、膽汁酸螯合樹脂、甾烷醇或法規核准且銷售的煙酸(例如尼斯潘或尼克爾))且在研究者看來，無需上調劑量(uptitration)。在篩選時，通過中心實驗室所測定，空腹ldl-c必須≥100mg/dl(2.6mmol/l)且空腹甘油三酯≤400mg/dl(4.5mmol/l)。初步數據(數據未示出)顯示用350mg21b12治療的受試者在給藥間隔結束時相較於基線的ldl-c最小平方(ls)平均降低百分比為38.46％，且用420mg21b12治療的受試者相較於基線的ldl-cls平均降低百分比為45.68％。用350mg21b12治療的受試者在給藥間隔結束時相較於基線的lp(a)ls平均降低百分比為21.69％，且用420mg21b12治療的受試者相較於基線的lp(a)ls平均降低百分比為28.23％。用350mg21b12治療的受試者在給藥間隔結束時相較於基線的hdl-cls平均增加百分比為15.39％，且用420mg21b12治療的受試者相較於基線的hdl-cls平均增加百分比為6.77％。用350mg21b12治療的受試者在給藥間隔結束時相較於基線的vldl-cls平均降低百分比為17.16％，且用420mg21b12治療的受試者相較於基線的vldl-cls平均降低百分比為18.49％。用350mg21b12治療的受試者在給藥間隔結束時相較於基線的甘油三酯ls平均降低百分比為17.24％，且用420mg21b12治療的受試者相較於基線的甘油三酯ls平均降低百分比為4.56％。用350mg21b12治療的受試者在給藥間隔結束時相較於基線的非hdl膽固醇ls平均降低百分比為36.16％，且用420mg21b12治療的受試者相較於基線的非hdl膽固醇ls平均降低百分比為41.81％。最後，用350mg21b12治療的受試者在給藥間隔結束時相較於基線的總膽固醇ls平均降低百分比為24.82％，且用420mg21b12治療的受試者相較於基線的總膽固醇ls平均降低百分比為29.45％。(數據未示出)圖24為表示以下21b12劑量所引起的ldl-c降低數據的圖：70mg、105mg及140mg(q2w或每兩周一次給藥)及280mg、350mg及420(q4w或一個月一次給藥)。這數據為實施例22-25中所述的研究的集合數據。簡單來說，集合數據顯示140mgq2w使得在第12周時ldl-c相較於基線降低約60％且ldl-c降低得以平穩維持。此外，這數據顯示420mgq4w使得在第12周時ldl-c相較於基線降低約56％且在給藥間隔結束時ldl-c回彈較小。圖25a-25d分別為展示21b12劑量對lp(a)、hdl-c、甘油三酯及vldl-c的有益效應的條形圖，從實施例22-25中所述的研究的集合數據獲得。此外，觀測到以下物質相較於基線的降低隨劑量而變：總膽固醇(25-37％，p值<0.001)、非hdl-c(36-53％，p值<0.001)及apob(36-53％，p值<0.001)(數據未示出)。實施例23用以評價人類抗pcsk9抗體相較於依澤替米貝在不能耐受有效劑量的hmg-co-a還原酶抑制劑的高膽固醇患者中的耐受性及對ldl-c的功效的隨機研究這項研究的目標在於評價12周皮下(sc)注射人類抗pcsk9抗體(單克隆抗體21b12)相較於依澤替米貝對不能耐受有效劑量的hmg-coa還原酶抑制劑的高膽固醇受試者的低密度脂蛋白膽固醇(ldl-c)相較於基線的變化百分比的影響。這項研究為人類抗pcsk9抗體單克隆抗體21b12的隨機、分層、平行組臨床試驗。計劃招募150個受試者。滿足所有納入/排除標準的受試者將以相等分配量隨機分成5個治療組：單克隆抗體21b12，280mg、350mg或420mgq4wsc(每4周一次，皮下)；依澤替米貝(10mg每日(qd)經口(po))連同單克隆抗體21b12(420mgq4wsc)一起；或依澤替米貝(10mgqdpo)連同安慰劑(q4wsc)一起。將通過篩選ldl-c水平(<130mg/dl[3.4mmol/l]對≥130mg/dl)及在基線狀態下的他汀類使用(是對否)來對隨機分組分層。隨機分組應在用於確定合格性的篩選ldl-c評估的5-10天內進行。將對單克隆抗體21b12及安慰劑不知情。不對依澤替米貝不知情。研究隨訪在第2、4、8及12周。末次施用單克隆抗體21b12或安慰劑在第8周。研究結束隨訪及末次脂質評價在第12周。≥18至≤75歲的男性及女性適於這項研究。受試者必須已嘗試至少1種他汀類且歸因於肌痛或肌病變已不能耐受任何劑量或超過以下總每周最大劑量的他汀類劑量增加：阿託伐他汀≤70mg，辛伐他汀≤140mg，普伐他汀≤140mg，羅素他汀≤35mg，洛伐他汀≤140mg，氟伐他汀≤280mg。對於未列的他汀類，最大總每周劑量不應超過最小可用片劑量的7倍。當他汀類中止或劑量降低時，症狀必須已消退。如果接受他汀類(不超過以上規定的最大劑量)、膽汁酸螯合樹脂和/或甾烷醇療法，那麼在ldl-c篩選之前劑量必須穩定持續至少4周。如果受試者在篩選開始時在服用依澤替米貝，那麼在ldl-c篩選之前依澤替米貝必須中止≥4周。取決於受試者的風險種類(基於ncepatpiii治療目標)，在篩選時受試者必須滿足以下空腹ldl-c(由中心實驗室來測定)標準：對於被診斷患有冠心病(chd)或chd風險等效物的受試者，≥100mg/dl(2.6mmol/l)；對於沒有被診斷chd或風險等效物及2個或更多個風險因素的受試者，≥130mg/dl(3.4mmol/l)；對於沒有被診斷chd或風險等效物且具有1個風險因素或不具有風險因素的受試者，≥160mg/dl(4.1mmol/l)。空腹甘油三酯必須≤400mg/dl(4.5mmol/l)，如在篩選時通過中心實驗室分析所測定。初步數據(數據未示出)顯示用280mg21b12治療的受試者在給藥間隔結束時相較於基線的ldl-cls平均降低百分比為38.79％；用350mg21b12治療的受試者在給藥間隔結束時相較於基線的ldl-cls平均降低百分比為40.01％；且用420mg21b12治療的受試者相較於基線的ldl-cls平均降低百分比為50.63％。初步數據顯示用280mg21b12治療的受試者在給藥間隔結束時相較於基線的lp(a)ls平均降低百分比為27.38％；用350mg21b12治療的受試者在給藥間隔結束時相較於基線的lp(a)ls平均降低百分比為16.04％；且用420mg21b12治療的受試者相較於基線的lp(a)ls平均降低百分比為23.84％。初步數據顯示用280mg21b12治療的受試者在給藥間隔結束時相較於基線的hdl-cls平均增加百分比為8.62％；用350mg21b12治療的受試者在給藥間隔結束時相較於基線的hdl-cls平均增加百分比為4.62％；且用420mg21b12治療的受試者相較於基線的hdl-cls平均增加百分比為7.55％。初步數據顯示用280mg21b12治療的受試者在給藥間隔結束時相較於基線的vldl-cls平均降低百分比為31.02％；用350mg21b12治療的受試者在給藥間隔結束時相較於基線的vldl-cls平均降低百分比為38.14％；且用420mg21b12治療的受試者相較於基線的vldl-cls平均降低百分比為37.27％。初步數據顯示用280mg21b12治療的受試者在給藥間隔結束時相較於基線的甘油三酯ls平均降低百分比為15.35％；用350mg21b12治療的受試者在給藥間隔結束時相較於基線的甘油三酯ls平均降低百分比為19.22％；且用420mg21b12治療的受試者相較於基線的甘油三酯ls平均降低百分比為19.55％。初步數據顯示用280mg21b12治療的受試者在給藥間隔結束時相較於基線的總膽固醇ls平均降低百分比為31.03％；用350mg21b12治療的受試者在給藥間隔結束時相較於基線的總膽固醇ls平均降低百分比為34.46％；且用420mg21b12治療的受試者相較於基線的總膽固醇ls平均降低百分比為42.23％。初步數據顯示用280mg21b12治療的受試者在給藥間隔結束時相較於基線的非hdl-cls平均降低百分比為39.92％；用350mg21b12治療的受試者在給藥間隔結束時相較於基線的非hdl-cls平均降低百分比為42.86％；且用420mg21b12治療的受試者相較於基線的非hdl-cls平均降低百分比為53.49％。實施例24用以評價人類抗pcsk9抗體在10年弗雷明漢(framingham)風險分值為10％或10％以下的高膽固醇患者中的耐受性及對ldl-c的功效的隨機、安慰劑及依澤替米貝對照的劑量範圍研究這項研究的目標在於相較於安慰劑評價12周皮下(sc)注射人類抗pcsk9抗體(單克隆抗體21b12)(每2周(q2w)或每4周(q4w))在用作單藥療法時對10年弗雷明漢風險分值為10％或10％以下的高膽固醇受試者的低密度脂蛋白膽固醇(ldl-c)相較於基線的變化百分比的影響。這項研究為人類抗pcsk9抗體單克隆抗體21b12的隨機、分層、安慰劑及依澤替米貝對照的平行組劑量範圍臨床試驗，招募411個受試者。滿足所有納入/排除標準的受試者將以相等分配量隨機分成9個治療組：單克隆抗體21b12的6個劑量方案中的一個(70mg、105mg或140mgq2wsc、或280mg、350mg或420mgq4wsc(每4周一次，皮下))、安慰劑連同q2w或q4wsc施用一起、或依澤替米貝連同每日(qd)經口(po)施用一起。通過篩選ldl-c水平(130mg/dl)來對隨機分組分層。隨機分組在用於確定合格性的篩選ldl-c評價的5-10天內進行。不管受試者是否接受q2wsc或q4w治療劑或依澤替米貝，研究隨訪皆每2周進行。3個q2w單克隆抗體21b12劑量組及1個q2w安慰劑組對彼此不知情，且3個q4w劑量組及1個q4w安慰劑組對彼此不知情。不對依澤替米貝不知情。研究結束隨訪及末次脂質估算對於採用q4wip日程安排或服用依澤替米貝的受試者在第12周且對於採用q2wip日程安排的受試者在第14周。≥18至≤75歲的男性及女性適於這項研究。在篩選時，由中心實驗室所測定，空腹ldl-c為≥100mg/dl(2.6mmol/l)且<190mg/dl(4.9mmol/l)且空腹甘油三酯≤400mg/dl(4.5mmol/l)。受試者的國家膽固醇教育組成人治療組iii(ncepatpiii)弗雷明漢風險分值為10％或10％以下。主要終點為在第12周時ldl-c相較於基線的變化百分比。次要終點包括載脂蛋白b(apob)、脂蛋白(a)(lp(a))及總膽固醇與高密度脂蛋白(hdl)-c的比率的變化百分比。還評價耐受性及安全性。初步數據顯示用70mg21b12(q2w)治療的受試者在給藥間隔結束時相較於基線的ldl-c平均降低百分比為41.21％；用105mg21b12(q2w)治療的受試者在給藥間隔結束時相較於基線的ldl-c平均降低百分比為45.44％；且用140mg21b12(q2w)治療的受試者相較於基線的ldl-c平均降低百分比為51.56％(數據未示出)。初步數據顯示用280mg21b12(q4w)治療的受試者在給藥間隔結束時相較於基線的ldl-c平均降低百分比為37.53％；用350mg21b12治療的受試者在給藥間隔結束時相較於基線的ldl-c平均降低百分比為42.16％；且用420mg21b12治療的受試者相較於基線的ldl-c平均降低百分比為47.52％(數據未示出)。最終數據顯示在第12周時，接受21b12的受試者相較於基線的ldl-c最小平方(ls)平均降低百分比多達51％(表12)；依澤替米貝達成的相較於基線的變化百分比為14％。21b12達成的從基線至第12周的變化比安慰劑所達成者大多達72mg/dl。接受21b12的受試者相較於基線的ldl-c降低比安慰劑大37％-53％且比依澤替米貝大37％。21b12達成的相較於基線的apob平均降低(多達44％)、lp(a)平均降低(多達29％)及總膽固醇/hdl比率平均降低(多達38％)大於安慰劑所達成者。表12：第12周相較於基線的ldl-c變化百分比：sc21b12對依澤替米貝或安慰劑sc：皮下q2w：每2周；q4w：每4周或一個月一次；qd：每日*p<0.001實施例25用以評價人類抗pcsk9抗體與hmg-co-a還原酶抑制劑組合在高膽固醇患者中的耐受性及對ldl-c的功效的雙盲、隨機、安慰劑對照的劑量範圍研究這項研究的目標在於相較於安慰劑評價12周皮下(sc)人類抗pcsk9抗體(單克隆抗體21b12)(每2周(q2w)或每4周(q4w))在組合hmg-co-a還原酶抑制劑(例如他汀類)使用時對高膽固醇血症受試者的低密度脂蛋白膽固醇(ldl-c)相較於基線的變化百分比的影響。這項研究為人類抗pcsk9抗體單克隆抗體21b12的雙盲、隨機、分層、安慰劑對照的平行組劑量範圍臨床試驗，招募631個受試者。連同或不連同依澤替米貝一起服用穩定劑量的他汀類療法至少4周且滿足所有納入/排除標準的受試者將以相等分配量隨機分成8個治療組：單克隆抗體21b12皮下(sc)(70mgq2w，105mgq2w，140mgq2w，280mgq4w，350mgq4w及420mgq4w，安慰劑q2wsc，或安慰劑q4wsc)。將通過篩選ldl-c水平(<130mg/dl[3.4mmol/l]對≥130mg/dl)及在基線狀態下的依澤替米貝使用(是對否)來對隨機分組分層。隨機分組應在用於確定合格性的篩選ldl-c評估的5-10天內進行。不管受試者是否接受q2wsc或q4w治療劑，研究隨訪皆每2周進行。3個q2w單克隆抗體21b12劑量組及1個q2w安慰劑組將對彼此不知情，且3個q4w劑量組及1個q4w安慰劑組將對彼此不知情。研究結束隨訪及末次脂質估算對於採用q4wip日程安排的受試者在第12周且對於採用q2wip日程安排的受試者在第14周。≥18至≤80歲的男性及女性適於這項研究。對於招募，受試者在ldl-c篩選之前必須連同或不連同依澤替米貝一起以穩定劑量服用他汀類至少4周且無需上調劑量。在篩選時，空腹ldl-c必須≥85mg/dl(2.2mmol/l)。對篩選空腹ldl-c在≥85mg/dl(2.2mmol/l)且<100mg/dl(2.6mmol/l)範圍內的受試者的招募將限於不超過總計劃招募數的約20％。空腹甘油三酯必須≤400mg/dl(4.5mmol/l)，如在篩選時通過中心實驗室分析所測定。初步數據顯示用70mg21b12(q2w)治療的受試者在給藥間隔結束時相較於基線的ldl-cls平均降低百分比為39.22％；用105mg21b12(q2w)治療的受試者在給藥間隔結束時相較於基線的ldl-cls平均降低百分比為56.38％；且用140mg21b12(q2w)治療的受試者相較於基線的ldl-cls平均降低百分比為68.76％(數據未示出)。初步數據顯示用70mg21b12(q2w)治療的受試者在給藥間隔結束時相較於基線的lp(a)ls平均降低百分比為21.17％；用105mg21b12(q2w)治療的受試者在給藥間隔結束時相較於基線的lp(a)ls平均降低百分比為33.41％；且用140mg21b12(q2w)治療的受試者相較於基線的lp(a)ls平均降低百分比為33.87％(數據未示出)。初步數據顯示用70mg21b12(q2w)治療的受試者在給藥間隔結束時相較於基線的hdl-cls平均增加百分比為21.17％；用105mg21b12(q2w)治療的受試者在給藥間隔結束時相較於基線的hdl-cls平均增加百分比為6.80％；且用140mg21b12(q2w)治療的受試者相較於基線的hdl-cls平均增加百分比為8.43％(數據未示出)。初步數據顯示用70mg21b12(q2w)治療的受試者在給藥間隔結束時相較於基線的vldl-cls平均降低百分比為14.84％；用105mg21b12(q2w)治療的受試者在給藥間隔結束時相較於基線的vldl-cls平均降低百分比為12.75％；且用140mg21b12(q2w)治療的受試者相較於基線的vldl-cls平均降低百分比為45.14％(數據未示出)。初步數據顯示用70mg21b12(q2w)治療的受試者在給藥間隔結束時相較於基線的甘油三酯ls平均降低百分比為7.20％；用105mg21b12(q2w)治療的受試者在給藥間隔結束時相較於基線的甘油三酯ls平均降低百分比為5.65％；且用140mg21b12(q2w)治療的受試者相較於基線的甘油三酯ls平均降低百分比為17.60％(數據未示出)。初步數據顯示用70mg21b12(q2w)治療的受試者在給藥間隔結束時相較於基線的非hdl-cls平均降低百分比為36.20％；用105mg21b12(q2w)治療的受試者在給藥間隔結束時相較於基線的非hdl-cls平均降低百分比為51.20％；且用140mg21b12(q2w)治療的受試者相較於基線的非hdl-cls平均降低百分比為64.61％(數據未示出)。初步數據顯示用70mg21b12(q2w)治療的受試者在給藥間隔結束時相較於基線的總膽固醇ls平均降低百分比為26.33％；用105mg21b12(q2w)治療的受試者在給藥間隔結束時相較於基線的總膽固醇ls平均降低百分比為36.91％；且用140mg21b12(q2w)治療的受試者相較於基線的總膽固醇ls平均降低百分比為46.17％(數據未示出)。初步數據顯示用280mg21b12(q4w)治療的受試者在給藥間隔結束時相較於基線的ldl-cls平均降低百分比為42.62％；用350mg21b12治療的受試者在給藥間隔結束時相較於基線的ldl-cls平均降低百分比為56.84％；且用420mg21b12治療的受試者相較於基線的ldl-cls平均降低百分比為52.19％(數據未示出)。初步數據顯示用280mg21b12(q2w)治療的受試者在給藥間隔結束時相較於基線的lp(a)ls平均降低百分比為22.54％；用350mg21b12(q2w)治療的受試者在給藥間隔結束時相較於基線的lp(a)ls平均降低百分比為29.43％；且用420mg21b12(q2w)治療的受試者相較於基線的lp(a)ls平均降低百分比為23.29％(數據未示出)。初步數據顯示用280mg21b12(q2w)治療的受試者在給藥間隔結束時相較於基線的hdl-cls平均增加百分比為2.17％；用350mg21b12(q2w)治療的受試者在給藥間隔結束時相較於基線的hdl-cls平均增加百分比為6.92％；且用420mg21b12(q2w)治療的受試者相較於基線的hdl-cls平均增加百分比為7.42％(數據未示出)。初步數據顯示用280mg21b12(q2w)治療的受試者在給藥間隔結束時相較於基線的vldl-cls平均降低百分比為18.12％；用350mg21b12(q2w)治療的受試者在給藥間隔結束時相較於基線的vldl-cls平均降低百分比為20.89％；且用420mg21b12(q2w)治療的受試者相較於基線的vldl-cls平均降低百分比為28.66％(數據未示出)。初步數據顯示用280mg21b12(q2w)治療的受試者在給藥間隔結束時相較於基線的甘油三酯ls平均降低百分比為6.75％；用350mg21b12(q2w)治療的受試者在給藥間隔結束時相較於基線的甘油三酯ls平均降低百分比為9.17％；且用420mg21b12(q2w)治療的受試者相較於基線的甘油三酯ls平均降低百分比為11.13％(數據未示出)。初步數據顯示用280mg21b12(q2w)治療的受試者在給藥間隔結束時相較於基線的非hdl-cls平均降低百分比為38.89％；用350mg21b12(q2w)治療的受試者在給藥間隔結束時相較於基線的非hdl-cls平均降低百分比為50.83％；且用420mg21b12(q2w)治療的受試者相較於基線的非hdl-cls平均降低百分比為48.54％(數據未示出)。初步數據顯示用280mg21b12(q2w)治療的受試者在給藥間隔結束時相較於基線的總膽固醇ls平均降低百分比為28.08％；用350mg21b12(q2w)治療的受試者在給藥間隔結束時相較於基線的總膽固醇ls平均降低百分比為36.04％；且用420mg21b12(q2w)治療的受試者相較於基線的總膽固醇ls平均降低百分比為42.76％(數據未示出)。實施例26pcsk9abp在他汀類存在下進一步上調ldlr這個實施例證明所產生的針對pcsk9的abp在他汀類存在下使用時會進一步增加ldlr可用性，從而顯示可通過組合使用兩者來達成進一步益處。將hepg2細胞接種於含10％胎牛血清(fbs)的dmem中且生長至約90％匯合。細胞於含3％fbs的dmem中用指定量的莫維諾林(mevinolin)(一種他汀類，sigma)及pcsk9abp(圖12a-12c)處理48小時。製備總細胞溶解產物。通過凝膠電泳分離50mg總蛋白質且轉移至pvdf膜中。使用兔抗人類ldl受體抗體(fitzgerald)或兔抗人類b-肌動蛋白抗體進行免疫印跡。增強的化學發光結果展示於圖12a-12c的頂部版面中。通過imagej軟體定量條帶的強度且根據b-肌動蛋白加以歸一化。ldlr的相對水平展示於圖12a-12c的下部版面中。abp21b12及31h4為pcsk9中和性抗體，而25a7.1為非中和性抗體。還生成hepg2-pcsk9細胞。這些細胞為用人類pcsk9轉染的穩定hepg2細胞系。將細胞接種於含10％胎牛血清(fbs)的dmem中且生長至約90％匯合。細胞於含3％fbs的dmem中用指定量的莫維諾林(sigma)及pcsk9abp(圖12d-12f)處理48小時。製備總細胞溶解產物。通過凝膠電泳分離50mg總蛋白質且轉移至pvdf膜中。使用兔抗人類ldl受體抗體(fitzgerald)或兔抗人類b-肌動蛋白抗體進行免疫印跡。增強的化學發光結果展示於頂部版面中。通過imagej軟體定量條帶的強度且根據b-肌動蛋白加以歸一化。如在圖12a-12f中所述的結果中可見，遞增量的中和性抗體及遞增量的他汀類通常引起ldlr的水平增加。abp水平增加所致的此有效性增加在圖12d-12f中尤其明顯，其中細胞也用pcsk9轉染，從而允許abp在更大程度上顯示其有效性。感興趣的是，如由圖12d-12f與圖12a-12c的結果比較所證明，當pcsk9由細胞產生時，abp濃度對ldlr水平的影響顯著增加。此外，明顯的是中和性abp(21b12及31h4)引起的ldlr水平增加大於25a7.1abp(一種非中和劑)，甚至在他汀類存在下也如此，從而顯示可通過使用他汀類與針對pcsk9的abp兩者來達成額外益處。實施例27共有序列使用對應於抗pcsk9abp的vh及vl的cdr的標準系統發生分析來確定共有序列。通過保持cdr在對應於vh或vl的相同序列內相連來確定共有序列。簡單來說，對應於vh或vl的整個可變域的胺基酸序列轉換成fasta格式以便於處理比較比對物並推斷系統發生。接著，這些序列的框架區用人工接頭序列(「bbbbbbbbbb」佔位符，非特異性核酸構建體)置換以使得對單獨cdr的檢查可在不引入歸因於重合事件(例如偶然共有共同生殖系框架遺傳性的無關抗體)的任何胺基酸位置權重偏差下進行同時仍然保持cdr在對應於vh或vl的相同序列內相連。接著使用採用標準clutalw樣算法的程序對這種形式的vh或vl序列進行序列類似性比對詢問(參見thompson等，1994,nucleicacidsres.22:4673-4680)。空位產生罰分8.0連同空位擴展罰分2.0一起採用。這個程序也使用upgma(使用算術平均值的未加權配對群組方法)或鄰近聯接方法(參見saitou和nei,1987,molecularbiologyandevolution4:406-425)基於序列類似性比對結果產生系統發生圖(系統發生樹圖解)以經由分支長度比較及分組來建立及說明序列群組的類似性及差別。兩種方法產生類似結果但最終使用upgma衍生的樹，因為所述方法採用一組更簡單且更保守的假設。產生upgma衍生的樹，其中類似序列群組被定義為在群組內的單個序列中每100個殘基具有少於15個取代(參見樹圖解中的標度圖例)，且將upgma衍生的樹用於定義共有序列集合。比較的結果描述於圖13a-13j以及圖48-49中。在圖13e中，選擇群組以使得輕鏈中分枝的序列也為重鏈中的分枝序列且具有少於15個取代。實施例28製備pcsk9abp製劑uf/df-超濾/滲濾方法用使用milliporepelliconxl過濾器、50cm2尺寸(再生纖維素，30,000分子量截斷值)膜的小型milliporetffuf/df系統使原料藥(例如抗體21b12及抗體11f1)緩衝液交換至包括穩定劑的製劑緩衝液中。進行滲濾步驟直到至少10體積的滲濾緩衝液被交換。一旦完成滲濾步驟，uf/df系統即切換至超濾模式且各製劑被濃縮至目標濃度水平。在完成uf/df步驟之後，從1.0％(w/w)新鮮製備的聚山梨醇酯(「ps」)儲備溶液添加適當量的聚山梨醇酯20或80至各製劑中以達到所要聚山梨醇酯濃度。在填充主要容器之前，各製劑在層流罩下並使用0.2微米過濾器進行無菌過濾。填充也是無菌進行並且手動或使用適當填充儀器自動進行。實施例29粘度較低的高濃度pcsk9abp製劑為評價不同賦形劑對高蛋白質濃縮物的粘度的影響，使用粘度、穩定性及溶解性篩選測定來探究用於高濃度蛋白質製劑的賦形劑粘度調節劑。具體來說，所有樣品(例如抗體21b12樣品)製備皆在層流罩下無菌進行。將待測試的樣品凍幹允許使用簡單方法達成高蛋白質濃度。將1.5ml70mg/ml蛋白質(例如21b12)吸移至3cc玻璃小瓶中以進行凍幹。使用通用凍幹循環在virtis實驗室規模凍幹機上進行凍幹。凍幹緩衝液為10mml-穀氨酸鹽及1.0％蔗糖，ph4.8。凍幹的樣品(例如凍幹的21b12樣品)用約0.65ml下表13中所示的賦形劑緩衝液單個地復原至最終蛋白質濃度150-200mg/ml。復原的樣品靜置過夜以使得完全溶解。接著如下所述測量粘度。表13粘度、穩定性、溶解性篩選的結果展示在添加各種賦形劑之後的21b12粘度變化(圖26)。並非所有用於篩選目的的賦形劑皆致使溶液粘度降低；相較於對照樣品，添加l-丙氨酸、甘油、硫酸鈉、蔗糖及氯化鋅致使粘度高很多。用於篩選中的若干賦形劑似乎為良好的粘度調節候選物，例如l-精氨酸、肉鹼、肌酸酐、l-蛋氨酸及牛磺酸。為評價不同製劑對特定pcsk9abp的粘度的影響，以下表29.2中所示的6種不同製劑配製21b12的組合物。所有製劑中的21b12的濃度皆為134mg/ml。組合物以最終體積1.0ml填充於小瓶中。在室溫下(即25℃)孵育組合物。透析及濃縮21b12經由透析通過向pierceslide-a-lyzer(rockford,il)透析盒中添加約10ml21b12並在4℃下相對於2l緩衝液透析3個循環(2小時×2及16小時×1)以達成完全緩衝液交換來實現從最初於10mm乙酸鈉、9.0％(w/v)蔗糖中的21b12除去蔗糖。透析用緩衝液含有ph5.0的10mm乙酸鈉(由乙酸製得)。所有樣品隨後皆使用milliporeamiconultraprep裝置(billerica,ma)，於在3000rpm下旋轉的beckmancoulterallegra6r離心機(fullerton,california)中濃縮直至樣品體積略微小於為所要濃度所需的體積。接著通過使用agilent8453分光光度計(santaclara,california)在a280下測量吸光度來進行濃度測定。使用適當的消光係數計算蛋白質濃度。接著添加適量緩衝液至樣品中以將其稀釋回所要濃度並且再進行a280測量以獲得實驗的最終濃度。添加也可用於降低粘度的穩定劑：測試如脯氨酸、苯甲醇、肌酸酐、蛋氨酸、牛磺酸等賦形劑以試圖降低粘度。這些賦形劑單個地添加至來自高濃度儲備溶液的21b12製劑樣品中。粘度測量使用具有cpe-40軸的brookfieldlv-dvii錐板式粘度計(middleboro,massachusetts)，在匹配樣品杯溫度由循環水浴調控在恆定25c下的情況下測量粘度。用正位移移液器添加500ul樣品至樣品杯中。在固定樣品杯之後，逐漸增加軸的旋轉速度直至達成約80％扭矩。此時停止旋轉速度且由rheocalc軟體生成粘度讀數。表14結果顯示l-脯氨酸、苯甲醇、肌酸酐、蛋氨酸及牛磺酸在高濃度pcsk9abp21b12中皆具有顯著粘度降低效應(參見表14)。為進一步評價不同製劑對特定pcsk9abp的影響，以下表15中所示的不同製劑配製21b12的組合物。製劑分成以下3組：(1)一組各種濃度的21b12於10mm乙酸鈉緩衝液(ph5.2)中，(2)一組各種濃度的21b12於10mm乙酸鈉緩衝液(ph5.2)中，3％(約261mm)l-脯氨酸摻加至各樣品中，及(3)一組約117-134mg/ml濃度的21b12樣品於不同ph水平(4.0至5.5)的10mm乙酸鈉緩衝液中，摻加2個樣品於添加有nacl或l-蛋氨酸/苯甲醇組合的10mm乙酸鈉緩衝液(ph5.2)中。表15結果顯示l-脯氨酸在高濃度pcsk9abp21b12中具有顯著粘度降低效應(參見圖27)。為更進一步評價不同製劑對特定pcsk9abp的影響，以下表16中所示的不同製劑配製21b12的組合物。表16結果顯示用1.5％或2.0％脯氨酸(約131nm-174mm脯氨酸)及1％苯甲醇配製的21b12製劑在高濃度pcsk9abp21b12中具有顯著粘度降低效應。為更進一步評價不同製劑對特定pcsk9abp的影響，以下表17中所示的不同製劑配製21b12的組合物。表17：結果顯示能夠用具有特定穩定劑/賦形劑的製劑達成具有降低的粘度的高濃度21b12蛋白(參見圖28a-28d)。具體來說，圖28a為展示各種濃度的抗pcsk9抗體21b12在包含10mm乙酸鈉及9％蔗糖(ph5.2)的製劑中在25℃及40℃下的粘度的圖。圖28b為展示各種濃度的抗pcsk9抗體21b12在包含10mm乙酸鈉及9％蔗糖(ph5.2)的製劑中在25℃及40℃下，相較於在包含10mm乙酸鈉、125mm精氨酸及3％蔗糖(ph5.0)的製劑中在25℃及40℃下的粘度的圖。圖28c為展示各種濃度的抗pcsk9抗體21b12在包含10mm乙酸鈉及9％蔗糖(ph5.2)的製劑中在25℃及40℃下，相較於在包含10mm乙酸鈉、100mm蛋氨酸及4％蔗糖(ph5.0)的製劑中在25℃及40℃下的粘度的圖。圖28d為展示各種濃度的抗pcsk9抗體21b12在包含10mm乙酸鈉及9％蔗糖(ph5.2)的製劑中在25℃及40℃下，相較於在包含10mm乙酸鈉及250mm脯氨酸(ph5.0)的製劑中在25℃及40℃下的粘度的圖。實施例30高濃度11f1粘度研究表30展示11f1抗體在攝氏25度下在各種抗體濃度下及於各種製劑中的粘度。如以上實施例29中對於21b12所述類似地製備高濃度11f1儲備溶液。然後通過使用agilent8453分光光度計(santaclara,california)在a280下測量吸光度來進行濃度測定。使用適當的消光係數計算蛋白質濃度。接著添加適量緩衝液至樣品中以將其稀釋回所要濃度且再進行a280測量以獲得實驗的最終濃度。將賦形劑單個地添加至由高濃度儲備溶液獲得的11f1製劑樣品中。使用具有cpe-40軸的brookfieldlv-dvii錐板式粘度計(middleboro,massachusetts)，在匹配樣品杯溫度由循環水浴調控在恆定25℃下的情況下測量粘度。用正位移移液器添加500μl樣品至樣品杯中。在固定樣品杯之後，逐漸增加軸的旋轉速度直至達成約80％扭矩。此時停止旋轉速度且由rheocalc軟體生成粘度讀數。高濃度蛋白質製劑有時使用不同類型的粘度計，即具有cp50-1軸的antonpaarphysicamcr300型粘度計測量。此儀器中使用600ul樣品且使用rheoplus軟體3.4版計算溶液粘度。使用任一粘度計獲得的測量結果不存在較大差異。表30表30中所示的結果顯示能夠以具有特定穩定劑/賦形劑的製劑達成具有相對較低粘度的高濃度11f1抗體。包含穩定劑蛋氨酸、脯氨酸、精氨酸、甘氨酸、絲氨酸及丙氨酸的製劑展現尤其更低的粘度。實施例31高濃度pcsk9abp製劑的穩定性研究為評價穩定性對高蛋白質pcsk9abp製劑的影響，以下表31.1中所示的不同製劑配製21b12的組合物。製劑於指定容器中在-30℃或4℃下孵育0周、1個月、2個月、3個月及6個月及1年。對於在各時間點的各製劑，從各包裝移除樣品以通過非變性尺寸排阻hplc(sec-hplc)及通過光遮蔽進行的在顯微鏡下才可見的粒子檢測(hiac)監測抗體單體。表31.1sec-hplc:sec-hplc基於蛋白質的流體動力學體積的差異分離蛋白質。流體動力學蛋白質體積較大的分子早於體積較小的分子洗脫。使用5μm粒度的tsk-gelg3000swxl7.8mm×300mm管柱(tosohbioscience)在具有可變波長檢測器的agilenthplc上進行非變性sec-hplc。流動相為100mm磷酸鈉，250mm氯化鈉，ph6.8±0.1。流速為0.5毫升/分鐘。在280nm下監測管柱洗脫液。使用色譜圖中的完整峰面積定量單體及高分子量物質種類的量。表31.2：表31.2展示對在x℃下孵育0周、1個月、2個月、3個月及6個月的表31.1中所列的21b12製劑的非變性sec-hplc分析的結果。「hmw％」反映樣品中高分子量21b12單體的量。這些結果指示在6個月之後，未觀測到製劑問題；然而，蛋氨酸製劑(即製劑2、5及8)中一些高分子量物質種類確實是增加了。通過光遮蔽進行的在顯微鏡下才可見的粒子檢測(hiac)：含有光遮蔽傳感器(hiac/roycohrld-150或等效物)以及液體取樣器的電子液載粒子計數系統(hiac/royco9703或等效物)可定量給定測試樣品中的粒子數目及其尺寸範圍。當液體中的粒子穿過光源與檢測器之間時，其減弱或「遮蔽」落在檢測器上的光束。當粒子的濃度處於傳感器的正常範圍內時，這些粒子逐個被檢測。各粒子穿過檢測區域會降低光檢測器上的入射光並且光檢測器的電壓輸出量瞬間降低。電壓的變化記錄為電脈衝，其由儀器轉換成存在的粒子數目。所述方法為非特異性的且測量不管何種來源的粒子。所監測的粒度為10μm及25μm。在這個實施例中，使用已在4℃下儲存的樣品進行hiac分析。具體來說，表31.1中的21b12製劑的樣品經受真空(又稱為「脫氣」)以除去在粒子計數系統中可檢測為粒子的氣泡。對於21b12樣品，所述方法是使樣品在75託(torr)下經受真空1至2小時。在完成脫氣過程後的2小時內進行粒子計數。圖29a及29b展示對在容器中孵育0周、1個月、2個月、3個月及6個月的以上鑑定的製劑的hiac測定的結果。計數10μm及25μm粒子。圖29a及29b顯示所有21b12製劑皆穩定，如用hiac所測量。儘管玻璃注射器中的製劑(即製劑4-6)在各蛋白質濃度及製劑下顯示更高的粒子含量，但那些粒子計數在各粒度(10μm及25μm)的usp限度以下。10μm粒子的usp限度為每個容器6000個粒子，且對於25μm粒子為每個容器600個粒子。實施例3211f1穩定性研究為研究11f1的高濃度製劑(150mg/ml)，使用如下表32a中指示的候選賦形劑製備若干製劑。製劑於指示容器中在-30℃或4℃下儲存至少6個月。表32a：所研究的製劑在-30℃及4℃下儲存之後在下表32b中指示的時間點通過尺寸排阻hplc評估hmw物質種類％。簡單來說，尺寸排阻hplc基於蛋白質的流體動力學體積的差異來分離蛋白質。流體動力學蛋白質體積較大的分子早於體積較小的分子洗脫。使用5μm粒度的tsk-gelg3000swxl7.8mm×300mm管柱(tosohbioscience)在具有可變波長檢測器的agilenthplc上進行非變性sec-hplc。流動相為100mm磷酸鈉，250mm氯化鈉，ph6.8+/-0.1。流速為0.5毫升/分鐘。在280nm下監測管柱洗脫液。使用色譜圖中的完整峰面積定量單體及高分子量物質種類的量。表32b表32b展示對在4℃或-30℃下孵育0周、2個月、4個月或6個月的表32a中所列的11f1製劑的非變性sec-hplc分析的結果。「hmw％」反映樣品中高分子量11f1的量。這些結果指示直至6個月，未觀測到製劑問題；然而，在-30℃下儲存的蛋氨酸製劑(即製劑3及6)中一些高分子量物質種類確實是增加了。通過如下表32c中所指示於主要容器中製備製劑來評估其它高濃度11f1製劑的穩定性：表32c製劑在4℃下孵育一年。在下表32d中指示的時間點，從各容器移除樣品且通過sec-hplc如對於上表32b所述加以分析。表32d在4℃下儲存1年之後的尺寸排阻hmw形式％在下表32e中指示的時間點，從各容器移除樣品且通過陽離子交換hplc(cex-hplc)加以分析。陽離子交換hplc基於蛋白質的表面電荷的差異來分離蛋白質。在設定ph下，在陽離子交換管柱上分離11f1的帶電荷亞型並使用鹽梯度洗脫。通過紫外吸光度監測洗脫液。通過測定各亞型的峰面積佔總峰面積的百分比來評價帶電荷亞型分布。使用10μm粒度的dionexg3000swxl4.0mmid×250mm管柱(tosohbioscience)在具有可變波長檢測器的agilenthplc上進行非變性cex-hplc。流動相為線性梯度的20mmmes(ph6.0+/-0.1)及含500mm氯化鈉的相同緩衝液。流速為0.6毫升/分鐘。在280nm下監測管柱洗脫液。使用色譜圖中的完整峰面積定量帶電荷不同的亞型的量。表32e在4℃下儲存1年之後陽離子交換hplc主要亞型峰％表32d與表32e均顯示在4℃下儲存直至1年，所述11f1製劑展現hmw％增加小於5％(sec-hplc)或主要亞型峰變化小於3-5％(陽離子hplc)。實際上，兩種參數的變化極低，這指示製劑高度穩定。通過光遮蔽進行的在顯微鏡下可見的粒子檢測(hiac)：具有液體取樣器的含有光遮蔽傳感器(hiac/roycohrld-150或等效物)的電子液載粒子計數系統(hiac/royco9703或等效物)可定量給定測試樣品中的粒子數目及其尺寸範圍。當液體中的粒子穿過光源與檢測器之間時，其減弱或「遮蔽」落在檢測器上的光束。當粒子的濃度處於傳感器的正常範圍內時，這些粒子逐個被檢測。各粒子穿過檢測區域會降低光檢測器上的入射光並且光檢測器的電壓輸出量瞬間降低。電壓的變化記錄為電脈衝，其由儀器轉換成存在的粒子數目。所述方法為非特異性的且測量不管何種來源的粒子。所監測的粒度為10μm及25μm。在這個實施例中，使用已在4℃下儲存的樣品進行hiac分析。具體來說，使表32a中的11f1製劑的樣品經受真空(又稱為「脫氣」)以除去在粒子計數系統中可檢測為粒子的氣泡。對於11f1樣品，方法是使樣品在75託下經受真空1至2小時。在完成脫氣過程後的2小時內進行粒子計數。圖30a及30b展示對在容器中孵育0周及4個月的以上鑑定的製劑的hiac測定的結果。計數10μm及25μm粒子。圖30a及30b顯示所有11f1製劑皆穩定，如用hiac所測量。所有製劑的粒子計數皆在各粒度(10μm及25μm)的usp限度以下。10μm粒子的usp限度為每個容器6000個粒子，且對於25μm粒子為每個容器600個粒子。實施例3311f1結合特異性這項測定的結果顯示11f1結合pcsk9而不結合pcsk1、pcsk2、pcsk7或弗林蛋白酶，從而證明11f1對pcsk9具有特異性。使於緩衝液a(25mmtris，150mmnacl，0.1％bsa，0.05％吐溫，ph7.5)中稀釋的生物素化的pcsk9以0.2μg/ml的濃度結合於經中性鏈親和素塗布的96孔板，在室溫下孵育1小時。單獨地，0.4μg/ml11f1與各種濃度(在0至20μg/ml的範圍內)的pcsk1、pcsk2、pcsk7、pcsk9或弗林蛋白酶(r&dsystems,minneapolis,mn)(於無吐溫的緩衝液a中稀釋)一起在室溫下孵育1小時。4.5μg/ml的弗林蛋白酶抑制劑與所有含弗林蛋白酶的反應物一起包括在內。經pcsk9塗布的抗生物素蛋白鏈黴親和素板用緩衝液a洗滌且添加抗體/前蛋白轉化酶混合物至板中並在室溫下孵育1小時。在洗滌之後，通過依次與山羊-α-人類fc-hrp(160ng/ml，於緩衝液a中稀釋)(jacksonlaboratories,barharbor,me)及tmb底物一起孵育來檢測結合的抗體。用1nhcl終止反應且在450nm波長下在spectramaxplus384分光光度計(moleculardevicesinc.,sunnyvale,ca)上讀取吸光度。這項測定依賴於溶液中的前蛋白轉化酶與11f1競爭結合板捕捉的pcsk9的能力。11f1與pcsk9在溶液中預孵育以隨劑量而變的方式且強力降低結合板捕捉的pcsk9的11f1的量，檢測為降低的od450(圖31)。所有結果皆表示為平均od450值±標準偏差相對於前蛋白轉化酶的濃度。11f1與pcsk1、pcsk2、pcsk7或弗林蛋白酶在溶液中預孵育不顯著影響11f1結合板捕捉的pcsk9。因此，在所研究的蛋白質濃度下，11f1僅結合pcsk9並且不結合所測試的其它前蛋白轉化酶家族成員。實施例3311f1抑制ldlr:pcsk9結合的功效所述實施例證明毫微摩爾濃度的11f1可在這項測定的條件下抑制d374y與野生型pcsk9兩者結合ldlr。簡單來說，透明384孔板用2μg/ml於pbs中稀釋的山羊抗ldl受體抗體(r&dsystems,minneapolis,mn)塗布，隨後在4℃下孵育過夜。各板用緩衝液a(100mm二甲胂酸鈉，ph7.5)充分洗滌，然後在室溫下用緩衝液b(含1％脫脂奶粉[bio-radlaboratories,hercules,ca]的緩衝液a)阻斷2小時。在洗滌之後，各板與0.4μg/ml的於緩衝液c(補充有10mmcacl2的緩衝液b)中稀釋的ldl受體(r&dsystems,minneapolis,mn)一起在室溫下孵育1.5小時。與此孵育同時，將20ng/ml生物素化的d374ypcsk9或100ng/ml生物素化的wtpcsk9與各種濃度的於緩衝液a中稀釋的抗pcsk9抗體11f1(對於d374ypcsk9測定，最終濃度在6.0ng/ml至200ug/ml的範圍內，或對於wtpcsk9測定，最終濃度在3.1ng/ml至25ug/ml的範圍內)一起孵育。洗滌經ldlr塗布的板且添加生物素化的pcsk9/抗體混合物。ldlr板在室溫下孵育1小時。通過依次與抗生物素蛋白鏈黴親和素-hrp(500ng/ml於緩衝液c中)及tmb底物一起孵育來檢測生物素化的pcsk9與ldlr的結合。用1nhcl終止反應且在450nm波長下在spectramaxplus384分光光度計(moleculardevicesinc.,sunnyvale,ca)上讀取吸光度。使用graphpadprism(4.01版)軟體繪製抗體濃度的對數相對於od450的曲線以通過非線性回歸確定ic50值。11f1抑制ldlr:pcsk9結合。在d374ypcsk9測定中，11f1的ic50值在7.3nm至10.1nm的範圍內，平均值(±sd)為9.1nm±1.5nm(n＝3)。在野生型pcsk9測定中，11f1的ic50值在4.4nm至8.1nm的範圍內，平均值(±sd)為5.9nm±1.9nm(n＝3)。應注意這些ic50值取決於結合測定中使用的重組d374ypcsk9或wtpcsk9的量。d374y測定與野生型測定兩者的代表性劑量反應曲線分別呈現於圖32及圖33中。實施例3411f1在阻斷細胞ldl攝取方面的功效11f1在體外阻斷pcsk9與ldlr之間的相互作用並且可防止hepg2細胞中由pcsk9介導的ldl攝取降低。簡單來說，人類hepg2細胞於補充有10％fbs及1％抗生素-抗黴劑溶液(mediatechinc.,herndon,va)的dmem(mediatechinc.,herndon,va)中以每孔5×104個細胞的密度接種於黑色透明底部96孔板(fisherscientificcollc,santaclara,ca)中。細胞在37℃(5％co2)下孵育過夜。為形成d374ypcsk9與抗體之間或wtpcsk9與抗體之間的複合物，於配製緩衝液(25mmhepes(ph7.5)，0.15mnacl)中製備666.7nm至0.7nm(對於阻斷d374ypcsk9)或3.3μm至3.3nm(對於阻斷wtpcsk9)的11f1連續稀釋液(1:2)。d374ypcsk9(2μg/ml)或wtpcsk9(25μg/ml)於攝取緩衝液(含有1％fbs的dmem)中稀釋且與各種濃度的11f1或單獨攝取緩衝液(陰性對照)一起在室溫下在震蕩下孵育1小時。bodipy-ldl(invitrogen,carlsbad,ca)於攝取緩衝液中稀釋至12μg/ml的濃度。在孵育過夜之後，hepg2細胞用dpbs(mediatechinc.,herndon,va)衝洗兩次。添加25微升的d374ypcsk9或wtpcsk9與11f1的複合物及25μl稀釋的bodipy-ldl(invitrogen,carlsbad,ca)至細胞中且在37℃(5％co2)下孵育3小時。細胞用dpbs洗滌5次且重懸於100μldpbs中。使用safire板讀取器(tecansystemsinc.,sanjose,ca)在480至520nm(激發)及520至600nm(發射)下檢測螢光信號且表示為相對螢光單位(rfu)。使用graphpadprism(4.02版，graphpadsoftwareinc.,sandiego,ca)軟體繪製抗體濃度的對數相對於rfu的曲線且通過使用s形劑量-反應(可變斜率)曲線擬合程序進行非線性回歸來確定ec50值。這個實施例顯示11f1以隨劑量而變的方式阻斷hepg2細胞中由d374ypcsk9或wtpcsk9介導的ldl攝取降低。添加重組純化的d374ypcsk9(2μg/ml)或wtpcsk9(25μg/ml)至hepg2細胞中分別使對bodipy-ldl的攝取降低至未治療細胞中所測量到的水平的約50至60％及約40％。抗體以隨劑量而變的方式使ldl攝取恢復至未治療細胞中所觀測到的水平。11f1阻斷d374ypcsk9介導的ldl攝取降低的能力的平均(±sd)ec50值為35.3±9.1nm(n＝6，圖34)。11f1阻斷wtpcsk9介導的ldl攝取降低的能力的ec50值為124.2±28.5nm(n＝3，圖35)。應注意這些ec50值隨細胞測定中使用的重組d374ypcsk9或wtpcsk9的量而變。針對d374ypcsk9的ec50值低於針對wtpcsk9的ec50值，因為測定中使用較少d374ypcsk9，原因為其對ldlr的結合親和力為wtpcsk9對ldlr的結合親和力的5至30倍(cunningham等，2007；fisher等，2007；kwon等，2008)。此處報導的ec50值代表由對11f1的3至6個各別測量結果獲得的平均值。實施例3511f1及8a3阻斷小鼠模型中經由腺相關病毒表達的人類pcsk9的功效單一靜脈內快速施用抗pcsk9抗體11f1或8a3致使由aav表達人類pcsk9的小鼠中的血清非hdl-c及tc顯著降低。這個實施例證明兩種抗pcsk9抗體在體內阻斷人類pcsk9的功能的有效性。簡單來說，通過用編碼人類pcsk9的改造的腺相關病毒(aav)感染來產生120隻表達人類pcsk9的c57bl/6小鼠，從而使循環低密度脂蛋白膽固醇(ldl-c)水平升高。使用cobasintegra400plus化學分析儀(rochediagnostics,indianapolis,in)進行血清膽固醇分析。將動物隨機分成非hdl-c(ldl-c及vldl-c)、hdl-c及tc的水平類似的治療組。在治療第0天(t＝0)，對一子組小鼠施以安樂死且收集血清以確定當天的基線水平。然後經由尾靜脈注射以30mg/kg向其餘小鼠施用11f1、8a3或抗匙孔螺血氰蛋白(keyholelimpethemocyanin，klh)igg2對照抗體。在注射之後第1至5天，對數個子組的小鼠施以安樂死且從腔靜脈收集全血並使其在室溫下凝結30分鐘。在用臺式離心機在12,000rpm下離心10分鐘之後，收集血清。使用cobasintegra400plus化學分析儀進行血清膽固醇分析。使用夾心式elisa測定來測定血清pcsk9濃度。透明96孔板用2μg/ml於1×pbs中稀釋的單克隆抗pcsk9抗體(31h4)塗布過夜。各板用1×pbs/.05％吐溫充分洗滌，然後用3％bsa/1×pbs阻斷2小時。在洗滌之後，各板與於通用測定稀釋劑(immunochemistrytechnologies,bloomington,mn)中稀釋的血清一起孵育2小時。重組人類pcsk9(1ng/ml至500ng/ml)被並行分析且用於生成關於各elisa板的標準曲線。以1ug/ml(於1％bsa/pbs中)添加兔多克隆生物素化的抗pcsk9抗體(d8773，amgeninc,ca)，隨後以200ng/ml(於1％bsa/pbs中)添加中性鏈親和素-hrp。通過與tmb底物一起孵育檢測結合的pcsk9。以添加1nhcl終止反應且在450nm下在spectramaxplus384分光光度計(moleculardevicesinc,sunnyvale,ca)上測量吸光度。使用在重組人類pcsk9情況下生成的標準曲線(4參數邏輯擬合)確定血清樣品中pcsk9的相應濃度。使用夾心式elisa測定來測定血清抗體濃度。多克隆山羊抗人類fcigg及hrp標記的山羊抗人類iggfcγ多克隆試劑(均來自jacksonimmunoresearchlaboratoriesinc,westgrove,pa)分別用作捕捉抗體及檢測抗體。3,3',5,5'四甲基聯苯胺(tmb)底物溶液與過氧化物反應，且在辣根過氧化物酶(hrp)存在下生成與由捕捉試劑結合的各別抗pcsk9抗體的量成正比的比色信號。使用微板讀取器(spectramaxplus384)在450nm減去650nm下測量顏色的強度(光學密度，od)。使用watson7.0.0.01版(thermoscientific,waltham,ma)數據簡化套件連同對各別製作的標準曲線進行羅吉斯(logistic)(自動估計)回歸來分析數據。測定的定量下限(lloq)為34.4ng/ml。計算aav小鼠中的藥物動力學參數使用winnonlinenterprise5.1.1版(pharsight,st.louis,mo)對各受試者在預定額定時間點的血清濃度進行非隔室分析(nca)。通過目視檢查濃度-時間概況來選擇用於估計終末消除速率常數及半衰期的數據點。報導的nca參數包括：表觀半衰期(t1/2)、從零時間點至末次測量濃度的血清濃度-時間曲線下面積(auc0-t)、及表觀血清清除率(cl0-t)。使用線性對數-線性梯形法確定auc0-t，且通過劑量/auc0-t計算cl0-t。對於11f1、8a3及31h4抗體，研究後劑量溶液分析顯示實際劑量在30mg/kg目標的20％內。然而，對於igg2對照，分析顯示實際劑量僅為預定目標的40％。因此，igg2對照的cl0-t計算使用校正的劑量12mg/kg。參數報導至3位有效數字，半衰期除外，其報導至2位有效數字。統計分析所有膽固醇結果皆表示為平均值±平均值標準誤差。所有藥物動力學數據皆表示為平均值±標準偏差。由單因子anova確定的p值0.05用作確定抗klhigg2對照抗體注射動物與在相同時間點用抗pcsk9抗體給藥的那些動物之間的統計顯著性的閾值。抗pcsk9抗體對血清非hdl-c、hdl-c及tc的影響為建立基線，在注射抗體之前對一子組表達人類pcsk9的小鼠施以安樂死並收集血液。這些動物的非hdl-c、hdl-c及tc水平分別為33±4、117±4及183±9mg/dl(平均值±sem)。測定首次接受實驗的動物的pcsk9的水平為4921ng/ml±2044ng/ml。相較於用抗klhigg2對照抗體注射的小鼠(對照動物)，注射11f1在注射後第1、2及4天使得非hdl-c顯著降低(最大值為59％)，而tc僅在第4天顯著降低(降低了22％)(圖36，圖37)。在任何時間點皆未觀測到顯著的hdl-c降低(圖38)。相較於對照動物，注射8a3在注射後第1、2及4天使得非hdl-c顯著降低(最大值為65％)，而tc僅在注射後第2天顯著降低(最大值為24％)(圖36，圖37)。在任何時間點皆未觀測到顯著的hdl-c降低(圖38)。藥物動力學在30mg/kg的靜脈內劑量下，11f1及8a3具有極類似的藥物動力學特性(圖39)。對於這兩種分子，auc0-t暴露量、估計的cl0-t及表觀半衰期是相等的(圖40的表)。抗klhigg2對照抗體的auc0-t暴露量出乎意料地低於11f1及8a3，但這可能歸因於施用的抗體的劑量低於預定劑量(12mg/kg對比於30mg/kg)；劑量溶液分析顯示抗體濃度為目標的40％。當使用校正劑量計算時，抗klhigg2對照抗體cl0-t類似於11f1及8a3的cl0-t，並且抗klhigg2對照抗體的表觀半衰期據估計為>120小時。這些數據表明當相較於在aav模型中給藥的其它抗體時，對於11f1及8a3，pcsk9配體對抗體處置的影響較不明顯，因為11f1及8a3cl0-t值更類似於抗klhigg2對照抗體。概述在小鼠中由aav表達人類pcsk9(約5μg/ml)產生約33mg/dl的血清非hdl-c水平。在30mg/kg注射11f1之後，在注射後第1、2及4天觀測到血清非hdl-c的顯著降低(相較於對照動物，最大值為59％)。僅在第4天觀察到tc顯著降低。注射8a3引起類似的非hdl-c降低樣式，其中相較於對照動物，最大值為65％。然而，8a3施用僅在注射後第2天引起顯著tc降低，其中最大值為24％。未觀測到施用11f1或8a3的動物的hdl-c的顯著降低。對11f1及8a3的血清抗體水平的分析顯示與抗klhigg2對照抗體類似的概況。實施例3611f1、21b12及8a3的單次皮下給藥對食蟹獼猴的血清脂質的影響向食蟹獼猴單次sc施用11f1、8a3或21b12使得血清ldl-c及tc顯著降低。這項研究證明了抗pcsk9抗體降低非人類靈長類動物的血清膽固醇的能力。簡單來說，在實驗之前使首次接受實驗的雄性食蟹獼猴適應其環境至少2周。動物基於其血清tc、hdl-c、ldl-c及甘油三酯水平及其體重的預篩選隨機分入各治療組。1周之後，使動物禁食過夜，且從周邊血管結構(頭靜脈或隱靜脈)採血以測量在指定為t＝0的時間點的基線血清脂質水平。然後用抗klhigg2對照抗體、11f1、21b12或8a3(皆於10mmnaoac(ph5.2)、9％蔗糖中)以0.5mg/kg(皆以每公斤體重0.4ml)sc注射動物。接著歷經45天在指定的時間點從動物收集空腹血液樣品。實驗設計在指定時間點，在禁食過夜條件下從周邊血管結構(頭靜脈或隱靜脈)收集動物血液。使全血在室溫下凝結30分鐘。在3,000rpm下離心20分鐘後，收集血清。使用cobasintegra400分析儀(rochediagnosticsinc,indianapolis,in)進行直接血清膽固醇分析。在指定時間點(第0、3、6、15、24及33天)用以下方法通過anilytics(md)測定載脂蛋白b血清水平。使用17μl樣品的等分試樣(不製備)利用hitachi717分析儀使用6點標準曲線進行分析。如果樣品的初始值高於標準曲線線性，那麼稀釋樣品並重複分析，結果乘以適當稀釋因子。用於所述測定的試劑(apo-b試劑盒#86071、抗體套裝#86060、對照套裝#86103)是從diasorin(stillwater,mn)獲得。使用酶聯免疫吸附測定(elisa)來測定血清中的抗體濃度，測定範圍為34.4至3000ng/ml(34.4ng/ml為定量下限[lloq])。使用lims7.0.0.01版(thermoscientific,waltham,ma)對各受試者在預定額定時間點的血清濃度進行非隔室分析(nca)。通過目視檢查濃度-時間概況及最佳線性擬合來選擇用於估計終末消除速率常數及半衰期的數據點(通常從360小時直至抗體濃度降低至定量下限以下)。報導的nca參數包括：終末半衰期(t1/2，z)、最大血清濃度(cmax)、從零時間點至∞的血清濃度-時間曲線下面積(auc0-∞)、及表觀血清清除率(cl/f)。使用線性對數-線性梯形法計算auc0-∞。所有參數皆報導至3位有效數字，半衰期除外，其報導至2位有效數字。統計分析考慮基線為共變量且治療組為固定效應的統計模型相對於ldl-c、hdl-c、tc及甘油三酯在各時間點時的對數變換反應進行擬合。應用塔基氏多重比較校正(tukey'smultiplecomparisoncorrection)來調整在各時間點的成對比較。使用調整過的p值在α＝0.05下評價統計顯著性。11f1、21b12及8a3對血清ldl膽固醇的影響在注射之後9天觀測到11f1達成的最大ldl-c降低，相較於抗klhigg2對照抗體治療的猴(對照動物)，ldl-c降低57％。直至第27天，ldl-c返回至與對照動物中觀測到的水平類似的水平。在注射之後3天觀測到21b12達成的最大ldl-c降低，相較於對照動物，ldl-c降低64％。直至第6天，ldl-c返回至與對照動物類似的水平。在注射之後4天觀測到8a3達成的最大ldl-c降低，相較於對照動物，ldl-c降低54％。直至第27天，ldl-c返回至與對照動物中觀測到的水平類似的水平(圖41)。11f1、21b12及8a3對血清總膽固醇的影響在注射之後9天觀測到11f1達成的最大tc降低，相較於抗klhigg2對照抗體治療的猴(對照動物)，tc降低27％。直至第27天，tc返回至與對照動物中觀測到的水平類似的水平。在注射之後3天觀測到21b12達成的最大tc降低，相較於對照動物，tc降低20％。直至第4天，tc短暫返回至與媒介物治療的猴中觀測到的水平類似的水平，但在第14天與第18天之間(包括第14天及第18天)顯著較低。在注射之後9天觀測到8a3達成的最大tc降低，相較於對照動物，tc降低22％。直至第30天，tc返回至與對照動物中觀測到的水平類似的水平(圖42)。11f1、21b12及8a3對血清hdl膽固醇及甘油三酯的影響平均來說及在各時間點，用11f1或8a3治療的動物的hdl-c或甘油三酯水平並不顯著不同(基於α＝0.05顯著性水平)於抗klhigg2對照抗體治療的猴中所觀測到的。然而，21b12在單一時間點(在注射後第18天)確實誘導hdl-c的統計顯著變化(圖43及圖45)。11f1、21b12及8a3對載脂蛋白b(apob)的影響在注射後第3、6、15、24及33天測量血清apob水平。相較於抗klhigg2對照抗體治療的猴，11f1及8a3在第3至24天使apob降低(圖46)。21b12僅在第3天使apob水平發生統計顯著降低。11f1、21b12及8a3的藥物動力學概況由治療達成的平均濃度-時間概況的概要圖展示於748中。接受11f1、21b12、8a3及抗klhigg2對照抗體的動物的估計的平均藥物動力學參數顯示於圖47的表中。所有組中的抗體吸收皆一致且呈現皮下抗體施用的特徵。21b12關於cl/f、cmax及auc0-∞的藥物動力學特性與21b12在相同劑量下施用的先前研究中所觀測到的一致。11f1及8a3的藥物動力學顯著不同於21b12，其中觀測到cl/f較低(約為21b12cl/f的15％)且估計半衰期更長(約200小時，相較於21b12的40小時)。值得注意的是，11f1及8a3的藥物動力學彼此之間以及與抗klhigg2對照抗體均無區別。鑑於11f1及8a3與對pcsk9無親和力的抗klhigg2對照抗體具有相同暴露概況，這些數據表明11f1及8a3的處置受與pcsk9目標締合影響的程度遠小於21b12。結果概述歷經45天研究過程，觀測到相較於抗klhigg2對照抗體，施用11f1、21b12或8a3的動物的tc及ldl-c發生統計顯著降低。從第2天至第24天(包括第2天及第24天)，11f1使ldl-c發生統計顯著降低(相對於抗klhigg2對照抗體)。從第1天至第4天(包括第1天及第4天)，21b12顯示ldl-c的統計顯著降低(相對於抗klhigg2對照抗體)。從第1天至第24天(包括第1天及第24天)，8a3顯示ldl-c的統計顯著降低(相對於抗klhigg2對照抗體)。對於所有組，tc及apob的變化反映所觀測到的ldl-c變化。11f1在注射後9天達成最大ldl-c降低(相對於在相同時間點的抗klhigg2對照抗體)(-57％)。21b12在注射後3天達成最大ldl-c降低(相對於在相同時間點的抗klhigg2對照抗體)(-64％)。8a3在注射後4天達成最大ldl-c降低(相對於在相同時間點的抗klhigg2對照抗體)(-54％)。21b12在單一時間點，即，在注射之後18天使hdl-c降低。在施用11f1或8a3之後，未觀測到hdl-c水平的統計顯著變化。在施用11f1、21b12或8a3之後，未觀測到甘油三酯水平的統計顯著變化。實施例37用以評估人類抗pcsk9抗體在患有純合子家族性高膽固醇血症的受試者中的安全性、耐受性及對ldl-c的功效的兩部分研究研究設計：這是一項2部分研究。a部分是一項開放標籤、單臂、多中心試驗性研究。b部分是一項人類抗體21b12的雙盲、隨機、安慰劑對照的、多中心研究，除了擴充招募之外其它地方與a部分的設計相同。評估的入選/排除標準以及日程安排二者對於a部分和b部分將是相同的。入選標準包括：●男性和女性的年齡≥12歲至≤65歲●純合子家族性高膽固醇血症的診斷●穩定的降脂療法持續至少4周●ldl膽固醇＞130mg/dl(3.4mmol/l)●甘油三酯＜400mg/dl(4.5mmol/l)●在篩選時體重＞40kg或更大排除標準包括：●在隨機分組前8周內ldl或血漿單採●紐約心力衰竭協會(nyha)分級iii或iv或最近已知的左室射血分數＜30％●在隨機分組後的3個月內有心肌梗塞、不穩定性心絞痛、經皮冠狀動脈介入治療(pci)、冠狀動脈旁路移植術(cabg)或中風●已計劃的心臟手術或血管重建術●不受控制的心律失常●不受控制的高血壓評估的日程安排包括但不限於收集不良事件(ae)以及嚴重不良事件(sae)的數據、生命體徵、合併用藥、實驗室測試，等等。符合入選/排除標準的受試者將被告知遵循ncep成人治療組tlc(或類似)的飲食並且被要求在研究期間自始至終維持他們當前的降脂療法。21b12製劑將以無菌、澄清、無色的冷凍液形式呈現。每個無菌小瓶都充滿1-ml可遞送體積的用10mm乙酸鈉、9％(w/v)蔗糖、0.004％(w/v)聚山梨醇酯20(ph5.2)配製的70mg/ml21b12。每個小瓶都一次性使用。安慰劑將在相同的容器內以澄清、無色、無菌、無蛋白質的冷凍液形式呈現，並且配製成10mm乙酸鈉、9％(w/v)蔗糖、0.004％(w/v)聚山梨醇酯20，ph5.2。在a部分中，4-16個之間的受試者將被招募並且接受開放標籤的21b12製劑(420mgq4w)。每4周將進行研究隨訪。這些隨訪將需要收集不良事件(ae)以及嚴重不良事件(sae)的數據、生命體徵、合併用藥、實驗室測試，等等。在第6周收集空腹脂質組以便評估響應於用21b12製劑的治療的ldl-c水平最低點。所述21b12製劑將在第1天、第4周和第8周施用。研究結束(eos)隨訪和末次脂質估算將在第12周進行。大約51名新受試者將招募至b部分中。招募的受試者將以2:1分配量被隨機分為2個治療組：420mg21b12q4wsc或安慰劑q4wsc。隨機分組將通過基線ldl-c水平分層。每4周進行研究隨訪，在第2周和第10周進行兩個任選的隨訪。隨訪將需要收集ae和sae數據、生命體徵、合併用藥、實驗室測試，等等。在第6周收集空腹脂質組以評估響應於21b12治療的ldl-c水平最低點。21b12製劑將在第1天、第4周及第8周施用。所有受試者的研究結束(eos)隨訪和末次脂質估算將在第12周進行。以引用的方式併入如果本文引用的所有參考文獻，包括專利、專利申請、論文、教科書及其類似參考文獻及其中引用的參考文獻尚未以引用的方式整體併入本文，那麼其據此以引用的方式整體併入本文。如果以引用的方式併入的參考文獻中提供的任何定義或術語不同於本文提供的術語及論述，那麼以本文的術語及定義為準。等效物上述書面說明書被視為足以使本領域技術人員能夠實施本發明。上述描述及實施例詳述本發明的某些優選實施方案且描述發明者所預期的最佳方式。然而，應了解無論上述事項在文中可能如何詳述，本發明皆可以許多方式實施且本發明應根據隨附權利要求及其任何等效物加以解釋。序列表chan,joycegibbs,johndias,claptonscott,robertwasserman,scottclogston,chrisosslund,timothy治療或預防膽固醇相關疾病的方法a-1635-wo-pct61/642,3632012-05-0361/614,4172012-03-2261/595,5262012-02-0661/562,3032011-11-2161/484,6102011-05-10587fastseq4.0版(windows系統)1662prt智人1glngluaspgluaspglyasptyrglugluleuvalleualaleuarg151015serglugluaspglyleualaglualaprogluhisglythrthrala202530thrphehisargcysalalysaspprotrpargleuproglythrtyr354045valvalvalleulysglugluthrhisleuserglnsergluargthr505560alaargargleuglnalaglnalaalaargargglytyrleuthrlys65707580ileleuhisvalphehisglyleuleuproglypheleuvallysmet859095serglyaspleuleugluleualaleulysleuprohisvalasptyr100105110ileglugluaspserservalphealaglnserileprotrpasnleu115120125gluargilethrproproargtyrargalaaspglutyrglnpropro130135140aspglyglyserleuvalgluvaltyrleuleuaspthrserilegln145150155160serasphisarggluilegluglyargvalmetvalthrasppheglu165170175asnvalproglugluaspglythrargphehisargglnalaserlys180185190cysaspserhisglythrhisleualaglyvalvalserglyargasp195200205alaglyvalalalysglyalasermetargserleuargvalleuasn210215220cysglnglylysglythrvalserglythrleuileglyleugluphe225230235240ilearglysserglnleuvalglnprovalglyproleuvalvalleu245250255leuproleualaglyglytyrserargvalleuasnalaalacysgln260265270argleualaargalaglyvalvalleuvalthralaalaglyasnphe275280285argaspaspalacysleutyrserproalaseralaprogluvalile290295300thrvalglyalathrasnalaglnaspglnprovalthrleuglythr305310315320leuglythrasnpheglyargcysvalaspleuphealaproglyglu325330335aspileileglyalaserseraspcysserthrcysphevalsergln340345350serglythrserglnalaalaalahisvalalaglyilealaalamet355360365metleuseralagluprogluleuthrleualagluleuargglnarg370375380leuilehispheseralalysaspvalileasnglualatrpphepro385390395400gluaspglnargvalleuthrproasnleuvalalaalaleupropro405410415serthrhisglyalaglytrpglnleuphecysargthrvaltrpser420425430alahisserglyprothrargmetalathralailealaargcysala435440445proaspglugluleuleusercysserserpheserargserglylys450455460argargglygluargmetglualaglnglyglylysleuvalcysarg465470475480alahisasnalapheglyglygluglyvaltyralailealaargcys485490495cysleuleuproglnalaasncysservalhisthralaproproala500505510glualasermetglythrargvalhiscyshisglnglnglyhisval515520525leuthrglycysserserhistrpgluvalgluaspleuglythrhis530535540lysproprovalleuargproargglyglnproasnglncysvalgly545550555560hisargglualaserilehisalasercyscyshisalaproglyleu565570575glucyslysvallysgluhisglyileproalaproglnglyglnval580585590thrvalalacysglugluglytrpthrleuthrglycysseralaleu595600605proglythrserhisvalleuglyalatyralavalaspasnthrcys610615620valvalargserargaspvalserthrthrglyserthrsergluglu625630635640alavalthralavalalailecyscysargserarghisleualagln645650655alaserglngluleugln66022076dna智人2atgggcaccgtcagctccaggcggtcctggtggccgctgccactgctgctgctgctgctg60ctgctcctgggtcccgcgggcgcccgtgcgcaggaggacgaggacggcgactacgaggag120ctggtgctagccttgcgctccgaggaggacggcctggccgaagcacccgagcacggaacc180acagccaccttccaccgctgcgccaaggatccgtggaggttgcctggcacctacgtggtg240gtgctgaaggaggagacccacctctcgcagtcagagcgcactgcccgccgcctgcaggcc300caggctgcccgccggggatacctcaccaagatcctgcatgtcttccatggccttcttcct360ggcttcctggtgaagatgagtggcgacctgctggagctggccttgaagttgccccatgtc420gactacatcgaggaggactcctctgtctttgcccagagcatcccgtggaacctggagcgg480attacccctccgcggtaccgggcggatgaataccagccccccgacggaggcagcctggtg540gaggtgtatctcctagacaccagcatacagagtgaccaccgggaaatcgagggcagggtc600atggtcaccgacttcgagaatgtgcccgaggaggacgggacccgcttccacagacaggcc660agcaagtgtgacagtcatggcacccacctggcaggggtggtcagcggccgggatgccggc720gtggccaagggtgccagcatgcgcagcctgcgcgtgctcaactgccaagggaagggcacg780gttagcggcaccctcataggcctggagtttattcggaaaagccagctggtccagcctgtg840gggccactggtggtgctgctgcccctggcgggtgggtacagccgcgtcctcaacgccgcc900tgccagcgcctggcgagggctggggtcgtgctggtcaccgctgccggcaacttccgggac960gatgcctgcctctactccccagcctcagctcccgaggtcatcacagttggggccaccaat1020gcccaggaccagccggtgaccctggggactttggggaccaactttggccgctgtgtggac1080ctctttgccccaggggaggacatcattggtgcctccagcgactgcagcacctgctttgtg1140tcacagagtgggacatcacaggctgctgcccacgtggctggcattgcagccatgatgctg1200tctgccgagccggagctcaccctggccgagttgaggcagagactgatccacttctctgcc1260aaagatgtcatcaatgaggcctggttccctgaggaccagcgggtactgacccccaacctg1320gtggccgccctgccccccagcacccatggggcaggttggcagctgttttgcaggactgtg1380tggtcagcacactcggggcctacacggatggccacagccatcgcccgctgcgccccagat1440gaggagctgctgagctgctccagtttctccaggagtgggaagcggcggggcgagcgcatg1500gaggcccaagggggcaagctggtctgccgggcccacaacgcttttgggggtgagggtgtc1560tacgccattgccaggtgctgcctgctaccccaggccaactgcagcgtccacacagctcca1620ccagctgaggccagcatggggacccgtgtccactgccaccaacagggccacgtcctcaca1680ggctgcagctcccactgggaggtggaggaccttggcacccacaagccgcctgtgctgagg1740ccacgaggtcagcccaaccagtgcgtgggccacagggaggccagcatccacgcttcctgc1800tgccatgccccaggtctggaatgcaaagtcaaggagcatggaatcccggcccctcagggg1860caggtgaccgtggcctgcgaggagggctggaccctgactggctgcagcgccctccctggg1920acctcccacgtcctgggggcctacgccgtagacaacacgtgtgtagtcaggagccgggac1980gtcagcactacaggcagcaccagcgaagaggccgtgacagccgttgccatctgctgccgg2040agccggcacctggcgcaggcctcccaggagctccag20763692prt智人3metglythrvalserserargargsertrptrpproleuproleuleu151015leuleuleuleuleuleuleuglyproalaglyalaargalaglnglu202530aspgluaspglyasptyrglugluleuvalleualaleuargserglu354045gluaspglyleualaglualaprogluhisglythrthralathrphe505560hisargcysalalysaspprotrpargleuproglythrtyrvalval65707580valleulysglugluthrhisleuserglnsergluargthralaarg859095argleuglnalaglnalaalaargargglytyrleuthrlysileleu100105110hisvalphehisglyl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