一種含益生元的雙歧桿菌微膠囊的製備方法
2023-12-10 10:24:47 1
專利名稱：一種含益生元的雙歧桿菌微膠囊的製備方法
技術領域：
本發明屬於雙歧桿菌製劑技術領域，涉及一種含益生元的雙歧桿菌微膠囊的製備方法。
背景技術：
近年來的大量研究發現，雙歧桿菌對人體有重要的生理和保健功能，可抑制腐生菌的生長，改善維生素代謝，防止便秘，降低膽固醇，預防和治療乳糖消化不良，提高人體免疫機能，並具有抗癌、抗衰老作用。隨著對雙歧桿菌保健功能研究的不斷深入，各種利用雙歧桿菌活性的藥物和食品也相繼推出。雖然雙歧桿菌作為食品中最受關注、最安全、也是使用最多的一種益生菌，對人越來越多的保健作用被證實。但是雙歧桿菌是一種專性厭氧菌，對營養條件要求高，對氧極為敏感，對低PH的抵抗力差，活性保持較困難，因而目前市場上銷售的雙歧桿菌產品液體或粉體製劑活菌數下降很快，產品的貯存穩定性極差，保健功效損失快。如雙歧桿菌液體製劑在幾天內活菌數就會下降一個數量級，凍幹菌粉在一般貯存溫度下也只能保存幾個月。另外，雙歧桿菌要對人體產生有益作用，首先它必須通過胃環境、十二指腸以大量的存活菌到達腸道病定殖於腸黏膜 上。但由於雙歧桿菌耐酸、耐膽鹽能力差，雙歧桿菌的活菌數在此過程中也會大幅度下降。再者，在雙歧桿菌微膠囊的製備過程中也會受到氧氣的影響而導致其活菌數大量下降。益生元(Prebiotics)是這樣一種物質它是一種膳食補充劑,通過選擇性的刺激一種或少數種菌落中的細菌的生長與活性而對寄主產生有益的影響從而改善寄主健康的不可被消化的食品成分(Gibson and Roberfroid, 1995)。成功的益生元應是在通過上消化道時，大部分不被消化而能被腸道菌群所發酵的。最重要的是它只是刺激有益菌群的生長，而不是有潛在致病性或腐敗活性的有害細菌。由於雙歧桿菌和乳酸菌被認為對人體有很多有益的影響，所以一般的益生元被假設認為能促進此兩種菌數量的增加或是其活性的增強。可以促進(生成促進)雙歧桿菌的物質被認為為雙歧因子。益生元主要包括各種寡糖類物質(Oligosaccharides)或稱低聚糖(由2 10個分子單糖組成)。更概括的說法是功能性低聚糖。常見的雙歧因子有低聚果糖、低聚異麥芽糖、低聚木糖、菊糖、低聚半乳糖。
發明內容
本發明解決的問題在於提供一種含益生元的雙歧桿菌微膠囊的製備方法，所製備的雙歧桿菌微膠囊能夠促進雙歧桿菌的增殖，有利於提高微膠囊內雙歧桿菌的活菌數。本發明是通過以下技術方案來實現一種含益生元的雙歧桿菌微膠囊的製備方法，包括以下步驟I)將雙歧桿菌的菌懸液和含有益生元的海藻酸鈉溶液按照I :5 20的體積比例混合，充分混均後得到雙歧桿菌膠液；所述的雙歧桿菌的菌懸液是將雙歧桿菌以0. I 5. OX IO11Cfumr1的濃度懸浮在質量濃度為O. 85 O. 9%的無菌生理鹽水中；所述的含有益生元的海藻酸鈉溶液中益生元量的質量濃度為3 9%，海藻酸鈉的質量濃度為I 3% ；2)用壓力噴嘴將雙歧桿菌膠液霧化成液滴後，擠壓入含有乳化劑體積分數為
O.2 1.0%的大豆油中，雙歧桿菌膠液與大豆油的體積比為I :4 7，充分攪拌，乳化5 20min，然後加入質量濃度為I 5%的氯化鈣溶液，靜置20min以上；3)待靜置分層後，傾去上層大豆油，離心得到溼膠囊並用生理鹽水充分洗滌，得到含有益生元的雙歧桿菌微膠囊。
所述的雙歧桿菌為兩歧雙歧桿菌、長雙歧桿菌或乳雙歧桿菌中的一種。所述的益生元為水蘇糖、低聚異麥芽糖、低聚木糖、低聚果糖、菊糖、低聚半乳糖中的一種或幾種。所述含有益生元的海藻酸鈉溶液中還含有氯化鈉，其質量濃度為O. 85 O. 9%。所述的雙歧桿菌為接種於MRS培養基經過增殖培養所獲得的。所述的乳化劑為吐溫-80。所述的雙歧桿菌的菌懸液和含有益生元的海藻酸鈉溶液按照I :8 12的質量比例混合。與現有技術相比，本發明具有以下有益的技術效果本發明提供的含益生元的雙歧桿菌微膠囊的製備方法，在製備的雙歧桿菌微膠囊產品中加入了益生元，益生元能夠促進雙歧桿菌的增殖，在一定程度上提高了微膠囊內雙歧桿菌的活菌數，在未加入益生元之前每克微膠囊的活菌數大概在8. OX IO9Cfug'在加入了益生元後其每克膠囊活菌數明顯提高，可達到I. IXlOiciCfug'本發明提供的含益生元的雙歧桿菌微膠囊的製備方法，在製備雙歧桿菌微膠囊的的過程中將乳化法和擠壓法結合，採用壓力噴嘴將含有除氧劑的菌膠液霧化成小液滴噴入大豆油中，比傳統的注射器擠壓法省時省力。本發明提供的含益生元的雙歧桿菌微膠囊的製備方法，由於所製備的微膠囊含有雙歧桿菌益生元，當食用了這種雙歧桿菌微膠囊的產品，當微膠囊到達腸道後，在大量雙歧桿菌在腸道釋放的同時，益生元也會在腸道發揮其增殖作用，可以使腸道內的雙歧桿菌活菌數迅速上升，從而在真正意義上實現益生菌的保健功能。
具體實施例方式下面結合具體的實施例對本發明做進一步的詳細說明，所述是對本發明的解釋而不是限定。實施例I含益生元的雙歧桿菌微膠囊的製備方法，包括以下步驟(I)將O. 4g雙歧桿菌凍幹菌粉(兩歧雙歧桿菌)接種於18mL MRS液體培養基(購買於青島高科園海博生物技術有限公司)中，在MRS液體培養基中添加佔培養基體積O. 05%的半胱氨酸鹽酸鹽，在37°C培養條件下採用此MRS液體培養基活化三次，每次以5%的接種量轉接，其中前兩次均在37°C培養條件下培養20 24h，第三次在37°C培養條件下培養18h，然後離心(4000r，15min)棄去上清液得菌泥，將菌泥洗兩次滌後與O. 85 O. 9%無菌生理鹽水混合配製成濃度為I. OX IO11CfumL-1菌懸液以備使用。(2)配製濃度2%且含益生元量為3%的海藻酸鈉溶液，110°C，滅菌15min。所述的益生元為水蘇糖、低聚異麥芽糖、低聚半乳糖中的一種。(3)將菌懸液和含 有益生元的海藻酸鈉溶液按照I :10的比例混合併在旋渦混合儀上混合均勻得菌膠液。(4)用壓力噴嘴將上述菌膠混合液逐滴滴入大豆油中(含O. 4%的吐溫-80)，菌膠液和大豆油的比例為I :4，用磁力攪拌器攪拌800rpm/min,乳化5min,然後快速加入濃度為
I.5%的氯化鈣溶液，靜置30min。其中壓力噴嘴通過類似於噴霧器的方式將菌膠液霧化成液滴，代替了傳統的注射器擠壓法形成液滴狀，省時省力。(5)傾去上層大豆油，通過離心得到溼膠囊(1000r，5min)，用生理鹽水洗滌3次。實施例2含益生元的雙歧桿菌微膠囊的製備方法，包括以下步驟(I)將O. 4g雙歧桿菌凍幹菌粉(長雙歧桿菌)接種於18mL MRS液體培養基(購買於青島高科園海博生物技術有限公司)中，在MRS液體培養基中添加佔培養基體積O. 05%的半胱氨酸鹽酸鹽，在37°C培養條件下採用此MRS液體培養基活化三次，每次以5%的接種量轉接，其中前兩次均在37°C培養條件下培養20 24h，第三次在37°C培養條件下培養18h，然後離心(4000r，15min)棄去上清液得菌泥，將菌泥洗兩次滌後與O. 85 O. 9%無菌生理鹽水混合配製成濃度為5. OX IO11CfumL-1菌懸液以備使用。(2)配製濃度2%且含益生元量為2%的海藻酸鈉溶液，110°C，滅菌15min。所述的益生元為低聚木糖、低聚果糖、低聚半乳糖中的兩種。(3)將菌懸液和含有益生元的海藻酸鈉溶液按照I :12的比例混合併在旋渦混合儀上混合均勻得菌膠液。(4)用壓力噴嘴將上述菌膠混合液逐滴滴入大豆油中(含O. 4%的吐溫-80)，菌膠液和大豆油的比例為I :7，用磁力攪拌器攪拌800rpm/min,乳化IOmin,然後快速加入濃度為2. 5%的氯化鈣溶液，靜置30min。(5)傾去上層大豆油，通過離心得到溼膠囊(1000r，5min)，用生理鹽水洗滌3次。實施例3含益生元的雙歧桿菌微膠囊的製備方法，包括以下步驟(I)將O. 4g雙歧桿菌凍幹菌粉(乳雙歧桿菌)接種於18mL MRS液體培養基(購買於青島高科園海博生物技術有限公司)中，在MRS液體培養基中添加佔培養基體積O. 05%的半胱氨酸鹽酸鹽，在37°C培養條件下採用此MRS液體培養基活化三次，每次以5%的接種量轉接，其中前兩次均在37°C培養條件下培養20 24h，第三次在37°C培養條件下培養18h，然後離心(4000r，15min)棄去上清液得菌泥，將菌泥洗兩次滌後與O. 85 O. 9%無菌生理鹽水混合配製成濃度為5. OX IOltlCfumL-1菌懸液以備使用。(2)配製濃度2%且含益生元量為3%的海藻酸鈉溶液，110°C，滅菌15min。所述的益生元為水蘇糖、低聚果糖、菊糖、低聚半乳糖中的兩種。(3)將菌懸液和含有益生元的海藻酸鈉溶液按照I :10的比例混合併在旋渦混合儀上混合均勻得菌膠液。
(4)用壓力噴嘴將上述菌膠混合液逐滴滴入大豆油中(含O. 4%的吐溫-80)，菌膠液和大豆油的比例為I :6，用磁力攪拌器攪拌800rpm/min,乳化15min,然後快速加入濃度為2%的氯化鈣溶液，靜置30min。(5)傾去上層大豆油，通過離心得到溼膠囊(1000r，5min)，用生理鹽水洗滌3次。實施例4含益生元的雙歧桿菌微膠囊的製備方法，包括以下步驟(I)將O. 4g雙歧桿菌凍幹菌粉(長雙歧桿菌)接種於18mL MRS液體培養基(購買於青島高科園海博生物技術有限公司)中，在MRS液體培養基中添加佔培養基體積O. 05%的半胱氨酸鹽酸鹽，在37°C培養條件下採用此MRS液體培養基活化三次，每次以5%的接種量轉接，其中前兩次均在37°C培養條件下培養20 24h，第三次在37°C培養條件下培養18h， 然後離心(4000r，15min)棄去上清液得菌泥，將菌泥洗兩次滌後與O. 85 O. 9%無菌生理鹽水混合配製成濃度為I. OX IO11CfumL-1菌懸液以備使用。(2)配製濃度3%且含益生元量為3%的海藻酸鈉溶液，110°C，滅菌15min。所述的益生元為低聚異麥芽糖、低聚木糖、低聚果糖、低聚半乳糖中的一種或幾種。(3)將菌懸液和含有益生元的海藻酸鈉溶液按照I :8的比例混合併在旋渦混合儀上混合均勻得菌膠液。(4)用壓力噴嘴將上述菌膠混合液逐滴滴入大豆油中(含O. 4%的吐溫-80)，菌膠液和大豆油的比例為I :5，用磁力攪拌器攪拌800rpm/min,乳化IOmin,然後快速加入濃度為2%的氯化鈣溶液，靜置30min。(5)傾去上層大豆油，通過離心得到溼膠囊(1000r，5min)，用生理鹽水洗滌3次。
權利要求
1.一種含益生元的雙歧桿菌微膠囊的製備方法，其特徵在於，包括以下步驟 1)將雙歧桿菌的菌懸液和含有益生元的海藻酸鈉溶液按照I:5 20的體積比例混合，充分混均後得到雙歧桿菌膠液； 所述的雙歧桿菌的菌懸液是將雙歧桿菌以O. I 5. OX IO11CfumL-1的濃度懸浮在質量濃度為O. 85 O. 9%的無菌生理鹽水中； 所述的含有益生元的海藻酸鈉溶液中益生元量的質量濃度為3 9%，海藻酸鈉的質量濃度為I 3% ； 2)用壓力噴嘴將雙歧桿菌膠液霧化成液滴後，擠壓入含有乳化劑體積分數為O.2 I.0%的大豆油中，雙歧桿菌膠液與大豆油的體積比為I :4 7，充分攪拌，乳化5 20min，然後加入質量濃度為I 5%的氯化鈣溶液，靜置20min以上； 3)待靜置分層後，傾去上層大豆油，離心得到溼膠囊並用生理鹽水充分洗滌，得到含有益生元的雙歧桿菌微膠囊。
2.如權利要求I所述的含益生元的雙歧桿菌微膠囊的製備方法，其特徵在於，所述的雙歧桿菌為兩歧雙歧桿菌、長雙歧桿菌或乳雙歧桿菌中的一種。
3.如權利要求I所述的含益生元的雙歧桿菌微膠囊的製備方法，其特徵在於，所述的益生元為水蘇糖、低聚異麥芽糖、低聚木糖、低聚果糖、菊糖、低聚半乳糖中的一種或幾種。
4.如權利要求I所述的含益生元的雙歧桿菌微膠囊的製備方法，其特徵在於，所述含有益生元的海藻酸鈉溶液中還含有氯化鈉，其質量濃度為O. 85 O. 9%。
5.如權利要求I所述的含益生元的雙歧桿菌微膠囊的製備方法，其特徵在於，所述的雙歧桿菌為接種於MRS培養基經過增殖培養所獲得的。
6.如權利要求I所述的含益生元的雙歧桿菌微膠囊的製備方法，其特徵在於，所述的乳化劑為吐溫-80。
7.如權利要求I所述的含益生元的雙歧桿菌微膠囊的製備方法，其特徵在於，所述的雙歧桿菌的菌懸液和含有益生元的海藻酸鈉溶液按照I :8 12的質量比例混合。
全文摘要
本發明公開了一種含益生元的雙歧桿菌微膠囊的製備方法，用壓力噴嘴將雙歧桿菌膠液霧化成液滴後，擠壓入含有乳化劑體積分數為0.2～1.0%的大豆油中，雙歧桿菌膠液與大豆油的體積比為14～7，充分攪拌，乳化5～20min，然後加入質量濃度為1～5%的氯化鈣溶液，靜置20min以上；待靜置分層後，傾去上層大豆油，離心得到溼膠囊並用生理鹽水充分洗滌，得到含有益生元的雙歧桿菌微膠囊。本發明在製備的雙歧桿菌微膠囊產品中加入了益生元，益生元能夠促進雙歧桿菌的增殖，在一定程度上提高了微膠囊內雙歧桿菌的活菌數，加入了益生元後其每克膠囊活菌數明顯提高，可達到1010～1011cfug-1。
文檔編號A23L1/09GK102960599SQ20121047049
公開日2013年3月13日 申請日期2012年11月19日 優先權日2012年11月19日
發明者陳合, 王野, 舒國偉 申請人:陝西科技大學