一種凍幹滅活乙型腦炎疫苗的製作方法
2023-12-08 12:48:11
專利名稱：一種凍幹滅活乙型腦炎疫苗的製作方法
技術領域：
本發明涉及一種新型凍幹滅活乙型腦炎全病毒疫苗。
背景技術：
流行性乙型腦炎(epidemic encephalitis B,簡稱乙腦)的病原體1934年在日本發現，故又稱日本乙型腦炎(Japanese Encephalitise)。乙腦病毒屬披膜病毒科黃病毒屬，球形病毒顆粒外有囊膜，對溫度、乙醚等有機溶劑敏感。乙腦病毒經蚊蟲傳播，夏秋季流行。全球每年發病約50000例，主要流行地區為我國南方、東南亞及熱帶地區等國家，WHO建議所有乙腦流行國家均應實施乙腦疫苗免疫。目前國際上使用的乙腦疫苗主要為全病毒乙腦滅活疫苗和減毒活疫苗。疫苗在運輸和儲存過程中保持良好穩定性是保證疫苗免疫效果的關鍵。與液體製劑相比，凍幹疫苗具有更好的穩定性。目前我國絕大部分凍幹疫苗含有動物源蛋白，如人血白蛋白、明膠等。人血白蛋白及明膠具有攜帶源自動物本身病毒等外源因子的潛在危險，同時，明膠或血清蛋白也常常引起疫苗受種者的過敏反應。因此有必要尋找一種適合於全病毒滅活疫苗的穩定的不含蛋白的賦形劑，尤其是適合於乙腦全病毒的穩定劑。另外，由於純化疫苗中雜蛋白含量較低，與疫苗有效蛋白加在一起總蛋白含量也僅為100微克以內，病毒顆粒處於完全裸露狀態，因此比起未經純化的疫苗，純化疫苗更加不穩定。本發明的目的就是建立一種不含明膠和人血白蛋白的穩定劑和賦形劑配方，使疫苗在凍幹、儲存及運輸過程中保持良好的穩定性。
發明內容
本發明提供了一種乙腦全病毒凍幹製劑，其包含(a)滅活的乙腦全病毒；(b)穩定劑，其包含麥芽糖，乳糖，和任選地，海藻糖，甘露醇，山梨醇和/或胺基酸(優選地，精氨酸，穀氨酸，穀氨醯胺和賴氨酸中的一種或更多種，更優選地為精氨酸)；以及任選地(c)緩衝劑(優選地,磷酸鹽)，表面活性劑(優選地，tween80),等滲調節劑(優選地鈉鹽，更優選地氯化鈉)，和/或螯合劑(優選地EDTA或EDTA鈉鹽)。在一個實施方式中，本發明的乙腦全病毒凍幹製劑中穩定劑為麥芽糖，乳糖。在一個實施方式中，本發明的乙腦全病毒凍幹製劑中穩定劑為麥芽糖，乳糖和海藻糖。在一個實施方式中，所述穩定劑為麥芽糖，乳糖和甘露醇。在一個實施方式中，所述穩定劑為麥芽糖，乳糖和山梨醇。在一個實施方式中，所述穩定劑為麥芽糖，乳糖和精氨酸。在一個實施方式中，所述穩定劑為麥芽糖，乳糖，甘露醇和山梨醇。在一個實施方式中，所述穩定劑為麥芽糖，乳糖，海藻糖和甘露醇。在一個實施方式中，所述穩定劑為麥芽糖，乳糖，海藻糖和山梨醇。在一個實施方式中，所述穩定劑為麥芽糖，乳糖，海藻糖和精氨酸。在一個實施方式中，所述穩定劑為麥芽糖，乳糖，甘露醇和精氨酸。在一個實施方式中，所述穩定劑為麥芽糖，乳糖，山梨醇和精氨酸。在一個實施方式中，所述穩定劑為麥芽糖，乳糖，海藻糖，甘露醇和山梨醇。在一個實施方式中，所述穩定劑為麥芽糖，乳糖，甘露醇，山梨醇和精氨酸。在一個實施方式中，所述穩定劑為麥芽糖，乳糖，海藻糖，甘露醇和精氨酸。在一個實施方式中，所述穩定劑為麥芽糖，乳糖，海藻糖，山梨醇和精氨酸。在一個實施方式中，所述穩定劑為麥芽糖，乳糖，海藻糖，甘露醇，山梨醇和精氨酸。在一個實施方式 中，本發明的凍幹製劑包含滅活的乙腦全病毒，麥芽糖，乳糖，甘露醇，氯化鈉和磷酸鹽緩衝劑。在一個實施方式中，本發明的凍幹製劑包含滅活的乙腦全病毒，麥芽糖，乳糖，海藻糖，甘露醇，氯化鈉和磷酸鹽緩衝劑。在一個實施方式中，本發明的凍幹製劑包含滅活的乙腦全病毒，麥芽糖，乳糖，海藻糖，精氨酸，和磷酸鹽緩衝劑。本文所述穩定劑並不排除所述物質除了穩定作用之外還起其它作用，例如，所述麥芽糖，乳糖，海藻糖，甘露醇等物質還可以起賦形劑的作用。其它物質的命名(例如，緩衝齊 ，表面活性劑，等滲調節劑，螯合劑等等)也是類似的。本發明的乙腦全病毒凍幹製劑不包含動物源蛋白質，例如明膠和人血白蛋白。本發明的乙腦全病毒凍幹製劑中所述滅活的乙腦全病毒是以VERO細胞或者人二倍體細胞為基質生產的，優選地，採用生物反應器和無血清培養基培養細胞和繁殖病毒。本發明的乙腦全病毒凍幹製劑中所述滅活乙腦病毒採用下述方法滅活將收穫的病毒懸液經過超濾濃縮、超速離心純化後用甲醛滅活。本發明的乙腦全病毒凍幹製劑在使用前需要進行重構，重構按照本領域的已知方法並根據生產商提供的說明書進行。例如，在一個實施方式中，本發明的凍幹製劑用O. I-Iml注射用水/ 一次人用劑量(例如，O. 4-0. 6ml注射用水/ 一次人用劑量，例如O. 5ml注射用水/一次人用劑量)進行重構。本文所述一次人用劑量優選地為一個包裝單元的劑量，例如一瓶凍幹製劑劑量。在本發明的乙腦全病毒凍幹製劑重構後的溶液中病毒的濃度為10-20微克/ml，並且總蛋白不高於20微克/ml，糖類(例如，麥芽糖，乳糖和海藻糖)的濃度(W/W)為I % -15% (例如，1-14%, 1-13%, 1-12%, 1-11%, 1-10 %, 5 %, 6 %, 7 %, 8 %, 9 %, 10%,11%，12%，13%，14%，15% 等)，例如，麥芽糖濃度(W/W)為 1-10% (例如，I %，2 %，3%，4%，5%，6%，7%，8%，9%，10%等)，乳糖濃度(W/W)為 1-10% (例如，I %，2%，3%，4%，5%，6%，7%，8%，9%，10%等)，海藻糖濃度(W/W)為 0-10% (例如，O. 1%,0. 2%,O. 3%,0.4%，0.5%，1%，2%，3%，4%，5%，6%，7%，8%，9%，10%等)。下述物質如果存在的話，其在所述凍幹製劑重構後的溶液中的濃度分別為如下所述甘露醇 2 % -20 % (W/W)，山梨醇 2-10 % (ff/ff)，EDTA 或者 EDTA 鈉鹽 O. 03-3 % (V/ff)，tween80 O. 001-0. I % (ff/ff)，磷酸鹽緩衝液 IOmM-IOOmM,氯化鈉 O. 05-0. 15M,精氨酸O. 35 O. 9mM,穀氨酸O. 8 I. 6mM,穀氨醯胺O. 15 O. 45mM,賴氨酸O. 385 O. 77mM。本文所用的「W/W」表示「重量/重量」。在一個實施方式中，本發明凍幹製劑中麥芽糖與乳糖的重量比為0.5 : 1-1 : O. 5,在一個實施方式中，所述重量比為O. 6 : 1-1 : O. 6,在一個實施方式中，所述重量比為O. 7 1-1 O. 7，在一個實施方式中，所述重量比為0.8 1-1 O. 8，在一個實施方式中，所述重量比為O. 9 1-1 O. 9，在一個實施方式中，所述重量比為I : I。在一個實施方式中，本發明凍幹製劑中麥芽糖與海藻糖的重量比為10 : 1-2 : I,在一個實施方式中，所述重量比為9 1.2 1，在一個實施方式中，所述重量比為8 : 1.2 : 1，在一個實施方式中，所述重量比為7 1-2 1，在一個實施方式中，所述重量比為6 1.2 1，在一個實施方式中，所述重量比為5 1-2 1，在一個實施方式中，所述重量比為4 : 1-2 : I,在一個實施方式中,所述重量比為3 : 1-2 : I,在一個實施方式中，所述重量比為5 2。在一個實施方式中，本發明凍幹製劑中麥芽糖乳糖海藻糖的重量比為5 : 5 : 2，在一個實施方式中，所述重量比為10 5 4，在一個實施方式中，所述重量比為10 10 1，在一個實施方式中，所述重量比為10 : 5 : I。 本發明還提供了上述任一種乙腦全病毒凍幹製劑重構所得的液體製劑。在一個實施方式中，所述液體製劑為用O. 5ml注射用水將凍幹製劑重構獲得。本文所述「包含」，「包括」等類似開放式用語也涵蓋了「由......組成」的情形。本發明與現有的疫苗相比具有顯著的優越性。表I為本發明疫苗的一種配方與現有乙腦疫苗配方的比較表I現行乙腦疫苗賦形劑與本發明配方比較
權利要求
1.一種乙腦全病毒凍幹製劑，其包含 (a)滅活的乙腦全病毒； (b)穩定劑，其包含麥芽糖，乳糖，和任選地，海藻糖，甘露醇，山梨醇和/或胺基酸(優選地，精氨酸，穀氨酸，穀氨醯胺和賴氨酸中的一種或更多種，更優選地為精氨酸)； 以及任選地 (C)緩衝劑(優選地,磷酸鹽),表面活性劑(優選地，tween80),等滲調節劑(優選地鈉鹽，更優選地氯化鈉)，和/或螯合劑(優選地EDTA或EDTA鈉鹽)。
2.權利要求I的乙腦全病毒凍幹製劑，所述製劑不包含動物源蛋白質，例如明膠和人血白蛋白。
3.權利要求I的乙腦全病毒凍幹製劑，所述滅活的乙腦全病毒是以VERO細胞或者人二倍體細胞為基質生產的，優選地，採用生物反應器和無血清培養基培養細胞和繁殖病毒。
4.權利要求3的乙腦全病毒凍幹製劑，所述滅活乙腦病毒採用下述方法滅活將收穫的病毒懸液經過超濾濃縮、超速離心純化後用甲醛滅活。
5.權利要求I的乙腦全病毒凍幹製劑，其中在所述凍幹製劑重構後的溶液中病毒的濃度為10-20微克/ml，並且總蛋白不高於20微克/ml。
6.權利要求I的乙腦全病毒凍幹製劑，其中在所述凍幹製劑重構後的溶液中糖類(例如，麥芽糖，乳糖和海藻糖)的濃度為1^-10% (W/W)。
7.權利要求I的乙腦全病毒凍幹製劑，其中下述物質如果存在的話，其在所述凍幹製劑重構後的溶液中的濃度分別為如下所述甘露醇2%-20% (W/W)，山梨醇2-10% (ff/ff)，EDTA 或者 EDTA 鈉鹽 0. 03-3 % (ff/ff)，tween80 0. 001-0. I % (ff/ff)，磷酸鹽緩衝液IOmM-IOOmM,氯化鈉0. 05-0. 15M,精氨酸0. 35 0. 9mM,穀氨酸0. 8 I. 6mM,穀氨醯胺.0.15 0. 45mM,賴氨酸 0. 385 0. 77mM。
8.權利要求5-7任一項的乙腦全病毒凍幹製劑,其中所述重構是用0.I-Iml注射用水/ 一次人用劑量(例如，0. 5ml注射用水/ 一次人用劑量)進行的。
9.由權利要求1-8任一項的乙腦全病毒凍幹製劑重構所得的液體製劑。
全文摘要
本發明提供了一種乙腦全病毒凍幹製劑，其包含(a)滅活的乙腦全病毒；(b)穩定劑，其包含麥芽糖，乳糖，和任選地，海藻糖，甘露醇，山梨醇和/或胺基酸；以及任選地(c)緩衝劑，表面活性劑，等滲調節劑)，和/或螯合劑。
文檔編號A61K47/26GK102631672SQ20121013111
公開日2012年8月15日 申請日期2012年4月27日 優先權日2012年4月27日
發明者任秀寶, 石慧穎 申請人:天津百若克醫藥生物技術有限責任公司