治療早發性卵巢功能不全的中藥組合物的製作方法

2023-11-07 18:14:58 2

本發明涉及一種治療早發性卵巢功能不全的藥物組合物，特別是涉及一種以植物中草藥為原料製成的治療早發性卵巢功能不全的中藥組合物。本發明還涉及由該中藥組合物製成的藥物。

背景技術：

早發性卵巢功能不全(prematrueovarianinsufficiency，poi)指女性在40歲之前卵巢功能衰竭，以月經紊亂(如停經或稀發月經)伴有高促性腺激素(促卵泡激素(fsh)、促黃體生成素(lh))和低雌激素(雌二醇(e2))為特徵。其臨床表現為：停經或月經稀發；不孕；潮熱、盜汗、陰道乾澀等雌激素缺乏症狀。絕經後發生骨質疏鬆、心血管疾病的風險增加，而且未經治療可能因這些風險影響患者的生命質量和壽命。

目前早發性卵巢功能不全的治療方法主要是激素治療(homonetreatment，ht)。ht對改善低雌激素症狀、預防絕經後骨質疏鬆及心血管疾病是有益的，但其陰道不規則出血、頭痛、腸胃不適等不良反應和血栓形成及長期應用潛在致癌的風險也限制了其應用，尤其對有生育要求的患者。目前ht的研究仍然缺乏延緩卵巢衰退及卵泡復甦的臨床證據，故相關指南建議採用贈卵體外受精一胚胎移植方案。

中醫藥治療poi有一定優勢，尤其在早期幹預對衰退卵巢的卵泡復甦、延緩卵巢的衰退可能有潛在的作用。2015年2月中華醫學會生殖醫學分會制定的《卵巢低反應專家共識》中明確指出中藥治療卵巢功能低下的有效性，但由於缺乏高級別的循證證據，目前尚沒有一種能有效治療poi的中藥組合物。

技術實現要素：

本發明的目的在於提供了一種用於治療早發性卵巢功能不全的中藥組合物，以解決上述問題中的至少一個。

根據本發明的一個方面，提供了一種治療早發性卵巢功能不全的中藥組合物，包括下述重量份數的各原料：

黃芪150份、當歸30～45份、淮山30～45份、熟地30～45份、仙靈脾30～45份、菟絲子30～45份和沙參30～45份。

本發明的中藥組合物中，黃芪大補脾肺之氣，淮山健脾益氣，兩者合用加強健脾補後天之功效，取以後天養先天之意，後天之本得養，先天之本隨之而充；當歸補血活血調經，與黃芪合用，以資化源，陽生陰長，氣旺血生；熟地補血養陰、填精益髓，仙靈脾補腎助陽，兩者合用腎陰陽並補，加強補先天之腎之功效；菟絲子滋補肝腎，沙參養陰生水，增強調補腎精之功。全方兼顧先後天之本，氣血同調，共奏「健脾補腎，益氣養血」之功效，可改善對早發性卵巢功能不全患者月經情況，對早發性卵巢功能不全患者的血清內分泌水平有一定的調節作用。

在一些具體的實施方式中，本發明治療早發性卵巢功能不全的中藥組合物由下述重量份數原料組成：

黃芪150份、當歸30份、淮山30份、熟地30份、仙靈脾30份、菟絲子30份和沙參30份。

根據本發明的另一個方面，還提供了一種治療早發性卵巢功能不全的藥物，包括上述中藥組合物的水提物和藥學上可接受的載體組成。其中，這種藥物可以被製成水劑、顆粒劑、散劑、片劑、膠囊劑、膏滋劑、合劑或丸劑等劑型，實現運輸、貯存和使用的方便、快捷。

附圖說明

圖1為本發明中藥在vcd誘導衰老模型中促進卵泡復甦的作用。

具體實施方式

下面結合實施例對本發明作進一步詳細的說明。

本發明中藥組合物主要針對早發性卵巢功能不全的患者，下面列舉了本發明實施例1～4的組分和重量。

實施例1：黃芪150g、當歸30g、淮山30g、熟地30g、仙靈脾30g、菟絲子30g和沙參30g。

實施例2：黃芪150g、當歸35g、淮山40g、熟地45g、仙靈脾30g、菟絲子35g和沙參40g。

實施例3：黃芪150g、當歸40g、淮山35g、熟地30g、仙靈脾45g、菟絲子30g和沙參35g。

實施例4：黃芪150g、當歸45g、淮山40g、熟地35g、仙靈脾30g、菟絲子35g和沙參40g。

本發明中藥組合物可以採用中藥的常規使用方法使用，使用過程如下：

(1)按比例稱取組合物中各組分放入乾淨的容器中，加入3～5升涼水浸泡，一般浸泡半小時至一小時左右，這時候中藥原料吸掉了很多水分。

(2)將浸泡好的中藥組合物連同泡中藥組合物的水一起倒入砂鍋內，大火煮開後，小火煎熬，煎煮至砂鍋內僅剩1升水。

(3)第一遍煎藥，煎開之後還要小火煎熬10～15分鐘，用雙層乾淨的紗布貼在砂鍋的開口邊緣處，通過紗布將煎好的藥水倒出來，藥渣留在砂鍋內。

(4)用2～3升涼開水或者溫水繼續浸泡剛剛煎過的藥渣半小時。然後，小火煎熬至砂鍋內僅剩0.5升水，用雙層乾淨的紗布濾出煎好的藥水，藥渣基本就沒有什麼藥性了，可以倒掉。

(5)將兩次煎熬的藥液混合在一起，然後分為六份，分三天服用，每天分早晚兩次服用，第二次喝的時候應該加熱一下。

此外，還可以將上述中藥水劑和藥學上可接受的載體(如：玉米粉、澱粉、明膠、糖衣等)混合做成顆粒劑、散劑、片劑、膠囊劑、膏滋劑、合劑或丸劑等形式的藥物，即各種中成藥。含活性成分的藥液與載體的重量份配比為1:19～19:1。製備的藥物方便運輸、儲存和使用。使用時，水劑、顆粒劑、散劑或合劑可以放入開水中，待藥劑溶解並攪拌均勻後服用，而丸劑、片劑或膠囊劑則可以直接用溫水服用。

1、為了驗證本發明藥物用於治療早發性卵巢功能不全的效果，進行如下臨床觀察試驗。

1.1月經及妊娠情況

對納入門診的46名早發性卵巢功能不全患者按其臨床表現分類：月經稀發或閉經患者31例，月經頻發患者7例，月經量少患者25例，口服該中藥組合物並進行臨床觀察。服用量及方法如下：實施例1中的中藥組合物，按照上述常規使用方法煎煮中藥組合物，每劑藥分成6份，所有患者每天早、晚各口服一份，月經來潮停藥3天繼續服用，持續口服該方藥3個月經周期後，統計月經情況的變化及所有患者的病情改善情況。統計結果見表1。(備註：參照中華中醫藥學會制定的《中醫婦科常見病診療指南》中的患者月經情況觀察表，將月經紊亂分為月經頻發、月經稀發或閉經、月經量少三種狀態，按程度的不同分等級，其中，月經頻發分為21～25天一潮、16～20天一潮、小於15天一潮三個等級，月經稀發或閉經分為35～50天一潮、51～65天一潮、66～90天一潮、91天以上一潮四個等級，月經量少分為經量偏少、經量非常少兩個等級。根據患者治療前後月經情況進行療效判定，若治療後患者月經周期或經量程度好轉一個等級或以上，則為改善，若治療後患者月經周期或經量均無變化或下降一個等級或以上則為無效)。

治療前，統計所有接受本中藥水劑治療的患者中有生育要求的人數。治療後，統計成功妊娠的人數。統計結果見表2。

表1治療前後月經情況比較

表2治療後月經改善及妊娠結果

1.2比較治療前後血清性激素水平

對上述納入門診的46名早發性卵巢功能不全患者進行如下激素檢測(1)接受本發明中藥組合物治療前，抽取2ml的靜脈血，用於進行常用的性激素(fsh、lh、e2)檢查工作。(2)接受本發明中藥水劑治療後，抽取2ml的靜脈血，用於進行常用的性激素(fsh、lh、e2)檢查。治療前後，46名早發性卵巢功能不全患者的性激素檢查統計數據見表3。

表3治療前後血清性激素水平比較

*表示差異有統計學意義。▽表示經正態性檢驗服從正態分布，▼表示經正態性檢驗不服從正態分布。

比較表3中治療前後血清fsh、lh、e2、fsh/lh的變化，可見：本發明中藥組合物可降調升高的fsh、lh和e2，輕微升高fsh/lh，對降調e2差異顯著，有統計學意義。

2、為了進一步證明本發明中藥能用於治療早發性卵巢功能不全，還進行了如下對比性研究：

以月經失調或閉經為主訴且符合納入標準的早發性卵巢功能不全患者共28例，其中治療組15例，對照組13例。治療組給予本方藥治療，每個月經周期第3天開始服用，月經來潮停藥，每日早、晚各一次溫服實施例1製備的中藥水劑一份(150-200ml)；對照組不予藥物治療。觀察治療組、對照組月經情況的變化及病情改善情況，對治療組和對照組患者進行治療前後的性激素檢查。觀察3個月經周期，分析治療前、後患者月經變化情況及血清內分泌(包括血清amh、fsh、e2、lh)的變化，並比較兩組療效，結果如下：

2.1基線資料分析

對治療組和對照組的基線資料進行比較，比較內容包括：年齡、月經初潮年齡和病程三個方面，經獨立樣本檢驗和獨立樣本秩和檢驗，兩組病例年齡、月經初潮年齡、病程差異無統計學意義(p>0.05)具有可比性，詳見表4。

表4兩組基線資料比較

2.2兩組月經情況比較

中藥組月經稀發者7例，治療後月經周期縮短一個等級以上者5例；月經頻發者5例，治療後月經周期延長一個等級以上者4例；月經量少者6例，治療後經量增加一個等級以上者4例；15例患者中治療後月經總體情況改善者12例，改善率為80％。

空白組月經稀發者6例，觀察期結束後5例月經周期無明顯改變，1例月經周期縮短；月經頻發者4例，觀察結束後月經周期均無明顯改變；月經量少者5例，觀察期結束後月經量均無明顯改變。13例患者中僅1例月經改善，改善率為7.7％，經卡方檢驗，差異有統計學意義(p<0.05)，中藥組效果明顯優於空白組，詳見表5。

表5兩組治療後月經改善情況比較

*表示差異有統計學意義

2.3治療前後血清內分泌水平比較

2.3.1治療前後血清內分泌水平組內比較

中藥組治療前後血清e2、amh組內比較差異有統計學意義(p0.05)，治療前後血清內分泌水平組內比較情況見表6。

表6治療前後血清內分泌水平組內比較

*表示差異有統計學意義

2.3.2治療前後血清內分泌水平差值組間比較

對治療前後血清內分泌水平進行組間比較，治療前後血清fsh、e2、lh差值組間差異有統計學意義(p0.05)，治療前後血清內分泌水平差值的組間比較見表7。

表7治療前後血清內分泌水平差值的組間比較

*表示差異有統計學意義

3、動物試驗研究

本實驗選擇去氧乙烯基環己烯(vcd)誘導的大鼠模型，給予本方藥的幹預，在卵巢衰退的不同階段動態檢測大鼠卵巢內各級卵泡的數目的變化，以觀察本方藥改善卵巢功能的作用；並選取本方兩組不同劑量進行幹預，以比較兩個劑量組的效果。

實驗方法：spf級sd大鼠，21天大小，雌性，共44隻，二級實驗室餵養，室溫22℃±2℃，溼度50％，予普通飼料餵養，自由攝水，照明晝夜明暗交替時間為12：12，適應性餵養7天。在28天齡時開始用vcd造模。

44隻大鼠共分為以下4組：①對照組(11隻)：按劑量為每kg小鼠腹腔注射160mg的芝麻油，每天一次，共15天；②vcd組(11隻)：與對照組一樣，按劑量160mg/kg(芝麻油:vcd＝40:1)，每天腹腔注射一次，共15天；③中藥劑量ⅰ組(11隻，對應圖1中的50g50天)：按vcd組方案每天腹腔注射一次vcd，共15天。在造模結束10天後開始給予劑量ⅰ中藥，每天早晚各一次，共25天，故從造模第一天開始計算，取材日為造模後50天；④中藥劑量ⅱ組(11隻，對應圖1中150g50天)：按vcd組方案每天腹腔注射一次vcd，共15天。在造模結束10天後開始給予劑量ⅱ中藥，每天早晚各一次，共25天，故從造模第一天開始計算，取材日為造模後50天。

3.1藥物製備：

①中藥劑量ⅰ組：黃芪50g、當歸15g、淮山15g、熟地15g、仙靈脾15g、菟絲子15g、沙參15g。按照上述常規使用方法用去離子水水煎，旋轉蒸發濃縮，製得一劑中藥水劑(每日共服用一劑中藥)。中藥劑量ⅰ組11隻小鼠按體重及公式換算每次灌胃量進行給藥，每日早晚各一次。

②中藥劑量ⅱ組：黃芪150g、當歸30g、淮山30g、熟地30g、仙靈脾30g、菟絲子30g、沙參30g。按照上述常規使用方法用去離子水水煎，旋轉蒸發濃縮，製得一劑中藥水劑(三天共服用一劑中藥)。中藥劑量ⅱ組11隻小鼠按體重及公式換算每次灌胃量進行給藥，每日早晚各一次。

大鼠給藥量計算方法：

每天稱重計算給藥，人的體重考慮婦女為主要人群，按60kg換算，人的劑量為(140/60)g/kg、(330/60)g/kg。

若大鼠體重200g，按照鼠的體表面積換算，能夠減少誤差，人的體表面積為1.55，不同體重鼠的體表面積不同。

大鼠的劑量＝大鼠的體表面積/人的體表面積*人的劑量*人的體重/鼠的體重。

藥物幹預結束後分別在造模後50天取材，觀察卵巢形態觀察和卵泡分級計數：在照相顯微鏡下觀察、採集圖像，選取卵巢最大橫切面的三張切片，對整個卵巢最大橫切面進行圖像分析，以卵母細胞核作為標記，計算各種卵泡數目，每個卵巢分析3張切片，同一切片計算3次，取平均值。

實驗結果提示：本方藥可以有效增加衰老卵巢中竇卵泡、成熟卵泡的數量，而減少閉鎖卵泡數量，與模型組相比有顯著性的差異，提示本方有促進衰退卵巢中卵泡復甦的作用(見圖1)。兩個不同劑量組比較，結果顯示，中藥劑量ⅱ組增加衰老卵巢中竇卵泡、成熟卵泡的數量的效果優於中藥劑量ⅰ組。

綜合分析具體實施方式中的試驗結果可得出：

1、經該方藥治療可改善早發性卵巢功能不全患者月經情況；

2、該方藥對早發性卵巢功能不全患者的血清內分泌水平有一定的調節作用；

3、在早發性卵巢功能不全的早期階段，該方藥通過降調升高的e2來改善月經狀況，在早發性卵巢功能不全的晚期階段，該方藥通過降調升高的fsh來改善月經狀況；

4、該方藥通過增加衰老卵巢中成熟卵泡的數量、減少閉鎖卵泡的數量來改善卵巢功能，促進衰退卵巢中卵泡的復甦。

以上所述的僅是本發明的一些實施方式。對於本領域的普通技術人員來說，在不脫離本發明創造構思的前提下，還可以做出若干變形和改進，這些都屬於本發明的保護範圍。