腫瘤壞死因子-α抑制肽及其應用的製作方法

2023-12-09 04:38:11 3

專利名稱：腫瘤壞死因子-α抑制肽及其應用的製作方法
技術領域：
本發明涉及生物活性肽及其製備方法。本發明還涉及腫瘤壞死因子-a (TNF-a) 抑制肽及其製備方法。本發明還涉及包含所述肽分子的藥物組合物及其在治療腫瘤壞死因子-a (TNF-a)介導的炎性病症例如類風溼性關節炎、牛皮癬關節炎、克羅恩氏(Crohn's) 病和敗血病等中的應用。
背景技術：
細胞因子是一類由活化的免疫細胞即B細胞、T細胞、單核細胞和巨噬細胞產生的信號傳導蛋白。細胞因子包括白介素(IL-1至IL-23)、幹擾素(α、β和Y)以及TNF-a 和 β 的家族(Janeway CA 等，1999，《免疫學》第四版(Immunobiology,4th Ed.)New York, Garland，1999 ;RoittI 等，2002，《免疫學》第五版(Immunology 5th ed.) London, Mosby, 2002)。已經提出了 IL-I和TNF-α在疾病例如敗血病和自身免疫病症例如RA、皮膚病、炎症性腸病中作為炎性應答的關鍵介導物的重要作用(Locksley RM等，2001，Cell 104(4) 487-501 ；Feldmann M 等，1996，Ann. Rev. Immunol. 14 :397-440 ；Buchan G 等，1988，Clin. Exp.Immunol. 73 :449-455 ；Canto E 等，2006, Clin.Immunol. 119(2) 156-165 ；Fantuzzi F 等，2008，Expert Opi. Ther. Targets 12 (9) : 1085-96)。細胞因子調控研究進一步表明，TNF-α是造成炎性病理的最重要的細胞因子(Feldmann等，1999，Ann. Rheum. Dis. 58 (Supp 1 1)127-131)。TNF-α最初是作為引起小鼠腫瘤出血性壞死的分子而被發現(Carswel 1等， 1975，Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. Α. 72 :3666)。第二條路線研究據認為造成惡病質狀態的被稱為「惡液質素」的血清蛋白，導致最終發現惡液質素等同於TNF- α (Beutler等，1989， Annu. Rev. Immunol. 7 :625)。現在，已確定TNF-α是涉及多種臨床病症的活性廣泛的炎性介導物。TNF-a是由幾種細胞類型、特別是活化的巨噬細胞產生的分子量為17kD的蛋白。 TNF-a最初被合成為排列成穩定的三聚體的跨膜蛋白。它然後被金屬蛋白酶——TNF-a 轉化酶(TACE)切割，形成同三聚體的可溶性TNF(sTNF)，與其遍在表達的關聯受體(TNFRI， p55和TNFRII，p7Q接合。TNF受體的遍在表達以及細胞特異性效應子解釋了 TNF-α介導的細胞應答的廣泛多樣性，其中某些細胞應答是有害和危及生命的。這些受體當從單核細胞上脫落時，通過肅清和作為天然抑制劑，降低了 TNF-a水平。TNF-a誘導廣泛的各種細胞應答，其中許多導致有害的結果。例如，TNF-a誘導惡病質，惡病質是由失去脂肪和全身蛋白質貧化所引起的病症，伴有厭食引起的食物攝入不足。惡病質常見於癌症患者，並且也已在患有獲得性免疫缺陷症候群(AIDS)的患者中觀察到。此外，在動物中注射高劑量TNF-α產生了敗血性休克的大部分症狀。TNF-a也已顯示出在自身免疫疾病例如多發性硬化症和類風溼性關節炎、牛皮癬、牛皮癬關節炎、過敏症、免疫複合物病和移植物抗宿主疾病以及移植排斥中發揮作用。甚至在瘧疾和肺纖維化中也牽涉TNF-a的參與。因此，在疾病狀況中定向阻斷TNF-a生產是相當重要和有治療益處的。
TNF相關病症的治療中和TNF-α的副作用的方法集中於使用抗TNF抗體和可溶性TNF-R。在動物模型中，使用特異性針對TNF-α的抗體治療與TNF-α相關的炎性病症，已顯示出治療效能(Williams 等，1992，Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. Α. 89 :9784-88 ；Baker 等，1994， Eur. J. Immunol. 24 :2040 ；Suitters 等，1994，J. Exp. Med. 179 :849)。已經構建了嵌合形式的抗TNF抗體用於人類臨床試驗(Lorenz等，1996，J. Immunol. 156 :1646 ；Walker 等，1996，J. Infect. Dis. 174 :63 ；Tak 等，1996，Arthritis Rheumat. 39 :1077)。此夕卜， 可溶性TNF-受體融合蛋白已作為TNF拮抗劑引入人類患者(P印pel等，1991，J.Exp. Med. 174 1483 ；WiIliams 等，1995, Immunol. 84 433 ；Baumgartner 等，1996, Arthritis Rheumat. 39(Supp1.)S74)。美國專利6265535涉及從TNF-受體超家族成員的結合環設計的環狀肽和肽類似物，其幹擾TNF-α與TNF-受體之間的結合相互作用，表現出體外和體內抑制活性，用於拮抗TNF的不需要的體內生物活性。該發明優選環化的肽，因為環和轉角在蛋白質-蛋白質相互作用中發揮功能上重要的作用。在具體實施方案中，從TNF-R p55的三個結合環設計了環狀肽，其與TNF-α結合併抑制TNF-α與其細胞受體的結合。最優選的實施方案具有至少7個胺基酸，並且沒有提出更小的線性肽能夠用作TNF- α抑制劑。美國專利6344443涉及通過給藥有效量的抑制肽來抑制TNF- α與TNF受體的結合以及TNF-α功能的方法。該專利涉及與TNF受體結合併幹擾TNF-α結合和活化細胞 TNF-α受體的能力的肽。具體來說，該發明涉及使用具有7和12個胺基酸殘基的肽來抑制 TNF-α與TNF受體的結合和TNF的功能。『443文獻旨在篩選能夠與TNF受體結合的小肽。 已經鑑定到的最小分子是7個胺基酸長的序列。沒有提出更小的肽能夠用作TNF-α抑制劑。美國專利6143866涉及源自尿液的TNF抑制肽。該專利還涉及具有抗TNF-α活性的純化形式的TNF抑制劑。該專利還涉及具有作為表現出抗TNF活性的藥物製品價值的純化形式的TNF抑制劑。它還涉及以其純化形式獲得的30kDa蛋白和40kDa蛋白。這些蛋白所公開的胺基酸序列不少於15個胺基酸長，因此沒有提出更小的肽能夠用作TNF-α抑制劑。美國專利6048543涉及使用至少一個選自甘氨酸、丙氨酸和絲氨酸的胺基酸或其生理可接受的鹽來製備藥物或營養製劑，用於在腫瘤壞死因子(TNF)水平升高到超過介導生理穩態和局部炎症的水平的患者中降低所述腫瘤壞死因子(TNF)水平。該專利公開了可以通過抑制或降低巨噬細胞類型細胞的TNF生產、或巨噬細胞類型細胞的TNF釋放、或TNF 被TNF受體的結合，來實現TNF水平的降低。該專利涉及僅使用甘氨酸、丙氨酸和絲氨酸製備用於降低TNF水平的藥物或營養製劑。專利沒有公開胺基酸組合或含有胺基酸組合的肽的任何應用。美國專利6107273涉及TNF-α拮抗化合物，其包含與選自人類TNF-α的分子表面的至少一個人類TNF-α分子表面基本上相似的分子表面。該發明的化合物具有附著於兩端的連接部分和間隔部分。該發明的化合物公開了具有25個胺基酸以及連接部分和間隔部分的TNF- α抑制肽。『273專利的TNF- α拮抗化合物與TNF ρ55受體和/或TNF ρ75 受體結合，並抑制TNF-α介導的細胞毒性。『273專利沒有提出不具有間隔部分的更小肽。
本領域中目前可用的治療方法被設計成通過使用可溶性TNF受體或單克隆抗TNF 抗體來中和 TNF-α (Piguet 等，1992，Immunology 77 :510-514 ;Elliot 等，1993，Arthritis Rheum. 36 :1681-90)。它們與循環中的TNF-α結合，從而限制了後者對細胞表面上的TNF-R 的可接近性以及隨後對炎性途徑的活化。阻斷TNF-α水平的可用療法是(1)英利昔單抗(Remicade)小鼠人類嵌合的抗人類TNF-α單克隆抗體，(2)阿達木單抗完全人類抗 TNF-α單克隆抗體；(3)依那西普，可溶性P7MTNF-RII與人類IgG的Fc部分融合的二聚體融合蛋白。儘管這些分子在各種自體免疫病症中已顯示效能，但它們苦於某些限制，即生物利用度和穩定性差、誘導嚴重免疫反應和高成本。提供阻斷TNF-α活性的可替代手段是適當的。已經利用抗TNF抗體或TNF受體的序列來合成生物活性肽片段(Weisong Q等， 2006，Mol. Immunol. 43 :660-66 ；Zhang J 等，2003，Biochem. Biophy. Res. Comm. 7 :1181-87 ； Aoki等，2006，J.Clin· Invest. 116(6) :1525-34)；但是它們大並相對不溶。這突出了對可能採取小分子形式的改進的TNF-α抑制化合物的需要。在一個這樣的研究中，Takasaki等，1997 (Nat Biotechnol. 1997，Nov ；15(12) 1266-70)研究了從TNF-RI的三個結合環設計的肽類似物。這些肽基於形成結合環的胺基酸序列來產生。已發現，一個肽序列，即TNF-RI的結構域3的環1上的環狀WP9(序列為 WSENL) (107-114位殘基)具有最明顯的TNF- α阻斷活性。WP9的序列WSENL被Takasaki 等用作模板，設計了環狀肽模擬物WP9Q、WP9ELY、WP9Y和WP9QY。肽模擬物WP9QY顯示出治療價值，並在小鼠中降低了實驗性自身免疫腦脊髓炎(EAE)和類風溼性關節炎(RA)的嚴重性。然而，其在生理緩衝液中相對不良的溶解性是其用作潛在的人類治療劑的限制因素 (Takasaki 等，1997，Nat. Biotechnol. Nov. 15(12) :1266-70)。儘管肽的環化和芳構化增強了穩定性和生物利用度，但Takasaki等，1997注意到對增強溶解性或增強活性效果只有很少或沒有。Takasaki陳述了 WP9QY是迄今為止開發的最小的肽模擬物，並且它可以用作下一代非肽類抑制劑的先導化合物。因此，該參考文獻建議本技術領域的專業人員基於當時已知的最小肽嘗試非肽類TNF抑制劑。這些觀察著重說明了需要開發改進的下一代TNF- α抑制劑，其目的在於設計具有在生理緩衝液中具有可溶性、更好的穩定性和生物利用度並具有最小的副作用和降低的成本的肽。發明概述根據本發明，提供了具有下式的生物活性肽X1-X2-X3或其可藥用鹽和衍生物，其中\γ、\各自獨立地是0-2個胺基酸是單個胺基酸殘基；並且胺基酸可以選自親水性胺基酸、疏水性胺基酸和半胱氨酸樣胺基酸。根據本發明的另一方面，提供了具有下式的TNF-α抑制肽X1-X2-X3或其可藥用鹽和衍生物，其中\γ、\各自獨立地是0-2個胺基酸是單個胺基酸殘基；並且胺基酸可以選自親水性胺基酸、疏水性胺基酸和半胱氨酸樣胺基酸。本發明還涉及使用本發明的生物活性肽治療TNF-α相關疾病狀況。本發明還涉及包含本發明的生物活性肽的藥物組合物。
附圖簡述

圖1顯示了利用生物測定法測定的肽的抗TNF- α活性。X軸上的數字1_10 表示序列ID-I到10的肽。Y軸表示每次運行兩個平行樣的三次獨立實驗的TNF-α介導細胞毒性的抑制百分率的平均值士SE。在X軸上，「+ve」表示陽性對照，即已知的TNF-α抑制月太，即環狀 WSQYL (cy Trp-Ser-Gln-Tyr-Leu)。圖2顯示了序列ID-2和序列ID-6的線性肽、序列ID_9和序列ID-10的環狀肽以及陽性對照即環狀WSQYL (cy Trp-Ser-Gln-Tyr-Leu)肽抑制TNF-α誘導的細胞毒性的比較。結果表示成每次運行三個平行樣的三次獨立實驗的TNF-α介導細胞毒性的抑制百分率的平均值士 SE。圖3顯示了序列ID-6的肽與依那西普(Et)對TNF- α介導的細胞毒性的抑制的比較。結果表示成每次運行三個平行樣的兩次獨立實驗的TNF-α介導細胞毒性的抑制百分率的平均值士 SE。圖4顯示了通過流式細胞術進行的肽與TNF-α的結合的定量。圖如中顯示了在序列ID-2和序列ID-6的肽存在下與細胞受體結合的TNF-α的螢光活化細胞分揀(FACS) 分析。Y-軸表示三次獨立實驗的TNF-RI表達陽性細胞的百分率的平均值士SE。在柱狀圖 (圖4a)或流式細胞術直方圖(圖4b)中X軸上的數字1-5意義如下1 =用抗小鼠IgG FITC作為第二抗體染色的U937細胞，2 =用小鼠抗人類TNF-受體抗體和抗小鼠IgG FITC染色的U937細胞，3 =用重組TNF- α處理並用小鼠抗人類TNF-受體抗體和抗小鼠IgG FITC染色的 U937細胞，4 =用重組TNF- α與序列ID-2的複合物處理並用小鼠抗人類TNF-受體抗體和抗小鼠IgG FITC染色的U937細胞，5 =用重組TNF- α與肽序列ID-6的複合物處理並用小鼠抗人類TNF-受體抗體和抗小鼠IgG FITC染色的U937細胞。圖5顯示了序列ID-6的肽與U937細胞上的TNF-Rl的結合圖5中顯示了具有序列ID-6的肽與U937細胞上表達的TNF-Rl的結合的螢光活化細胞分揀(FACS)分析。Y-軸表示兩次獨立實驗的TNF-RI表達陽性細胞的百分比的平均值士SE。在柱狀圖或流式細胞術直方圖(圖5)中X軸上的數字表示下列樣品1 未處理的U937細胞，2 :U937 細胞 +TNF- α，3 :U937細胞+序列ID-6的肽。圖6顯示了來自介質(CFA)血清、對照(PBS)血清和膠原蛋白免疫的小鼠血清的抗膠原蛋白IgG水平的估算。圖7顯示了在膠原蛋白誘導的關節炎的鼠類模型中，使用具有序列ID-6的肽的不同劑量和方案進行治療之前(Pre Tx)和治療之後(Post Tx)右踝中爪厚度值的平均值。每個組包含4-5隻動物。Y軸上的值表示相應組中爪厚度的平均值士SE。動物組用X軸上的字母表示，即A 用1. 25mg/kg具有序列ID-6的肽以每周三次、然後三周每周一次的方案治療的關節炎小鼠，
B 用2. 5mg/kg具有序列ID_6的肽以每周三次、然後三周每周一次的方案治療的關節炎小鼠，C 用5mg/kg具有序列ID-6的肽以每周三次、然後三周每周一次的方案治療的關節炎小鼠，D 用7. 5mg/kg具有序列ID-6的肽以每周一劑共四周的方案治療的關節炎小鼠，E 用7. 5mg/kg具有序列ID-6的肽以第一周一劑然後在三周後第二劑的方案治療的關節炎小鼠，F 使用作為對照的PBS治療的關節炎小鼠，G 對照動物，即健康的雄性C57BL/6小鼠。計算了治療之前和之後的ρ值。#表示ρ值<0.01，*表示ρ <0.05。圖8(a)顯示了用序列ID-6的肽、序列ID_2的肽和依那西普(Et)治療之前(Pre Tx)和治療之後(Post Tx)左和右踝中爪厚度值的平均值士SE。PBS治療的動物被當作未治療動物，對照表示健康的雄性C57BL/6小鼠。計算了治療之前和之後的ρ值。^"表示ρ值
<0. 01, * 表示 P < 0. 05。圖8(b)顯示了在用序列ID-6的肽、序列ID-2的肽和依那西普(Et)治療的動物中治療後抗膠原蛋白IgGl/IgGh的比率比較。PBS治療的動物被當作未治療動物，對照表示健康的雄性C57BL/6小鼠。計算了治療之前和之後的ρ值。」表示ρ值<0.01，*表示ρ
<0. 05。圖9(a)顯示了用序列ID-6的肽和依那西普(Et)治療之前(Pre Tx)和治療之後 (Post Tx)右踝和右關節中爪厚度值的平均值。PBS治療的動物被當作未治療動物。每個組包括3隻動物。圖9(b)顯示了在佐劑誘導的關節炎的大鼠模型中用序列ID-6的肽和依那西普 (Et)治療之前(Pre Tx)和治療之後(Post Tx)的比較性臨床分值。PBS治療的動物被當作未治療動物。每個組包括3隻動物。計算了治療之前和之後的ρ值。#表示ρ值<0.01， * 表示 ρ < 0. 05。圖10顯示了在用序列ID-6、依那西普或作為陰性對照的PBS治療之前和之後關節炎大鼠中爪和關節腫脹的代表性照片。發明詳述本發明涉及具有下式的生物活性肽X1-X2-X3或其可藥用鹽和衍生物，其中\γ、\各自獨立地是0-2個胺基酸是單個胺基酸殘基；並且胺基酸可以選自親水胺基酸、疏水胺基酸和半胱氨酸樣胺基酸。本發明還涉及具有下式的TNF- α抑制肽X1-X2-X3或其可藥用鹽和衍生物，其中\γ、\各自獨立地是0-2個胺基酸是單個胺基酸殘基；並且胺基酸可以選自親水胺基酸、疏水胺基酸和半胱氨酸樣胺基酸。本發明還涉及用作TNF-α抑制劑的生物活性肽。本發明的生物活性肽可以通過不同機制起作用，所述機制例如但不限於下述a)本發明的肽能夠結合TNF- α以形成複合物，導致阻止TNF- α與TNF-Rl受體的？口口。b)本發明的肽能夠直接結合TNF-Rl受體並能阻止TNF- α與TNF-Rl受體的結合。本發明還涉及藥物組合物，其包含具有下式的生物活性肽X1-X2-X3或其可藥用鹽和衍生物，其中\γ、\各自獨立地是0-2個胺基酸是單個胺基酸殘基；並且胺基酸可以選自親水胺基酸、疏水胺基酸和半胱氨酸樣胺基酸。本發明還涉及治療TNF-α相關疾病狀況的方法，所述方法包含給藥具有下式的生物活性肽X1-X2-X3或其可藥用鹽和衍生物，其中\γ、\各自獨立地是0-2個胺基酸是單個胺基酸殘基；並且胺基酸可以選自親水胺基酸、疏水胺基酸和半胱氨酸樣胺基酸。本發明還涉及具有下式的生物活性肽X1-X2-X3或其可藥用鹽和衍生物，其中\γ、\各自獨立地是0-2個胺基酸是單個胺基酸殘基；並且胺基酸可以選自親水胺基酸、疏水胺基酸和半胱氨酸樣胺基酸，並且其中Xp X2 和\當加在一起時不少於2個胺基酸。本發明涉及具有下式的TNF- α抑制肽X1-X2-X3或其可藥用鹽和衍生物，其中\γ、\各自獨立地是0-2個胺基酸是單個胺基酸殘基；並且胺基酸可以選自親水胺基酸、疏水胺基酸和半胱氨酸樣胺基酸，並且其中Xp X2 和\當加在一起時不少於2個胺基酸。本發明涉及藥物組合物，其包含具有下式的生物活性肽X1-X2-X3或其可藥用鹽和衍生物，其中\γ、\各自獨立地是0-2個胺基酸是單個胺基酸殘基；並且胺基酸可以選自親水胺基酸、疏水胺基酸和半胱氨酸樣胺基酸，並且其中Xp X2 和\當加在一起時不少於2個胺基酸。本發明還涉及治療TNF-α相關疾病狀況的方法，所述方法包含給藥具有下式的生物活性肽X1-X2-X3或其可藥用鹽和衍生物，其中\γ、\各自獨立地是0-2個胺基酸是單個胺基酸殘基；並且胺基酸可以選自親水胺基酸、疏水胺基酸和半胱氨酸樣胺基酸，並且其中Xp X2 和\當加在一起時不少於2個胺基酸。本發明涉及具有下式的生物活性肽X1-X2-X3或其可藥用鹽和衍生物，其中X1J2各自獨立地是0-2個選自Trpjer、Gin、Asn、 Tyr和Leu的胺基酸是單個胺基酸殘基；並且胺基酸可以選自Trp、Ser, Gin、Asn、Tyr 和Leu，並且其中Xp X2和\當加在一起時不少於2個胺基酸。本發明涉及具有下式的TNF- α抑制肽X1-X2-X3
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或其可藥用鹽和衍生物，其中X1J2各自獨立地是0-2個選自Trpjer、Gin、Asn、 Tyr和Leu的胺基酸是單個胺基酸殘基；並且胺基酸可以選自Trp、Ser, Gin、Asn、Tyr 和Leu，並且其中Xp X2和\當加在一起時不少於2個胺基酸。本發明涉及具有下式的生物活性肽X1-X2-X3或其可藥用鹽和衍生物，其中Χ:、)(2和)(3各自獨立地是選自Trp、kr、Gin、Asru Tyr和Leu的單個胺基酸殘基。本發明涉及具有下式的TNF- α抑制肽X1-X2-X3或其可藥用鹽和衍生物，其中Xp )(2和)(3各自獨立地是選自Trp、kr、Gin、Asru Tyr和Leu的單個胺基酸殘基。本發明涉及具有下式的生物活性肽X1-X2-X3或其可藥用鹽和衍生物，其中\是選自Trp、Ser, Gln的0_2個胺基酸；X2是選自 Ser, Gin, Asn和Tyr的0_2個胺基酸；並且是選自Gin、Leu和Tyr的胺基酸殘基；並且其中\γ、\和1、當加在一起時不少於2個胺基酸。本發明涉及具有下式的TNF- α抑制肽X1-X2-X3或其可藥用鹽和衍生物，其中\是選自Trp、Ser, Gln的0_2個胺基酸；X2是選自 Ser, Gin, Asn和Tyr的0_2個胺基酸；並且是選自Gin、Leu和Tyr的胺基酸殘基；並且其中\γ、\和1、當加在一起時不少於2個胺基酸。本發明還涉及藥物組合物，其包含具有下式的生物活性肽X1-X2-X3或其可藥用鹽和衍生物，其中\是選自Trp、Ser, Gln的0_2個胺基酸；X2是選自 Ser, Gin, Asn和Tyr的0_2個胺基酸；並且是選自Gin、Leu和Tyr的胺基酸殘基；並且其中\、\和當加在一起時不少於2個胺基酸；以及可藥用載體。本發明還涉及治療TNF-α相關疾病狀況的方法，所述方法包含給藥具有下式的生物活性肽X1-X2-X3或其可藥用鹽和衍生物，其中\是選自Trp、Ser, Gln的0_2個胺基酸；X2是選自 Ser, Gin, Asn和Tyr的0_2個胺基酸；並且是選自Gin、Leu和Tyr的胺基酸殘基；並且其中\γ、\和1、當加在一起時不少於2個胺基酸。本發明還涉及具有下式的生物活性肽X1-X2-X3或其可藥用鹽和衍生物，其中\是選自Trp、Ser, Gln的胺基酸殘基；X2是選自 Ser, Gin, Asn和Tyr的胺基酸殘基；並且\是選自Gin、Leu和Tyr的胺基酸殘基；前提是如果X1是Trp，那麼X2是Ser或Gin。本發明還涉及具有下式的TNF-α抑制肽X1-X2-X3
或其可藥用鹽和衍生物，其中&是選自Trp、Ser, Gln的胺基酸殘基；X2是選自 Ser, Gin, Asn和Tyr的胺基酸殘基；並且\是選自Gin、Leu和Tyr的胺基酸殘基；前提是如果X1是Trp，那麼X2是Ser或Gin。本發明還涉及藥物組合物，其包含具有下式的生物活性肽X1-X2-X3或其可藥用鹽和衍生物，其中\是選自Trp、Ser, Gln的胺基酸殘基；X2是選自 Ser, Gin, Asn和Tyr的胺基酸殘基；並且\是選自Gin、Leu和Tyr的胺基酸殘基；前提是如果X1是Trp，那麼X2是Ser或Gln ；以及可藥用載體。本發明還涉及治療TNF-α相關疾病狀況的方法，所述方法包含給藥具有下式的生物活性肽X1--X2-X3或其可藥用鹽和衍生物，其中\是選自Trp、Ser, Gln的胺基酸殘基；X2是選自 Ser, Gin, Asn和Tyr的胺基酸殘基；並且\是選自Gin、Leu和Tyr的胺基酸殘基；前提是如果X1是Trp，那麼X2是Ser或Gin。本發明還涉及具有下式的生物活性肽X1-X2-X3或其可藥用鹽和衍生物，其中\是選自Trp、Ser, Gln的胺基酸殘基；X2是選自 Ser, Gin, Asn和Tyr的胺基酸殘基；並且\是選自Gin、Leu和Tyr的胺基酸殘基；前提是如果\是kr，那麼I2是Asn或Gin。本發明還涉及具有下式的TNF-α抑制肽X1-X2-X3或其可藥用鹽和衍生物，其中\是選自Trp、Ser, Gln的胺基酸殘基；X2是選自 Ser, Gin, Asn和Tyr的胺基酸殘基；並且\是選自Gin、Leu和Tyr的胺基酸殘基；前提是如果\是kr，那麼I2是Asn或Gin。本發明還涉及藥物組合物，其包含具有下式的生物活性肽X1-X2-X3或其可藥用鹽和衍生物，其中\是選自Trp、Ser, Gln的胺基酸殘基；X2是選自 Ser, Gin, Asn和Tyr的胺基酸殘基；並且\是選自Gin、Leu和Tyr的胺基酸殘基；前提是如果\是Ser,那麼\是Asn或Gln ；以及可藥用載體。本發明還涉及治療TNF-α相關疾病狀況的方法，所述方法包含給藥具有下式的生物活性肽X1-X2-X3或其可藥用鹽和衍生物，其中\是選自Trp、Ser, Gln的胺基酸殘基；X2是選自 Ser, Gin, Asn和Tyr的胺基酸殘基；並且\是選自Gin、Leu和Tyr的胺基酸殘基；前提是如果\是kr，那麼I2是Asn或Gin。本發明還涉及具有下式的生物活性肽X1-X2-X3或其可藥用鹽和衍生物，其中\是選自Trp、Ser, Gln的胺基酸殘基；X2是選自 Ser, Gin, Asn和Tyr的胺基酸殘基；並且\是選自Gin、Leu和Tyr的胺基酸殘基；前提是如果X1是Gln，那麼X2是Asn或Tyr。本發明還涉及具有下式的TNF- α抑制肽X1--X2-X3或其可藥用鹽和衍生物，其中\是選自Trp、Ser, Gln的胺基酸殘基；X2是選自 Ser, Gin, Asn和Tyr的胺基酸殘基；並且\是選自Gin、Leu和Tyr的胺基酸殘基；前提是如果&是Gln，那麼\是Asn或Tyr。本發明還涉及藥物組合物，其包含具有下式的生物活性肽X1--X2-X3或其可藥用鹽和衍生物，其中\是選自Trp、Ser, Gln的胺基酸殘基；X2是選自 Ser, Gln、Asn和Tyr的胺基酸殘基；並且\是選自Gln、Leu和Tyr的胺基酸殘基；前提是如果\是Gln，那麼\是Asn或Tyr ；以及可藥用載體。本發明還涉及治療TNF-α相關疾病狀況的方法，所述方法包含給藥具有下式的生物活性肽X1-X2-X3或其可藥用鹽和衍生物，其中\是選自Trp、Ser, Gln的胺基酸殘基；X2是選自 Ser, Gln、Asn和Tyr的胺基酸殘基；並且\是選自Gln、Leu和Tyr的胺基酸殘基；前提是如果&是Gln，那麼\是Asn或Tyr。當在本文中使用時，術語「肽」是指由天然存在的胺基酸亞基通過肽鍵相連所形成的聚合物。術語胺基酸也可以是指具有與天然存在的肽相似的部分(portions)但是也具有非天然存在的部分(portions)的組成部分(moieties)。因此，肽可以具有改變的胺基酸或連鍵。術語生物活性肽是指當給藥於哺乳動物時顯示出任何種類/量的藥理學或生物學效應的肽。上面使用的術語「胺基酸/胺基酸殘基」可以是遺傳編碼的L-胺基酸、天然存在的非遺傳編碼的胺基酸、合成的L-胺基酸或所有上述的D-對映異構體或其可藥用鹽/衍生物。本文使用的20種遺傳編碼的L-胺基酸和常見的非編碼胺基酸的胺基酸表示法是常規的，並如下所示表-權利要求
1.具有下式的TNF-α抑制肽 X1 __X2 __X3或其可藥用鹽和衍生物，其中各自獨立地是0-2個胺基酸A3是單個胺基酸殘基； 其中胺基酸選自親水胺基酸、疏水胺基酸和半胱氨酸樣胺基酸，並且其中和\當加在一起時不少於2個胺基酸。
2.權利要求1的TNF-α抑制肽，其中親水胺基酸、疏水胺基酸和半胱氨酸樣胺基酸選自遺傳編碼的胺基酸和非遺傳編碼的胺基酸。
3.權利要求2的TNF-α抑制肽，其中胺基酸是遺傳編碼的胺基酸。
4.權利要求3的TNF-α抑制肽，其中胺基酸選自Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gin、Glu、 Gly、His、lie、Leu、Lys> Met> Phe> Pro、Ser> Thr> Trp> Tyr 禾口 Val。
5.權利要求1的TNF-α抑制肽，其中各自獨立地是選自Trp、Ser、Gln、Asn、Tyr 和Leu的1-2個胺基酸；X3是單個胺基酸殘基並選自Trp、Ser, Gin、Asn、Tyr和Leu。
6.權利要求1的TNF-α抑制肽，其中\是選自Trp、Ser,Gln的1-2個胺基酸；X2是選自kr、Gin、Asn和Tyr的1_2個胺基酸；並且是選自Gin、Leu和Tyr的胺基酸殘基。
7.權利要求1的TNF-α抑制肽，其中&是選自Trp、Ser,Gln的胺基酸殘基；X2是選自Ser、Gin、Asn和Tyr的胺基酸殘基；並且\是選自GlruLeu和Tyr的胺基酸殘基；前提是如果X1是Trp，那麼X2是Ser或Gin。
8.權利要求1的TNF-α抑制肽，其中\是選自Trp、Ser,Gln的胺基酸殘基；X2是選自Ser、Gin、Asn和Tyr的胺基酸殘基；並且\是選自GlruLeu和Tyr的胺基酸殘基；前提是如果&是％r，那麼\是Asn或Gin。
9.權利要求1的TNF-α抑制肽，其中\是選自Trp、Ser,Gln的胺基酸殘基；X2是選自Ser、Gin、Asn和Tyr的胺基酸殘基；並且\是選自GlruLeu和Tyr的胺基酸殘基；前提是如果&是Gln，那麼\是Asn或Tyr。
10.權利要求1的TNF-α抑制肽，其中X^A和)(3各自獨立地是選自Trp、kr、Glru Asn、Tyr和Leu的單個胺基酸殘基。
11.權利要求1m TNF- α抑制肽，其選自SEQ ID No :1_38。
12.權利要求1的TNF-α抑制肽，其中肽是線性肽或環狀肽。
13.一種用於製備權利要求1的TNF-α抑制肽的方法，其中所述肽通過固相合成來製備。
14.一種藥物組合物，其包含權利要求1或權利要求11的TNF-α抑制肽和可藥用載體。
15.一種治療TNF-α相關疾病狀況的方法，其包含給藥權利要求1或權利要求11的 TNF-α抑制肽。
16.權利要求1或權利要求11的TNF-α抑制肽，其中所述肽能經局部、經腸胃外、經黏膜、經口、經頰、經直腸、吸入、鼻內、經直腸、經陰道或經舌下途徑給藥。
全文摘要
本發明涉及腫瘤壞死因子-α(TNF-α)抑制肽及其製備方法。本發明還涉及包含本發明的TNF-α抑制肽的藥物組合物及其在TNF-α介導的炎性疾病治療中的應用。
文檔編號C07K5/06GK102282163SQ200980154542
公開日2011年12月14日 申請日期2009年11月5日 優先權日2008年11月20日
發明者拉傑什·賈殷, 拉胡爾·賈殷, 施維塔·杜比, 維倫達·庫馬爾·維納雅克, 維賈伊·戈埃爾, 蘇哈南德·普拉薩德 申請人:萬能藥生物有限公司