腫瘤診斷劑的製作方法
2023-12-09 04:19:21
專利名稱：腫瘤診斷劑的製作方法
技術領域：
本發明涉及一種新型腫瘤診斷劑，該腫瘤診斷劑含有δ-氨基乙醯丙酸、其衍生物、或它們的鹽。
背景技術：
早期檢測對於治療腫瘤最為重要。通常，人們通過測量血液中的每種腫瘤對應的物質(通常被稱為腫瘤標誌物)來檢測各種腫瘤。所述的腫瘤標誌物可定義為「在產生癌細胞的物質中或是在因體內正常細胞與癌細胞相互作用而產生的物質中，可通過對血液、組織、和排洩物(尿液和糞便)等進行檢查從而用作癌症診斷或治療的標誌物的那些物質」。
然而，由於除癌症之外的其它疾病也能引起人體產生少量的多種腫瘤標誌物，因此，在慢性炎症等疾病中，這些腫瘤標誌物經常表現出假陽性結果。例如，據信，由於諸如胃、大腸、胰腺、和肺等之類的多個器官的細胞可產生癌胚抗原(CEA)，所以其可引起約20％的假陽性結果。此外，由於多種腫瘤的合適的腫瘤標誌物還沒有被發現，所以，就目前的情況而言，還不存在可針對所有腫瘤的腫瘤標誌物。
另一方面，已知的是，在施用δ-氨基乙醯丙酸(ALA)或其衍生物後，因誘導產生的原卟啉IX會在腫瘤內積聚，從而使其在術中診斷和治療中發揮作用(專利文獻1和2)。
專利文獻1JP-A-11-12197專利文獻2JP-T-11-501914發明內容本發明欲解決的問題
然而，根據上述方法，必須製備δ-氨基乙醯丙酸的同位素標記物(參見專利文獻1)，並且必須將收集到的體液(體液內含有細胞)與ALA酯混合，並將該混合物暴露於光下(參見專利文獻2)。
此外，人們已經試圖分析癌症患者血液樣品中的卟啉，但是由於卟啉的濃度低，所以上述分析尚不能診斷腫瘤。
因此，本發明的目的是提供一種這樣的腫瘤診斷劑，其可通過分析從體內或體外收集到的樣品(以施用ALA後的血液和尿液為代表)中的卟啉類化合物來針對所有腫瘤施行早期檢測，治療效果監測和預後診斷。
解決問題的方法考慮到這種現狀，本發明人對能夠針對所有腫瘤的新型診斷劑進行了大量的研究，結果發現，在施用δ-氨基乙醯丙酸、其衍生物、或它們的鹽之後測定從體內或體外收集到的樣品中的卟啉類化合物，可高度靈敏地檢測腫瘤，從而完成本發明。
換言之，本發明涉及以下(1)到(11)項(1)一種選自由式(I)代表的δ-氨基乙醯丙酸、其衍生物、或它們的鹽的化合物，其可用作腫瘤診斷劑，該腫瘤診斷劑用於在施用該腫瘤診斷劑之後通過測定從體內或體外收集到的樣品中的卟啉類化合物來進行診斷，式(I)為R2R1NCH2COCH2CH2COR3(I)，其中，R1和R2各自獨立代表氫、烷基、醯基、烷氧基羰基、芳基或芳烷基；R3代表羥基、烷氧基、醯氧基、烷氧基羰基氧基、芳氧基、芳烷氧基或氨基。
(2)由式(I)代表的δ-氨基乙醯丙酸、其衍生物、或它們的鹽作為腫瘤診斷劑的用途，其中該腫瘤診斷劑用於在施用該腫瘤診斷劑之後通過測定從體內或體外收集到的樣品中的卟啉類化合物來進行診斷，式(I)為R2R1NCH2COCH2CH2COR3(I)，其中，R1和R2各自獨立代表氫、烷基、醯基、烷氧基羰基、芳基或芳烷基；R3代表羥基、烷氧基、醯氧基、烷氧基羰基氧基、芳氧基、芳烷氧基或氨基。
(3)由式(I)代表的δ-氨基乙醯丙酸、其衍生物、或它們的鹽在製造腫瘤診斷劑中的用途，其中該腫瘤診斷劑用於在施用該腫瘤診斷劑之後通過測定從體內或體外收集到的樣品中的卟啉類化合物來進行診斷，式(I)R2R1NCH2COCH2CH2COR3(I)，其中，R1和R2各自獨立代表氫、烷基、醯基、烷氧基羰基、芳基或芳烷基；R3代表羥基、烷氧基、醯氧基、烷氧基羰基氧基、芳氧基、芳烷氧基或氨基。
(4)根據上述(1)到(3)中任意一項所述的化合物或用途，其中所述腫瘤的組織為腦、鼻道、鼻腔、氣管、支氣管、口腔、咽、食道、胃、乳房、結腸直腸、肺、卵巢、中樞神經系統、肝臟、膀胱、尿道、輸尿管、胰腺、頸管、腹腔、肛管或子宮頸。
(5)根據上述(1)到(4)中任意一項所述的化合物或用途，其中，所述卟啉類化合物為原卟啉IX、尿卟啉I、尿卟啉III、糞卟啉I、糞卟啉III、七羧基卟啉I、七羧基卟啉III、六羧基卟啉I、六羧基卟啉III、五羧基卟啉I、五羧基卟啉III、異糞卟啉、副卟啉(ハルデロポルフイリン)、異副卟啉(イソハルデロポルフイリン)、中卟啉IX、次卟啉IX或8(13)-氫基-3，7，12，17-四甲基-13(8)-乙烯基-21H，23H-卟吩-2，18-二丙酸(ペンプトポルフイリン)。
(6)根據上述(1)到(5)中任意一項所述的化合物或用途，其中，以每次0.001毫克/每千克體重到10克/每千克體重的劑量施用所述的δ-氨基乙醯丙酸、其衍生物、或它們的鹽。
(7)根據上述(1)到(6)中任意一項所述的化合物或用途，其可用於經口施用、腹膜內施用、靜脈施用、肌內施用、患病部位局部應用、經皮吸收或直腸施用。
(8)根據上述(1)到(7)中任意一項所述的化合物或用途，其中，所述的從體內或體外收集到的樣品為血液、體液、組織、尿液、糞便、唾液、汗液、腦脊液、精液或淚液。
(9)根據上述(1)到(8)中任意一項所述的化合物或用途，其中，在施用所述的δ-氨基乙醯丙酸、其衍生物、或它們的鹽的0.1小時到10小時之後從體內或體外收集所述樣品。
(10)根據上述(1)到(9)中任意一項所述的化合物或用途，其中，測量尿卟啉I和尿卟啉III的量，並根據尿卟啉I/尿卟啉III的濃度比來檢測腫瘤。
(11)根據上述(1)到(10)中任意一項所述的化合物或用途，其中，使用HPLC(高效液相色譜法)、TLC(薄層色譜法)、螢光檢測法或免疫測定法來測量所述卟啉類化合物。
發明效果根據本發明的腫瘤診斷劑，可方便地施行針對腫瘤的早期檢測，治療效果監測和預後診斷，而不限於特定的腫瘤。
圖1是示出通過螢光檢測法測定的在荷瘤小鼠和正常小鼠中的原卟啉IX和尿卟啉的濃度變化圖。
實施本發明的最佳方式傳統上，人們沒有嘗試過這樣的方法施用δ-氨基乙醯丙酸、其衍生物、或它們的鹽，從體內或體外收集樣品，然後測定樣品中的卟啉類化合物。本發明的腫瘤診斷劑是一種通過施用δ-氨基乙醯丙酸、其衍生物、或它們的鹽，然後測量從體內或體外收集到的樣品中的卟啉類化合物來檢測腫瘤的診斷劑。
本發明的腫瘤診斷劑的活性成份為δ-氨基乙醯丙酸、其衍生物(如上述式(I)所示)、或它們的鹽。
在式(I)中，R1或R2所代表的烷基優選為具有1到24個碳原子的直鏈或支鏈烷基、更優選為具有1到18個碳原子的烷基、最優選為具有1到6個碳原子的烷基。具有1到6個碳原子的烷基包括甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、和仲丁基等。醯基優選為具有1到12個碳原子的直鏈或支鏈的烷醯基、烯基羰基或芳醯基、更優選為具有1到6個碳原子的烷醯基。醯基包括甲醯基、乙醯基、丙醯基、和丁醯基等。烷氧基羰基優選為碳原子總數為2到13的烷氧基羰基、更優選為具有2到7個碳原子的烷氧基羰基。烷氧基羰基包括甲氧基羰基、乙氧基羰基、正丙氧基羰基、和異丙氧基羰基等。芳基優選為具有6到16個碳原子的芳基，例如苯基和萘基。芳烷基優選為由具有6到16個碳原子的芳基和上述具有1到6個碳原子的烷基構成的基團，例如苄基。
由R3代表的烷氧基優選為具有1到24個碳原子的直鏈或支鏈烷氧基、更優選為具有1到16個碳原子的烷氧基、最優選為具有1到12個碳原子的烷氧基。烷氧基包括甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、戊氧基、己氧基、辛氧基、癸氧基、和十二烷氧基等。醯氧基優選具有1到12個碳原子的直鏈或支鏈的烷醯氧基、更優選具有1到6個碳原子的烷醯氧基。烷醯氧基包括乙醯氧基、丙醯氧基、和丁醯氧基等。烷氧基羰基氧基優選為碳原子總數為2到13的烷氧基羰基氧基、更優選為碳原子總數為2到7的烷氧基羰基氧基。烷氧基羰基氧基包括甲氧基羰基氧基、乙氧基羰基氧基、正丙氧基羰基氧基、和異丙氧基羰基氧基等。芳氧基優選為具有6到16個碳原子的芳氧基，例如苯氧基和萘氧基。芳烷氧基優選為具有上述芳烷基的基團，例如苄氧基。
在式(I)中，R1和R2都優選為氫。R3優選為羥基、烷氧基或芳烷氧基，更優選為羥基或具有1到12個碳原子的烷氧基，最優選為甲氧基或己氧基。
δ-氨基乙醯丙酸衍生物包括δ-氨基乙醯丙酸甲酯、δ-氨基乙醯丙酸乙酯、δ-氨基乙醯丙酸丙酯、δ-氨基乙醯丙酸丁酯、δ-氨基乙醯丙酸戊酯、和δ-氨基乙醯丙酸己酯等，並且特別優選為δ-氨基乙醯丙酸甲酯或δ-氨基乙醯丙酸己酯。
關於δ-氨基乙醯丙酸或其衍生物的鹽，優選為可藥用的無機酸或有機酸的酸加成鹽，但是沒有特別限定。無機酸加成鹽包括鹽酸鹽、氫溴酸鹽、硫酸鹽、硝酸鹽、和磷酸鹽等，而有機酸加成鹽包括乙酸鹽、乳酸鹽、檸檬酸鹽、酒石酸鹽、琥珀酸鹽、馬來酸鹽、延胡索酸鹽、和抗壞血酸鹽等，並且優選為δ-氨基乙醯丙酸鹽酸鹽或δ-氨基乙醯丙酸磷酸鹽。
可通過採用化學合成法、微生物法或酶法的方法中的任何一種方法來製備這些鹽。其實例包括在專利文獻JP-A-4-9360、JP-T-11-501914、日本專利申請No.2004-99670、2004-99671和2004-99672中描述的那些方法。
可採用將δ-氨基乙醯丙酸、其衍生物、或它們的鹽與藥用載體混合這種常規方法來本製備發明的腫瘤診斷劑。其劑型包括經口施用製劑，例如顆粒劑、細粒劑和片劑；注射劑，例如溶液劑和用時溶解的粉末劑；經皮製劑，例如膏劑、溶液劑、霜劑和凝膠劑；以及栓劑等。
可應用本發明的腫瘤診斷劑的腫瘤為惡性腫瘤或非惡性腫瘤。惡性腫瘤以浸潤方式增殖，並且表現出諸如轉移等惡性症狀。在惡性腫瘤中，來源於上皮細胞的腫瘤佔大部分，並且肉瘤、淋巴瘤和白血病也被包括在其中。非惡性腫瘤表現為除惡性腫瘤之外的其它疾病，例如良性疾病，並且並不一定意味著它們的治療是容易的。
雖然對腫瘤組織沒有特別限定，但是其包括腦、鼻道、鼻腔、氣管、支氣管、口腔、咽、食道、胃、乳房、結腸直腸、肺、卵巢、中樞神經系統、肝臟、膀胱、尿道、輸尿管、胰腺、頸管、腹腔、肛管和子宮頸等。
本發明腫瘤診斷劑的施用方法包括經口施用、靜脈施用、肌內施用、患病部位局部應用、腹膜內施用、經皮吸收和直腸施用等，並且優選腹膜內施用、經口施用、患病部位局部應用或靜脈施用。
本發明腫瘤診斷劑的劑量隨施用方法、施用途徑、症狀、體重和腫瘤類型的不同而不同，但是就經口施用而言，劑量為每次0.001毫克/每千克體重到10克/每千克體重、優選為0.1毫克/每千克體重到1000毫克/每千克體重、更優選為1毫克/每千克體重到100毫克/每千克體重。
關於在施用本發明的腫瘤診斷劑之後從體內或體外收集到的樣品，其實例包括血液、體液、組織、尿液、糞便、唾液、汗液、腦脊液、精液、淚液等，但是並不受限定於這些。為了便於收集樣品，以血液、尿液或糞便作為樣品是優選的。從施用後直到從體內或體外收集到樣品的時間段可隨施用方法和腫瘤組織的不同而不同，但是該時間段為約0.1小時到10小時(其間，卟啉類化合物存在的量達到最大值)、特別是0.5小時到5小時。就此而論，需要在進行隨後的測量前對收集到的樣品進行常規處理。
雖然對待測卟啉類化合物的種類沒有特別限定，但是其實例包括原卟啉IX、尿卟啉I、尿卟啉III、七羧基卟啉I、七羧基卟啉III、六羧基卟啉I、六羧基卟啉III、五羧基卟啉I、五羧基卟啉III、糞卟啉I、糞卟啉III、異糞卟啉、副卟啉、異副卟啉、中卟啉IX、次卟啉IX、和8(13)-氫基-3，7，12，17-四甲基-13(8)-乙烯基-21H，23H-卟吩-2，18-二丙酸等，並且優選原卟啉IX、尿卟啉I、尿卟啉III、糞卟啉I或糞卟啉III。
可通過諸如HPLC(高效液相色譜法)、TLC(薄層色譜法)或採用螢光檢測器的方法之類的檢測方法，或諸如免疫測定法之類的生物檢測法來測量上述卟啉類化合物。對檢測方法沒有特別限定，只要能有效鑑定卟啉類化合物即可，並可根據目的和方便程度任意地選擇檢測方法。在這些檢測方法中，HPLC和TLC適用於詳細診斷，這是因為這些方法能夠將各種卟啉類化合物單獨地鑑定出來。就HPLC而言，兩種或多種卟啉類化合物所形成的峰可能會由於色譜柱的情況和液體流動條件的限制而發生重疊，但是這種情況對於只判斷腫瘤存在與否仍是可行的。雖然在合適的波長下，螢光檢測器可以鑑定特定的卟啉，但是由於各卟啉類化合物的螢光發生波長彼此接近，使得這種方法不適於精確測定單獨的卟啉。如下文實施例所示，螢光檢測器適於鑑定卟啉類化合物。免疫測定法可以測量特定的卟啉，並且還可以測量卟啉類化合物的總量。
如下文實施例所示，與正常小鼠相比，在由植入荷瘤細胞的小鼠(荷瘤小鼠)得到的樣品中，其卟啉濃度較高，從而表明本發明的腫瘤診斷劑可明顯區分腫瘤組織與正常組織。此外，就特定種類的卟啉(例如尿卟啉I和尿卟啉III)的存在比值(如尿卟啉I/尿卟啉III)而言，由於荷瘤小鼠和正常小鼠之間存在明顯差異，所以，基於這些差異可以發現，使用本發明的腫瘤診斷劑、以特定種類卟啉的存在比值為指標可檢測腫瘤。
使用本發明的腫瘤診斷劑的診斷原理是基於在施用δ-氨基乙醯丙酸、其衍生物、或它們的鹽之後，以原卟啉IX為代表的卟啉作為代謝物會在腫瘤內積聚。針對產生這種現象的原因，多個機構正在進行研究，並且據信，將原卟啉IX代謝為血紅素的亞鐵螯合酶在腫瘤內活性可能較低，但是迄今尚不明確。
實施例以下參照實施例來進一步詳細說明本發明，然而，本發明不受限於下列實施例。
實施例1以1×106個細胞的劑量將小鼠荷瘤細胞(MH 134細胞肝腹水癌細胞)腹腔植入小鼠(C3H/He系，5周齡，雌性)體內，並將該小鼠飼養0到14天。在腹腔植入荷瘤細胞後10天時，向該腹腔植入荷瘤細胞的小鼠經口施用50微升濃度為0.12M的δ-氨基乙醯丙酸鹽酸鹽、δ-氨基乙醯丙酸甲酯鹽酸鹽、δ-氨基乙醯丙酸己酯鹽酸鹽或δ-氨基乙醯丙酸磷酸鹽。並在其後的0小時、0.25小時、0.5小時、2小時、3小時、4小時、或6小時的時候，分別從經口施用上述化合物的小鼠收集10微升到20微升的血液樣品。將如此收集到的血液在2000×g的條件下離心5分鐘，向5微升上清液(血漿)中加入300微升乙酸乙酯/醋酸(2/1，體積比)，然後進行混合，向該混合物中進一步加入300微升濃度為0.6M的NaOH溶液，然後進行混合，並收集NaOH層。向剩餘的有機層中加入300微升濃度為0.5M的鹽酸溶液，並收集鹽酸水溶液層。測定氫氧化鈉層和鹽酸水溶液層的螢光強度(鹽酸層激發波長400nm，螢光波長600nm；氫氧化鈉層激發波長400nm，螢光波長619nm)，並根據標準溶液計算各樣品的濃度。此外，將δ-氨基乙醯丙酸鹽酸鹽、δ-氨基乙醯丙酸甲酯鹽酸鹽、δ-氨基乙醯丙酸己酯鹽酸鹽或δ-氨基乙醯丙酸磷酸鹽也經口施用(0.12M，50μl)給正常小鼠作為對照，並進行相同處理。所得結果示於圖1-1到1-8。
從圖1-1到1-8可明顯看出，在施用δ-氨基乙醯丙酸鹽酸鹽、δ-氨基乙醯丙酸甲酯鹽酸鹽、δ-氨基乙醯丙酸己酯鹽酸鹽或δ-氨基乙醯丙酸磷酸鹽之後2個小時的時候，在腹腔植入荷瘤細胞的小鼠中，原卟啉IX和尿卟啉的濃度達到最大值。與此形成對比的是，在上述2個小時的時候，在正常小鼠中幾乎檢測不到尿卟啉。因此發現，本發明的腫瘤診斷劑是一種能夠明顯區分腫瘤組織和正常組織的診斷劑。
實施例2以1×106個細胞的劑量將小鼠荷瘤細胞(MH 134細胞)腹腔植入小鼠(C3H/He系，5周齡，雌性)體內，並將該小鼠飼養0到14天。在腹腔植入荷瘤細胞之後10天時，將50微升濃度為0.12M的δ-氨基乙醯丙酸鹽酸鹽經口施用給所述小鼠，並在其後2個小時的時候，收集10微升到20微升的血液樣品。然後，將收集到的各血液樣品在2000×g的條件下離心5分鐘，向5微升上清液(血漿)中加入50微升乙酸乙酯/醋酸(2/1，體積比)，然後進行混合，向該混合物中進一步加入50微升濃度為0.6M的NaOH溶液，然後進行混合，並收集NaOH層。採用HPLC測量樣品(分析條件如下使用激發波長為406nm、螢光波長為610nm的螢光檢測器；用由12.5％乙腈、1M醋酸銨和0.27mM的EDTA組成的溶液(pH5.15，使用醋酸調節)作為洗脫液；使用由Shiseido公司製造的ODS-AG型CAPCELLPAK(4.6mmφ×250mm，粒徑為5微米)作為色譜柱；在流速為1.0mL/分鐘和25℃的條件下進行測量)，並根據標準溶液的峰面積計算各樣品的濃度。所得結果示於表1中。
表1使用HPLC測定血液中的尿卟啉I和尿卟啉III
ND未檢出從表1可以明顯看出，在施用δ-氨基乙醯丙酸鹽酸鹽之前的正常小鼠中和腹腔植入荷瘤細胞的小鼠中、以及在施用δ-氨基乙醯丙酸鹽酸鹽之後的正常小鼠中均未檢出尿卟啉I和尿卟啉III，但是在腹腔植入荷瘤細胞以後再施用δ-氨基乙醯丙酸鹽酸鹽的小鼠中，卻檢出尿卟啉I和尿卟啉III，其中檢測出的尿卟啉III的量多，其中尿卟啉I/尿卟啉III為0.53。根據這個結果發現本發明的診斷劑是一種可根據尿卟啉I和尿卟啉III的量及它們的比值來明顯區分腫瘤組織和正常組織的診斷劑。
實施例3以1×106個細胞的劑量將小鼠荷瘤細胞(MH 134細胞)腹腔植入小鼠(C3H/He系，5周齡，雌性)體內，並將該小鼠飼養0到14天。在腹腔植入荷瘤細胞後10天時，將50微升濃度為0.12M的δ-氨基乙醯丙酸鹽酸鹽經口施用給所述小鼠，並在其後2個小時的時候，收集尿樣，並且在施用化合物之前的尿樣也已被收集。採用HPLC測量如此收集的樣品(分析條件如下使用激發波長為406nm、螢光波長為619nm的螢光檢測器；用由12.5％乙腈、1M醋酸銨和0.27mM的EDTA組成的溶液(pH5.15，使用醋酸調節)作為洗脫液；使用由Shiseido公司製造的ODS-AG型CAPCELLPAK(4.6mmφ×250mm，粒徑為5微米)作為色譜柱；在流速為1.0mL/分鐘和25℃的條件下進行測量)測量如此收集的樣品，並根據標準溶液計算各樣品的濃度。此外，還要將50微升濃度為0.12M的δ-氨基乙醯丙酸鹽酸鹽施用給正常小鼠以便作為對照，然後進行相同的處理。所得結果示於表2中。
表2使用HPLC測定尿中的尿卟啉I和尿卟啉III
ND未檢出從表2可以明顯看出，在施用δ-氨基乙醯丙酸鹽酸鹽之前的正常小鼠和腹腔植入荷瘤細胞的小鼠中均未檢測出尿卟啉I和尿卟啉III，但是，在施用δ-氨基乙醯丙酸鹽酸鹽之後的正常小鼠和腹腔植入荷瘤細胞的小鼠中，則可檢測出尿卟啉I和尿卟啉III，並且，在腹腔植入荷瘤細胞的小鼠中檢測出的尿卟啉I和尿卟啉III的量均高出正常小鼠中撿測出的尿卟啉I和尿卟啉III的量的約13倍。此外，雖然正常小鼠的尿卟啉I與尿卟啉III的比值為0.94，但是不同的是，腹腔植入荷瘤細胞的小鼠的尿卟啉I與尿卟啉III的比值卻為0.54。根據該結果發現，本發明的診斷劑是一種根據尿卟啉I和尿卟啉III的量以及它們的比值來明顯區分腫瘤組織和正常組織的診斷劑。
實施例4以1×106個細胞的劑量將小鼠荷瘤細胞(MH 134細胞)腹腔植入小鼠(C3H/He系，5周齡，雌性)體內，並將該小鼠飼養0到14天。在腹腔植入荷瘤細胞後10天時，將50微升濃度為0.12M的δ-氨基乙醯丙酸鹽酸鹽經口施用給所述小鼠，並在其後2個小時的時候，收集小鼠糞便。向如此收集到的溼重為10毫克的糞便樣品中，加入100微升乙酸乙酯和醋酸的混合液(乙酸乙酯/醋酸為4/1，體積比)，然後使混合物均化並用濾紙過濾，採用HPLC測量10微升的濾液(分析條件如下使用激發波長為406nm、螢光波長為619nm的螢光檢測器；用溶液A(80％乙腈/7％乙酸/50mM乙酸銨的混合液)和溶液B(10％乙腈/4％乙酸/50mM乙酸銨的混合液)作為洗脫液，從A/B(20/80)到A/B(90/10)進行線性梯度洗脫30分鐘，然後用溶液A保留20分鐘；使用由Shiseido公司製造的ODS-AG型CAPCELLPAK(4.6mmφ×250mm，粒徑為5微米)作為色譜柱；在流速為1.0mL/分鐘和25℃的條件下進行測量)，並根據標準溶液的峰面積計算各樣品的濃度。此外，還要將50微升濃度為0.12M的δ-氨基乙醯丙酸鹽酸鹽施用給正常小鼠以便作為對照，然後進行相同的處理。所得結果示於表3中。
表3使用HPLC測定糞便中的尿卟啉和糞卟啉
ND未檢出從表3可以明顯看出，在施用δ-氨基乙醯丙酸鹽酸鹽之前的正常小鼠和腹腔植入荷瘤細胞的小鼠中均未檢測出尿卟啉和糞卟啉，並且在施用δ-氨基乙醯丙酸鹽酸鹽之後的正常小鼠中也沒有檢測出尿卟啉和糞卟啉，但是在施用δ-氨基乙醯丙酸鹽酸鹽之後的腹腔植入荷瘤細胞的小鼠中卻檢測出1.75pmol的尿卟啉和0.21pmol的糞卟啉，從而表明本發明的診斷劑是一種能夠明顯區分腫瘤組織和正常組織的診斷劑。
實施例5將通過以1×106個細胞的劑量將人肝癌細胞(HepG2細胞)皮下植入裸鼠(BALB/cA-nu，5周齡，雄性)體內的方法得到的小鼠、和通過以1×106個細胞的劑量將人宮頸癌細胞(HeLa細胞)皮下植入裸鼠(BALB/cA-nu，5周齡，雄性)體內的方法得到的小鼠飼養0到10天。在植入人肝癌細胞和人宮頸癌細胞之後10天時，將50微升濃度為0.12M的δ-氨基乙醯丙酸磷酸鹽經口施用給每隻所述的小鼠，並在其後4個小時的時候，收集小鼠尿液。
採用HPLC測量如此收集的尿液(分析條件如下使用激發波長為406nm、螢光波長為619nm的螢光檢測器；用溶液A(80％乙腈/7％乙酸/50mM乙酸銨的混合液)和溶液B(10％乙腈/4％乙酸/50mM乙酸銨的混合液)作為洗脫液，從A/B(20/80)到A/B(90/10)進行線性梯度洗脫13分鐘，然後用溶液A洗脫10分鐘；使用由Shiseido公司製造的ODS-AG型CAPCELLPAK(4.6mmφ×250mm，粒徑為5微米)作為色譜柱；在流速為1.0mL/分鐘和25℃的條件下進行測量)，並根據標準溶液計算各樣品的濃度。此外，通過測量尿液中肌酸酐(CRE)的量，並計算卟啉/CRE的量從而校正尿液濃度。此外，還將50微升濃度為0.12M的δ-氨基乙醯丙酸磷酸鹽施用給正常小鼠以便作為對照，並進行相同的處理。所得結果示於表4中。
表4使用HPLC測定尿液中的尿卟啉和糞卟啉
從表4可以明顯看出，在施用δ-氨基乙醯丙酸磷酸鹽之後，在植入人肝癌細胞的小鼠尿液中含有的尿卟啉的量是正常小鼠尿液中含有的尿卟啉的量的約15倍，在植入人肝癌細胞的小鼠中含有的糞卟啉的量是正常小鼠尿液中含有的糞卟啉的量的約1.5倍。此外，還可看出，在施用δ-氨基乙醯丙酸磷酸鹽之後，在植入人宮頸癌細胞的小鼠的尿液中含有的尿卟啉的量是正常小鼠尿液中含有的尿卟啉的量的約94倍，在植入人宮頸癌細胞的小鼠的尿液中含有的糞卟啉的量是正常小鼠尿液中含有的糞卟啉的量的約2.7倍。
根據以上結果，可以發現，即使在使用人癌細胞的情況下，本發明的腫瘤診斷劑也是一種能夠明顯區分正常組織和異常組織的診斷劑。
雖然通過參考本發明的具體實施方案詳細說明了本發明，但是在不脫離本發明實質和範圍的情況下對本發明進行各種改變和修改對於本領域內技術人員來說是顯而易見的。
本專利申請基於2004年9月29日提交的日本專利申請No.2004-284078和2005年8月11日提交的日本專利申請No.2005-232996，這些申請的全部內容已以引用的方式併入本文。本文引用的所有參考文獻都全部併入本文。
工業實用性根據本發明的腫瘤診斷劑，可方便地施行早期檢測、治療效果監測和預後診斷，而不受限於特定的腫瘤。
權利要求
1.一種選自由式(I)代表的δ-氨基乙醯丙酸、其衍生物、或它們的鹽的化合物，其用作腫瘤診斷劑，該腫瘤診斷劑用於在施用該腫瘤診斷劑之後通過測定從體內或體外收集到的樣品中的卟啉類化合物來進行診斷，式(I)為R2R1NCH2COCH2CH2COR3(I)，其中，R1和R2各自獨立代表氫、烷基、醯基、烷氧基羰基、芳基或芳烷基；R3代表羥基、烷氧基、醯氧基、烷氧基羰基氧基、芳氧基、芳烷氧基或氨基。
2.由式(I)代表的δ-氨基乙醯丙酸、其衍生物、或它們的鹽作為腫瘤診斷劑的用途，其中該腫瘤診斷劑用於在施用該腫瘤診斷劑之後通過測定從體內或體外收集到的樣品中的卟啉類化合物來進行診斷，式(I)為R2R1NCH2COCH2CH2COR3(I)，其中，R1和R2各自獨立代表氫、烷基、醯基、烷氧基羰基、芳基或芳烷基；R3代表羥基、烷氧基、醯氧基、烷氧基羰基氧基、芳氧基、芳烷氧基或氨基。
3.由式(I)代表的δ-氨基乙醯丙酸、其衍生物、或它們的鹽在製造腫瘤診斷劑中的用途，其中該腫瘤診斷劑用於在施用該腫瘤診斷劑之後通過測定從體內或體外收集到的樣品中的卟啉類化合物來進行診斷，式(I)R2R1NCH2COCH2CH2COR3(I)，其中，R1和R2各自獨立代表氫、烷基、醯基、烷氧基羰基、芳基或芳烷基；R3代表羥基、烷氧基、醯氧基、烷氧基羰基氧基、芳氧基、芳烷氧基或氨基。
4.根據權利要求1到3中任意一項所述的化合物或用途，其中所述腫瘤的組織為腦、鼻道、鼻腔、氣管、支氣管、口腔、咽、食道、胃、乳房、結腸直腸、肺、卵巢、中樞神經系統、肝臟、膀胱、尿道、輸尿管、胰腺、頸管、腹腔、肛管或子宮頸。
5.根據權利要求1到4中任意一項所述的化合物或用途，其中，所述卟啉類化合物為原卟啉IX、尿卟啉I、尿卟啉III、糞卟啉I、糞卟啉III、七羧基卟啉I、七羧基卟啉III、六羧基卟啉I、六羧基卟啉III、五羧基卟啉I、五羧基卟啉III、異糞卟啉、副卟啉、異副卟啉、中卟啉IX、次卟啉IX或8(13)-氫基-3，7，12，17-四甲基-13(8)-乙烯基-21H，23H-卟吩-2，18-二丙酸。
6.根據權利要求1到5中任意一項所述的化合物或用途，其中，以每次0.001毫克/每千克體重到10克/每千克體重的劑量施用所述的δ-氨基乙醯丙酸、其衍生物、或它們的鹽。
7.根據權利要求1到6中任意一項所述的化合物或用途，其可用於經口施用、腹膜內施用、靜脈施用、肌內施用、患病部位局部應用、經皮吸收或直腸施用。
8.根據權利要求1到7中任意一項所述的化合物或用途，其中，所述的從體內或體外收集到的樣品為血液、體液、組織、尿液、糞便、唾液、汗液、腦脊液、精液或淚液。
9.根據權利要求1到8中任意一項所述的化合物或用途，其中，在施用所述的δ-氨基乙醯丙酸、其衍生物、或它們的鹽的0.1小時到10小時之後從體內或體外收集所述樣品。
10.根據權利要求1到9中任意一項所述的化合物或用途，其中，測量尿卟啉I和尿卟啉III的量，並根據尿卟啉I/尿卟啉III的濃度比來檢測腫瘤。
11.根據權利要求1到10中任意一項所述的化合物或用途，其中，使用HPLC(高效液相色譜法)、TLC(薄層色譜法)、螢光檢測法或免疫測定法來測量所述卟啉類化合物。
全文摘要
本發明所提供的腫瘤診斷劑是一種可針對所有腫瘤施行早期發現、治療效果監測和預後診斷的腫瘤診斷劑。本發明的腫瘤診斷劑是一種含有由式(I)代表的δ－氨基乙醯丙酸、其衍生物、或它們的鹽的腫瘤診斷劑，式(I)為R
文檔編號G01N30/88GK101031324SQ20058003298
公開日2007年9月5日 申請日期2005年9月22日 優先權日2004年9月29日
發明者大倉一郎, 蒲池利章, 小倉俊一郎, 石塚昌宏, 田中徹 申請人:克斯莫石油株式會社