酪氨酸激酶抑制劑及其應用的製作方法

2023-12-09 03:50:41 1

本發明涉及醫藥技術領域，具體涉及一種酪氨酸激酶抑制劑及其應用。

背景技術：

蛋白激酶是一種磷酸轉移酶，轉移三磷酸腺苷atp的伽馬磷酸脂基到特定的胺基酸殘基，用以實現蛋白的磷酸化，從而實現其生理和生化功能。

蛋白激酶在信息傳導上有著重要功能。反常的蛋白激酶不能進行正常的信號傳遞，可能會引起病變，例如：腫瘤細胞增生、細胞死亡、炎症、心血管疾病等蛋白激酶。蛋白激酶主要分為兩類：蛋白酪氨酸激酶ptks和受體酪氨酸激酶rtks。met族蛋白激酶中的ros1/c-met是rtps的一個重要亞系，也稱作hhgfr和ron；ros1/c-met能夠對起始腫瘤細胞的生長和代謝起到重要作用，是多種藥物臨床研究的目標靶點。

因此，生物醫療技術領域急需ros1/c-met激酶抑制劑，尤其是小分子化合物的酪氨酸激酶抑制劑。

技術實現要素：

本發明要解決的技術問題是提供一種酪氨酸激酶抑制劑，該激酶抑制劑能夠抑制c-met、vegf、kdr、ron、kit、pdgf、fgf、src等多種參與信號傳導的酪氨酸激酶的活性，能有效抑制腫瘤細胞的增殖，使臨床癌症治療取得更好效果。

為了解決上述技術問題，本發明通過如下技術方案實現:

在本發明的一個方面，提供了一種具有通式(i)的鹽類化合物，

其中，

r1選自滷素、滷素負離子、低級滷代烷烴基、低級烷烴基、低級烯烴基、低級炔烴基、取代飽和或不飽和環烷基，取代或不取代芳香烷基、取代或不取代芳香基、取代或不取代雜環基、取代或不取代雜環烷基、或為空；

y選自c、o、n、s或為空；

x選自碳酸根、硫酸根、亞硫酸根、硫酸氫根、磷酸根、亞磷酸根、磷酸氫根、磷酸二氫根、鉬酸根、氯酸根、或為空。

優選的，所述通式(i)化合物包括下述具體結構的化合物：

在本發明的另一方面，還提供了一種藥物組合物，該組合物包含安全有效量的上述化合物和藥學上可接受的載體。

上述可接受的載體是無毒的、能輔助施用並且對化合物的治療效果沒有不利影響。此類載體可以是本領域的技術人員通常能得到的任何固體賦形劑、液體賦形劑、半固體賦形劑或者在氣霧劑組合物中的氣體賦形劑。固體藥物賦形劑包括澱粉、纖維素、滑石、葡萄糖、乳糖、蔗糖、明膠、麥芽、稻米、麵粉、白堊、矽膠、硬脂酸鎂、硬脂酸鈉、甘油硬脂醯酯、氯化鈉、無水脫脂乳等。液體和半固體賦形劑可以選自甘油、丙二醇、水、乙醇和各種油，包括那些源於石油、動物、植物或人工合成的油，例如，花生油、豆油、礦物油、芝麻油等、優選的液體載體，特別是用於可注射溶液的，包括水、鹽水、葡萄糖水溶液和甘醇。另外還可以在組合物中加入其它輔劑如香味劑、甜味劑等。

本發明的化合物以治療上的有效量施用，其施用方式可以是口服、全身施用(例如，透過皮膚的、鼻吸入的或者用栓劑)或腸胃外施用(例如，肌肉內、靜脈內或皮下)。優選的施用方式是口服，它可根據疾病程度調節。

本發明的化合物的實際施用量(即活性組分)依賴於許多因素，如待治療疾病的嚴重性、治療對象的年齡和相對健康程度、所使用的化合物的效能、施用途徑和形式，以及其他因素。

本發明藥物組合物的各種劑型可以按照藥學領域的常規方法製備。例如使該化合物與一種或者多種載體混合，然後將其製成所需的劑型，如片劑、藥丸、膠囊、半固體、粉末、緩釋劑型、溶液、混懸液、配劑、氣霧劑等等。

在本發明的另一方面，還提供了一種包含上述鹽類化合物的酪氨酸激酶抑制劑。

所述酪氨酸激酶包括c-met、vegf、kdr、ron、kit、pdgf、fgf、src激酶。

在本發明的另一方面，還提供了上述鹽類化合物在製備治療癌症的藥物中的應用。

由於酪氨酸激酶是目前效果明顯的抗腫瘤藥物靶點，而本發明的鹽類化合物具有顯著的酪氨酸激酶抑制活性，通過實驗證實這些化合物對各種癌細胞增殖具有抑制作用，因此本發明鹽類化合物適用於治療各種癌症。尤其是對於肺癌、胃癌、卵巢癌、結腸癌、惡性膠質瘤具有較好的治療效果。

在本發明的另一方面，還提供了上述鹽類化合物在製備治療炎症的藥物中的應用。

本發明鹽類化合物與多種信號傳導激酶如c-met、vegf、kdr、ron、kit、pdgf、fgf、src等都具有良好的生物活性作用，並與多種信號傳導路徑相關聯，因此對多種疾病有治療效果，如癌症、炎症、淋巴水腫、糖尿病等。

本發明的酪氨酸激酶抑制劑，能夠抑制c-met、vegf、kdr等多種信號傳導激酶的生物活性，能有效抑制細胞增殖，對多種疾病如癌症具有良好的治療效果，尤其是對肺癌、胃癌、卵巢癌、惡性膠質瘤等具有顯著的治療效果，應用前景非常廣闊。

附圖說明

下面結合附圖和具體實施方式對本發明作進一步詳細的說明。

圖1是本發明實施例7的化合物6對人肺腺癌細胞hcc78的增殖抑制擬合曲線圖；

圖2是本發明實施例7的化合物6對人惡性膠質瘤細胞u87mg的增殖抑制擬合曲線圖；

圖3是本發明實施例7的化合物6對人臍靜脈內皮細胞huvec的增殖抑制擬合曲線圖；

圖4是本發明實施例7的化合物2和4對人惡性膠質瘤細胞u87mg的增殖抑制擬合曲線圖；

圖5是本發明實施例7的化合物2和4對人胃癌細胞mkn-45的增殖抑制擬合曲線圖；

圖6是本發明實施例7的化合物2和4對人肺腺癌細胞hcc78的增殖抑制擬合曲線圖；

圖7是本發明實施例7的化合物2、4、6對人卵巢癌細胞sk-ov-3的增殖抑制擬合曲線圖；

圖8是本發明實施例7的化合物2、4、6對人結腸癌細胞hct116的增殖抑制擬合曲線圖；

圖9是本發明實施例7的化合物2、4、6對人肺腺癌細胞a549的增殖抑制擬合曲線。

具體實施方式

實施例1酪氨酸激酶抑制劑對甲苯磺酸鹽化合物的合成

化合物1(n-[3-氟-4-[[6-甲氧基-7-[[3-(嗎啉-4-基)丙基]氧]喹啉-4-基]氧]苯基]-n'-(4-氟苯基)環丙烷-1,1-二甲醯胺)(632mg,1mmol)溶於四氫呋喃(10ml)中，冰水浴至內溫0℃後，加入對甲苯磺酸(173mg，1mmol)，室溫下反應2h，反應完畢後過濾得白色固體n-[3-氟-4-[[6-甲氧基-7-[[3-(嗎啉-4-基)丙基]氧]喹啉-4-基]氧]苯基]-n'-(4-氟苯基)環丙烷-1,1-二甲醯胺對甲苯磺酸鹽(化合物2)650mg，產率81％。

1hnmr(500mhz,dmso-d6):δ10.41(s,1h),9.99(s,1h),9.48(brs,1h),8.50(d,j＝5hz,1h),7.92(dd,1h),7.52-7.65(m,4h),7.40-7.48(m,4h),7.10-7.18(m,4h),6.46(d,j＝5.5hz,1h),4.26(t,2h),4.10(d,2h),4.10(m,1h),3.97(s,3h),3.66(t,2h),3.60(m,2h),3.15(m,2h),2.21-2.36(m,5h),1.45-1.51(m,4h)。

lc-ms(esi)m/z633(m+h)。

實施例2酪氨酸激酶抑制劑穀氨酸鹽化合物的合成

化合物1(n-[3-氟-4-[[6-甲氧基-7-[[3-(嗎啉-4-基)丙基]氧]喹啉-4-基]氧]苯基]-n'-(4-氟苯基)環丙烷-1,1-二甲醯胺)(632mg,1mmol)溶於四氫呋喃/水(10ml,1:1)中，冰水浴至內溫0℃後，加入l-穀氨酸(147mg，1mmol)，室溫下反應8h，反應完畢後過濾得白色固體n-[3-氟-4-[[6-甲氧基-7-[[3-(嗎啉-4-基)丙基]氧]喹啉-4-基]氧]苯基]-n'-(4-氟苯基)環丙烷-1,1-二甲醯胺穀氨酸鹽(化合物3)450mg，產率58％。

lc-ms(esi)m/z633(m+h)。

實施例3酪氨酸激酶抑制劑正丁磷酸鹽化合物的合成

化合物1(n-[3-氟-4-[[6-甲氧基-7-[[3-(嗎啉-4-基)丙基]氧]喹啉-4-基]氧]苯基]-n'-(4-氟苯基)環丙烷-1,1-二甲醯胺)(632mg,1mmol)溶於二氯甲烷(10ml)中，冰水浴至內溫0℃後，加入正丁磷酸(154mg，1mmol)，室溫下反應4h，反應完畢後過濾得白色固體n-[3-氟-4-[[6-甲氧基-7-[[3-(嗎啉-4-基)丙基]氧]喹啉-4-基]氧]苯基]-n'-(4-氟苯基)環丙烷-1,1-二甲醯胺正丁磷酸鹽(化合物4)650mg，產率83％。

1hnmr(500mhz,dmso-d6):δ10.43(s,1h),9.94(s,1h),9.20(brs,1h),8.51(d,j＝5hz,1h),7.92(dd,1h),7.52-7.65(m,4h),7.40-7.48(m,4h),7.10-7.18(m,4h),6.46(d,j＝5.5hz,1h),4.21(t,2h),4.15(d,2h),4.08(m,1h),3.77(m,2h),3.66(t,2h),3.60(m,2h),3.15(m,2h),2.21-2.36(m,5h),1.45-1.51(m,4h),1.23(m,4h).1.10(t,3h),

lc-ms(esi)m/z633(m+h)。

實施例4酪氨酸激酶抑制劑蘋果酸鹽化合物的合成

化合物1(n-[3-氟-4-[[6-甲氧基-7-[[3-(嗎啉-4-基)丙基]氧]喹啉-4-基]氧]苯基]-n'-(4-氟苯基)環丙烷-1,1-二甲醯胺)(632mg,1mmol)溶於四氫呋喃(10ml)中，冰水浴至內溫0℃後，加入蘋果酸(134mg，1mmol)，室溫下反應8h，反應完畢後過濾得白色固體n-[3-氟-4-[[6-甲氧基-7-[[3-(嗎啉-4-基)丙基]氧]喹啉-4-基]氧]苯基]-n'-(4-氟苯基)環丙烷-1,1-二甲醯胺蘋果酸鹽(化合物5)550mg，產率72％。

lc-ms(esi)m/z633(m+h)。

實施例5酪氨酸激酶抑制劑阿侖膦酸鹽化合物的合成

化合物1(n-[3-氟-4-[[6-甲氧基-7-[[3-(嗎啉-4-基)丙基]氧]喹啉-4-基]氧]苯基]-n'-(4-氟苯基)環丙烷-1,1-二甲醯胺)(632mg,1mmol)溶於n,n-二甲基甲醯胺(10ml)中，冰水浴至內溫0℃後，加入阿侖膦酸(249mg，1mmol)，室溫下反應8h，反應完畢後過濾得白色固體n-[3-氟-4-[[6-甲氧基-7-[[3-(嗎啉-4-基)丙基]氧]喹啉-4-基]氧]苯基]-n'-(4-氟苯基)環丙烷-1,1-二甲醯胺阿侖膦酸鹽(化合物6)150mg，產率17％。

lc-ms(esi)m/z633(m+h)。

實施例6酪氨酸激酶抑制活性檢測

將上述實施例的鹽類化合物應用於對c–met和kdr激酶抑制活性的檢測和篩選。

1.方法

(1)向384孔板中加入4μl配製的激酶緩衝溶液，或是4μl的激酶溶液(100％抑制對照)；向孔中加入2μl的化合物，或是2μl不含化合物的buffer(0％inhibition對照)；以上所有樣品或對照均設2復孔。

(2)25℃孵育5min；

(3)向孔中加入2μl的atp/底物/mgcl2/mncl2/seb/dtt混合液；

(4)1000rpm離心1min，30℃震蕩孵育30min；

(5)向孔中加入8μlxl-665/抗體的混合液；

(6)25℃孵育1h；

(7)pherastarfs儀器讀取665nm和620nm信號；

(8)根據試劑盒說明書分析數據，並用graphpadprism5擬合計算ic50。

ratio＝665nm/620nm

2.實驗結果

各送檢化合物及參比化合物的檢測結果總結如下表1和表2所示，其中對照化合物是現有的c–met激酶抑制劑foretinib(結構式如下)。for-oxide、for-methyl的化學結構式也分別如下。

表1化合物6對c–met的抑制活性

表2化合物6對kdr的抑制活性

表3化合物2和4對c–met/kdr的抑制活性

由表1-3的數據可知，本發明上述實施例的鹽類化合物具有c–met、kdr等酪氨酸激酶的抑制活性。

實施例7對腫瘤細胞增殖抑制試驗

1.方法

(1)細胞培養：將腫瘤細胞(如人肺腺癌細胞hcc78、人惡性膠質瘤細胞u87mg、人胃癌細胞mkn-45、人臍靜脈內皮細胞huvec、人肺腺癌細胞a549等)用細胞培養基培養，培養條件為37℃，5％co2。

(2)細胞接種：取處於指數生長期，狀態良好的細胞，加入適量胰酶消化細胞，收集細胞離心，棄上清。用含血清的培養液重新混懸細胞，然後計數並取細胞懸液按3000/孔接種於96孔板上，90μl/孔。將培養板轉入恆溫co2培養箱中，在37℃，5％co2及飽和溼度條件下培養24小時。

(3)加入受試化合物：10μl/孔，培養72小時，每組設3個平行孔。

(4)結果測定：化合物作用72小時後，加入10μl/孔的cck8，置於培養箱中孵育適當時間，在450nm處測吸光值。

2.實驗結果

各送檢化合物的檢測結果總結如下表4-6所示：

表4化合物6對人肺腺癌細胞hcc78、人惡性膠質瘤細胞u87mg、人臍靜脈內皮細胞huvec、人胃癌細胞mkn-45的增殖抑制結果(對應的擬合曲線見圖1-3)

表5化合物2和4對人惡性膠質瘤細胞u87mg、人胃癌細胞mkn-45、人肺腺癌細胞hcc78的增殖抑制結果(對應的擬合曲線見圖4-6)

表6化合物2、4、6對人卵巢癌細胞sk-ov-3、人結腸癌細胞hct116、人肺腺癌細胞a549的增殖抑制結果(對應的擬合曲線見圖7-9)

由上述表4-6的數據可知，本發明的鹽類化合物通過抑制c–met、kdr等酪氨酸激酶的活性，能夠有效抑制人肺腺癌細胞、人胃癌細胞、人結腸癌細胞、人卵巢癌細胞、人惡性膠質瘤細胞等各種癌細胞的增殖，特別適用於癌症的治療。

以上所述實施例僅表達了本發明的實施方式，其描述較為具體和詳細，但並不能因此而理解為對本發明專利範圍的限制。應當指出的是，對於本領域的普通技術人員來說，在不脫離本發明構思的前提下，還可以做出若干變形和改進，這些都屬於本發明的保護範圍。因此，本發明專利的保護範圍應以所附權利要求為準。