一種具有抗腫瘤活性的二苯乙烯類化合物及其製備方法
2023-12-09 03:59:46
專利名稱：一種具有抗腫瘤活性的二苯乙烯類化合物及其製備方法
技術領域：
本發明屬於植物藥用成分和抗腫瘤化合物領域，特別涉及的是從蒙藥苦馬豆(Sphaerophysa salsula(Pall.)DC.)提取的具有明顯預防和治療腫瘤作用的有效成分及其製備方法和應用。
背景技術：
目前全世界每年有600多萬人死於癌症，新發病例800萬，這數字還在逐年增加。我國13億人口中每年有百萬新發癌症病人，待治療病人約200萬，死亡約130萬。估計到2006年，我國將有170萬人死於癌症，癌症已成為第一位死因。
目前，對於癌症的治療仍以化療及放療為首選，兩者雖對腫瘤的治療取得了相當的療效，但由於缺乏對腫瘤細胞的特異性因而具有較大的毒副作用以及某些腫瘤細胞對化療和放療處理的不敏感，因此在很大程度上限制了它們在臨床中的應用。近年來，為了開發出能特異性地殺傷癌細胞而對正常細胞無毒負作用的藥物，人們對癌症的發病機制從細胞，分子水平上的研究予以高度重視和巨額投資。因此，研究製備抗腫瘤藥物成為生物醫藥領域的熱點。
發明內容
本發明的目的在於提供一種具用抗腫瘤活性的化合物。
本發明的另一個目的在於提供上述二苯乙烯類化合物的製備方法。
本發明的另一個目的在於提供上述二苯乙烯類化合物在抗腫瘤方面的應用。
本發明提供了一種具用抗腫瘤活性的化合物，即一種二苯乙烯類化合物，該化合物的結構式如下所示 ，其中，R、R』分別可以為-H、-CH3、-CH2CH3、-CH2CH＝C(CH3)2、-OH、-OCH3、-NH2、O＝CCH＝CH(CH3)2等中的任一種。上述二苯乙烯類化合物在本發明中簡稱為化合物B。
另一方面，本發明還提供了上述化合物的製備方法。
本發明的二苯乙烯類化合物可以從植物中提取，也可以是通過合成或半合成得到。如由化合物A和化合物D經魏悌錫反應和脫保護基反應得到化合物B 魏悌錫試劑是由親核性的三苯基磷(C6H5)3P與滷代烷進行親核取代反應製得的磷鹽，再用強鹼例如苯基鋰處理除去α-氫而製得。醛、酮與魏悌錫試劑作用脫去一分子氧化三苯基磷生成烯烴，稱為魏悌錫反應。將3，5-取代的苯甲醛和酚羥基被保護的魏悌錫試劑溶於四氫呋喃，在丁基鋰存在的條件下，常溫下反應16-30小時，得到化合物B；其中魏悌錫試劑的酚羥基保護基為苄基(Bn)。
脫保護基反應在常溫下，將帶保護基苄基(Bn)的化合物和N，N-二甲基丙烯醯胺溶於二氯甲烷，反應1.5-3小時，得到化合物B。
其中，化合物D可以由化合物C合成 保護基反應將化合物C、苄基溴和碳酸鉀溶於丙酮，回流4小時，得到化合物D。
本發明的化合物B可用於製備抗腫瘤藥物。所述的腫瘤是腦瘤、肺癌、肝癌、乳腺癌、前列腺癌、胰腺癌、宮頸癌、胃癌、食道癌或者白血病，等等。
以MTT法進行抗腫瘤作用的篩選，結果顯示，本發明的二苯乙烯類化合物處理的腫瘤細胞系如人髓白血病細胞(HL60)、腦膠質瘤細胞(U87)、乳腺癌細胞(MCF-7)、肺癌細胞(H460)、人肝癌細胞(HepG2)、人前列腺細胞(PC3)、人結腸癌細胞(SW480)、人宮頸癌細胞(Hela)隨著用藥濃度增高與相應不加藥對照組相比細胞增殖活性分別下降了，說明化合物呈濃度依賴性抑制腫瘤細胞增殖。而正常人肝細胞(Lo2)及人胚腎細胞(HBK293)上細胞增殖活性未有統計學意義上變化，顯示出該化合物對正常細胞很少有毒性。上述細胞株均購自中科院上海細胞生物研究所。
本發明的化合物B可與市售或者常用的載體結合，用於預防或者治療腫瘤和癌症。所述的藥物可以為片劑或者針劑。
利用本發明化合物B，通過各種常規篩選方法，可篩選出與二苯乙烯類化合物發生相互作用的物質，如受體、抑制劑或拮抗劑等。
本發明的化合物B及其抑制劑、拮抗劑等，當在治療上進行施用(給藥)時，可提供不同的效果。通常，可將這些物質配製於無毒的、惰性的和藥學上可接受的水性載體介質中，其中pH通常約為5-8，較佳地pH約為6-8，儘管pH值可隨被配製物質的性質以及待治療的病症而有所變化。配製好的藥物組合物可以通過常規途徑進行給藥，其中包括(但並不限於)肌內、腹膜內、皮下、皮內、或局部給藥。
以本發明的化合物B為例，可以將其與合適的藥學上可接受的載體聯用。這類藥物組合物含有治療有效量的化合物和藥學上可接受的載體或賦形劑。這類載體包括(但並不限於)鹽水、緩衝液、葡萄糖、水、甘油、乙醇、及其組合。藥物製劑應與給藥方式相匹配。本發明的化合物B可以被製成針劑形式，例如用生理鹽水或含有葡萄糖和其他輔劑的水溶液通過常規方法進行製備。諸如片劑和膠囊之類的藥物組合物，可通過常規方法進行製備。藥物組合物如針劑、溶液、片劑和膠囊宜在無菌條件下製造。活性成分的給藥量是治療有效量，例如每天1μg/kg體重-約2000mg/kg體重。此外，本發明的化合物B還可與其他治療劑一起使用。
本發明的化合物B在製備抗腫瘤藥物中的應用中，可以是針劑或者片劑。
當本發明的化合物B被用作藥物時，可將治療有效劑量的該多肽施用於哺乳動物，其中該治療有效劑量通常至少約10微克/千克體重，而且在大多數情況下不超過約8毫克/千克體重，較佳地該劑量是約10微克/千克體重-約1毫克/千克體重。當然，具體劑量還應考慮給藥途徑、病人健康狀況等因素，這些都是熟練醫師技能範圍之內的。
本發明的優點經實驗證明，本發明的二苯乙烯類化合物為有效的抗腫瘤劑。本發明的製備方法簡單可靠，成本低，效率高，可進行工業化大生產，有利於推廣應用。
圖1為化合物Trans-4-[2-(3，5-二甲氧基苯基)乙烯基]-1，2-苯二醇的體外抗腫瘤試驗結果數據圖。
圖2為化合物Trans-4-[2-(3，5-二異戊烯基苯基)乙烯基]-1，2-苯二醇的體外抗腫瘤試驗結果數據圖。
具體實施例方式
以下通過具體的實施方式的實施例對本發明的內容作進一步詳細的說明。但不應將實施例理解為對本發明的限制。在不脫離本發明上述思想情況下，根據本領域普通技術知識和常規手段作出的各種替換手段或變更，均包含在本發明之內。
實施例1 Trans-4-[2-(3，5-二甲氧基苯基)乙烯基]-1，2-苯二醇(R＝R』＝H)進行核磁共振分析，結果如下表1 Trans-4-[2-(3，5-二甲氧基苯基)乙烯基]-1，2-苯二醇的核磁共振(1HNMR 500MHz，13CNMR 500MHz在CDCl3中)數據
從而確定了得到的化合物為Trans-4-[2-(3，5-二甲氧基苯基)乙烯基]-1，2-苯二醇。
實施例2 Trans-4-[2-(3，5-二甲氧基苯基)乙烯基]-1，2-苯二醇的體外抗腫瘤作用取對數期的腫瘤細胞，每孔3×104接種於96孔板上，12h後，棄上清，按一下分組給藥正常對照組和加藥組(濃度0-100μM)，每組設6個復孔，培養24h，棄上清，加入帶MTT的培養液50μl培養4h(0.5mg/mL)，加入100μl DMSO，振蕩1h，於酶標儀上570nm處測OD值。
結果顯示，加藥後，腫瘤細胞活性明顯下降，而且腫瘤細胞活性隨著藥物濃度的增加而降低。而正常人細胞系的細胞增殖活性未有統計學意義上變化，顯示出該化合物對正常細胞很少有毒性。圖1所示細胞為MCF-7(乳腺癌細胞)、U87(腦膠質瘤細胞)、H460(腫癌細胞)、PC3(人前列腺細胞)和HEK293(正常人胚腎細胞系)。
實施例3 Trans-4-[2-(3，5-二異戊烯基苯基)乙烯基]-1，2-苯二醇(R＝R』＝-CH2CH＝CH(CH3)2)的製備方法 a為苄基溴，K2CO3，丙酮，回流，4h，80％；b為NaBH4，MeOH，常溫，1h，96％；c為PBr3，四氫呋喃-甲苯，常溫，2h，三苯基磷，甲苯，回流，3h，78％；d為正丁基鋰，化合物E，四氫呋喃，常溫，24h，86％；三氯化鋁，N，N-二甲基丙烯醯胺，CH2Cl2，常溫，2h，57％。
製備方法(1)E的製備H(2g)與G(5.0g)的混合液中加入10mL的10％KOH溶液，常溫下反應48h，得到E(116mg，4.7％)。
(2)D的製備3(2g)與2(5.2mL)的丙酮混合液中加入9g的碳酸鈉，回流4小時，回收溶劑，得3，4-二苄氧基苯甲醛(3.9g)；將3，4-二苄氧基苯甲醛(3.5g)溶於甲醇，加入四氫硼鈉0.7g，常溫下攪拌1小時，後加入蒸餾水20mL，並用鹽酸酸化，二氯甲烷萃取，萃取液用飽和碳酸鈉溶液洗滌，揮幹溶劑得3，4-二苄氧基苯甲醇(3.2g)；3，4-二苄氧基苯甲醇(2.0g)溶於0℃5mL的無水四氫呋喃和15mL無水甲苯，滴加0.7mL的三溴化磷四氫呋喃(1mL)和甲苯(5mL)溶液，反應2小時後將反應也倒入冰水中，並用乙醚萃取，回收溶劑後得到的固體溶於甲苯並和三苯基磷反應，回流3小時過濾得到D(3.6g)。
(3)F的製備D(2g)的四氫呋喃溶液中加入3 mL的丁基鋰溶液，0℃反應1小時，加入E(500mg)的四氫呋喃溶液，常溫下反應24小時，回收溶劑，產物加入1mL的DMA，0℃下加入三氯化鋁1g，反應3小時，加入25mL 1M的鹽酸終止反應，用二氯甲烷萃取，洗滌、重結晶得F(365mg)。
實施例4 Trans-4-[2-(3，5-二異戊烯基苯基)乙烯基]-1，2-苯二醇的體外抗腫瘤作用取對數期的腫瘤細胞，每孔3×104接種於96孔板上，12h後，棄上清，按以下分組給藥正常對照組和加藥組(濃度0-100μM)，每組設6個復孔，培養24h，棄上清，加入帶MTT的培養液50μl培養4h(0.5mg/mL)，加入100μl DMSO，振蕩1h，於酶標儀上570nm處測OD值。
結果顯示，加藥後，腫瘤細胞活性明顯下降，而且腫瘤細胞活性隨著藥物濃度的增加而降低。而正常人細胞系的細胞增殖活性未有統計學意義上變化，顯示出該化合物對正常細胞很少有毒性。圖2所示細胞為HL60(人髓白血病細胞)、HepG2(人肝癌細胞)、Hela(人宮頸癌細胞)、SW480(人結腸癌細胞)和LO2(正常人肝細胞)。所述細胞均購自中科院上海細胞生物研究所。
權利要求
1.一種具有抗腫瘤活性的二苯乙烯類化合物，其特徵在於，該化合物的結構式如下所示 ，其中，R、R』分別為-H、-CH3、-CH2CH3、-CH2CH＝C(CH3)2、-OH、-OCH3、-NH2、O＝CCH＝CH(CH3)2中的任一種。
2.根據權利要求1所述化合物的製備方法，其特徵在，化合物A和化合物D經魏悌錫反應和脫保護基反應得到化合物B
3.根據權利要求2所述的製備方法，其特徵在於化合物D由化合物C合成
4.根據權利要求1所述化合物在製備抗腫瘤藥物中的應用。
5.根據權利要求4所述的應用，其特徵在於，所述的腫瘤是腦瘤、肺癌、肝癌、乳腺癌、前列腺癌、胰腺癌、宮頸癌、胃癌、食道癌或者白血病。
全文摘要
本發明屬於植物藥用成分和抗腫瘤化合物領域，一種具有抗腫瘤活性的二苯乙烯類化合物及其製備方法。人們常常談癌色變，這是因為癌症已日趨成為人類的第一位死因，但是到目前為止又缺乏特效藥預防和治療癌症或者腫瘤。本發明公開了一種具有抗腫瘤活性的二苯乙烯類化合物，該化合物的結構式如圖所示，其中，R、R′分別為－H、－CH
文檔編號C07C37/00GK101070274SQ20071004199
公開日2007年11月14日 申請日期2007年6月14日 優先權日2007年6月14日
發明者朱煥章, 馬忠俊 申請人:復旦大學