血液處理方法及其裝置、血紅蛋白類測定方法及其裝置的製作方法

2023-12-06 13:37:46

專利名稱：血液處理方法及其裝置、血紅蛋白類測定方法及其裝置的製作方法
技術領域：
本發明涉及用於破壞紅細胞膜的血液處理方法以及血紅蛋白類測定。
背景技術：
目前，在臨床檢查領域，即時檢驗(以下略稱為POCT)倍受矚目。所謂POCT是指在醫療現場顯示臨床檢查，表示最重視從檢體採樣到出結果的時間的檢查的總稱。因此，一般在臨床檢查領域，要求操作的簡便性、迅速判定、以及低價格。這當然在血液中成分的測定中也不例外。
血液可以大致分為細胞成分和液體成分。在細胞成分中包括紅細胞、白細胞以及血小板。液體成分包括血漿。
在血液檢體樣品中，紅細胞與全血的容積比(以後稱之為紅細胞壓積值或Ht值)是一個重要的因子。由於Ht值根據貧血的程度而變化，因此可以作為用於測定貧血的程度的尺度。另外，由於血液檢體樣品的物性(粘度)在測定中受到影響而因此有必要進行其它測定值的補正，Ht值也可以作為關於這種必要性的尺度。
紅細胞大致為1.1×1010個，佔有1ml的體積，每一個的容積大致為90μm3。作為紅細胞的最大成分的水，在100ml的紅細胞中大致佔63g。在紅細胞中剩餘大致34g的大部分可以認為是血紅蛋白類。在Ht值為45％時，1L血液中的血紅蛋白類的量大致為150g。即，血紅蛋白類在血液中的濃度為150g/l，是生物體內含量最大的蛋白質。
人血紅蛋白(以後稱為Hb)是與α鏈以及非α鏈(β、γ、δ鏈)的球蛋白結合併締合的四聚物。在健康人的Hb中存在大致90％的HbA(α2β2)、大致3％的HbA2(α2δ2)、大致1％的HbF(α2γ2)以及大致百分之幾的HbA1(糖結合的HbA)。另外，在上述HbA1中含有HbA1a、HbA1b以及HbA1c。
以往，檢查上述Hb的組成比被認為是臨床化學中重要的指標。例如，上述HbF的值在顯示基準範圍0.3～1.3％以外的異常值時，被認為懷疑有遺傳性高HbF症、慢性骨髓性白血病、急性骨髓性白血病等。另外，當上述HbA2的測定值顯示基準範圍2～3.5％以外的異常值時，被認為懷疑有不穩定性Hb症或惡性貧血。
另外，近年來，作為三大成人疾病之一的糖尿病成為了問題。因此，作為用於控制糖尿病患者的1～3個月間的比較長時間的血糖的標準，HbA1或HbA1c作為被檢查項目倍受矚目。並且正在開發HbA1c的測定裝置。
血紅蛋白類，例如可以利用等電點電泳法、離子交換層析法、膠乳免疫凝集法等測定。
與血液檢體樣品中的其它測定對象不同，血紅蛋白類由於存在於紅細胞中，因此要進行測定就有必要使產生溶血。作為「溶血」是指紅細胞膜被破壞、血紅蛋白類排出紅細胞外的現象。更具體地說，紅細胞的大小受到相對於紅細胞的滲透壓的影響。紅細胞在鹽濃度高於生理鹽水(0.9％NaCl)鹽溶液中收縮。另一方面，在鹽濃度低於生理鹽水(0.9％NaCl)鹽溶液中，紅細胞膨脹。在這種紅細胞的收縮以及膨脹的過程中，紅細胞一旦被破壞，則血紅蛋白類排出紅細胞外。在當血液完全被溶血的情況下，在Ht值45％時，血紅蛋白濃度大致為150g/L。
血紅蛋白類測定結果是以相對於全部血紅蛋白量的比例來表示。因此，不僅僅要測定測定對象的血紅蛋白類的量，還要測定全部血紅蛋白量。如上述，全部血紅蛋白量因人而異，但是通常在血液中大致為150g/L。對於血紅蛋白類的測定，該濃度是不利於測定的非常高的濃度。血紅蛋白類，由於具有在長波長側含有吸收波長的紅色色素，因此，只要高濃度，就很容易妨礙血紅蛋白類的測定。
例如，在通過免疫層析法測定血紅蛋白類時，作為免疫反應的其中一個特性而產生的抗原過剩量區域的測定值低下，成為操作失誤的原因。另外，由於大量血紅蛋白類造成的血液檢體樣品的粘度的增加，則產生免疫層析裝置的固相基質中的血液檢體樣品的展開速度或者變慢、或變得完全不展開的不良現象。因此，例如特開平3-46566號公報中公開的那樣，為了準確測定血紅蛋白類，在溶血操作後有必要用於稀釋血液檢體樣品的很多操作。即，為了測定血紅蛋白類，需要很多用於處理血液檢體樣品的操作。

發明內容
本發明是鑑於上述事情而完成的，涉及血液處理方法、血液處理裝置、血紅蛋白類測定方法以及血紅蛋白類測定裝置，尤其是目的在於提供能夠更簡便地對以血紅蛋白類為代表的紅細胞中成分進行測定的方法以及裝置。
本發明的血液處理方法，包括準備含有紅細胞的血液檢體樣品及溶血劑的工序(a)、通過混合上述血液檢體樣品與上述溶血劑而調製混合樣品的工序(b)，上述溶血劑是破壞紅細胞膜的固體藥劑。
在以往的方法中，為了測定以血紅蛋白類為代表的紅細胞中的成分，需要用於處理血液檢體樣品的很多操作。但是，若使用本發明的血液處理方法，在測定紅細胞中的成分時，在溶血操作後不需要用於稀釋血液檢體樣品的很多操作。因此，根據本發明的血液處理方法，可以更簡便地對紅細胞中的成分進行測定。
在上述工序(b)中，優選在上述混合樣品中殘存血細胞成分。
上述溶血劑可以是改變相對於紅細胞膜的滲透壓的藥劑。
上述溶血劑可以是無機鹽。
上述混合樣品中的上述無機鹽的濃度優選在0.05～10％(w/v)的範圍內。
本發明的血紅蛋白類的測定方法，包括準備含有紅細胞的血液檢體樣品及溶血劑的工序(a)、通過混合血液檢體樣品與溶血劑而調製混合樣品的工序(b)、測定上述混合樣品的血漿中的血紅蛋白類的工序(c)，上述溶血劑為破壞紅細胞膜的固體藥劑。
在以往的方法中，為了測定血紅蛋白類，需要用於處理血液檢體樣品的很多操作。但是，若使用本發明的血紅蛋白類測定方法，在測定血紅蛋白類時，在溶血操作後不需要用於稀釋血液檢體樣品的很多操作。因此，根據本發明的血紅蛋白類測定方法，可以更簡便地進行測定。
在上述工序(c)中，作為測定上述混和樣品中含有的血紅蛋白類的方法，可以使用免疫層析法、免疫集中法、固相酶免疫測定法、比色玻片法、以及電極法玻片法中的任意一種。
在上述工序(c)中，可以至少測定2種血紅蛋白。
上述的至少兩種血紅蛋白可以是血紅蛋白與HbAlc的組合。
上述血紅蛋白類可以是糖化血紅蛋白。
本發明的血液處理裝置，具備基材與用於破壞紅細胞膜的固體溶血劑，在形成含有紅細胞的血液檢體樣品與上述溶血劑的混和樣品時，在上述基材上負載的所述固體溶血劑的量，是使血細胞成分在上述混和樣品中有殘存的量。
根據本發明的血紅蛋白類測定裝置，可以更簡便地進行紅細胞中成分的測定。
本發明的血紅蛋白類的測定裝置，是用於測定含有紅細胞的血液檢體樣品中的血紅蛋白類的血紅蛋白類測定裝置，具備具有上述血液檢體樣品的添加部的基材、用於破壞紅細胞膜的溶血劑、與上述血紅蛋白類特異結合的檢測物質、與上述血紅蛋白類特異結合的固定化物質，在上述基材上負載的所述固體溶血劑的量，是使血細胞成分在上述混和樣品中有殘存的量，上述溶血劑、上述檢測物質、以及上述固定化物質分別負載在上述基材上，從靠近上述基材的上述血液檢體樣品的添加部依次配置上述溶血劑、上述檢測物質、上述固定化物質。
根據本發明的血紅蛋白類測定裝置，可以更簡便地進行血紅蛋白類的測定。
本發明的另一血紅蛋白類的測定裝置，是用於測定含有紅細胞的血液檢體樣品中的血紅蛋白類的血紅蛋白類測定裝置，具備基板；設置於上述基板上的上述血液檢體樣品的添加部；溶血層，設置於上述基板上，含有用於破壞紅細胞膜的固體的溶血劑，用於控制上述血液檢體樣品的溶血；標記層，設置於上述基板上，含有與血紅蛋白類特異結合的檢測物質，用於標記上述血紅蛋白類；檢測層，設置於上述基板上，含有與上述血紅蛋白類特異結合的固定化試劑，用於檢測上述血紅蛋白類，上述血液檢體樣品可以在上述溶血層、上述標記層以及上述檢測層之間移動。
根據本發明的血紅蛋白類測定裝置，可以更簡便地進行血紅蛋白類測定。
也可以進一步設置在上述血液檢體樣品溶血後用於除去紅細胞殘留物的層。
上述溶血層、上述標記層以及上述檢測層可以配置成單一的層。


圖1是本發明的血液處理方法的流程圖。
圖2是表示溶血率表示式的圖。
圖3(a)以及圖3(b)是表示本實施方式的血液處理裝置的圖。
圖4是表示本發明的一例單層式血紅蛋白類測定裝置的圖。
圖5是表示本發明的一例多層式血紅蛋白類測定裝置的剖面圖。
圖6是表示本發明的一實施例的KCl濃度(溶血劑的添加量)與光透過率的圖。
圖7是表示本發明的一實施例的KCl濃度(溶血劑的添加量)與Hb濃度以及HbAlc之間關係圖。
圖8是表示本發明的一實施例的KCl量的濃度(溶血劑的添加量)與610nm的反射吸光度之間的關係圖。
圖9是表示本發明一實施例的Hb測定用裝置的標準曲線的圖。
圖10是表示本發明一實施例的HbA1c測定用裝置的標準曲線的圖。
圖11是表示用本發明的一實施例的測定裝置測定4.0％HbA1c、5.4％HbA1c、10.4％HbA1c時的結果的圖。
圖12是表示從基於本發明一實施例裝置的4.0％HbA1c、5.4％HbA1c、10.4％HbA1c的測定值，利用標準曲線進行濃度換算後的結果圖。
具體實施例方式
以下邊參照圖邊說明本發明實施方式。
(實施方式1)
在本實施方式中，邊參照圖邊說明本發明的血液處理方法。圖1是本發明血液處理方法的流程圖。
如圖1所示，本實施方式的血液處理方法，包括準備血液檢體樣品與溶血劑的工序St1以及通過混和血液檢體樣品與溶血劑而調製混和樣品的工序St2。這裡的溶血劑是破壞紅細胞膜的固體藥劑。
「血液檢體樣品」是指從含人在內的被檢體通過普通的採血法(例如靜脈注射或刺血針)而採取的血液或在測定以前保存的血液。
溶血劑使用破壞紅細胞膜的固體藥劑。例如優選通過冷凍乾燥調製成粉末狀，使大致不含水分。
另外，本實施方式的血液處理方法，優選在血紅蛋白類的測定中使用。即，本發明的血紅蛋白類測定方法，不僅包括如圖1所示的準備血液檢體樣品與溶血劑的工序St1以及通過混和血液檢體樣品與溶血劑而調製混和樣品的工序St2，還含有對混和樣品的血漿中含有的血紅蛋白類進行測定的工序。這裡的溶血劑是破壞紅細胞膜的固體藥劑。
根據上述實施方式的血液處理方法，本技術領域的普通技術人員可以通過周知的方法定量測定混和樣品的血漿中含有的血紅蛋白類。
如圖1所示，在工序St2中，若通過混和血液檢體樣品與溶血劑而調製混和樣品時，則血液檢體樣品中紅細胞的紅細胞膜被破壞，紅細胞中的成分(以血紅蛋白類為代表)排出紅細胞外(即產生溶血)。因此，能夠測定紅細胞中成分(以血紅蛋白類為代表)。
如上述，為了測定以血紅蛋白類為代表的紅細胞中的成分，需要很多用於處理血液檢體樣品的很多操作。但是，若利用本實施方式的血液處理方法，在測定紅細胞中的成分時，就不需要在溶血操作後用於稀釋血液檢體樣品的很多操作。因此，根據本實施方式的血液處理方法，可以更簡便地進行紅細胞中的成分測定。
在以免疫學方法測定血紅蛋白類時，若要進行完全溶血，則由於濃度非常高，因此進入抗原過剩區域，也可能使測定靈敏度下降。因此，在工序St2中，優選在混和樣品中殘存血細胞成分，即對血液檢體樣品進行部分溶血。
所謂「對血液檢體樣品進行部分溶血」，是指對低於完全溶血體積的紅細胞進行溶血。例如，在Ht值45％的血液1L時，對體積低於450ml的紅細胞進行溶血。與此相對，所謂「完全溶血」是指實質上對全部紅細胞體積的紅細胞進行溶血。例如，在Ht值45％的血液1L時，對體積大致450ml的紅細胞進行溶血。通過「進行控制使對血液檢體樣品進行部分溶血」，可以使樣品中部分紅細胞膜被破壞，使其中的血紅蛋白類溶出。此時，血漿中的血紅蛋白類的濃度也比完全溶血時低。例如，在Ht值45％的血液1L中使相當於1ml體積的紅細胞溶血時，在血漿550ml中血紅蛋白類0.34g以及水0.63g被溶出。因此，由於在血漿水550.63ml中血紅蛋白類被溶解0.34g，因此血紅蛋白類濃度變為0.62g/L。完全溶血時的全部血紅蛋白濃度為150g/L。在本實施方式的血液處理方法中，無需緩衝液等而通過溶血，就可以獲得大致相當於完全溶血時的250倍的稀釋效果。
如在背景技術欄所述那樣，Ht值是相對於全血的紅細胞的容積比。因此通過Ht值就可以獲得紅細胞的量以及全部血紅蛋白的量。需要說明的是，Ht值可以通過包括毛細管法以及Wintrobe法在內的周知的方法測定。在用毛細管法測定時，成人男性的Ht值為36～48％、女性為34～43％。在幼兒中，新生兒(臍帶血)44～64％、三個月為32～44％，一歲兒為36～44％、10～12歲為37～44％(參照Dacie等，臨床檢查法提要，改訂31版，金原出版株式會社)。因此，關於血紅蛋白測定，可以考慮被檢體的性別以及年齡對Ht值進行設定。
全血紅蛋白濃度在Ht值等中存在個人差異，但是幾乎所有的人都具有多於100mg/ml的Hb(男性大致為130～170mg/ml、女性大致為120～150mg/ml)。根據以往的測定機器，不進行稀釋，不能測定超過100mg/ml濃度的Hb。因此，基於部分溶血的Hb濃度優選在100mg/ml以下。
溶血的控制，例如可以通過改變溶血劑的量來進行。例如，在1.5mg或7.5mg的氯化鉀血液中添加1.5ml血液時，全血紅蛋白濃度，前者變為6.0g/L，後者變為25g/L。這樣，若溶血劑的量變大，則溶血的比例也變大。因此，對達成血漿中最適血紅蛋白濃度(最適溶血率)的溶血劑的量的確定進行簡單闡述。
首先，以任意量的溶血劑使血液檢體樣品溶血，通過分離作業取出上清液。然後，測定上清液中的血紅蛋白濃度。接著，確定溶血劑的添加量與血紅蛋白濃度之間的關係。最後，根據上述關係來確定達到血漿中的最適血紅蛋白濃度的溶血劑的添加量。
更具體地說，通過進行與後述實施例2中記載的操作大致相同的操作，根據獲得的溶血劑的量與血紅蛋白濃度之間的關係圖來確定。
血漿中最適血紅蛋白濃度(最適溶血率)，由於依賴於其測定方法，因此添加的溶血劑的量也依賴於測定方法。另外，在本說明書中，溶血率用圖2所示式來表示。
在Ht值為40～50％的情況、血紅蛋白類的測定方法是吸光法的情況下，優選添加的溶血劑的量是使溶血率變為0.01～1％(血紅蛋白濃度0.01～1mg/ml)的量，在測定方法是免疫層析法時，優選添加的溶血劑的量是使溶血率變為0.0001～0.1％(血紅蛋白濃度0.1～10mg/dl)的量。
在以吸光法進行測定時，由於Hb的最大摩爾吸光係數大致為105M-1，因此溶血劑的添加量優選是使血紅蛋白濃度變為0.1～1mg/ml(吸光度變為大致0.1～2的濃度)的量。
在以免疫層析法進行測定時，溶血劑的添加量取決於依賴該免疫層析法中使用的抗體的性能(結合親和力等)的血紅蛋白濃度。
例如，在作為溶血劑使用氯化鉀時，一般相對於血液檢體樣品的全血量的溶血劑的添加比例(濃度)，優選在0.05～10％(w/v)(在本說明書中(w/v)的單位取g/ml)的範圍內。尤其是相對於血液檢體樣品的全容量的溶血劑的添加比例(濃度)，在吸光法的情況下優選在0.05～1％(w/v)的範圍內，在免疫層析法的情況下，雖然在一定程度上依賴於層析裝置的大小、或負載在層析裝置中的固定化抗體、標記抗體的試劑量等，但是優選在0.05～3％(w/v)的範圍內。尤其在5mm×10cm的層析裝置時，優選在0.1～1％((w/v)的範圍內。
在使用其它鹽時，也可以添加與氯化鉀情況下的濃度大致相等的濃度。另外，例如，也可以使用月桂酸鈉等的表面活性劑或如抗紅細胞抗體的直接作用於紅細胞膜的藥劑。在這種情況下，同樣也可以利用上述全血紅蛋白濃度的測定方法，在確定為了達成血漿中最適血紅蛋白濃度所必須得溶血劑的量後，利用確定量的溶血劑，對血液檢體樣品進行部分溶血。
一旦確定為了達成血漿中的最適血紅蛋白濃度所需的溶血劑的量，控制使用該量的溶血劑，以便使血液檢體樣品部分溶血。然後，為了測定血液檢體樣品中的全血紅蛋白濃度，目前使用臨床檢查中所用的任意血紅蛋白定量法。作為這種血紅蛋白定量法，例如可以舉出氰化高鐵血紅蛋白法、氧化血紅蛋白法、以及SLS-血紅蛋白法(例如參照臨床檢查法提要，改訂31版、金原初版株式會社)。在上述血紅蛋白定量法中所用的專用體外診斷藥有市售品。
若根據本實施方式的血液處理方法以及血紅蛋白類測定方法，在測定血紅蛋白類時，可以省略以往必須的在溶血操作後用於稀釋血液檢體試劑的很多操作，可以簡便地實現測定中最適的血紅蛋白濃度。
在本實施方式中，作為溶血劑，使用使相對於紅細胞膜的滲透壓發生變化的藥劑。紅細胞在鹽濃度高於生理鹽水(0.9％NaCl)鹽溶液中收縮。另一方面，在鹽濃度低於生理鹽水(0.9％NaCl)鹽溶液中，紅細胞膨脹。通過這種紅細胞的收縮以及膨脹，紅細胞被破壞，血紅蛋白類排出紅細胞外。例如可以舉出無機鹽(例如氯化鉀、氯化鈉、或者氟化鈉等)。尤其優選氯化鉀。如上所述，溶血是在將紅細胞置於生理條件即0.9％NaCl以外的環境下而發生。因此，在上述血液檢體樣品中添加上述藥劑的量是使血液中的鹽濃度在這種條件下(即除0.9％NaCl或與之等價的鹽濃度之外的濃度)並且在血漿中溶出所需量的血紅蛋白的濃度或量。例如，對於血液量50μl，若使用250μg的氯化鉀，則溶血率大致為2％。
另外，溶血劑以固體使用。作為溶血劑，可以使用首先準備含有所需量溶血性試劑的溶液，然後通過冷凍乾燥該溶液而得到的固體。另外，例如可以使用首先在含有所需量的溶血性試劑的溶液中含浸基材(膜等)，然後通過冷凍乾燥而負載在基材上的固體。
血液檢體樣品，在開始測定血紅蛋白類之前用溶血劑處理。或在測定血紅蛋白類的同時用溶血劑處理血液檢體樣品。無論哪一種情況，通過溶血而溶出的血紅蛋白類，可以通過以下詳細敘述的該領域所用的手段或技術來測定。作為實施這種方法的方式，在溶血劑為溶液狀態時，在測定血液檢體樣品中血紅蛋白類之前，向血液檢體樣品中添加溶血劑。在溶血劑以固體而負載在基材上時，可以將血液檢體樣品導入基材後供給測定機構，或將這種基材供給測定機構時將樣品導入基材。
作為被測定的血紅蛋白類，可以舉出Hb、HbA(α2β2)、HbA2(α2δ2)、HbF(α2γ2)、以及HbA1(HbA與糖的結合體)，以及HbA1被進一步分類的HbA1a、HbA1b以及HbA1c。這裡Hb是指含有上述血紅蛋白類的全血紅蛋白。HbA1以及該HbA1被進一步分類的HbA1a、HbA1b以及HbA1c被稱為糖基化血紅蛋白或「糖化血紅蛋白」，具有相同的一維結構，但是β鏈的N末端纈氨酸的氨基被糖或其衍生物封閉。在本說明書中使用的用語「糖化血紅蛋白」包括HbA1以及該HbA1被進一步分類的HbA1a、HbA1b以及HbA1c。尤其HbA1c是葡萄糖非酶結合的糖化血紅蛋白。
在臨床化學上檢查Hb的組成比是非常重要的。為了臨床意義，也可以測定通過上述處理的血液檢體樣品中的至少兩種血紅蛋白類。
尤其，在本實施方式中通過控制部分溶血，可以將血液檢體樣品中的Hb(全血紅蛋白)抑制為低濃度。因此，測定的血紅蛋白類的濃度不是絕對值。即，HbA、HbA2、HbF、HbA與糖結合的HbA1、以及HbA1被進一步分類的HbA1a、HbA1b以及HbA1c等的測定值，是以相對於全Hb量的比例表示。並且，相對於這些全Hb量的比例，由於因溶血率而變化，因此，可以充分地成為本發明的測定對象。另外，血紅蛋白濃度的絕對值，與溶血率存在相關關係，因此也可以從測定值進行反算。
糖化血紅蛋白(尤其HbA1或HbA1c)，作為糖尿病患者的血糖控制指標，更詳細地說，作為糖尿病患者的長期(主要1～3個月)的血糖控制指標而倍受矚目。例如，正常時，HbA1是Hb(全血紅蛋白)的7～8％，正常時，HbA1c是Hb(全血紅蛋白)的6％以下(例如4.7～5.7％)。但是，這些糖化的血紅蛋白，在糖尿病患者中有所增加。例如HbA1c達到Hb的20％。因此，通過測定糖化血紅蛋白，可以將本實施方式的測定方法很好地應用於糖尿病的診斷、治療等。另外，根據本發明的測定方法，也可以測定Hb(全血紅蛋白)以及HbA1c。
另外，根據本實施方式的測定方法，也可以將HbF作為相對於Hb的比例進行測定。相對於Hb的HbF的比例，在正常成年中為0.3～1.3％。相對於Hb的HbF的比例，通常在遺傳性高胎兒血紅蛋白血症、慢性骨髓性白血病、凡科尼貧血、紅白血病、發作性夜間血紅蛋白尿症、不應性貧血、妊娠、葡萄胎、地中海貧血(β、δβ)、不穩定血紅蛋白症中，很少在再生不良性貧血、白血病、多血症(紅細胞增加症)、骨髓纖維症、惡性腫瘤、甲狀腺中毒症中，比該標準範圍有所增加。因此，也可以在上述疾病的診斷中利用本實施方式的測定方法。
另外，根據本實施方式的測定方法，也可以將HbA2作為相對於Hb的比例進行測定。相對於Hb的HbA2的比例，在正常人中為2～3.5％。在β地中海貧血、不穩定血紅蛋白症、鐮狀紅細胞性貧血異型、巨成紅細胞性貧血、甲狀腺機能亢進症中，相對於Hb的HbA2的比例均比標準範圍有所增加，另一方面，在α-、δ-、δβ-地中海貧血、遺傳性高胎兒血色素症、缺鐵性貧血、鐵芽球性貧血中，比標準範圍有所減少。因此，也可以在上述疾病的診斷中利用本實施方式的測定方法。
上述的Hb組成成分，由於等電點不同，因此可以通過離子交換層析法進行定量地分離。離子交換層析法，可以使用從CYPRESS社購入的柱子(商品名PolyCATATM)進行實施，但是，只要是具有與該柱相同的分離能力，可以使用市售的任何柱子。上述的Hb組成成分，也可以使用能夠分別識別它們成分的抗體，利用免疫學方法進行測定。作為免疫學方法，例如可以舉出免疫層析法、免疫集中法、固相酶免疫測定法(ELISA法)、比色玻片法、以及電極法玻片法等。
全血紅蛋白濃度，如上所述，可以使用目前臨床檢查中所用的任意的血紅蛋白定量法。作為這種血紅蛋白定量法，可以舉出氰化高鐵血紅蛋白法、氧化血紅蛋白法、以及SLS-血紅蛋白法(例如參照臨床檢查法提要，改訂31版、金原初版株式會社)。在上述血紅蛋白定量法中所用的專用體外診斷藥有市售品。
另外，血紅蛋白類的測定，可以根據基於乾式化學法的測定方法進行。所謂基於乾式化學法的測定方法，是指在以乾燥狀態負載試劑的固相基質中添加液狀樣品(通常基於點接)，使在該基質上與試劑反應，然後通過檢測該反應而測定樣品中的被檢物質的方法。基於乾式化學的測定方法，由於是迅速、簡便並且精度良好的測定方法，因此在日常臨床檢查中可以很好地使用。作為基於乾式化學的測定方法，例如可以舉出免疫層析法、免疫集中法、固相酶免疫測定法等的免疫法；比色玻片法；以及電極法玻片法。關於乾式化學，例如被公開在「臨床病理，乾式化學·簡易檢查的新展開(日本臨床病理學會集編、平成9年11月發行)」中。
(實施方式2)在本實施方式中，參照

可以在上述實施方式1中所述的血液處理方法以及血紅蛋白類測定方法中使用的血液處理裝置。圖3(a)以及圖3(b)是表示本實施方式的血液處理裝置的圖。
如圖3(a)所示，本實施方式的血液處理裝置10a，具備供給血液檢體樣品的基材11和負載於基材11上的對血液檢體樣品進行部分溶血的量的溶血劑(未圖示)。另外，溶血劑為破壞紅細胞膜的固體藥劑。溶血劑首先以溶液狀態添加在基材上，然後進行冷凍乾燥，從而以乾燥狀態負載於基材上。優選溶血劑在能夠與血液檢體樣品接觸的區域，以乾燥狀態負載於基材上。
作為供給血液檢體樣品的基材11，可以是從用於使血液檢體樣品以點狀接觸的平版狀態(不溶性單層基材(例如THERALIZA(Ames)、試紙、免疫層析儀(plastic card型)等)或多層基材(例如EKUTAKEM(Kodak)、DRYKEM(富士)等)到裝樣品液體的容器形態(例如小玻璃瓶、試管、安瓶、shino-test、離心旋轉器、piccolo等)的各種基材。在本實施方式的裝置中所用的基材，可以使用紙巾(例如leedcookingpaper(註冊商標)的紙漿無紡布)、網眼布帛(例如紗布綿布帛)、以及玻璃纖維濾紙式的能夠吸收並保持液體的材料而製作。
作為用於測定血紅蛋白類的機構，可以舉出基於離子交換層析法或免疫學的方法(例如膠乳免疫凝集法)的測定機構。
另外，可以代替圖3(a)所示的血液處理裝置10a，而使用圖3(b)所示的血液處理裝置10b。在血液處理裝置10b中使用的基材11，具有側面和底面(未圖示)，成為具備開口部13的適用於測定機構的容器12。此時，溶血劑以乾燥狀態被負載在容器中的能夠與血液檢體樣品接觸的區域(例如容器12內的底部以及側面的表面等(這些可以根據測定的血液檢體樣品容積進行適宜選擇))。血液處理裝置10b，在負載溶血劑的容器12內可以在投入血液檢體樣品後導入測定手段中，也可以將血液檢體樣品投入容器12內。另外，也可以以間歇式或連續式將血液檢體樣品導入容器內。
如背景技術欄所述那樣，為了測定血紅蛋白類需要很多用於處理血液檢體樣品的操作。
尤其，在以往為了測定HbA1c，使用基於離子交換層析法以及膠乳免疫凝集法的測定原理的自動化機器。血液中大致150g/l的全血紅蛋白量是用上述以往的自動化機器進行測定中非常高的濃度。因此，一般來說在上述自動化機器中，嚴格設定為對血液檢體樣品進行完全溶血的階段、將完全溶血後的樣品稀釋至可以獲得最適測定結果的濃度的階段、以及根據上述測定原理測定稀釋後的樣品的階段。作為代表的HbA1c專用測定機器，可以舉出TOSO制的Alc2.2以及BIOER制的DLS2000。前者是根據離子交換層析法原理，後者是基於膠乳免疫凝集阻止法。這些機器中的血液檢體樣品的處理方法，在完全溶血階段和稀釋階段被自動化這一點是一致的。如上述的自動化機器多使用於臨床檢查領域，但是為了對各種操作進行自動化，機器規模大並且價錢高。
這樣，在血紅蛋白類的測定中，使用上述的處理操作被自動化的裝置時，成本變高，或在不使用這種裝置時，要基於很多階段操作，檢查變得麻煩。另外，在以免疫學方法測定血紅蛋白類時，一旦進行完全溶血，則濃度變得非常高，因此進入抗原過剩區域，有時降低測定靈敏度。
但是，若使用本實施方式的血液處理裝置10a，僅通過在基材11上供給血液檢體樣品並設置於測定手段，就能夠迅速開始紅細胞內的成分的測定。另外，若使用本實施方式的血液處理裝置10b，僅通過在容器12內投入血液檢體樣品並將容器12設置於測定機構，就能夠迅速開始紅細胞內的成分測定。
(實施方式3)在本實施方式中，對用於通過乾式化學的測定方法測定血液檢體樣品中的血紅蛋白類的裝置(以下稱為血紅蛋白類測定裝置)進行說明。血紅蛋白類測定裝置包括對血液檢體樣品進行部分溶血的量的溶血劑、與血紅蛋白類特異結合的能夠溶出的檢測物質、與血紅蛋白類特異結合的固定化物質。
這裡使用的「能夠部分溶血的量的溶血劑」與上述實施方式1中敘述的相同。
上述檢測物質是與測定對象的血紅蛋白類特異結合的被標記的物質。這種標記在該技術領域中是公知的，例如膠質金、酶(例如西洋辣根過氧化物酶、葡萄氧化酶)、放射性同位素(例如碘(125I、121I)、碳(14C)、硫(35S)、氚(3H)、銦(112In)以及鎝(99mTc))、螢光標記(例如螢光素、若丹明)以及生物素。這種標記可以通過結合在相對於測定對象的血紅蛋白類的抗體而形成檢測物質。只要與測定對象的血紅蛋白類結合，可以使用任何抗體。抗體可以是單克隆抗體也可以是多克隆抗體。優選單克隆抗體。
固定化物質可以是與測定對象的血紅蛋白類特異結合的任意物質。作為這種物質，在使用免疫學方法時，是相對於測定對象的血紅蛋白類的單克隆抗體。優選對與在上述檢測物質中使用的抗體的抗原表位不同的抗原表位反應的單克隆抗體。
在本實施方式的血紅蛋白類測定裝置中，溶血劑、檢測物質、以及固定化物質，在從裝置的血液檢體樣品的添加部位開始依次以乾燥狀態被負載。
因此，若根據本實施方式的血紅蛋白類測定裝置，添加於裝置的血液檢體樣品，邊在負載有溶血劑、檢測物質、以及固定化物質的層間移動，邊進行基於溶血的血紅蛋白溶出至溶出的血紅蛋白的測定。
在本實施方式的血紅蛋白類測定裝置中，溶血劑，例如為了負載在基材上，在浸漬在層中後被冷凍乾燥。溶血劑由於通過與添加的血液接觸而反應，因此優選在整個基材上都含有溶血劑，以便不用預先決定添加血液的部位而可以測定。當然，此時，在整個基材上含有的溶血劑的量，是使溶出後的血紅蛋白類在血漿中濃度與完全溶血相比較低的濃度的量。
含有溶出後的血紅蛋白類的血液檢體樣品，一旦在負載有檢測物質的層中移動，則負載於該層的檢測物質溶出，溶出的血紅蛋白類與該溶出的檢測物質發生特異反應。因此，檢測物質雖然在不使用裝置的狀態下以乾燥狀態被負載於層中並形成固相，但是在遇著溶液時，能夠在該溶液中溶出。例如，為了負載於這種層中，可以將檢測物質含浸在層中後進行冷凍乾燥。
與檢測物質結合的血紅蛋白類，與負載於基材(固相基質)中的固定化物質結合。固相基質中的檢測物質，通過檢測血紅蛋白類以及固定化物質的夾層特異反應，可以測定血液檢體樣品中的血紅蛋白類的量。作為檢測場所的固相基質，可以使用通常免疫測定等中使用的基質材料(例如纖維素、瓊脂糖、葡聚糖、聚苯乙烯等)。該固相基質也可以是膠片、試紙以及試劑片。
根據基於乾式化學的測定方法的血紅蛋白類測定裝置，可以是單層方式也可以是多層方式。無論是單層方式還是多層方式，一旦使靠近血液檢體樣品的添加部位的一方作為上遊，則從上遊到下遊，依次負載溶血劑、檢測物質以及固定化物質。
在單層方式中，如圖4所示，通過溶血劑控制血液檢體樣品的溶血的層(本說明書中以下也稱為溶血層)、通過檢測物質標記血紅蛋白類的層(本說明書中以下也稱為標記層)、以及檢測結合在固定化試劑中的血紅蛋白類的層(本說明書中以下也稱為檢測層)被配置在單一(相同)層中。在單層方式中，溶血劑、檢測物質以及固定化物質，從添加血液檢體樣品的部分A側開始依次負載在可以作為血紅蛋白類檢測場所的基材(固相基質)41上。固相基質41可以使用通常免疫測定等中使用的基質材料(例如硝酸纖維素薄膜)。該固形基質還可以是膠片、試紙以及試驗片。
通過這種配置，添加的血液檢體樣品在固相基質上展開的過程中，首先最初與溶血劑接觸並對血液進行部分溶血。然後，基於部分溶血的血漿水中的血紅蛋白類與能夠溶出的檢測物質特異結合。接著血紅蛋白類-檢測物質的複合體育固定化試劑特異結合，生成檢測物質-血紅蛋白類-固定化物質。
在多層方式中，通過溶血劑控制血液檢體樣品的溶血的層、通過檢測物質標記血紅蛋白類的層、以及檢測結合在固定化試劑中的血紅蛋白類的層，分別作為獨立的個別層存在，這些層以血液檢體樣品能夠在其間移動的方式被疊層。在多層方式中，溶血劑、檢測物質以及固定化物質分別負載於各個層中，這些層從添加血液檢體樣品的一側開始依次被疊層。負載溶血劑的層，由使添加於表面的液體浸透到其對側表面的材料構成。例如可以使用紙漿無紡布、網眼布帛(例如紗布綿布帛)以及玻璃纖維濾紙式的材料，製作通過溶血劑控制血液檢體樣品的溶血的層。溶血劑例如可以通過將溶血劑的溶液含浸在這些層中，然後通過冷凍乾燥而負載在層中。檢測物質也可以負載在由使添加於表面的液體浸透到其對側表面的材料構成的層中。檢測物質例如也可以通過將檢測物質的溶液含浸在這些層中，然後通過冷凍乾燥而負載在層中。固定化物質可以負載在能夠作為血紅蛋白檢測場所的固相基質上。作為這種固相基質可以舉出硝酸纖維素薄膜。這些層可以接觸配置，以便使血液檢體樣品可以在這些層間移動。通過這種配置，添加的血液檢體樣品，在這些層間移動的過程中，首先與溶血劑接觸並對血液進行部分溶血。然後，基於部分溶血的血漿水中的血紅蛋白類與能夠溶出的檢測物質特異結合。接著血紅蛋白類-檢測物質的複合體育固定化試劑特異結合，生成檢測物質-血紅蛋白類-固定化物質。
本實施方式的血紅蛋白類測定裝置，具備除去血液檢體樣品被溶血後的紅細胞殘留物的層。該除去紅細胞殘留物的層，可以與通過溶血劑控制血液檢體樣品溶血的層相同。或者，在本裝置中，可以與通過溶血劑控制血液檢體樣品溶血的層不同地另外設置除去紅細胞殘留物的層。例如可以使用紙漿無紡布、網眼布帛(例如紗布綿布帛)以及玻璃纖維濾紙式的材料構成的層。本層可以吸收含有基於乾式化學的血紅蛋白類測定中不需要的紅細胞膜殘骸的血漿溶液。因此，在本說明書中也將本層稱為「吸收層」。
圖5表示本實施方式的多層式的一例血紅蛋白類測定裝置。圖5是表示本實施方式的多層式血紅蛋白類測定裝置的剖面圖。在基板(21)(基板可以是聚對苯二甲酸乙二醇酯(PET))上疊層固定有抗體(23)的抗體固定化表層(22)，接著在其上疊層標記抗體冷凍乾燥抗體負載層(24)，然後在其上疊層溶血劑負載層(25)。這裡，如圖2所示，溶血劑負載層(25)、標記抗體冷凍乾燥抗體負載層(24)、以及固定化表層(22)，配置為與其下面的層部分重疊。通過這種重疊，血液檢體樣品在各層間移動，因此產生溶血、標記抗體結合以及固定化抗體結合。在抗體固定化表層(22)的剝出區域(即溶血劑負載層(25)以及標記抗體冷凍乾燥負載層(24)沒有重疊的區域)上固定與血紅蛋白類特異結合的抗體，在該區域，可以檢測血液檢體樣品中的血紅蛋白類的反應。另外，吸收層(26)疊層在抗體固定化表層(22)上的與血液檢體樣品的添加側相反側(即標記抗體冷凍乾燥抗體負載層(24)沒有重疊的側)的區域。吸收層吸收存在於反應檢測區域的含有在檢測中不需要的紅細胞殘骸的血漿溶液，可以輔助反應的檢測。另外，從溶血劑負載層(25)、標記抗體冷凍乾燥抗體負載層(24)、以及抗體固定化表層(22)的三層重疊的區域至反應檢測區域，為了防止基於添加的樣品的溼潤的乾燥以及為了避免妨礙樣品測定的物質的混入，可以被覆不透過性片材(27)。作為這種不透過性片材，可以舉出玻璃紙。溶血劑負載層(25)的重疊部分以外，不用不透過性片材被覆。在該非被覆部分上可以添加血液檢體樣品。不透過性片材(27)也可以被覆抗體固定化表層(22)與吸收層(26)重疊的區域以及沒有與抗體固定化表層(22)重疊的吸收層(26)的至少一部分。通過這種被覆，可以不妨礙從抗體固定化表層(22)向吸收層(26)的吸收。
如以上所示，在測定血細胞中的成分時，通過使血液檢體樣品部分溶血，可以去除以往必須的稀釋階段。在手動情況下，通過使用本發明的方法，可以省略稀釋操作。另外，在目前稀釋階段自動化的情況下，可以從自動化機器省略自動稀釋階段，從而可以使機器小型化以及降低成本。
因此，根據本發明可以提供能夠更容易測定血紅蛋白類等的血細胞中成分的血液處理方法、血紅蛋白類測定方法、血液處理裝置以及血紅蛋白類測定裝置。根據本發明可以簡便快速地測定血紅蛋白類。
實施例以下根據HbA1c的測定例來說明本發明的實施例。需要說明的是本發明並不局限於以下實施例。在實施例中所用的材料、試劑等，只要沒有特殊限定均可以從市場獲取。
(實施例1吸光法中的溶血劑添加量的最適範圍)
分別在1.5、7.5、15、75以及150mg的氯化鉀中添加全血檢體樣品(HbA1c值4.8％)1.5ml(即各個氯化鉀比例為0.1％、0.5％、1％、5％、以及10％，這些比例是重量/體積)，混濁，然後進行離心分離，取出上清液1.0ml。對於它們的各個上清液，測定350～800nm的透光率，結果表示在圖6中。例如在500nm，溶血劑(這裡是指氯化鉀)的添加量以0.1～0.5％左右為宜，在700nm以0.1～10％左右為宜。
(實施例2溶血劑的量與Hb濃度以及HbA1c值的關係)分別在1.5、7.5、15、75以及150mg的氯化鉀中添加全血檢體樣品(HbA1c值4.8％)1.5ml(即各個氯化鉀比例為0.1％、0.5％、1％、5％、以及10％，這些比例是重量/體積)，混濁，然後進行離心分離，取出上清液1.0ml。通過SLS-血紅蛋白法測定存在於該上清液中的Hb濃度。對於SLS-血紅蛋白法進行闡述。作為專用試劑使用和光純藥出售的血紅蛋白B-檢測和純實施SLS-血紅蛋白法。對於血紅蛋白的發色原液即0.67mM月桂酸鈉5.0ml，加入血紅蛋白標準液(1、5、10、50、100以及150g/L)0.02ml，充分混合，然後再室溫下放置大致3分鐘，製作血紅蛋白對照溶液。在540nm波長處測定這些對照溶液的吸光度。利用所得值，製作關於血紅蛋白濃度的吸光度(540nm)的標準曲線。然後，在以各種溶血率處理的樣品中，利用上述上清液0.02ml，經過同樣的處理並測定吸光度。利用標準曲線計算出各血紅蛋白濃度。
另一方面，利用專用HPLC(Alc2.2、TOSO制)測定HbA1c值。將溶血處理的樣品放入試管內，設在該裝置上，進行自動測定。這裡所得HbA1c值，相當於相對全血紅蛋白的HbA1c的比例(％)。
圖7表示以上的結果。在圖7中，下方的橫軸表示添加的氯化鉀的濃度(％)，左面的縱軸表示Hb濃度(mg/ml)，另外，右面的縱軸表示HbA1c值(％)。另外，圖7中的黑圈表示Hb濃度的結果，並且白圈表示HbA1c值的結果。
圖7表示Hb濃度依賴於KCl濃度並且基於溶血而變高。另外，Hb濃度依賴於溶血劑的量而變化，但是HbA1c顯示不變。因此，在測定相對於全血紅蛋白的血紅蛋白類的比例(％)時，沒有必要完全溶血，因此也暗示沒有稀釋階段的必要性。
(實施例3利用免疫層析法的HbA1c的測定)(2.1.Hb測定用裝置以及HbA1c測定用裝置的製作)在本實施例中，製作可以用於HbA1c測定的裝置。如圖5所示，該裝置是分別在各層上進行基於溶血劑的溶血、與抗體的反應以及該反應的檢測的多層式。圖5是本發明的多層式裝置的一例剖面圖。首先對於各層的製作進行說明。
膠質金標記抗體冷凍乾燥固定化物(24)
在三角燒瓶中放入蒸餾水198ml以及1％氯金酸水溶液2ml，使所得混合水溶液沸騰，在沸騰的水溶液中快速添加1％檸檬酸三鈉水溶液4ml。添加後，在確認混合水溶液的顏色變為紅紫色後，再以沸騰狀態放置15分鐘。之後，取出三角燒瓶，通過在室溫下放置，進行自然冷卻，得到膠質金液。在所得膠質金液中添加0.2M碳酸鉀水溶液，調整pH為8.9。在該膠質金液中，添加1.55mg/ml的通過獨立行政法人產業技術綜合研究所特許生物寄存中心收藏編號FERM BP-7288號細胞株產生的抗Hb單克隆抗體的溶液1.6ml，攪拌3分鐘。進而添加10％牛血清白蛋白(BSA)水溶液(pH8.9)20ml，進一步攪拌3分鐘。之後，為了去除未標記的抗體以及BSA，進行離心，通過抽吸器除去上清液。用0.45μm過濾器過濾所得的膠質金標記抗Hb單克隆抗體1％BSA·PBS懸濁液，除去凝集塊。之後，使膠質金標記抗Hb抗體21懸濁液含浸在玻璃纖維濾紙上，利用液態氮進行冷凍，通過在冷凍乾燥機中放置24小時製作冷凍乾燥固定化物。
Hb測定用/抗體固定化表層(22)
在硝酸纖維素性表層上對通過獨立行政法人產業技術綜合研究所特許生物寄存中心收藏編號FERM BP-7289號細胞株產生的抗Hb單克隆抗體的溶液(PBS)進行固定。固定後，用脫脂乳進行封閉。接著，用0.1MTris(PH8.2)清洗2次，使乾燥。
HbA1c測定用/抗體固定化表層(22)
在硝酸纖維素性表層上對通過獨立行政法人產業技術綜合研究所特許生物寄存中心收藏編號FERM BP-7636號細胞株產生的抗HbA1c單克隆抗體的溶液進行固定。固定後，用脫脂乳進行封閉。接著，用0.1M Tris(PH8.2)清洗2次，使乾燥。
溶血劑負載固相(25)
在Leedcookingpaper(註冊商標) (LION社出售)上，使含浸相對於全樣品量的0.5％(w/v)的KCl，進行冷凍乾燥。
Hb測定用裝置以及HbA1c測定用裝置的構建
利用上述製作的膠質金標記抗體冷凍乾燥負載層、Hb測定用抗體固定化表層或HbA1c測定用抗體固定化表層、以及溶血劑負載層，如圖5所示，構建Hb測定用裝置以及HbA1c測定用裝置。以下說明該裝置的構建。
在基板(21)(聚對苯二甲酸乙二醇酯松本製作所制)上疊層固定有抗體(23)的抗體固定化表層(22)，接著在其上疊層膠質金標記抗體冷凍乾燥負載層(24)，然後再在其上疊層溶血劑負載層(25)。這裡，如圖5所示，溶血劑負載層(25)、膠質金標記抗體冷凍乾燥抗體負載層(24)、以及抗體固定化表層(22)，配置為與其下面的層重疊。在抗體固定化表層(22)的剝出區域(即溶血劑負載層(25)以及膠質金標記抗體冷凍乾燥負載層(24)沒有重疊的區域)上固定與血紅蛋白類特異結合的抗體，該區域，可以作為用於檢測血液檢體樣品中的血紅蛋白類的反應的區域。另外，玻璃纖維濾紙吸收層(26)疊層在抗體固定化表層(22)上的與血液檢體樣品的添加側相反側(即膠質金標記抗體冷凍乾燥抗體負載層(24)沒有重疊的側)的區域。另外，從溶血劑負載層(25)、膠質金標記抗體冷凍乾燥抗體負載層(24)、以及抗體固定化表層(22)的三層重疊的區域至反應檢測區域，被覆不透過性片材(27)(玻璃紙)。溶血劑負載層(25)的重疊部分以外暴露。該暴露部分是點上血液檢體樣品的區域。不透過性片材(27)也可以被覆抗體固定化表層(22)與吸收層(26)重疊的區域以及沒有與抗體固定化表層(22)重疊的吸收層(26)的一部分。通過這種被覆，可以不妨礙從抗體固定化表層(22)向吸收層(26)的吸收。
利用Hb測定用裝置以及HbA1c測定用裝置的血紅蛋白類測定
對於含有負載0、0.05、0.1、0.5、0.7、1.0、3.0％(w/v)的KCl溶血劑負載層的各個裝置，點上160μl的血液，5分鐘後，測定610nm的反射吸光度。其結果顯示在圖8中。
在圖8中，通過顯示從0.1～1.0％(w/v)KCl中的顯色強度，可以推知KCl量的最適範圍為0.1～1.0％(w/v)。在該裝置中，優選作為半值的0.5％(w/v)KCl，如在上述溶血劑負載固相(25)中所述那樣，在本實施例中，使0.5％(w/v)KCl負載於溶血劑固定相(25)上來進行HbA1c的測定。
首先，利用Hb標準液或HbA1c標準液製作稀釋系列。將該稀釋系列160μl點在裝置上，5分鐘後測定610nm的反射吸光度，製作標準曲線。圖9表示Hb測定用裝置的標準曲線，圖10表示HbA1c測定用裝置的標準曲線。圖9中，橫軸表示Hb濃度(mg/dl)，縱軸表示610nm的反射吸光度的值。另外，圖9中的黑圈表示各稀釋系列的Hb濃度的吸光度的結果。圖10中，橫軸表示HbA1c濃度(mg/dl)，縱軸表示610nm的反射吸光度的值。另外，圖10中的黑圈表示各稀釋系列中的HbA1c濃度的吸光度的結果。
下面，將含有4.0、5.4或10.4％HbA1c的血液檢體樣品160μl的血液點在裝置上，5分鐘後，測定反射吸光度。其結果顯示在圖11中。在圖11中，橫軸表示HbA1c的值(％)，左面的縱軸表示對於Hb的反射吸光度，另外，右面的縱軸表示對於HbA1c的反射吸光度。另外，圖11中的黑圈表示Hb濃度的結果，並且白圈表示HbA1c值的結果。從圖9以及圖10分別根據所得的標準曲線對圖11的結果的各吸光度值進行回歸，計算出Hb濃度以及HbA1c濃度(圖12)。圖12中橫軸表示610nm的反射吸光度，左面的縱軸表示通過換算計算出的Hb濃度(mg/dl)，右面的縱軸表示通過換算計算出的HbA1c濃度(mg/dl)。另外，圖12中的黑圈表示Hb濃度的結果，並且白圈表示HbA1c濃度(mg/dl)的結果。在上述任一血液檢體樣品中，Hb濃度大致相同。由此可知在上述任一血液檢體樣品中可以使溶血程度大致相同。利用通過該裝置測定所得的Hb濃度(mg/dl)以及HbA1c濃度(mg/dl)來確定各HbA1c值的樣品的HbA1c值(％) (通過HbA1c濃度(mg/dl)/Hb濃度(mg/dl)×100來計算)。其結果分別算出HbA1c值4.0％的檢體為3.9％，HbA1c值5.4％的檢體為5.7％，HbA1c值10.4％的檢體為11.2％。由此可以確認，通過控制使血液檢體樣品部分溶血，可以測定血紅蛋白類。
根據以上結果，可以製作不需要稀釋階段而在一個階段可以簡便地進行測定的裝置。
根據本發明可以簡便並且迅速地測定血紅蛋白類。
產業上的利用本發明可以用於營養管理以及醫療診斷的領域。
權利要求
1.一種血液處理方法，包括準備含有紅細胞的血液檢體樣品及溶血劑的工序(a)、通過混合上述血液檢體樣品與上述溶血劑而調製混合樣品的工序(b)，上述溶血劑是破壞紅細胞膜的固體藥劑。
2.根據權利要求1所述的血液處理方法，其中，在上述工序(b)中，在上述混合樣品中殘存血細胞成分。
3.根據權利要求1所述的血液處理方法，其中，上述溶血劑是使相對於紅細胞膜的滲透壓變化的藥劑。
4.根據權利要求3所述的血液處理方法，其中，上述溶血劑是無機鹽。
5.根據權利要求4所述的血液處理方法，其中，上述混合樣品中的上述無機鹽的濃度在0.05～10％(w/v)的範圍內。
6.一種血紅蛋白類測定方法，包括準備含有紅細胞的血液檢體樣品及溶血劑的工序(a)、通過混合血液檢體樣品與溶血劑而調製混合樣品的工序(b)、測定上述混合樣品的血漿中的血紅蛋白類的工序(c)，上述溶血劑為破壞紅細胞膜的固體藥劑。
7.根據權利要求6所述的血紅蛋白類測定方法，其中，在上述工序(c)中，作為測定上述混合樣品中的血漿中含有的血紅蛋白類的方法，使用免疫層析法、免疫集中法、固相酶免疫測定法、比色玻片法、以及電極法玻片法中的任意一種。
8.根據權利要求6所述的血紅蛋白類測定方法，其中，在上述工序(c)中，至少測定2種血紅蛋白。
9.根據權利要求8所述的血紅蛋白類測定方法，其中，上述至少2種血紅蛋白是血紅蛋白與HbA1c的組合。
10.根據權利要求6所述的血紅蛋白類測定方法，其中，上述血紅蛋白類是糖化血紅蛋白。
11.一種血液處理裝置，具備基材與用於破壞紅細胞膜的固體溶血劑，在形成含有紅細胞的血液檢體樣品與上述溶血劑的混和樣品時，在上述基材上負載的所述固體溶血劑的量，是使血細胞成分在上述混和樣品中有殘存的量。
12.一種血紅蛋白類測定裝置，用於測定含有紅細胞的血液檢體樣品中的血紅蛋白類，具備具有上述血液檢體樣品的添加部的基材、用於破壞紅細胞膜的溶血劑、與上述血紅蛋白類特異結合的檢測物質、與上述血紅蛋白特異結合的固定化物質，在上述基材上負載的所述固體溶血劑的量，是使血細胞成分在上述混和樣品中有殘存的量，上述溶血劑、上述檢測物質、以及上述固定化物質分別以固體負載在上述基材上，從靠近上述基材的上述血液檢體樣品的添加部依次配置上述溶血劑、上述檢測物質、上述固定化物質。
13.一種血紅蛋白類的測定裝置，用於測定含有紅細胞的血液檢體樣品中的血紅蛋白類，具備基板；設置於上述基板上的上述血液檢體樣品的添加部；溶血層，設置於上述基板上，含有用於破壞紅細胞膜的固體的溶血劑，用於控制上述血液檢體樣品的溶血；標記層，設置於上述基板上，含有與血紅蛋白類特異結合的檢測物質，用於標記上述血紅蛋白類；檢測層，設置於上述基板上，含有與上述血紅蛋白類特異結合的固定化試劑，用於檢測上述血紅蛋白類，上述血液檢體樣品可以在上述溶血層、上述標記層以及上述檢測層之間移動。
14.根據權利要求13所述的血紅蛋白類測定裝置，其中，還具備在上述血液檢體樣品被溶血後用於除去紅細胞殘留物的層。
15.根據權利要求13所述的血紅蛋白類測定裝置，其中，上述溶血層、上述標記層、以及上述檢測層配置在單一層中。
全文摘要
一種血液處理方法，如圖1所示，包括準備含有紅細胞的血液檢體樣品及溶血劑的工序(St1)、通過混合血液檢體樣品與溶血劑而調製混合樣品的工序(St2)，這裡的溶血劑是破壞紅細胞膜的固體藥劑。
文檔編號G01N33/72GK1522369SQ0380059
公開日2004年8月18日 申請日期2003年3月31日 優先權日2002年3月29日
發明者北脅文久, 重藤修行, 河村達朗, 朗, 行 申請人:松下電器產業株式會社