一種聚乙二醇單甲醚-聚己內酯-聚磷酸酯三嵌段共聚物及其製備的siRNA藥物載體的製作方法

2023-10-25 12:02:47 3

專利名稱：：一種聚乙二醇單甲醚-聚己內酯-聚磷酸酯三嵌段共聚物及其製備的siRNA藥物載體的製作方法
技術領域：
：本發明涉及一種聚乙二醇單甲醚-聚己內酯-聚磷酸酯三嵌段共聚物及其製備的siRNA藥物載體。
背景技術：
：RNA幹擾是一種由大約二十多個核苷酸組成的雙鏈小分子幹擾RNA(siRNA)介導的基因沉默技術，它具有序列特異性而且發生在遺傳信息的轉錄之後。由於RNA幹擾技術具有特異性抑制致病基因表達的能力以及其高效、多樣化的特徵，人們正在不斷挖掘siRNA在人類疾病治療中的潛力，到目前為止已經開展了大量針對疾病治療的動物實驗甚至臨床實驗，這其中包括以表達血管內皮生長因子(VEGF)、P糖蛋白、端粒酶等各種基因為靶基因的癌症治療，針對HIV-1、乙型和C型肝炎、流感和SARS等病毒的實驗，以及針對一些神經退化性疾病的研究等。最近的研究還表明利用siRNA也可能治療II型糖尿病和肥胖症，而視網膜退化病變引起的老年黃斑病變的siRNA療法更是進入了臨床試驗階段。美國費城的Acuity製藥公司在2006年美國基因治療學會年會上還宣布以RNAi為基礎的Bevasiranib藥物能夠"關閉"VEGF基因，用來治療老年性黃斑病變的II期臨床試驗取得了初步成功。有RNAi專家指出，這項試驗的成果是RNA療法發展的一個裡程碑，而且還預言RNAi在不久的將來就可能用於臨床治療。儘管目前在大多數細胞培養和體外應用研究中，siRNA顯示出抑制基因的良好潛質，體外siRNA的傳輸結果也比較滿意，但在以治療人類疾病為目的的體內siRNA傳輸方面卻面臨著巨大挑戰。由於siRNA分子本身穿透細胞膜的能力極差，也不具備靶向功能，而且在生理環境中極不穩定，因此siRNA藥物開發的一個關鍵是siRNA的傳輸體系。如何增強在體內的穩定性和穿透細胞膜的能力，以及增強疾病治療的細胞和組織耙向性等都是siRNA傳輸體系急切需要解決的問題。因此除了尋找和篩選高效特異性的siRNA藥物分子之外，在生命體系發揮RNAi治療功效離不開靶向特定組織或靶細胞的傳輸體系，siRNA的體內傳輸體系也因此成為發展和實施RNA幹擾療法的另一個關鍵所在。儘管動物實驗中高壓大體積的靜脈液力注射(hydrody腦icinjection)能將siRNA分子輸送到肝臟、脾臟、肺、腎、胰腺等血管豐富的組織，而且十分有效，但在實際臨床應用中受到限制；一些物理方法如電穿孔(Electroporation)，以及將siRNA直接送到靶部位如眼睛、肺或中樞神經系統，這類局域性輸送方法具有一定潛能，仍然需要尋找更方便適合臨床應用的新方法，特別是系統給藥的方法。載體介導的siRNA表達質粒的體內傳輸是一個類似於基因治療的問題，在研究中可以用一些物理方法，以及病毒或非病毒的傳輸體系。然而，儘管病毒對它的傳遞具有高效性，但潛在的安全性問題制約著它的廣泛臨床應用；而非病毒類的陽離子脂質體和陽離子高分子載體的安全性好的特點使它們成為極具潛力的載體。已有的典型非病毒siRNA傳輸材料包括聚乙烯亞胺(PEI)、去了端肽的精製膠原"atelocollagen"和一些陽離子脂質體，包括最近報導的siRNA-SNALP(stablenucleic-acid-lipidparticle)，通過抗體介導的細胞特異性siRNA輸送，以及中性脂質體DOPC，還有用基於寡聚核苷酸適配子(Aptamer)的特異性輸送siRNA到細胞的報導，但發展高效具有一定靶向性和安全的siRNA體內傳輸體系仍然面臨挑戰。siRNA給藥載體的研究和開發一直是困擾各國科學家的關鍵問題。人們一直在研究合適的載體材料能有效地將siRNA藥物分子輸送到靶細胞和部位，並在一段合理時間維持其功效。目前所採用的載體體系大多是陽離子脂質體或水溶性的陽離子聚合物，將這些載體分子與siRNA溶液互混得到二者的複合物，從而實現傳遞siRNA的目的，這類方法的不足就是不容易放大規模並且重複性較差。Alnylam製藥公司發展的DirectRNAi技術主要是針對病灶部位的直接給藥，用於治療眼科疾病、中樞神經系統疾病和呼吸道疾病；而該公司的SystemicRNAi技術用於治療包括腫瘤、消化系統疾病和自身免疫性疾病等眾多疾病。Intradigm公司利用TargeTransiRNA技術，該技術利用陽離子型嵌段高分子通過靜電相互作用和siRNA形成納米顆粒的內核，並覆蓋一層具有保護和增強血液中siRNA穩定性的外殼，以及靶向基團。基於高分子的納米顆粒已經廣泛用於從小分子到生物活性DNA分子的傳遞的研究，取得了不菲成績，其中很多成果已經用於臨床或臨床試驗。高分子納米顆粒的傳遞體系生物相容性好，具有靶向傳遞的潛能，具有更好的穩定性，能有效保護生物活性分子對生理環境的耐受性，並增強細胞對被傳遞分子的吸收。特別值得指出的是高分子自組裝的納米粒具有EPR效應(Enhancedpermeabilityandretention)，可促進藥物在腫瘤組織的富集，並能有效地被腫瘤部位細胞吸收，進入細胞質和各種細胞器，因此高分子納米粒是極具潛能的siRNA傳遞系統的候選者。而具有良好生物相容性的可降解高分子載體，特別是具有快速去質子化能力的可降解陽離子型高分子載體能有效結合和保護siRNA分子，又能使siRNA在細胞質中迅速釋放，實現阻斷基因表達的目的，這將使這類載體在小RNA給藥中具有更好的優勢和應用前景。傳統的方式均採用水溶性的陽離子聚合物，將這些載體分子與siRNA互混得到二者的複合物或納米顆粒，從而實現傳遞siRNA的目的，這類方法的明顯不足在於工藝難以放大，可重複性較差。本發明的一個目的是提供一種siRNA的藥物載體，它的活性成分是聚合物形成的帶正電荷的納米顆粒。所述納米顆粒可進行化學修飾或配體修飾。所述聚合物可為聚乙二醇單甲醚-聚己內酯-聚磷酸酯三嵌段共聚物。上述聚乙二醇單甲醚-聚己內酯-聚磷酸酯三嵌段共聚物中，所述聚己內酯為聚s-己內酯，所述聚磷酸酯由結構式如式(I)的五元環狀磷酸酯單體聚合而成上述聚乙二醇單甲醚-聚己內酯-聚磷酸酯三嵌段共聚物中，中間嵌段是所述聚己內酯，一個末端嵌段是聚乙二醇單甲醚，另一個末端嵌段是所述聚磷酸酯；所述聚乙二醇單甲醚嵌段的聚合度為45，對應的數均分子量為2，000g/mol;所述聚己內酯嵌段的聚合度為45-100，對應的數均分子量為5，130-11，400g/mol;所述聚磷酸酯嵌段的聚合度為7-12，對應的數均分子量為l，420-2，430g/mo1。上述三嵌段共聚物，可為mPEG45-PCL45-PPEEA7或mPEG45-PCL1M-PPEEA12。所述納米顆粒的直徑可為30-121nm。本發明還提供了一種聚乙二醇單甲醚-聚己內酯-聚磷酸酯三嵌段共聚物。上述聚己內酯為聚s-己內酯，上述聚磷酸酯由結構式如式(I)的五元環狀磷酸酯單體聚合而成。
發明內容6上述三嵌段共聚物中，中間嵌段是所述聚己內酯，一個末端嵌段是聚乙二醇單甲醚，另一個末端嵌段是所述聚磷酸酯；所述聚乙二醇單甲醚嵌段的聚合度為45，對應的數均分子量為2000g/mol;所述聚己內酯嵌段的聚合度為45-100，對應的數均分子量為5，130-11，400g/mol;所述聚磷酸酯嵌段的聚合度為7-12,對應的數均分子量為1，420-2，430g/mo1。本發明還提供了一種合成聚乙二醇單甲醚-聚己內酯-聚磷酸酯三嵌段共聚物的方法。所述合成聚乙二醇單甲醚-聚己內酯-聚磷酸酯三嵌段共聚物的方法是以端羥基聚乙二醇單甲醚-聚己內酯為大分子引發劑，以異辛酸亞錫為催化劑，通過環狀磷酸酯單體的開環聚合反應得到三嵌段共聚物。上述端羥基聚乙二醇單甲醚-聚己內酯可以聚乙二醇單甲醚為引發劑，以異辛酸亞錫為催化劑，在本體條件下引發己內酯單體聚合而成。上述環狀磷酸酯單體可通過2-氯-2-氧-1，3，2-二氧磷雜環戊烷和N-叔丁氧羰基胺基乙醇反應得到。上述2-氯-2-氧-1，3，2-二氧磷雜環戊烷可通過乙二醇和三氯化磷反應得到。上述N-叔丁氧羰基胺基乙醇(EABoc)可通過乙醇胺和二碳酸二叔丁酯反應得到。上述結構式如式(I)的單體聚合後，脫去叔丁氧羰基(Boc)保護基團後便可得到側基為胺基的聚磷酸酯聚合物。本發明得到的三嵌段共聚物具有良好的生物相容性和可降解性，其物理、化學性能可通過調節聚合物的組成而調節。本發明提供生物相容性的三嵌段共聚物，在水溶液中自組裝形成納米顆粒，具有良好的穩定性，製備方法簡單，可重複性高，作為載體能保護siRNA免於降解，又能結合納米顆粒本身的尺度效應。該共聚物主要適用於納米藥物載體、基因治療載體，大分子前體藥物，生物材料表面修飾等領域。本發明提供的聚乙二醇單甲醚-聚己內酯-聚磷酸酯嵌段共聚物可以形成帶有正電荷的納米顆粒，這種納米顆粒的粒徑在100nm左右，表面電荷在40mV左右。在合適的正負電荷比(N/P比)情況下，納米顆粒能夠與siRNA完全結合形成穩定的負載siRNA分子的納米顆粒。本發明利用mPEG-PCL-PPEEA納米顆粒輸送針對GFP基因的siRNA，並和Lipofectamine2000比較沉默GFP在HEK293細胞的表達，證明了納米顆粒能夠將siRNA運輸到細胞內並發揮沉默基因表達的作用。本發明利用針對Luciferase蛋白的siRNA進一步定量分析檢驗了納米顆粒輸送siRNA的能力，mPEG-PCL-PPEEA納米顆粒轉染150pmolsiRNA與Lipofectamine2000轉染20pmolsiRNA相比，細胞內Luciferase的表達量相當，隨著siRNA劑量的增加，細胞中Luciferasede表達量降低，隨著N/P比的增加，Luciferase的表達量下降。本發明通過細胞毒性實驗證明這種納米膠束具有良好的生物相容性，同時高分子膠束具有很好的穩定性和方便製備等特點，使得這類生物可降解的納米膠束在siRNA輸送和基於RNA幹擾的疾病治療中具有良好的應用前景。以下的實施例便於更好地理解本發明，但並不限定本發明。圖1為mPEG-PCL-PPEEABoc的合成路線圖。圖2為EABoc和PEEABoc的核磁共振譜。圖3為mPEG-PCL大分子引發劑和mPEG-PCL-PPEEABoc的GPC譜。圖4為mPEG-PCL大分子引發劑的的麗R譜。圖5為mPEG-PCL-PPEEABoc和mPEG-PCL-PPEEA的'HNMR譜。圖6為芘在不同濃度mPEG-PCL-PPEEA聚合物溶液中的激發光譜。圖7為mPEG-PCL-PPEEA共聚物所形成的納米顆粒的表徵。圖8為mPEG-PCL-PPEEA共聚物所形成的納米顆粒的細胞毒性。圖9為mPEG-PCL-PPEEA-siRNA複合物在不同N/P比條件下的粒徑和表面電位的變化。圖10為PKH26染色的mPEG45-PCU。-PPEEAt2納米顆粒與FAM標記的siRNA形成的複合物在進入細胞後分布的雷射共聚焦顯微鏡照片。圖11為PKH26染色的mPEG45-PCL45-PPEEA7納米顆粒與FAM標記的siRNA形成的複合物在進入細胞後分布的雷射共聚焦顯微鏡照片。圖12為納米顆粒運輸綠色螢光蛋白GFPsiRNA進入細胞沉默綠色螢光蛋白GFP表達效果的螢光顯微鏡照片。圖13為納米顆粒運輸不同劑量螢火蟲螢光素酶(Luciferase)siRNA進入細胞沉默Luciferase表達效果的比較。具體實施例方式本發明提供了一種siRNA的藥物載體，它的活性成分是聚合物形成的帶正電荷的納米顆粒。上述聚合物為ABC型聚乙二醇單甲醚-聚己內酯-聚磷酸酯三嵌段共聚物，包括聚乙二醇單甲醚(A嵌段)、聚己內酯(B嵌段)和聚磷酸酯(C嵌段)，所述B嵌段為聚s-己內酯(PCL)，所述C嵌段由結構式如式(I)的單體聚合而成，該聚乙二醇單甲醚-聚己內酯-聚磷酸酯共聚物表示為mPEG-PCL-PPEEA。使用聚己內酯作為本發明的三嵌段共聚物的中間嵌段結構，具有如下優點和作用①相對疏水性，因此在聚合物鏈之間的疏水-疏水相互作用促進共聚物自組裝；②可生物降解；③生物相容；④合成方法簡單可控；⑤原料較為廉價，節約成本。使用親水性聚磷酸酯作為本發明三嵌段共聚物的親水部分，主要利用聚磷酸酯易官能化的優點得到側基帶有胺基官能團的共聚物，為傳輸siRNA奠定基礎。下述實施例提供了由異辛酸亞錫催化，大分子聚酯引發的合成兩親性三嵌段共聚物的合成方法。該方法是合成不同分子量的端羥基聚乙二醇單甲醚-聚己內酯；以端羥基聚乙二醇單甲醚-聚己內酯為大分子引發劑，異辛酸亞錫為催化劑，通過環狀磷酸酯單體的開環聚合反應得到三嵌段共聚物。聚乙二醇單甲醚-聚己內酯-聚磷酸酯三嵌段共聚物具有兩親性的特徵，在水溶液中自組裝形成納米尺度的顆粒，這類納米顆粒具有疏水的聚己內酯內核和親水性的聚乙二醇單甲醚和聚磷酸酯外殼，而且顆粒的尺寸與共聚物的組成相關，可以調控。比較有意義的是，本發明中所合成的兩親性共聚物的聚磷酸酯部分均帶有可質子化的胺基，在略酸性環境中形成的納米顆粒表面帶有可觀的正電荷，通過靜電作用可以結合帶有負電的siRNA，起到傳輸siRNA的作用。採用這種納米顆粒作為載體實現了載體/siRNA複合物的內吞，並達到基因沉默的效果。可通過常規方法將三嵌段共聚物在水中製備成納米顆粒，比如溶劑揮發法和透析法。溶劑揮發法將三嵌段共聚物溶於四氫呋喃中，於攪拌下滴入超純水得到相應的終濃度，攪拌兩小時後，於減壓下除去有機溶劑，再定容至合適的體積。透析法將三嵌段共聚物溶於良溶劑如二甲基亞碸(DMSO)中，於攪拌下滴入超純水得到相應的終濃度，攪拌兩小時後，於透析袋中透析除去有機溶劑。9下述實施例還提供了將製備好的納米顆粒與siRNA溶液互混製備的納米顆粒與siRNA複合物。實施例中所用原料來源及處理方法.-e-己內酯(CL，Acros)，純度>99%，在!^氣氛下用CaH2回流24h，使用前減壓蒸出。聚乙二醇單甲醚(Mn=2000g/mol，mPE")，購於Aldrich公司，純度>99,5。％，使用前用甲苯共沸除水。異辛酸亞錫(國藥集團化學試劑有限公司)，先用對二甲苯共沸兩次，然後再減壓蒸餾，收集152°C(2040Pa)的餾分用於聚合反應。三氯化磷、乙二醇，使用前重蒸。二氯甲烷，用五氧化二磷回流24h，使用前蒸出。三乙胺，先後用鄰苯二甲酸酐，Na0H和CaH2分別回流24h，使用前蒸出。四氫呋喃，用鈉鉀合金回流，使用前蒸出。乙醚、甲苯用鈉砂回流乾燥，均在使用前蒸出。未經說明的其他試劑直接使用。下述實施例中的實驗方法，如無特殊說明，均為常規方法。實施例l、mPEG-PCL-PPEEA的合成和表徵一、2-(N-叔丁氧羰基胺基)乙氧基-2-氧-1，3，2-二氧磷雜環戊垸(PEEABoc)環狀磷酸酯單體的合成與表徵(一)2-氯-2-氧-1,3，2-二氧磷雜環戊垸(COP)的合成C0P合成路線如圖1(A)所示。合成COP的具體步驟為在300mL3.26mol/L三氯化磷的二氯甲烷溶液中，緩慢加入301mL3.25mol/L乙二醇的二氯甲烷溶液。待滴完後，繼續反應0.5小時，減壓蒸去溶劑。再連續兩次減壓蒸出產物後，溶解在苯中，通3天02直到反應完全，減壓蒸餾(20Pa)，收集72"的餾分，得到C0P。(二)N-叔丁氧羰基胺基乙醇(EABoc)的合成和表徵合成路線如圖1(B)所示。合成EABoc的具體步驟為在250毫升三口瓶中依次加入6.1克(0.10mol)乙醇胺、100mL四氫呋喃、100mL超純水，攪拌待其完全溶解後，連續加入8.4g(0.1rool)碳酸氫鈉和21.8g(0.1mol)二碳酸二叔丁酯。在(TC下反應30分鐘後，自然升至室溫反應過夜。反應液用100mL乙醚萃取2次，有機相用無水硫酸鈉乾燥。減壓下除去溶劑，得到EABoc，產率為95%。對EABoc進行核磁共振氫譜('H醒R)分析，'H腿R譜見圖2(A)。由圖2(A)可見，各種質子均得到相應歸屬，積分比例吻合。(三)2-(N-叔丁氧羰基胺基)乙氧基-2-氧-1，3，2-二氧磷雜環戊烷(PEEABoc)的合成和表徵合成路線如圖1(C)所示。合成PEEABoc的具體步驟為在-5X:的低溫反應浴下，將製得的C0P(14.25g，0.lmol)的四氫呋喃(30ml)溶液滴加到EABoc(16.10g，0.lmol)和三乙胺(10.12g，0.lmol)的四氫呋喃(120ml)溶液中，反應過夜。然後在NJ呆護下，過濾以上溶液，將濾液濃縮後，用400mL乾燥的冷乙醚沉澱，移去上清液，沉澱物用油泵抽乾，即為PEEABoc。對PEEABoc進行核磁共振氫譜('HNMR)和核磁共振碳譜(13C-麗R)分析，'HNMR譜見圖2(B)，13C-麗R譜見圖2(C)。從圖2(B)可以觀察到，1.43ppm的單峰為叔丁基的9個氫核，3.36ppm和4.12ppm的三重峰分別為-0CH2(12NH-和-0(12CH2NH-片段上的2個氫核，4.36ppm的多重峰為磷酸酯環-OC&C&O-上的4個氫核。在圖2(C)中，各種碳的化學位移已在圖中標明。以上的核磁共振譜證明了單體的結構。二、聚乙二醇單甲醚-聚己內酯-聚磷酸酯三嵌段共聚物(mPEG-PCL-PPEEA)的合成和表徵(一)聚乙二醇單甲醚-聚己內酯(mPEG-PCL)大分子弓I發劑的合成和表徵各種分子量的端羥基聚乙二醇單甲醚-聚己內酯大分子引發劑是以聚乙二醇單甲醚為引發劑，在本體條件下引發己內酯單體聚合而成。通過調節聚乙二醇單甲醚的分子量以及己內酯與聚乙二醇單甲醚的投料比，可以得到不同分子量的聚乙二醇單甲醚-聚己內酯聚合物。異辛酸亞錫因其高催化效率及無毒性，是被最廣泛應用的內酯及交酯環狀單體開環聚合反應的催化劑，已被美國FDA批准作為食品添加劑。以mPEG45為引發劑，異辛酸亞錫(Sn(0ct)2)為催化劑製備聚合物，聚合反應在手套箱中進行，mPEG-PCL合成的具體實驗步驟如下1)將進行反應的圓底燒瓶經多次的抽真空火焰乾燥和充氮氣的處理後，放入手套箱。2)按表1的配比進行投料向燒瓶中加入mPEG45、CL單體和Sn(0ct)2，在120°C攪拌下反應。3)反應24小時後，將產物移出手套箱，用少量的CH2Cl2溶解，將溶液沉澱到冷的乙醚中，反覆兩次，收集沉澱物，用油泵抽乾至恆重為止，即得產物。不同投料比可得到不同的產物，如此得到了一系列mPEG-PCL共聚物，見表l。表l不同投料比(摩爾比)合成mPEG-PCLmPEG45CL單體Sn(0ct)2mPEG-PCLa1400.025mPEG45-PCUs11100.025mPEG45—PCL100聚合物右下角的數字代表聚合物根據^麗R得到的聚合度對上述raPEG-PCL共聚物進行核磁共振氫譜CH蘭R)分析，測定其聚合度和數均分子量。用凝膠滲透色譜(GPC)法以聚苯乙烯為標準分析mPEG-PCL共聚物的數均分子量和分子量分布PDI(分子量分布寬度指數)。聚合度、數均分子量和分子量分布PDI見表2。GPC譜見圖3(A)和圖3(B)。'H麗R譜見圖4。表2mPEG-PCL聚合物的表徵mPEG-PCLMn(g/mol)aMn(g/mol)bPDIamPEG45-PCL4s1050071301.46mPEG45-P(X1M22510134001.45GPC測定；b'H麗R測定。由表2可見，根據'HNMR計算結果，mPEG45-PCU5的數均分子量為7130g/mol，對應的嵌段PCL45的數均分子量為5130g/mol;mPEG45-PCU。的數均分子量為13400g/mol，對應的嵌段PCL咖的數均分子量為11400g/mol。圖3(A)對應mPEG45-PCL45;圖3(B)對應mPEG45-PCL10。。從圖中可以看到兩種聚合物呈現的都是規整的單峰，並具有相對較窄的分子量分布。圖4(A)對應mPEG45-PCU;圖4(B)對應mPEG45-PCL1QQ。經過對比可以看到raPEG45-PCL45和mPEG45-PCU。具有相似的譜，分析如下字母a到f標記了歸屬mPEG-PCL的所有質子信號，聚s-己內酯的聚合度通過4.02ppm的三重峰(歸屬於聚己內酯的-C(O)OQU與3.63ppm的單峰(歸屬於聚乙二醇單甲醚的-CH2CH「)的積分面積比計算得到。(二)聚乙二醇單甲醚-聚己內酯-聚磷酸酯三嵌段共聚物(mPEG-PCL-PPEEA)的合成和表徵以mPEG-PCL為引發劑，異辛酸亞錫(Sn(0ct)2)為催化劑製備聚合物，聚合反應12在手套箱中進行。在反應前，mPEG-PCL大分子引發劑用乾燥的甲苯共沸兩次，減壓抽乾。合成路線如圖l(D)。合成mPEG-^PCL-Z^PPEEABoc的具體步驟如下1)將進行反應的圓底燒瓶經多次的抽真空火焰乾燥和充氮氣的處理後，放入手套箱。2)按表2的比例進行投料往25mL燒瓶中加入mPEG-PCL、PEEABoc和THF，保證PEEABoc的起始濃度為lmol/L。在30°C下攪拌30分鐘後，加入Sn(0ct)2。3)反應3小時後，將反應液濃縮，在0°C下沉澱到10:l(v/v)的乙醚/甲醇混合溶劑中，過濾，將固體抽乾，即得到mPEG-i^PCL-Z7"PPEEABoc。4)取1g上述聚合物溶於10mL無水THF，加入20mL的6MHC1/THF溶液使得HC1最終的濃度為4M。在0°C下攪拌反應2小時後，將反應液濃縮，用冷的乙醚沉澱，過濾，抽乾固體，即得到mPEG-^PCL-Z^PPEEA聚合物。表3不同投料比(摩爾比)合成mPEG-PCL-PPEEABoc聚合物PPEEABocmPEG-PCLSn(Oct)2mPEG--PCL--PPEEABoca2011mPEG45-PCL45-PPEEABoc73011mPEG45--PCL1C,。-PPEEABoc12聚合物右下角的數字代表聚合物根據^醒R得到的聚合度用凝膠滲透色譜(GPC〕法以聚苯乙烯為標準分析mPEG-PCL-PPEEABoc共聚物的數均分子量和分子量分布PDI(分子量分布寬度指數)。需要指出，由於脫保護後的mPEG-PCL-PPEEA很難用GPC表徵，所以所列的分子量及分子量分布都是指脫保護前的mPEG-PCL-PPEEABoc。對mPEG-PCL-PPEEABoc和mPEG-PCL-PPEEA進行核磁共振氫譜NMR)分析，測定其聚合度和數均分子量。mPEG-PCL-PPEEABoc的聚合度、數均分子量和分子量分布PDI見表4。mPEG-PCL-PPEEABoc的GPC譜見圖3(C)和圖3(D)。mPEG45-^PCL-Z^PPEEABoc和mPEG45-^PCL-Z^PPEEA的^麗R譜見圖5。表4聚合物的表徵mPEG-PCL--PPEEABocMna(g/mol)Mnb(g/mol)PDIamPEG-PCL--PPEEAMnb(g/mol)raPEG45--PCU5-PPEEABoc11740■01.40mPEG45--PCU「PPEEA76550mPEG45-PCL1013-PPEEABoc1225240166001.49mPEG45-PCL101「PPEEA1215840GPC測定；blH腿R測定。由表4可見，根據'H麗R計算結果，mPEG45-PCL45-PPEEABoc的數均分子量為9000g/mo1，對應的嵌段PPEEABoc7的數均分子量為1870g/mol;脫保護後對應的mPEG45-PCL45-PPEEA7的數均分子量為6550g/mol,對應的嵌段PPEEA7的數均分子量為1，420g/mol;mPEG45-PCU。-PPEEABoc,2的數均分子量為16600g/mol，對應的嵌段PPEEABod2的數均分子量為3200g/mol;脫保護後對應的mPEG45-PCL腦-PPEEA12的數均分子量為15840g/mol，對應的嵌段PPEEA^的數均分子量為2430g/mol。圖3(C)對應mPEG45—卜PCU—&PPEEABoc7;圖3(D)對應mPEG45—ZrPCL咖—ZrPPEEABoc12。從圖中可以看到聚合物呈現的都是規整的單峰，並具有相對較窄的分子量分布。與mPEG-PCL大分子引發劑(圖3(A)和圖3(B))比較可以看到mPEG-PCL-PPEEABoc聚合物的分子量向高分子量方向移動。圖5(A)對應脫保護前的mPEG45-Z^PPEEABoc7;圖5(B)對應脫保護後的mPEG45-/^PCU-Z^PPEEA7;圖5(C)對應脫保護前的mPEG45-/r"PCL咖-Z^PPEEABoc12;圖5(D)對應脫保護後的mPEG45-^PCU。-卜PPEEAi2。與圖4(A)相比較，圖5(A)和圖5(C)出現了幾個新的信號，如在1.401.48ppm處的多峰對應的除PCL鏈段上的e處的亞甲基的質子信號外，明顯多出了聚磷酸酯側基Boc保護基團上甲基的9個氫核(j)的質子信號，在4.35ppm處出現的信號對應於聚磷酸酯主鏈段上-0-C払—0-的4個氫核(g)的峰，在4.20ppm和3.41ppm出現的質子峰則歸屬於聚磷酸酯鏈段側基上的-0-Cl2(h)-(l2(i)-NH-的信號。聚磷酸酯鏈段的聚合度是根據H麗R圖中在4.35ppm處的聚磷酸酯主鏈上的質子(g)積分面積與在3.63ppm處的聚乙二醇主鏈上的質子(b)積分面積之比計算的。這些聚磷酸酯鏈段上特徵信號峰的出現證明了嵌段聚合物的生成。將raPEG45-PCL，-PPEEABod2三嵌段聚合物在無水的HC1/THF溶液中反應脫去Boc的保護基團，圖5(B)和圖5(D)給出了脫保護後'H-NMR譜圖的變化。從中可以發現，Boc基團上的1.48ppm處的強峰消失，而在8.42ppm處出現了一個鈍峰，對應於側鏈胺基的活潑氫，從而證明了脫保護的成功進行，並且從圖中相應峰的積分面積計算己內酯和磷酸酯鏈段保持完整，沒有發生降解等副反應，相應鏈段的聚合物均沒有變化。實施例2、用mPEG-PCL-PPEEA共聚物製備納米顆粒1、納米顆粒的製備兩親性嵌段共聚物在水溶液中存在疏水嵌段的疏水相互作用，只要共聚物濃度高於臨界聚集濃度即可形成納米顆粒。製備納米顆粒的方法有多種，最簡單常見的就是溶劑揮發法，具體方法為將10mgmPEG-PCL-PPEEA三嵌段共聚物溶於lmL四氫呋喃中，室溫下攪拌1小時，然後在攪拌下以60mL/h的速度滴入10mL超純水，再攪拌兩小時後，於減壓下抽掉有機溶劑，定容到IOmL，得到lmg/mL的納米顆粒溶液。通過上述方法分別製備lmg/mL的mPEG45-PCU-PPEEA7納米顆粒溶液和lmg/mL的mPEG45-PCUfPPEEA^納米顆粒溶液。2、臨界聚集濃度(CAC)的測定以芘為螢光探針表徵兩親性聚合物的聚集體的臨界聚集濃度是最為常見和有效的方法。將上述配製的1mg/mL的納米顆粒溶液稀釋成一系列濃度，同時保證每一濃度下芘的濃度保持6X10—、01/L不變。固定最大發射波長在390nm，掃描芘的激發光譜。見圖6(A)和(B)。圖6為芘在不同濃度raPEG-PCL-PPEEA聚合物溶液中的激發光譜。圖6(A)為raPEG45-PCL45-PPEEABoc7;圖6(B)為mPEG45-PCU。-PPEEABoc12。由圖可見，兩圖的變化趨勢一致。隨著聚合物濃度的增加，芘探針的螢光光譜發生了顯著的變化，首先是峰的強度逐漸增強，其次是其(0，0)吸收譜帶從336nm紅移到339nm，這些變化是由於芘由水環境轉移至疏水環境，意味著核殼結構的納米顆粒的形成。結合上述的激發光譜，計算每個聚合物濃度下339nm和336nra時峰的強度比，即1339/13:,6，將一系列的1339/1336對相應的濃度的對數作圖，見圖6(C)，圖中的Log特指Log10。由圖6(C)可見，兩條曲線均呈S型，在低濃度下，聚合物的螢光強度基本穩定，當達到一定濃度後，其比值開始迅速增大，表明芘選擇性的由水環境進入疏水核中，此時納米顆粒形成。繼續增大聚合物濃度時，螢光強度到達一個平臺，不再增大，這表明共聚物在水中已完全自組裝形成了以聚己內酯為疏水核的納米顆粒。CAC值可由水平線與斜線切線的交點確定。利用上述方法求得mPEG45-PCL45-PPEE&和mPEG45-PCL1M-PPEEA12的CAC值分別為3.57X10—3和2.68X10-3mg/mL。可以發現，隨著疏水鏈段聚己內酯的增加，聚合物的CMC值減小，表明隨疏水相互作用的增強，聚合物膠束更易形成。CAC的大小直接反應了聚合物顆粒在水溶液中的穩定性，其值愈小表明組裝顆粒的穩定性愈高。15本發明中的聚合物的CAC值與一般的小分子表面活性劑相比，低了近兩個數量級，表明此聚合物較好的穩定性。3、納米顆粒的形態利用透射電子顯微鏡觀察mPEG-PCL-PPEEA共聚物所形成的納米顆粒的形態。如圖7(A)和圖7(B)所示，圖7(A)對應mPEG45-PCU-PPEEA7;圖7(B)對應mPEG45-PCLI0。-PPEEA12o由圖可見，兩種mPEG-PCL-PPEEA共聚物所形成的納米顆粒都呈現規整的球形結構，粒徑約為20nm和60nra且大小分布均一。4、納米顆粒的粒徑和zeta電勢通過型號為MalvernZetasizerNanaoZS90的動態光散射儀檢測濃度為0.1mg/mL的mPEG-PCL-PPEEA納米顆粒的粒徑與粒徑分布。圖7(C)和圖7(D)分別是聚合物mPEG45-PCL45-PPEEA7的粒徑和zeta電勢的結果，圖7(E)和圖7(F)分別是聚合物mPEG45-PCL1。-PPEEA^的粒徑和zeta電勢的結果。mPEG45-PCL45-PPEEA7納米顆粒的平均直徑為27.7nm，粒徑分散度(PDI)為0.20，zeta電勢為32.3mV。mPEG45-PCU。-PPEEA^顆粒的平均直徑在121nra,粒徑分散度(PDI)為0.09，zeta電勢為45mV。需要指明的是，利用動態光散射測量的粒徑比透射電子顯微鏡的結果偏大，這主要是因為動態光散射測量的是納米顆粒在水溶液中的流體動力學半徑，而透射電鏡測量的是納米顆粒在脫水狀態的粒徑。但是不管哪種測量方法均顯示上述三嵌段聚合物的納米顆粒都具有均勻的粒徑分布。這些正電荷除了可以穩定納米顆粒外，更主要的作用是可以結合siRNA，起到傳輸siRNA的作用。5、mPEG-PCL-PPEEA納米顆粒的生物相容性將上述配製的1mg/mL的納米顆粒溶液稀釋為1.95-500ng/raL。通過MTT方法測定不同濃度mPEG-PCL-PPEEA共聚物納米顆粒的細胞毒性。具體試驗為將不同濃度的raPEG45-PCL45-PEEP7納米顆粒溶液和不同濃度的mPEG45-PCU。-PEEP^納米顆粒溶液分別與HEK293細胞共培養24小時後，分別測細胞存活率，以PEI作為對照實驗。不同處理下細胞的存活率見圖8。由圖可見，當聚合物濃度從1.95^/mL增大到500)ug/mL，兩種納米顆粒對細胞活力都沒有明顯的影響，細胞活力一直維持在100%左右，表明上述納米顆粒具有良好的生物相容性。實施例3、raPEG-PCL-PPEEA納米顆粒作為siRNA載體的應用siRNA是一種由二十多個核苷酸組成的雙鏈小分子RNA，帶有負電荷，可與帶正電的mPEG-PCL-PPEEA納米顆粒通過正負電荷作用形成穩定的複合物。N/P指的是納米顆粒的胺基正電荷與siRNA磷酸基團的負電荷的比值。1、納米顆粒與siRNA複合物的表徵按照實施例2的方法製備濃度為5mg/mL的mPEG45-PCL45-PEEP7納米顆粒溶液。綠色螢光蛋白GFPsiRNA，序列為GCAAGCTGACCCTGAAGTTCAT,購自上海吉瑪製藥技術有限公司，將10DGFPsiRNA溶解在150fiLDEPC處理的水中，得到濃度為20^MsiRNA溶液。上述納米顆粒與上述siRNA溶液分別按不同N/P比混合，製備不同的mPEG45-PCL45-PEEP7納米顆粒與siRNA複合物。通過動態光散射測量以上納米顆粒或納米顆粒與siRNA複合物的粒徑和粒徑分布。通過Zeta電勢測量以上納米顆粒或納米顆粒與siRNA複合物的表面的電勢。圖9(A)為在N/P比分別為1:0、1:1、5:1時，mPEG45-PCL45-PEEP7納米顆粒與siRNA複合物的粒徑變化。圖9(B)為N/P比分別為1:0和1:1時mPEG45-PCL45-PEEP7納米顆粒納米顆粒與siRNA複合物的表面電位變化。從圖9(A)圖可見，當N/P比為1:0，即只有納米顆粒時，複合物粒徑最大為121nm，當N/P比為1:1時，複合物粒徑最小，為98士1.4nm。而隨著N/P比的增加，複合物粒徑增大，並接近N/P比為l:O時的粒徑。從圖9(B)圖可見，在N/P為l:O時，複合物的表面電位最大，為45mV，當N/P比為1:1時，複合物表面電位降低到-10.7±0.76raV，表明mPEG-PCL-PPEEA納米顆粒通過電荷相互作用與siRNA結合形成複合物。不同N/P比形成的raPEG45-PCU-PEEP7納米顆粒與siRNA複合物的粒徑和表面電位見表5。表5不同N/P比形成的複合物的粒徑和表面電位N/P比直徑士標準差(nm)分散度表面電位士標準差(mV)198±1.40.033-10.7±0.765115±0.70.15730.0±1.0210116±0.50.11734.7±0.5550125±1.30.12337.0±0.752、納米顆粒與siRNA複合物的細胞吞噬171)mPEG45-PCU。-PPEEA^納米顆粒與siRNA複合物的細胞吞噬將0.5pLPKH26染料加入到lmL濃度為5mg/mL的mPEQ-PCL-PPEEA!2納米顆粒溶液中，室溫放置過夜，然後用超純水透析除去沒有進入納米顆粒疏水性核的PKH26染料。螢光染料FAM標記的綠色螢光蛋白GFPsiRNA，序列為GCAAGCTGACCCTGAAGTTCAT,購自上海吉瑪製藥技術有限公司，將10DGFPsiRNA溶解在150pLDEPC處理過的水中，得到濃度為20|_iMGFPsiRNA溶液。上述納米顆粒與上述siRNA溶液按N/P=50混合，製備mPEG45-PCL咖-PPEEAi2納米顆粒與siRNA複合物。將上面製備好的mPEG45-PCU。-PPEEA^納米顆粒與siRNA複合物與HEK293細胞在37"C共同培養2小時後，用Hoechst33342對細胞核染色，最後用4%甲醛溶液室溫下固定細胞30分鐘，用雷射共聚焦顯微鏡觀察細胞吞噬納米顆粒的結果，見圖10。圖10給出了HEK293細胞吞噬mPEGfPCUfPPEEAu納米顆粒雷射共聚焦顯微鏡觀察的結果，細胞內綠色的部分是FAM標記的siRNA，細胞內紅色的部分是PKH26標記的納米顆粒，細胞內藍色的部分是細胞核。通過三種顏色疊加的結果可以看出納米顆粒與siRNA在細胞內分離，而且納米顆粒並沒有進入細胞核，siRNA主要分布在細胞胞漿中。圖10中，圖10(A)為在488nm激發光下的雷射共聚焦顯微鏡照片，顯示的是FAM標記的siRNA;圖10(B)為在551nm激發光下的雷射共聚焦顯微鏡照片，顯示的是PKH26標記的納米顆粒；圖10(C)為在346nm激發光下的雷射共聚焦顯微鏡照片，顯示的是細胞核；圖10(D)為圖10(A)、圖10(B)和10(C)的疊加結果。由圖可以看出納米顆粒與siRNA在細胞內分離，而且納米顆粒並沒有進入細胞核，siRNA主要分布在細胞胞漿中。表明mPEG45-PCLhktPPEEA^納米顆粒能夠有效的將siRNA運輸到細胞內，並能夠與siRNA分離，使siRNA發揮基因沉默的作用。2)mPEG45-PCU-PPEEA7納米顆粒與siRNA複合物的細胞吞噬同步驟l)，結果見圖11。圖11中，圖11(A)為在488nm激發光下的雷射共聚焦顯微鏡照片，顯示的是FAM標記的siRNA;圖ll(B)為在551nm激發光下的雷射共聚焦顯微鏡照片，顯示的是PKH26標記的納米顆粒；圖ll(C)為在346nm激發光下的雷射共聚焦顯微鏡照片，顯示的是細胞核；圖11(D)為圖11(A)、圖11(B)和11(C)的疊加結果。圖11顯示的結果與圖10顯示的mPEG站-PCU。-PPEEA,2納米顆粒的細胞吞噬結果相似。3、納米顆粒與siRNA複合物沉默基因表達1)納米顆粒與siRNA複合物對綠色螢光蛋白基因的沉默綠色螢光蛋白GFPsiRNA，序列為GCAAGCTGACCCTGAAGTTCAT，購自上海吉瑪製藥技術有限公司。將300ngpEGFP-N2質粒(Clontech)用Lipofectamine2000轉染入HEK293細胞，稱為HEK293-pEGFP-N2。實驗共設以下幾種處理將lOOpmol綠色螢光蛋白GFPsiRNA溶解在50pLOpti-MEM中，然後向其中加入60|il的5mg/mL的mPEG45-PCL咖-PPEEA12，得到N/P=50的mPEG45-PCL咖-PPEEA12納米顆粒與siRNA複合物溶液。將溶液在室溫下靜置20分鐘後，加入到已經轉染了pEGFP-N2質粒(Clontech)6小時的HEK293細胞中。將lOOpmol綠色螢光蛋白GFPsiRNA溶解在50fiL0pti-MEM中，然後向其中加入60jil的5mg/mL的mPEG45-PCU-PPEEA7，得到N/P=50的mPEG45-PCL45-PPEEA納米顆粒與siRNA複合物溶液。將溶液在室溫下靜置20分鐘後，加入到已經轉染了pEGFP-N2質粒(Clontech)6小時的HEK293細胞中。以HEK293-pEGFP-N2細胞作為對照1;用Lipofectamine2000轉染LuciferasesiRNA的複合物轉染HEK293-pEGFP-N2細胞，作為陽性對照(LuciferasesiRNA的終濃度為20pmol/孔)；用游離的LuciferasesiRNA轉染服K293-pEGFP-N2細胞，作為對照2(LuciferasesiRNA的終濃度為20pmol/孔)。用螢光倒置顯微鏡對處理48小時後的HEK293細胞拍照，照片見圖12。圖12(A)為對照1;圖12(B)為陽性對照；圖12(C)為對照2;圖12(D)對應mPEG45-PCL咖-PPEEA12;圖12(E)對應mPEG45-PCL45-PPEEA7。由圖可見，單獨的siRNA對細胞中的基因表達沒有明顯影響，Lipofectamine2000轉染的siRNA明顯降低了GFP在細胞中的表達水平，mPEG-PCL-PPEEA納米顆粒在100pmol/孔的濃度下顯著降低細胞中GFP的表達。以轉染了pEGFP-N2質粒(Clontech)的HEK293細胞中GFP的表達水平計作100X，轉染了pEGFP-N2質粒和單獨的siRNA的細胞中GFP表達水平為99.3%，利用Lipofectamine2000轉染GFPsiRNA的細胞內GFP表達水平為54.5%，利用mPEG45-PCU。-PPEEA^轉染GFPsiRNA的細胞內GFP表達水平為51.5%，利用raPEG45-PCUs-PPEEA7轉染GFPsiRNA的細胞內GFP表達水平為72.3%。2)納米顆粒與siRNA複合物對螢火蟲螢光素酶基因的沉默Luciferase是螢火蟲螢光素酶，能夠催化反應底物發出可見光，根據酶的反應均一性，可以定量的測定Luciferase基因的表達水平。LuciferasesiRNA，對應序列為CTTACGCTGAGTACTTCGA，購自上海吉瑪製藥技術有限公司。將300ngpGL3質粒(Promega)用Lipofectamine2000轉染入HEK293細胞，稱為HEK293-pGL3。將lOOpmolLuciferasesiRNA溶解在50nlOpti-MEM中，然後向其中加入60fil的5rag/raL的mPEG-PCL-PPEEA，得到N/P=50的mPEG-PCL-PPEEA納米顆粒與siRNA複合物溶液。將溶液在室溫下靜置20分鐘後，加不同體積到已經轉染了pGL3質粒6小時的HEK293細胞中，使LuciferasesiRNA的終濃度分別為20pmol/孔、50pmol/孔、100pmol/孔、150pmol/孔、200pmol/孔。以HEK293-pGL3細胞作為對照1(MOCK);用Lipofectamine2000轉染LuciferasesiRNA的複合物轉染HEK293-pGL3細胞，作為陽性對照(LuciferasesiRNA的終濃度為20pmol/孔);用游離的LuciferasesiRNA轉染HEK293-pGL3細胞，作為對照2(LuciferasesiRNA的終濃度為20pmol/孔)。用VeritasMicroplateLuminometer檢測處理48小時後螢光素酶的相對表達量，見圖13。圖13(A)為mPEG45-PCL1M-PPEEA12;圖13(B)為mPEG45-PCU-PPEEA7。由圖13(A)可見，結果顯示當N/P二50時，隨著siRNA劑量的增力口，Luciferase表達量降低。mPEG45-PCU。-PPEEAu納米顆粒轉染150pmolsiRNA與Lipofectamine2000轉染20pmolsiRNA相比，細胞內Luciferase的表達量相當。由圖13(B)可見，結果顯示當N/P二50時，mPEG45-PCU廠PPEEA7納米顆粒具有與mPEG45-PCL咖-PPEEA^納米顆粒相似的轉染siRNA的能力，隨著siRNA劑量的增加，細胞中Luciferasede表達量降低。在相同siRNA劑量(pmol/孔)的情況下，用不同N/P比(N/P為50、75、100)製備納米顆粒與siRNA的複合物，用上述複合物轉染HEK293-pGL3細胞，分別以HEK293-pGL3細胞(MOCK)、轉染游離的LuciferasesiRNA的HEK293-pGL3細胞和用Lipofectamine2000轉染LuciferasesiRNA的HEK293-pGL3細胞作為對照，用VeritasMicroplateLuminoraeter分別檢測上述不同複合物處理48小時後Luciferase的相對表達量，見圖13(C)。由圖可見，隨著N/P比的增加，Luciferase的表達量下降。2權利要求1、一種siRNA的藥物載體，它的活性成分是聚合物形成的帶正電荷的納米顆粒。2、如權利要求1所述的藥物載體，其特徵為所述納米顆粒進行了化學修飾或配體修飾。3、如權利要求1所述的藥物載體，其特徵為所述聚合物為聚乙二醇單甲醚-聚己內酯-聚磷酸酯三嵌段共聚物。4、如權利要求3所述的藥物載體，其特徵為所述聚己內酯為聚s-己內酯，所述聚磷酸酯由結構式如式(I)的五元環狀磷酸酯單體聚合而成5、如權利要求4所述的藥物載體，其特徵為所述三嵌段共聚物中，中間嵌段是所述聚己內酯，一個末端嵌段是聚乙二醇單甲醚，另一個末端嵌段是所述聚磷酸酯；所述聚乙二醇嵌段的聚合度為45,對應的數均分子量為2000g/mol;所述聚己內酯嵌段的聚合度為45-100，對應的數均分子量為5，130-11，400g/mol;所述聚磷酸酯嵌段的聚合度為7-12，對應的數均分子量為1，420-2，430g/mo1。6、如權利要求5所述的藥物載體，其特徵為所述三嵌段共聚物為mPEG45-PCU-PPEEA7或mPEG45-PCL100-PPEEA12。7、一種聚乙二醇單甲醚-聚己內酯-聚磷酸酯三嵌段共聚物，所述聚己內酯為聚s-己內酯，所述聚磷酸酯由結構式如式(I)的五元環狀磷酸酯單體聚合而成(I)。8、如權利要求7所述的三嵌段共聚物，其特徵為所述三嵌段共聚物中，中間嵌段是所述聚己內酯，一個末端嵌段是聚乙二醇單甲醚，另一個末端嵌段是所述聚磷酸酯，所述聚乙二醇單甲醚嵌段的聚合度為45，對應的數均分子量為2，000g/mol;所述聚己內酯嵌段的聚合度為45-100，對應的數均分子量為5，130-11，400g/mol;所述聚磷酸酯嵌段的聚合度為7-12,對應的數均分子量為1，420-2，430g/mo1。9、如權利要求7或8所述的共聚物，其特徵為所述三嵌段共聚物為raPEG45-PCU-PPEEA7或mPEG45-PCL咖-PPEEAi2。10、一種合成聚乙二醇單甲醚-聚己內酯-聚磷酸酯三嵌段共聚物的方法，是以端羥基聚乙二醇單甲醚-聚己內酯為大分子引發劑，以異辛酸亞錫為催化劑，通過環狀磷酸酯單體的開環聚合反應得到三嵌段共聚物；所述端羥基聚乙二醇單甲醚-聚己內酯是以聚乙二醇單甲醚為引發劑，以異辛酸亞錫為催化劑，在本體條件下引發己內酯單體聚合而成；所述環狀磷酸酯單體通過2-氯-2-氧-1，3，2-二氧磷雜環戊垸和N-叔丁氧羰基胺基乙醇反應得到；所述2-氯-2-氧-l，3，2-二氧磷雜環戊烷通過乙二醇和三氯化磷反應得到；所述N-叔丁氧羰基胺基乙醇(EABoc)通過乙醇胺和二碳酸二叔丁酯反應得到。全文摘要本發明公開了一種siRNA的藥物載體，它的活性成分是聚合物形成的帶正電荷的納米顆粒，該聚合物具體可為聚乙二醇單甲醚-聚己內酯-聚磷酸酯三嵌段共聚物。本發明還提供了一種聚乙二醇單甲醚-聚己內酯-聚磷酸酯共聚物以及合成該共聚物的方法。本發明提供生物相容性的三嵌段共聚物，在水溶液中自組裝形成納米顆粒，具有良好的穩定性，製備方法簡單，可重複性高。採用聚合物納米顆粒作為載體能保護siRNA免於降解，又能結合納米顆粒本身的尺度效應。這種納米膠束具有良好的生物相容性，同時高分子膠束具有很好的穩定性和方便製備等特點，使得這類生物可降解的納米膠束在siRNA輸送和基於RNA幹擾的疾病治療中具有良好的應用前景。文檔編號A61K47/34GK101474408SQ20081005594公開日2009年7月8日申請日期2008年1月2日優先權日2008年1月2日發明者孫天盟,杜金志,均王申請人:中國科學技術大學