一種採用發光菌毒性試驗準確檢測水質毒性的方法

2023-10-05 02:05:59 1

專利名稱：一種採用發光菌毒性試驗準確檢測水質毒性的方法
技術領域：
本發明涉及一種水質毒性的檢測方法，具體涉及一種採用發光菌毒性試驗準確檢 測水中有機物質和無機物質的毒性的方法。
背景技術：
為了保障飲水安全，降低環境惡化給飲用水水質帶來的威脅，人們常採用各種方 法對水質進行評價，以有效的掌握飲用水引起的健康風險。發光菌毒性試驗是經典的綜合生物毒性評價方法之一，因細菌生長周期短，對環 境變化敏感等特點，其發光強度的變化程度與毒物質量濃度在理論上呈線性相關。以發光 菌為代表的細菌類試驗在國內外得到廣泛的應用，許多國家已將發光菌方法作為標準的毒 性測試方法。目前也有發光菌毒性儀應用在了水質預警檢測上，作為水質安全的有力屏障 之一。但已有研究表明，不論是海洋發光菌還是淡水發光菌，在檢測水質中的無機物時非常 靈敏、準確，但是在檢測有機物時卻表現出不同的效果。用發光菌對有機物進行檢測時，相 對於陰性對照，有機物不但不抑制發光菌的發光性，反而促進其發光性。由於水中可能含有 有機和無機的多種物質，如果用傳統的發光菌毒性試驗進行水質綜合毒性評價的話勢必會 使結果產生很大的偏差。由於這種原因，發光菌毒性試驗在檢測水中綜合毒性時受到了很 大的阻礙。

發明內容
本發明針對上述發光菌毒性試驗存在的不足，提供了一種採用發光菌毒性試驗準 確檢測水質毒性的方法，該方法對發光菌進行了處理，使有機物也同樣的抑制其發光性，從 而能同時檢測水質中無機物質和有機物質的綜合毒性，使檢測結果更加準確。本發明是通過以下措施實現的
發明人在進行發光菌毒性試驗時發現，有機毒物不但不會抑制發光菌的發光性，還具 有促進作用，這樣在測定含有有機和無機毒性物質的水樣使會使測量結果發生錯誤，偏離 真實數據，發明人經創造性實驗，發現在將發光菌用於檢測毒性物質前，先對其進行一定的 培養，則可使發光菌對有機物質也同樣具有發光抑制性，使檢測水質毒性時結果更加準確。 其具體技術方案如下
一種採用發光菌毒性試驗準確檢測水質毒性的方法，包括用發光菌對待測水樣進行發 光菌毒性試驗，以檢測其水質綜合毒性，其特徵是在試驗前對發光菌進行以下處理
(1)固體培養將發光菌在LB固體培養基中進行固體培養，培養條件為溫度 20-25°C，時間 20-24h ；
(2)液體培養將固體培養得到的發光菌菌種接種到液體LB培養基中，在20-25°C下 振蕩培養16_24h ；
(3)製備菌懸液取上述步驟(2)的含發光菌的液體培養基，進行離心分離，然後用無 菌生理鹽水進行懸浮，得OD值為0. 4-0. 9的菌懸液；(4)將待測水樣與菌懸液混合進行發光菌毒性試驗，測定待測水樣的發光菌抑制率。本發明所用的發光菌為青海弧菌。本發明中，發光菌毒性試驗的條件為菌懸液與待測水樣的體積比為1:1，反應時 間為 10-15min。上述方法中，液體培養時發光菌的接種量滿足所得發光菌的發光量在IO5-IO6的 要求。上述方法中，步驟(3)中離心分離的轉速為3000-4000r/min。進一步的，步驟(1)的培養條件為溫度22°C，時間Mh ；步驟(2)的培養條件為 溫度22°C，時間22h。有機毒性物質對發光菌起增強發光的原因可能是原先發光菌處於貧營養的狀態， 一開始接觸有機毒物時將其作為碳源，本發明對發光菌進行了處理，發光菌就不處於原始 的貧營養狀態，使有機毒性物質和無機毒性物質均能夠抑制發光菌的發光強度，從而提高 了採用發光菌毒性試驗檢測水質毒性的準確性，解決了發光菌不能正確反應水質綜合毒性 的問題。本方法費時較少、靈敏度高、操作簡便、結果準確，能夠對水質汙染狀況做出判斷， 為突發性水質汙染和水廠的水處理技術提供支持，降低由於飲用水暴露導致的風險。
具體實施例方式下面通過具體實施例對本發明進行進一步的闡述，應該明白的是，下述說明僅是 為了解釋本發明，並不對其內容進行限定。本發明所用的LB固體培養基的配方如下胰蛋白腖10g/L、酵母提取物5g/L、 氯化鈉10g/L、瓊脂粉18g/L。本發明所用的LB液體培養基的配方如下胰蛋白腖10g/L、酵母提取物5g/L、 氯化鈉10g/L。實施例1
以青海弧菌為例，檢測其進行前處理和不進行處理時對同一種物質的發光抑制率情
況
採用本發明的方法製備青海弧菌菌懸液將青海弧菌在LB固體培養基上於22°C培養 Mh，將30個單菌落菌種接種到150ml液體LB培養基中，22°C振蕩培養20h ；取含有青海弧 菌的液體培養基在4000r/min的離心條件下進行離心分離，再用無菌生理鹽水進行懸浮， 得OD值為0. 9的菌懸液；
未經處理的青海弧菌直接配成OD為0. 9的菌懸液。將三氯甲烷0. lmg/L、溴氰菊酯0. 02mg/L、四氯化碳0. 02mg/L、鐵0. 25 mg/L分別 於菌懸液按1:1的體積比混合，曝光IOmin後檢測發光抑制率，其結果見表1。
權利要求
1.一種採用發光菌毒性試驗準確檢測水質毒性的方法，包括用發光菌對待測水樣進行 發光菌毒性試驗，以檢測其水質綜合毒性，其特徵是在試驗前對發光菌進行以下處理(1)固體培養將發光菌在LB固體培養基中進行固體培養，培養條件為溫度20-25°C， 時間 20-24h ；(2)液體培養將固體培養得到的發光菌菌種接種到液體LB培養基中，在20-25°C下振 蕩培養16-24h ；(3)製備菌懸液取上述步驟(2)的含發光菌的液體培養基，進行離心分離，然後用無 菌生理鹽水進行懸浮，得OD值為0. 4-0. 9的菌懸液；(4)將待測水樣與菌懸液混合進行發光菌毒性試驗，測定待測水樣的發光菌抑制率。
2.根據權利要求1所述的方法，其特徵是所述發光菌為青海弧菌。
3.根據權利要求1所述的方法，其特徵是發光菌毒性試驗的條件為菌懸液與待測水 樣的體積比為1:1，反應時間為10-15min。
4.根據權利要求1所述的方法，其特徵是液體培養時發光菌的接種量滿足所得發光 菌的發光量在IO5-IO6的要求。
5.根據權利要求1所述的方法，其特徵是步驟(3)中離心分離的轉速為3000-40001·/min0
6.根據權利要求1-5中任一項所述的方法，其特徵是步驟(1)的培養條件為溫度 22°C，時間Mh ；步驟(2)的培養條件為溫度22°C，時間22h。
全文摘要
本發明公開了一種採用發光菌毒性試驗準確檢測水質毒性的方法，包括將發光菌在LB固體培養基中進行固體培養，然後將得到的發光菌菌種接種到液體LB培養基中進行培養；取含發光菌的液體培養基，進行離心分離，然後用無菌生理鹽水進行懸浮，得OD值為0.4-0.9的菌懸液；將待測水樣與菌懸液混合進行發光菌毒性試驗，測定待測水樣的發光菌抑制率。本發明對發光菌進行了處理，使有機毒性物質和無機毒性物質均能夠抑制發光菌的發光強度，從而提高了採用發光菌毒性試驗檢測水質毒性的準確性，解決了發光菌不能正確反應水質綜合毒性的問題。本方法費時較少、靈敏度高、操作簡便、結果準確。
文檔編號C12Q1/18GK102071244SQ20101058082
公開日2011年5月25日 申請日期2010年12月9日 優先權日2010年12月9日
發明者孫韶華, 宋豔, 賈瑞寶, 馬中雨 申請人:濟南市供排水監測中心