一種3,4‑二氫吡喃[3,2‑c]色烯‑5‑酮類化合物的合成方法及其應用與流程

2023-10-05 03:23:09

技術領域：

本發明屬於有機化學合成和藥物研發領域，具體涉及一種3,4-二氫吡喃[3,2-c]色烯-5-酮類化合物的合成方法及其應用。

背景技術：
：

新有機合成方法的獲得和新藥先導物的發現是我們多年研究的主要目標。目前，2,4,4-三甲基-2-取代苯基氨基-3,4-二氫吡喃[3,2-c]色烯-5-酮類化合物的合成方法，以及對2,4,4-三甲基-2-取代苯基氨基-3,4-二氫吡喃[3,2-c]色烯-5-酮類化合物進行活性測試，在現有技術中均未見報導。

技術實現要素：
：

本發明的目的在於克服現有技術的不足，提供3,4-二氫吡喃[3,2-c]色烯-5-酮類化合物的合成方法及其應用。本發明所提供的合成方法反應條件溫和、過程經濟、環保，合成操作簡單產物易於分離提純、產率高、過程經濟環保、不需使用任何催化劑。

本發明的第一個目的是提供一種3,4-二氫吡喃[3,2-c]色烯-5-酮類化合物的合成方法，包括如下步驟：在反應容器中分別加入4-羥基香豆素、苯胺、丙酮和有機溶劑混合均勻，4-羥基香豆素、苯胺和丙酮的摩爾比為1:0.5～4:1.2～10，將混合均勻後的反應混合物在40℃-140℃條件下攪拌反應10～14小時至反應完成，將得到的反應產物減壓蒸餾除去低沸點物質，獲得固體產物，用乙醇對固體產物進行重結晶，獲得3,4-二氫吡喃[3,2-c]色烯-5-酮類化合物。在本發明中，反應混合物的加熱方式選擇常見方式加熱或微波加熱均可實現。

本發明提出的合成方法簡單快速，合成反應步驟少、操作簡單、產物易於分離提純、產率高、過程經濟和環保、不需使用任何催化劑。

優選，所述的苯胺為取代苯胺，所述的取代苯胺中的取代基選自氫、烷基、芳基、取代芳基、滷素、三氟甲基、氨基、取代氨基、烷氧基、羧基、酯基和醯基中的一種。

優選，所述的有機溶劑選自丙酮、氯代烷、烷基苯、醚類和酯類溶劑中的一種。在本發明中，4-羥基香豆素為固體，取代苯胺為固體或液體，丙酮為液體。當有機溶劑為丙酮時，丙酮既為反應物，同時也是溶劑，不需要使用任何催化劑，正是如此，該反應比較經濟、環保。本發明也可以選用其他溶劑，如氯代烷、烷基苯、醚類和酯類溶劑，該反應也可進行。

進一步的，所述的有機溶劑為丙酮，反應溫度為60℃-80℃。

進一步的，所述的有機溶劑選自氯代烷、烷基苯、醚類和酯類溶劑中的一種，反應溫度為60℃-80℃。

優選，4-羥基香豆素、苯胺和丙酮的摩爾比為1:1:2.5。

本發明的第二個目的是提供根據上述的合成方法製備得到的3,4-二氫吡喃[3,2-c]色烯-5-酮類化合物，結構式如式1所示：

其中：r選自氫、烷基、芳基、滷素、三氟甲基、氨基、取代氨基、烷氧基、羧基、酯基和醯基中的一種。

本發明提出的3,4-二氫吡喃[3,2-c]色烯-5-酮類化合物，以4-羥基香豆素、丙酮和取代苯胺為原料，合成路線特徵用以下反應式來表示：

其中：r選自氫、烷基、芳基、取代芳基、滷素、三氟甲基、氨基、取代氨基、烷氧基、羧基、酯基、醯基等。

優選，式1所示的3,4-二氫吡喃[3,2-c]色烯-5-酮類化合物如表1所示：

表1

本發明的第三個目的是提供3,4-二氫吡喃[3,2-c]色烯-5-酮類化合物在乙醯膽鹼酯酶抑制劑的應用。通過活性測試發現3,4-二氫吡喃[3,2-c]色烯-5-酮類化合物具有乙醯膽鹼酯酶的抑制活性，在抗老年痴呆方面具有明確的潛在應用價值。

本發明的第四個目的是提供一種防治抗老年痴呆的藥物，3,4-二氫吡喃[3,2-c]色烯-5-酮類化合物作為活性成分。

本發明與現有技術相比具有如下優點：

1.本發明提供的合成方法反應條件溫和、過程經濟、環保，合成操作簡單產物易於分離提純、產率高、過程經濟環保、不需使用任何催化劑。

2.本發明所製備的3,4-二氫吡喃[3,2-c]色烯-5-酮類化合物具有乙醯膽鹼酯酶的抑制活性，在抗老年痴呆方面具有明確的潛在應用價值。

具體實施方式：

以下實施例是對本發明的進一步說明，而不是對本發明的限制。

除特別說明，本發明中的實驗材料和試劑均為本技術領域常規市購產品。

實施例1：

2,4,4-三甲基-2-苯基氨基-3,4-二氫吡喃[3,2-c]色烯-5-酮的合成(化合物1)

合成方法1：在50ml圓底燒瓶中分別加入10.0毫摩爾(1.62克)4-羥基香豆素、10.0毫摩爾(0.93克)苯胺和25.0毫摩爾(1.74克)丙酮和5毫升丙酮混合均勻，將混合均勻後的反應混合物在70℃條件下攪拌12小時，該反應利用tlc跟蹤反應，直至反應完成。反應完成後獲得固體產物，把適量乙醇加入到固體產物中，進行重結晶獲得純產物。經計算該化合物1的產率65％。

1hnmr(400mhz,cdcl3)δ:7.89(dd,j1＝8.2hz,j2＝1.6hz,1h),7.50(dd,j1＝8.6hz,j2＝1.6hz,1h),7.36–7.18(m,4h),7.00(d,j＝7.6hz,2h),6.92(t,j＝7.3hz,1h),4.44(br,1h),2.33–2.11(m,2h),1.82(s,3h),1.66(s,3h),1.56(s,3h).13cnmr(75mhz,cdcl3)δ:161.2,157.1,152.6,142.8,131.4,129.1,123.7,123.2,121.1,119.4,116.3,116.2,108.5,89.2,49.6,30.8,28.8,28.6,25.4.esrmsm/z＝336.2[m+h]+。

依據合成方法1，反應溫度依次為40℃，60℃，80℃和90℃，經計算化合物1的產率依次為15％、63％、65％、61％。核磁數據顯示產物同反應溫度為70℃獲得同樣的產物。由此看出，在反應溫度為60℃～80℃時，化合物1的產率最高。

依據合成方法1，依次改變4-羥基香豆素、苯胺和丙酮的摩爾比例，由1:0.5:1.2至1:4:10，在70℃條件下攪拌反應12小時，得到產物的收率範圍為25％至65％。多次實驗結果表明，4-羥基香豆素、苯胺和丙酮的摩爾比例為1:1:2.5時的化合物1的產率最高，最為經濟。

依據合成方法1，反應溫度控制在70℃，反應時間分別為4小時、8小時、10小時、12小時、14小時和18小時，後處理得到的化合物1的產率依次為18％、44％、60％、65％、63％和59％。核磁數據顯示產物為化合物1。由此看出，在反應溫度為70℃，反應時間為12小時，化合物1的產率最高。

合成方法2：在50ml圓底燒瓶中分別加入10.0毫摩爾(1.62克)4-羥基香豆素、10.0毫摩爾(0.93克)苯胺和25.0毫摩爾(1.74克)丙酮以及5毫升四氫呋喃，把反應混合物在60-870℃條件下攪拌12小時，該反應利用tlc跟蹤反應，直至反應完成。反應完成後，減壓蒸餾除去低沸點物質，獲得固體產物。把適量乙醇加入到固體產物中，進行重結晶獲得純產物。經計算該化合物1的產率67％。核磁數據顯示產物同合成方法1獲得同樣的產物。

使用丁醚、三氯甲烷、丁酮有機試劑來代替合成方法2中的四氫呋喃，其他反應條件不變，最後得到產物，經計算該化合物1的產率50％～65％，與合成方法1相近，核磁數據顯示產物同合成方法1獲得同樣的產物。

實施例2：

2,4,4-三甲基-2-(4-甲苯基氨基)-3,4-二氫吡喃[3,2-c]色烯-5-酮的合成(化合物2)

與實施例1的合成方法1相同，不同之處在於：取代苯胺為對甲苯胺，獲得化合物2，經計算化合物2的產率60％。

1hnmr(400mhz,cdcl3)δ:7.87(dd,j1＝7.9hz,j2＝1.6hz,1h),7.50(dd,j1＝7.3hz,j2＝1.6hz,1h),7.32–7.25(m,2h),7.06(d,j＝8.0hz,2h),6.94(d,j＝8.1hz,2h),4.49(br,1h),2.29(s,3h),2.26–2.10(m,2h),1.77(s,3h),1.63(s,3h),1.55(s,3h).13cnmr(75mhz,cdcl3)δ:161.3,157.3,152.6,140.1,131.3,131.0,130.5,129.6,128.4,123.6,123.2,120.6,116.2,108.4,89.7,49.6,30.8,28.7,26.9,26.5,25.3,20.6.esrmsm/z＝350.2[m+h]+.

依據合成方法1，反應溫度依次為40℃，60℃，80℃和90℃，經計算化合物2的產率依次為15％、58％、60％、52％。核磁數據顯示產物同反應溫度為70℃獲得同樣的產物。由此看出，在反應溫度為60℃～80℃時，化合物2的產率最高。

依據合成方法1，依次改變4-羥基香豆素、對甲苯胺和丙酮的摩爾比例，由1:0.5:1.2至1:4:10，在70℃條件下攪拌反應12小時，得到產物的收率範圍為20％至60％。多次實驗結果表明，4-羥基香豆素、對甲苯胺和丙酮的摩爾比例為1:1:2.5時的化合物2的產率最高，最為經濟。

依據合成方法1，反應溫度控制在70℃，反應時間分別為4小時、8小時、10小時、12小時、14小時和18小時，後處理得到的化合物2的產率依次為15％、40％、55％、60％、57％和54％。核磁數據顯示產物為化合物2。由此看出，在反應溫度為70℃，反應時間為12小時，化合物2的產率最高。

實施例3：

2,4,4-三甲基-2-(3-甲苯基氨基)-3,4-二氫吡喃[3,2-c]色烯-5-酮的合成(化合物3)

與實施例1的合成方法1相同，不同之處在於：取代苯胺為間甲苯胺，獲得化合物3，經計算化合物3的產率55％。

1hnmr(400mhz,cdcl3)δ:7.90(dd,j1＝8.1hz,j2＝1.6hz,1h),7.50(dd,j1＝8.6hz,j2＝1.6hz,1h),7.35–7.24(m,2h),7.12(t,j＝7.7hz,1h),6.89–6.78(m,2h),6.74(d,j＝7.5hz,1h),4.41(br,1h),2.30(s,3h),2.28–2.11(m,2h),1.82(s,3h),1.67(s,3h),1.56(s,3h).13cnmr(75mhz,cdcl3)δ:161.3,157.1,152.7,142.7,138.9,131.4,128.9,123.6,123.1,121.9,120.2,116.4,116.3,116.2,108.6,89.2,49.7,30.7,28.8,28.5,25.4,21.5.esrmsm/z＝350.2[m+h]+.

依據合成方法1，反應溫度依次為40℃，60℃，80℃和90℃，經計算化合物3的產率依次為18％、53％、55％、50％。核磁數據顯示產物同反應溫度為70℃獲得同樣的產物。由此看出，在反應溫度為60℃～80℃時，化合物3的產率最高。

依據合成方法1，依次改變4-羥基香豆素、間甲苯胺和丙酮的摩爾比例，由1:0.5:1.2至1:4:10，在70℃條件下攪拌反應12小時，得到產物的收率範圍為20％至55％。多次實驗結果表明，4-羥基香豆素、間甲苯胺和丙酮的摩爾比例為1:1:2.5時的化合物3的產率最高，最為經濟。

依據合成方法1，反應溫度控制在70℃，反應時間分別為4小時、8小時、10小時、12小時、14小時和18小時，後處理得到的化合物3的產率依次為15％、35％、52％、55％、53％和50％。核磁數據顯示產物為化合物3。由此看出，在反應溫度為70℃，反應時間為12小時，化合物3的產率最高。

實施例4：

2,4,4-三甲基-2-(2-甲苯基氨基)-3,4-二氫吡喃[3,2-c]色烯-5-酮的合成(化合物4)

與實施例1的合成方法1相同，不同之處在於：取代苯胺為鄰甲苯胺，獲得化合物4，經計算化合物4的產率58％。

1hnmr(400mhz,cdcl3)δ:7.95–7.88(m,1h),7.53–7.46(m,1h),7.35(d,j＝8.1hz,1h),7.28(d,j＝14.2hz,2h),7.14(dd,j1＝13.4hz,j1＝7.2hz,2h),6.84(t,j＝7.4hz,1h),4.36(br,1h),2.40-2.15(m,5h),1.86(s,3h),1.70(s,3h),1.57(s,3h).13cnmr(75mhz,cdcl3)δ:161.3,157.2,152.6,141.1,131.3,130.6,126.6,126.1,123.7,123.2,120.5,118.2,116.3,108.5,89.2,50.1,30.6,28.9,28.8,25.3,18.0.esrmsm/z＝350.2[m+h]+.

依據合成方法1，反應溫度依次為40℃，60℃，80℃和90℃，經計算化合物4的產率依次為15％、55％、58％、50％。核磁數據顯示產物同反應溫度為70℃獲得同樣的產物。由此看出，在反應溫度為60℃～80℃時，化合物4的產率最高。

依據合成方法1，依次改變4-羥基香豆素、鄰甲苯胺和丙酮的摩爾比例，由1:0.5:1.2至1:4:10，在70℃條件下攪拌反應12小時，得到產物的收率範圍為20％至58％。多次實驗結果表明，4-羥基香豆素、鄰甲苯胺和丙酮的摩爾比例為1:1:2.5時的化合物4的產率最高，最為經濟。

依據合成方法1，反應溫度控制在70℃，反應時間分別為4小時、8小時、10小時、12小時、14小時和18小時，後處理得到的化合物3的產率依次為15％、38％、50％、58％、55％和50％。核磁數據顯示產物為化合物4。由此看出，在反應溫度為70℃，反應時間為12小時，化合物4的產率最高。

實施例5：

2,4,4-三甲基-2-(4-甲氧基苯基氨基)-3,4-二氫吡喃[3,2-c]色烯-5-酮的合成(化合物5)

與實施例1的合成方法1相同，不同之處在於：取代苯胺為對甲氧基苯胺，獲得化合物5，經計算化合物5的產率60％。

1hnmr(400mhz,cdcl3)δ：7.84(d,j＝7.9hz,1h),7.51(t,j＝7.8hz,1h),7.34–7.25(m,2h),7.00(d,j＝8.5hz,2h),6.82(d,j＝8.6hz,2h),4.18(br,1h),3.79(s,3h),2.28–2.08(m,2h),1.69(s,3h),1.61(s,3h),1.56(s,3h).13cnmr(75mhz,cdcl3)δ:161.3,157.5,155.8,152.7,135.2,131.3,124.6.123.6,123.2,116.2,114.2,108.3,90.5,55.5,49.3,30.9,28.9,28.5,25.3.esrmsm/z＝366.2[m+h]+.

依據合成方法1，反應溫度依次為40℃，60℃，80℃和90℃，經計算化合物5的產率依次為18％、57％、60％、52％。核磁數據顯示產物同反應溫度為70℃獲得同樣的產物。由此看出，在反應溫度為60℃～80℃時，化合物5的產率最高。

依據合成方法1，依次改變4-羥基香豆素、甲氧基苯胺和丙酮的摩爾比例，由1:0.5:1.2至1:4:10，在70℃條件下攪拌反應12小時，得到產物的收率範圍為20％至60％。多次實驗結果表明，4-羥基香豆素、甲氧基苯胺和丙酮的摩爾比例為1:1:2.5時的化合物5的產率最高，最為經濟。

依據合成方法1，反應溫度控制在70℃，反應時間分別為4小時、8小時、10小時、12小時、14小時和18小時，後處理得到的化合物1的產率依次為15％、43％、52％、60％、58％和54％。核磁數據顯示產物為化合物5。由此看出，在反應溫度為70℃時，反應時間為12小時時化合物5的產率最高。

通過對上述五種化合物的反應條件的比較，包括反應溫度，反應時間，反應物的摩爾比和溶劑的使用，由產物的收率選擇此類反應的優化條件為：反應溫度70℃，反應時間12小時，4-羥基香豆素、取代苯胺和丙酮的摩爾比例為1:1:2.5，不包括溶劑。鑑於此，下面的實施例，就以上述優化條件為基礎，對本發明進行說明。

實施例6：

2,4,4-三甲基-2-(3-甲氧基苯基氨基)-3,4-二氫吡喃[3,2-c]色烯-5-酮的合成(化合物6)

與實施例1的合成方法1相同，不同之處在於：取代苯胺為間甲氧基苯胺，獲得化合物6，經計算化合物6的產率58％。

1hnmr(400mhz,cdcl3)δ:7.91(dd,j1＝7.9hz,j2＝1.6hz,1h),7.50(dd,j1＝8.7hz,j2＝1.6hz,1h),7.32–7.25(m,2h),7.13(t,j＝8.1hz,1h),6.58(d,j＝8.0hz,2h),6.48(d,j＝8.3hz,1h),4.42(br,1h),3.77(s,3h),2.32–2.11(m,2h),1.84(s,3h),1.66(s,3h),1.55(s,3h).13cnmr(75mhz,cdcl3)δ:161.2,160.4,157.0,152.6,144.3,131.4,129.8,123.6,123.1,116.3,116.1,111.5,108.6,106.1,104.9,88.9,55.2,49.8,30.7,28.8,28.5,25.4.esrmsm/z＝366.2[m+h]+.

實施例7：

2,4,4-三甲基-2-(2-甲氧基苯基氨基)-3,4-二氫吡喃[3,2-c]色烯-5-酮的合成(化合物7)

與實施例1的合成方法1相同，不同之處在於：取代苯胺為鄰甲氧基苯胺，獲得化合物7，經計算化合物7的產率56％。

1hnmr(400mhz,cdcl3)δ:7.92–7.87(m,1h),7.48(dd,j1＝8.6hz,j2＝1.6hz,1h),7.30–7.24(m,3h),6.88(dd,j1＝6.8hz,j2＝2.2hz,1h),6.84–6.77(m,2h),5.12(br,1h),3.78(s,3h),2.38–2.13(m,2h),1.88(s,3h),1.72(s,3h),1.55(s,3h).13cnmr(75mhz,cdcl3)δ161.3,157.1,152.6,148.2,132.8,131.2,123.6,123.1,120.8,119.5,116.7,116.2,109.9,108.8,88.6,55.5,49.9,30.5,29.1,28.1,25.4.esrmsm/z＝366.2[m+h]+.

實施例8：

2,4,4-三甲基-2-(4-氯苯基氨基)-3,4-二氫吡喃[3,2-c]色烯-5-酮的合成(化合物8)

與實施例1的合成方法1相同，不同之處在於：取代苯胺為對氯苯胺，獲得化合物8，經計算化合物8的產率63％。

1hnmr(400mhz,cdcl3)δ:7.85(dd,j1＝7.8hz,j2＝1.6hz,1h),7.52(dd,j1＝8.6hz,j2＝1.6hz,1h),7.33–7.25(m,2h),7.22–7.16(m,2h),6.96–6.89(m,2h),4.38(br,1h),2.26(d,j＝14.6hz,2h),1.79(s,3h),1.65(s,3h),1.55(s,3h).13cnmr(75mhz,cdcl3)δ:161.1,156.9,152.6,141.5,131.5,129.0,126.1,123.7,122.9,120.5,116.3,116.0,108.6,88.9,49.6,30.7,28.7,28.6,25.3.esrmsm/z＝370.1[m+h]+.

實施例9：

2,4,4-三甲基-2-(3-氯苯基氨基)-3,4-二氫吡喃[3,2-c]色烯-5-酮的合成(化合物9)

與實施例1的合成方法1相同，不同之處在於：取代苯胺為間氯苯胺，獲得化合物9，經計算化合物9的產率60％。

1hnmr(400mhz,cdcl3)δ:7.89(dd,j1＝8.2hz,j2＝1.7hz,1h),7.51(td,j1＝7.7hz,j2＝1.6hz,1h),7.35–7.27(m,2h),7.13(t,j＝8.1hz,1h),7.04(t,j＝2.1hz,1h),6.84(td,j1＝8.5hz,j2＝2.0hz,2h),4.45(br,1h),2.30–2.11(m,2h),1.83(s,3h),1.67(s,3h),1.55(s,3h).13cnmr(75mhz,cdcl3)δ:161.2,156.8,152.6,144.3,134.7,131.5,130.1,123.8,123.0,120.4,118.3,116.5,116.3,116.0,108.8,88.6,49.7,30.6,28.8,28.4,25.3.esrmsm/z＝370.1[m+h]+.

實施例10：

2,4,4-三甲基-2-(2-氯苯基氨基)-3,4-二氫吡喃[3,2-c]色烯-5-酮的合成(化合物10)

與實施例1的合成方法1相同，不同之處在於：取代苯胺為鄰氯苯胺，獲得化合物10，經計算化合物10的產率62％。

1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.90(dd,j1＝8.2hz,j2＝1.7hz,1h),7.53–7.47(m,1h),7.40(dd,j1＝8.3hz,j2＝1.5hz,1h),7.32–7.27(m,3h),7.16(dd,j1＝8.4hz,j2＝1.6hz,1h),6.78(td,j1＝7.7hz,j2＝1.5hz,1h),5.11(br,1h),2.37–2.16(m,2h),1.89(s,3h),1.75(s,3h),1.56(s,3h).13cnmr(75mhz,cdcl3)δ:161.1,156.7,152.6,139.7,131.4,129.4,127.4,123.7,122.9,121.7,120.2,117.4,116.3,116.0,109.0,88.1,50.1,30.4,29.1,28.2,25.4.esrmsm/z＝370.1[m+h]+.

實施例11：

2,4,4-三甲基-2-(4-溴苯基氨基)-3,4-二氫吡喃[3,2-c]色烯-5-酮的合成(化合物11)

與實施例1的合成方法1相同，不同之處在於：取代苯胺為對溴苯胺，獲得化合物11，經計算化合物11的產率40％。

1hnmr(400mhz,cdcl3)δ:7.84(dd,j1＝7.9hz,j2＝1.6hz,1h),7.52(dd,j1＝8.6hz,j2＝1.6hz,1h),7.37–7.26(m,5h),6.89(d,j＝8.2hz,2h),4.39(br,1h),2.30–2.10(m,2h),1.80(s,3h),1.65(s,3h),1.55(s,3h).13cnmr(75mhz,cdcl3)δ:162.3,161.2,156.9,152.6,142.0,131.9,131.5,123.8,123.0,120.6,116.3,116.0,113.2,108.6,88.8,49.6,30.7,28.8,28.4,25.3.esrmsm/z＝414.1[m+h]+.

實施例12：

2,4,4-三甲基-2-(4-碘苯基氨基)-3,4-二氫吡喃[3,2-c]色烯-5-酮的合成(化合物12)

與實施例1的合成方法1相同，不同之處在於：取代苯胺為對碘苯胺，獲得化合物12，經計算化合物12的產率35％。

1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.84(dd,j1＝7.9hz,j2＝1.6hz,1h),7.51(dq,j1＝7.3hz,j2＝1.6hz,3h),7.34–7.27(m,2h),6.80(d,j＝8.2hz,2h),4.34(br,1h),2.31–2.10(m,2h),1.81(s,3h),1.64(s,3h)，1.55(s,3h).13cnmr(75mhz,cdcl3)δ:161.1,156.9,152.6,142.7,137.8,131.5,123.8,122.9,120.8,116.3,115.9,108.7,88.7,82.8,49.6,31.6,30.7,28.8,28.5,25.3,22.7.esrmsm/z＝462.1[m+h]+.

實施例13：

2,4,4-三甲基-2-(2,4-二甲基苯基氨基)-3,4-二氫吡喃[3,2-c]色烯-5-酮的合成(化合物13)

與實施例1的合成方法1相同，不同之處在於：取代苯胺為2.4-二甲基苯胺，獲得化合物13，經計算化合物13的產率58％。

1hnmr(400mhz,cdcl3)δ:7.90(dd,j1＝8.3hz,j2＝1.6hz,1h),7.53–7.46(m,1h),7.32–7.20(m,3h),6.95(d,j＝6.6hz,2h),4.21(br,1h),2.22(d,j＝29.4hz,8h),1.81(s,3h),1.67(s,3h),1.57(s,3h).13cnmr(75mhz,cdcl3)δ:161.4,157.4,152.7,138.3,131.3,130.5,127.3,127.0,123.7,123.2,119.7,116.3,108.4,89.8,50.0,30.8,28.8,25.2,20.5,18.1.esrmsm/z＝364.2[m+h]+.

實施例14：

2,4,4-三甲基-2-(3,5-二甲基苯基氨基)-3,4-二氫吡喃[3,2-c]色烯-5-酮的合成(化合物13)

與實施例1的合成方法1相同，不同之處在於：取代苯胺為3.5-二甲基苯胺，獲得化合物14，經計算化合物14的產率69％。

1hnmr(400mhz,cdcl3)δ:7.90(dd,j1＝7.9hz,j2＝1.6hz,1h),7.50(dd,j1＝8.6hz,j2＝1.6hz,1h),7.33–7.24(m,2h),6.61(m,j＝29.9hz,3h),4.33(br,1h),2.29–2.12(m,8h),1.82(s,3h),1.66(s,3h),1.54(s,3h).13cnmr(75mhz,cdcl3)δ:161.3,157.1,152.7,138.7,131.3,123.5,123.1,122.9,117.3,116.3,116.2,108.7,89.2,49.7,30.7,28.8,28.5,25.4,21.4.esrmsm/z＝364.2[m+h]+.

實施例15：

2,4,4-三甲基-2-取代苯基氨基-3,4-二氫吡喃[3,2-c]色烯-5-酮類化合物的乙醯膽鹼酯酶抑制活性

2,4,4-三甲基-2-取代苯基氨基-3,4-二氫吡喃[3,2-c]色烯-5-酮類化合物的體外乙醯膽鹼酯酶抑制活性測試方法，參考如下三篇文獻完成：

1、周金林，以生物鹼為母體進行結構修飾的新藥研究.中山大學博士畢業論文，2004.

2、ellmangl,courtneydk,andresv,featherstonerm.anewandrapidcolorimetricdeterminationofacetylcholinesteraseactivity.biochem.pharmacol.1961,7:88-95.

3、massouliej,bons,silmani.structureandfunctionsofacetylcholinesteraseandbutyrylcholinesterase.prog.brainres.1993,98:139-146.

具體的測試方法如下：

溶液的配製:

(1)0.1mph＝8.0磷酸鹽緩衝溶液：用移液管移取6.4ml1mkh2po4，94.0mlk2hpo4至1000ml容量瓶中，後用蒸餾水稀釋，定容至1000ml。

(2)乙醯膽鹼酯酶溶液(現用現配)：稱取0.10mg乙醯膽鹼酯酶用0.1mph＝8.0磷酸鹽緩衝液溶解，定容至1.0ml。

(3)2mg/ml硫代乙醯膽鹼溶液(現用現配)：稱取2.0mg硫代乙醯膽鹼用0.1mph＝8.0磷酸鹽緩衝液溶解，定容至1.0ml。

(4)4mg/ml5,5-二硫代雙(2-硝基苯甲酸)(現用現配)：稱取4.0mg5,5-二硫代雙(2-硝基苯甲酸)用0.1mph＝8.0磷酸鹽緩衝液溶解，定容至1.0ml。

(5)1.0mm樣品dmso溶液：稱取一定量待測分析樣品用dmso溶解，定容。

化合物對乙醯膽鹼酯酶的抑制活性分析

以硫代乙醯膽鹼為底物，化學標記的5,5-二硫代雙(2-硝基苯甲酸)為顯色劑，在0.1cm比色皿中測定樣品對ache抑制活性。其反應式為：

acetylthiocholine+h2o+ache→acetyrate+thiochline

thiocholine+5,5'-thiobis-2-nitrobenzoicacid→5-thio-2-nitrobenzoicacid

硫代乙醯膽鹼被乙醯膽鹼酯酶水解後，產生的硫代膽鹼，能與5,5-二硫代雙(2-硝基苯甲酸)反應，生成的5-硫-2-硝基苯甲酸可在412nm處產生紫外吸收。

取5支1.5ml分別裝有840μl0.1mph＝8.0磷酸鹽緩衝液的梨型管，依次加入0，5μl，10μl，20μl，40μl，50μl的上述步驟配製的濃度的樣品dmso溶液，並用dmso加至890μl。分別加入50μl4mg/ml5,5-二硫代雙(2-硝基苯甲酸)和10μl乙醯膽鹼酯酶溶液，並在37℃保溫15分鐘，立刻加入50μl2mg/ml硫代乙醯膽鹼溶液，搖勻後測其在λ＝412nm處的a值(an)。參比用0.1mph＝8.0磷酸鹽緩衝液，以未加樣品所測得的acontrol值作為100個活力單位：

然後以酶的相對活力對抑制劑濃度作圖，根據抑制曲線求得各種化合物的ic50值(抑制酶活力50％時的抑制劑濃度)。

由上述方法測定獲得目標產物的ic50值(μm)，列於表2。

表2化合物對乙醯膽鹼酯酶的抑制活性據(ic50值，μm)

註：a由於溶解度的問題，其活性很差，沒有測試。

從表2可以看出，這類化合物具有一定程度的乙醯膽鹼酯酶抑制活性。該合成方法為一步反應便可提供結構複雜而新穎的化合物，可以通過該合成方法，製備出所希望的初步結構骨架，再進行結構改造，獲得計劃合成的化合物，有望進一步提高其活性。所以該合成方法以及所涉及的這類骨架結構的化合物具有潛在的藥物研發價值。

以上實施例的說明只是用於幫助理解本發明的技術方案及其核心思想，應當指出，對於本技術領域的技術人員來說，在不脫離本發明原理的前提下，還可以對本發明進行若干改進和修飾，這些改進和修飾也落入本發明權利要求的保護範圍內。