一種臨床診斷基因晶片的對照設計方案的製作方法

2023-10-04 19:55:59 3

專利名稱：一種臨床診斷基因晶片的對照設計方案的製作方法
技術領域：
本發明涉及一種臨床診斷基因晶片的對照設計方案，屬於生物醫學技術領域。
本發明還利用人的β—肌動蛋白(β—actin)作為晶片檢測時的陽性對照探針，檢查從DNA提取到PCR擴增、及雜交等全過程的操作正確性；利用植物特異的DNA片段為探針，分別檢測PCR擴增到雜交過程的操作正確性、和整個過程的操作正確性。由於每一個操作階段都有相應的陽性對照，在檢測失敗的情況下可以確定是哪一階段操作失誤，從而查找失敗的原因。本發明的具體操作方法同於現有技術。
本發明採用的植物特異的DNA片段可以是公知的任一DNA片段，本發明實驗過程中選擇的為植物1，5-二磷酸核酮糖羧化酶基因的一段序列。
本發明具有可準確地判斷晶片檢測操作過程的正確性，如果操作失敗，可檢查出失敗的原因，適用於所有臨床檢測基因晶片的對照設計。
圖2為正確的雜交結果。
2.陽性對照設置

圖1中IV為全操作過程檢測陽性對照。臨床標本都來自人體，在取檢測樣品時，都會帶上人體的細胞，如上皮細胞，血細胞等。選擇人體拷貝數較多的基因(或DNA)作為探針，本發明實施過程中用的是β—肌動蛋白基因，設置為一個陽性對照位點，如果整個操作無誤，這個位點必定是陽性信號。圖1中III為PCR擴增陽性對照。設置一個陽性位點，該探針序列來自植物特異DNA，既不能與人的DNA序列雜交，也不能與病原物DNA有雜交信號。在PCR擴增時，加入這一探針序列的不含鹼基U的PCR產物在PCR擴增反應管中，PCR擴增之後的操作無誤，該位點必定為陽性信號。圖1中I為雜交檢測陽性對照。該位點的探針序列也來自植物特異DNA，該DNA序列既不能與人的DNA序列雜交，也不能與病原物DNA雜交。與之雜交的DNA事先用螢光標記，在進行雜交時加入雜交液中，如果雜交無誤，該對照位點必為陽性信號。
3.利用本發明設計的泌尿生殖道感染性疾病診斷基因晶片對照設計方案汙染控制對照探針(II)序列為植物1，5-二磷酸核酮糖羧化酶基因的一段序列，具體如下1 gctgccaaga tatcagtgtc cttggtttcg tactccgggg tgtagtaagc caatttataa61 tccttaacac cagctttgaa tccaacactt gctttagttt ctgtttgtgg tgcatacgtc121 cctccctaca actcatgaat taagaattct cacaacgaca gggtctactc gatatggatt181 aggcgtaaat gaaacctttg caa上述序列與人和病原物DNA均無同源性。
檢測操作全過程控制探針(IV)為人β-actin基因序列，具體如下1 ggcatcctca ccctgaagta ccccactgag cactgcatca tcaccaactg ggaagacatg61 gagaagatct ggcaccacac cttctacaat gagttgtggc tcccaaggag caccctgtgc121 tattgaccaa ggtccccctg gaccccaagg ccaaccatga gaagatagcc cagatcatgt181 ttgagacctt caacacccc上述序列在人體的23對染色體上均有序列與此該序列同源，但PCR引物是相同。
PCR擴增對照(III)和雜交對照(I)探針均為植物1，5-二磷酸核酮糖羧化酶基因的一段序列，具體如下1 agtaggggga attcgcagat cctccagacg tagagcgcgt agggctttga aaccaaatac61 gttacccaca atggaagtaa acatgttagt aacagaaccc tcttcaaata ggtctaatgg121 ataagctaca taagtgatat attgattatc ctccccaaca acgggctcga tgtgatagca181 tcggcctttg t1 ctaccacata acgcctgcaa tgtgacaccc tacctattca ctagtgtgcc tcttcccaca61 cgctttccac ccgtactgct cacagcttta agaaccagaa caaatgagta atattagtgt121 cggttcatgg ctaaaaccag cactgatgta catgaccaca tatgtcaaat gctgcttcta181 ggcatgaccc gctcttac上述序列與人和病原物DNA均無同源性。
利用以上探針的序列對照在晶片中的排列見圖1，經雜交後的結果見圖2。這一設計完全達到預想效果。
權利要求
一種臨床診斷基因晶片的對照設計方案，其特徵在於利用人的β—肌動蛋白基因和植物特異的DNA片段作為晶片檢測時的陽性對照探針，測試基因晶片臨床檢測過程中不同階段的操作正確性。
全文摘要
本發明涉及一種臨床診斷基因晶片的對照設計方案，屬於生物醫學技術領域。本發明的臨床診斷基因晶片的對照設計方案，利用人的β－肌動蛋白基因和植物特異的DNA片段作為晶片檢測時的陽性對照探針，測試基因晶片臨床檢測過程中不同階段的操作正確性。本發明具有可準確地判斷晶片檢測操作過程的正確性等優點，適用於所有臨床檢測基因晶片的對照設計。
文檔編號C12Q1/68GK1441062SQ0211340
公開日2003年9月10日 申請日期2002年2月25日 優先權日2002年2月25日
發明者譚德勇, 朱寶生 申請人:昆明寰基生物晶片開發有限公司