大環雙官能螯合劑、其配合物和它們的抗體共軛物的製作方法

2023-10-18 10:48:04 2

>PH1％配合物加熱未加熱98.992.7399.693.3599.692.9799.695.7999.995.81199.695.71399.694.5實施例33α-(4-氨基苯基)-1，4，7，10-四氮雜環十二烷-1，4，7，10-四乙酸，釔(Ⅲ)配合物的製備。將10μl含有1.4mg/100μl的α-(4-氨基苯基)-1，4，7，10-四氮雜環十二烷-1，4，7，10-四乙酸(用實施例3的步驟製備)的溶液加入到100μl的摻有Y-90的Y(OAC)3(0.003μ)的溶液中。往該溶液中再加入500μl水，隨後加入125μl的NaOAC(0.5μ)溶液。265μl水加入到該溶液中使總體積達到1ml。將這一溶液分成等量的兩份。一份加熱到100℃一小時。用前面所述的陽離子交換步驟來確定加熱和未加熱樣品中以配合物形式存在的金屬的百分數。測試結果表明加熱和未加熱樣品中以配合物形式存在的金屬的百分數分別為84%和4%。實施例34α-(4-氨基苯基)-1，4，7，10-四氮雜環十二烷-1，4，7，10-四乙酸，鑥(Ⅲ)配合物的製備。將α-(4-氨基苯基)-1，4，7，10-四氮雜環十二烷-1，4，7，10-四乙酸溶液(用實施例3的步驟製備)溶解到蒸餾水中，達到濃度為1.63mg/ml。將氯化鑥溶解到0.1NHCl中，製得濃度為3.9mg/ml(0.01μ)的氯化鑥溶液。鑥-177(0.3毫摩爾)用作示蹤劑。將體積為30μl的0.01μ的鑥溶液加入到2μl的Lu-177溶液中。加入適量的上述配位體，再加入HEPES緩衝液(0.1μ，PH＝7.6)使總體積達到1.0ml。所得溶液中配位體和鑥的量為0.3毫摩爾。然後將該溶液加熱到100℃一小時，用前面所述的陽離子交換方法測定作為配合物的Lu的百分數為86%。實施例35α-(4-異硫氰醯苯基)-1，4，7，10-四氮雜環十二烷-1，4，7，10-四乙酸，釤(Ⅲ)配合物的製備。將7mg，(10.8微摩爾)的α-(4-氨基苯基)-1，4，7，10-四氮雜環十二烷-1，4，7，10-四乙酸，釤(Ⅲ)配合物(用實施例30的步驟來製備)的樣品溶解到400μl水中。加入過量的硫光氣(50μl)，隨後再加入400μlCHCl3，兩相反應在激烈攪拌下進行30分鐘。這段時間結束時，水層用500μlCHCl3萃取4次，然後將水層凍幹，定量地得到所需要的標題產物。紫外光譜顯示出這種化合物在272和282nm處有一譜帶。薄層色譜，矽膠，用75∶25(V∶V)的CH3CN∶H2O展開，給出Rf＝0.38。原料具有Rf＝0.19。紅外光譜顯示出一SCN在2100Cm-1處有伸張;快速原子撞擊質譜，〔M+H+〕+＝687。實施例36α-(4-氨基苯基)-1，4，7，10-四氮雜環十二烷-1，4，7，10-四乙酸，銨鹽，釔(Ⅲ)配合物的製備。將90mg(160毫摩爾)的α-(4-氨基苯基)-1，4，7，10-四氮雜環十二烷-1，4，7，10-四乙酸(用實施例3的步驟來製備)樣品溶解到1ml水中。向這個溶液中加入3ml含有51mg(192毫摩爾)的Y(OAC)3的水溶液。然後該反應混合物，PH＝6-7，被加熱到100℃兩小時。然後所得溶液通過玻璃毛，並且凍幹得到126mg的黃色固體。這種固體在矽膠上進行色譜分離(溶劑體系1)，得到71mg(76%)的所需的配合物的產物。陰離子交換的分析表明，其與類似物釤配合物具有相同的保留時間，標題產物的特徵數據為13CNMR(D2O)180.8，180.5，179.9，146.1，133.4，122.0，116.1，74.9，56.3，55.8，55.4，55.1，54.8，52.2，46.0，44.0，23.6，1HNMR(D2O)6.90(d)，6.70(d)，4.40(s)，3.45-3.06(m)，2.71-2.10(m)，1.75(s)。快速原子撞擊質譜，〔M+H+〕+＝582。實施例37α-(4-異硫氰醯苯基)-1，4，7，10-四氮雜環十二烷-1，4，7，10-四乙酸，鈉鹽，釔(Ⅲ)配合物的製備。將α-(4-氨基苯基)-1，4，7，10-四氮雜環十二烷-1，4，7，10-四乙酸，釔配合物(用實施例36的步驟製備)的樣品(10mg，17μmole)溶解到400μl水中。向這種溶液中加入64μl硫光氣(過量)和400μlCHCl3，所得混合物激烈攪拌40分鐘。在這段時間內分幾次少量加入固體NaHCO3以保持PH在8左右。反應結束時，分離出水層，用1mlCHCl3萃取4次，並且凍幹。用薄層色譜和紫外光譜檢定標題產物。實施例38α-〔2-(4-氨基苯基)乙基〕-1，4，7，10-四氮雜環十二烷-1，4，7，10-四乙酸，釔(Ⅲ)配合物，銨鹽的製備;NH4〔Y(PA-DOTA)〕。通過一強陽離子交換樹脂(SP-SephadexTMC-25，Pharmacia)柱色譜將配位體α-〔2-(4-氨基苯基)乙基〕-1，4，7，10-四氮雜環十二烷-1，4，7，10-四乙酸(用實施例8的步驟製備)轉化成混合的質子化了的銨鹽。該柱子呈質子化了的形式，用蒸餾水洗滌。配位體的液縮的水溶液被用到柱子上，隨後用蒸餾水洗滌該柱子。用0.5MNH4OH將配位體從柱子上洗脫下來。洗脫液被濃縮至幹。將5mlY(OAC)3·4H2O(0.0728g，0.215mmole)的蒸餾水溶液加入到溫熱的5ml混合的質子化了的銨鹽配位體(0.120g，0.215mmole)水溶液中。將溶液進行回流並用0.1MNH4OH調PH到大約7.0。回流一小時後，將溶液冷卻並濃縮至幹。真空條件下，在大約105℃的油浴上加熱白色固體以除去過量的NH4OAC標題產物(其含有大約一當量的乙酸銨)的產量為0.142g(94%)，並且其特徵數據如下13CNMR(D2O，88℃，75MHz)23.8，27.6，35.4，49.6，55.0，56.2，56.9，57.1，65.7，68.0，121.7，132.6，138.8，180.7，181.4，182.0，183.1，快速原子撞擊質譜，m/e610(正離子，〔M-+2H+〕+，)，608(負離子，M-)。實施例39α-〔2-(4-氨基苯基)乙基〕-1，4，7，10-四氮雜環十二烷-1，4，7，10-四乙酸，釤(Ⅲ)配合物，銨鹽的製備，NH4〔Sm(PA-DOTA)〕。重複實施例38的步驟，用Sm(OAC)3·3H2O(0.082g，0.215mmole)代替Y(OAC)3·4H2O，製備出的標題產物(其含有大約一當量的乙酸銨)的產量為0.155g(94%)，其特徵數據如下13CNMR(D2O，88℃，75MHz)23.5，27.2，35.6，50.5，54.5，56.0，57.2，57.9，69.5，71.5，122.3，133.0，139.7，181.2，188.4，189.3，190.9，快速原子撞擊質譜，m/e673(正離子，〔M-+2H+〕+，Sm同位素型式)，m/e671(負離子，M-，Sm同位素型式。)實施例40α-〔2-(4-異硫氰醯苯基)乙基〕-1，4，7，10-四氮雜環十二烷-1，4，7，10-四乙酸，釤(Ⅲ)配合物，銨鹽的製備，NH4〔Sm(SCN-PA-DOTA)〕。將10mlSm(OAC)3·3H2O(27.9mg，381.56g/mole，73.1μmole)的蒸餾水溶液和10ml含有42mgPA-DOTA，混合的銨-鉀鹽(632.97g/mole，66.4μmole)(用實施例8的步驟製備)的蒸餾水溶液混合，並在蒸汽浴上加熱。三十分鐘後，(用實施例41中描述的方法)通過HPLC測定形成〔Sm(PA-DOTA)〕的反應已進行完全。在分離漏鬥中，通過搖動使該溶液與20ml含有45.4mgCSCl2(114.98g/mole，395μmole)的氯仿溶液反應。大約一分鐘後反應進行完全，這是通過HPLC測定的，並通過當把該水溶液點樣到矽膠TLC板上時，用茚三酮(0.2%的乙醇液)陽性測示結果消失來測定，(起始螯合物，〔Sm(PA-DOTA)〕測試呈陽性)。除去氯仿層，水層用兩份20ml的氯仿洗滌。在氮氣流下，並在室溫下通過加入100ml乙腈並蒸發使水層濃縮至幹，得到標題產物56mg。快速原子撞擊質譜，m/e715(正離子，〔m-+2H+〕+，Sm同位素型式)，m/e713(負離子，M-Sm同位素型式)。實施例41Y3+與PA-DOTA的螯合速率的HPLC分析。以在PA-DOTA合成中建立使用的函數形式來研究PA-DOTA與Y3+螯合的速率。通過HPLC用-AlltechEconosphereTMC18100mm的柱子來監測螯合度。採用的梯度是A)95∶5，PH6.0，0.05MNaOAC緩衝液CH3CN，B)30∶70，PH6.0，0.05MNaOAC緩衝液CH3CN，A到B用15分鐘。均用實施8的步驟製備的PA-DOTA·nHCl溶液(保留時間＝1.31分)和PA-DOTA混合的銨-鉀鹽溶液(保留時間＝4.55分)，被製備成1.6mm，pH6.0，0.5MNaOAC緩衝液。兩種溶液中每一種取一毫升(1.6μmole)與0.2ml(8μmole)的Y(OAc)3·4H2O溶液(40mm的，PH6.0的0.5MNaOAc緩衝液)反應。通過在保留時間值為3.96分時的峰值的出現來確定螯合物的形成(通過與實施例38的樣品比較來證實)。以下示出螯合形成的結果。很明顯，BFC的純化方法對螯合速率有影響。實施例42α-〔2-(4-氨基苯基)乙基〕-1，4，7，10-四氮雜環十二烷-1-(R.S)-乙-4，7，10-三-(甲基乙)酸，釤(Ⅲ)配合物，銨鹽的製備，NH4〔Sm(PA-DOTA)〕。將Sm(OAC)3·3H2O的溶液(13.2mg在2ml蒸餾水中)加入到α-〔2-(4-氨基苯基)乙基〕-1.4，7，10-四氮雜環十二烷-1-(R·S)-乙-4，7，10-三-(甲基乙)酸的溶液(30mg在2ml的蒸餾水中)中去，(用實施例29的步驟製備，高Rf的非對映體)。該PH為6.5的溶液在蒸汽浴上加熱，並用HPLC來監測反應。加熱30分鐘後，溶液在旋轉蒸發儀上被濃縮至幹，並在真空爐中乾燥。快速原子撞擊質譜，m/e715(正離子，〔M-+2H+〕+，Sm同位素型式)，737(正離子，〔M-+H++Na+〕+，Sm同位素型式)，713(負離子(M-)，Sm同位素型式)。在下面的例子中，配合物溶液經過一離子交換柱除去溶液中任何過量的游離金屬。不穩定的體系將恢復平衡，且相同量的游離金屬將存在於溶液中。惰性體系將不會達到再平衡，且游離金屬的量會減少。這樣的話既使一配合物形成的產率並不高，令其通過一離子交換樹脂的純化作用也能形成一可用的穩定的無非配合金屬的配合物。實施例43α-(2-甲氧基-5-氨基苯基)-1，4，7，10-四氮雜環十二烷-1，4，7，10-四乙酸，釤(Ⅲ)配合物的製備。將5.8mg的α-(2-甲氧基-5-氨基苯基)-1，4，7，10-四氮雜環十二烷-1，4，7，10-四乙酸(用實施例12的步驟製備)溶解在325μlNANOPureTM的水中製成濃度為3×10-2M的溶液。將一份10μl的這種溶液加入到990μl的摻有Sm-153的3×10-4M的溶液中。SmCl3(在0.1NHCl中)然後用NaOH調PH到7.0。這溶液被分成每份500μl的兩份，一份在100℃時加熱一小時，測試加熱和未加熱的兩個樣品，用前面所述的陽離子交換方法測定以配合物形式存在的金屬的百分數。然後將該溶液通過SP-SephadexTM樹脂。用純化的樣品再測一次其配合程度。結果示於下表中實施例44α-(2-甲氧基-5-氨基苯基)-1，4，7，10-四氮雜環十二烷-1，4，7，10-四乙酸，釤(Ⅲ)配合物的PH穩定性。實施例43中的加熱和未加熱的純化後的樣品分別都分成2×250μl的兩份。一份用HCl調節，另一份用NaOH調節，分別都達到下表中所表示的PH值。達到了欲期的PH值後，讓樣品保持10分鐘，用前面所述的陽離子交換方法測定以配合物形式存在的金屬的量。其結果示於下表中實施例45α-(2-甲氧基-5-硝基苯基)-1，4，7，10-四氮雜環十二烷-1，4，7，10-四乙酸，釤(Ⅲ)配合物的製備將7.9mg的α-(2-甲氧基-5-硝基苯基)-1，4，7，10-四氮雜環十二烷-1，4，7，10-四乙酸(用實施例11的步驟製備)溶解在464μlNANOPureTM的水中製成濃度為3×10-2M溶液。將一份10μl的這種溶液加入到950μl的摻有Sm-153的3×10-4M的溶液中。SmCl3(在0.1NHCl中)然後用NaOH調PH到7.0。這種溶液被分成每份為500μl的兩份，一份在100℃加熱一小時。測示加熱和未加熱的兩個樣品，用前面所述的陽離子交換方法測定以配合物形式存在的金屬的百分數。然後將這些溶液通過SP-SepnadexTM樹脂。然後採用前面描述的一般方法測定純化了的樣品的配合程度。其結果示於下表中實施例46α-(2-甲氧基-5-硝基苯基)-1，4，7，10-四氮雜環十二烷-1，4，7，10-四乙酸，釤(Ⅲ)配合物的PH穩定性。實施例45中的加熱和未加熱的經純化的樣品分別被分成二份。一份用稀釋的HCl調節，另一份用NaOH來調節，使PH值達到下表中所示之值。欲期的PH達到後，將樣品保持10分鐘，然後用前面所述的陽離子交換方法測定以配合物形式存在的金屬的量。其結果示於下表中實施例47α-(4-硝基苯基)-1，4，7，10-四氮雜環十二烷-1，4，7-三乙酸，釤(Ⅲ)配合物的製備。使0.0219M(100μl，2.195mmole)的α-(4-硝基苯基)-1，4，7，10-四氮雜環十二烷-1，4，7-三乙酸(用實施例4的步驟製備)的溶液與0.043M(25μl，1.075mmole)的Sm(OAc)3的溶液接觸。反應混合物經陰離子交換的HPLC處理(Q-SepharoseTM柱子，1cm×25cm，流速＝2ml/min，用0-1M的NH4OAc洗脫，梯度超過30分鐘)。一小時後，配合物(保留時間＝11.1分鐘)以77%的產率形成(面積百分比)，並且從配位體峰(保留時間＝15.5分鐘)可被完全分辨出來。標題配合物已形成的進一步的證據是由矽膠TLC(溶劑體系4)得到的，其中配位體有Rf＝0.59，配合物有Rf＝0.00。實施例48α-(4-氨基苯基)-1，4，7，10-四氮雜環十二烷-1，4，7-三乙酸，釤(Ⅲ)配合物的製備。使0.022M(100μl，2.2μmole)的α-(4-氨基苯基)-1，4，7，10-四氮雜環十二烷-1，4，7-三乙酸(用實施例5的步驟製備)溶液與0.043M(6.4μl，0.275mmole)的Sm(OAc)3溶液接觸。反應混合物經陰離子交換的HPLC處理(Q-SepharoseTM柱子，1cm×25cm，流速＝2ml/分鐘，用0-0.25MNH4OAc洗脫，梯度超過30分鐘)。40分鐘後，配合物(保留時間＝9.0分鐘)以66%的產率形成(面積百分比)，並且從配位體峰(保留時間＝18.5分鐘)可被完全分辨出來。實施例49α-(4-氨基苯基)-1，4，7，10-四氮雜環十二烷-1，4，7-三乙酸，釤(Ⅲ)配合物和α-(4-氨基苯基)-1，4，7，10-四氮雜環十二烷-1，4，10-三乙酸，釤(Ⅲ)配合物的製備。將4.2mg的α-(4-氨基苯基)-1，4，7，10-四氮雜環十二烷-1，4，7-三乙酸五鹽酸鹽和α-(4-氨基苯基)-1，4，7，10-四氮雜環十二烷-1，4，10-三乙酸五氯化物(用實施例5的步驟製備)溶解在300μlNANOPureTM的水中製成濃度為3×10-2M的溶液。將一份10μl的該溶液加入到15μl的摻有Sm-153的2×10-2M的SmCl3(0.1NHCl液)中，通過加水使體積達到1ml。然後用NaOH調PH到7.0。該溶液被分成分別為500μl的兩份，一份在100℃時加熱一小時。測示加熱和未加熱的兩個樣品，用前面描述的陽離子交換的方法測定以配合物形式存在的金屬的百分數。其結果表明對於加熱的和未加熱的樣品，其以配合物形式存在的金屬的百分數分別為89%和96%。實施例50α-(4-氨基苯基)-1，4，7，10-四氮雜環十二烷-1，4，7-三乙酸，釤(Ⅲ)配合物，和α-(4-氨基苯基)-1，4，7，10-四氮雜環十二烷-1，4，10-三乙酸，釤(Ⅲ)配合物的PH穩定性。將實施例49中的加熱的和未加熱的樣品都分成兩份。一份用HCl，另一份用NaOH調到PH到下表中所示出的PH值。一但達到所期望的PH，即將樣品保持10分鐘，然後用前面描述的陽離子交換的方法測定以配合物形式存在的金屬的百分數。下表中表示出了其結果實施例51α-(4-硝基苯基)-1，4，7，10-四氮雜環十二烷-1，4，7-三乙酸，釤(Ⅲ)配合物的製備。將13μl2×10-2M的α-(4-硝基苯基)-1，4，7，10-四氮雜環十二烷-1，4，7-三乙酸(用實施例4的步驟製備)溶液，15μl的SmCl3(0.02M0.1NHCl)和2μl的Sm-153合併，用NANOPureTM水使體積達到1ml。用NaOH調PH到7.0。該溶液被分成各500μl的兩份，一份在100℃加熱一小時。測示加熱和未加熱的樣品用前面所述的陽離子交換方法測定以配合物形式存在的金屬的百分數。結果表明對於加熱的和未加熱的樣品，以配合物形式存在的金屬的百分數分別為74%和42%。實施例52α-(4-硝基苯基)-1，4，7，10-四氮雜環十二烷-1，4，7-三乙酸，釤(Ⅲ)配合物的PH穩定性。實施例51中的加熱的樣品被分成二份。一份用HCl調節，另一份用NaOH調節，使其PH值達到下表中所給出的PH值。予期的PH值達到後，將樣品放置十分鐘，用前面描述的陽離子交換的方法測定以配合物形式存在的金屬的量。下表中給出了其結果實施例531-〔2-(4-氨基苯基)乙基〕-1，4，7，10-四氮雜環十二烷-4，7，10-三乙酸，鑥(Ⅲ)配合物的製備。將EA-DO3A(用實施例17中的步驟製備)固體溶解於水中製備成溶液。最終的濃度為0.01M。將氯化鑥溶解於0.1NHCl中製備成氯化鑥溶液。最後的濃度為含氯化鑥3.9mg/ml(0.01MLu)。鑥-177被用作示蹤劑。將30μl0.01M的Lu溶液加入到2μl的Lu-177溶液中。加入30μl的配位體溶液然後加入HEPES緩衝劑(0.1M，PH＝7.6)，使總體積達到1.0ml。最終的溶液對配位體和鑥來說是0.3mm。用前面所述的陽離子交換方法測定的以配合物形式存在的Lu的量為98%。實施例541-〔2-(4-氨基苯基)乙基〕-1，4，7，10-四氮雜環十二烷-4，7，10-三乙酸，釔(Ⅲ)配合物的製備〔Y(EA-DO3A)〕。通過強陽離子交換樹脂(SP-SephadexTMC-25，Pharmacia)柱色譜將配位體1-〔2-(4-氨基苯基)乙基〕-1，4，7，10-四氮雜環十二烷-4，7，10-三乙酸(用實施例17的步驟製備)轉化成混合的質子化了的銨鹽。色譜柱處於質子化的形式，用蒸餾水洗滌。將濃的配位體水溶液加到柱中，隨後用蒸餾水洗滌柱子，用0.5M的NH4OH從柱子上將配位體洗脫下來。在旋轉蒸發儀上將洗脫液濃縮至幹，並在蒸空爐中將其乾燥。將10mlY(OAc)3·4H2O(0.203g，338.101g/mole，0.600mmole)的蒸餾水溶液加到溫熱的10ml混合的質子化了的銨鹽配位體(0.300g，499.615g/mole，0.600mmole)的蒸餾水溶液中。將該溶液進行回流，並用0.1MNH4OH調PH到大約7.0。回流十五分鐘後，將該溶液冷卻，並在旋轉蒸發儀上濃縮至幹。真空條件下，在大約105℃的油浴上通過加熱白色固體將過量的乙酸銨除去。得到標題產物(其含有大約一當量的乙酸銨)373mg(99%)，並由以下數據來確定13CNMR(88℃，D2O，75MHz)24.4，28.4，51.2，56.5，57.2(2c)，57.7，67.2，67.6，120.5，132.3，135.2，182.1，182.5，183.0;快速原子撞擊質譜，m/e552(正離子，〔M+H+〕+)，m/e610(負離子，〔M+OAc-〕-)。實施例551-〔2-(4-氨基苯基)乙基〕-1，4，7，10-四氮雜環十二烷-4，7，10-三乙酸，釤配合物的製備〔Sm(EA-DO3A)〕。重複實施例54的步驟，用Sm(OAc)3·3H2O(0.229g381.531g/mole，0.600mmole)代替Y(OAc)3·4H2O，製備出標題產物(其含有約一當量的乙酸銨)408mg(99%)，並用以下數據來確定13CNMR(88℃，D2O，75MHz)23.8，27.9，51.4，57.5，58.1(3c)，68.7，73.4，120.3，132.2，134.7，185.0，186.8，192.1;快速原子撞擊質譜，m/e615(正離子，〔M+H+〕+，Sm同位素形式)，m/e673(負離子，〔M+OAc-〕-，Sm同位素型式)。實施例561-〔2-(4-硝基苯基)乙基〕-1，4，7，10-四氮雜環十二烷-4，7，10-三乙酸，釤(Ⅲ)配合物的製備。將10μl1.48mg/100μl(0.03M)的1-〔2-(4-硝基苯基)乙基〕-1，4，7，10-四氮雜環十二烷-4，7，10-三乙酸(用實施例20的步驟製備)的溶液加入到15μl摻有Sm-153的SmCl3溶液(0.02M的0.1NHCl溶液)中，加入NANOPureTM水使體積達到1ml。這種溶液被分成500μl的兩份，將一份在100℃加熱一小時，測試加熱和未加熱的樣品，用前面描述的陽離子交換方法測定以配合物形式存在的金屬的百分數。結果表明對於加熱的和未加熱的樣品，以配合物形式存在的金屬的百分數分別為81%和43%。實施例571-〔2-(4-硝基苯基)乙基〕-1，4，7，10-四氮雜環十二烷-4，7，10-三乙酸，釤(Ⅲ)配合物的PH穩定性。將實施例56的加熱的樣品分成兩份。一份用HCl調節，另一份用NaOH調節，以達到下表中所示出PH值。所期望的PH達到後，將樣品放置十分鐘，然後用前面所述的陽離子交換方法測定以配合物形式存在的金屬的量。下表中示出了其結果。實施例581-〔2-(4-氨基苯基)乙基〕-1，4，7，10-四氮雜環十二烷-4，7，10-三乙酸，釤(Ⅲ)配合物的製備。將3μl4.65mg/100ml的1-〔2-(4-氨基苯基)乙基〕-1，4，7，10-四氮雜環十二烷-4，7，10-三乙酸(由實施例20的步驟製備)溶液加入到15μl摻有Sm-153的SmCl3(0.02M的0.1NHCl溶液)溶液中。用NANOPureTM水使體積達到1ml。用NaOH將溶液的PH值調節到7.3。該溶液被分成兩份，一份在100℃加熱一小時。測試加熱和未加熱的樣品，用前面描述的陽離子交換方法測定以配合物形式存在的金屬的百分數。結果表明加熱的和未加熱的樣品中以配合物形式存在的金屬百分數分別為96%和93%。實施例591-〔2-(4-氨基苯基)乙基〕-1，4，7，10-四氮雜環十二烷-4，7，10-三乙酸，釤(Ⅲ)配合物的PH穩定性。將實施例58的加熱的和未加熱的樣品均分成兩份。每一樣品的其中一份用HCl調節，另一份用NaOH調節以達到下表中示出的PH值。達到希望的PH值後，將樣品放置十分鐘，然後用前面描述的陽離子交換方法測定以配合物形式存在的金屬的量。下表中示出了其結果1-(2-羥基-5-硝基苯甲基)-1，4，7，10-四氮雜環十二烷-4，7，10-三乙酸，釤(Ⅲ)配合物的製備。將3.9mg1-(2-甲氧基-5-硝基苯甲基)-1，4，7，10-四氮雜環十二烷-4，7，10-三乙酸(用實施例25的步驟製備)溶解在260μlNANOPureTM水中，製成3×10-2M的溶液。將一份10μl這種的溶液加入到15μl摻有10μlSm-153的0.1NHCl溶液(3×10-4M)2×10-2MSmCl3的溶液(水溶液)中。加入965μlDI水使體積達到1ml。然後用NaOH調節PH到7.0。將這個溶液分成500μl的兩份，一份在100℃加熱一小時。測試加熱和未加熱的樣品，用前面描述的陽離子交換方法測定以配合物形式存在的金屬的百分數。結果表明加熱的和未加熱的樣品中以配合物形式存在的金屬的百分數分別為71%和74%。實施例611-(2-羥基-5-硝基苯甲基)-1，4，7，10-四氮雜環十二烷-4，7，10-三乙酸，釤(Ⅲ)配合物的PH值穩定性。實施例60的加熱的和未加熱的樣品都被分成250μl的兩份。一份用HCl調PH，另一份用NaOH來調節PH值以達到下表中示出的PH值。達到期望的PH值後，將樣品放置十分鐘，然後用前面所描述的陽離子交換方法測定以配合物形式存在的金屬的量。結果示於下表中實施例621-(2-羥基-5-氨基苯甲基)-1，4，7，10-四氮雜環十二烷-4，7，10-三乙酸，釤(Ⅲ)配合物的製備將3.2mg的1-(2-羥基-5-氨基苯甲基)-1，4，7，10-四氮雜環十二烷-4，7，10-三乙酸(用實施例26的步驟製備)溶解於100μlNANOPureTM水中製備成3×10-2M的溶液。將一份10μl的這種溶液(稀釋到20μl)加入到15μl摻有Sm-153的2×10-2MSmCl3(水溶液)的溶液中。加入950μlDI水和20μl0.1NNaOH使體積達到1ml。這種溶液被分成500μl的兩份，一份在100℃加熱一小時。測試加熱的和未加熱的樣品，用前面所描述的陽離子交換方法測定以配合物形式存在的金屬的百分數。當被配合的金屬少於95%時，將該溶液通過SP-SephadexTM樹脂。再測定以配合物形式存在的金屬的百分數。其結果示於下表中實施例631-(2-羥基-5-氨基苯甲基)-1，4，7，10-四氮雜環十二烷-4，7，10-三乙酸，釤(Ⅲ)配合物的PH穩定性將實施例62的加熱的和未加熱的經色譜純化的樣品分別分成兩個250μl的份，一份用HCl調節，另一份用NaOH調節以達到表中所示的PH值。當希望的PH值達到後，將樣品放置10分鐘，然後用前面描述的陽離子交換方法測定以配合物形式存在的金屬的百分數。下表中示出了其結果我們已知道，在一些分子內具有金屬螯合基團如DTPA和反應活性的連接基(芳胺)的雙官能螯合劑能夠共價連接到各種對癌或腫瘤細胞抗原決定基或抗原具有特性的直接的生物分子靶上。這種共軛物的放射性核素配合物在診斷和/或治療的應用上是有效的，是輸送放射性核素到癌或腫瘤細胞上的一種手段。〔參考，Meares等人，Anal.Biochem.142，68-78，(1984);也參看討論部分，P215-216，J.ProteinChem.，3(2)(1984)，Meares和Goodwin;最近的參考文獻是Meares，美國專利4，678，677，1987.7.7發行，Warshawsky等人，美國專利4，652，519，1987.3.24.發行，和Brechbiel等人，Inorg.Chem.，25，2772-2781(1986)〕。可以想像到，使用了放射活性的或發光的金屬的產物，也可被用於體外免疫檢定。標記抗體的應用決定於一些因素，例如1)抗體的特性，2)在應用條件下配合物的惰性或穩定性(即，血清穩定性)，3)標記技術，即整個抗體可以具有同天然分子一樣的特性和免疫反應性。對於放射核素抗體共軛物用作診斷和/或治療試劑的效果，其配合物的穩定性或惰性是極為重要的。動力學的不穩定性可能導致不穩定性，例如，在血清中，以及放射性核素從配合物上的離解作用。這樣，便降低了診斷和治療的效果。另外，也形成了對於正常組織的一般放射性損害的巨大潛在性〔Cole等人，J.Nucl.Med.，28，83-90(1987)〕。放射性核素向抗體的結合可以採用兩種方法進行，或者通過現有技術中已知的步驟使BFC連接到抗體上，然後在與抗體相配伍的條件下進行放射性核素的螯合。或者，將抗體共軛到已成型的(室溫或高溫)金屬-BFC配合物上。〔Meares等人，Acc.Chem.Res.17，202-209(1984)〕。後面將提供實施例。實施例ZA(比較例)1-(4-異硫氰醯苯甲基)-二亞乙基三胺五乙酸，釤-153配合物向CC-49的IgG和F(ab′)2的共軛;〔153Sm(SCN-Bz-DTPA)〕-IgG和〔153Sm(SCN-Bz-DTPA)〕-F(ab′)2片段。通過將150μl153Sm的0.1NHCl溶液與9μl的1-(4-異硫氰醯苯甲基)二亞乙基三胺五乙酸混合，再向其中加入HEPES緩衝劑(0.5M，PH8.9，大約30μl)使PH達到約6，製備成1-(4-異硫氰醯苯甲基)二亞乙基三胺五乙酸，釤-153配合物〔153Sm(SCN-Bz-DTPA)〕。為了共軛，將22.5×10-9moles的CC-49的IgG或F(ab′)2(在50mmoleHEPES中，PH8.5，蛋白質濃度約為1×10-4M)與153Sm配合物混合，並加入碳酸鈉溶液(1.0M，12～15μl)調節PH到8.9。共軛作用在室溫(約25℃)下進行大約3小時。153Sm配合物標記的IgG或F(ab′)2被分離出來，並用與實施例Ⅻ中描述的相似方法進行鑑定。實施例Ⅰ和Ⅱ及對比例A-D雙官能螯合物的體內篩選某些確定的稀土螯合物的穩定性已在動物體內測試中得到了檢驗。例如，Rosoff等人，在theInternationalJournalofAppliedRadiationandIsotopes14，129-135(1963)中報告了具有放射活性的稀土螯合物在鼠體中對確定的氨基羧酸的分布情況。已發現在體內，「螯合劑與體內成份(無機的和有機的)對稀土離子的競爭決定了它的沉積和排洩」。強的稀土螯合物被認為離解的很少而被排洩出來，而弱的或中等強度的螯合物離解迅速，被沉積在諸如肝臟等器官中。但是，放射性核素在肝臟中的濃度並不總是由於弱的配合物形成的，在一些情況下，是由於金屬螯合物對肝臟具有的親合性。事實上，螯合物早已被製備並用來評價肝臟的功能〔Fritzberg，Alan.R.，RaoliopharmaCeuticalsProgressandClinicalPerspectives，Vol.1，1986;美國專利4，088，747和4，091，088〕。實施例3化合物的釔和釤的螯合物的生物分布已被測定，且其在肝臟中的百分比劑量被用作在體內的掩蔽方法來定性地評估螯合物的穩定性。為比較，包括了NTA和EDTA的螯合物。作為對照，也注射了釤，以未螯合的氯化釤形式。從CharlesRiver實驗室購進重量在150-200g的Sprague-Dawley鼠。將這些動物放在籠中，並隨意餵以水和食物。使用前讓這些動物馴化至少五天。在注射配合物前，將動物放在熱的燈下(15-30分鐘)，使其尾端靜脈膨脹。然後將動物放在約束籠中，用酒精棉棍清潔其尾部，通過尾端靜脈向動物注射(50-200μl)。注射後，動物被放到另一籠中兩小時，在這之後，通過頸脫位使動物死去，然後將動物解剖，各部分用去離子水漂洗，輕拍至幹，在一配衡的計量小瓶內稱重。製作出注射後的同一材料的至少三個標準，並以動物的組織計數。劑量百分數等於器官中的計數值除以標準中的計數值，乘以100(參看下表)。＊配合物是按以下配位體/金屬的比例製備的，對實施例Ⅰ和Ⅱ為1∶1;對實施例A為5∶1，對實施例B和C為大約300∶1。實施例Ⅲ和E用前面所述的方法製備1∶1的釔(摻有示蹤劑量的90Y)與實施例3中的配位體，即BA-DOTA，和EDTA(比較例E)的配合物，然後將幾份100μl的溶液轉移到離心分離管中。加入過量的Y(Ⅲ)，總體積的變化可以乎略，並且記錄時間。金屬加入一個半小時後，用前面描述的陽離子交換方法測定配合物的百分數，把這個結果與起始的配合物的量進行比較。配合物百分數與加入的金屬的比值能表示出配位體-金屬配合物的不穩定性。表中給出了其結果。表配合物的研究實施例Ⅳ1-〔2-(4-異硫氰醯苯基)乙基〕-1，4，7，10-四氮雜環十二烷-4，7，10-三乙酸，釤-153配合物的製備;〔153Sm(SCN-EA-DO3A)〕配合物向100μl153Sm的0.1NHCl溶液中加入5μl的SCN-EA-DO3A(5mM，在50mMHEPES中，PH8.2)(實施例18中製備)。該溶液在渦流混合器上混合，逐漸加入HEPES緩衝液(0.5M，PH8.9)(總共大約25μl)調節PH值到7左右。通過HPLC在GF-250柱上(HPLC體系Ⅰ)監測螯合過程。得到大約50%的產率。實施例Ⅴα-〔2-(4-氨基苯基)乙基〕-1，4，7，10-四氮雜環十二烷-1，4，7，10-四乙酸，釤-153配合物的製備;〔153Sm(PA-DOTA)〕配合物向150μl153Sm的0.1NHCl溶液(大約4.6mCi)中加入1μl的乙酸鈉(2.0M)和9μl的α-〔2-(4-氨基苯基)乙基〕-1，4，7，10-四氮雜環十二烷-1，4，7，10-四乙酸混合的銨-鉀鹽(5mmole，在50mmoleHEPES中，PH8.5，用實施例8的步驟製備)。機械振動該混合物，並逐步滴加HEPES緩衝液(0.5M，PH8.9;加入大約31μl)到PH為7。然後在沙浴上於98℃加熱該溶液一小時。以上過程結束後，取5μl混合物在Mono-QTM柱上用HPLC體系Ⅱ進行分析，用梯度溶劑體系來洗脫(0-15分鐘，從0至100%的B;其中A＝水，B＝1.0M乙酸銨和0.1mmoleEDTA)。得到85-95%的產率，以153Sm計。這樣製備的α-〔2-(4-氨基苯基)乙基〕-1，4，7，10-四氮雜環十二烷-1，4，7，10-四乙酸，釤-153配合物通過與相同的無放射活性的樣品的比較進行鑑定，即通過它們各自的在Mono-QTM和GF-250柱子上的色譜行為。存在放射活性的配合物的進一步證據是通過其向異硫氰醯衍生物的轉化和其後來的向抗體的螯合作用來確定的。配合物也可在不加熱(在環境溫度下)通過保溫6-18小時來製備，其產率為70-80%。實施例Ⅵα-〔2-(4-異硫氰醯苯基)乙基〕-1，4，7，10-四氮雜環十二烷-1，4，7，10-四乙酸，釤-153配合物的製備;〔153Sm(SCN-PA-DOTA)〕配合物向實施例Ⅴ中得到的反應混合物中加入2μl的HEPES緩衝液(0.5M，PH8.9)，2μl的硫光氣和0.2ml的氯仿。激烈地機械振動混合物2或3次，每次幾秒鐘。棄去氯仿層，留下主要含有所需產物的水層，並進一步純化。採用HPLC，在GF-250柱子上用HPLC體系Ⅰ測出α-〔2-(4-異硫氰醯苯基)乙基〕-1，4，7，10-四氮雜環十二烷-1，4，7，10-四乙酸，釤-153配合物的產率，以活性153Sm計，為85-90%。為了純化，讓水層經過Sep-PakTMC-18柱體，並用90%的乙腈水溶液洗脫。棄去開始的300μl流出物，隨後出來的900μl的SCN-衍生物用HPLC在GF-250柱上檢定。活性153Sm的回收率優於90%。然後將溶劑蒸發，歷時1.5-2小時，剩餘物被用來向抗體螯合。實施例Ⅶα-(4-氨基苯基)-1，4，7，10-四氮雜環十二烷-1，4，7，10-四乙酸，釤-153配合物的製備;〔153Sm(BA-DOTA)〕配合物向200μl153Sm的0.1NHCl溶液中加入1μl的乙酸鈉(2.0M)和12μl的α-(4-氨基苯基)-1，4，7，10-四氮雜環十二烷-1，4，7，10-四乙酸(5mmole，在50mmoleHEPES中，PH8.5)(用實施例3的步驟製備)。機械振動該混合物，並逐漸滴加HEPES緩衝液(0.5M，PH8.9;加入大約38μl)使PH到7。然後將該溶液在沙浴上98℃下加熱一小時。結束後，取5μl的混合物在Mono-QTM柱上進行分析(HPLC體系Ⅱ，用梯度溶劑體系洗脫0-15分鐘，從0至100%的B;其中A＝水;B＝1.0M乙酸銨和0.1mmoleEDTA)。通常得到的產率以153Sm計為85-95%。該配合物也可用在室溫下將混合物保溫12-18小時的方法製備，其標題產物的產率為80-90%。如此製備的α-(4-氨基苯基)-1，4，7，10-四氮雜環十二烷-1，4，7，10-四乙酸，釤-153配合物通過與一個真正的樣品進行比較，即比較它們在Mono-QTM柱上的色譜行為、向異硫氰醯衍生物的轉化作用和其後來向抗體的螯合作用來進行檢定。實施例Ⅷα-〔4-異硫氰醯苯基)-1，4，7，10-四氮雜環十二烷-1，4，7，10-四乙酸，釤-153配合物的製備;〔153Sm(SCN-BA-DOTA)〕配合物向實施例Ⅶ中得到的反應混合物中加入2μl的HEPES緩衝液(0.5M，PH8.9)，2μl的硫光氣和0.2ml的氯仿。將混合物繳烈地機械振動2或3次，每次幾秒鐘。棄去氯仿層，留下主要含有所需產物的水層。並進一步純化。基於153Sm活性，用HPLC體系Ⅰ，通過HPLC在GF-250柱上分析，α-(4-異硫氰醯苯基)-1，4，7，10-四氮雜環十二烷-1，4，7，10-四乙酸，釤-153配合物的產率為90%以上。為了純化，使水層經過Sep-PakTMC-18柱體，並用90%的乙腈水溶液洗脫，棄去開始的0.3ml流出物，隨後出來的1.2ml是所需產物，回收率為86-93%。然後蒸發掉溶劑大約需2小時，剩餘物被用來對抗體螯合。實施例Ⅸ1-〔2-(4-異硫氰醯苯基)乙基〕-1，4，7，10-四氮雜環十二烷-4，7，10-三乙酸，釤-153配合物向抗體的螯合;〔153Sm(SCN-EA-DO3A)〕-IgG螯合物使用的抗體是CC-49，-鼠科單克隆IgG，它可以結合到TAG-72，一個瘤締合抗原，的抗原決定基上。為了螯合，將187μl的抗體溶液(1.20×10-4M，在50mMHEPES中，PH8.5)與4.5×10-8moles的153Sm(SCN-EA-DO3A)(按照實施例Ⅳ中描述的方法製備)進行混合，隨後加入碳酸鈉溶液(1.0M)，使PH值升到8.9。反應在室溫下持續進行2小時。結束後，在SepadaxG-25(2.2ml)一次應用的柱子上用離心凝膠過濾法將153Sm標記的IgG分離出來，並在GF-250柱子上用HPLC進一步純化，用檸檬酸緩衝液(0.25M，PH7.4)洗脫。將含有標記IgG的部分沉澱下來，用CentriconTM濃縮器進行濃縮並交換(3×1)到PBS中。如此製備的153Sm標記的IgG的放射性比度大約是0.16μCi/μg蛋白質。通過HPLC(Sivakoff，S.I.，Biochrom1(1)，42-48(1986)〕和標準的生物化學方法，例如，十二烷基磺酸鈉聚丙醯胺凝膠電泳和放射自顯影法，及固相放射免疫測定法(RIA)〔參見DavidColcher等人，CancerRes.，43，736-742(1983)〕來鑑定〔153Sm(EA-DO3A)〕-IgG製備的定整性。實施例Ⅹ1-〔2-(4-異硫氰醯苯基)乙基〕-1，4，7，10-四氮雜環十二烷-4，7，10-三乙酸，釤-153配合物向CC-49的片段F(ab′)2的螯合;〔153Sm(SCN-EA-DO3A)〕-CC-49的片段F(ab′)2使CC-49的F(ab′)2片段，根據Lamoyi和Nisonoff描述的方法，用酶水解方法製備〔E.Lamoyi和A.Nisonoff，J.Immunol.Methods，56，235-243(1983)〕〔225μl，1×10-4M於50mMHEPES中的溶液，PH8.5〕與2.9×10-8moles的153Sm(SCN-EA-DO3A)(用實施例Ⅳ中描述的方法製備)進行混合。加入碳酸鈉(1.0M，大約5μl)使PH到8.9，讓反應持續進行大約2.5小時。結束後，將153Sm標記的片段分離出來，用實施例Ⅸ中描述的方法進行檢定。實施例Ⅺ(A和B)〔153Sm(EA-DO3A)〕-IgG和〔153Sm(EA-DO3A)-F(ab′)2在體內的定位153Sm(EA-DO3A)標記的IgG(實施例Ⅸ)和CC-49的F(ab′)2(實施例Ⅹ)的應用可通過異種移植到無胸腺的鼠身上的人類腫瘤對標記材料的吸收來證實。雌性無胸腺(Nu/Nu，CD1背景)鼠皮下接種(S.C.(0.1ml/源)以人類結腸癌細胞鏈，LS-174T(大約1×106個細胞/動物)。接種後大約兩周，每一動物都被通過尾部靜脈注射以大約2μCi(15-30μg)的在PBS中的153Sm標記的抗體。在不同的時間間隔裡，這些鼠都死去了。放血後，癌和選擇的組織被切下來並稱重。在一γ射線測定器中測定其放射性活性。測定在每一組織中的153Sm的每分鐘記數(CPM)，並被表示為CPM每克組織每一注射劑量剩以100(%注射劑量/克)。結果示於圖1～4和表ⅠA和ⅠB中。在研究中153Sm(SCN-Bz-DTPA)標記的IgG和CC-49的F(ab′)2(實施例ZA)被作為比較例。結果示於表ⅠC和ⅠD中。實施例Ⅻα-〔2-(4-異硫氰醯苯基)乙基〕-1，4，7，10-四氮雜環十二烷-1，4，7，10-四乙酸，釤-153配合物向抗體的共軛;〔153Sm(SCN-PA-DOTA)〕-IgG共軛物使用的抗體是CC-49，一鼠科單克隆IgG，其結合於TAG-72的抗原決定基，一個腫瘤締合的抗原。為了共軛，使178μl的抗體溶液(1.26×10-4M，在50mmole的HEPES中，PH8.5)與3.4×10-8moles的α-〔2-(4-異硫氰醯苯基)乙基〕-1，4，7，10-四氮雜環十二烷-1，4，7，10-四乙酸，釤配合物(用實施例Ⅵ中描述的步驟製備)進行混合，隨後加入碳酸鈉溶液(1.0M，大約17μl)使PH值升到大約8.9。使反應在室溫下持續2小時。結束後，用離心凝膠過濾法，在SephadexTMG-25(2.2ml)一次性應用的柱子上，將153Sm標記的IgG分離出來，並進一步在GF-250柱子上用HPLC純化，用檸檬酸緩衝液(0.25M，PH7.4)洗脫。含有標記IgG的部分被沉澱下來，用CentriconTM濃縮器濃縮並交換(3次)到PBS中。如此製備的153Sm標記的IgG的放射性比度大約為0.16μCi/μg蛋白質。採用HPLC和標準的生化方法如實施例Ⅸ中描述的來檢驗α-〔2-(4-異硫氰醯苯基)乙基〕-1，4，7，10-四氮雜環十二烷-1，4，7，10-四乙酸，釤-153配合物-IgG製備的完整性和一致性。下面的實施例是製備標記抗體共軛物的一種選擇方法，它包括先將BFC共軛到抗體上，然後再進行螯合，生成放射性核素-BFC標記的Ab。實施例ⅫAα-〔2-(4-氨基苯基)乙基〕-1，4，7，10-四氮雜環十二烷-1，4，7，10-四乙酸-AbCC49共軛物(IgGCC49-PA-DOTA)的製備;第二步與153Sm螯合形成153Sm標記的抗體(IgGCC49-PA-DOTA-153Sm)153Sm(PA-DOTA)標記的抗體可以通過下列步驟製備首先將BFC，例如，α-〔2-(4-異硫氰醯苯基)乙基〕-1，4，7，10-四氮雜環十二烷-1，4，7，10-四乙酸(SCN-PA-DOTA)，在PH8～9的條件下偶合到抗體上，然後在PH為6時，室溫下與153Sm螯合幾小時。在一典型的實驗中，CC-49在一Amicon濃縮器中(截去30K分子重量)被濃縮並經三次交換進入到碳酸鹽緩衝液中(50mM，PH9.1)使溶液中抗體濃度大於1.5×10-4M。向形成的共軛物中加入161μl含有25×10-9mole的IgGCC-49並混有5μl的SCN-PA-DOTA(5mM的濃度，在同樣的碳酸鹽緩衝液中，由實施例18的方法製備)的抗體溶液。使混合液在室溫下放置5小時，最後在5000轉/分的SorvallRT離心機上，通過Amico濃縮器中的30K膜片過濾。濃縮液進一步用2ml0.25M，PH值為7.4的DTPA的PBS溶液洗滌，並用MES緩衝液(20mM，PH5.8)洗滌5次(2ml每次)，每次洗滌時離心30分鐘。最後，PA-DOTA-IgG共軛物被濃縮到最小體積(大約100μl)，在GF-250柱上用HPLC分析證實其完整性。向純化了的共軛物中加入153Sm的0.1NHCl溶液(50μl)和20μl的MES緩衝液(1.0M，PH6)的在渦流混合器上混合後的混合液，並使其在室溫下放置過夜。結束後，未結合的153Sm的量，經HPLC分析估計，是0.22BFC-Sm/抗體。153Sm與抗體的結合是通過與BFC的螯合來完成的，它是共價結合到抗體上的，通過對照實驗證實了其並不屬於非特性結合。在對照實驗中，IgGCC-49溶液，是在相同的條件下與153Sm混合液混合的，並根據相同的方法被分離出來，其沒有顯示出明顯量的153Sm與其結合。實施例ⅩⅢα-〔2-(4-異硫氰醯苯基)-乙基〕-1，4，7，10-四氮雜環十二烷-1，4，7，10-四乙酸，釤-153配合物向CC-49的片段F(ab′)2的共軛;〔153Sm(SCN-PA-DOTA)〕-F(ab′)2片段使CC-49的F(ab′)2片段〔根據E.Lamoyi等人，J.Immunol.Methods56，235-243(1983)描述的方法，通過酶水解製備〕，(225μl的1×10-4M的溶液，在50mmolesHEPES中，PH8.5)與2.9×10-8moles的α-〔2-(4-異硫氰醯苯基)乙基〕-1，4，7，10-四氮雜環十二烷-1，4，7，10-四乙酸，釤-153配合物(用實施例Ⅵ中描述的方法製備)進行混合，加入碳酸鈉(1.0M，9μl)使PH值達到8.9左右，反應持續進行約2.5小時。分離出153Sm標記的片段，並用實施例Ⅸ中描述的方法鑑定。其放射性比度大約是0.4μCi/μg。實施例ⅩⅣ(A和B)α-〔2-(4-異硫氰醯苯基)乙基〕-1，4，7，10-四氮雜環十二烷-1，4，7，10-四乙酸，釤-153配合物標記的IgG和F(ab′)2的共軛物的體內定位;〔153Sm(SCN-PA-DOTA)〕-IgG和〔153Sm(SCN-PA-DOTA)〕-F(ab′)2α-〔2-(4-異硫氰醯苯基)乙基〕-1，4，7，10-四氮雜環十二烷-1，4，7，10-四乙酸，釤-153配合物標記的IgG和CC-49的F(ab′)2(實施例Ⅻ和ⅩⅢ)的共軛物的應用可通過異種移植到無胸腺鼠體內的人類腫瘤對標記材料的吸收來證實。用實施例Ⅺ中描述的方法測定生物定位。IgG的結果示於圖1-7，F(ab′)2的結果示於圖8-14中，以及表ⅡA和ⅡB中。在研究中，153Sm(SCN-Bz-DTPA)與IgG和F(ab′)2共軛物標記的材料(由實施例ZA製備)被用來作為比較，〔參見表ⅠC和ⅠD〕。實施例ⅩⅤα-(4-異硫氰醯苯基)-1，4，7，10-四氮雜環十二烷-1，4，7，10-四乙酸，釤-153配合物向抗體的共軛;〔153Sm(SCN-BA-DOTA)〕-IgG將CC-49的整個IgG(174μl，1.2×10-4M，在0.25MHEPES中，PH8.7)與2.0×10-8moles的α-(4-異硫氰醯苯基)-1，4，7，10-四氮雜環十二烷-1，4，7，10-四乙酸，釤-153(2.8mCi)(用實施例Ⅷ中的方法製備)進行混合，隨後加入碳酸鈉溶液(1.0M，大約2μl)以保持PH大約為8.7。在室溫下讓反應持續2.5小時。結束後，在SephadexTMG-25(2.2ml)一次性使用的柱子上用離心凝膠過濾法分離出153Sm標記的IgG，並用HPLC在GF-250柱子上進一步純化，用檸檬酸緩衝液(0.25M，PH7.4)洗脫。將含有標記的IgG部分沉澱下來，利用CentriconTM濃縮器將其濃縮，並交換(3次)到PBS中。通過HPLC和標準的生化方法，如在實施例Ⅸ中描述過的，來驗證釤-153標記的IgG製備的一致性和完整性。實施例ⅩⅥα-(4-異硫氰醯苯基)-1，4，7，10-四氮雜環十二烷-1，4，7，10-四乙酸，釤-153配合物向CC-49的片段F(ab′)2的共軛;〔153Sm(SCN-BA-DOTA)〕-CC-49的F(ab′)2片段將CC-49的F(ab′)2(84μl，2.4×10-4M，在0.25MHEPES緩衝液中，PH8.7)，根據Lamoyi等描述的方法用酶水解製備，與2.1×10-8moles的α-(4-異硫氰醯苯基)-1，4，7，10-四氮雜環十二烷-1，4，7，10-四乙酸，釤-153配合物(用實施例Ⅷ的方法製備)進行混合，加入碳酸鈉(1.0M，大約2μl)使PH值到8.7，讓反應持續進行大約2小時。結束後，分離出153Sm標記的片段，並用實施例Ⅻ中描述的方法來鑑定。實施例ⅩⅦ(A和B)α-(4-異硫氰醯苯基)-1，4，7，10-四氮雜環十二烷-1，4，7，10-四乙酸，釤-153配合物標記的IgG(實施例ⅩⅤ)和F(ab′)2(實施例ⅩⅥ)的體內定位;〔153Sm(BA-DOTA)〕-IgG和〔153Sm(BA-DOTA)〕-F(ab′)2。根據實施例ⅩⅣ或Ⅺ中描述的步驟來進行體內研究，結果示於圖1-14和表ⅢA和ⅢB中。實施例ⅩⅧ(A和B)α-〔2-(4-異硫氰醯苯基)乙基〕-1，4，7，10-四氮雜環十二烷-1，4，7，10-四乙酸，177Lu-配合物標記的IgG和F(ab′)2的體內定位;〔177Lu(PA-DOTA)〕-IgG和〔177Lu(PA-DOTA)〕-F(ab′)2根據實施例Ⅴ，Ⅵ，Ⅻ，和ⅩⅢ中描述的步驟，製備出標題化合物，並進行體內研究，其結果示於表ⅣA和ⅣB中。實施例ⅩⅨ(A和B)α-〔2-(4-異硫氰醯苯基)乙基〕-1，4，7，10-四氮雜環十二烷-1，4，7，10-四乙酸，釔-90配合物標記的IgG和F(ab′)2的體內定位;〔90Y(PA-DOTA)〕-IgG和〔90Y(PA-DOTA)〕-F(ab′)2根據實施例Ⅴ，Ⅵ，Ⅻ，和ⅩⅢ中描述的步驟，製備標題化合物，並進行體內研究，其結果示於表ⅤA和ⅤB中。實施例ⅩⅩ〔153Sm(BFC)〕-CC-49-IgG和〔177Lu(BFC)〕-CC-49-IgG的體內PH穩定性將〔153Sm(BFC)〕-CC-49-IgG或〔177Lu(BFC)〕-CC-49-IgG放置在0.2MNaOAc緩衝液中，其PH值分別為6.0，4.0和2.8，且在室溫下，蛋白質的濃度大約為5×10-6M，並有大約0.5配合物/抗體。在一定的時間間隔內取樣，用HPLC(GF-250柱)分析活性153Sm或177Lu從蛋白質上的離解作用。通常該研究要進行5天，或直到有90%的放射性同位素都已離解。結果以每天放射性同位素的損失的初始速度來表示。結果證實了153Sm(PA-DOTA)，177Lu(PA-DOTA)，153Sm(BA-DOTA)和153Sm(OMe-BA-DOTA)與標準的〔153Sm(Bz-DTPA)〕配合物相比較，在酸性PH下具有很好的穩定性。結果示於下表中。配合物的這個較大的穩定性也與153Sm和177Lu從人體和非目標組織上(如腎、肝)較快速的排除有密切的關係。參看圖1-14。實施例ⅩⅪ(A和B)α-(2-甲氧基-5-氨基苯基)-1，4，7，10-四氮雜環十二烷-1，4，7，10-四乙酸，釤-153配合物標記的IgG和F(ab′)2的體內定位;〔153Sm(MeO-BA-DOTA)〕-IgG和〔153Sm(MeO-BA-DOTA)〕-F(ab′)2根據實施例Ⅴ，Ⅵ，和Ⅻ中描述的方法製備標題化合物，用實施例Ⅺ中的方法進行體內研究。結果示於表ⅥA和ⅥB中。實施例ⅩⅫ153Sm(PA-DOTMA)配合物的製備向100μl的153Sm(0.3×10-3M，在0.01NHCl中;5mCi)中加入6μl的PA-DOTMA(用實施例29的方法製備的高Rf的非對映體;5mM，在Milli-QTM水中)，20μl的MES緩衝液(1.0M，PH6)和1μl的HEPES緩衝液(0.5M，PH8.7)。該溶液在渦流混合器上混合，且該混合物最終的PH值大約為6。在90℃下，將混合物加熱30分鐘後，通過HPLC在GF-250柱上分析其螯合效果，一般能得到90%或更好的產率。153Sm-PA-DOTMA配合物的檢定可以通過與非放射性活性的Sm配合物比較而得到。非放射性活性的配合物已在實施例42中分別被合成和鑑定過。實施例ⅩⅩⅢ153Sm(SCN-PA-DOTMA)的製備向實施例ⅩⅫ中製備的，並已在室溫下冷卻了20分鐘的153SmPA-DOTMA配合物中加入10μl1%的硫光氣在90%的乙腈-水介質中形成的溶液。將該混合物在渦流混合器上激烈地混合，並在室溫下放置5～20分鐘。反應連續進行，並用HPLC分析來監測。為了純化具有活性的153Sm配合物，用氯仿將其萃取3次(每次200μl)，使水層經過預先用5ml的甲醇和5ml的MES緩衝液(20mM，PH5.8)處理的PRP柱體(PRP柱體＝Mini-CleanTM柱子。來自AlltechAssociates，Deerfield，IL)。先用5ml的MES緩衝液和5ml的Milli-QTM水洗滌後，用900μl90%的乙腈將其萃取，回收了大約90%的活性153Sm，將開始的100μl棄去。減壓下在溫度低於40℃時將混合物蒸發至幹，主要含有標題產物的剩餘物被用來對抗體進行共軛作用。實施例ⅩⅩⅣ153Sm(SCN-PA-DOTMA)對IgG和F(ab′)2CC49的共軛作用通常在一個CentriconTM濃縮器上(斷掉30K分子重量)將抗體濃縮，並交換到碳酸鹽緩衝液中(PH9.1或9.5，50mM)，使蛋白質的濃度為1.5×10-4M或更大。為了共軛，將少量的碳酸鹽緩衝液，利用它使最終的蛋白質濃度達1.5×10-4M，加入到153Sm(PA-DOTMA)的異硫氰醯衍生物中(實施例ⅩⅫ中製備)，隨後濃縮抗體，與BFC-153Sm配合物等當量。在渦流混合器上混合該混合物，使反應在室溫下進行1小時或直到有40～50%的153Sm結合到了抗體上，經HPLC分析在GF-250柱子上表現出來。通過兩個串聯的離心凝膠過濾SephadexTMG-25柱(2.2ml)分離出標記的抗體。標記的抗體的免疫反應性、完整性和一致性通過HPLC和前面所述的標準的生化技術來分析。實施例ⅩⅩⅤ153Sm(PA-DOTMA)標記的IgG和F(ab′)2CC-49的生物分布研究利用實施例Ⅺ中描述的相似方式進行研究，結果示於表ⅦA和ⅦB中。參看圖15-28。實施例ⅩⅩⅥ177Lu(PA-DOTMA)配合物的製備向30μl的177Lu(6×10-3M，在1.1NHCl中;4mCi)中加入36μl的PA-DOTMA(用實施例29的方法製備;5mMmilli-QTM水溶液)。該溶液在渦流混合器中混合，加入115μl的MES緩衝液(1.0M，PH6.0)中和溶液使PH約為5.5～6。將該溶液在90℃時加熱30分鐘，使螯合率大於90%。讓混合物經過預先用5ml的甲醇和5ml的MES緩衝液(20mM，PH5.8)處理的PRP柱體，用5ml的milli-QTM水洗滌柱體，用1000μl90%的乙腈萃取絡合物，其佔起始活性177Lu的78%(棄去開始的100μl的萃取液)。實施例ⅩⅩⅦ177Lu(SCN-PA-DOTMA)的製備向實施例ⅩⅩⅥ中得到的存在於90%的乙腈中的177Lu(PA-DOTMA)配合物中加入6μl的10%硫光氣在90%的乙腈中形成的溶液。該溶液在渦流混合器上混合，20分鐘後，用HPLC分析異硫氰酸鹽衍生物的形成。一般地，該反應是定量進行的。在減壓條件下，溫度低於40℃時，蒸發1～2小時除去溶劑和過量的硫光氣，剩餘物被用來與抗體進行共軛作用。實施例ⅩⅩⅧ177Lu(PA-DOTMA)對IgGCC-49的共軛作用將在碳酸鹽緩衝液(50mM，PH9.1)中的抗體IgGCC-49與在相同緩衝液中的等摩爾量的異硫氰醯衍生物(用實施例ⅩⅩⅦ中的方法製備)進行混合，反應持續進行70分鐘，抗體濃度為1.5×10-4M，分離出標記的抗體，並根據實施例ⅩⅩⅣ中描述的方法進行鑑定。實施例ⅩⅩⅨ177Lu(PA-DOTMA)標記的IgGCC-49的長期生物分布研究用177Lu標記的抗體進行長期的動物實驗，利用其半衰期長的優點(161小時)。根據實施例Ⅺ中描述的方式，該實驗在Balb/C老鼠體中進行三個多星期，結果示於表ⅧA中。參看圖29-34。在圖中，下表中的點和數據，所用的符號是＊在帶有LS174-T腫瘤的裸體小鼠中。＊＊在Blab/C鼠中＊在帶有LS174-T腫瘤的裸體小鼠中。＊＊在Blab/C鼠中根據本文公開的發明說明書和實例，本發明的其它具體實例對於那些熟練的技術人員來說將是明顯的，說明書和實施例僅僅是作為例證，發明的真正範圍和實質是由下面的權利要求書表示的。權利要求1.一種製備式(IA)化合物的方法，其中每個Q分別是氫或(CHR5)pCO2R；Q1是氫或(CHR5)wCO2R；每個R分別是氫、苄基或C1-C4烷基；條件是Q和Q1總和中至少兩個必須不是氫；每個R5分別是氫或C1-C4烷基；X和Y每個分別是氫或者可以與相鄰的X和Y形成另外的碳-碳鍵；n是0或1；m是包括0到10的整數；p=1或2；r=0或1；w=0或1；條件是當X和/或Y形成另外的碳-碳鍵時，n僅是1，且r和w的總和是0或1；R2選自由氫、硝基、氨基、異硫氰酸根合、脲氨基、硫代脲氨基、馬來醯亞胺基、溴乙醯胺基和羧基所組成的基團；R3選自由C1-C4烷氧基、-OCH2CO2H、羥基和氫組成的基團；R4選自由氫、硝基、氨基、異硫氰酸根合、脲氨基、硫代脲氨基、馬來醯亞胺基、溴乙醯胺基和羧基組成的基團；條件是R2和R4不能兩個都是氫，但R2和R4中的一個必須是氫；或其藥學上可接受的鹽；該方法包括下列步驟中的任何一個(A)式(ⅢA)化合物其中X和Y各自分別是氫或者可以與相鄰的X和Y形成另外的碳-碳鍵；n是0或1；m是包括0到10的整數；r=0或1；條件是當X和/或Y形成另外的碳-碳鍵時，n僅是1；與下式的α-滷代羧酸酯其中每個R分別是苄基或C1-C4烷基；在一有機溶劑和鹼的存在下，在0℃至回流的溫度下進行反應，得到式(IA)化合物其中X、Y、m、n、r定義如前；Q1、R3、R4、R5是氫；R是C1-C4烷基或苄基；以及R2是硝基；或者(B)步驟(A)的產物與氫化試劑如pd/c和氫一起在標準反應條件下進行反應，生成式(IA)化合物其中X、Y、m、n、r定義如前；Q1、R3、R4、R5是氫；R是C1-C4烷基或苄基；以及R2是氨基；或者(C)定義如上的式(ⅢA)化合物與氫化試劑和pd/c和氫一起在標準反應條件下進行反應，接著在有溶劑的存在下，與氯化氫氣體反應，生成式(IA)化合物，其中X，Y，m，n，r定義如前；Q1、R3、R4是氫；以及R2是氨基；或者(D)步驟(C)的產物與下式的α-滷代羧酸酯其中每個R分別是苄基或C1-4烷基；在有一有機溶劑和鹼的存在下，在從0℃到回流的溫度下進行反應生成式(IA)化合物，其中X、Y、m、n、r定義如前；Q1、R3、R4、R5是氫；R是C1-4烷基或苄基；以及R2是氨基；或者(E)下式的化合物其中Q1是(CHR5)wCO2R；每個R分別是苄基或C1-4烷基；每個R5分別是氫或C1-4烷基；X和Y各自分別是氫或者可以與相鄰的X和Y形成另外的碳-碳鍵；n是0或1；m是包括0到10的整數；r=0或1；w=0或1；條件是r和w的總和是0或1；與下式的α-滷代羧酸酯BrCH2CO2R其中每個R分別是苄基或C1-4烷基；在有一有機溶劑和鹼的存在下，在0℃到回流的溫度下進行反應，生成式(IA)化合物，其中X、Y、Q1、m、n、r定義如前；R3、R4、R5是氫；R是C1-4烷基或苄基；以及R2是硝基；或者(F)、步驟(E)的產生與氫化試劑如pd/c和氫一起在標準反應條件下進行反應，生成式(IA)化合物，其中X、Y、Q1、m、n、r定義如前；R3、R4、R5是氫；R是C1-4烷基或苄基；以及R2是氨基；或者(G)步驟(B)，或步驟(D)的產物與一脫酯化試劑如強酸進行反應，生成式(IA)化合物，其中X、Y、m、n、r定義如前；Q1、R3、R4、R5是氫；R是氫；以及R2是氨基；或者(H)、步驟(F)的產物與一脫酯化試劑如強酸進行反應，生成式(IA)化合物，其中X、Y、Q1、m、n、r定義如前；R3、R4、R5是氫；R是氫；以及R2是氨基；或者(I)步驟如上定義的式(VA)化合物與下式的旋光活性的α-苯磺酸酯進行反應其中R和R5定義如前，生成式(IA)化合物，其中X、Y、Q1、R5、m、n、r定義如前；R3和R4是氫；R是C1-4烷基或苄基；以及R2是硝基；或者(J)步驟(I)的產物與氫化試劑如pd/c和氫一起在標準反應條件下進行反應，生成式(IA)化合物，其中X、Y、Q1、R5、m、n、r定義如前；R3和R4是氫；R是C1-4烷基或苄基；以及R2是氨基；或者(K)步驟(J)的產物與一脫酯化試劑如強酸進行反應，生成式(IA)的化合物，其中X、Y、Q1、R5、m、n、r定義如前；R3、R4和R是氫；以及R2是氨基；或者(L)下式化合物其中X和Y各自分別是氫或者可以相鄰的X和Y生成另外的碳-碳鍵；R3'是C1-4烷氧基，-OCH2COOH或OH；n是0或1；m是包括0到10的整數；r=0或1；條件是當X和/或Y生成另外的碳-碳鍵時，n僅是1；與下式的α-滷代羧酸在一有機溶劑和鹼的存在下，在0℃到回流的溫度下進行反應，生成式(IA)化合物，其中X、Y、R3'、m、n、r定義如前；Q1和R2是氫；以及R4是硝基；或者(M)步驟(L)的產物與與氫化試劑如pd/c和氫一起在標準反應條件下進行反應，生成式(IA)化合物，其中R3'X、Y、m、n、r定義如前；Q1R、R2和R5是氫；以及R2是氨基；或者(N)下式化合物其中X和Y各自分別是氫或者可以與相鄰的X和Y生成另外的碳-碳鍵；Q1是CH2CO2R；R是苄基或C1-4烷基；n是0或1；m是包括0到10的整數；r=0或1；條件是當X和/或Y生成另外的碳-碳鍵時，n僅是1；與下式的α-滷代羧酸其中R定義如前；在一有機溶劑和鹼的存在下，在0℃至回流的溫度下進行反應，生成式(IA)化合物，其中X、Y、Q1、Q、m、n、r定義如前；R2是氫；以及R4是硝基；或者(O)步驟(N)的產物與一脫酯化試劑如強酸在標準反應條件下進行反應，接著用一氫化試劑如pd/c和氫一起進行反應，反應在標準條件下進行，生成式(IA)化合物，其中X、Y、Q1、Q、m、n、r定義如前；R、R2和R5是氫；以及R2是氨基。(P)將(G)、(FO、(K)、(M)或(O)步驟的產物與硫光氣進行反應，以提供相應的化合物其中R2或R4是異硫氰基。2.根據權利要求1的製備式(ⅠA)的化合物的藥物上可接受的鹽的方法，此法包括將式(ⅠA)的化合物，用已知的方法，與一種製劑進行反應，以製備作為藥物上可接受的鹽的鉀、鈉、鋰、銨、鈣、鎂或氫氯酸的加合物。3.根據權利要求1(B)的製備1-〔2-(4-氨基苯基)乙基〕-1，4，7，10-四氮雜環十二烷-4，7，10-三乙酸、4，7，10-三甲酯的方法，此法包括將1-〔2-(4硝基苯基)乙基〕-1，4，7，10-四氮雜環十二烷-4，7，10-三乙酸、4，7，10-三甲酯與氫和擔載在碳上的鈀進行反應。4.根據權利要求1(G)的製備1-〔2-4氨基苯基)乙基〕-1，4，7，10-四氫雜環十二烷-4，7，10-三乙酸、氫氯酸鹽的方法，此法包括將1-〔2-(4-氨基苯基)乙基〕-1，4，7，10-四氮雜環十二烷-4，7，10-三乙酸、4，7，10-三甲酯與氫氯酸進行反應。5.根據權利要求1(P)的製備1-〔2-(4-異硫氰基苯基)乙基〕-1，4，7，10-四氮雜環十二烷-4，7，10-三乙酸的方法，此法包括將1-〔2-(4-氨基苯基)乙基〕-1，4，7，10-四氮雜環十二烷-4，7，10-三乙酸、氫氯酸鹽與硫光氣進行反應。6.根據權利要求1(A)的製備1-(4-氨基苄基)-1，4，7，10-四氮雜環十二烷-4，7，10-三乙酸、氫氯酸鹽的方法，此法包括將1-(4-氨基苄基)-1，4，7，10-四氮雜環十二烷、四氫氯酸鹽與溴代乙酸甲酯進行反應。7.根據權利要求1(M)的製備1-(2-甲氧基-5-氨基苄基)-1，4，7，10-四氮雜環十二烷-4，7，10-三乙酸的方法，此法包括將1-(2-甲氧基-5-硝基苄基)-1，4，7，10-四氮雜環十二烷-4，7，10-三乙酸與氫在帕爾彈(Parrbomb)中進行反應。8.根據權利要求1(M)的製備1-(2-羥基-5-氨基苄基)-1，4，7，10-四氮雜環十二烷-4，7，10-三乙酸的方法，此法包括將N-(2-羥基-5-硝基苄基)-1，4，7，10-四氮雜環十二烷-4，7，10-三乙酸與氫和PtO2進行反應。9.根據權利要求1(J)的製備α-〔2-(4-氨基苯基)乙基〕-1，4，7，10-四氮雜環十二烷-1-(R，S)-乙酸-4，7，10-三-(R-甲基乙酸)、1-異丙酯-4，7，10-三甲酯的方法，此法包括將α-〔2-(4-硝基苯基)乙基〕-1，4，7，10-四氮雜環十二烷-1-(R，S)-乙酸-4，7，10-三(R-甲基乙酸)、1-異丙酯-4，7，10-三甲酯與氫和擔載在碳上的鈀進行反應。10.根據權利要求1(K)的製備α-〔2-(4-氨基苯基)乙基〕-1，4，7，10-四氮雜環十二烷-1-(R，S)-乙酸-4，7，10-三(R-甲基乙酸)的方法，此法包括將α-〔2-(4-氨基苯基)乙基〕-1，4，7，10-四氮雜環-1-(R，S)-乙酸-4，7，10-三-(R-甲苯乙酸)、1-異丙酯-4，7，10-三甲酯與氫氯酸進行反應。11.根據權利要求1(P)的製備α-〔2-(4-異硫氰基苯基)乙基〕-1，4，7，10-四氮雜環十二烷-1-(R，S)-乙酸-4，7，10-三-(R-甲基乙酸)的方法，此法包括將α-〔2-(4-氨基苯基)乙基〕-1，4，7，10-四氮雜環十二烷-1-(R，S)-乙酸-4，7，10-三-(R-甲基乙酸)與硫光氣進行反應。12.根據權利要求1(F)的製備α-(4-氨基苯基)-1，4，7，10-四氮雜環十二烷-1，4，7-三乙酸的方法，此法包括將α-(4-硝基苯基)-1，4，7，10-四氮雜環十二烷-1，4，7-三乙酸與氫和PtO2進行反應。13.根據權利要求1(F)的製備α-(4-氨基苯基)-1，4，7，10-四氮雜環十二烷-1，4，10-三乙酸的方法，此法包括將α-(4-硝基苯基)-1，4，7，10-四氮雜環十二烷-1，4，10-三乙酸與氫和PtO2進行反應。14.根據權利要求1(F)的製備α-(4-氨基苯基)-1，4，7，10-四氮雜環十二烷-1，4，7，10-四乙酸的方法，此法包括將α-(4-硝基苯基)-1，4，7，10-四氮雜環十二烷-1，4，7，10-四乙酸與氫和PtO2進行反應。15.根據權利要求1(P)的製備α-(4-異硫氰基苯基)-1，4，7，10-四氮雜環十二烷-1，4，7，10-四乙酸的方法，此法包括將α-(4-氨基苯基)-1，4，7，10-四氮雜環十二烷-1，4，7，10-四乙酸與硫光氣進行反應。16.根據權利要求1(E)的製備α-〔2-(4-硝基苯基)乙基〕-1，4，7，10-四氮雜環十二烷-1，4，7，10-四乙酸、1，4，7，10-四甲酯的方法，此法包括將α-〔2-(4-硝基苯基)乙基〕-1，4，7，10-四氮雜環十二烷-1-乙酸、1-甲酯與溴代乙酸甲酯進行反應。17.根據權利要求1(F)的製備α-〔2-(4-氨基苯基)乙基〕-1，4，7，10-四氮雜環十二烷-1，4，7，10-四乙酸、1，4，7，10-四甲酯的方法，此法包括將α-〔2-(4-硝基苯基)乙基〕-1，4，7，10-四氮雜環十二烷-1，4，7，10-四乙酸、1，4，7，10-四甲酯與氫和擔載在碳上的鈀進行反應。18.根據權利要求1(H)的製備α-〔2-(4-氨基苯基)乙基〕-1，4，7，10-四氮雜環十二烷-1，4，7，10-四乙酸的方法，此法包括將α-〔2-(4-氨基苯基)-乙基〕-1，4，7，10-四氮雜環十二烷-1，4，7，10-四乙酸、1，4，7，10-四甲酯與氫氯酸進行反應。19.根據權利要求1(P)的製備α-〔2-(4-異硫氰基苯基)乙基〕-1，4，7，10-四氮雜環十二烷-1，4，7，10-四乙酸的方法，此法包括將α-〔2-(4-氨基苯基)乙基〕-1，4，7，10-四氮雜環十二烷-1，4，7，10-四乙酸與硫光氣進行反應。20.根據權利要求1(O)的製備α-(2-甲氧基-5-硝基苯基)-1，4，7，10-四氮雜環十二烷-1，4，7，10-四乙酸的方法，此法包括將α-(2-甲氧基-5-硝基苯基)-1，4，7，10-四氮雜環十二烷-1，4，7，10-四乙酸、四甲酯與氫氯酸進行反應。21.根據權利要求1(O)的製備α-(2-甲氧基-5-氨基苯基)-1，4，7，10-四氮雜環十二烷-1，4，7，10-四乙酸、四氨鹽的方法，此法包括將α-(2-甲氧基-5-硝基苯基)-1，4，7，10-四氮雜環十二烷-1，4，7，10-四乙酸與氫和PtO2進行反應。22.根據權利要求1(P)的製備α-(2-甲氧基-5-異硫氰基苯基)-1，4，7，10-四氮雜環十二烷-1，4，7，10-四乙酸、四氨鹽的方法，此法包括將α-(2-甲氧基-5-氨基苯基)-1，4，7，10-四氮雜環十二烷-1，4，7，10-四乙酸與硫光氣進行反應。23.製備權利要求1至22中的任何一項權利要求的化合物的絡合物的方法，其中與該化合物絡合的金屬離子選自La、Ce、Pr、Nd、Pm、Sm、En、Gd、Tb、Dy、Ho、Er、Tm、Yb、Lu、Y和Sc，此法包括將該化合物與該金屬離子進行反應。24.根據權利要求23的方法，其中該金屬離子是153Sm、166Ho、90Y、149Pm、159Gd、140La、199Lu、175Yb、49Sc或142Pr。25.根據權利要求24的方法，其中該金屬離子是153Sm、177Lu或90Y。26.根據權利要求23至25中的任何一項權利要求的方法，其中將該反應加熱。27.製備含有權利要求1至22中的任何一項權利要求的化合物的絡合物的共軛物的方法，其中與該化合物絡合的金屬離子選自La、Ce、Pr、Nd、Pm、Sm、Eu、Gd、Tb、Dy、Ho、Er、Tm、Yb、Lu、Y和Sc，此法包括將該絡合物以共價鏈合的方式連接在抗體或抗體碎片上。28.根據權利要求27的方法，其中該金屬離子是153Sm、166Ho、90Y、149Pm、159Gd、140La、199Lu、175Yb、49Sc或142Pr。29.根據權利要求28的方法，其中該金屬離子是153Sm、179Lu或90Y。30.根據權利要求27至29中的任何一項權利要求的共軛物，其中該抗體或抗體碎片是一種單細胞系抗體或其碎片。31.根據權利要求30的共軛物，其中該抗體或抗體碎片是CC-49、CC-49F(ab′)2、CC-83、CC83F(ab′)2或B72.3。32.製備含有權利要求1至22中的任何一項權利要求的化合物的共軛體的方法，其中該化合物以共價鏈合的方式連接在抗體或抗體碎片上，此法包括將該合物與一種抗體或抗體碎片進行反應。33.根據權利要求32的共軛物，其中該抗體或抗體碎片是一種單細胞系抗體或其碎片。34.根據權利要求33的共軛物，其中該抗體或抗體碎片是CC-49、CC-49F(ab′)2、CC-83、CC-83F(ab′)2或B72.3。全文摘要本發明公開了一組與稀土類金屬離子形成配合物的官能化的多氨基羧酸酯螯合劑。該配合物可共價連結到抗體或抗體片段上，用於診斷和/或治療目的。文檔編號C07D257/02GK1044095SQ8910640公開日1990年7月25日申請日期1989年6月23日優先權日1988年6月24日發明者羅伯特·C·鄭,威廉·A·福代斯,威廉·F·葛凱勒,小威廉·J·克魯帕,沙朗·包曼,約瑟夫·R·加裡希,肯尼思·麥克米倫,戴維·A·威爾遜,加裡·基法,賈米·J·西蒙,理察·基思·弗蘭克申請人:唐化學原料公司