經取代∴啉－4－基胺的製作方法
2023-10-04 13:03:04 2
專利名稱：經取代∴啉－4－基胺的製作方法
技術領域：
本發明概括地關於一種具有有效的醫藥性質的經取代
啉-4-基胺。本發明進一步關於使用此等化合物治療與辣椒素(capsaicin)受體活化相關病症的用途，以此等化合物檢測其它與辣椒素受體結合製劑的用途，以及作為辣椒素受體的檢測和定位的探針(probe)的用途。
先前技術 疼痛知覺，或傷害性感覺(nociception)，是由一組特殊化的感覺神經元，稱為「傷害性受體(nociceptors)」的周邊末梢神經所調節。各種不同物理和化學刺激會誘導哺乳動物體內此等神經元的活化，導致對潛在傷害性刺激的認知。然而，不適當或過度活化傷害性受體可能導致急性或慢性疼痛衰弱(debilitating)。
神經病變性疼痛包括在沒有刺激下的疼痛訊號傳遞，且典型地是由神經系統受損所致。於大部份情況中，此等疼痛是因周邊系統受到初次傷害後(例如，經由直接傷害或全身性疾病)造成周邊和中樞神經系統的敏化作用(sensitization)所致。神經病變性疼痛典型為灼熱、劇痛且其強度持續，且有時候可能使誘發該神經病變性疼痛的初次傷害或疾病更惡化。
對神經病變性疼痛的現有治療大部份是沒有效用者。鴉片(opiate)，諸如嗎啡，為強力止痛劑，不過彼等的適用性是受限於其不良副作用，諸如生理性上癮和戒斷性質，以及呼吸困難、情緒變化和減低腸蠕動並伴隨著便秘、噁心、嘔吐、和內分泌與自主神經系統改變。此外，神經病變性疼痛對於習用的類鴉片止痛服藥法時常為無響應性或只有部份響應性者。採用N-甲基-D-天冬胺酸拮抗劑克他明(ketamine)或α(2)-腎上腺素促效劑氯壓定(clonidine)的治療可減輕急性或慢性疼痛，且允許類鴉片消耗量的減少，不過此等製劑因為副作用而時常導致不良的耐受性。
過去曾使用辣椒素局部治療慢性與急性疼痛，包括神經病變性疼痛。辣椒素為一種辛辣物質，其衍生自茄科植物(Solanaceaefamily)(此科植物包括紅辣椒(hot chili pepper))且顯然可選擇性作用於被視為傳達疼痛的小直徑傳入神經纖維(A-δ纖維和C纖維)。對辣椒素的反應特徵在於周邊組織中持續活化傷害性受體，最終使得周邊傷害性受體對一種或多種刺激沒有敏感性(desensitization)。從動物研究得知，辣椒素似乎藉由打開鈣和鈉的陽離子選擇性信道而觸動C纖維膜去極化(depolarization)。
共有相同類香草醇部份(vanilloid moiety)的辣椒素結構類似物亦可誘發相似的反應。其中一種類似物為樹脂毒素(resineferatoxin)(RTX)，為大戟科(Euphrbia)植物的天然產物。術語「類香草醇受體」(vanilloid receptor)(VR)是創造來描述辣椒素與此等相關刺激性化合物的神經元膜辨識位置。辣椒素反應受到另一種辣椒素類似物，辣椒素受體阻斷劑(capsazepine)的競爭性抑制(而因此拮抗)，且也可被非選擇性陽離子信道阻斷劑釕紅(ruthenium red)所抑制該等拮抗劑連結至VR只有中度的親和力(affinity)(典型Ki值不低於140μM)。
大鼠和人類的類香草醇受體可從背根神經節細胞複製。第一類型的類香草醇受體與已知的類香草醇受體第1型(VR1)是相同的，該術語「VR1」和「辣椒素受體」於本文中是可互相交換地用來指稱此類型的大鼠及/或人類受體，以及哺乳動物的同源物(homologues)。VR1在痛覺上的作用已使用缺乏此受體的小鼠予以確定過，彼等小鼠沒有表達出類香草醇誘發的疼痛行為，且對熱和發炎反應已受損。VR1為一種非選擇性陽離子信道，當受到高溫、低pH與辣椒素受體促效劑時，其開放閥值即降低。例如，該信道通常會在高於約45℃的溫度打開。辣椒素受體信道開放後通常會接著從表達該受體的神經元及其它附近的神經元中釋放出炎胜肽，以增加疼痛反應。於辣椒素初期活化後，辣椒素受體會經由cAMP依賴性蛋白激酶的磷酸化而發生快速的脫敏化作用。
VR1促效劑類香草醇化合物一直作為局部麻醉劑，是因為彼等對周邊組織的傷害性受體具有脫敏化的能力促效劑。不過，促效劑的應用本身可能引起灼熱感疼痛，而限制其治療用途。最近，已經有報導VR1拮抗劑，包括某些非類香草醇化合物，也可以用來治療疼痛(參見例如PCT國際申請案公告案號WO 02/08221、WO 03/062209、WO 04/054582、WO 04/055003、WO 04/055004、WO 04/056774、WO 05/007646、WO05/007648、WO 05/007652、WO 05/009977、WO 05/009980和WO05/009982)。
因此，與VR1發生反應的化合物，但是不會誘發初期痛覺的VR1促效劑類香草醇化合物為想要用於治療慢性和急性疼痛，包括神經病變性疼痛，以及其它對辣椒素受體調節作用具有反應的病症。本發明可符合此需求，並提供進一步相關的優點。
發明內容
本發明提供式I經取代
啉-4-基胺
以及此等化合物的醫藥上可接受的鹽類。於式I中 W、Y和Z獨立地為N或CRz； Rz於每一次出現時獨立地選自氫、滷素、氰基、胺基、C1-C6烷基、滷基C1-C6烷基、C1-C6烷氧基和滷基C1-C6烷氧基； R3為氫、滷素、氰基、胺基、C1-C4烷基或滷基C1-C4烷基； Ar1和Ar2為獨立地選自5至10員芳族碳環和雜環，彼等每一者可視需要經取代，較佳者為經0至3個獨立地選自下列的取代基取代 滷素、氰基、硝基和式LRa基團； L於每一次出現時獨立地選自單一共價鍵、O、C(＝O)(亦即，
)、OC(＝O)(亦即、
)、C(＝O)O(亦即，
)、OC(＝O)O(亦即，
)、S(O)m(亦即，-S-、
、或
)、N(Rx)(亦即，
)、C(＝O)N(Rx)(亦即，
)、N(Rx)C(＝O)(亦即
)、N(Rx)S(O)m(亦即，
)、S(O)mN(Rx)(亦即，
)、與N[S(O)mRx]S(O)m(亦即，
其中m為獨立地選自0、1和2；且Rx於每一次出現時獨立地選自氫和C1-C8烷基，或Rx與Ra一起形成視需要經取代的4至7員雜環；且Ra於每一次出現時獨立地選自 (i)氫；和 (ii)C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、(C3-C8環烷基)C0-C4烷基、滷基C1-C8烷基、C2-C8烷基醚、單-和二-(C1-C8烷基)胺基、(3至10員雜環)C0-C4烷基以及與Rx一起形成的4至7員雜環，彼等每一者含有從0至6個獨立地選自下列的取代基(a)羥基、滷素、胺基、胺基羰基、氰基、硝基、酮基、和COOH；及(b)C1-C8烷基、C1-C8烯基、C1-C8炔基、(C3-C8環烷基)C0-C4烷基、C1-C8烷氧基、C1-C8烷硫基、C2-C8烷基醚、C1-C8烷醯基、C3-C8烷酮基、C1-C8烷醯氧基、C1-C8烷氧基羰基、羥基C1-C8烷基、滷基C1-C8烷基、氰基C1-C8烷基、苯基C0-C8烷基、單-和二-(C1-C6烷基)胺基C0-C8烷基、C1-C8烷基磺醯基、單-或二-(C1-C8烷基)胺基磺醯基、和(5至7員雜環)C0-C8烷基，彼等每一者皆視需要經取代。
於某些方面中，式I化合物為VR1調節劑且Ki在辣椒素受體結合性檢定中呈現不大於1微摩爾濃度(micromolar)、500納摩爾濃度(nanomolar)、100納摩爾濃度、50納摩爾濃度、10納摩爾濃度或1納摩爾濃度及/或在測定辣椒素受體促效劑或拮抗劑活性的檢定中具有不大於1微摩爾濃度、500納摩爾濃度、100納摩爾濃度、50納摩爾濃度、10納摩爾濃度或1納摩爾濃度的EC50或IC50值。
於某些具體實施例中，本文中所述VR1調節劑為VR1拮抗劑且在辣椒素受體活化的活體外檢定中沒有展示出可檢測的促效劑活性。
於某些方面中，本文中所述化合物是經標記可檢測的標記物(例如，放射性標記或螢光素共軛物)。
本發明進一步提供，於其它方面之內者，藥物組合物，其包含至少一種本文中所述化合物(亦即，本文中所提供的化合物或其醫藥上可接受的鹽)與生理上可接受的載劑或賦形劑組合。
其它方面之內者，提供減低細胞辣椒素受體的鈣傳導性的方法，其包括將表達辣椒素受體的細胞(例如神經元細胞)與至少一種本文中所述VR1調製劑接觸。此等接觸可在活體內或活體外發生。
此外，也進一步提供抑制類香草醇配體與辣椒素受體的結合的方法。於某些此等方面之中，所述的抑制是在活體外發生。此等方法包括在條件與用量足以可檢測抑制類香草醇配體結合至辣椒素受體下，將辣椒素受體與至少一種本文中所述VR1調節劑接觸。於某些此等方面之中，該辣椒素受體是在患者體內出現。此等方法包括足以於活體外可檢測到抑制類香草醇配體與表達克隆辣椒素受體的細胞結合的用量下，使表達辣椒素受體的患者體內細胞與至少一種本文中所述VR1調節劑接觸，且藉此抑制類香草醇配體與患者體內辣椒素受體結合。
本發明進一步提供患者對辣椒素受體調節具反應性的治療方法，包括投予患者治療有效量的至少一種本文中所述VR1調節劑。
於其它方面之內，提供治療患有疼痛患者的方法，包括投予該患有疼痛的患者治療有效量的至少一種本文中所述VR1調節劑。
本發明進一步提供治療患者患有搔癢、尿失禁、膀胱過動症、咳嗽及/或呃逆(hiccup)的方法，其包括給該患有一種或多種前述病症的患者投予治療有效量的至少一種本文中所述VR1調節劑。
本發明進一步提供促進肥胖患者減重的方法，包括對該肥胖患者投予治療有效量的至少一種本文中所述VR1調節劑。
本發明進一步提供鑑定可與辣椒素受體結合的製劑的方法，其包括(a)將辣椒素受體與本文中所述經標記化合物在允許該化合物對該辣椒素受體的結合的條件下接觸，藉此產生經結合、經標記的化合物；(b)在試驗製劑不存在中，檢測該經結合、經標記的化合物含量相應的訊引；(c)將該經結合、經標記的化合物與試驗製劑接觸；(d)於該試驗製劑存在中，檢測該經結合、經標記的化合物含量的訊號；及(e)與在步驟(b)所檢測的訊號做比較，檢測於步驟(d)中所降低的訊號。
於其它方面中，本發明提供測定樣品中辣椒素受體的存在與否的方法，其包括(a)將樣品與本文中所述化合物在允許該化合物與該辣椒素受體結合的條件下接觸；及(b)檢測該化合物結合至辣椒素受體的程度。
本發明也提供經包裝的醫藥製劑，其包括(a)在容器內的本文中所述藥物組合物與(b)說明書，其用以說明該組合物治療對辣椒素受體調節有反應的一種或多種病症，諸如疼痛、搔癢、尿失禁、膀胱過動症、咳嗽、呃逆及/或肥胖症。
於又另一方面中，本發明提供製備本文中所揭示的化合物，包括中間物的方法。
本發明此等和其它方面將可參照下面詳細說明而明白。
實施方式 如上文所述，本發明提供經取代
啉-4-基胺。此等化合物可用在活體外或活體內以調節在多種環境中辣椒素受體活性。
術語 於本文中通常使用標準命名法說明化合物。對於具有不對稱中心的化合物，必須了解者(除非另外有不同的表明否則)是涵蓋所有光學異構物和其混合物。此外，具有碳-碳雙鍵的化合物可出現為Z-型和E-型，除非另外有不同的表明否則該等化合物的所有異構物型都包括在本發明內。在化合物以多種互變異購物型(tautomeric forms)存在時，所引述的化合物並不限於任何一種特定的互變異購物。本文某些化合物是使用含有變量(例如，R3、A1、Z)的通式予以描述。除非另外有不同的表明否則在此等通式中的每一變量是定義為任何其它的變量，且在通式中出現多於一次的任何變量於每一次出現時是各獨立地定義。
術語「經取代
啉-4-基胺」，如於本文中所用者，其涵蓋所有式I化合物，包括其醫藥上可接受的鹽類，以及本文中提供的具有其它式的化合物。例如其核心環系統(core ring system)
為
或
是經本文中所述視需要經取代的化合物且經特別地包括在
啉-4-基胺的定義內。
本文中所引述的化合物「醫藥上可接受的鹽類」其為相關技藝習知可適合於與人類或動物的組織接觸而不會引起過度的毒性、刺激性、過敏性反應、或其它問題或併發症的酸性或鹼性鹽類。此等鹽類包括鹼性殘基諸如胺的礦物酸鹽或有機酸鹽，以及酸性殘基諸如羧酸的鹼金屬鹽或有機鹽。特定醫藥上的鹽包括，但是不限定於，諸如鹽酸、磷酸、氫溴酸、蘋果酸、乙醇酸、反丁烯二酸、硫酸、胺磺酸、磺胺酸、甲酸、甲苯磺酸、甲磺酸、苯磺酸、乙二磺酸、2-羥基乙磺酸、硝酸、苯甲酸、2-乙醯氧基苯甲酸、檸檬酸、酒石酸、乳酸、硬脂酸、水楊酸、麩胺酸、抗壞血酸、雙羥萘酸、丁二酸、反丁烯二酸、順丁烯二酸、丙酸、羥基順丁烯二酸、氫碘酸、苯基乙酸、烷酸諸如乙酸、HOOC-(CH2)n-COOH，此處n為0至4，等等的鹽類。類似者，醫藥上可接受的陽離子包括，但是不限定於，鈉、鉀、鈣、鋁、鋰和銨。熟諳此技藝者都可辨識出本文中提供的化合物所用醫藥上可接受的鹽類，包括在Remington’s Pharmaceutical Sciences，17th ed.，MackPublishing Company，Easton，PA，p.1418(1985)中所列出者。一般而言，醫藥上可接受的酸或鹼鹽可從含有鹼性或酸性部份的母化合物以任何種習用的化學方法予以合成。簡言之，此等鹽類可經由將游離酸或鹼形式的此等化合物與化學劑量的適當鹼或酸，在水或有機溶劑內，或在兩者的混合物內進行反應而製備；通常，較佳者為使用非水性介質，諸如醚、乙酸乙酯、乙醇、異丙醇、或乙腈。
鹹了解，各式I化合物可以，但是不一定需要，調配成為水合物、溶劑合物或非共價鍵錯合物的形式。此外，多種結晶型和多態異構物，如同式I化合物的前驅藥物一般，也都在本發明的範圍之內。「前驅藥物」是一種化合物，其不一定完全滿足本文中所提供的化合物的結構要求，不過在投予患者後，會在活體內修飾，產生具有式I或本文中提供的其它化學式的化合物。例如，一種前驅藥物可為本文中所提供的化合物的醯化衍生物。前驅藥物包括其中羥基、胺或氫硫基鍵結在任何基團上的化合物，其在投予哺乳動物對象服用後，會裂解而分別形成游離羥基、胺基或氫硫基的化合物。前驅藥物的實例包括，但是不限定於，本文中所提供的化合物中所含醇和胺官能基的乙酸酯、甲酸酯、磷酸酯、和苯甲酸酯衍生物。本文中所提供的化合物的前驅藥物可藉由修飾存在於化合物中所含官能基予以製備，其中該修飾會裂解成為母化合物。
於用在本文中時，術語「烷基」指的是直鏈或分支鏈的飽和脂族烴。烷基包括具有從1至8個碳原子(C1-C8烷基)、從1至6個碳原子(C1-C6烷基)以及從1至4個碳原子(C1-C4烷基)的基團，諸如，甲基、乙基、丙基、異丙基、正丁基、第二丁基、叔丁基、戊基、2-戊基、異戊基、新戊基、己基、2-己基、3-己基、和3-甲基戊基。「C0-C4烷基」指的是單一共價鍵(C0)或具有1、2、3或4個碳原子的烷基；「C0-C6烷基」指的是單一共價鍵或C1-C6烷基；「C0-C8烷基」指的是單一共價鍵或C1-C8烷基。於某情況中，烷基的取代基是經特定地明示出者。例如，「氰基-C1-C6烷基」指的是具有至少一個CN取代基的C1-C6烷基。一個代表性分支鏈的氰基烷基為-C(CH3)2CN。
「伸烷基」指的是二價烷基，如上面所定義者。C0-C4伸烷基指的是單一共價鍵或具有從1至4個碳原子的伸烷基；且C0-C3伸烷基指的是單一共價鍵或具有從1至3個碳原子的伸烷基。
「烯基」指的是直鏈或分支鏈的烯基，其中含有至少一個不飽和碳-碳雙鍵。烯基包括C2-C8烯基、C2-C6烯基和C2-C4烯基，其分別具有2至8個碳原子、2至6個碳原子和2至4個碳原子，諸如乙烯基、烯丙基或異丙烯基。「炔基」指的是直鏈或分支鏈或環狀的炔基，其包含有一個或多個不飽和碳-碳鍵，其中至少一個為叄鍵。炔基包括C2-C8炔基、C2-C6炔基和C2-C4炔基，其分別具有2至8個碳原子、2至6個碳原子和2至4個碳原子。
「環烷基」為包含一個或多個飽和及/或部份飽和環的基團，其中所有環組員均為碳，諸如環丙基、環丁基、環戊基、環己基、環辛基、金剛烷基、十氫萘基、十八氫茚基、以及任何前述的部份飽和變異形式的基團，諸如環己烯基。某些環烷基為C3-C7環烷基，其中該環包含從3至7個環組員。
術語「烷氧基」，於用在本文中之時，意指經由氧橋連接至上述的烷基。烷氧基包括具有從1至6個碳原子的C1-C6烷氧基以及從1至4個碳原子的C1-C4烷氧基。特定的烷氧基為甲氧基、乙氧基、丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、第二丁氧基、第三丁氧基、正戊氧基、2-戊氧基、異戊氧基、新戊氧基、己氧基、2-己氧基、3-己氧基、和3-甲基戊氧基。類似地，「烷硫基」指的是單一共價鍵(C0)或具有1、2、3或4個碳原子的烷氧基；「C0-C6烷氧基」指的經由硫橋連接至上述的烷基。
術語「酮基」，於用在本文中時，指的是酮基(C＝O)。為非芳族碳原子的取代基的酮基，造成-CH2-轉化成為-C(＝O)-。為芳族碳原子的取代基的酮基造成-CH-轉化成為-C(＝O)-，並失掉其芳香性。
術語「烷醯基」，指的是醯基(例如，-(C＝O)-烷基)。烷醯基包括C2-C8烷醯基、C2-C6烷醯基和C2-C4烷醯基，分別具有從2至8個碳原子、從2至6個碳原子和從2至4個碳原子。「C1烷醯基」指的是-(C＝O)-H，其(與C2-C8烷醯基)均包含於為術語「C1-C8烷醯基」所涵蓋。乙醯基為C2烷醯基。
「烷酮」為酮基，其中碳原子呈直鏈或分支鏈烷基排列。「C3-C8烷酮」、「C3-C6烷酮」和「C3-C4烷酮」指的是分別具有從3至8個、6或4個碳原子的烷酮。舉例而言，C3烷酮具有結構-CH2-(C＝O)-CH3。
類似地，「烷基醚」指的是經直鏈或分支鏈醚取代基。烷基醚基包括C2-C8烷基醚、C2-C6烷基醚和C2-C4烷基醚，分別具有從2至8個、6或4個碳原子。舉例而言，C2烷基醚具有結構-CH2-O-CH3。
術語「烷氧基羰基」指的是經由羰基鍵聯的烷氧基(亦即，具有一般結構-C(＝O)-O-烷基的基團)。烷氧基羰基包括C1-C8、C1-C6、和C1-C4烷氧基羰基，彼等於該基的烷基部份分別具有從1至8個、6或4個碳原子。
術語「烷醯氧基」，於用在本文中時，指的是經由氧橋連結的烷醯基(亦即，具有一般結構-O-C(＝O)-烷基的基團)。烷醯氧基包括C2-C8、C2-C6、和C2-C4烷醯氧基，彼等分別具有從2至8個、6或4個碳原子。
「烷基磺醯基」指的是具有式-(SO2)-烷基的基團，其中硫原子為接著點。烷基磺醯基包括C1-C6烷基磺醯基和C2-C4烷基磺醯基，彼等分別具有從1至6個、或1至4個碳原子。甲基磺醯基為一種代表性烷基磺醯基。
「胺基磺醯基」指的是具有式-(SO2)-NH2的基團，其中硫原子為接著點。
「單-或二-(C1-C8烷基)胺基磺醯基指的是滿足式-(SO2)-NR2的基，其中硫原子為接著點且其中一個R為C1-C8烷基，且另一個R為氫或分別獨立選出的C1-C8烷基。
「烷基胺基」指的是具有一般結構-NH-烷基或-N(烷基)(烷基)的二級或三級胺，其中每一烷基可為相同或不同。此等基團包括，例如，單-和二-(C1-C8烷基)胺基，其中每一烷基可為相同或不同且可包含從1至8個碳原子，以及單-和二-(C1-C6烷基)胺基及單-和二-(C1-C4烷基)胺基。
「烷基胺基烷基」指的是經由伸烷基鍵聯的烷基胺基(亦即，具有一般結構-烷基-NH-烷基或-烷基-N(烷基)(烷基))，其中每一烷基是獨立地被選擇。此等基團包括，例如，單-和二-(C1-C8烷基)胺基C1-C8烷基，單-和二-(C1-C6烷基)胺基C1-C6烷基及單-和二-(C1-C4烷基)胺基C1-C4烷基，其中每一烷基可為相同或不同。「單-和二-(C1-C6烷基)胺基C0-C8烷基」指的是經由單一共價鍵或C1-C8伸烷基鍵聯的單-或二-(C1-C6烷基)胺基。下列為代表性烷基胺基烷基
術語「胺基羰基」指的是醯胺基(亦即，-(C＝O)NH2)。「單-或二-(C1-C8烷基)胺基羰基」為其中一個或兩個氫原子被C1-C8烷基所取代的胺基羰基。假若兩個氫原子被如此所取代時，該等C1-C8烷基可為相同或不同。
術語「滷素」指的是氟、氯、溴或碘。
「滷烷基」為經一個或多個滷素原子取代的烷基(例如，「滷基C1-C8烷基」具有從1至8個碳原予；「滷基C1-C6烷基」具有從1至6個碳原子)。滷烷基的實例包括，但是不限定於，單-、二-或三-氟甲基；單-、二-或三-氯甲基；單-、二-、三-、四-或五-氟乙基；單-、二-、三-、四-或五-氯乙基；以及1，2，2，2-四氟-1-三氟甲基-乙基。典型的滷烷基為三氟甲基和二氟甲基。術語「滷烷氧基」為經由氧橋連接至上述所定義的滷烷基。「滷基C1-C8烷氧基」具有1至8個碳原子。
位在兩個字母或符號之間的破折號(「-」)是用來指示出取代基的連接點。例如，-CONH2是經由碳原子連接。
「碳環」或「碳環基」包括至少一個經由碳-碳鍵形成的環(於本文中稱為碳環)，且不包含雜環。除非另外有不同的表明，否則在碳環中的每一環可獨立地經飽和、部份飽和或芳族環，且視需要如所示地取代。碳環通常具有從1至3個稠合環、側接環或螺旋環；於某些具體實施例中的碳環具有一個環或兩個稠合環。典型地，每一個環包含從3至8個環組員(亦即，C3-C8)；於某些具體實施例中，述及C5-C7環。包含稠合環、側接環或螺旋環的碳環典型地包含從9至14個環組員。某些碳環為C4-C10。(亦即包含從4至10個環組員。某些代表性碳環為上面所述的環烷基。其它碳環為芳基(亦即，包含至少一個芳族碳環，帶有或不帶一個或多個其它的芳族環及/或環烷基環)。此等碳環包括，例如，苯基、萘基、茀基、氫茚基和1，2，3，4-四氫-萘基。
「雜環」或「雜環基」具有1至3個稠合環、側接環或螺旋環，其中至少一環為雜環(亦即，一個或多個環原子為獨立地選自O、S和N的雜原子，其餘環原子為碳)。若出現其它環時，其可能為雜環或碳環。典型地，雜環包含1、2、3或4個雜原子；於某些具體實施例中，每一雜環具有1個或2個雜原子/環。每一雜環環通常包含從3至8個環組員(於某些具體實施例中引述具有從4或5至7個環組員的雜環)且包含稠合環、側接環或螺旋環的雜環典型地包含從9至14個環組員。某些雜環包含以硫原子作為環組員；於某些具體實施例中，該硫原子可經氧化成為SO或SO2。雜環可視需要經以多種取代基所取代。除非另外有不同的表明，否則雜環可為雜環烷基(亦即，每一環是飽和或部份飽和者)或雜芳基(亦即，在該基團中至少有一環是芳香系者)，諸如5至10員雜芳基(其可為單環或雙環)或6員雜芳基(例如，吡啶基或嘧啶基)。N-鍵聯的雜芳基是經由組成分氮原子連接。
雜環基包括，例如，氮雜環庚烷基(azepanyl)、吖
基(azocinyl)、苯並咪唑基、苯並咪唑啉基、苯並異噻唑基、苯並異
唑基、苯並呋喃基、苯並硫呋喃基、苯並
唑基、苯並噻唑基、苯並四唑基、色滿基、色烯基、噌
啉基、十氫喹啉基、二氫呋喃並[2，3-b]四氫呋喃基、二氫異喹啉基、二氫四氫呋喃基、l，4-二氧雜-8-氮雜-螺[4.5]癸基、二噻_基、呋喃基、呋咱基、咪唑啉基、咪唑啶基、咪唑基、吲唑基、吲哚烯基、吲哚啉基、吲哚_基、吲哚基、異苯並呋喃基、異色滿基、異吲唑基、異吲哚啉基、異吲哚基、異噻唑基、異
唑基、異喹啉基、嗎啉基、
啶基、八氫異喹啉基、
二唑基、
唑啶基、
唑基、呔_基、六氫吡_基、六氫吡啶基、六氫吡啶烷基、喋啶基、嘌呤基、吡喃基、吡_基、吡唑啶基、吡唑啉基、吡唑基、嗒_基、吡啶並咪唑基、吡啶並
唑基、吡啶並噻唑基、吡啶基、嘧啶基、吡咯啶基、吡啶烷酮基、吡咯啉基、吡咯基、喹唑啉基、喹喏啉基、喹
啉基、奎寧環基、四氫異喹啉基、四氫喹啉基、四唑基、噻二_基、噻二唑基、噻唑基、噻吩並噻唑基、噻吩並
唑基、噻吩並咪唑基、噻吩基、噻吩基(thiophenyl)、硫代嗎啉基及其硫原子經氧化的變體，三_基，以及含有從1至4個的上述取代基的任何前述基團取代。
「雜環C0-C8烷基」為經由單一共價鍵或C1-C8伸烷基鍵聯的雜環基。(3至10員雜環)C0-C4烷基為經由單一共價鍵或具有從1至4個碳原子的伸烷基鍵聯的具有從3至10個環組員的雜環基(例如單環或雙環基)。(5至7員雜環)C0-C8烷基為經由單一共價鍵或具有從1至8個碳原子的伸烷基鍵聯的具有從5至7個環組員的雜環基。
「取代基」，於用於本文中時，指的是經共價鍵結合到分子內有關是原子的分子部份。例如，「環取代基」可為經共價鍵結合到環單元的原子(較佳為碳原子或氮原子)上的諸如滷素、烷基、滷烷基或其它本文中討論過的取代基的部份。術語「經取代」指的是氫原子在分子結構中經上述取代基置換，此指定原子的價數不會超過，且該經取代結果為化學穩定化合物(亦即，可被分離、特性描述及試驗生物活性的化合物)。
「視需要經取代」為基團可不被取代或在一個或多個可取代位置被氫以外的取代基所取代，典型地為在1、2、3、4或5的位置，被一個或多個適當基團(其可為相同或不同)所取代。視需要經取代也以詞組「視需要經以0至X個取代基取代」，其中X為可能的取代基的最大數目。某些視需要經取代基是可視需要經以0至2、3或4個獨立選出的取代基所取代(亦即，不飽和或飽和的取代基，一直到所述取代基的最大數目)。
術語「VR1」和「辣椒素受體」於本文中可互換地用來指稱第1型類香草醇受體。除非另外有不同的表明，否則此等術語是同時涵蓋大鼠和人類VR1受體(例如，GenBank Accession Number AF327067、AJ277028、和NM_018727；提供某些人類VR1 cDNAs的序列，由美國專利第6,482,611號的編碼胺基酸序列所提供)，以及彼等在其它物種中所發現的同源物。
「VR1調節劑」在本文中也稱為「調節劑」，為一種可調結VR1活化及/或VR1-媒介的訊號轉導作用的化合物。本發明特定地提供VR1調節劑為式I化合物及其醫藥上可接受的鹽類。某些較佳的VR1調節劑不為類香草醇。VR1調節劑可為VR1促效劑或拮抗劑。調節劑與VR1結合的Ki小於1微摩爾濃度、較佳者小於500納摩爾濃度、100納摩爾濃度、10納摩爾體度或1納摩爾濃度。本文實施例5提供用於測定VR1的Ki值的代表性試驗。調節劑可考慮為「拮抗劑」，該拮抗劑可檢測地抑制類香草醇配體連結至VR1及/或VR1-媒介的訊號轉導(使用例如實施例6中提供的代表性檢定)；通常，使用在實施例6中提供的檢定內，此等拮抗劑可以IC50值小於1微摩爾濃度而抑制VR1活性，較佳者小於500納摩爾濃度，且更佳者小於100納摩爾濃度、10納摩爾濃度或1納摩爾濃度。VR1拮抗劑包括中性拮抗劑和反促效劑(reverse agonist)。
VR1的「中性拮抗劑」為一種抑制類香草醇配體在VR1上的活性，但是不會明顯地改變該受體基礎活性的化合物(例如，在實施例6中所述鈣移動性檢定(calcium mobilization assay)中，於類香草醇配體不存在中，VR1活性的減低程度不超過10％，更佳者不超過5％，甚至更佳者為不超過2％；最佳者，為其活性沒有檢測到活性的減低)。VR1的中性拮抗劑也可能抑制類香草醇配體對VR1的結合。
VR1的「反促效劑」為當不添加類香草醇配體時，將VR1的活性減低到其基礎活性以下的化合物。VR1的反促效劑也抑制類香草醇配體對VR1的活性，及/或可抑制類香草醇配體對VR1的結合。VR1的基礎活性及因VR1拮抗劑的存在而減低VR1活性，都可從鈣移動性檢定法，諸如在實施例6中所述檢定法，予以測定。
於用於本文中時，「辣椒素受體促效劑」或「VR1促效劑」為一種化合物，其可將該受體的活性增高到高於該受體的基本活性級次(亦即，增強VR1活化及/或VR1-媒介的信號轉導)。辣椒素受體促效劑活性可以使用實施例6中提供的代表性檢定法予以鑑定。一般而言，此種促效劑具有在使用實施例6中提供的檢定內，小於1微摩爾濃度、較佳者小於500毫微摩爾濃度、且更佳者小於100毫微摩爾濃度或10毫微摩爾濃度的EC50值。
「類香草醇」為辣椒素或任何辣椒素類似物，其包含帶有兩個氧原子的苯基環與毗鄰環碳原子鍵結(該碳原子中之一者是與苯環上所鍵結的第三個部份基團的連接點呈對位)。類香草醇在若能以不大於10μM的Ki(按照本文中所述測定者)結合到VR1，則其為一種「類香草醇配體」。類香草醇配體促效劑包括辣椒素、奧伐尼(olvanil)、N-花生四烯醯基-多巴胺(N-arachidonoyl-dopamine)以及樹膠脂毒素(resiniferatoxin)(RTX)。類香草醇配體拮抗劑包括辣椒平(capsazepine)和碘-樹膠脂毒素。
「治療有效量」(或劑量)為投予患者後造成可識別的患者利益(例如提供從受治療病症的可檢測到的紓解)的用量。此等紓解可使用任何適當準則予以檢測，該準則包括一種或多種病症例如疼痛的減輕。治療有效量或劑量通常在體液(諸如血液、血漿、血清、CSF、關節潤滑液體、淋巴液、細胞間質液、淚液或尿液)中造成化合物濃度可有效地改變類香草醇配體對VR1在活體外結合(使用實施例5中所提供的檢定法)及/或VR1-媒介的訊號轉導(使用實施例6中所提供的檢定法)。
「患者」為使用本發明所提供的化合物治療的任何個體。患者包括人類，以及其它動物諸如陪伴動物(例如，狗和貓)及家畜。患者可能罹患一種或多種對辣椒素受體調節作用有反應的病症(例如，疼痛、暴露於類香草醇配體、搔癢、尿失禁、膀胱過動症、呼吸病變、咳嗽及/或呃逆)，或可能沒有上述等病症(亦即，該治療對於有發展出此等徵候的危險的患者可能為預防性者)。經取代
啉-4-基胺 如上述，本發明提供經取代
啉-4-基胺，其可用於多種領域，包括疼痛的治療(例如，治療神經病變性疼痛或周邊神經所調控的疼痛)；暴露於辣椒素；暴露於酸、熱、光、催淚氣體、空氣汙染物(例如，香菸煙霧)、傳染性製劑(包括病毒、細菌和酵母菌)、胡椒噴霧或相關製劑；呼吸病症諸如氣喘或慢性堵塞性肺病；搔癢；尿失禁或膀胱過動症；咳嗽或呃逆；及/或肥胖症。此等化合物也可以用於活體外檢定(例如，受體活性檢定)，作為檢測與VR1定位探針(probe)以及作為配體結合檢定和VR1-媒介訊號轉導檢定的標準。
某些本發明所提供的化合物已可檢測調節辣椒素對VR1在納摩爾濃度的結合(亦即，次微摩爾濃度)，較佳者在次納摩爾濃度，更佳者在低於100微微摩爾濃度(picomolar)，20微微摩爾濃度，10微微摩爾濃度或5微微摩爾濃度。此等調節劑較佳者為非類香草醇。某些較佳的調節劑為VR1拮抗劑且在實施例6中所述檢定中不具有可檢測出的促效劑活性。較佳的VR1調節劑可進一步以高親和力結合到VR1，且不會實質地抑制類EGF受體酪胺酸激酶的活性。
本發明所提供的化合物概括地滿足式I，或為此等化合物的醫藥上可接受的鹽類，其中的各變量皆為上面所述者
式I 於某些式I化合物中，W、Y和Z各為CH。於其它式I化合物中，W、Y和Z中有一者或二者各為N。例如，於某些此等化合物中，Y為N及/或Z為N。於某些具體實例中，W、Y和Z中不是N者為CH。
於式I某些化合物中，Ar1和Ar2為獨立地選自苯基及5至6員芳族雜環，彼等每一者可經取代，較佳者帶有從0至3個獨立地選自式LRa基團的取代基。代表性Ar1部份基團包括苯基、嘧啶基和吡啶基，彼等每一者可經從0至2個獨立地選自下列的取代基所取代滷素、羥基、氰基、胺基、硝基、COOH、單-和二-(C1-C6烷基)胺基、C1-C6烷基、滷基C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、和滷基C1-C6烷氧基。代表性Ar2部份基團包括苯基、嘧啶基和吡啶基，彼等每一者可經從0至3個獨立地選自下列的取代基所取代滷素、羥基、氰基、胺基、硝基、單-和二-(C1-C6烷基)胺基、C1-C6烷基、滷基C1-C6烷基、氰基C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、滷基C1-C6烷氧基、C2-C6烷基醚、C1-C6烷醯基、-S(O2)Rd、-N(Rx)S(O)mRd、和-N[S(Om)Rx]S(O)mRd；其中m為1或2，Rx為氫或C1-C6烷基，且Rd為C1-C6烷基、滷基C1-C6烷基、胺基、單-或二-(C1-C6烷基)胺基、或5至10員、N-鍵聯雜環基，其中每一Rd經從0至2個獨立地選自下列的取代基所取代滷素、羥基、氰基、胺基、硝基、單-和二-(C1-C6烷基)胺基、C1-C4烷基、滷基C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、和滷基C1-C4烷氧基。
於某些此等化合物中，Ar1為吡啶基，未經取代者或經滷素、氰基、COOH、C1-C4烷基或滷基C1-C4烷基所取代；且Ar2為苯基或吡啶基，彼等經從0至3個獨立地選自下列的取代基所取代滷素、氰基、C1-C4烷基、氰基C1-C4烷基、滷基C1-C4烷基、C2-C6烷基醚、和式-S(O2)Rd基團，其中Rd為C1-C4烷基或滷基C1-C4烷基。於其它的此等化合物中，Ar1為苯基，未經取代者或經滷素、氰基、COOH、C1-C4烷基或滷基C1-C4烷基所取代；且Ar2為苯基或吡啶基，彼等經從0至2個獨立地選自下列的取代基所取代滷素、C1-C4烷基、氰基C1-C4烷基、滷基C1-C4烷基、C2-C6烷基醚、和式-S(O2)Rd基團，其中Rd為C1-C4烷基或滷基C1-C4烷基。
於又其它此等化合物中，Ar1為苯基，2-甲基-苯基、2-三氟甲基-苯基、2-滷基-苯基、吡啶-2-基、3-甲基-吡啶-2-基、3-三氟甲基-吡啶-2-基、或3-滷基-吡啶-2-基；且Ar2為苯基、吡啶-2-基或吡啶-3-基，彼等每一者可在對位(相對於連接點)帶有下列取代基滷素、氰基、甲基、乙基、丙基、異丙基、叔丁基、三氟甲基、2，2，2-三氟乙基、2，2，2-三氟-1-甲基-乙基、甲烷磺醯基、乙烷磺醯基、丙烷磺醯基、丙烷-2-磺醯基、三氟甲烷磺醯基、或2，2，2-三氟乙烷磺醯基。換言之，若Ar2為在對位位置經取代的苯基，則在4-位置有一者取代基；若Ar2為在對位位置經取代的吡啶-2-基，則在5-位置有一者取代基；且若Ar2為在對位位置經取代的吡啶-3-基，則在6-位置有一者取代基。此等Ar2代表性基團包括苯基、吡啶-2-基和吡啶-3-基，每一者在對-位經滷素、氰基、甲基、乙基、丙基、異丙基、叔丁基、三氟甲基、2，2，2-三氟乙基或2，2，2-三氟-1-甲基-乙基所取代。
式I的R3，於某些具體實施例中，為氫或C1-C4烷基(例如，甲基)。於本發明所提供的某些化合物中，R3為氫。
於某些具體實例中，式I經取代
啉-4-基胺進一步滿足式II
式II 或其醫藥上可接受的鹽類，式中 A、B、Y和Z獨立地為N或CH； R4表0、1或2個獨立地選自下列的取代基滷素、羥基、氰基、胺基、硝基、COOH、單-和二-(C1-C6烷基)胺基、C1-C6烷基、滷基C1-C6烷基、C1-C6烷氧基和滷基C1-C6烷氧基；及 R5表0、1、2或3個獨立地選自下列的取代基滷素、氰基、C1-C4烷基、氰基C1-C4烷基、滷基C1-C4烷基、C2-C6烷基醚和式-S(O2)Rd基團，其中Rd為C1-C4烷基或滷基C1-C4烷基。
於某些此等化合物中，R4表1或2個獨立地選自下列的取代基滷素、氰基、COOH、C1-C6烷基和滷基C1-C6烷基；及R5表1、2或3個獨立地選自下列的取代基滷素、氰基、C1-C4烷基、氰基C1-C4烷基、滷基C1-C4烷基、C2-C6烷基醚和式-S(O2)Rd基團，其中Rd為C1-C4烷基或滷基C1-C4烷基。
於某些具體實例中，式I經取代
啉-4-基胺進一步滿足式III
式III 或其醫藥上可接受的鹽類，式中 R1為滷素、氰基、C1-C4烷基或滷基C1-C4烷基； R2為滷素、氰基、C1-C4烷基、氰基C1-C4烷基、滷基C1-C4烷基、C2-C6烷基醚或式-S(O2)Rd基團，其中Rd為C1-C4烷基或滷基C1-C4烷基； R4a為不存在或表1個選自下列的取代基滷素、氰基、COOH、C1-C6烷基和滷基C1-C6烷基；且 R5a為不存在或表1個選自下列的取代基滷素、氰基、C1-C4烷基、氰基C1-C4烷基、滷基C1-C4烷基和C2-C6烷基醚。
於某些此等化合物中，R4a和R5a兩者都不存在。換言之，於此等化合物內，Ar2為苯基或吡啶基，該兩基的每一者在對位位置都經單取代(R2)；且Ar1為苯基或吡啶基，該兩基的每一者在鄰位位置都經單取代(R1)。此等R1代表性基團包括滷素、甲基和三氟甲基。此等R2代表性基團包括滷素、氰基、甲基、乙基、丙基、異丙基、叔丁基、三氟甲基、2，2，2-三氟乙基和2，2，2-三氟-1-甲基-乙基。
本發明所提供代表性化合物包括，但是不限定於，在實施例1至3中所特定地述及者。鹹了解，本文中所述及的特定化合物僅為代表性化合物，並無意用來限制本發明的範圍。進一步者，如上文中所提及者，所有本發明的化合物可以用游離鹼或醫藥上可接受的鹽的形式存在。
在本發明某些方面內，本發明所提供的經取代
啉-4-基胺可用可檢測到顯著改變(調節)VR1活性，其如使用活體外VR1功能性檢定法所測定者諸如鈣移動性檢定法、背根神經節檢定法或活體內疼痛舒減檢定法。可以使用VR1配體結合性檢定法作為初步篩選此等活性。本文中所指稱的「VR1配體結合性檢定法」是指標準活體外受體結合性檢定法諸如實施例5中所提供者，且可以按照實施例6中所述者實施「鈣移動性檢定法」(於本文中也稱為「訊號轉導檢定法」)。概略述之，為了評估對VR1的結合，可以實施競爭性檢定法，其中是將VR1製劑與會結合VR1的有標記(例如，經125I或3H標記)化合物(例如，辣椒素受體促效劑諸如RTX)與未標記的試驗化合物一起培養。於本文中所提供的檢定中，所使用的VR1較佳者為哺乳動物VR1，更佳者為人類或大鼠VR1。該受體可經重組方式表達或經自然表達。該VR1製劑可為，例如，來自重組表達人類VR1的HEK293或CHO細胞的膜製劑。將可檢測地調節類香草醇配體對VR1結合的化合物一起培養，造成與VR1製劑結合的標記量相對於該化合物不存在中所結合的標記結合量減少或增加。如本文中所述者，該減少或增加可用來測定在VR1的Ki值。一般而言，於此等檢定中使與VR1製劑結合的標記量減少的化合物為較佳者。
如上面提及者，在某些具體實施例中，較佳的化合物為VR1拮抗劑。對此等化合物的IC50值可使用標準活體外VR1媒介鈣移動性檢定法予以測定，如實施例6中所提供者。概略言之，將表達辣椒素受體的細胞與標的化合物及與細胞內鈣濃度指示劑(例如，膜可通透的鈣敏感性染料諸如Fluo-3或Fura-2(兩者都可得自，例如，MolecularProbes，Eugene，OR)，當與Ca++結合時，分別會產生螢光訊號)接觸。此等接觸較佳者是包含該化合物和指示劑中一者或兩者的緩衝液或培養基中，與細胞培養一次或多次下進行。接觸是經維持一段足以讓染料進入細胞內的時間量(例如，1至2小時)。將細胞清洗或過濾以移除過剩的染料，接著與類香草醇受體促效劑(例如，辣椒素、RTX、或奧伐尼)接觸，典型地是在等於EC50濃度時接觸，再測量螢光反應。當經促效劑接觸的細胞與作為VR1拮抗劑的化合物接觸時，相對於在沒有試驗化合物下與促效劑接觸的細胞，其螢光反應通常會減低至少20％，較佳者至少減低50％且更佳者至少80％。對於本發明所提供的VR1拮抗劑的IC50較佳者為小於1微摩爾濃度，小於100nM，小於10nM或小於1nM。
於其它具體實施例中，較佳化合物為辣椒素受體促效劑。辣椒素受體促效劑的活性通常可以按照實施例6中所述予以測定。當細胞與1微摩爾濃度的VR1促效劑化合物接觸時，其螢光反應訊號量通常會比當細胞與100nM辣椒素接觸時觀測者增加至少30％的增量。本發明所提供的VR1促效劑的EC50較佳者為小於1微摩爾濃度，小於100nM，或小於10nM。
VR1調節活性也可以，或替代地，使用經培養的背根神經節檢定法(如實施例9中所提供者)及/或活體內疼痛舒減檢定法(如實施例10中所提供者)予以評定。較佳為本發明所提供的化合物在本文中所提供的一種或多種功能性檢定法中，對VR1活性具有統計學上顯著的特定影響。
於某些具體實施例中，本發明所提供的VR1調節劑實質上不會調節配體結合至其它細胞表面受體，諸如EGF受體酪胺酸激酶或菸鹼酸乙醯膽鹼受體。換言之，此等調節劑不會實質地抑制細胞表面受體的活性，諸如人類表皮生長因子(EGF)受體酪胺酸激酶或菸鹼酸乙醯膽鹼受體(例如，在此等受體上的IC50或IC40較佳地大於1微摩爾濃度，且最佳者大於10微摩爾濃度)。較佳者，調節劑在0.5微摩爾濃度，1微摩爾濃度，或更佳者10微摩爾濃度下，不會可檢測地抑制EGF受體活性或菸鹼酸乙醯膽鹼受體活性。測定細胞表面受體活性所用的檢定法為商業上可取得者，且包括可從Panvera(Madison，WI)取得的酪胺酸激酶檢定套組。
較佳的VR1調節劑為非鎮靜劑。換言之，在測定疼痛舒減所用的動物模型(如實施例10中所提供者)中，足以提供止痛的最低劑量的兩倍的VR1調節劑的劑量，在動物模式鎮靜檢定中(藉由使用Fitzgeraldet al.(1988)Toxicology 49(2-3)433-9所述的方法)，只造成短暫(亦即，持續時間不超過疼痛舒減所維持時間的1/2)，或較佳者沒有統計學上顯著的鎮靜作用。較佳者，足以提供止痛作用的最低劑量5倍的劑量不會產生統計學上顯著的鎮靜作用。更佳者，本發明所提供的VR1調節劑在低於25毫克/仟克(較佳者低於10毫克/仟克)的靜脈內劑量或低於140毫克/仟克(較佳者低於50毫克/仟克，更佳者低於30毫克/仟克)的口服劑量不會產生鎮靜作用。
於需要時，可對本發明所提供的化合物評估某些藥理性質包括，但是不限定於，口服生物利用性(bioavailability)(較佳化合物為具有口服生物利用性至容許化合物的醫療有效濃度達到低於140毫克/仟克、較佳者低於50毫克/仟克，更佳者，低於30毫克/仟克，甚至更佳者低於10毫克/仟克，又更佳者低於1毫克/仟克且最佳者低於0.1毫克/仟克的口服劑量程度)，毒性(較佳化合物為當投予治療有效量至對象時是不具毒性)，副作用(較佳化合物為當投予治療有效量至對象時產生和安慰劑(placebo)相當的副作用)，血清蛋白質結合性作用和活體外與活體內半生期(較佳化合物展示出的活體內半生期允許進行Q.I.D投藥法，較佳為T.I.D.劑量，更佳為B.I.D.劑量，且最佳者每日一次劑量)。此外，對於經由調節CNS VR1活性來治療疼痛的VR1調節劑可能需要具有腦血障壁的差異滲透性使得如上所述的口服總每日劑量可提供此調節作用至醫療有效的範圍，同時較佳為低腦含量的VR1調節劑用來治療周邊神經媒介的疼痛(亦即，此等劑量不會提供足以顯著調節VR1活性的腦中(例如，CSF)化合物含量)。可以使用技藝中熟知的例行性檢定法來評定此等性質，且鑑定對於特別用途為較優良的化合物。例如，可用來預測生物利用性的檢定法包括傳輸通過人類腸單層細胞，包括Caco-2單層細胞。化合物在人類滲透腦血障壁可從投予在實驗室動物的腦部化合物濃度(例如，經靜脈內)預測。血清蛋白質結合可從白蛋白結合檢定法預測出。化合物半生期是與化合物的劑量頻率成反比。化合物的活體內半生期可從微粒體半生期檢定法預測出，如在本文中實施例7中所述者。
如上面提及者，本發明所提供的化合物較佳為無毒性。一般而言，術語「無毒性」，於在本文中所用時，應以相對意義理解且意圖指稱經美國食品與藥物管理局(United States Food and DrugAdministration)(「FDA」)核准用於投予哺乳動物(較佳者人類)或符合所制定的準則，可被FDA核准投予哺乳動物(較佳者人類)。此外，高度較佳的無毒性化合物通常會符合一項或多項下列準則(1)實質上不抑制細胞ATP產生；(2)顯著延長心臟QT間隔；(3)實質上不引起肝腫大；或(4)不引起肝酵素實質上的釋放。
於用在本文中時，實質上不抑制細胞ATP產生的化合物為可滿足本發明實施例8中所敘述的準則的化合物。換言之，按照實施例8中所述使用100μM的此等化合物處理過的細胞具有ATP濃度至少為未經處理過的細胞中所檢測到的ATP濃度的50％。於更高度較佳的具體實施例中，此等細胞具有ATP濃度至少為未經處理細胞可檢測的80％。
不顯著延長心臟QT間隔的化合物為在投予可以產生等於該化合物的EC50或IC50的血清濃度的劑量後，不會在天竺鼠、小型豬或狗體內導致心臟QT間隔(以心電圖法測量)的統計學上顯著延長的化合物。於某些較佳具體實施例中，經非腸道或經口投予0.01、0.05、0.1、0.5、1、5、10、40或50毫克/仟克劑量不會造成統計上顯著的心臟QT間隔延長。「統計上顯著」意指使用具有統計顯著性的標準參數性檢定法，諸如學生』T檢驗(student’s T test)測量時，控制在p＜0.1標準或更佳者為在p＜0.05標準的意義產生變化。
實質上不引起肝腫大的化合物為在使用可以產生等於該化合物的EC50或IC50的血清濃度的劑量每日處理實驗室囓齒類(例如小鼠或大鼠)5-10天後，導致肝對身體重比例相對於對照控制組不超過100％者。於更高度較佳具體實施例中，此等劑量不會造成肝腫大超過對照控制組的75％至50％。於使用非囓齒類哺乳動物(例如，狗)時，此等劑量不應造成肝對身體重比例增加，與對照控制組相比不會超過50％，較佳者不超過25％，且更佳者不超過10％。在此等檢定中的較佳劑量包括經非腸道或經口投予的劑量包括0.01、0.05、0.1、0.5、1、5、10、40或50毫克/仟克。
類似地，不引起肝酵素實質上的釋放的化合物為在投予產生血清濃度等於EC50或IC50的兩倍最低劑量，在實驗室囓齒類中不會提高血清中ALT、LDH或AST濃度與假處理控制組相比超過100％。或者，不引起肝酵素實質上的釋放的化合物為，在活體外肝細胞檢定中，如果濃度(於培養基或其它活體外與培養肝細胞接觸的此等溶液)等於該化合物的EC50或IC50，不會引起任何該等肝酵素可檢測地釋放到培養基到超過從假處理控制細胞的基準濃度。於更高度較佳具體實施例中，當此等化合物為5倍時，較佳為該化合物為EC50或IC5010倍時，部會引起任何該等肝酵素可檢測地釋放至培養基道高於基準濃度。
於其它具體實施例中，某些較佳化合物在濃度等於該化合物的EC50或IC50，不會抑制或誘發微粒體細胞色素P450酵素活性，諸如CYP1A2活性，CYP2A6活性，CYP2C9活性，CYP2C19活性，CYP2D6活性，CYP2E1活性，或CYP3A4活性。
某些較佳化合物在濃度等於該化合物的EC50或IC50時，不具造成染色體斷裂(clastogenic)(例如，使用小鼠紅血球前趨細胞小核檢定法，Ames小核檢定法，或螺旋小核檢定法，或類似者測定出者)。於其它具體實施例中，某些較佳化合物在此等濃度下不會誘發姊妹染色單體互換(sister chromatid exchange)(例如中國倉鼠卵巢細胞)。
為了檢測目的，如下文會更詳細的討論，本發明所提供的VR1調節劑可標記同位素或放射性。例如，化合物中可能有一個或多個原子被原子量或質量數不同於通常天然存在的原子量或質量數的相同元素置換。可為本發明所提供的化合物所含的同位素的實例包括氫、碳、氮、氧、磷、氟和氯的同位素，諸如2H、3H、11C、13C、14C、15N、18O、17O、31P、32P、35S、18F、和36Cl。此外，使用重同位素諸如氘(亦即，2H)取代時，由於代謝穩定性較大，例如，增加活體內半生期或減低所需劑量，可得到特定的治療優點，因而在某些情勢下較有利。
經取代
啉-4-基胺的製備 經取代
啉-4-基胺通常可以使用標準合成方法予以製備。起始材料可在商業上從供貨商取得，例如從Sigma-Aldrich Corp.(St.Louis，MO)，或可從商業上可取得的先質使用已經建立的方案予以合成。舉例而言，可使用類似於任何一種下面的反應圖(Schemes)的合成途徑，加上合成有機化學相關技藝中熟知的合成方法。下列反應圖中的每一種變量是指稱與本發明所提供的化合物的說明相一致的任何基團。
於下面的反應圖中，術語「催化劑」是指稱適當的過渡金屬催化劑，諸如，但是不限定於，肆(三苯基膦)鈀(O)或乙酸鈀(II)。此外，催化系統可包括配體諸如，但是不限定於，2-(二環己基膦基)聯苯基和三-叔丁基膦，且也可包括鹼諸如K3PO4、Na2CO3、或第三丁氧化鈉或鉀。經過渡金屬催化的反應可以在周溫或增溫下使用各種惰性溶劑包括，但是不限定於，甲苯、二氧雜環己烷、DMF、N-甲基吡咯烷酮、乙二醇、甲醚、甘醇二甲基醚和乙腈。常用的試劑/催化劑配對包括芳基硼酸/鈀(O)(Suzuki反應；Miyaura and Suzuki(1995)ChemicalReviews 952457)和芳基三烷基tannane//鈀(O)(Stille反應；T.N.Mitchel，(1992)Synthesis 9803-815)，芳基鋅/鈀(O)和芳基Grignard/鎳(II)。
下列反應圖和實施例中用到的其它定義為 AcOH 乙酸 DMA N，N-二甲基乙醯胺 DME 乙二醇二甲基醚 DMF 二甲基甲醯胺 EDCI 1-(3-二甲基胺基丙基)-3-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽 Et3N 三乙胺 EtOAc乙酸乙酯 EtOH 乙醇 IPr 異丙基 m-CPBA 間-氯過氧苯甲酸 n-BuLi 正丁基鋰 Oac 乙酸根 Pd2(dba)3 參[二亞苯甲基丙酮]二-鈀 Pd(PPh3)4 肆(三苯基膦))鈀(O) THF 四氫呋喃 Xantphos4，5-雙(二苯基膦基)-9，9-二甲基-呫噸 反應
圖1
反應圖2
反應圖3
於某些具體實施例中，本發明所提供的化合物可包含一個或多個不對稱碳原子，使得該化合物可出現不同立體異構型。此等型式可為，例如，消旋物或光學活性型。如上面所提及者，所有立體異構型均包括在本發明範圍內。儘管如此，仍然有可能需要取得單一鏡像異構物(enantiomer)(亦即，光學活性型)。製備單一鏡像異構物所用的標準方法包括不對稱合成法及與消旋物解析法。消旋物解析法可經由，例如，習用方法諸如在解析劑(resolving agent)存在中進行結晶或使用例如，對掌性(chiral)HPLC管柱層析術。
化合物可在其合成法中使用包含至少一個放射性同位素原子的前趨物進行放射性標記。各放射性同位素較佳者為碳(例如，14C)、氫(例如，3H)、硫(例如，35S)、或碘(例如，125I)。經氚標記的化合物也可在氚化的乙酸中經由鉑催化交換反應，在氚化的三氟乙酸中，使用酸催化交換反應或使用該化合物作為受質以與氚氣體進行不均相的催化交換反應。此外，某些先趨物可依需要使用氚氣體進行氚-滷素交換反應，使用氚氣體還原不飽和鍵，或使用氚硼化鈉進行還原。經放射標記的化合物的製備可由專為合成標記放射性探針化合物的放射同位素供貨商方便地實施。
藥物組合物 本發明也提供藥物組合物，其包含一種或多種本發明所提供的化合物以及至少一種生理上可接受的載劑或賦形劑。藥物組合物可包含例如，一種或多種下列成分水、緩衝劑(例如，中性緩衝食鹽水或磷酸鹽緩衝食鹽水)、乙醇、礦物油、植物油、二甲亞碸、醣類(例如，葡萄糖、甘露糖、蔗糖或葡聚糖(dextran))、甘露醇、蛋白質、輔劑，多肽或胺基酸諸如甘胺酸、抗氧化劑、鉗合劑諸如EDTA或榖胱甘肽及/或防腐劑。此外，於本發明所提供的藥物組合物中也可以(但是不一定需要)包括其它活性成分。
藥物組合物可經調配以用於任何適當的投藥方式，包括，例如，局部、經口、經鼻、經直腸或非經腸方式投藥。術語「非經腸」於用在本文中時是包括皮下、皮內、血管內(例如，靜脈內)、肌肉內、脊髓內、顱內、氣管內、與腹膜內注射，以及任何類似的注射或注輸液技術。於某些具體實施例中，適合用於經口使用的組合物為較佳者。此等組合物包括，例如錠劑、片劑、菱形錠劑、水性或油性懸浮液、分散性粉劑或粒劑、乳劑、硬質或軟質膠囊、或糖漿或酏劑。於又其它具體實施例中，本發明組合物可經調配成為冷凍乾燥物。供局部投藥所用的調配物可經製備以供某些狀況所用(例如，於皮膚狀況諸如灼傷或搔癢的治療之中者)。供直接投藥至膀胱內(膀胱內投藥)用的調配物對於尿失禁和膀胱過動症的治療可能為較佳者。
經口所用的組合物可進一步包含一種或多種化合物諸如甜味劑、調味劑、著色劑及/或防腐劑，以提供令人喜歡且適口的製劑。錠劑包含活性成分與適合用來製造錠劑的生理上可接受的賦形劑的混合物。此等賦形劑包括，例如，惰性稀釋劑(例如，碳酸鈣、碳酸鈉、乳糖、磷酸鈣、或磷酸鈉)，制粒劑和崩解劑(例如，玉米澱粉或海藻酸)，黏合劑(例如，澱粉、明膠或阿拉伯膠)，與潤滑劑(例如，硬脂酸鎂、硬脂酸或滑石)。錠劑可為無包衣或彼等可經已知方法包覆包衣以延緩在胃腸道內的崩解與吸收，藉此提供長期間內的持續作用。例如，可以採用時間延遲性物質諸如單硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。
經口所用的調配物也可以呈現為硬質明膠膠囊的形式，於其中活性成分與惰性固體稀釋劑(例如，碳酸鈣、磷酸鈣、或高嶺土)混合，或呈現軟質明膠膠囊的形式，於其中活性成分與水或油性介質(例如，花生油、液體石蠟、或橄欖油)混合。
水性懸浮液包含活性成分(群)與適當的賦形劑混合，諸如懸浮劑(例如，羧甲基纖維索鈉、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、海藻酸鈉、聚乙烯基吡咯烷酮、黃蓍膠、和阿拉伯膠)；及分散劑或溼潤劑(例如，天然發生的磷脂類例如卵磷脂，伸烷基氧化物與脂肪酸的縮合產物例如聚氧伸乙基硬脂酸酯，環氧乙烷與長鏈脂族醇的縮合產物例如十七碳伸乙基氧鯨蠟醇，環氧乙烷與衍生自脂肪酸和己糖醇的部份酯的縮合產物例如聚氧伸乙基山梨糖醇單油酸酯，或環氧乙烷與衍生自脂肪酸和己糖醇酐的部份酯的縮合產物例如聚氧伸乙基山梨糖醇酐單油酸酯)。水性懸浮液也可以包含一種或多種防腐劑，諸如對羥基苯甲酸乙酯或正丙酯；一種或多種著色劑；一種或多種調味劑及/或一種或多種甜味劑，諸如蔗糖或糖精。
油性懸浮液可以經由將活性成分(群)懸浮在植物油(例如，花生油、橄欖油、芝麻油或椰子油)或礦物油諸如液態石蠟之中而調配成。油性懸浮液可以包含增稠劑諸如峰蠟、硬質石蠟、或鯨蠟醇。此外可以加入上述的甜味劑及/或調味劑以提供適口的口服製劑。此等懸浮液可以經由添加抗氧化劑諸如抗壞血酸予以防腐。
適合製備水性懸浮液的可分散性粉劑可加水以使活性成分與分散劑或溼潤劑、懸浮劑和一種或多種防腐劑混合。適當的分散劑或溼潤劑及懸浮劑實例子已如上述。也可以含有其它賦形劑，諸如甜味劑、調味劑和著色劑。
藥物組合物也可以調配成為水包油乳液(oil-in-wateremulsion)。其油相可為植物油(例如，橄欖油或花生油)，礦物油(諸如，液態石蠟)或彼等的混合物。適當的乳化劑包括天然發生的樹膠類(例如，阿拉伯膠或黃蓍膠)，天然發生的磷脂質類(例如，大豆卵磷脂，與衍生自脂肪酸和己糖醇的酯或部份酯)，酸酐類(例如，山梨糖醇單油酸酯)，以及衍生自脂肪酸和己糖醇的部份酯與環氧乙烷的縮合產物(例如，聚氧伸乙基山梨糖醇酐單油酸酯)。乳液也可以包含一種或多種甜味劑及/或調味劑。
糖漿和酏劑可以使用甜味劑予以調配成，諸如甘油、丙二醇、山梨糖醇或蔗糖。此等調配物也可以包含一種或多種緩和劑、防腐劑、調味劑及/或著色劑。
局部投藥所用的調配劑典型地包含局部用媒劑與活性成分(群)組合，可添加或不添加其它可視需要選用的成分。適當的局部用媒劑與其它成分皆為技藝中熟知者，且顯然地，媒劑的選擇是決定於特別的物理形式與投遞方式。局部用媒劑包括水；有機溶劑諸如醇類(例如，乙醇或異丙醇)或甘油；二醇類(例如，丁二醇、異戊二醇或丙二醇)；脂族醇類(例如，羊毛脂)；水和有機溶劑的混合物及多種有機溶劑的混合物例如醇和甘油；以脂質為基底的物質諸如脂肪酸、醯基甘油(包括油類，諸如礦物油，以及天然或合成的脂肪)；磷酸甘油酯類，神經鞘脂類和蠟類；以蛋白質為基底的物質諸如膠原和明膠；以聚矽氧為基底的物質(包括非揮發性與揮發性者)；以及以烴為基底的物質諸如微囊海綿(microsponge)和聚合物材料。組合物可進一步包括一種或多種經調適用來改良所施用的調配物的安定性或有效性的成分，諸如安定劑、懸浮劑、乳化劑、黏度調整劑、膠凝劑、防腐劑、抗氧化劑、皮膚滲透增進劑、增溼劑以及持續釋放性物質。此等成份的實例都載於Martindale的The Extra Pharmacopoeia(Pharmaceutical Press，London，1993)和Marin(ed.)，Remington’s PharmaceuticalSciences中。調配物可包含微膠囊，諸如羥甲基纖維素或明膠微膠囊，微脂粒，白蛋白微球體，微乳液，奈米粒子或奈米膠囊。
局部用調配物可製備成多種物理形式中的任何一種，例如，固體、糊劑、乳霜、泡沫物、洗液、凝膠、粉劑、水性液體和乳液。此等醫藥上可接受的形式所具物理外觀和黏度可由調配物中所含乳化劑和黏度調整劑的用量來控制。固體通常為堅固且不能傾注者，且通常調配為棒狀或杆狀，或特別的形式；固體可為不透明或為透明者，且視需要可包含溶劑、乳化劑、增溼劑、保溼藥、香料、染料/著色劑、防腐劑以及可增加或加強最後產品效力的其它活性成分。乳霜和洗液時常為彼此相似者，其差異主要在於彼等的黏度；洗液和乳霜兩者可為不透明、半透明或透明者，且時常包含乳化劑、溶劑、和黏度調整劑，以及增溼劑、保溼藥、香料、染料/著色劑、防腐劑以及可增加或加強最後產品效力的其它活性成分。凝膠可經製備成為具有一範圍的黏度者，從濃稠或高黏度到稀薄或低黏度。此等調配物，如同洗液和乳霜者，也可以包含溶劑、乳化劑、增溼劑、保溼藥、香料、染料/著色劑、防腐劑以及可增加或加強最後產品效力的其它活性成分。液態比乳霜、洗液、或凝膠都更為稀薄且時常不包含乳化劑。液態局部用產品時常包含溶劑、乳化劑、增溼劑、保溼藥、香料、染料/著色劑、防腐劑以及可增加或加強最後產品效力的其它活性成分。
適用於局部調配物的乳化劑包括，但是不限定於，離子性乳化劑、鯨蠟硬脂醇、非離子性乳化劑如聚氧伸乙基油基醚、PEG-40硬脂酸酯、鯨蠟硬脂醇醚-12(ceteareth-12)、鯨蠟硬脂醇醚-20(ceteareth-20)、鯨蠟硬脂醇醚-30(ceteareth-30)、鯨蠟硬脂醇(ceteareth alcohol)、PEG-100硬脂酸酯與硬脂酸甘油酯。適當的黏度調整劑包括，但是不限定於，保護性膠體或非離子性樹膠類諸如羥乙基纖維素、黃蓍膠、矽酸鋁鎂、矽石、微晶蠟、蜂蠟、石蠟、與棕櫚酸鯨蠟酯。凝膠組合物可以經由添加膠凝劑而形成，諸如甲殼素(chitosan)、甲基纖維素、乙基纖維素、聚乙烯醇、聚四元鹽(polyquaternium)、羥乙基纖維素、羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素、卡波姆(carbomer)或胺化甘草酸鹽。適當的界面活性劑包括，但是不限定於，非離子性、兩性、離子性和陰離子性界面活性劑。例如，在局部用調配物內可以使用一種或多種下列者二甲矽酮共多元醇(dimethicone copolyol)、聚山梨酸酯-20(polysorbate-20)、聚山梨酸酯-40、聚山梨酸酯-60、聚山梨酸酯-80、月桂醯胺DEA、椰子醯胺DEA與椰子醯胺MEA、油基甜菜鹽、椰子醯胺丙基磷脂醯基PG-二銨化氯、以及月桂基醚硫酸銨。適當的防腐劑包括，但是不限定於，抗微生物劑諸如對氧苯甲酸甲酯(methylparaben)、對氧苯甲酸丙酯、山梨酸、苯甲酸、和甲醛，以及物理安定劑和抗氧化劑諸如維生素E、抗壞血酸鈉/抗壞血酸、及沒食子酸丙酯。適當的增溼劑包括，但是不限定於，乳酸和其它的羥基酸及彼等的鹽類，甘油、丙二醇、和丁二醇。適當的保溼藥包括羊毛脂醇、羊毛脂、羊毛脂衍生物、膽固醇、礦脂(petrolatum)、新戊酸異硬脂基酯、與礦物油。適當的香料和著色劑包括，但是不限定於，FD&C紅色40號和FD&C黃色5號。可以包括在局部調配物內的其它適當的附加成分包括，但是不限定於，研磨劑、吸收劑、抗結塊劑、消泡劑、抗靜電劑、收斂劑(例如，含榛、醇和草藥萃取物諸如甘菊萃取物)、黏合劑/賦形劑、緩衝劑、鉗合劑、膜形成劑、調理劑、推進劑、不透光劑、pH調整劑和防護劑。
適合用於凝膠調配物的局部用媒劑的實例為羥丙基纖維素(2.1％)；70/30異丙醇/水(90.9％)；丙二醇(5.1％)；和聚山梨酸酯-80(1.9％)。適合用於泡沫調配物的局部用媒劑的實例為鯨蠟醇(1.1％)；硬脂醇(0.5％)；季銨鹽52(Quternium 52)(1.0％)；丙二醇(2.0％)；乙醇95 PGF3(61.05％)；去離子水(30.05％)；P75烴推進劑(4.30％)。所有百分比均以重量計。
局部調配物的典型遞送方式包括使用手指塗抹；使用物理性塗抹器諸如布、衛生紙、棉花、棒子或刷子塗抹；噴灑(包括霧化、氣霧或泡沫噴灑)；滴管施用；噴灑；浸泡；與衝洗。也可以使用控制釋放性媒劑。
藥物組合物也可以製備成為無菌可注射的水性或油性懸浮液。本發明所提供的化合物(群)，依照所使用的媒劑和濃度而定，可以懸浮或溶解在媒劑內。此等組合物可以根據已知的技藝使用適當的分散劑、溼潤劑及/或懸浮劑諸如上面所提及者予以調配。於可接受的媒劑和溶劑中可使用水、1，3-丁二醇、林格氏溶液(Ringer’s solution)和等張性氯化鈉溶液。此外，可以採用無菌固定油類作為溶劑或懸浮介質。為此目的，可以採用任何品牌的固定油，包括合成單酸甘油酯或二酸甘油酯。此外，脂肪酸類諸如油酸可用來製備可注射的組合物，且可以將輔劑諸如局部麻醉劑、防腐劑及/或緩衝劑溶解在媒劑內。
藥物組合物也可以製備成為栓劑(例如，經直腸投藥用)。此等組合物可以經由將藥物與適當的在常溫下為固體但是在直腸溫度下卻為液體的無刺激性賦形劑混合而製備成，因而可在直腸內融化以釋放出該藥物。適當的賦形劑包括，例如，可可脂和聚乙二醇。
藥物組合物也可以製備成為持續釋放性或控制釋放性調配物(亦即，如膠囊可在投藥後緩慢釋放調節劑效力的調配物)。此等調配物通常可以使用熟知的技術予以製備且經由，例如經口、經直腸或皮下植入物，或經由在所欲目標位置植入而投藥。在此等調配物內使用的載劑為生物兼容性者，且也可為生物可分解者；較佳者，該調配物可釋放相當恆定的調節劑。持續釋放性調配物中所包含的調節劑含量是決定於，例如，植入位置、釋放速度和預期的釋放持續期以及要治療或預防病症的性質。
除了上述投藥方式或與上述投藥方式一起並用，也可以將本發明所提供的化合物添加到食物或飲用水內(例如，用來投予非人類動物包括陪伴動物(諸如狗和貓)與家畜)。動物飼料和飲用水組合物可以調配成為使得動物在進食時可以伴隨其食物攝取適當量的該組合物。也可以方便地將組合物呈現為預混料形式以用來加到飼料或飲用水內。
化合物通常是以治療有效量投藥。較佳的全身劑量為不高於每天每仟克體重50毫克(例如，每天每仟克體重約0.001毫克至約50毫克)，口服劑量通常比靜脈內劑量較高為約5至20倍(例如，每天每仟克體重約0.01毫克至40毫克)。
可以與載劑物質組合使用以製造出單一劑量單位的活性成分用量會依照，例如被治療的患者與特定投藥方式而變化。劑量單位通常包含約10微克至約500毫克活性成分。最佳劑量可以經由使用例行性檢驗，與技藝中熟知的程序予以確定。
藥物組合物可經包裝用來治療對VR1調節有反應的病症(例如，治療暴露道類香草醇配體或其它的刺激物、疼痛、搔癢、肥胖症或尿失禁)。包裝藥物組合物通常包括(i)容器，內裝包含至少一種本發明所提供的VR1調節劑的藥物組合物；與(ii)說明書(例如，卷標)，指示出其中所裝的組合物是用來治療患者對VR1調節作用有反應的病症。
使用方法 本發明所提供的VR1調節劑可以用來在多種範疇，包括活體外與活體內，用以變更辣椒素受體的活性及/或活化。於某些方面中，可以使用VR1拮抗劑在活體外或活體內抑制類香草醇配體促效劑(例如，辣椒素及/或RTX)對辣椒素受體的結合。一般而言，此等方法包括下述步驟令辣椒素受體與一種或多種本發明所提供的VR1調節劑，在類香草醇配體的存在中，於水溶液內及其它適合該配體對辣椒素受體的結合的條件下進行接觸。VR1調節劑通常是以足以變更類香草醇配體對VR1在活體外的結合性(使用實施例5中所提供的檢定法)及/或VR1媒介訊號轉導作用(使用實施例6中所提供的檢定法)的濃度存在。辣椒素受體可存在於溶液中或者懸浮液中(例如，在單離膜或細胞製劑中)，或者在培養或單離出的細胞中。於某些具體實施例中，辣椒素受體是由患者體內所含的神經細胞表達，且該水溶液為一種體液。較佳者，投予動物一種或多種VR1調節劑，其投藥量為使動物體內至少一種體液所含VR1調節劑的醫療有效濃度為1微摩爾濃度或更低；較佳者500納摩爾濃度或更低；更佳者100納摩爾濃度或更低，50納摩爾濃度或更低，20納摩爾濃度或更低，或10納摩爾濃度或更低。例如，此等化合物可用醫療有效的劑量來投予，該醫療有效的劑量為低於20毫克/仟克體重，較佳者低於5毫克/仟克體重且，於某些實例中，低於1毫克/仟克體重。
本發明也提供一種調節，較佳者減低，細胞辣椒素受體的訊號轉導活性(亦即鈣傳導)的方法。此等調節可以經由令辣椒素受體與一種或多種本發明所提供的VR1調節劑，在適合該調節劑(群)對該受體結合的條件下進行接觸(可為活體外或活體內任一種)。VR1調節劑(群)通常是以足以變更類香草醇配體對VR1在活體外的結合性及/或VR1媒介訊號轉導的濃度存在，如本文中所述者。該受體可存在於溶液中或者懸浮液中，在培養或單離的細胞製劑中或在患者體內的細胞中。例如，該細胞可為在動物體內以活體內接觸的神經元細胞。或者，該細胞可為在動物體內以活體內接觸的上皮細胞，諸如膀胱上皮細胞(urothelial cell)或呼吸道上皮細胞。訊號轉導活性的調節可以經由檢測對於鈣離子傳導性的影響(也稱為鈣移動性或流量)予以評估。或者，訊號轉導活性的調節可以經由檢測使用一種或多種本發明所提供的VR1調節劑給予治療的患者症狀(例如，疼痛、灼傷感覺、支氣管收縮、發炎、咳嗽、呃逆、搔癢、尿失禁或膀胱過動症)的變更予以評估。
本發明所提供的VR1調節劑較佳地是經口或局部投予患者(例如，人類)，且當調節VR1訊號轉導活性時是存在於患者的至少一種體液中。用於此等方法中的較佳VR1調節劑可在活體外在1納摩爾濃度或更低；較佳者100微微摩爾濃度或更低；更佳者20微微摩爾濃度或更低，且在活體內於體液諸如血液內在1微摩爾濃度或更低，500納摩爾濃度或更低，或100納摩爾濃度或更低者的濃度之下調節VR1訊號轉導活性。
本發明進一步提供治療對VR1調節有反應的病症的方法。於本發明範疇內，術語「治療」同時涵蓋疾病改變疾病的治療法和症狀處理兩者，彼等之中任何一者都可為預防性者(亦即，在症狀出現的前處理，以預防、延緩或減低病症的嚴重性)或醫療性(亦即，在病症出現之後處理，以減低病症的嚴重性及/或持續期)。一種狀況，不論類香草醇配體的局部含量，若病症的特徵為辣椒素受體活性不當，及/或若辣椒素受體活性的調節會造成該病症或其症狀減輕時，則該病症為「對VR1調節有反應」者。此等狀況包括，例如，暴露於VR1活化刺激所造成的症狀、疼痛、呼吸疾病例如哮喘或慢性阻塞性肺病、搔癢、尿失禁、膀胱過動症、咳嗽、呃逆、和肥胖症，如下面要更詳細說明者。此等狀況都可以使用技藝中已經建立的準則予以診斷與監測。患者可能包括人類、家居陪伴動物與家畜，其劑量為上面所述者。
療程可能依照所用的化合物和要治療的特別病症而變化；不過，對於大部份疾病的治療，較佳者為每日投藥四次或更低的頻率。一般而言，更佳者為每日投藥二次的劑量療程，而特別較佳者為每日投藥一次。對於治療急性疼痛時，宜於採用可以快速地達到有效濃度的單一劑量。不過，要理解者，用於任合特定患者的明確劑量和療程是決定於多種因素者，包括所使用的特定化合物的活性，年齡、體重、一般健康狀況，性別、飲食、投藥時間、投藥途徑、以及排洩速度、藥物組合與接受治療期間特定疾病的嚴重性。一般而言，較佳者為使用足以提供有效治療的最低劑量。通常可以對患者使用適合用於受治療或要預防的病症的醫學或獸醫準則予以追蹤。
因暴露於辣椒素受體活化刺激而產生症狀的患者包括患有因熱、光、催淚氣體或酸引起的灼傷的個體或其黏膜暴露(例如，因攝入、吸入或眼睛接觸)辣椒素(例如，來自辣胡椒或胡椒噴霧中)或相關的刺激物諸如酸、催淚氣體、傳染性製劑或空氣汙染物的個體。所造成的症狀(可以使用本發明所提供的VR1調節劑，尤其是拮抗劑治療的症狀)可能包括，例如，疼痛、支氣管收縮和發炎。
可以使用本發明所提供的VR1調節劑予以治療的疼痛可為慢性或急性疼痛，且包括，但是不限定於，周邊神經媒介疼痛(尤其是神經病變性疼痛)。本發明所提供的化合物可用來治療，例如，後乳房切除術疼痛徵候群、殘肢疼痛、幻肢疼痛、口腔神經病變性疼痛、牙痛(牙齒疼痛)、全口齒疼痛、皰疹後神經痛、糖尿病性神經病變、反射交感神經營養障礙、三叉神經痛、骨關節炎、類風溼關節炎、纖維肌痛、吉蘭-拜瑞(Guillain-Barre)症候群、感覺異常性股痛、口腔灼熱症候群及/或兩側周邊神經病變。其它的神經病變性疼痛狀況包括灼狀神經痛(反射交感神經營養障礙-RSD、周邊神經損傷後續發)，神經炎(包括，例如，坐骨神經炎、周邊神經炎、多發神經炎、視神經炎、熱病後神經炎、遊走性神經炎、節段神經炎和剛波氏神經炎(Gombaultneuritis))，神經元炎(neuronitis)，神經痛(例如，上面述及者，頸臂神經痛、爐側神經痛、膝狀神經痛、舌咽神經痛、偏頭痛神經痛、自發性神經痛、肋間神經痛、乳房神經痛、下頜關節神經痛、摩頓氏神經痛(Morton’s neuralgia)、鼻睫狀神經痛、枕骨神經痛、紅色神經痛、史榴逗氏神經痛(Sluder’s neuralgia)、脾顎神經痛、眶上神經痛和翼管神經痛)，手術相關的疼痛，肌肉骨骼疼痛，AIDS-相關的神經病變、MS-相關的神經病變，以及脊椎傷害相關疼痛。頭痛，包括涉及周邊神經活性的頭痛，諸如竇頭痛、簇頭痛(亦即，偏頭痛神經痛)與某些緊張性頭痛以及偏頭痛，也可以按照本發明所述予以治療。例如，偏頭痛性頭痛可以經由在患者經歷偏頭痛前先兆之際立即投予本發明所提供的化合物予以預防。可以按照本發明所述予以治療的其它疼痛狀況包括「口腔灼熱症候」、分娩疼痛、夏科氏疼痛(Charcot’spain)、腸脹氣痛、月經疼痛、急性和慢性背痛(例如下背疼痛)、痔瘡疼痛、消化不良疼痛、咽痛、神經根疼痛、等位疼痛(homotopic pain)和異位疼痛(heterotopic pain)-包括癌症相關的疼痛(例如，在患有骨癌的患者體內者)，與毒素暴露(例如，因為被蛇咬、蜘蛛咬、或昆蟲叮所導致者)相關的疼痛(與發炎)，以及與創傷相關的疼痛(例如，後手術後疼痛、來自割傷、挫傷和斷骨的疼痛，以及燒燙傷疼痛)。可以按照本發明所述予以治療的其它疼痛狀況包括與炎性腸部疾病相關的疼痛、刺激性腸部症候群及/或炎性腸部疾病。
於某些方面中，本發明所提供的VR1調節劑可以用來治療機械性疼痛。於在本文中使用時，術語「機械性疼痛」是指稱頭痛以外的疼痛，其不為神經病變性疼痛或因暴露於熱、冷或外來化學刺激所致。機械性疼痛包括物理性創傷(有別於熱或化學灼傷、或其它暴露到有害化學物質的刺激性及/或疼)諸如；手術後疼痛及來自割傷、挫傷和斷骨引起的疼痛；牙痛；全口齒疼痛；神經根疼痛；骨關節炎；類風溼性關節炎；纖維肌痛；感覺異常性股痛；背痛；癌症相關疼痛；咽痛；腕管症候群；以及來自骨折、分娩、痔瘡、腸部脹氣、消化不良、和月經引起的疼痛。
可以治療的搔癢包括乾癬性搔癢、因血液透析所致搔癢、瘧疾造成的搔癢(aguagenic pruitus)、以及與陰道前庭炎、接觸性皮膚炎、昆蟲叮咬和皮膚過敏相關的搔癢。可以按照本發明所述予以治療的尿道狀況包括尿失禁(包括溢尿性失禁、急性尿失禁和壓力性尿失禁)，以及過動症或不穩定性膀胱疾病(包括因脊柱造成迫肌過度反射和膀胱過敏)。於某些此等治療方法中，是將VR1調節劑通過導管或類似的裝置投藥，直接注射VR1調節劑到膀胱內。本發明所提供的化合物也可以用為止咳藥(防止、疏減或壓制咳嗽)且用於治療呃逆，以及促進肥胖患者的減輕體重。
於其它方面中，可以使用本發明所提供的VR1調節劑於組合治療中用以治療涉及發炎成分的病症。此等狀況包括，例如，自體免疫病變以及已知具有發炎成分的病理性自體免疫反應包括，但是不限定於，關節炎(尤其是類風溼關節炎)、乾癬、克隆氏症、紅斑狼瘡、刺激性腸部症候群、組織移植物排斥和移植器官的過急性排斥。其它此等狀況包括創傷(例如，頭部或脊柱受傷)、心臟-與腦-血管疾病以及某些傳染性疾病。
於此等組合治療法中，VR1調節劑是與消炎劑一起投予患者。也可以將VR1調節劑與消炎藥包含在相同的藥物組合物中，或者可分開依任何順序投藥。消炎劑包括，例如，非類固醇消炎藥(NSAIDs)，非專一性-和環氧化酶-2(cyclooxygenase-2)(COX-2)專一性環氧化酶酵素抑制劑，金化合物，皮質類固醇，胺甲喋呤(methotrexate)、腫瘤壞死因子(TNF)受體拮抗劑、抗-TNFα抗體，抗-C5抗體，以及介白素-1(IL-1)受體拮抗劑。NSAIDs實例包括，但是不限定於，異丁苯丙酸(ibuprofen)(例如，ADVILTM、MOTRINTM)，氟布洛芬(flurbiprofen)(ANSAIDTM)、那普洛辛(naproxen)或那普洛辛鈉鹽(naproxen sodium)(例如，NAPROSYN、ANAPROX、ALEVETM)、二氯苯胺苯乙酸(diclofenac)(例如，CATAFLAMTM、VOLTARENTM)、二氯苯胺苯乙酸鈉(diclofenac sodium)和雙氯芬酸鈉與米索前列醇(misoprostol)的組合(例如，ARTHROTECTM)、速靈達(sulindac)(CLINORILTM)、
丙_(oxaprozin)(DAYPROTM)、二氟苯水楊酸(diflunisal)(DOLOBIDTM)、炎痛喜康(piroxicam)(FELDENETM)、吲哚美辛(indomethacin)(INDOCINTM)、乙哚乙酸鹽(etodolac)(LODINETM)、非諾洛芬鈣(fenoprofen calcium)(NALFONTM)、酮洛芬(ketoprofen)(例如，ORUDISTM、ORUVAILTM)、萘丁美酮鈉(sodium nabumetone)(RELAFENTM)、柳氮磺胺嘧啶(sulfasalazine)(AZULFIDINETM)、四苯醯吡咯乙酸鈉(tolmetin sodium)(TOLECTINTM)、和羥氯喹(hydroxychloroquine)(PLAQUENILTM)。有一類NSAIDs是由可抑制環氧化酶(COX)酵素的化合物所組成。NSAIDs進一步包括水楊酸鹽諸如乙醯基水楊酸或阿司匹林，水楊酸鈉，膽鹼和水楊酸鎂(TRILISATETM)，和水楊醯水楊酸(salsalate)(DISALCIDTM)，以及皮質類固醇諸如可松體(cortisone)(CORTONETM乙酸鹽)、地塞米松(dexamethasone)(例如，DECADRONTM)、甲基氫化潑尼松(methylprednisolone)(MEDROLTM)、氫化潑尼松(PRELONETM)、氫化潑尼松磷酸鈉(PREDIAPREDTM)、以及潑尼松(predinisone)(例如，PREDNICEN-MTM、DELTASONETM、STERAPREDTM)。
在此等組合治療法中，VR1調節劑的適當劑量通常為如上所述者。消炎劑的劑量和投藥方法可以參見，例如，載於Physician’s DeskReference中的製造商說明書。於某些具體實施例中，VR1調節劑和消炎劑的組合投藥可以導致產生治療效用所需的消炎劑劑量的減低(亦即，減少最低治療有效量)。因此，較佳者，於本發明組合物或組合治療法中的消炎劑的劑量最好低於不與VR1拮抗劑組合投藥時，製造商所建議的最大消炎劑劑量。更佳者，此劑量低於不與VR1拮抗劑組合投藥時，製造商所建議的最高消炎劑劑量的3/4，甚至更佳者低於1/2，而最佳劑量為低於最高劑量的10％。需要達到所需效用的組合物中所含VR1拮抗劑成分的劑量會受到該組合物所含消炎劑藥成分劑量和效力影響。
於某些較佳具體實施例中，VR1調製劑和消炎劑的組合投藥是將一種或多種VR1調節劑和一種或多種消炎劑包裝在同一包裝中，在同一包裝中分裝在不同容器中，或為含有一種或多種VR1拮抗劑和一種或多種消炎劑的混合物裝在同一容器中。較佳的混合物是經調配成為經口投藥用(例如，呈丸劑、膠囊、錠劑等等)。於某些具體實施例中，包裝包含卷標，指示該一種或多種VR1調節劑和一種或多種消炎劑是用於共同治療發炎疼痛病症。
於其它方面中，本發明所提供的VR1調節劑可以與一種或多種其它疼痛紓解醫藥組合使用。某些此等醫藥也為消炎劑，且為上面所列出者。其它的此等醫藥為麻醉止痛劑，彼等典型地是作用於一種或多種類鴉片受體亞型(例如，μ、κ及/或δ)，較佳是作為促效劑或部份促效劑。此等藥劑包括鴉片製劑、鴉片製劑衍生物或類鴉片劑，以及彼等的醫藥上可接受的鹽和水合物。於較佳具體實施例中，麻醉止痛藥的明確實例包括阿芬他泥(alfentanyl)、安那度(alphaprodine)、氨苄度冷丁(anileridine)、培集屈密特(bezitramide)、丁基原啡因(buprenorphine)、可待因(codeine)、二乙醯基二氫嗎啡(diacetyldihyromorphine)、二乙醯基嗎啡(diacetylmorphine)、二氫可待因(dihydrocodeine)、氰苯哌酯(diphenoxylate)、乙基嗎啡(ethylmorphine)、芬太尼(fentanyl)、海洛因(heroin)、二氫可待因酮(hydrocodone)、二氫嗎啡酮(hydromorphone)、異美沙冬(isomethadone)、左旋甲基嗎泛(levomethorphan)、佐旋凡(levorphane)、左旋嗎泛(levorphanol)、嘜啶(meperidine)、美他唑新(metazocine)、美沙酮(methadone)、美沙芬(methorphan)、5-甲基二氫嗎啡酮(metopon)、嗎啡(morphine)、罌粟萃取物(opiumextracts)、罌粟液萃取物(opium fluid extracts)、粉化罌粟(powdered opium)、粒化罌粟(granulated opium)、生罌粟(rawopium)、罌粟酊劑(tincture of opium)、14-羥基二氫待因酮(oxycodone)、羥二氫嗎啡酮(oxymorphone)、複方樟腦酊(paregoric)、鎮痛新(pentazocine)、哌替啶(pethidine)、那爾芬(phenazocine)、匹密諾汀(piminodine)、丙氧吩(propoxyphene)、消旋甲嗎南(racemethophan)、外消旋嗎泛(racemorphan)、蒂巴因(thebaine)以及前述諸製劑的醫藥上可接受的鹽類和水合物。
麻醉止痛藥的其它實例包括，乙醯氧戊甲嗎啡(acetorphine)、乙醯基二氫可待因(acetyldihydrocodeine)、乙醯美沙醇(acetylmethadol)、丙烯普魯汀(allylprodine)、α-乙醯美沙醇(alphracetylmethadol)、阿法-美普魯汀(alphameprodine)、α-美沙醇(alphamethadol)、苯才西汀(benzethidine)、苯甲基嗎啡(benzylmorphine)、β-乙醯美沙醇(betacetylmethadol)、β-美普魯汀(betameprodine)、β-美沙醇(betamethadol)、β-安那度爾(betaprodine)、環丁甲二羥嗎喃(butorphanol)、克羅尼他淨(clonitazene)、可待因甲基溴化物(codeine methylbromide)、可待因-N-氧化物(codeine-N-oxide)、賽普諾啡(cyprenorphine)、二氫去氧嗎啡(desomorphine)、右旋嗎醯胺(dextromoramide)、狄安普魯密特(diampromide)、二乙基塞丁烯(diethylthiambutene)、二氫嗎啡(dihydromorphine)、狄門諾沙多(dimenoxadol)、二甲庚醇(dimepheptanol)、二甲基噻丁烯(dimethylthiamubutene)、二
菲定丁酸鹽(dioxaphetyl butyrate)、狄匹潘濃(dipipanone)、羥甲嗎哺醇(drotebanol)、乙醇、乙基甲基噻丁烯(ethylmethylthiambutene)、愛託尼他淨(etonitazene)、羥甲嗎啡(etorphine)、愛託失立汀(etoxeridine)、佛萊西汀(furethidine)、羥化嗎啡醇(hydromorphinol)、羥基配西汀(hydroxypethidine)、酮基貝米酮(ketobemidone)、左旋嗎拉密(levomoramide)、左旋酚醯基嗎喃(levophenacylmorphan)、甲基去氧嗎啡(methyldesorphine)、甲基二氫嗎啡(methyldihydromorphine)、嗎啡啶(morpheridine)、嗎啡甲基普醯胺(morphine methylpromide)、嗎啡甲基磺酸酯(morphinemethylsulfonate)、嗎啡-N-氧化物(morphine-N-oxide)、嗎咯吩(myrophin)、那諾松(naloxone)、鈉丁酚(nalbuyphine)、納曲酮(naltyhexone)、煙醯可待因(nicocodeine)、菸鹼醯嗎啡(nicomorphine)、去甲基醯基美沙多(noracymethadol)、去甲基左啡諾(norlevorphanol)、去甲基美沙醇(normethadone)、去甲基嗎啡(normorphine)、諾匹哌酮(norpipanone)、苯他索咔因(pentazocaine)、苯嗎庚酮(phenadoxone)、非那丙胺(phenampromide)、非諾啡烷(phenomorphan)、苯阿柏尼丁(phenoperidine)、哌腈米特(piritramide)、福爾可定(pholcodine)、普庚索辛(proheptazoine)、普魯配立汀(properidine)、丙吡胺(propiran)、消旋嗎拉密特(racemoramide)、醋氫可酮(thebacon)、三甲利定(trimeperidine)以及其醫藥上可接受的鹽類和水合物。
其它特定代表性止痛劑包括，例如TALWIN_Nx和DEMEROL_(均得自溫莎藥廠(Sanofi Winthrop Pharmaceuticals；New York，NY))；LEVO-DROMORAN_；BUPRENEX_(Reckitt & Coleman藥廠；Richmond，VA)；MSIR_(Purdue Pharma L.P.藥廠；Norwalk，CT)；DILAUDID_(Knoll藥廠；Mount Olive，NJ)；SUBLIMAZE_；SUFENTA(a)(Janssen藥廠；Titusville，NJ)；PERCOCET_，NUBAIN_和NUMORPHAN_(均得自Endo藥廠；Chadds Ford，PA)；HYDROSTAT_IR，MS/S和MS/L(均得自Richwood藥廠；Florence，KY)；ORAMORPH_SR和ROXICODONE_(均得自Roxanne Laboratories實驗室；Columbus，OH)；以及STADOL_(Bristol-Myers Squibb；New York，NY)。另有其它止痛劑包括CB-2受體促效劑，諸如AM1241，及與α2δ亞單位結合的化合物，諸如加巴噴丁(Neurontin)(Gabapentin)與普瑞巴林(pregabalin)。
於某些方面中，本發明所提供的VR1調節劑可以與一種或多種白三烯受體拮抗劑(例如，抑制半胱胺醯基白三烯CysLT1受體的藥劑)組合使用。CysLT1拮抗劑包括孟魯司特(Montelukast)(順爾寧(SINGULATIR_；Merck&Co.，Inc.)。此等組合可用來治療肺部疾病諸如哮喘。
本發明進一步提供治療尿失禁的組合療法。於此等方面中，可以使用本發明所提供的VR1調節劑與毒蕈鹼受體拮抗劑諸如託特羅定(Tolterodine)(DETROL_；Pharmacia Corporation藥廠)或抗膽鹼能劑諸如奧昔布寧(Oxybutynin)(DITROPAN_；Ortho-McNeilPharmaceutical，Inc.，Raritan，NJ)。
在此等組合療法中VR1調節劑的適當劑量通常為上面所述者。其它的疼痛紓解性醫藥的劑量和投藥方法可以參見，例如，載於Physician’s Desk Reference中的製造商說明書。於某些具體實施例中，VR1調節劑和一種或多種其它的疼痛醫藥的組合投藥結果可以降低藥產生醫療效用所需的各醫療劑的劑量(例如，其中一種或兩種藥劑的劑量可能低於上述或製造商所建議的最高劑量的3/4，低於1/2，低於1/4或低於上述或製造商所建議的最高劑量的10％)。於某些較佳具體實施例中，VR1調節劑和一種或多種其它疼痛醫藥的組合投藥是經由將一種或多種該VR1調節劑和一種或多種其它疼痛醫藥製劑包裝在同一包裝內而完成，如上文中所述者。
作為VR1拮抗劑的化合物可用於例如群體控制(作為替代催淚氣體)或個人保護(例如，呈噴霧調配物)或作為醫療劑以用於經由辣椒素受體去敏化作用而治療疼痛、搔癢、尿失禁或膀胱過動症。通常，用於群體控制或個人保護的化合物是根據習用的催淚氣體或胡椒噴霧技術而調配與使用。
在分開的諸方面中，本發明提供可用本發明所提供的化合物的多種非醫藥活體外和活體內用途。例如，此等化合物可經標記且用為探針(probe)以用於辣椒素受體的檢測和定位(在諸如細胞製劑或組織切片，製劑或其部份中)。此外，本發明所提供的化合物包含適當反應基(諸如，芳基、羰基、硝基或疊氮基)的化合物可用於受體結合位置的光親和性標記試驗。此外，本發明所提供的化合物可以用在受體活性檢定中作為陽性對照組，作為用以測定候選試劑結合到辣椒素受體的能力的標準物，或作為正子放射斷層掃描攝影(PET)造影或用於單光子放射計算機斷層掃描攝影(SPECT)造影。此等方法可以用來鑑定活體內的辣椒素受體。例如，可以使用多種熟知技術中的任何一者來標記VR1調節劑(例如，使用放射性核種諸如氚進行放射標記，如本文中所述者)，然後與樣品培養一段適當的時間(例如，由第一次檢定結合的時間過程所測定出者)。於培養後，移除掉未結合的化合物(例如，經由清洗)，且使用對於該所採用的標記物為適當的任何方法檢測經結合的化合物(例如，可以使用放射自顯術或閃爍計數經放射標記的化合物或光譜分析法來檢測冷光基團和螢光基團)。作為對照組者，可以使用相同的方式處理含有經標記的化合物與更大量(例如，超過10倍以上)未經標記的化合物的經配對樣品。在試驗樣品中殘留著比對照組更大量的可檢測標記物即表示樣品中有辣椒紊受體存在。可以按照Kuhar在Current Protocols in Pharmacology(1998)John Wiley & Sons，NewYork中的第8.1.1至8.1.9段中所述者實施在培養的細胞或組織樣品內的辣椒素受體的檢測檢定法，包括受體放射自顯術(受體造影)。
本發明所提供的化合物也可以用在多種習知的細胞分離方法中。例如，可以將調節劑連結到組織培養板或其它擔體的內表面，以作為固定親和性配體，藉此在活體外單離辣椒素受體(例如，單離表達受體的細胞)。於一較佳具體實施例中，是將經連結到螢光標誌物，諸如螢光素，與細胞接觸後，使用螢光活化的細胞篩選法(FACS)進行分析(或單離)。
本發明所提供的VR1調節劑可以進一步用於鑑定其它結合辣椒素受體的製劑所用的檢定法。一般而言，此等檢定法為標準的競爭結合檢定法，其中，是使用試驗化合物取代經結合的經標記VR1調節劑。概述之，此等檢定法是經由下列步驟而實施(a)由辣椒素受體與本發明所述經標記放射性的VR1調節劑在允許VR1調節劑對辣椒素受體結合的條件下接觸，藉此產生已結合的經標記VR1調節劑；(b)於不含試驗製劑存在下檢測與已結合的經標記VR1調節劑含量的訊號；(c)由已結合的經標記VR1調節劑與試驗製劑接觸；(d)於有試驗製劑存在下檢測與已結合的經標記VR1調節劑含量相應的訊號；及(e)與在步驟(b)中所檢測到的訊號比較，檢測在步驟(d)中所檢測到的訊號降低程度。
下列實施例是以示範說明方式而絕不是以限制方式提出。除非另外有不同的表明，否則所有的試劑和溶劑都是標準商品級且不再純化即使用。使用例行修飾法可以變化起始物與其它所採用的步驟來製造本發明所提供的其它化合物。
實施例 實施例1 代表性經取代
啉-4-基胺的製備 本實施例闡明代表性經取代
啉-4-基胺5-三氟甲基-吡啶-2-基)-[7-(3-三氟甲基-吡啶-2-基)-
啉-4-基胺的製備。
1.2-對甲苯基-3-三氟甲基-吡啶
於除過氣的2-氯-3-(三氟甲基)-吡啶(70.1毫摩爾)、對甲苯基硼酸(70.6毫摩爾)和2M Na2CO3(175.0毫摩爾)在DME(200毫升)中的混合物中在氮氣下加入Pd(PPh3)4(2.8毫摩爾)。在80℃下攪拌該混合物整晚後，濃縮、用EtOAc萃取。於Na2SO4上脫水之後，在真空下濃縮，且通過氧化矽凝膠墊而獲得2-對甲苯基-3-三氟甲基-吡啶。
2.2-(4-甲基-3-硝基-苯基)-3-(三氟甲基)-吡啶
於2-對甲苯基-3-三氟甲基-吡啶(8.4毫摩爾)在H2SO4(6毫升)中的溶液中小心地加入發煙HNO3(2毫升)。在室溫下攪拌該混合物1小時。將該混合物傾倒在冰-水(30毫升)中，用EtOAc萃取，使用1N NaOH中和，於Na2SO4上脫水之後，在真空下濃縮而獲得2-(4-甲基-3-硝基-苯基)-3-(三氟甲基)-吡啶。
3.2-硝基-4-(3-三氟甲基-吡啶-2-基)-苯甲酸
於2-(4-甲基-3-硝基-苯基)-3-(三氟甲基)-吡啶(7.1毫摩爾)在吡啶(10毫升)和水(5毫升)中的溶液內，分數份地加入KMnO4(25.3毫摩爾)。在110℃下攪拌該混合物4小時，然後加入另一份25.3毫摩爾的KMnO4與10毫升的水。在110℃下攪拌該混合物整晚，冷卻到室溫，過濾過硅藻土墊。在真空下濃縮該濾液，用水稀釋，且用EtOAc萃洗該水溶液。使用2N HCl中和水層且收集沉澱物而獲得2-硝基-4-(3-三氟甲基-吡啶-2-基)-苯甲酸。
4.N-甲氧基-N-甲基-2-硝基-4-(3-三氟甲基-吡啶-2-基)-苯甲醯胺
將2-硝基-4-(3-三氟甲基-吡啶-2-基)-苯甲酸(10毫摩爾)、N，O-二甲基羥基胺鹽酸鹽(20毫摩爾)、EDCI(11毫摩爾)、三乙胺(30毫摩爾)在二氯甲烷(100毫升)中的溶液在室溫下攪拌24小時。將該反應混合物傾倒在飽和碳酸氫鈉水溶液之中且用二氯甲烷萃取。用食鹽水萃洗該合併的有機層。於Na2SO4上脫水之後，在真空下濃縮，且通過氧化矽凝膠墊而獲得N-甲氧基-N-甲基-2-硝基-4-(3-三氟甲基-吡啶-2-基)-苯甲醯胺。
5.1-[2-硝基-4-(3-三氟甲基-吡啶-2-基)-苯基]-乙酮
於N-甲氧基-N-甲基-2-硝基-4-(3-三氟甲基-吡啶-2-基)-苯甲醯胺(5毫摩爾)在THF(50毫升)中的溶液，在0℃下加入碘化甲基鎂(3M，甲苯中，15毫摩爾)。在室溫下攪拌該混合物4小時後，傾倒在1M鹽酸之中。用碳酸氫鈉中和該混合物且用乙酸乙酯萃取。用食鹽水萃洗合併的有機層。於Na2SO4上脫水之後，在真空下濃縮，且通過氧化矽凝膠墊而獲得1-[2-硝基-4-(3-三氟甲基-吡啶-2-基)-苯基]-乙酮。
6.1-[2-胺基-4-(3-三氟甲基-吡啶-2-基)-苯基]-乙酮
將1-[2-硝基-4-(3-三氟甲基-吡啶-2-基)-苯基]-乙酮(3.84毫摩爾)於95％EtOH(100毫升)中的溶液用10％Pd/C(150毫克)氫化整晚。過濾過硅藻土墊且將濾液濃縮而獲得1-[2-胺基-4-(3-三氟甲基-吡啶-2-基)-苯基]-乙酮。
7.7-(3-三氟甲基-吡啶-2-基)-
啉-4-醇
於1-[2-胺基-4-(3-三氟甲基-吡啶-2-基)-苯基]-乙酮(5亳摩爾)在濃鹽酸(25毫升)中的溶液內，加入亞硝酸鈉(5毫摩爾)/水(5毫升)。於攪拌4小時後，蒸發至幹且加入水20毫升與乙酸鈉(10毫摩爾)。將該混合物回流2小時，冷卻且用乙酸乙酯萃取。用食鹽水萃洗合併的有機層。於Na2SO4上脫水之後，在真空下濃縮，且通過氧化矽凝膠墊而獲得7-(3-三氟甲基-吡啶-2-基)-
啉-4-醇。
8.4-氯-7-(3-三氟甲基-吡啶-2-基)-
啉
將7-(3-三氟甲基-吡啶-2-基)-
啉-4-醇(1亳摩爾)在氧氯化磷(10毫升)中的溶液回流4小時。蒸發至幹且在乙酸乙酯與飽和碳酸氫鈉之間分溶。用更多的乙酸乙酯萃取且用食鹽水萃洗合併的有機層。於Na2SO4上脫水之後，在真空下濃縮，且通過氧化矽凝膠墊而獲得4-氯-7-(3-三氟甲基-吡啶-2-基)-
啉。
9.(5-三氟甲基-吡啶-2-基)-[7-(3-三氟甲基-吡啶-2-基)-
啉-4-基]-胺
於經除氣過的4-氯-7-(3-三氟甲基-吡啶-2-基)-
啉(1毫摩爾)、碳酸銫(2毫摩爾)、2-胺基-3-三氟甲基-吡啶(1毫摩爾)在二
烷(10毫升)中的混合物中，在氮氣下，加入Pd2dba3(0.05毫摩爾)和雙膦配體(xantphos)(0.05摩爾；Sigma-Aldrich Corp.，St.Louis，MO)。在90℃下攪拌該混合物整晚，濃縮且用EtOAc萃取。於Na2SO4上脫水之後，且在真空下濃縮。以管柱層析術用二氯甲烷/甲醇/氫氧化銨混合物溶析而獲得(5-三氟甲基-吡啶-2-基)-[7-(3-三氟甲基-吡啶-2-基)-
啉-4-基]-胺。
實施例2 其它代表性經取代
啉-4-基胺 使用例行修飾法，可以變化起始物與其它所採用的步驟來製造本發明所提供的其它化合物。下列化合物為使用此等方法製備者。
實施例3 其它代表性經取代
啉-4-基胺 使用例行修飾法，可以變化起始物且其它所採用的步驟來製造本發明所提供的其它化合物。下列化合物為使用此等方法製備者。
實施例4 VR1轉感染細胞和膜製劑 本實施例闡述用於辣椒素結合檢定法(實施例5)的VR1轉感染細胞製劑和含有VR1的膜製劑的製備。
將編碼全長度人類辣椒素受體的cDNA(美國專利案第6,482,611號的SEQ ID NO1、2或3)次克隆到質體pBK-CMV(Stratagene，La Jolla，CA)用以在哺乳動物細胞中重組表達。
使用標準方法將人類胚胎腎(HEK293)細胞經編碼全長度人類辣椒素受體的pBK-CMV表達構築體轉感染。在含有G418(400微克/毫升)的培養基內選取培養該經轉感染細胞兩星期而得到一群安定轉感染細胞。經由限制稀釋法，從該群細胞中單離出獨立純系而得到純系的安定細胞株以用於後續實驗中。
進行放射性配體結合性實驗時，是將細胞接種於T175細胞培養瓶內不含抗生素的培養基中，且生長到約90％融合度。然後使用PBS清洗該瓶且於含有5mM EDTA的PBS中收集細胞。將細胞經由溫和離心集結成塊且貯存在-80℃下直到要檢定為止。
將先前冷凍的細胞利用組織均質器的助勻散在冰冷的HEPES均質緩衝液中(5mM KCl、5.8mM NaCl、0.75mM CaCl2、2mM MgCl2、320mM蔗糖、與10mM HEPES pH7.4)。組織均質液先在1000xg(4℃)離心10分鐘以移除細胞核部份與碎屑，然後將第一次離心所得上澄液在35,000xg(4℃)進一步離心30分鐘而得到部分純化的膜部份。於檢定之前，將膜再懸浮於HEPES均質緩衝液中。使用一份此膜均質液通過Bradford法(BIO-RAD蛋白質分析套組(Protein Assay Kit)，#500-0001，BIO-RAD，Hercules，CA)測定蛋白質濃度。
實施例5 辣椒素受體結合性檢定法 本實施例闡明辣椒素受體結合性的代表性檢定法，其可用來測定化合物對辣椒素(VR1)受體的結合親和性。
使用[3H]樹脂毒素(resineferatoxin)(RTX)的結合性試驗基本上是按照Szallasi and Blumberg(1992)J.Pharmacol.Exp.Ter.262883-888中所述進行。於此方案中，是經由在結合反應終止之後，非專一性RTX結合性會因添加牛α1酸糖蛋白(每管100微克)而減低。
[3H]RTX(37 Ci/毫摩爾)是得自國家癌症研究所-費得利克癌症研究與發展中心的化學合成與分析實驗室(Chemical Synthesis andAnalysis Laboratory，National Cancer Institute-Frederick CancerResearch and Development Center，Frederick，MD.)所合成者。[3H]RTX也可以得自商業販售者(例如，藥廠Amersham Pharmacia Biotech，Inc，；Piscataway，NJ)。
取實施例4的膜均質液依照前述離心與再懸浮到均質緩衝液達333微克/毫升的蛋白質濃度。在冰上製備結合性檢定混合物，且其中包含[3H]RTX(比活性2200 mCi/毫升)、2微升的非放射性試驗化合物、0.25毫克/毫升的牛血清白蛋白(Cohn部份fraction V)、和5×104至1×105 VR1轉感染細胞。使用上述冰冷的HEPES均質緩衝液(pH7.4)將最後體積調整到500微升(用於競爭結合性檢定法)或1,000微升(用於飽和結合性檢定法)。非專一結合性是經定義為在1μM非放射性RTX(Alexis Corp.；San Diego，CA)存在中發生者。對於飽和結合，是將[3H]RTX的添加濃度範圍為7至1000pM，稀釋1至2次。典型做法為每條飽和結合性曲線收集11個濃度點。
競爭結合性檢定是在60pM[3H]RTX與各種濃度的試驗化合物的存在中實施。結合性反應是經由將檢定混合物移到37℃水浴中而開始，且在培養60分鐘後，該等試管在冰上冷卻而終止反應。經由使用前事先用1.0％PEI(聚乙烯亞胺)預浸泡2小時的WALLAC玻璃纖維濾紙(PERKIN-ELMER，Gaithersburg，MD)上過濾，將經膜結合的RTX從游離的RTX以及任何與α1酸糖蛋白結合的RTX分離出。讓濾紙乾燥整晚後，添加WALLAC BETA SCINT閃爍計數液，且在WALLAC 1205 BETA PLATE計數器中計數。
平衡結合性參數是經由藉助於電腦程式FIT P(Biosoft，Ferguson，MO)按照Szallasi，et al.(1993)J.Pharmacol.Exp.Ter.266678-683中所述將變構性希爾方程式(allosteric Hill equation)代入到測量值而測定的。於此檢定中，本發明所提供的化合物通常展示出低於1μM、100nM、50nM、25nM、10nM、或1nM對辣椒素受體的Ki值。
實施例6 鈣移動性檢定法 本實施例闡明用來評估試驗化合物的促效劑或拮抗劑活性的代表性鈣移動性檢定法。
將經使用表達質體轉感染(如實施例4中所述者)藉以表達人類辣椒素受體的細胞接種至FALCON黑邊、透明底板96孔板中(#3904，BECTON-DICKINSON，Frankilin，Lakes，NJ)，生長到70至90％融合度。從該96孔板將培養基排空後，於每一個孔中加入FLUO-3AM鈣敏感性染料(Molecular Probes，Eugene，OR)(染料溶液1毫克FLUO-3AM、440微升DMSO和440微升20％普羅尼克酸(pluronic acid)的DMSO溶液，在Krebs-Ringer HEPES(KRH)緩衝液(25mM HEPES、5mM KCl、0.96mM NaH2PO4、1Mm H2SO4、2mM CaCl2、5mM葡萄糖、1mM羧苯磺胺(probenecid)、pH7.4)中稀釋1∶250)，每孔50微升稀釋溶液)。使用鋁箔覆蓋該板，且在37℃含有5％CO2環境中培養1至2小時。於此培養後，從該板排空染料，使用KRH緩衝液洗滌該細胞一次，且再懸浮於KRH緩衝液中。
辣椒素EC50的測定法 為了測定化合物在表達辣椒素受體的細胞中對辣椒素或其它類香草醇促效劑促效或拮抗鈣移動性反應的能力，因此先測定促效劑辣椒素的EC50。於每一個按照上面所述製備的細胞孔中加入20微升KRH緩衝液和1微升的DMSO。以FLIPR儀器將100微升的辣椒素的KRH緩衝液自動轉感染到每一個孔中。使用螢光掃瞄器(FLUOROSKANASCENT)(Labsystems；Franklin，MA)或FLIPR(螢光測定儀顯影板讀數系統；Molecular Devices，Sunnyvale，CA)任一種儀器追蹤辣椒素誘導的鈣移動性作用。使用在施加促效劑後的30與60秒鐘之間所得到的數據製成8點的濃度效應曲線，最後的辣椒素濃度為1nM至3μM。使用KALEIDAGRAPH軟體(Synergy Software，Reading，PA)將數據代入下面的方程式 y＝a*(1/(1+(b/x)°)) 以測定出對該反應的50％激發濃度(EC50)。於此方程式中，y為最高螢光訊號，x為促效劑或拮抗劑(於此情況中指為辣椒素)濃度，a為Emax，b相當於EC50值且c為希爾是數(Hill coefficient)。
促效劑活性測定法 將試驗化合物溶解在DMSO中，於KRH緩衝液中稀釋，且立即加到按照上面所述製備的細胞。也於相同的96孔板中的細胞中加入100nM辣椒素(約為EC90濃度)作為陽性對照組。檢定孔中的試驗化合物最後濃度為介於0.1nM至5μM之間。
試驗化合物作為辣椒素受體的促效劑的能力是經由測量表達辣椒素受體的細胞被該化合物所誘發的螢光反應隨化合物濃度的變化而測定。按照上面所述代入此數據而得EC50值，此值通常小於1微摩爾濃度，較佳者小於100nM，且最佳者小於10nM。每一種試驗化合物的效力程度也經由計算指定試驗化合物濃度(典型為1μM)誘發的反應相對於100nM辣椒素所誘發的反應而測定出。此數值稱為訊號百分比(POS)，是用下面的方程式計算出 POD＝100*試驗化合物反應/100nM辣椒素反應 此分析提供同時試驗化合物作為人類辣椒素受體促效劑的強度和效力的定量法。人類辣椒素受體促效劑通常在低於100μM的濃度，或較佳者低於1μM的濃度，或最佳者在低於10nM的濃度誘發可檢測的反應。於1μM濃度時，對人類辣椒素受體的效力程度較佳為大於30POS，更佳為大於80POS。某些促效劑如在下文所述的檢定中，於低於4nM的化合物濃度下沒有可檢測的拮抗劑活性，即證實其基本上沒有拮抗劑活性，更佳為低於10μM的濃度，即最佳於為低於或等於100μM的濃。
拮抗劑活性測定法 將試驗化合物溶解在DMSO中，稀釋於20微升KRH緩衝液中，使得在檢定孔中的最後試驗化合物濃度為介於1μM至5μM之間，且加到按照上面所述製備的細胞。將含有製備的細胞和試驗化合物的96孔板放在黑暗室溫中0.5至6小時。重要者為該培養不要超過6小時。在正要測定螢光反應之前，以FLIPR儀器自動地在96孔板的每一個孔中加入按照上面所述測定出的EC50濃度兩倍的100微含升辣椒素的KRH緩衝液以達到200微升的最後體積和等於EC50的最後辣椒素濃度。於檢定孔中的試驗化合物最後濃度為介於0.1μM至5μM之間。辣椒素受體的拮抗劑在10微摩爾濃度或更低，較佳者1微摩爾濃度或更低，使此反應相對於配對對照組(亦即，在沒有試驗化合物之中，以兩倍EC50濃度的辣椒素處理過的細胞)，可將此反應值減低至少約20％，較佳者至少約50％，且最佳者至少約80％。取相對於在辣椒素的存在下及沒有拮抗劑下所觀察到的反應降低50％時所需拮抗劑濃度即為該拮抗劑的IC50值，且其較佳者為低於1微摩爾濃度、100納摩爾濃度、10納摩爾濃度、或1納摩爾濃度。
某些較佳的VR1調節劑為基本上不含促效劑活性的拮抗劑，如在上面所述檢定中於化合物濃度低於4nM，更佳者於低於10μM的濃度且最佳者於低於或等於100μM的濃度仍然沒有可檢測的促效劑活性所證實者。
實施例7 微粒體活體外半生期 本實施例闡明使用代表性肝微粒體半生期檢定法評定化合物的半生期值(t1/2值)。
匯集的(pooled)人類肝微粒體是得自XenoTech LLC(Kansas City，KS)。此等肝微粒體也可以得自活體外技術(In Vitro Technologies)(Baltimore，MD)或組織轉形技術(Tissue TransformationTechnologies)(Edison，NJ)。準備六份試驗反應，每一者包含25微升的微粒體、5微升的100μM試驗化合物溶液、和399微升的0.1M磷酸鹽緩衝液(19毫升的0.1M NaH2PO4、81毫升的Na2HPO4、使用H3PO4調整到pH7.4)。製備第七份反應作為陽性對照組，其中含有25微升的微粒體、399微升的0.1M磷酸鹽緩衝液、和5微升的100μM具有已知代謝性質的驗化合物(例如，苯二甲氮卓(DIAZEPAM)或氯氮平(CLOZAPINE))的溶液。將諸反應液在39℃培養10分鐘。
經由將16.2毫克NADP和45.4毫克葡萄糖-6-磷酸鹽稀釋在4毫升100mM MgCl2之中以製備輔因子(CoFactor)混合物。經由將214.3微升的葡萄糖-6-磷酸鹽脫氫酶(洛氏藥廠(Roche MolecularBiochemicals；Indianapolis，IN)供應)稀釋在1285.7微升的蒸餾水內而製備葡萄糖-6-磷酸鹽脫氫酶溶液。將71微升的起始反應混合物(3毫升的輔因子混合物；1.2毫升的葡萄糖-6-磷酸鹽脫氫酶溶液)加到六份試驗反應中的五份及陽性對照組中。將71微升的100mM MgCl2加到第六份試驗反應中作為陰性對照組。於每一個指定時間點(0、1、3、5和10分鐘)，用吸管將75微升的每一個反應混合物加到96孔含有75微升冰冷乙腈的深孔板的孔中。將樣品渦旋且於3500rpm離心10分鐘(Sorval T 6000D離心機，H1000B轉子)。將每一個反應的75微升上澄液移到96孔板中，其中各孔含有150微升0.5μM具有已知的LCMS圖形的化合物溶液(內標準)。進行每一個樣品的LCMS分析法，且由AUC測量未代謝的試驗化合物含量，標繪出化合物濃度對時間的曲線，外插得到試驗化合物的t1/2值。
本發明提供較佳化合物在人類肝微粒體中的活體外t1/2值最好大於10分鐘且小於4小時，較佳者介於30分鐘與1小時之間，。
實施例8 MDCK毒性檢定法 本實施例闡明使用Madin Darby犬腎(MDCK)細胞的細胞毒性檢定法進行化合物毒性的評定。
於透明底板96孔板(PACKARD，Meriden，CT)的每一個孔中加入1微升的試驗化合物，使檢定中化合物最後濃度為10微摩爾濃度、100微摩爾濃度或200微摩爾濃度。將不含試驗化合物的溶劑加到對照組孔中。
將MDCK細胞，ATCC no.CCL-34(美國菌種培養收集處(AmericanType Culture Collection，Manassas，VA))採用ATCC生產資料頁中的指示，維持在無菌狀態。使用胰蛋白酶處理(trypsinized)匯聚的MDCK細胞，予以收集，使用溫熱(37℃)培養基(VITACELL MinimumEssential Medium Eagle，ATCC catalog#30-2003)將其稀釋到0.1×106細胞/毫升的濃度。添加100微升稀釋的細胞至各孔中，但其中5個標準曲線對照組孔中改含100微升沒有細胞的溫熱培養基。然後將該板置於37℃95％O2、5％CO2下，恆定震蕩培養2小時。於培養後，於每一個孔中加入50微升哺乳動物細胞溶胞液(得自PACKARD(Meriden，CT)ATP-LITE-M Luminescent ATP檢測套組)，使用PACKARDTOPSEAL貼紙覆蓋諸孔且將諸板置於適當的震蕩器上以約700rpm震蕩2分鐘。
相對於沒有處理的細胞，會造成毒性的化合物將會減低ATP生產。ATP-LITE-M冷光(Luminescent)ATP檢測套組通常是根據製造商的指示用來測量在有處理和沒有處理的MDCK細胞中的ATP產量。先讓PACKARD ATP-LITE-M試劑平衡到室溫。一旦平衡後，將經冷凍乾燥的受質溶液在5.5毫升受質緩衝液(來自套組)中再重新組成。將經冷凍乾燥的ATP標準溶液在去離子水中再組成以得到10mM儲液(stock)。於5個對照組孔中，將10微升的經系列稀釋的PACKARD標準溶液加到每一個標準曲線對照組孔中，而使各依序孔中達到200nM、100nM、50nM、25nM、和12.5nM的最後濃度。於所有的孔中加入PACKARD受質溶液(50微升)，然後予以覆蓋，且將諸板置於適當的震蕩器上以約700rpm震蕩2分鐘。於每一個板的底部貼上白色PACKARD貼紙且使用箔片包裹諸板，將樣品保持在黑暗中10分鐘。之後，在22℃使用冷光計數器(例如，PACKARD TOPCOUNT微分析板閃爍與冷光計數器(Microplate Scintillaiton and Luminescence Counter)或TECANSPECTRAFLUOR PLUS)測量冷光，且從標準曲線計算ATP含量。比較試驗化合物處理過的細胞中的ATP含量與對未經處理的細胞中所測定到ATP含量。使用10μM較佳試驗化合物處理過的細胞中的ATP含量為未經處理的細胞的至少80％，較佳者至少90％。於使用濃度為100μM的試驗化合物時，使用較佳試驗化合物處理過的細胞中檢測到的ATP含量為未經處理的細胞的至少50％，較佳者至少80％的ATP含量。
實施例9 背根神經節細胞檢定法 本實施例闡明用來評定化合物的VR1拮抗劑或促效劑活性的代表性背根神經節細胞檢定法。
使用標準方法從新生大鼠切下DRG，予以解離與培養(Aguayo andWhite(1992)Brain Research 57061-67)。於48小時培養之後，清洗細胞一次且與鈣敏感性染料Fluo 4 AM(2.5至10微克/毫升；TefLabs，Austin，TX)培養30至60分鐘。之後，再清洗細胞一次。使用螢光計測量Fluo-4螢光的變化監測細胞中鈣濃度因添加辣椒素至細胞中而隨VR1增加的變化。收集數據60至180秒以測定出最大螢光訊號。
於拮抗劑檢定法中，是將多種濃度的化合物分別加到細胞。然後以化合物濃度為函數標繪出螢光訊號曲線以鑑定達到抑制50％辣椒素活化反應時所需的濃度，或IC50。辣椒素受體拮抗劑較佳地具有低於1微摩爾濃度、100納摩爾濃度、10納摩爾體度或1納摩爾濃度的IC50。
於促效劑檢定法中，是將多種濃度的化合物分別加到沒有添加辣椒素的細胞中。作為辣椒素受體促效劑的化合物使用螢光計測量Fluo-4螢光變化時，細胞內鈣濃度會隨VR1增加。EC50，或達到辣椒素活化反應的最高訊號的50％時所需的濃度較佳為低於1微摩爾濃度、低於100納摩爾濃度或低於10納摩爾濃度。
實施例10 測定疼痛舒減所用的動物模型 此實例說明檢定化合物舒減疼痛程度的代表性方法。
A.疼痛舒減檢驗 下列方法可以用來評定疼痛舒減。
機械性異常疼痛(mechanical allodynia) 機械性異常疼痛(對無害性刺激產生的異常反應)基本上是按照Chaplan et al.(1994) J.Neurosci.Methods 5355-63以及Tal andEliav(1998)Pain 64(3)511-518之中所述予以評定。取一系列各具不同剛硬度的von Frey絲線(典型為一系列中有8至14種絲線)以剛好足以彎曲該絲的力量施加到後爪的足底表面。將該絲線保持在此位置不超過3秒鐘或直到該大鼠出現陽性異常疼痛反應為止。陽性異常疼痛反應包括舉起受擾的爪接著立即舐或搖動其爪。採用狄克森上下分析法(Dixon up-down method)決定各絲線的施加順序與頻率。檢驗是從該系列的中等絲線凱始，隨後依向上或向下順序連續施加，分別依開始時所使用的絲線是否出現陰性或陽性反應而定。
若使用此等化合物處理過的大鼠相較於未經處理對照組或經媒劑處理的大鼠需要使用較高剛硬度的凡弗瑞(von Frey)絲線予以刺激才能誘發陽性異常疼痛反應時，則該化合物可有效地逆轉或預防類似機械性異常疼痛的症狀。或者，或除此以外，可在投予化合物之前與之後實施對動物的慢性疼痛檢驗。於此等檢定中，相較於處理之前，或相對於對也具有慢性疼痛但是沒有處理或使用媒劑處理的動物誘導響應所需的絲線，有效的化合物可以在處理之後，誘導反應所需絲線剛度較為增加。試驗化合物是在疼痛發作之前或之後投藥。於在疼痛發作之後投予試驗化合物時，是在投藥之後的10分鐘到3小時實施檢驗。
機械性痛覺過敏 機械性痛覺過敏(一種對疼痛刺激的反應過度)基本上是按照Kochet al.(1996)Analgesia 2(3)157-164中所述予以檢驗。將大鼠放置在具有加溫、穿孔金屬地板的個別隔間籠內。在任一隻後爪足底表面上溫和針刺後，測量後爪抽回的時間期(亦即，動物將其後爪放回地板上之前保持向上舉起之時間)。
若化合物使後爪抽回的時間期有令人滿意的明顯縮短，則該化合物可提供降低機械性痛覺過敏。試驗化合物可在疼痛發作之前或之後投藥。對於在疼痛發作之後投予試驗化合物者，是在投藥之後的10分鐘到3小時實施檢驗。
熱痛覺過敏 熱痛覺過敏(一種對有害熱刺激的反應過度)基本上是按照Hargreaves等人說明於(1988)Pain 32(1)77-88中測量。簡言之，將動物任一隻後爪的足底表面施加恆定的輻射熱源。直到抽回後爪的時間(亦即，動物移動其後爪之前施加熱之時間期)，另外也稱為熱閥值或潛伏期，即決定動物後爪對熱的敏感性。
若化合物使後爪抽回的時間期(亦即，出現反應的熱閥值或潛伏期增長)有令人滿意的明顯增加，則該化合物可降低熱痛覺過敏。試驗化合物可在疼痛發作之前或之後投藥。對於在疼痛發作之後投予化合物者，是在投藥之後的10分鐘到3小時實施檢驗。
B.疼痛模型 疼痛可以經由使用下列任何一種方法予以誘導，以用來檢驗化合物的止痛效力。一般而言，使用雄性SD大鼠和下列至少一種模型時，本發明所提供的化合物可在上述至少一種檢驗方法測定時，使疼痛達令人滿意的明顯減低。
急性發炎疼痛模型 急性發炎疼痛基本上是按照Field等人說明於(1997)Br.J.Pharmacol.121(8)1513-1522中所述使用角叉菜膠模型中予以誘導。將100至200微升的1至2％角叉菜膠溶液注射到大鼠的後爪。於注射後的3至4小時，使用上述方法檢驗動物對熱和機械性刺激的敏感性。於檢驗前，或注射角叉菜膠前，對動物投予試驗化合物(0.01至50毫克/仟克)。該化合物可以經口或任何非經腸途徑，或局部投藥至爪部。在此模型中紓解疼痛的化合物可使機械性異常疼痛及/或熱痛覺過敏有令人滿意的明顯降低。
慢性發炎疼痛模型 使用下列一種方法誘導慢性發炎疼痛 1.基本上是按照Bertorelli等人說明於(1999)Br.J.Pharmacol.128(6)1252-1258的方法，及Stein等人說明於(1998)Pharmacol.Biochem.Behav.31(2)455-51的方法，將200微升完全弗羅因德佐劑(Complete Freund Adjuvant)(0.1毫克經熱殺死且乾燥的結核菌(M.Tuberculosis))注射到大鼠的後爪100微升注射到爪背面，100微升注射到足底表面。
2.基本上按照Abbadie等人說明於(1994)J.Neurosci.14(10)5865-5871的方法，使用150微升的CFA(1.5毫克)注射到大鼠的脛骨跗骨關節。
於任一方法中，在注射CFA之前，先取得各實驗動物後爪對機械性異常疼痛與熱刺激的個別敏感度底限。
於注射CFA後，按照上述檢驗大鼠的熱痛覺過敏、機械性異常疼痛和機械性痛覺過敏。為了確使其發展出症狀，在CFA注射後的第5、6和7天檢驗大鼠。於第7天，使用試驗化合物，嗎啡或媒劑處理動物。以口服劑量為1至5毫克/仟克的嗎啡作為適合的陽性對照組。典型使用的試驗化合物劑量為0.01-至50毫克/仟克。化合物可在檢驗前呈單一大丸劑形式投藥或在檢驗前，每天投藥一次或二次或三次，進行數天。藥物可以經口或任何非經腸途徑，或局部投藥給動物。
其結果以最高可能效力百分比(Percent Maximum PotentialEfficacy)(MPE)表示。0％MPE是經定義為媒劑的止痛效力。100％MPE是經定義為動物恢復注射CFA前的底線敏感度。在此模型中紓解疼痛的化合物所得到的MPE為至少30％。
慢性神經病變性疼痛模型 慢性神經病變性疼痛基本上是按照Bennett and Xie(1988)Pain3387-107中所述使用對大鼠的坐骨神經的慢性收縮傷害(chronicconstriction injury)(CCI)予以誘導。將大鼠麻醉(例如，經腹膜內使用劑量50-至65毫克/仟克的戊巴比妥(pentobarbital)及視需要再增加劑量)。將後肢側面刮毛且消毒。使用無菌技術，在後肢側面上於大腿中部實施切開術。將股二頭肌切成鈍端且暴露出坐骨神經。在每隻動物的其中一隻後肢上，依約1至2毫米的間隔將四條結紮線鬆弛結紮坐骨神經。另一隻後肢沒有將坐骨神經結紮且沒有處理。以連續方式將肌肉閉合且使用傷口夾或縫合線將皮膚縫合。按照上述對該等大鼠評定機械性異常疼痛、機械性痛覺過敏和熱痛覺過敏。
當化合物在此模型中，在即將檢驗前以單一大丸劑形式投藥或在檢驗前，每天投藥一次或二次或三次，進行數天(0.01-至50毫克/仟克，經口、非經腸地或局部地投藥)時，紓解疼痛的化合物可使在機械性異常疼痛、機械性痛覺過敏及/或熱痛覺過敏有令人滿意的明顯降低。
權利要求
1.一種具有下式的化合物
或其醫藥上可接受的鹽，式中
W、Y和Z獨立地為N或CRZ；
RZ於每次出現時獨立地選自氫、滷素、氰基、胺基、C1-C6烷基、滷基C1-C6烷基、C1-C6烷氧基和滷基C1-C6烷氧基；
R3為氫、滷素、氰基、胺基、C1-C4烷基或滷基C1-C4烷基；
Ar1和Ar2為獨立地選自5至10元芳族碳環和雜環，它們每一個帶有0至3個獨立地選自下列的取代基滷素、氰基、硝基和式LRa基團；
L於每次出現時獨立地選自單一共價鍵、O、C(＝O)、OC(＝O)、C(＝O)O、OC(＝O)O、S(O)m、N(Rx)、C(＝O)N(Rx)、N(Rx)C(＝O)、N(Rx)S(O)m。S(O)mN(Rx)、與N[S(O)mRx]S(O)m；其中m每一出現時為獨立地選自0、1和2；且Rx於每次出現時為獨立地選自氫和C1-C8烷基，或Rx與Ra一起形成視需要經取代的4至7元雜環族環；且
Ra於每次出現時為獨立地選自
(i)氫；和
(ii)C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、(C3-C8環烷基)C0-C4烷基、滷基C1-C8烷基、C2-C8烷基醚、單-和二-(C1-C8烷基)胺基、(3至10元雜環)C0-C4烷基以及與Rx一起形成的4至7元雜環基團，它們每一個含有從0至6個獨立地選自下列的取代基(a)羥基、滷素、胺基、胺基羰基、氰基、硝基、氧代、和COOH；和(b)C1-C8烷基、C1-C8烯基、C1-C8炔基、(C3-C8環烷基)C0-C4烷基、C1-C8烷氧基、C1-C8烷硫基、C2-C8烷基醚、C1-C8烷醯基、C3-C8烷酮基、C1-C8烷醯基氧基、C1-C8烷氧基羰基、羥基C1-C8烷基、滷基C1-C8烷基、氰基C1-C8烷基、苯基C0-C8烷基、單-和二-(C1-C6烷基)胺基C0-C8烷基、C1-C8烷
基磺醯基、單-或二-(C1-C8烷基)胺基磺醯基、以及(5至7元雜環)C0-C8烷基。
2.如權利要求1的化合物或其鹽，其中W、Y和Z各為CH。
3.如權利要求1的化合物或其鹽，其中Y為N。
4.如權利要求1的化合物或其鹽，其中Z為N。
5.如權利要求1的化合物或其鹽，其中Y和Z為N。
6.如權利要求1至5任一項的化合物或其鹽，其中Ar1和Ar2為獨立地選自苯基及5至6元芳族雜環，其各經0至3個獨立選自式LRa基團的取代基取代。
7.如權利要求6的化合物或其鹽，其中
Ar1為苯基或吡啶基，它們每一個各經0至2個獨立選自下列的取代基取代滷素、羥基、氰基、胺基、硝基、COOH、單-和二-(C1-C6烷基)胺基、C1-C6烷基、滷基C1-C6烷基、C1-C6烷氧基和滷基C1-C6烷氧基；且
Ar2為苯基或吡啶基，它們每一個各經0至3個獨立選自下列的取代基取代滷素、羥基、氰基、胺基、硝基、單-和二-(C1-C6烷基)胺基、C1-C6烷基、滷基C1-C6烷基、氰基C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、滷基C1-C6烷氧基、C2-C6烷基醚、C1-C6烷醯基、-(SO2)Rd、-N(Rx)S(O)mRd、和-N[S(Om)Rx]S(O)mRd；其中m為1或2，Rx為氫或C1-C6烷基，且Rd為C1-C6烷基、滷基C1-C6烷基、胺基、單-或二-(C1-C6烷基)胺基、或5至10元、N-鍵聯雜環基，每一個Rd是經0至2個獨立選自下列的取代基取代滷素、羥基、氰基、胺基、硝基、單-和二-(C1-C6烷基)胺基、C1-C4烷基、滷基C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、和滷基C1-C4烷氧基。
8.如權利要求7的化合物或其鹽，其中
Ar1為吡啶基，未經取代者或經滷素、氰基、COOH、C1-C4烷基或滷基C1-C4烷基所取代；且
Ar2為苯基或吡啶基，它們經0至3個獨立選自下列的取代基取代滷素、氰基、C1-C4烷基、氰基C1-C4烷基、滷基C1-C4烷基、C2-C6烷基醚、和式-(SO2)Rd基團，其中Rd為C1-C4烷基或滷基C1-C4烷基。
9.如權利要求7的化合物或其鹽，其中
Ar1為苯基，未經取代者或經滷素、氰基、COOH、C1-C4烷基或滷基C1-C4烷基所取代；且
Ar2為苯基或吡啶基，它們經0至2個獨立選自下列的取代基取代滷素、C1-C4烷基、氰基C1-C4烷基、滷基C1-C4烷基、C2-C6烷基醚、和式-(SO2)Rd基團，其中Rd為C1-C4烷基或滷基C1-C4烷基。
10.如權利要求7的化合物或其鹽，其中
Ar1為吡啶-2-基、3-甲基-吡啶-2-基、3-三氟甲基-吡啶-2-基、或3-滷基-吡啶-2-基；且
Ar2為苯基，吡啶-2-基或吡啶-3-基，它們每一個各在對位帶有下列取代基滷素、氰基、甲基、乙基、丙基、異丙基、叔丁基、三氟甲基、2，2，2-三氟乙基、2，2，2-三氟-1-甲基-乙基、甲烷磺醯基、乙烷磺醯基、丙烷磺醯基、丙烷-2-磺醯基、三氟甲烷磺醯基、或2，2，2-三氟乙烷磺醯基。
11.如權利要求7的化合物或其鹽，其中
Ar1為苯基，2-甲基-苯基、2-三氟甲基-苯基、或2-滷基-苯基；且
Ar2為苯基，吡啶-2-基或吡啶-3-基，它們每一個各在對位帶有下列取代基滷素、氰基、甲基、乙基、丙基、異丙基、叔丁基、三氟甲基、2，2，2-三氟乙基、或2，2，2-三氟-1-甲基-乙基。
12.如權利要求1至11任一項的化合物或其鹽，其中R3為氫或甲基。
13.如權利要求12的化合物或其鹽，其中R3為氫。
14.如權利要求1的化合物或其鹽，其中該化合物具有下式
式中
A、B、Y和Z獨立地為N或CH；
R4代表0、1或2個獨立地選自下列的取代基滷素、羥基、氰基、胺基、硝基、COOH、單-和二-(C1-C6烷基)胺基、C1-C6烷基、滷基C1-C6烷基、C1-C6烷氧基和滷基C1-C6烷氧基；且
R5代表0、1、2或3個獨立地選自下列的取代基滷素、氰基、C1-C4烷基、氰基C1-C4烷基、滷基C1-C4烷基、C2-C6烷基醚和式-(SO2)Rd基團，其中Rd為C1-C4烷基或滷基C1-C4烷基。
15.如權利要求14的化合物或其鹽，其中
R4代表1個或2個獨立地選自下列的取代基滷素、氰基、COOH、C1-C6烷基和滷基C1-C6烷基；且
R5代表1、2或3個獨立地選自下列的取代基滷素、氰基、C1-C4烷基、氰基C1-C4烷基、滷基C1-C4烷基、C2-C6烷基醚和式-(SO2)Rd基團，其中Rd為C1-C4烷基或滷基C1-C4烷基。
16.如權利要求14的化合物或其鹽，其中該化合物具有下式
式中
R1為滷素、氰基、C1-C4烷基或滷基C1-C4烷基；
R2為滷素、氰基、C1-C4烷基、氰基C1-C4烷基、滷基C1-C4烷基、C2-C6烷基醚或式-(SO2)Rd基團，其中Rd為C1-C4烷基或滷基C1-C4烷基；
R4a為不存在或代表1個選自下列的取代基滷素、氰基、COOH、C1-C5烷基和滷基C1-C6烷基；且
R5a為不存在或代表1個選自下列的取代基滷素、氰基、C1-C4烷基、氰基C1-C4烷基、滷基C1-C4烷基和C2-C6烷基。
17.如權利要求16的化合物或其鹽，其中R4a和R5a兩者都不存在。
18.如權利要求17的化合物或其鹽，其中
R1為滷素、甲基和三氟甲基；且
R2為滷素、氰基、甲基、乙基、丙基、異丙基、叔丁基、三氟甲基、2，2，2-三氟乙基或2，2，2-三氟-1-甲基-乙基。
19.如權利要求1至18任一項的化合物或其鹽，其中該化合物在辣椒素受體促效作用的活體外檢定中不顯現可檢測的促效劑活性。
20.如權利要求1至19任一項的化合物或其鹽，其中該化合物在辣椒素受體鈣移動性檢定法中的IC50值為1微摩爾濃度或更低。
21.如權利要求20的化合物或其鹽，其中該化合物在辣椒素受體鈣移動性檢定法中的IC50值為100納摩爾濃度或更低。
22.如權利要求21的化合物或其鹽，其中該化合物在辣椒素受體鈣移動性檢定法中的IC50值為10納摩爾濃度或更低。
23.一種藥物組合物，其包含至少一種如權利要求1至22任一項的化合物或其鹽與生理學上可接受的載劑或賦形劑的組合。
24.一種降低細胞辣椒素受體的鈣傳導性的方法，其包括令表達辣椒素受體的細胞與至少一種如權利要求1至22中任一項的化合物或其鹽接觸，藉此降低該辣椒素受體的鈣傳導性。
25.如權利要求24的方法，其中該細胞在動物體進行活體內接觸。
26.如權利要求25的方法，其中該細胞為神經細胞。
27.如權利要求25的方法，其中該細胞為膀胱上皮細胞。
28.如權利要求25的方法，其中在接觸期間，該化合物存在於該動物體液中。
29.如權利要求25的方法，其中該化合物在動物血液中的濃度為1微摩爾濃度或更低。
30.如權利要求25的方法，其中該動物為人類。
31.如權利要求25的方法，其中該化合物經口投藥。
32.一種於活體外抑制類香草醇配體與辣椒素受體結合的方法，該方法包括將辣椒素受體與至少一種如權利要求1至22任一項的化合物或其鹽在足以可檢測地抑制類香草醇配體與辣椒素受體結合的條件和用量下接觸。
33.一種在患者體內抑制類香草醇配體與辣椒素受體結合的方法，該方法包括將表達該辣椒素受體的細胞與至少一種如權利要求1至22任一項的化合物或其鹽於足以在活體外可檢測地抑制類香草醇配體與表達經克隆的辣椒素受體的細胞結合的用量下接觸，藉此抑制該患者體內類香草醇配體與辣椒素受體的結合。
34.如權利要求33的方法，其中該患者為人類。
35.如權利要求33的方法，其中該化合物在患者血液中的濃度為1微摩爾濃度或更低。
36.一種為患者治療對辣椒素受體調節作用有反應的病症的方法，該方法包括對患者投予治療有效量的如權利要求1至22任一項的至少一種化合物或其鹽，藉此減輕該患者的病症。
37.如權利要求36的方法，其中該患者患有(i)暴露於辣椒素，(ii)因暴露於熱所引起的灼傷或刺激，(iii)因暴露於光所引起灼傷或刺激，(iv)因暴露於催淚氣體、傳染物、空氣汙染物或胡椒噴霧所引起的灼傷、支氣管收縮或刺激，或(v)因暴露於酸所引起的灼傷或刺激。
38.如權利要求36的方法，其中該病症為哮喘或慢性阻塞性肺病。
39.一種治療患者疼痛的方法，該方法包括對患有疼痛的患者投予治療有效量的如權利要求1至22任一項的至少一種化合物或其鹽，藉此減輕該患者的疼痛。
40.如權利要求39的方法，其中該化合物於患者血液中的濃度為1微摩爾濃度或更低。
41.如權利要求39的方法，其中該患者患有神經病變性疼痛。
42.如權利要求39的方法，其中該疼痛與選自下列的病症相關聯乳房切除手術後的疼痛症候群、殘肢疼痛、幻肢疼痛、口腔神經病變性疼痛、牙痛、皰疹後神經痛、糖尿病性神經病變、反射性交感神經性營養障礙、三叉神經痛、骨關節炎、類風溼關節炎、纖維肌痛、格林—巴利症候群、感覺異常性股痛、口腔灼熱症候群、兩側周邊神經病變、灼痛、神經炎，神經元炎(neuronitis)，神經痛、AIDS相關神經病變、MS相關神經病變、脊髓損傷相關疼痛、手術相關的疼痛、肌肉骨骼疼痛、背痛、頭痛、偏頭痛、咽痛、分娩疼痛、痔瘡疼痛、消化不良、夏科氏疼痛(Charcot’s pain)、腸脹氣疼痛、月經疼痛、癌症、暴露到毒液、刺激性腸部症候群、炎性腸部疾病以及創傷。
43.如權利要求39的方法，其中該患者為人類。
44.一種治療一患者的搔癢的方法，該方法包括給該患者服用治療上有效量的至少一種如權利要求1至22任一項的化合物或其鹽，藉此減輕該患者的搔癢。
45.一種治療患者咳嗽或呃逆的方法，該方法包括對該患者投予治療有效量的如權利要求1至22任一項的化合物或其鹽，藉此減輕該患者的咳嗽或呃逆。
46.一種治療患者的尿失禁或膀胱過動症的方法，該方法包括對該患者投予治療有效量如權利要求1至22任一項的化合物或其鹽，藉此減輕該患者的尿失禁或膀胱過動症。
47.一種促進肥胖患者減輕體重的方法，該方法包括對該患者投予治療有效量如權利要求1至22任一項的化合物或其鹽，藉此促進該患者減輕體重。
48.如權利要求1的化合物或其鹽，其中該化合物或其鹽經放射標記。
49.一種測定樣品中辣椒素受體是否存在的方法，其包括下列步驟
(a)使樣品與如權利要求1至22任一項的化合物或其鹽在允許該化合物與辣椒素受體結合的條件下接觸；及
(b)檢測結合到辣椒素受體的化合物的含量的訊號指示，且從該訊號指示中測定出該樣品中辣椒素受體的存在與否。
50.如權利要求49的方法，其中該化合物是如權利要求48的經放射標記的化合物，且其中該檢測步驟包括下列步驟
(i)從經結合的化合物中分離未結合的化合物；及
(ii)檢測樣品中經結合的放射標記物的存在與否。
51.一種經包裝的醫藥製劑，其包含
(a)在容器內的如權利要求23的藥物組合物；與
(b)使用該組合物治療疼痛的說明書。
52.一種經包裝的醫藥製劑，其包含
(a)在容器內的如權利要求23的藥物組合物；與
(b)使用該組合物治療咳嗽或呃逆的說明書。
53.一種經包裝的醫藥製劑，其包含
(a)在容器內的如權利要求23的藥物組合物；與
(b)使用該組合物治療肥胖症的說明書。
54.一種經包裝的醫藥製劑，其包含
(a)在容器內的如權利要求23的藥物組合物；與
(b)使用該組合物治療尿失禁或膀胱過動症的說明書。
55.如權利要求1至22任一項的化合物或其鹽在製造用於治療對辣椒素受體調節有反應的病症中的用途。
56.如權利要求55的用途，其中該病症為疼痛；哮喘；慢性阻塞性肺病；咳嗽；呃逆；肥胖症；尿失禁；膀胱過動症；暴露於辣椒素；因暴露於熱所致的灼傷或刺激；因暴露於光所致的灼傷或刺激；因暴露於催淚氣體、感染劑、空氣汙染物或胡椒噴霧所致的灼傷、支氣管收縮或刺激；或因暴露於酸所致的灼傷或刺激。
全文摘要
本發明提供式(I)的經取代∴啉－4－基胺，其中變量皆為本文中所述及者。此等化合物可用來在活體內(invivo)或活體外(in vitro)調節特定受體的活性的配體，且特別有利於治療人類、馴養陪伴動物和家畜動物與病理上受體活化相關聯的狀況。此外，也提供藥物組合物與使用此等化合物來治療此等疾病的方法，是為使用此等配體進行受體定位研究的方法。
文檔編號A61K31/4985GK1964717SQ200580018689
公開日2007年5月16日 申請日期2005年4月8日 優先權日2004年4月8日
發明者K·J·霍傑茨 申請人:神經能質公司