曲古抑菌素a衍生物及其製備方法和用途的製作方法

2023-10-17 13:49:14 4

專利名稱：曲古抑菌素a衍生物及其製備方法和用途的製作方法
技術領域：
本發明涉及曲古抑菌素A衍生物及其製備方法，還涉及因所述曲 古抑菌素A衍生物具有組蛋白去乙醯化酶抑制活性而作為抗腫瘤藥物的用途。
背景技術：
核心組蛋白的乙醯化和去乙醯化.與基因調控密切相關，負責組蛋 白乙醯化和去乙醯化的是一對功能相互拮抗的酶即組蛋白乙醯轉移酶 (HAT)和組蛋白去乙醯化酶(HDAC)。 HAT可乙醯化組蛋白末端鹼 性胺基酸即賴氨酸的氨基，舒展核小體結構，激活基因轉錄。與HAT 的功能相反，HDAC抑制基因轉錄。HAT和HDAC的動態平衡控制著 染色體的結構和基因的表達。HDAC作為調控基因的關鍵蛋白酶，其 功能異常被證實與腫瘤的發生和發展有直接的關係。當HDAC過度表 達並被轉錄因子募集時，就會抑制某些基因的正常表達，從而導致腫 瘤和其他疾病。近年的研究結果顯示，抑制HDAC的活性可抑制腫瘤 細胞的生長並且i秀導腫瘤細胞的分化，從而在一些腫瘤中產生抗癌效 應，所以組蛋白去乙醯化酶被認為是最具潛力的癌症治療藥物的靶點 之一。目前，雖然有部分HDAC抑制劑已進入臨床研究，但現 有的HDAC抑制劑存在著諸如體內代謝穩定性差和特異性差 等問題，因此，迫切需要開發出具有更強抗癌作用以及更為穩定的組 蛋白去乙醯化酶抑制劑。曲古抑菌素A (Trichostotin A， TSA)是一種自吸溼鏈黴菌屬分離得到的具有抗菌活性的天然產物。研究表明，曲古抑菌素A具有抑制細 胞增殖，誘導細胞分化與凋亡(Yoshida， Cancer Res.， 1987， 47， 3688-3691 )，阻滯細胞周期(Yoshida, Exp. Cell Res" 1988, 177, 122-131 ) 等多種作用，對此作用的機理研究最終確認曲古抑菌素A為強效組蛋 白去乙醯4匕酶4中製劑(Yoshida, J. Biol. Chem.， 1990, 265， 17174 )。雖然 曲古抑菌素A具有很高的體外組蛋白去乙醯化酶抑制活性(ICso為幾 納摩爾)，但其體內代謝不穩定性導致其失去了臨床應用的可能，有關 TSA類似物的合成及生物活性研究已有一些文獻報導，由於TSA含有 一個和羰基相鄰的手性中心，其合成具有相當大的難度，目前報導的 TSA衍生物大多是一些TSA的結構簡化物，和母體化合物TSA相比， 簡化後的衍生物的活性有較大程度的下降。因此開發新的曲古抑菌素A 衍生物作為針對HDAC為靶點的新型抗胂瘤藥物有著極大的應用前 景。發明內容本發明的目的是提供具有良好的組蛋白去乙醯化酶抑制活性與癌 細胞增殖抑制作用的新穎的曲古抑菌素A衍生物，為尋找新型抗腫瘤 藥物開闢新的途徑。本發明的另一目的在於提供所述曲古抑菌素A衍 生物的製備方法。本發明的還一目的是提供所述曲古抑菌素A衍生物 在製備抗腫瘤藥物中的用途。曲古抑菌素A結構如下:本發明所述曲古抑菌素A^f汙生物的具體結構可由以下通式(I)表formula see original document page 10(I)其中，R4和R2相同或不同，為H、 C1 C5直鏈或支鏈烷基、取代或 未取代的C3 ~ C6環烷基、取代或未取代的芳香基、取代或未取代的芳 香烷基或R,和R2與鄰接的N原子相連成取代或未取代的含氮飽和雜 環基，即-NR,R2;Ra與Rb相同或不同，為H、 C1 C3直鏈或支鏈烷基，優選Ra與Rb 其中一個為H，另一個為C1 C3直鏈或支鏈烷基；R3為H、 C1~C3直鏈或支鏈烷基。本發明的C1 C5直鏈或支鏈烷基，可以列舉例如甲基、乙基、 正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、新戊 基等。C3 C6環烷基，可以列舉例如環丙基、環丁基、環戊基、環 己基等。芳香基與芳香烷基可以列舉例如苯基，千基等。C3 C6環 烷基、芳香基與芳香烷基可帶有1 ~2個取代基，取代基可以列舉例如: 烷基，烷氧基、羥基、面素等。作為R,和R2與鄰接的氮原子相連形成 的雜環，可以列舉例如吡咯烷環、哌啶環、嗎啡啉環、哌n秦環等。優選的化合物是(R，2E，4E ) -7- ( 4-氨基苯基)->^羥基-4，6-二曱基-7-氧代-2，4-二烯庚醯 胺(TA-1 );(R，2E,4E) -7- (4- (二乙氨基)苯基)->^-羥基-4，6-二甲基-7-氧代-2,4-二烯庚醯胺(TA-2 );(R，2E,4E) -7- (4- (二丙氨基)苯基)-1^-羥基-4，6-二曱基-7-氧代-2，4-二烯庚醯胺(TA-3 );(R,2E,4E ) -7- ( 4- ( 二丁絲)苯基)-1^羥基-4,6-二甲基-7-氧代-2,4-二烯庚醯胺(TA-4 );(R，2E，4E) -7- (4- (N, N-二 (4-曱氧基千基)苯基)-N-羥基 -4，6-二甲基-7-氧代-2，4-二烯庚醯胺(TA-5);(R，2E，4E) -7- (4-(甲基M)苯基)-N-羥基-4，6-二曱基-7-氧代-2，4-二烯庚醯胺 (TA-6);(艮2E，4E ) -7- ( 4-(異丙基氨基)苯基)-N-羥基-4，6-二曱基-7-氧代-2，4-二烯庚醯胺(TA-7 );(K2E，4E) -7- (4-(異丁基絲)苯基).N-羥基-4，6-二甲基-7-氧代-2，4-二烯庚醯胺 (TA-8 );(R,2E，4E ) -7- ( 4-(苄基氨基)苯基)-^羥基-4，6-二曱基-7-氧代-2，4-二烯庚醯胺(TA-9 );(R，2E，4E) -7- (4- (N- (4-甲氧基爺基)氨基)苯基)-N-羥基-4，6-二甲基-7-氧代-2，4-二烯庚醯胺(TA-10);(艮2E,4E) -7- (4-(環戊基氨基)苯基)-N-羥基4,6-二曱基-7-氧代-2,4-二烯庚醯胺(TA-11);(R，2E，4E ) -7- ( 4-(環己基M)苯基)-N-羥基-4，6-二曱基-7-氧代-2,4-二烯庚跣胺(TA-12);(R,2E，4E ) ->!-羥基-4，6-二甲基-7-氧代-7- ( 4- ( 1-吡咯烷基)苯基)-2,4-二烯庚醯胺(TA-13);(R，2E，4E) -1^-羥基-4，6-二甲基-7-氧代-7- (4- ( l-哌咬基)苯基)-2，4-二烯庚醯胺(TA-14);(R,2E，4E ) -6- ( 4- ( 二曱氨基)苯曱醯基)->!-羥基-4-甲基-2，4-二烯辛 醯胺(TA-15);(2E,4E) -7- (4- (二曱氨基)苯基)-1^羥基-4,6，6-三甲基-7-氧代-2，4-二烯庚醯胺(TA-16);(R，2E，4E) -7- (4- (二曱氨基)笨基)->1-羥基-6-曱基-7-氧代-2，4-二 烯庚醯胺(TA-17)。本發明還提供上述通式(I )所表示化合物的製備方法，其中方 法一為首先通過以下流程製備中間體XI:RaHCHORbOMD或L-脯氨酸02NCHOPh3P~ Ra Rb R3XRaH對硝基笨甲醛與不同的醛 CHO在D型或L型脯氨酸的催化下進行羥 醛縮合反應得到化合物VI;化合物VI經維悌希(Wittig)反應生成化合物VII;化合物VD經DIBAL-H (二異丁基氫化鋁)還原和二氧化錳氧化 連續兩步反應得到化合物K;化合物IX與再經過一步wittig反應得到化 合物X;化合物X在林德拉催化劑下催化氬化得到中間體XI (中間體 XI製備可參考專利申請申請號200510030149.5 )以上合成路線中，Ra、 Rb和Rs定義如前。M為氫原子或常用的 羥基保護基，在製備過程中，可在各中間體階段根據需要用適當的保 護基取代該羥基，然後根據需要除去保護基，即可獲得所需的化合物。 作為羥基保護基，可以列舉Greene和Wuts著的"Protective Groups in Organic Synthesis (有機合成中的保護基)"中記載的羥基保護基，如， 烷基矽烷類(例如叔丁基二曱基矽烷等)、烷醯基類(例如乙醯基等)。 可根據反應條件適當使用這些保護基。化合物XI與醛或酮在三乙醯氧基硼氫化鈉的作用下進行還原氨化 反應，可得到化合物Xfl，在室溫下，以四氬呋喃或l, 2-二氯乙烷為溶 劑進4亍反應。^^C02Et醛或酮NaBH(OAc)3 R其中，Ra、 Rb、 R3和M定義如前，當R!和R2相同，為C1 C5 直鏈或支鏈烷基、取代或未取代的C3 ~ C6環烷基、取代或未取代的芳 香基、取代或未取代的芳香烷基時，相對於1摩爾化合物XI,使用2 10 摩爾醛或酮(優選3 5摩爾)和2 10摩爾三乙醯氧基硼氫化鈉(優 選3 5摩爾)。當R,和R2其中一個為氫，另一個為C1-C5直鏈或支鏈烷基、取 代或未取代的C3 ~ C6環烷基、取代或未取代的芳香基、取代或未取代 的芳香烷基時，相對於1摩爾化合物XI，使用1~1.5摩爾餒或酮(優 選1 - 1.2摩爾)和1 ~ 1.5摩爾三乙醯氧基硼氫化鈉(優選1 ~ 1.2摩爾)。化合物Xfl進一步氨解，得到羥肟酸化合物，該化合物被氧化得到 通式(I )所表示化合物。NHOHNHOHR2，氣應以鹽酸雍胺為原料，在室溫下，以甲醇為溶劑進行反應。氧化反應所用氧化劑為2，3-二氯-5,6-二氰基對苯二醌(DDQ),在室溫14下，以二氧六環為溶劑進行反應。方法二首先通過以下流程製備中間體F除由化合物A製備化合物B時採用對溴苯曱醛為原料外，各步驟 反應採用與方法一中由化合物V製備化合物X相同的步驟進行。中間體F與環狀烷胺或取代環烷胺在4巴催化劑催化下及鹼的作用 下通過偶聯反應生成化合物Gformula see original document page 15該偶聯反應所用的鹼可列舉曱醇鈉、叔丁醇鈉、叔丁醇鉀、碳酸 鉀、碳酸銫、DBU ( 1，8-二氮雙環[5.4.0]十一烯-7)、 DABCO ( 1，4-二氮頁雜雙環[2.2.2]辛烷)等。反應所用溶劑只要為一般偶聯反應所用的溶劑 即可，並無特別限制，例如甲苯、四氬呋喃等。可在室溫下或加熱下 進行，優選在70 110。C加熱下進行反應。其中，Ra、 Rb、 R3和M定義如前，R,和R2與鄰#"的N原子相連 成取代或未取代的含氮飽和雜環基，即-NR，R2;反應所用鈀催化劑可使用常見的鈀催化劑，例如Pd(OAc)2 (醋酸 把)、Pd(PPh3)4 (四三苯基膦合4巴)、Pd2(dba)3 (三(二亞苄基丙酮)二鈀) 等。所用配體可列舉以下化合物1和2等，接著，化合物G先後經過與方法一相同的氨解、氧化反應得到通 式(I )所表示化合物。由本發明上述方法一和二製備的通式(I )所表示的化合物，在 細胞毒實驗中發現對腫瘤細胞抹有強烈的抑制作用，這類新化合物具 有抗肺瘤作用，可在製備預防和治療腫瘤藥物中應用。


圖1為試驗實施例2中通過HDAC螢光檢測/藥物篩選試劑盒 (HDAC Fluorimeteic Assay/Drug Discovery Kit)檢測的活性化合物對 HDAC的抑制作用；Ip—t16圖2為試驗實施例2中TA-15對乙醯化組蛋白H3、乙醯化組蛋白 H4和p21蛋白的表達的影響；圖3為試-瞼實施例2中TA-15對結腸癌細胞HCT-116和HT-29 細胞周期相關蛋白的影響。
具體實施方式
在下列實施例中將更具體地說a月本發明的一些有代表性的式(I) 的曲古抑菌素A衍生物及其製備方法。實施例1: ( R,2E，4E ) -7- ( 4-氨基苯基)_:^-羥基-4，6-二甲基-7-氧代-2,4-二烯庚醯胺(TA-1 )的製備A:中間體(2E，4E6R,7R)-7-(4-氨基苯基)-7-羥基-4， 6-二甲基-2,4-二烯庚酸乙酯的制W其製備可參考專利申請申請號200510030149.5)(1) 將1.51g對硝基苯甲醛溶於35ml DMF中，加入230mg L-脯氨 酸，然後加入1.44ml丙醛，室溫攪拌7小時。加入100ml水，乙酸乙 酯提取三次，合併有機層，硫酸鎂乾燥，過濾，將濾液濃縮，得到的 粗產物，直接投入下一步。(2) 將上步得到的粗產物溶於30ml二氯甲烷，加入9.6g wittig試 劑Ph3P=C(CH3)C02Me，加熱回流12小時，蒸乾溶劑，矽膠柱層析(乙 酸乙酯/石油醚-l/2(V/V))，得到2.67g如下結構的化合物，兩步產率 96%。(3)將2.19g上步得到的化合物溶於無水30mlTHF中，冷至-78。C， 10分鐘內滴加1M的DIBAL-H的溶液19ml,滴畢繼續攪拌15分鐘， 加入飽和酒石酸鈉鉀溶液，升至室溫，繼續攪拌6小時，加入乙酸乙 酯萃取，有機層用硫酸鎂乾燥濃縮得到粗產物；將此粗產物溶於二氯 曱烷25ml，加入5.4g活性二氧化錳，室溫攪拌30分鐘，過濾，濾液 濃縮得到黃色油狀粗產物，將粗產物用矽膠柱層析(乙酸乙酯/石油醚 =1/3(V/V))，得到1.27g具有如下結構的化合物，兩步產率65%。(4) 60%NaH 200rng懸浮於5ml乾燥的THF，滴加1.35ml膦醯基 乙酸三乙酯，滴畢攪拌10分鐘,將500mg步驟(3 )的產物溶於15mlTHF 溶液，然後將此溶液滴加入上述NaH與膦醯基乙酸三乙酯的反應液中， 滴畢繼續攪拌30分鐘，加入水，用乙酸乙酯萃取，有機層用硫酸鎂幹 燥濃縮，將粗產物用矽膠柱層析(乙酸乙酯/石油醚=1/5 (V/V)),得到 601mg具有如下結構的化合物，產率89%。(5)將上步得到的化合物600mg溶於18ml甲醇，加入910mg林德 拉催化劑及42(Hil喹啉，常溫常壓下用氫氣催化氫化20小時，過濾除 去催化劑，濾液濃縮後用矽膠柱層析(乙酸乙酯/石油醚=1/2 (V/V)), 得到具有如下結構的化合物。'H-NMR (CD3OD， 300Hz, Sppm): 5 7,35 (1H， dd， J-15.6, 0.9Hz)， 7.11 (2H， d， J-8.4Hz)， 6.67 (2H， d， J=8.4Hz), 5.84 (1H, d， J=9.6Hz), 5.81(1H, d, J=15.6Hz)， 4.36 (1H， d， J-7.5Hz), 4.21 (2H， q， J-7.2Hz), 2.84 (1H: m)， 1.77(3H, d， J-1.2Hz)， 1.30 (3H， t， J-7.2Hz), 0.86 (3H， d， J=6.9Hz);B:將10mg (2E， 4E 6R, 7R)-7-(4-樣苯基)-7-羥基-4， 6-二甲基-2，4-二烯庚酸乙酯溶於0.2ml甲醇，加入0.5ml 1.5M的NH20H MeOH溶液， 氬氣保護下室溫攪拌2小時，向反應液加入飽和NaHC03溶液，加入 乙酸乙酯萃取，合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，將濾液濃縮 得到粗產物14mg;將此粗產物溶於lml二氧六環，另將10mgDDQ溶 解於0.5ml 二氧六環中，將此溶液滴加入上述淨且產物的二氧六環溶液 中，TLC (薄層層析)跟蹤至反應完全，將反應液過濾，濾液濃縮後 矽膠柱層析(洗脫劑二氯曱烷/甲醇=10/1 (V/V))純化產品，得到 1.8mg (兩步產率20%)具有如下結構的化合物。- NMR ( CD3OD, 300Hz, Sppm): d-7.71 (2H， d, J=8.7Hz)， 7.14 (1H， d, J=15.3Hz)， 6.61 (2H， d， J=8.7Hz), 5.88 (1H， d, J=9.0Hz), 5.80 (1H， d, J-15.3 Hz)， 4.41 (1H, m)， l.即H, s)， L25(3H， d， J=6.9Hz)o 9實施例2: (R，2E，4E) -7- (4- ( 二乙氨基)苯基)->1-羥基-4，6-二曱基-7-氧代-2，4-二烯庚醯胺(TA-2)的製備A:將I50mg實施例1中A部分製得的中間體(2E， 4E 6R, 7R)-7-(4-氨基苯基)-7-羥基-4，6-二曱基-2，4-二烯庚酸乙酯溶於5ml四氫呋喃，加入685mg的40%乙醛水溶液(3eq.),室溫攪拌10分鐘後加入530mg 三乙醯氧基硼氬化鈉，繼續室溫攪拌10小時後，加入飽和NaHC03溶 液，加入乙酸乙酯萃取，合併有機相。將有機相用飽和食鹽水洗滌， 無水硫酸鎂千燥，過濾，將濾液濃縮。殘餘物用矽膠柱層析純化(乙 酸乙酯/石油醚=1/5 (V/V)),得到148mg (2E，4E,6R，7R)-(4-(二乙氨基) 苯基)-7-羥基-4，6-二甲基-2，4-二烯庚酸乙酯(收率83% )。B:將上步所得到的產物以與實施例1中B部分相同條件的氨解， 氧化反應得到79mg (兩步產率56%)具有如下結構的標題化合物。'H-NMR (CD3OD: CDC13=5: 1, 300他，Sppm): d=7.72 (2H， d, J=9.0Hz)， 7.11 (1H， d， J=14.7Hz)， 6.52 (2H, d， J=9.0Hz), 5.86 (1H, d， J=9.3Hz)，5.67 (1H， d， J=14.7Hz)， 4.28 (1H， m)， 3.31(4H， q， J=4.8Hz), L79(3H， s)， U9(3H，d， J=6.9Hz), U0(6H， t， J-4.8Hz)實施例3: ( R，2E，4E ) -7- ( 4- ( 二丙絲)苯基)-1^-羥基-4，6-二甲基-7-氧代-2，4-二烯庚醯胺(TA-3)的製備操作同實施例2，用丙醛代替乙醛，得到具有如下結構的標題化合物。'H-NMR (CD3OD: CDC13=5: 1， 300Hz， Sppm): d=7.68 (2H, d， J=9.3Hz)， 7.07 (1H， d， J=15.6Hz)， 6.49 (2H， d, J=9.3Hz)， 5.82 (1H， d， J-10.2HzP.66 (1H， d， J=15,6Hz)， 4.26 (1H， m), 3.22(4H， t， J=7.2Hz)， L77(3H， s)， L50(4H， m)， L17(3H， d， J=6.6Hz), 0.82(6H， t， J=7.2Hz)實施例4: (R，2E,犯)-7- ( 4- ( 二丁綠)苯基)->}-羥基-4，6-二甲基-7-氧代-2,4-二烯庚醯胺(TA-4)的製備搡作同實施例2，用丁醛代替乙醛，得到具有如下結構的標題化合物。!H-NMR (CD3OD: CDC13=5: 1, 300他，Sppm): d=7.81 (2H, d， J=9.3Hz), 7.20 (1H, d， J=15.6Hz), 6.58 (2H, d, J=9.3Hz), 5.97 (1H， d， J=9.3Hz)，5.79 (1H， d， J=15.6Hz)， 4.38 (1H, m)， 3.36 (4H, t， J=7.8Hz)， L91(3H, s)， 1.61 (4H， m), 1.40 (4H， q, J=7,2Hz)， 1.30 (3H， d, J=6.9Hz), 0.97 (6H， t， J=7.2Hz)實施例5: (R，2E,4E) -7- (4- (N, N-二 (4-甲氧基千基)氨基)苯基) 一N-羥基-4，6-二曱基-7-氧代-2，4-二埽庚醯胺(TA-5)的製備操作同實施例2,用10叫4-甲軋基苯甲醛代替3eq.乙醛，使用lOeq.三乙醯氧基硼氬化鈉，得到具有如下結構的標題化合物。'H-NMR (CD3OD: CDC1產5: 1, 300Hz, 5ppm): d=7.63 (2H, d, J=9.0Hz)， 7.14 (4H， d， J=6.6Hz)， 7.09 (4H， d， J=6.6Hz)， 6.46 (2H， d， J-15.6Hz)， 5.80 (1H， d， J-9.0他)，5.65 (1H， d， J=15.6Hz)， 4.26 (2H， s) 4.23(1H, m)， 4.19 (2H， s), 3.68 (3H， s)， 3.57 (3H, s)， 1.72(3H， s)， U4(3H， d: J-6.0Hz)實施例6: (R，2E，4E) -7- (4-(曱基^)苯基)-1^-羥基-4，6-二曱基-7-氧代-2,4-二烯庚醯胺(TA-6)的製備操作同實施例2，用1.2eq.甲醛代替3eq.乙醛，使用1.2eq.三乙醯 氧基硼氬化鈉，得到具有如下結構的標題化合物。'H-NMR (CD3OD: CDC13=5: 1, 300Hz, 5ppm): d-7.64 (2H， d， J=9.6Hz), 7.02 (1H， d， J=15.3Hz)， 6.38 (2H， d, J=9.6Hz)， 5.80 (1H， d， J-9.0Hz),5.75 (1H， d, J=15.3Hz), 4.25 (IH， m)， 2.67(3H， s), 1.71(1H， s), L11(3H， d， J=6.9Hz)實施例7: (R，2E，4E) -7- (4-(異丙基氨基)苯基)-N-羥基-4，6-二甲 基-7-氧代-2，4-二烯庚醯胺(TA-7)的製備操作同實施例2，用1.5叫.丙酮代替3eq.乙醛，使用1.5叫.三乙醯 氧基硼氯化鈉，得到具有如下結構的標題化合物。'H-NMR (CD3OD: CDC13=5: 1, 300Hz， Sppm): d=7.67 (2H, d,22J=9.0Hz), 7.10 (1H， d，河5.3Hz)， 6.42 (2H， d， J=9.0Hz), 5.85 (1H, d: J=9.0Hz)，5,67 (1H， d， J=15.3Hz)， 4.26 (IH， m),3.63 (1H, m)， 1.78 (3H， s): U8 (3H， d, J=6.9 Hz), 1.12 (6H, d, J=6.9Hz)實施例8: (R，2E,4E) -7- (4-(異丁基氨基)苯基)-N-羥基-4,6-二甲 基-7-氧代-2，4-二烯庚醯胺(TA-8)的製備操作同實施例2，用1.5eq.異丁醛代替3eq.乙醛，使用1.5eq.三乙 醯氧基鄰氫化鈉，得到具有如下結構的標題化合物。!H-NMR (CD3OD: CDC13=5: 1, 300Hz, 5ppm): d=7.77 (2H, d, J=6.0Hz)， 7.16 (1H， d， J=14.7Hz), 6.58 (2H, d, J=6.0Hz)， 5.83 (IH, d， J=6.3Hz)，5.67 (1H， d， J=14.7Hz)， 4.51 (IH， m)，2.% (2H, d， J=6.0Hz)， 2.00 (3H, s)， 1.96 (IH, m)， 1.25 (3H, d， J=6.3Hz), 0.96 (6H， d, J=6.0Hz)實施例9: (R，2E，4E) -7- (4-(爺基氨基)苯基)-^[-羥基-4，6-二甲基-7-氧代-2，4-二烯庚醯胺(TA-9)的製備操作同實施例2，用1.5eq.苯甲醛代替3eq.乙醛，使用1.5eq.三乙 醯氣基硼氳化鈉，得到具有如下結構的標題化合物。'H-NMR (CD3OD: CDC13=5: 1， 300他，5ppm): d=7.77 (2H， d，J=6.9Hz)， 7.34 (5H，m) 7.19 (1H， d， J=15.3ttz)， 6.60 (2H， d, J=6.9Hz)， 5.95 (1H， d， J=9.9Hz)，5.78 (1H， d， J=15.3Hz)， 4.40 (2H, s)， 4.37 (1H， m), L89(3H， s)， L29(3H， d, J=6.9Hz)formula see original document page 24實施例10: (R，2E,4E) -7- (4- (N- (4-曱氧基節基)氨基)苯基)-N-羥基_4,6-二曱基-7-氧代-2，4-二烯庚醯胺(TA-10)的製備操作同實施例2,用1.5eq.4-甲氧基苯曱醛代替3叫乙醛，使用1.5eq. 三乙醯氧基硼氫化鈉，得到具有如下結構的標題化合物。'H-NMR (CD3OD: CDC13=5: 1, 300Hz, 5ppm): d=7.64 (2H， d, J=8.1Hz)， 7.13 (2H, d， J=9.0Hz), 7.03 (1H， d, J=13.5Hz)，6.75 (2H， d, J=9.0Hz)， 6.46 (2H, d， J=8.1Hz)， 5.82 (1H, d， J=7.8Hz)，5.65 (1H, d， J=13.5Hz)， 4.25 (1H， m), 4.20 (2H， s)， 1.74(3H， s)， L15(3H, d， J=6.9Hz)formula see original document page 24實施例11: (R，2E，4E) -7- (4-(環戊基氨基)苯基)-N-羥基-4，6-二甲 基_7_氧代_2，4-二烯庚醯胺(TA-11)的製備操作同實施例2，用1.5eq.環戊酮代替3eq.乙醛，使用1.5eq.三乙 醯氧基硼iL化鈉，得到具有如下結構的標題化合物。'H-NMR (CD3OD: CDC13=5: 1， 300Hz, Sppm): d=7.62 (2H, d，J=8.4Hz)， 7.05 (1H， d， J-15.0Hz)， 6.41 (2H， d， J=8.4Hz)， 5.80 (1H， d: J=8.7Hz)， 5.65 (1H， d, J=15.0Hz)， 4.25 (IH， m)， 3.71 (1H, m)， 1.88 (2H m)， 1.73 (3H， s), 1.58 (4H， m)， 1.37 (2H， m)， 1.13 (3H， d, J=6.9Hz)實施例12: (R，2E，4E) -7- (4-(環己基氨基)苯基)-N-羥基-4，6-二曱 基-7-氧代-2,4-二烯庚醯胺(TA-12)的製備操作同實施例2，用1.5eq.環己酮代替3eq.乙醛，使用1.5eq.三乙 醯氧基硼氫化鈉，得到具有如下結構的標題化合物。'H-NMR (CD3OD: CDC13=5: 1, 300Hz, Sppm): d=7.66 (2H, d， J=9.0Hz)， 7.10 (1H， d， J=15.0Hz), 6.43 (2H, d， J=9.0Hz), 5.85 (1H， d， J=9.6Hz),5.67 (IH， d， J=15,0Hz)， 4.26 (1H， m), 3.26 (IH， m), 1.93 (2H, m)， 1.78 (3H, s)， 1.74 (2H， m)， 1.57 (2H， m)， 1.19 (3H， d， J=6.9Hz)， 1.15 (4H， m)實施例13: (2E，4E，6RJR)-7-(4-溴苯基)-7-羥基-4，6 二甲基-2，4-二烯庚酸 乙酯的製備(中間體)(1)將1.85g對溴苯甲醛和230mg L-脯氨酸溶於30mlDMF中，將 1.44ml丙醛溶於5mlDMF,用注射泵14小時內加入上迷對溴苯甲醛和脯氨酸的DMF溶液中。反應結束後加入水，用乙酸乙酯提取三次，合 並有機層，疏酸鎂乾燥，濃縮，得到的粗產物，直接投入下一步。(2)將上步得到的粗產物溶於40ml二氯曱烷，加入12.2gwittig試 劑Ph3P=C(CH3)C02Me ,加熱回流12小時，蒸乾溶劑，矽膠柱層析(乙 酸乙酯/石油醚-l/5(V/V)),得到2.7g如下結構的化合物，兩步產率 93%。(3)將2.7g上步得到的化合物溶於無水THF中，冷至-78。C, 10 分鐘內滴加1M的DIBAL-H的溶液25ml,滴畢繼續攪拌15分鐘，加 入飽和酒石酸鈉鉀溶液，升至室溫，繼續攪拌6小時，加入乙酸乙酯 萃取，有機層用硫酸4美千燥濃縮得到粗產物；將此粗產物溶於二氯甲 烷20ml，加入4.2g活性二氧化錳，室溫攪拌30分鐘，過濾濃縮，將 粗產物石i激柱層析(乙酸乙酯/石油醚-l/5(V/V)),得到1.6g具有如下 結構的化合物純品。兩步產率62%。(4) 60%NaH 200mg懸浮於20ml乾燥的THF，滴加1.4ml膦醯基 乙酸三乙酯，滴畢攪拌10分鐘，將550mg步驟(3)中產物溶於15mlTHF 溶液，然後將此溶液滴加入上述NaH與膦醯基乙酸三乙酯的反應液中， 滴畢繼續攪拌30分鐘，加入水，用乙酸乙酯萃取，有機層用硫酸鎂千 燥濃縮，粗產物矽膠柱層析(乙酸乙酯/石油醚-1/5 (V/V)),得到490mg 具有如下結構的標題化合物，產率76%。!H-應R (CDC13， 300Hz， Sppm): d-7.46 (2H, d, J=8.7Hz)， 7.33 (1H, d， J=15.6Hz)， d=7.20 (2H， d， J=8.7Hz) 5.85-5.80 (2H, m)， 4.48 (1H， d, J=7.2Hz)， 4.21 (2H， q， J=7.2Hz)，2.83 (1H, m), 1.73 (3H， s), 1.30 (3H, J=7.2Hz), O.卯(3H， d， J=6.6Hz)(5)將!350mg步驟4的化合物溶於4ml DMF，加入272mg的咪唑， 450mg的TBSC1(叔丁基二甲基氯化矽)，室溫攪拌20小時，加入水， 用乙酸乙酯萃取，將酯層乾燥濃縮，將粗產物矽膠柱層析(乙酸乙酯/ 石油醚=1/5 (V/V)),得到520mg具有如下結構的化合物，產率90%。實施例14: ( R，2E，4E ) ->}-羥基-4，6-二甲基-7_氧代-7- ( 4- ( 1-吡咯烷基) 苯基)-2，4-二烯庚醯胺(TA-13)的製備A:將35mg實施例13製得的中間體(2E，4E，6R，7R)-7-(4-溴苯基)-7-幾基-4，6 二甲基-2，4-二烯庚酸乙酯， 6mg配體化合物2， 2mg醋酸把， llmg叔丁醇鈉置於乾燥的兩口瓶中，抽真空排除空氣後充氬氣，加入 16^1吡咯烷在2.5ml乾燥四氬呋喃的溶液，反覆進行三次抽氣充氬氣， 加熱至IO(TC回流1.5小時，冷卻，向反應液中加入水，加入乙酸乙酯 萃取，合併有機相。有機相用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鎂乾燥，過 濾，濾液濃縮。殘餘物用矽膠柱層析純化(乙酸乙酯/石油醚=1/5 (V/V))， 得到22rr^油狀產物(2E，4E，6RJR)-7-(4-( 1-吡咯烷基)苯基)>7-羥基-4，6 二甲基-2，4-二秌庚酸乙酯(收率65% )B:將上步所得產物以與實施例l相同條件的氨解，氧化反應得到 26mg (兩步產率46%)具有如下結構的標題化合物。'H-NMR (CD3OD: CDC13=5: 1, 300Hz, 5ppm): d=7.74 (2H, d, J=9.0Hz)， 7.12 (1H, d， J=15.3Hz)， 6.42 (2H， d， J=9.0Hz), 5.88 (1H， d， J=8.1Hz)，5.68 (IH, d, J=15.3Hz)， 4.28 (1H， m), 3.26 (4H, m)， 1.93 (4H, m) 1.80 (3H, s), 1.20 (3H， d, J=6.9Hz)o 9實施例15: (R,2E，4E) ^-羥基-4，6-二甲基-7-氧代-7- (4- (l-哌錄) 苯基)-2，4-二烯庚醯胺(TA-14)的製備操作同實施例14,使用六氫哌啶代替吡咯烷，得到具有如下結構 的標題化合物。iNMR (CD3OD: CDC13=5: 1, 300Hz， 5ppm): d=7.76 (2H, d， J=8.7Hz), 7.16 (IH， d， J=15.3Hz)， 6.78 (2H， d， J=8.7Hz), 5.92 (1H， d， J=6.9Hz)，5.72 (1H， d， J=15.3Hz)， 4.31 (1H， m)， 3.31 (4H， m)， 1.78 (3H， s), 1.65 (6H， m)， 1.22 (3H， d, J=6.9Hz)o 9實施例16: (&2E，4E) >6- (4- (二甲tt)苯曱醯基)-N-雍基鬥甲基 -2，4-二烯辛醯胺(TA-15)的製備A:中間體(R^E，犯)-6-((11)-(4-氨基苯基)(羥基)甲基)-4-甲基-2,4-二烯辛酸乙酯的製備以正丁醛代替丙醛，其餘各步操作同實施例1中的A部分，得到 具有如下結構的化合物。B:以本實施例A部分製得的中間體代替實施例2中的中間體(2E, 4E 6R， 7R)-7-(4-M苯基)-7-羥基-4，6-二甲基-2，4-二烯庚酸乙酯，以曱 醛代替乙醛進行還原氨化，其餘操作同實施例2，得到具有如下結構的 標題化合物。'H-NMR (CD3OD: CDC13=5: 1， 300Hz， Sppm): d=7.86 (2H, d， J=9.0Hz)， 7.23 (1H， d, J=15.6Hz), 6.68 (2H， d, J=9.0Hz)， 5.93 (1H， d， J=9.6Hz)，5.78 (1H， d， J-15.6Hz)， 4.28 (1H， m)， 3.09 (6H， s)，1.90 (3H， s)， 1.66 (2H， m)， 0.90 (3H， t ， J=7.2Hz)o 9實施例17: (2E，4E) -7- (4- (二甲氨基)苯基)->1-羥基"4，6，6-三甲基 -7-氧代-2，4-二烯庚醯胺(TA-16)的製備A:中間體(IUE,4E)"7"(4-氨基苯基)-7-羥基-4，6,6-三甲基-2,4-二烯 庚酸乙酯的製備(1)以異丁醛代替丙酪，其餘操作同實施例1中A部分的步驟(l)， 得到的如下結構的粗產物直接投入下步反應。(2)上步粗產物930mg溶於10ml 二氯甲烷，加入1.2ml乙酸酐、 51mg N, N-二甲氨基吡啶以及L7ml三乙胺，室溫攪拌2小時，加入 水，二氯甲烷萃取三次，有機層無水硫酸鎂乾燥，過濾，濾液濃縮得 到粗產物，粗產物矽膠柱層析(乙酸乙酯/石油酸-l/6(V/V))得到羥基 被乙醯基保護的具有如下結構的化合物994mg,產率90%。(3)將上步得到的化合物900mg溶於4ml 二氯曱烷，加入2.34g wittig試劑Ph3P=C(CH3)C02Me ，加熱回流26小時，蒸乾溶劑，矽膠 柱層析(乙酸乙酯/石油醚-l/6(V/V)),得到288mg如下結構的化合物， 產率25%。(4)將416mg上步得到的化合物溶於無水5ml THF中，冷至-78。C， 2分鐘內滴加1M的DIBAL-H的溶液3.5ml，滴畢繼續攪拌15分鐘， 加入飽和酒石酸鈉鉀溶液，升至室溫，繼續攪拌6小時，加入乙酸乙 酯萃取，有機層用石危酸鎂乾燥濃縮得到乙醯基同時被脫去的具有如下 結構的粗產物420mg;(5)將上步粗產物420mg溶於8ml 二氯曱烷，加入1.2g活性二氧 化錳，室溫攪拌30分鐘，過濾，濾液濃縮得到如下結構的黃色油狀粗 產物，直接投入下步反應。(6)以上步得到的化合物為底物，其餘操作同實施例1的A部分 的步驟(4)一(5),得具有如下結構的化合物'H-NMR (CD3OD: CDC13=5: 1， 300Hz, Sppm): d=7.31 (1H, d， J=15.9Hz)， 7.08 (2H， d， J=8.1Hz), d=6.62 (2H, d, J=8.1Hz) 5.97 (1H， s)， 5.79 (2H， d, J=15.9Hz)， 4.50 (IH， s)， 4.20 (2H, q, J=7.2Hz)， 1.83 (3H, s), 1.30 (3H， t， J=7.2Hz),1.16 (3H， d， J=5.4Hz)B:以本實施例A部分製得的中間體代替實施例2中的中間體(2E， 4E 6R, 7R)-7-(4-絲苯基)-7-羥基-4，6-二甲基-2，4-二烯庚酸乙酯，以曱 酪代替乙醛進行還原氨化，其餘操作同實施例2，得到具有如下結構的 標題化合物。!H-NMR (CD3OD: CDC1產5: 1， 300Hz， Sppm): d=7.77 (2H， d，J=9.0Hz), 7.23 (1H， d， J=15.6Hz)， 6.48 (2H， d, J=9.0Hz)， 6.28 (1H, s)， 5.59 (IH, d, J=15.6Hz), 2.94 (6H， s), 1.37 (3H， s), 1.34 (6H， s)實施例18: (R，2E，4E) -7- (4- (二曱氨基)苯基)-^羥基-6-甲基-7-氧代-2，4-二烯庚醯胺(TA-17)的製備A:中間體(2E，4E，6R，7R)-7-(4-氨基苯基)-7-羥基-6-曱基-2，4-二烯庚酸乙酯的製備。以Ph3P=CHC02Me代替Ph3P=C(CH3)C02Me,其餘各步操作同實 施例1中的A部分，得到具有如下結構的化合物。B:以本實施例A部分製得的中間體來代替實施例2中的中間體(2E， 4E 6R, 7R)-7-(4-氨基苯基)-7-羥基-4，6-二曱基-2,4-二烯庚酸乙酯，以甲 酪代替乙醛進行還原氨化，得到具有如下結構的標題化合物。!H-NMR (CD3OD: CDC13=5: 1， 300Hz, Sppm): d=7.88 (2H， d， J=8.7Hz), 7.13 (IH, d， J=15.3Hz), 6.67 (2H, d, J=8.7Hz), 6.24 (1H， d， J=5.1Hz)， 5.76 (1H， d, J=15.3Hz)， 4.24 (1H， m)， 3.08(6H， s), 1.33(3H， d， J=6.6Hz)32formula see original document page 33試驗實施例1:抗腫瘤活性測定分別用磺醯羅丹明B蛋白染色法(sulforhodamine B， SRB )和四氮 唑鹽(microculture tetrazolium， MTT)還原法對合成的化合物進行抗肺 瘤活性的研究(Cancer Res. 1988, 48(3)， 589)。磺醯羅丹明B蛋白染色法SRB是一種蛋白結合染料，可與生物大 分子中的鹼性胺基酸結合，其在515nm的光密度(OD)讀數與細胞數 成良好的線性關係，故可用作細胞數的定量。人肺癌細胞A-549或小 鼠白血病細胞p-388或人白血病細胞k-562用含10%小牛血清的 RPMI- 1640培養，測定時將對數生長期的細胞配成細胞懸液，接種於 96孔培養板上。實驗組每孔分別加入l(Hil不同濃度的化合物，對照組 加等體積含最高濃度溶劑(二甲亞碸)的RPMI - 1640培養液，在37°C, 5%二氧化碳條件下培養72小時後，用三氯乙酸固定，毎孔加入100mJ SRB液，洗去未結合的SRB,用自動分光光度平板讀數計測定OD值。 以不加藥物的腫瘤細胞組為對照，計算藥物對該腫瘤細胞的生長抑制 率。抑制率=[(對照組-給藥組)/對照組]xiooy。四氮唑鹽還原法活細胞的線粒體中存在與NADP相關的脫氫酶， 可將黃色的MTT還原為不溶性的藍色物質曱臢(formazan)，而死細 胞此酶消失，MTT不被還原，用酶標測定儀測定細胞培養物的OD值， 可對活細胞計數。本法採用小鼠白血病P-388、人肺癌A-549和人白血病K562細胞系，實驗方法同SRB法，培養時間為48小時，數據 分析同SRB法。結果評定無效10'5mol/L50%;強效10-611101/1^85%或l(T7mol/L>50%。 測定的部分化合物活性數據如下 表l:(結構數據見實施例)濃度 P - 388(M) 評價 l(T4 l(T5 10-6 l(T7 10-8樣品編號TA-1 76.3 92.1 96.3 67.3 21.5 強效TA-2 99.2 99.3 99.5 96.9 70.6 強效TA-3 99.5 100 100 84.4 47.1 強效TA-4 98.8 100 97.4 3.3 4.5 強效TA-698 92.9 93.9 96.1 96.4 強效TA-7 97.6 100 98.6 98.9 73.9 強效TA-8* 85.2 84.4 17.6 14.8 18.2 弱效TA-9 98.9 99.4 100 97.3 84 強效TA-10 100 98.9 100 79 75.7 強效34TA-11* 94.3 92.6 63.5 19.7 19.1 強效TA-12 100 100 100 99.5 76 強效TA-13 卯.4 97.7 100 97.5 85.8 強效TA-14 98.4 86.7 80.3 84.6 79.2 強效TA-15 98.4 100 97.8 98.7 80.6 強效TA-16 19.1 17.30 0 0 無效TA-17 100 83.7 17.6 7.8 12.9 無效TSA 97.4 98.8 98.7 98.6 21.4 強效 *: TA-8與TA-11採用K- 562 (人白血病細胞)測定。 表2:(結構數據見實施例)濃度 A - 549(M) 評價 10-4 10-5 10-6 10-7 10-8樣品編號TA-1 63.8 93.3 89.5 51.9 17.6 強效TA-2 98.2 98.5 98.2 89.2 17.6 強效TA-3 98.5 97.9 97.8 85.4 52.4 強效TA-4 98.8 100 97.4 3.3 4.5 強效TA-6 95.6 95.3 94.8 93.0 56.1 強效TA-7 98.4 98.3 98.4 85.5 26.6 強效TA-8 97.5 98.8 0.8 0.40 弱效TA-9 94.8 96.1 94.9 94.6 87.9 強效TA-10 96.2 95.6 96.2 87.8 42.6 強效TA-ll 96.3 95.5 0.4 .0.8 2.5 弱效TA-12 98.6 98.0 98.1 82.6 0 強效TA-13 96.5 95.3 94.8 93.0 56.1 強效TA-14 93.2 93.3 92.7卯.8 86.7 強效TA-15 98.1 98.2 97.7 93.8 36.7 強效TA-16 11.8 10.8 0 0 0 無效TA-17 97.6 86.4 10.2 16.5 14.6 弱效TSA 97.7 96.9 97.3 72.4 19.0 強效如表1和表2所示，這一類化合物對腫瘤細胞林有強烈的細胞毒活 性，是有前途的抗腫瘤藥物。試驗實施例2:分子及細胞水平檢測活性化合物對HDAC的抑制 作用以及對相關周期蛋白的作用1)分子水平採用KOMOL公司的HDAC螢光檢測/藥物篩選試劑盒的熒ibir測 系統測定化合物對HDAC酶活的抑制作用。分別將10pL檢測緩衝液，稀釋的TSA及待測抑制劑加入96孔板中。在需測定的孔中加入稀釋的 Hela核提取物，待所有試劑平衡至室溫(25°C )後，每孔加入25^iL稀 釋的底物，徹底混勻後開始進行HDAC反應。反應10分鐘後加入50nL 螢光顯色劑(FluofDeLys Developer)終止反應。室溫(25°C)孵育 10 15分鐘後用螢光分光光度計(Polar Star)讀板進行測定，選擇激 發波長為355nm,吸收波長為460nm。2) 細胞水平將處於指數生長期的受試腫瘤細胞(5xl0S個/孔)接種於6孔板。 待貼壁後，棄孔中培液，加入1 ml/孔的新鮮培液，同時加入不同濃度 的活性化合物處理不同時間。棄上清，孔中細胞用lxSDS凝膠加樣緩 衝液(50mMTris.Cl (pH6.8)、 100mMDTT、 2%SDS、 0.1%溴酚 藍、10%甘油)裂解，收集於小離心管中，煮沸10min提取總蛋白。 冷卻後將等量樣品上樣於10%的聚丙烯醯胺凝膠，在Tris-甘氨酸電泳 緩沖液(25 mM Tris、 250 mM甘氨酸、0.1 % SDS )中以80 ~ 100 V 電泳約2 ~2.5h。用半千法將蛋白從凝膠轉移至硝酸纖維素濾膜。轉 移條件為轉移緩衝液(39mM甘氨酸、48mMTris鹼、0.037 %SDS、 20%甲醇)；轉移電流(50mA);轉移時間(2h)。轉移結束，用麗 春紅(Ponceau S)染色確定轉移情況和蛋白條帶在硝酸纖維素濾膜上 的位置，標記後用含5 %脫脂奶粉的封閉液[5 %脫脂奶粉，20 mM Tris-HCl (pH 7.2 ~ 7.4 )、 150 mMNaCl、 0.1 % (v/v) Tween20]於搖床 室溫封閉2h。然後，加入特異性一抗於4。C雜交過夜。用洗液[20mM Tris-HCl (pH 7.2-7.4 )、 150mMNaCl、 0.1 % (v/v) Tween20]室溫洗 3次，15min/次。加入辣根過氣化物酶標記的二抗，室溫置於搖床上平 緩搖動1 h。再用洗液洗三次，15min/次。最後，用電化學發光法(ECL)發色後暴光、顯影、定影、拍照。 1 )分子水平檢測採用BIOMOL公司的HDAC螢光檢測/藥物篩選試劑盒檢測活性化 合物對HDAC的抑制作用，如圖1所示。活性化合物對相關周期蛋白的影響採用蛋白質印跡方法，檢測不同濃度的TA-15分別作用結腸癌細胞 HCT-11,6 12小時及24小時後，乙醯化組蛋白H3(Acetyl-H3)、乙醯化組 蛋白H4 (Acetyl-H4)和p21蛋白的表達情況；以及250nMTA-15分別處 理細胞8小時、12小時和24小時，p21蛋白的表達情況(圖2)， (3-肌動蛋 白為內參照。已有實驗結果表明TA-15在作用細胞3小時後即引起細胞G2/M 期阻滯，所以我們檢測了不同濃度的TA-15處理結腸癌細胞HT-29和 HCT-116後對細胞周期相關蛋白的影響(圖3)，發現TA-15可下調細 胞周期蛋白D和Cdc25c蛋白的表達水平，P-肌動蛋白為內參照。
權利要求
1.一種具有通式(I)所示結構的曲古抑菌素A衍生物id="icf0001" top= "42" left = "59"/>其中，R1和R2相同或不同，為H、C1～C5直鏈或支鏈烷基、取代或未取代的C3～C6環烷基、取代或未取代的芳香基、取代或未取代的芳香烷基或R1和R2與鄰接的N原子相連成取代或未取代的含氮飽和雜環基，即-NR1R2；Ra與Rb相同或不同，為H、C1～C3直鏈或支鏈烷基；R3為H、C1～C3直鏈或支鏈烷基。
2、 #4§權利要求1所述的曲古抑菌素A衍生物，其特徵在於，Ra和 Rb其中一個為H時，它們中的另一個為C1 C3直鏈或支鏈烷基。
3、 根據權利要求1所述的曲古抑菌素A衍生物，其特徵在於，所述 C1~C5直鏈或支鏈烷基為甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁 基、仲丁基、叔丁基、正戊基或新戊基；所述芳香基為苯基；所述芳香烷 基為苄基；所述R,和R2與鄰接的氮原子相連形成的雜環為吡咯烷環、哌 咬環、嗎啡啉環或哌溱環；所述取代為選自垸基、烷氧基、羥基或卣素中的一個或兩個取代基對 C3 C6壞烷基、芳香基、芳香烷基或含氮飽和雜環基的取代。
4、根據權利要求1所述的曲古抑菌素A衍生物，其特徵在於所述化 合物為(R，2E，4E) -7- (4-氨基苯基)-N-羥基-4，6-二甲基-7-氧代-2，4-二烯庚醯胺；(R，2E,4E ) -7- (4- ( 二乙絲)苯基)-^羥基-4,6-二甲基-7-氧代-2,4-二烯庚醯胺；(R，2E，4E) -7- (4- ( 二丙氨基)笨基)-1^-羥基-4，6-二甲基-7-氧代-2，4-二烯庚醯胺；(R,2E，4E) -7- (4- ( 二丁絲)苯基)-1^-羥基-4，6-二甲基-7-氧代-2,4-二烯庚醯胺；(R，2E，4E) -7- (4- (N, N陽二 (4-曱氧基千基)氨基)苯基)-N-羥 基-4,6-二甲基-7-氧代-2，4-二烯庚醯胺；(R,2E，4E) -7- (4-(曱基tt)苯基)-^羥基-4,6-二甲基-7-氧代-2，4-二烯庚醯胺；(R,2E,4E) -7- (4-(異丙基絲)笨基)-^羥基-4，6-二曱基-7-氧代 -2,4-二烯庚醯胺；(R,2E，4E) -7- (4-(異丁基氨基)苯基)-1^-羥基-4，6-二曱基-7-氧代 -2，4-二烯庚醯胺；(R，2E，4E ) -7- ( 4-(苄基氨基)苯基)-^羥基-4,6-二曱基-7-氧代-2，4-二烯庚醯胺；(RJE，4E) -7- (4- (N- (4-甲氧基千基)氨基)苯基)一N-羥基-4，6-二甲基-7-氧代-2，4-二烯庚醯胺;(R,2E,4E) -7- (4-(環戊基氨基)苯基)-N-羥基-4，6-二曱基-7-氣代 一2,4-二烯庚醯胺；(R,2E，4E) -7- (4-(環己基氨基)苯基)->1-羥基-4,6-二甲基-7-氧代 -2，4-二烯庚醯胺；(R，2E，4E) ->}-羥基-4，6-二甲基-7-氧代-7- (4- (l-吡咯烷基)苯基) -2，4-二烯庚醯胺；(R，2E，4E) -^羥基-4，6-二甲基-7-氧代-7- (4- ( 1-哌咬基)苯基)-2,4-二烯庚醯胺；(R，2E，4E) -6- (4- (二曱氨基)苯曱醯基)—N-羥基-4-曱基-2，4-二烯辛醯胺；(2E,4E ) -7- (4- ( 二甲氨基)苯基)-N-羥基-4,6，6-三甲基-7-氧代-2，4_ 二烯庚醯胺；或(艮2E，4E) -7- (4- (二甲M)苯基)->1-羥基-6-曱基-7-氧代-2,4-二烯庚醯胺。
5、 一種權利要求1所述的曲古抑菌素A衍生物的製備方法，其特徵 是，使用以下通式XI所示的化合物經鹽酸幾胺氨解，而後經2,3-二氯-5,6-二氰基對笨二醌氧化得到R,和R2均為H的通式(I )的化合物；或者通式XI所示的化合物經還原氨化、鹽酸羥胺氨解和2，3-二氯-5,6-二氰基對笨二醌氧化三步反應得到Ri和R2不同時為H的通式(I )的化 合物，即formula see original document page 5其中，R，、 R2相同或不同，為H、 C1 C5直鏈或支鏈烷基、取代或未取 代的C3 ~ C6環烷基、取代或未取代的芳香基、取代或未取代的芳香烷基； Ra、 Rb和R3的定義如權利要求1所述，M為氫原子或常用羥基保護基。
6、 根據權利要求5所述的曲古抑菌素A衍生物的製備方法，其特徵 是，所述還原氨化是式XI所示的化合物與醛或酮在三乙醯氧基硼氫化鈉的 作用下，在室溫下，以四氫呋喃或1，2-二氯乙烷為溶劑進行反應，得到xn 所示的化合物；所述氨解反應是XH所示的化合物與鹽酸羥胺，在室溫下，以曱醇為溶 劑進行反應，得到其羥肟酸化合物；所述氧化反應所用氧化劑為2，3-二氯-5，6-二氰基對苯二醌，在室溫下， 以二氧六環為溶劑，X!I所示化合物的羥肟酸化合物被氧化，得到通式(I ) 的化合物。
7、 根據權利要求6所述的曲古抑菌素A衍生物的製備方法，當所述 R,和R2相同時，在還原氨化反應中，相對於1摩爾化合物XI，使用2~10 摩爾醛或酮和2 10摩爾三乙醯氧基硼氫化鈉；當！^和R2其中一個為氫，另一個為C1 C5直鏈或支鏈烷基、取代或未取代的C3 C6環烷基、取代或未取代的芳香基、取代或未取代的芳 香烷基時，在還原氨化反應中，相對於l摩爾化合物XI,使用1~1.5摩爾 醛或酮和1 ~ 1.5摩爾三乙醯氧基硼氬化鈉。
8、 一種權利要求1所述的曲古抑菌素A衍生物的製備方法，其特徵作用下通過偶聯反應生成化合物G;化合物G經鹽酸羥胺氨解，而後經 2，3-二氯-5，6-二氰基對苯二醌氧化得到通式(I )的化合物formula see original document page 6其中，Ra、 Rb、 R3的定義如權利要求1所述，M為氫原子或常用羥基保 護基，Ri和R2與鄰接的N原子相連成含氮飽和雜環基。
9、根據權利要求8所述的曲古抑菌素A衍生物的製備方法，其特徵 在於，所述中間體F與環狀烷胺或取代環烷胺在鈀催化劑催化及鹼的作用 下通過偶聯反應生成化合物G，反應在室溫下或加熱下進行，所用溶劑為 曱苯或四氫呋喃；所述的鹼為甲醇鈉、叔丁醇鈉、叔丁醇鉀、碳酸鉀、碳酸銫、1，8-二 氮雙環[5.4.0]十一烯-7或1，4-二氮雜雙環[2.2.2]辛烷；所述的鈀催化劑為醋酸鈀、四三苯基膦合鈀或三(二亞千基丙網)二鈀； 並採用下面化合物1或2為配體
10、 根據權利要求8所述的曲古抑菌素A衍生物的製備方法，其特徵 在於，所述氨解反應是化合物G與鹽酸羥胺，在室溫下，以甲醇為溶劑進 行反應，得到其羥肟酸化合物；所述氧化反應所用氧化劑為2，3-二氯-5,6-二氰基對苯二醌，在室溫下， 以二氧六環為溶劑，化合物G的羥肟酸化合物被氧化，得到通式(I )的 化合物。
11、 一種根據權利要求1所述的曲古抑菌素A衍生物的用途，其特徵 在於它為組蛋白去乙醯化酶抑制劑。
12、 權利要求1所述的曲古抑菌素A衍生物在製備抗腫瘤藥物中的應用。
全文摘要
本發明提供了其結構通式如下的曲古抑菌素A衍生物及其製備方法；所述曲古抑菌素A衍生物具有組蛋白去乙醯化酶抑制活性，可用作抗腫瘤藥物。
文檔編號C07C239/16GK101239929SQ20071003737
公開日2008年8月13日 申請日期2007年2月9日 優先權日2007年2月9日
發明者健 丁, 張士磊, 敏 桂, 段文虎, 曦 趙 申請人:中國科學院上海藥物研究所