抑制在有需要的主體內的食道癌生長的方法及木脂素化合物作為製備治療食道癌藥物的應用與流程

2023-10-06 10:28:39

本申請要求享有序列號62/183,728、於2015年6月23日申請和序列號62/183,729、於2015年6月23日申請和序列號62/183,726、於2015年6月23日申請的美國臨時專利申請案，它們的公開內容通過引用全部併入本文。

技術領域

本發明涉及藥物化學領域，具體地，涉及一種抑制在有需要的主體內的食道癌生長的方法及木脂素化合物作為製備治療食道癌藥物的應用。

背景技術：

木脂素和新木脂素是植物中的主要成分，佔有草本生物質的15-25％(w/w)。植物中大部分的木脂素和新木脂素具有光學活性並且在植物自我防禦和人類健康上展現出重要的生理功能。木脂素隸屬芳族結構多變的苯丙素類化合物(aromatic phenylpropanoid compounds)，根據骨架結構，它可被分為5個類別，包括聯苯環辛二烯(dibenzocyclooctadiene)、2，3-二甲基-1 4-二芳基丁烷(2,3-dimethyl-1,4-diarylbutane)、4-芳四氫萘(4-aryltetralin)、螺呋喃酚類二並苯環辛二烯(spirobenzofuranoid dibenzocyclooctadiene)和四氫呋喃(tetrahydrofuran)。

天南星科的刺芋(Lasia spinosa(L.)Thwait)是在中國西南地區廣泛使用的草藥。但是，幾乎沒有關於刺芋具有藥理活性的化學成分的詳細研究。

本發明的一個目的是提供具有抗癌作用的刺芋根水醇提取物(hydro-alcoholic extract)的化學組分。

就發明人的知識而言，本文公開的這個完整發明相對於現有技術具有新穎性和創造性。

本申請的這個部分或任何其他部分引用或識別的任何文獻不應被視為承認這些文獻為本申請可得到的現有技術。

技術實現要素：

因此，本發明的一個目的是提供一種抑制在有需要的主體內的食道癌生長的方法及木脂素化合物作為製備治療食道癌藥物的應用。

根據本發明的一個方面，提供了抑制在有需要的主體內的食道癌生長的方法，這個方法向主體施用有效劑量的至少一種化合物，該至少一種化合物選自自南燭木樹脂酚(1)、5』-二甲基開環異-落葉松脂醇(2)、2-(4-羥基-3,5-二甲氧基苄基)-3-(4-羥基-3-甲氧基苄基)-1,2-丁二醇(3)、(7』S,8S,8R)-4,4』-二羥基-3,3』5,5』-四甲氧基-7』,9-環氧木脂素-9』-醇-7-酮(4)、5,5』-二甲基開環異-落葉松脂醇(5)、開環異落葉松脂醇(6)、5』-甲氧基落葉松脂醇(7)、二氫脫氫二松柏醇(8)以及丁香樹脂酚(9)或它們的混合物組成的組。

根據本發明的另一個方面，提供了抑制在有需要的主體內的食道癌生長的方法，這個方法向主體施用有效劑量的至少一種化合物，該至少一種化合物選自5,5』-二甲基開環異-落葉松脂醇(5,5』-Dimethoxysecoiso-lariciresinol)、2-(4-羥基-3,5-二甲氧基苄基)-3-(4-羥基-3-甲氧基苄基)-1,2-丁二醇(2-(4-Hydroxy-3,5-dimethoxybenzyl)-3-(4-hydroxy-3-metoxybenzyl)-1,2-butaediol)、二氫脫氫二松柏醇(Dihydrodehydrodiconifery alcohol)以及丁香樹脂酚(Syringaresinol)或它們的混合物組成的組。

本發明的一個方面的第一實施例中，所述化合物通過腹腔內注射而施用。

本發明的一個方面的第二實施例中，所述有效劑量不多於每天2.43mg/kg。

本發明的一個方面的第三實施例中，所述有需要的主體是人類。

根據本發明的第二方面，提供了抑制在有需要的主體內的食道癌生長的方法，這個方法向主體施用有效劑量的刺芋根(Lasia spinosa(L.)Thwait root)或刺芋根提取物。

本發明第二方面的第一實施例中，所述化合物通過腹腔內注射施用。

本發明第二方面的第二實施例中，所述有需要的主體是哺乳動物。這些哺乳動物包括但不限定為人類。

根據本發明的第三方面，提供了木脂素化合物作為製備治療食道癌的藥物的應用，其中所述木脂素化合物選自南燭木樹脂酚(1)、5』-二甲基開環異-落葉松脂醇(2)、2-(4-羥基-3,5-二甲氧基苄基)-3-(4-羥基-3-甲氧基苄基)-1,2-丁二醇(3)、(7』S,8S,8R)-4,4』-二羥基-3,3』5,5』-四甲氧基-7』,9-環氧木脂素-9』-醇-7-酮(4)、5,5』-二甲基開環異-落葉松脂醇(5)、開環異落葉松脂醇(6)、5』-甲氧基落葉松脂醇(7)、二氫脫氫二松柏醇(8)以及丁香樹脂酚(9)的化合物，或它們的混合物組成的組。

本發明第三方面的第二實施例中，其中所述食道癌為轉移性食道癌。

本發明的特徵、整數、特徵、化合物、化學部分或與特定方面，實施例或示例結合描述的群組應理解為除非和它們不相容，可應用於本文描述的任何其他方面，實施例或示例。

除開那些特別描述的，所屬領域的技術人員可理解的是本文所描述的發明可進行改變和改進。

本發明包括所有這樣的改變和改進。本發明也包括說明書中單獨或共同地涉及或指示的所有步驟和特徵以及任一和所有的組合物或任何兩個或更多的步驟或特徵。

除非上下文另有要求，本說明書中的術語「包含(comprise)」或諸如「包含(comprises)」或「包含(comprising)」的變體，應理解為暗示包括規定的整數(integer)或整數群組，但不排除任何其他整數或整數群組。也需要注意的是在本公開中，特別是在權利要求和/或段落中，諸如「包含(comprises)」、「包含(comprised)」、「包含(comprising)」的術語以及類似術語具有它在美國專利法裡的意義，例如它們的意思可為「包括(include)」、「包括(included)」、「包括(including)」以及類似的詞語；以及諸如「實質上由…組成(consisting substantially of)」和「本質上由…組成(consists substantially of)」的這些術語具有它們在美國專利法裡的意思，例如，它們包括沒有特殊引用的元素，但排除了沒有在現有技術中發現的元素，或這些元素會影響本發明的基礎性或新穎性特徵。

進一步地，除非上下文另有所指，本說明書和權利要求中的術語「包括(include)」或諸如「包括(includes)」或「包括(including)」的變體，應理解為暗示包括規定的整數或整數群組，但不排除任何其他整數或整數群組。

本文使用的所選術語的其他定義在本發明的詳細說明中找到並且在全文中使用。除非另有定義，本文使用的所有其它技術術語具有和本發明所屬領域技術人員普遍理解相同的意義。

從下述說明書的綜述中，本發明的其他方面和優勢對於所屬領域的技術人員而言是顯而易見的。

附圖說明

本發明的上述和其他目的以及特徵從下面對本發明的描述(結合附圖)而顯而易見。

附圖1顯示了刺芋根的分離流程圖。「EtOH」代表乙醇，「ext.」代表提取物，「EtOAc」代表乙酸乙酯，「BuOH」代表正丁醇，「HE」代表正己烷，「MeOH」代表甲醇，「H2O」代表水提取物，「Fr」代表組分。

附圖2顯示所有分離化合物的結構。

附圖3顯示五種分離化合物在人類食道癌(KYSE-150)細胞上的傷口癒合分析；6.25μg/mL的化合物2，3，5，8和9，25μg/mL的化合物1，和50μg/mL的化合物6，7用來治療癌症細胞48小時。原始放大倍率，5×。

附圖4A顯示化合物9在接種腫瘤小鼠模型中腫瘤的尺寸。

附圖4B顯示化合物9在接種腫瘤小鼠模型中老鼠體重的變化。

附圖4C顯示化合物9在接種腫瘤小鼠模型中腫瘤的重量。

附圖4D顯示化合物9對腫瘤組織(a，對照組；b，15mg/kg化合物9治療組；c，30mg/kg化合物9治療組)結構表徵的影響。接種腫瘤小鼠用載體或每天一次以皮下給藥15到30mg/kg的化合物9治療連續12天。每兩天測量腫瘤尺寸並且每天測量體重。在第13天，處死小鼠並且測量腫瘤重量(n＝5，*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001，****p<0.0001)。

具體實施方式

本發明並不限定於本文描述的任何特定實施例的範圍。下面的實施例僅為例證而呈現。

總體試驗方法

3-[4,5-二甲基噻唑-2-炔]-2,5-二苯基四唑溴化物((3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl]-2,5-diphenyltetrazolium bromide)，MTT)和二甲基亞碸(dimethyl sulfoxide，DMSO)，以及所有使用的化學物質是HPLC級別的來自西格瑪化工有限公司(美國密蘇裡州，聖路易斯)。1H NMR和13CNMR光譜在Bruker-Avance 400MHz光譜儀上記錄。CD3OD用作溶劑。化學位移(δ)利用四甲基矽烷作為內標物以ppm記錄，並且J值以Hz記錄。高解析度質譜儀(HRMS)在VG Autospec-3000光譜儀上執行。柱層析在高速反流層析(high speed countercurrent chromatography，HSCCC)上進行並且使用製備型HPLC。HPLC分析使用配備了Alltech Alltima-C18(4.6×250mm，5μm)的Waters 2335系列儀器並且在式樣製備中使了製備型AlltechAlltima-C18柱(10×250mm，5μm)。

提取和分離

刺芋根部(500g)乾燥粉碎後利用80％乙醇進行回流提取。在減壓下去除溶劑後，水醇產出16g殘渣。然後它就在水中懸浮並且利用乙酸乙酯/正丁醇/水(EtOAc/BuOH/H2O，v:v:v)＝4/1/5的溶劑系統分離。上層(6.3g)以己烷/乙酸乙酯/甲醇/水(HE/EtOAc/MeOH/H2O＝0.3/5/0.3/5，v/v/v/v)作為洗脫液通過高速反流層析(HSCCC Waters，德國)處理得到四個餾分(I-IV)。餾分I-IV利用反相HPLC(Waters系統，包括2545二元梯度模值，2489UV/可見光探測器，餾分收集器III)在半製備柱製備型RP-C18進一步純化。製備流程圖在附圖1中顯示。

細胞毒性試驗

待測化合物溶解在二甲亞碸(DMSO)中以製作儲備溶液並且進一步在培養基中稀釋。人類食道癌細胞系(KYSE-70,KYSE-150,KYSE-450和KYSE-520)在RPMI 1640或DMEM培養基中培養，該培養基包含10％胎牛血清和1％抗生素(盤尼西林和鏈球菌)。3×103個細胞/孔在96孔板接種並且附著過夜。24小時後，對細胞施以1.56，3.125，6.25，12.5，25，50μg/mL的分離化合物處理48小時。然後每孔20μL MTT(5mg/mL存儲於磷酸鹽緩衝液(PBS))加入到培養基(200μL)中並且在37℃下培養4小時。最後，移除培養基並且加入200μL的DMSO。利用酶標儀分光光度計(伯樂生命醫學產品有限公司，赫拉克斯勒，加利福尼亞)在570nm波長測量溶液的吸光度。

傷口癒合試驗

以50％細胞覆蓋率在12孔板上接種細胞再利用無菌塑料頭(1mL)刨痕。細胞用磷酸鹽緩衝液(PBS)洗過之後，在存在或缺少待測試化合物的培養基中培養不同時間至長達48小時。選擇沒有改變KYSE-150細胞生存能力的濃度。利用奧林巴斯IX71顯微技術檢測遷移到傷口表面的細胞並且進行數位化拍照。

小鼠模型

從香港中文大學的實驗動物中心購買的體重大約為16到20g、6到8星期大的雌性裸鼠以200mL生理鹽水2×106KYSE-150細胞皮下注射到小鼠的腰窩。當腫瘤體積達到大約100mm3,小鼠被隨機分為三組(n＝5)。對照組以生理鹽水給藥而化合物9治療組通過腹腔內被注射施用不同劑量的化合物9(分別為15或30mg/kg)。在12天內，腫瘤體積每兩天以遊標卡尺測量，並且根據公式：體積＝(寬)2×長/2計算。觀察後，將小鼠處死以移除腫瘤。然後組織標本以4％多聚甲醛固定並且嵌入石蠟中。根據標準步驟，5微米的切片利用蘇木精/伊紅著色。該實驗流程被香港浸會大學中醫藥學院的試驗動物管理委員會批准。

人體等效劑量利用下述等式從小鼠劑量轉化：D人類＝D老鼠×k(k＝0.081)(Regan-Shaw等人，(2007)，其公開全部併入本文)。因此，人體等效劑量的範圍是1.215mg/kg/天到2.43mg/kg/天。

結果和討論

刺芋的水醇提取物利用在高速逆流色譜(HSCCC)純化並且利用製備型HPLC獲得一個新型和八個已知的木脂素。結構通過附圖2所示的1H，DEPT(無畸變極化轉移增強，是一種13C核磁共振譜)，HSQC(異核單量子相關譜，碳氫鍵關係)，HMBC(多鍵碳氫關係譜，碳氫連用圖譜)核磁共振生物廣譜數據而識別。

南燭木樹脂酚(1)：黃色凝膠；C22H28O8,[M+H]+:421.1872(Calcd.for 421.1862)。1H NMR(400MHz,CD3OD):δ6.58(1H,s,H-2』),6.38(2H,s,H-2』,6』),4.31(1H,d,J＝5.6Hz,H-7),3.85(3H,s,3』-OMe),3,73(3H for each,s,3,5-OMe),3.59(1H,dd,J＝10.8,5.2Hz,H-9』a),3.47-3.51(3H,m,H-9』b andH-9),3.37(3H,s,3-OMe),2.70(1H,dd,J＝15.2,4.8Hz,H-7』a),2.57(1H,dd,J＝15.2,11.2Hz,H-7』b),1.95-1.99(1H,m,H-8),1.59-1.64(1H,m,H-8』)；13CNMR(100MHz,CD3OD):δ147.58(s,C-3,5),147.25(s,C-3』),146.28(s,C-5』),137.91(s,C-1),137.48(s,C-4』),133.11(s,C-4),128.78(s,C-1』),124.84(s,C-6』),106.37(d,C-2』),105.47(d,C-2,6),65.38(t,C-9』),62.77(t,C-9),58.54(q,5』-OMe),55.54(q,5-OMe),55.36(q,3-OMe),55.19(q,3』-OMe),48.47(d,C-8),40.90(d,C-7),39.48(d,C-8』),32.16(t,C-7』)。

5,5』-二甲基開環異-落葉松脂醇(2)：黃色凝膠；C22H30O8,[M+H]+:423.2074(Calcd.for 423.2019)。1H NMR(400MHz,CD3OD):δ6.32(4H,s,H-2,2』,6,6』),3.74(12H,s,OMe-3,3』,5,5』),3.65(2H,dd,J＝10.8,4.8,Hb-9,9』),3.56(2H,dd,J＝11.2,5.6,Ha-9,9』),2.70(2H,dd,J＝13.6,6.4,Hb-7,7』),2.52(2H,dd,J＝13.6,8.8,Ha-7,7』),1.90-1.88(2H,m,H-8,8』)；13C NMR(100MHz,CD3OD):δ147.59(s,C-3,3』,5,5』),133.02(s,C-4,4』),131.73(s,C-1,1』),105.80(d,C-2,2』,6,6』),60.87(t,C-9,9』),55.18(q,OMe-3,3』,5,5』),44.61(d,C-7,7』),35.28(t,C-8,8』)。

2-(4-羥基-3,5-二甲氧基苄基)-3-(4-羥基-3-甲氧基苄基)-1,2-丁二醇(3*)：黃色凝膠；C21H28O7,[M+H]+:393.1916(Calcd.for 393.1913)。1H NMR(400MHz,CD3OD):δ6.65(1H,d,J＝8.0,H-5』),6.58(1H,d,J＝1.6,H-2』),6.54(1H,dd,J＝1.6,8.0,H-6』),6.33(2H,s,H-2,6),3.75(3H for each,s,OMe-3,5),3.72(3H,s,OMe-3』),3.63(2H,dd,J＝10.8,4.8,Hb-9,9』),3.56(2H,dd,J＝11.2,5.6,Ha-9,9』),2.68(2H,dd,J＝13.6,10.8,Hb-7,7』),2.54(2H,dd,J＝13.6,8.0,Ha-7,7』),1.89-1.94(2H,m,H-8,8』)；13C NMR(100MHz,CD3OD):δ147.61(s,C-3,5),147.41(s,C-3』),144.08(s,C-1』),133.04(s,C-1),132.47(s,C-4』),131.73(s,C-4),121.34(d,C-6』),114.34(d,C-5』),111.96(d,C-2』),105.81(d,C-2,6),60.84(d,C-9),60.76(d,C-9』),55.20(q,OMe-3,5),54.76(q,OMe-3』),42.73(d,C-8),42.58(d,C-8』),35.22(t,C-7),34.70(t,C-7』)。

(7』S,8S,8R)-4,4』-二羥基-3,3』5,5』-四甲氧基-7』,9-環氧木脂素-9』-醇-7-酮(4)：黃色凝膠；C22H26O9,[M+H]+:435.1672(Calcd.for 435.1655)。1H NMR(400MHz,CD3OD):δ7.39(2H,s,H-2,6),6.72(2H,s,H-2』,6』),4.65(1H,d,J＝8Hz,H-7』),4.18-4.29(3H,m,H-8,9),3.92(6H,s,OMe-3,5),3.85(6H,s,OMe-3』,5』),3.66-3.69(2H,m,H-9』),2.65(1H,m,H-8』)。13C NMR(100MHz,CD3OD):δ198.94(s,C-7),147.84(s,C-3,3』),147.74(s,C-5,5』),141.36(s,C-4),134.92(s,C-4』),131.51(s,C-1』),127.28(s,C-1),106.34(d,C-2,6),103.84(d,C-2』,6』),84.04(d,C-7』),70.15(t,C-9),59.99(t,C-9』),55.52(q,OMe-3,3』),55.36(q,OMe-5,5』),53.73(d,C-8』),48.74(d,C-8)。

5,5』-二甲氧基-落葉松脂醇(5)：黃色凝膠；C22H28O8,[M+H]+:421.1868(Calcd.for 421.1862)。1H NMR(400MHz,CD3OD):δ6.62(2H,s,H-2,6),6.50(2H,s,H-2』,6』),4.77(1H,d,J＝6.4Hz,H-7』),4.00(1H,dd,J＝8.4,6.4Hz,Hb-9』),3.85(1H,m,Hb-9),3.83(3H for each,s,OMe-3,5),3.82(3H foreach,s,OMe-3』,5』),3.75(1H,dd,J＝8.4,6.0Hz,Ha-9』),3.66(1H,dd,J＝10.8,6.4Hz,Ha-9),2.94(1H,dd,J＝13.6,4.8Hz,Hb-7』),2.69-2.78(1H,m,H-8』),2.49(1H,dd,J＝13.2,11.2Hz,Ha-7』),2.35-2.42(1H,m,H-8』)。13C NMR(100MHz,CD3OD):δ147.90(s,C-3,5)147.85(s,C-3』,5』),134.55(s,C-4),133.68(s,C-4』),133.48(s,C-1),131.42(s,C-1』),105.61(d,C-2』,6』),102.89(d,C-2,6),82.79(d,C-7),72.16(t,C-9』),59.12(t,C-9),55.38(q,OMe-3,5),55.36(q,OMe-3』,5』),52.74(d,C-8),42.43(d,C-8』),32.77(t,C-7』)。

開環異落葉松脂醇(6)：黃色凝膠；C20H26O6,[M+H]+:363.1799(Calcd.for 363.1808)。1H NMR(400MHz,CD3OD):δ6.68(2H,d,J＝8Hz,H-5,5』),6.61(2H,m,H-6,6』),6.56(2H,d,J＝7.6Hz,H-2,2』),3.86(2H,m,Hb-9,9』),3.75(6H,s,OMe-3,3』),3.60(2H,m,Ha-9,9』),2.68(2H,dd,J＝13.6,6.8Hz,Ha-7,7』),2.57(2H,dd,J＝13.6,7.6Hz,Hb-7,7』),1.92(2H,m,H-8,8』)。13C NMR(100MHz,CD3OD):δ147.40(s,C-3,3』),144.06(s,C-4,4』),132.49(s,C-1,1』),121.32(d,C-6,6』),114.38(d,C-5,5』),111.99(d,C-2,2』),60.73(t,C-9,9』),54.79(q,OMe-3,3』),42.72(d,C-8,8』),32.77(t,C-7,7』)。

5』-甲氧基落葉松脂醇(7)：黃色凝膠；C21H26O7,[M+H]+:391.1757(Calcd.for 391.1757)。1H NMR(400MHz,CD3OD):δ6.82(1H,d,J＝1.6Hz,H-2』),6.74(1H,d,J＝8.0Hz,H-5』),6.66(1H,dd,J＝8.0,1.6Hz,H-6』),6.64(2H,s,H-2,6),4.79(1H,d,J＝6.8Hz,H-7』),4.02(1H,dd,J＝8.4,6.8Hz,Ha-9),3.85(6H,s,OMe-3』,5』),3.85(3H,s,OMe-3),3.80-3.83(1H,m,Ha-9』),3.75(1H,dd,J＝8.4,6.4Hz,Hb-9』),3.49(1H,dd,J＝11.6,6.8Hz,Hb-9),2.94(1H,dd,J＝13.6,4.8Hz,Hb-7),2.74(1H,dd,J＝5.6,11.2Hz,H-8),2.52(1H,dd,J＝13.2,11.2Hz,Ha-7),2.39(1H,m,H-8』)。13C NMR(100MHz,CD3OD):δ147.84(s,C-3』,5』),147.61(s,C-3),144.43(s,C-4),134.51(s,C-4』),133.71(s,C-1』),132.12(s,C-1),120.76(d,C-6),114.80(d,C-5),112.00(d,C-2),102.85(d,C-2』,6』),82.84(d,C-7』),72.18(t,C-9),59.13(t,C-9』),55.36(q,OMe-3』,5』),54.98(q,OMe-3),52.68(d,C-8』),42.41(t,C-8),32.26(t,C-7)。

二氫脫氫二松柏醇(8)：黃色凝膠；C20H24O6,[M+H]+:361.1656(Calcd.for 361.1651)。1H NMR(400MHz,CD3OD):δ6.97(1H,d,J＝1.6Hz,H-2』),6.84(1H,dd,J＝1.6,8.4Hz,H-6』),6.78(H,d,J＝8.0Hz,H-5』),6.75(2H,s,H-2,6),5.51(1H,d,J＝6Hz,H-7』),3.87(3H,s,OMe-3』),3.83(3H,s,OMe-3),3.77(2H,dd,J＝7.2,11.2Hz,H-9』),3.59(2H,t,J＝6.4Hz,H-9),3.49(2H,dd,J＝6.0,12.4Hz,H-8』),2.63-2.67(2H,m,H-7),1.80-1.87(2H,m,H-8)。13CNMR(100MHz,CD3OD):δ147.68(s,C-3』),146.13(s,C-4),146.08(s,C-4』),143.80(s,C-3),135.51(s,C-1),133.41(s,C-1』),128.48(d,C-5),118.30(d,C-6』),116.52(d,C-2),114.72(d,C-5』),112.70(d,C-6),109.14(d,C-2』),87.58(d,C-7』),63.59(t,C-9』),60.83(t,C-9),55.35(q,OMe-3』),54.96(q,OMe-3),54.05(d,C-8』),34.41(t,C-8),31.50(t,C-7)。

丁香樹脂酚(9)：黃色凝膠；C22H26O8,[M+H]+:419.1706(Calcd.for 419.1706)。1H NMR(400MHz,CD3OD):δ6.68(4H,s,H-2,2』,6,6』),4.74(2H,d,J＝4.0Hz,H-7,7』),4.29(2H,dd,J＝6.8,8.8Hz,Ha-9,9』),3.90(2H,dd,J＝3.2,9.2,Hb-9,9』),3.86(12H,s,OMe-3,3』,5,5』),3.17(2H,m,H-8,8』)。13C NMR(100MHz,CD3OD):δ147.95(s,C-3,3』,5,5』),134.81(s,C-4,4』),131.74(s,C-1,1』),103.12(d,C-2,2』,6,6』),86.22(d,C-7,7』),71.36(t,C-9,9』),55.41(q,OMe-3,3』,5,5』),54.12(d,C-8,8』)。

所有這些化合物利用KYSE-70，KYSE-150，KYSE-450和KYSE-520細胞系在體外評估它們的細胞毒作用。如表1所示，化合物2具有對KYSE-70,KYSE-150和KYSE-450細胞強烈的細胞生長抑制作用，其IC50值低於或接近50μg/mL。化合物3僅在KYSE-150細胞系顯示細胞毒性。化合物8也可抑制KYSE-150和KYSE-520細胞的細胞生長，其IC50的值接近30μg/mL。

表1.化合物對癌症細胞系的細胞毒性[a]

[a]結果以μg/mL的IC50值表示

另外，進行體外傷口-癒合試驗以進一步檢測所有分離物對癌症細胞的遷移活性的抑制作用。當利用分離物治療，和對照物(附圖3)相比，在間隔48小時培養後發現較少遷移的KYSE-150細胞，這表明不存在細胞毒性的同時，分離物具有對KYSE-150細胞的抗遷移作用。

化合物9的細胞毒性效應進一步在腫瘤異種接種小鼠模型中評估。和對照組相比，每天用化合物9的治療顯著地減緩腫瘤生長。進一步地，化合物9治療組耐受性良好，體重減少更少，不出現中毒死亡(附圖4A到附圖4C)。對照組中的腫瘤組織的H&E染色有序而緊密，但是在化合物9治療組中它明顯地鬆散和凌亂(附圖4D)。這些結果顯示化合物9有效抑制體內的腫瘤生長。

工業實用性

本發明公開了從刺芋根分離的化學成分，以用於醫藥用途。更具體地，它涉及刺芋分離的具有生物活性的化學成分，其具有抗癌作用。