一種藏靈菇菌凍幹發酵劑及其製備方法
2023-10-11 20:46:19 1
一種藏靈菇菌凍幹發酵劑及其製備方法
【專利摘要】本發明涉及發酵領域，尤其是一種藏靈菇菌凍幹發酵劑及其製備方法。該發酵劑，按照重量份數計，其原料組份包括：從藏靈菇中分離出的混合菌沉澱物70-90份、保護劑10-30份；其中，混合菌沉澱物為將按體積份數計的乳球菌菌液沉澱物1.5份-2.5份、乳明串珠菌菌液沉澱物3.5-4.5份、乾酪乳桿菌菌液沉澱物2.5-3.5份、酵母菌菌液沉澱物0.5-1.5份同時接種到犛牛脫脂乳培養基恆溫振蕩培養、離心後獲得的沉積物；保護劑包括脫脂犛牛乳、犛牛奶油、殼寡糖、海藻糖、維生素以及穀氨酸鈉中的一種或多種。本發明提供的發酵劑，發酵獲得的酸乳還不易腐壞，保質期長；復活率高、發酵性能好、易於保存以及適合規模化生產。
【專利說明】一種藏靈薛菌凍幹發酵劑及其製備方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及發酵領域，具體而言，涉及一種藏靈菇菌凍幹發酵劑及其製備方法。
【背景技術】
[0002]藏靈菇又名西藏雪蓮，是源自雪域高原海拔4500米處的特有珍稀菌種，是幾百年來藏區牧民製作犛牛酸奶的必需菌種。形態為似米粒狀的白色小顆粒，觸覺較軟、較韌、發粘，長期培養後，個體會逐漸長大，形態如盛開的雪蓮，故謂之西藏雪蓮。藏靈菇所發酵的酸奶，具有調理人體胃腸機能、預防感冒、治療風溼病、增強腸道免疫力、提升肝臟解毒功能、降低血壓血糖血脂、防癌抗癌等功效。食用藏靈菇是個巨大的寶庫，迄今為大眾所利用的，只是其中極少部分。
[0003]在相關技術中，在使用藏靈菇(一般採用藏靈菇菌菌團)作為發酵劑製作酸奶時，常見的方法是直接將藏靈菇菌菌團作為發酵劑使用。但是，由於藏靈菇菌菌團中的細菌種類較多，進而使得製成的酸奶不衛生，較易造成腸胃疾病。
【發明內容】
[0004]本發明的目的在於提供一種藏靈菇菌凍幹發酵劑，以解決上述的問題。
[0005]本發明的另一個目的在於提供一種上述藏靈菇菌凍幹發酵劑的製備方法。
[0006]在本發明的實施例中提供了藏靈菇菌凍幹發酵劑，按照重量份數計，其原料組份包括:從藏靈菇中分離出的混合菌沉澱物70-90份、保護劑10-30份；其中，所述混合菌沉澱物為將按體積份數計的乳球菌菌液沉澱物1.5份-2.5份、乳明串珠菌菌液沉澱物3.5-4.5份、乾酪乳桿菌菌液沉澱物2.5-3.5份、酵母菌菌液沉澱物0.5-1.5份同時接種到犛牛脫脂乳培養基恆溫振蕩培養、離心後獲得的沉積物；所述保護劑包括脫脂犛牛乳、犛牛奶油、殼寡糖、海藻糖、維生素以及穀氨酸鈉中的一種或多種。
[0007]本發明提供的這種藏靈菇菌凍幹發酵劑，其從藏靈菇中分離出四種優勢菌種，四種優勢菌(乳球菌、乳明串珠菌、乾酪乳桿菌、酵母菌)通過犛牛脫脂乳培養基恆溫振蕩培養、離心後，分別得到了四種菌的菌液沉澱物，將這四種菌液沉澱物按照既定的體積比在接入到犛牛脫脂乳培養基中培養，進而得到了混合菌沉澱物；在混合菌沉澱物中，這四種菌均作為風味菌，與保護劑以既定的重量比例混合之後，通過真空冷凍乾燥，即可得到凍幹發酵劑。
[0008]本發明實施例提供的這種凍幹發酵劑，其來源於藏靈菇菌，通過分離培養只獲得了四種優勢菌種作為風味菌，進而克服了現有技術中直接將藏靈菇菌作為發酵劑時，其含有大量雜菌的缺陷，分離出的這四種菌，其以最佳的比例配合，通過培養並得到混合菌沉澱物，在作為發酵劑的時候，由於沒有雜菌，其發酵獲得的酸乳安全衛生。並且由於不含雜菌，其發酵獲得的酸乳還不易腐壞，保質期長。
[0009]另外，通過實踐證明，本發明實施例提供的這種凍幹發酵劑，其還具有復活率高、發酵性能好、易於保存以及適合規模化生產的優點。[0010]可選的，所述乳球菌菌液沉澱物、乳明串珠菌液沉澱物、乾酪乳桿菌菌液沉澱物和酵母菌菌液沉澱物為將從藏靈菇中分離出的乳球菌、乳明串珠、乾酪乳桿菌和酵母菌分別用犛牛脫脂乳培養基培養後通過離心獲得的絮狀沉積物。
[0011]可選的，在所述保護劑中，按重量份數計；具體包括:脫脂犛牛乳13份、犛牛奶油2份、殼寡糖4份、維生素I份。
[0012]可選的，所述藏靈菇菌凍幹發酵劑為粉末狀。
[0013]本發明實施例還提供了一種根據上述藏靈菇菌凍幹發酵劑的製備方法，包括以下步驟:
[0014](I)、從新鮮的藏靈菇中分離提取出乳球菌、乳明串珠菌、乾酪乳桿菌和酵母菌；
[0015](2)、分別將所述乳球菌、乳明串珠菌、乾酪乳桿菌和酵母菌接入到犛牛脫脂乳培養基中，振蕩培養後離心，得到四種菌液沉積物；
[0016](3)、將四種所述菌液沉積物按照既定的體積比接種到犛牛脫脂乳培養基中，恆溫振蕩培養後離心，得到混合菌沉澱物；
[0017](4)、將所述混合菌沉澱物和保護劑按照既定的質量比混合，依次在4°C平衡20-25分鐘、在_30°C預凍40-50分鐘、在_80°C預凍60-70分鐘，最後進行真空冷凍乾燥，得到藏靈菇菌凍幹發酵劑。
[0018]可選的，步驟(I)具體包括:將新鮮的藏靈菇進行研磨勻漿，得到均漿液；將均漿液振蕩搖勻後用無菌生理鹽水稀釋，得到不同稀釋倍數的菌懸液；利用培養基培養所述述菌懸液，並通過分離和純化，得到乳球菌、乳明串珠菌、乾酪乳桿菌和酵母菌。
[0019]可選的，在步驟⑵中，具體包括:分別將所述乳球菌、乳明串珠菌、乾酪乳桿菌和酵母菌按照3.5%的接種量接入到犛牛脫脂乳培養基中，在28-31°C、轉速180-190轉/分，培養4-5小時後離心，得到四種菌液沉積物。
[0020]可選的，在步驟(3)中:所述恆溫振蕩培養的溫度為37_42°C、時間為4小時_6小時、轉速為180轉/分-220轉/分；所述離心的轉速為5000轉/分鐘、時間為5分鐘。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0021]為了更清楚地說明本發明【具體實施方式】或現有技術中的技術方案，下面將對【具體實施方式】或現有技術描述中所需要使用的附圖作簡單地介紹，顯而易見地，下面描述中的附圖是本發明的一些實施方式，對於本領域普通技術人員來講，在不付出創造性勞動的前提下，還可以根據這些附圖獲得其它的附圖。
[0022]圖1為本發明實施例四提供的藏靈菇菌凍幹發酵劑的製備流程示意圖。
【具體實施方式】
[0023]為使本發明的目的、技術方案和優點更加清楚，下面將對本發明的技術方案進行清楚、完整的描述，基於本發明中的【具體實施方式】，本領域普通技術人員在沒有做出創造性勞動的前提下所得到的所有其它實施方式，都屬於本發明所保護的範圍。
[0024]本發明提供的這種藏靈菇菌凍幹發酵劑，其原料組份包括:從藏靈菇中分離出的混合菌沉澱物70-90份、保護劑10-30份；其中，所述混合菌沉澱物為將按體積份數計的乳球菌菌液沉澱物1.5份-2.5份、乳明串珠菌菌液沉澱物3.5-4.5份、乾酪乳桿菌菌液沉澱物2.5-3.5份、酵母菌菌液沉澱物0.5-1.5份同時接種到犛牛脫脂乳培養基恆溫振蕩培養、離心後獲得的沉積物。所述保護劑包括脫脂犛牛乳、犛牛奶油、殼寡糖、海藻糖、維生素以及穀氨酸鈉中的一種或多種。
[0025]本發明實施例提供的這種藏靈菇菌凍幹發酵劑，其從藏靈菇中分離出四種優勢菌種，四種優勢菌(乳球菌、乳明串珠菌、乾酪乳桿菌、酵母菌)通過犛牛脫脂乳培養基恆溫振蕩培養、離心後，分別得到了四種菌的菌液沉澱物，將這四種菌液沉澱物按照既定的體積比在接入到犛牛脫脂乳培養基中培養，進而得到了混合菌沉澱物；在混合菌沉澱物中，這四種菌均作為風味菌。與保護劑以既定的重量比例混合之後，通過真空冷凍乾燥，即可得到凍幹發酵劑。
[0026]本發明實施例提供的這種凍幹發酵劑，其來源於藏靈菇菌，通過分離培養只獲得了四種優勢菌種作為風味菌，進而克服了現有技術中直接將藏靈菇菌作為發酵劑時，其含有大量雜菌的缺陷，分離出的這四種菌，其以最佳的比例配合，通過培養並得到混合菌沉澱物，在作為發酵劑的時候，由於沒有雜菌，其發酵獲得的酸乳安全衛生。並且由於不含雜菌，其發酵獲得的酸乳還不易腐壞，保質期長。
[0027]另外，通過實踐證明，本發明實施例提供的這種凍幹發酵劑，其還具有復活率高、發酵性能好、易於保存以及適合規模化生產的優點。
[0028]作為可選的技術方案，在本發明中，所述乳球菌菌液沉澱物、乳明串珠菌液沉澱物、乾酪乳桿菌菌液沉澱物和酵母菌菌液沉澱物為將從藏靈菇中分離出的乳球菌、乳明串珠、乾酪乳桿菌和酵母菌分別用犛牛脫脂乳培養基培養後通過離心獲得的絮狀沉積物；並且，在所述保護劑中，按重量份數計；具體包括:脫脂犛牛乳13份、犛牛奶油2份、殼寡糖4份、維生素I份；另外，所述藏靈菇菌凍幹發酵劑可為粉末狀。
[0029]此外，本發明還結合上述的內容，對藏靈菇菌凍幹發酵劑的組成提供了以下具體的實施例:
[0030]實施例一
[0031]本實施例的藏靈菇菌凍幹發酵劑，按照重量份數計，其原料組份包括:
[0032]從藏靈菇中分離出的混合菌沉澱物70份、保護劑10份；
[0033]其中，所述混合菌沉澱物為將按體積份數計的乳球菌菌液沉澱物1.5份、乳明串珠菌菌液沉澱物3.5份、乾酪乳桿菌菌液沉澱物2.5份、酵母菌菌液沉澱物0.5份同時接種到犛牛脫脂乳培養基恆溫振蕩培養、離心後獲得的沉積物。所述保護劑包括脫脂犛牛乳、犛牛奶油、殼寡糖、維生素(脫脂犛牛乳13份、犛牛奶油2份、殼寡糖4份、維生素I份)。
[0034]實施例二
[0035]本實施例的藏靈菇菌凍幹發酵劑，按照重量份數計，其原料組份包括:
[0036]從藏靈菇中分離出的混合菌沉澱物80份、保護劑20份；
[0037]其中，所述混合菌沉澱物為將按體積份數計的乳球菌菌液沉澱物2份、乳明串珠菌菌液沉澱物4份、乾酪乳桿菌菌液沉澱物2份、酵母菌菌液沉澱物I份同時接種到犛牛脫脂乳培養基恆溫振蕩培養、離心後獲得的沉積物。所述保護劑包括脫脂犛牛乳、犛牛奶油、殼寡糖、維生素以及穀氨酸鈉(脫脂犛牛乳13份、犛牛奶油2份、殼寡糖4份、維生素I份、穀氨酸鈉I份)。
[0038]實施例三[0039]本實施例的藏靈菇菌凍幹發酵劑，按照重量份數計，其原料組份包括:
[0040]從藏靈菇中分離出的混合菌沉澱物90份、保護劑30份；
[0041]其中，所述混合菌沉澱物為將按體積份數計的乳球菌菌液沉澱物2.5份、乳明串珠菌菌液沉澱物4.5份、乾酪乳桿菌菌液沉澱物3.5份、酵母菌菌液沉澱物1.5份同時接種到犛牛脫脂乳培養基恆溫振蕩培養、離心後獲得的沉積物。所述保護劑包括脫脂犛牛乳、犛牛奶油、殼寡糖、維生素以及穀氨酸鈉(脫脂犛牛乳13份、犛牛奶油2份、殼寡糖4份、維生素I份、穀氨酸鈉I份)。
[0042]為了使得本發明上述實施例的藏靈菇菌凍幹發酵劑得到更好的應用，更加有效應用到發酵領域中，本發明還在上述實施例的基礎之上提供了實施例四，實施例四給出了上述實施例的藏靈菇菌凍幹發酵劑的製作方法，現做詳細的闡述和解釋，請參考圖1:
[0043]實施例四
[0044]請參考圖1，在本實施例中，藏靈菇菌凍幹發酵劑的製備方法包括以下步驟:
[0045]步驟101:從新鮮的藏靈菇中分離提取出乳球菌、乳明串珠菌、乾酪乳桿菌和酵母菌；
[0046]在步驟101中，對新鮮的藏靈菇進行處理，然後再通過分離、提取以及純化的操作，即可得到乳球菌、乳明串珠菌、乾酪乳桿菌和酵母菌，四種菌獲得之後需要保藏在4°C冰箱中備用。
[0047]步驟102:分別將所述乳球菌、乳明串珠菌、乾酪乳桿菌和酵母菌接入到犛牛脫脂乳培養基中，振蕩培養後離心，得到四種菌液沉積物；
[0048]在步驟102中，分別將4種菌利用犛牛脫脂乳培養基進行培養，進而獲得四種菌的純培養物，通過離心之後，即可獲得四種菌液沉積物。
[0049]步驟103:將四種所述菌液沉積物按照既定的體積比接種到犛牛脫脂乳培養基中，恆溫振蕩培養後離心，得到混合菌沉澱物；
[0050]在步驟103中，將獲得的4中菌液沉積物按照既定的體積比接種到犛牛脫脂乳培養基中，進行再次培養，通過離心後，獲得混合菌沉澱物。
[0051]步驟104:將所述混合菌沉澱物和保護劑按照既定的質量比混合，依次在4°C平衡20-25分鐘、在_30°C預凍40-50分鐘、在_80°C預凍60-70分鐘，最後進行真空冷凍乾燥，得到藏靈菇菌凍幹發酵劑；
[0052]在步驟104中，得到的混合菌沉澱物(絮狀液體)，將其以既定的比例和保護劑混勻，通過平衡、預凍之後，進行真空冷凍乾燥，進而獲得粉末狀的凍幹發酵劑，得到發酵劑之後在4 C冰箱中保存，待用。
[0053]此外，為了使得上述的方法更加清楚明了、便於實施，本發明還在上述實施例四的基礎之上提供了實施例五，實施例五是對實施例四提供的方法做出的進一步的限定以及增力口，具體的步驟請參考以下內容:
[0054]實施例五
[0055]本實施例的藏靈菇菌凍幹發酵劑的製備方法具體包括以下步驟:
[0056]S1:將新鮮的藏靈菇進行研磨勻漿，得到均漿液；
[0057]具體的，藏靈菇採用西藏當地的新鮮藏靈菇取(其重量約為5g)，無菌條件下研磨勻漿，進而得到勻漿液。[0058]S2:將均漿液振蕩搖勻後用無菌生理鹽水稀釋，得到不同稀釋倍數的菌懸液；
[0059]在稀釋的過程中，取ImL勻漿液，加入9mL無菌生理鹽水，稀釋成10'再吸取ImL上級稀釋液加入到9mL無菌生理鹽水中稀釋，配成10_2倍稀釋液，依次按10倍法稀釋，稀釋到10_7梯度。
[0060]在本實施例中，為了保證菌種的生長條件，接種的均漿液的稀釋倍數優選為:10_5、10_6、10_7濃度的梯度稀釋液(菌懸液)。
[0061]S3:利用培養基培養所述述菌懸液，並通過分離和純化，得到乳球菌、乳明串珠菌、乾酪乳桿菌和酵母菌；
[0062]具體的，將上述的稀釋液(菌懸液)取0.1mL倒入MRS培養基中，輕輕搖晃使液體均勻的平鋪在培養基上，37°C培養72小時。觀察培養基上菌落，挑取有透明圈的菌落，進行革蘭氏染色並觀察其形態。挑取革蘭氏染色陽性菌落再進行接觸酶實驗，陰性者為乳酸菌；將確定為乳酸菌菌落的再次在培養基上劃線培養，重複2-3次，直至鏡檢為純培養物止。純化後的菌株接種至MRS斜面上培養，培養後至4°C冰箱中保存備用。
[0063]另外，進一步的，為了分離出乳酸菌球菌，分別從上述2種菌懸液中選擇3個最高稀釋度，每個稀釋度取0.1ml，分別塗布於MRS+和LEE平板，30°C，培養48_72h，然後挑取不同形態的典型菌落製片，革蘭氏染色觀察並進行接觸酶試驗。凡屬革蘭氏陽性菌兼接觸酶陰性的菌落繼續在原培養基上劃線純化，重複3次，直至鏡檢為純培養物止。純化後的菌株接種至MRS斜面上培養，培養後至4°C冰箱中保存備用。
[0064]對於酵母菌的分離和純化，可以按照以下的操作進行:分別從2種菌懸液中選擇3個稀釋度，每個稀釋度取0.1ml分別塗布於YGC平板，30培養24_48h，挑取不同形態的單個菌落畫線純化，純化重複3次，直至鏡檢為純培養物止，純化後的菌株接種至YGC斜面培養基上，培養後至4°C冰箱中保存、備用。
[0065]另外，對於菌種的鑑定操作，乳酸菌的生理生化鑑定包括明膠液化試驗、石蕊牛乳試驗、吲哚試驗、澱粉水解試驗、產硫化氫試驗、硝酸鹽還原試驗、產黏液試驗及糖發酵試驗等完成。酵母菌的生理生化鑑定操作包括產澱粉類化合物試驗、尿素分解試驗、高滲透壓試驗、硝酸鹽同化試驗、產子囊孢子試驗、產擲孢子試驗、牛奶腖化試驗、同化乙醇試驗等完成。
[0066]具體的，通過上述的操作之後，從藏靈菇中分離到5株乳酸菌，其形態及部分生理學特性見表I。該5株菌均不運動，均在10°C下生長，45°C不生長，硝酸鹽還原、明膠液化、產硫化氫及澱粉水解試驗皆為陰性，其中ZLG2、ZLG4菌株產氣，且能在7% NaCl中生長，初步確定:ZLG2為乳酸乳球菌；ZLG4為乳明串珠菌；ZLG7為乾酪乳桿菌。具體結果請參照表
I:
[0067]表I藏靈菇中乳酸菌鑑定結果
[0068]
【權利要求】
1.一種藏靈菇菌凍幹發酵劑，其特徵在於，按照重量份數計，其原料組份包括: 從藏靈菇中分離出的混合菌沉澱物70-90份、保護劑10-30份； 其中，所述混合菌沉澱物為將按體積份數計的乳球菌菌液沉澱物1.5份-2.5份、乳明串珠菌菌液沉澱物3.5-4.5份、乾酪乳桿菌菌液沉澱物2.5-3.5份、酵母菌菌液沉澱物0.5-1.5份同時接種到犛牛脫脂乳培養基恆溫振蕩培養、離心後獲得的沉積物； 所述保護劑包括脫脂犛牛乳、犛牛奶油、殼寡糖、海藻糖、維生素以及穀氨酸鈉中的一種或多種。
2.根據權利要求1所述的藏靈菇菌凍幹發酵劑，其特徵在於，所述乳球菌菌液沉澱物、乳明串珠菌液沉澱物、乾酪乳桿菌菌液沉澱物和酵母菌菌液沉澱物為將從藏靈菇中分離出的乳球菌、乳明串珠、乾酪乳桿菌和酵母菌分別用犛牛脫脂乳培養基培養後通過離心獲得的絮狀沉積物。
3.根據權利要求2所述的藏靈菇菌凍幹發酵劑，其特徵在於，在所述保護劑中，按重量份數計；具體包括: 脫脂犛牛乳13份、犛牛奶油2份、殼寡糖4份、維生素1份。
4.根據權利要求2所述的藏靈菇菌凍幹發酵劑，其特徵在於，所述藏靈菇菌凍幹發酵劑為粉末狀。
5.一種根據權利要求1所述的藏靈菇菌凍幹發酵劑的製備方法，其特徵在於，包括以下步驟: (1)、從新鮮的藏靈菇中分離提取出乳球菌、乳明串珠菌、乾酪乳桿菌和酵母菌； (2)、分別將所述乳球菌、乳明串珠菌、乾酪乳桿菌和酵母菌接入到犛牛脫脂乳培養基中，振蕩培養後離心，得到四種菌液沉積物； (3)、將四種所述菌液沉積物按照既定的體積比接種到犛牛脫脂乳培養基中，恆溫振蕩培養後離心，得到混合菌沉澱物； (4)、將所述混合菌沉澱物和保護劑按照既定的質量比混合，依次在4°C平衡20-25分鐘、在_30°C預凍40-50分鐘、在-80°C預凍60-70分鐘，最後進行真空冷凍乾燥，得到藏靈菇菌凍幹發酵劑。
6.根據權利要求5所述的藏靈菇菌凍幹發酵劑的製備方法，其特徵在於，步驟(1)具體包括: 將新鮮的藏靈菇進行研磨勻漿，得到均漿液； 將均漿液振蕩搖勻後用無菌生理鹽水稀釋，得到不同稀釋倍數的菌懸液； 利用培養基培養所述述菌懸液，並通過分離和純化，得到乳球菌、乳明串珠菌、乾酪乳桿菌和酵母菌。
7.根據權利要求6所述的藏靈菇菌凍幹發酵劑的製備方法，其特徵在於，在步驟(2)中，具體包括: 分別將所述乳球菌、乳明串珠菌、乾酪乳桿菌和酵母菌按照3.5%的接種量接入到犛牛脫脂乳培養基中，在28-31°C、轉速180-190轉/分，培養4_5小時後離心，得到四種菌液沉積物。
8.根據權利要求7所述的藏靈菇菌凍幹發酵劑的製備方法，其特徵在於，在步驟(3)中:所述恆溫振蕩培養的溫度為37-42°C、時間為4小時-6小時、轉速為180轉/分-220轉/分； 所述離心的轉速為5000轉/分鐘、時間為5分鐘。
9.根據權利要求5-8任一項所述的藏靈菇菌凍幹發酵劑的製備方法，其特徵在於，每100mL所述犛牛脫脂乳培養基中，包括: 葡萄糖1.5-2.5g、犛牛肉膏0.8-1.2g、檸檬酸三銨0.2g、乙酸鈉0.5g、MgSO4.7Η200.058g、MnSO4.4Η200.025g、VB60.06g、吐溫 7_9ml，餘量為蒸餾水。
【文檔編號】A23C9/12GK103999934SQ201410243682
【公開日】2014年8月27日 申請日期:2014年6月3日 優先權日:2014年6月3日
【發明者】色珠, 佘永新, 馬興斌, 吳金措姆, 拉巴次旦, 巴桑旺堆, 朱彥賓, 四朗玉珍, 羅布頓珠, 姚海潮, 班旦 申請人:西藏自治區農牧科學院畜牧獸醫研究所