含蘆丁、柚皮苷的抗痔瘡提取物的製備方法
2023-10-22 19:18:42 2
專利名稱：含蘆丁、柚皮苷的抗痔瘡提取物的製備方法
技術領域：
本發明涉及一種含,丁 、柚皮苷的抗痔瘡提取物的製備方法。
技術背景痔瘡是一種常見病、多發病，中國自古就有"十人九痔"之說。中國專利申請號200710124647.5，名稱為"一種抗痔瘡藥物組合物，，文獻公開了含 蘆丁、柚皮苷重量百分比為0. 8~4:1的抗誇瘡組合物，具備顯著的抗誇瘡作 用。並具體公開了兩種製備方法， 一是直接混合,丁、柚皮苷；二是直接水 提法或含水乙醇提取法，即選中藥材枳殼、槐花(或槐米)，加水煎煮，收集 提取液，提取液濃縮，千燥，收集，得到的中藥提取物；或取中藥材加乙醇 回流提取，收集提取液，濃縮，乾燥，所得。直接混合法所用的,丁、柚皮 苷均是純品，這兩種化合物純品通過中藥提取的製備工藝及純化非常複雜， 純化路線煩瑣，成本代價很高；通過西藥合成的代價成本也很大，製備抗痔 疳組合物的成本也會比較高。而直接水提法或含水乙醇提取法製備的組合物 中所含其他水溶性成分會較多，如蛋白質、糖、胺基酸等，且在製備過程中 提取了部分生物鹼成分如辛弗林(能興奮a受體，使血壓升高，且能強心， 抗休克)及N —曱基酪胺等，這些生物鹼成分為非黃酮類物質、非抗痔瘡成 分，會影響了抗痔瘡組合物的純度。也正因為水溶性成分多，樣品為粘膏狀， 濃縮、乾燥轉移操作極其麻煩，轉移過程中有效成分損失較大，重複性不好， 形成的樣品也不便於保存，極易吸潮，生菌黴變。同時，由於原粗提物為浸 膏，樣品其他雜質多，樣品分析前的前處理比較複雜，稀釋和轉移步驟較多， 導致直接分析方法煩瑣。另外，申請人也採取了常規的大孔樹脂的製備工藝，從藥材提取，上樣、 洗脫乙醇濃度、乾燥等任意工藝參數去製備，發現製備的產品較難符合專利
申請號200710124647. 5文獻公開的含蘆丁、柚皮苷一定重量百分比為0. 8 ~ 4:1，且產品性狀，粘度，吸溼性均太強、含糖量高、非黃酮類成分生物鹼類 成分難去除。且保存，製劑加工非常不便。本發明正是基於以上製備及分析方法存在問題，對該抗痔瘡組合物進行 了深入系統的研究和試驗，完成了新的製備工藝，實施了新的適合工業化生 產的製備方法，較好地完成了其工業化的製備工藝，並建立了快速的高效液 相的質量分析方法。 發明內容本發明的目的在於提供一種含聲丁、柚皮苷抗誇瘡提取物的製備方法。本發明的主要方面，首次對二者藥材進行大孔樹脂吸附製備工藝的研究， 實質是提供了一種總黃酮的大孔樹脂吸附純化方法，該純化方法是將二者藥 材液經上樹脂柱、洗脫、收集洗脫液、濃縮、乾燥，獲得純化的總黃酮，從 而有效地富集了總黃酮，並去除了雜質等。該提取物的製備方法，提取藥材選自枳殼、槐花或槐米，包括以下步驟1)藥材用含水乙醇或水提取；2 )減壓濃縮步驟1)所得提取液；3) 以水稀釋濃縮液，並作澄清處理，取上清液；4) 取上清液，過大孔樹脂柱吸附，棄流出液，然後用水(用1%鹽酸調節 PH為5~6)洗滌所述吸附柱，棄水洗液；再用中性水溶液洗脫，棄水洗液， 之後，採用乙醇洗脫吸附柱並收集該乙醇洗脫液；5) 濃縮、乾燥乙醇洗脫液，得到總黃酮提取物。 其中步驟1)中，所述含水乙醇提取是指以含水乙醇或水作溶劑，採用本領域 內已知的常規技術提取。例如，熱回流提取、滲漉法提取、連續逆流提取等。 其中，所述含水乙醇是指IO倍體積(與藥材重量比)濃度為50~80°/。的乙醇 水溶液。舉例來說，對於熱回流提取，其溶劑用量為藥材重量的8~10倍(溶 劑體積/藥材重量，V/W);提取次數為2 3次；加熱溫度可以為60 ~ 85°C。步驟2)中，提取液濃縮後，其體積(L)優選為原藥材(kg)的6~10 倍體積。步驟3 )中，濃縮液優選以加3 ~ 5倍體積的水稀釋。步驟4 )中，吸附柱吸附提取液後，優選用1 ~ 5BV (用1%鹽酸調節PH為 5 ~ 6 )的水洗滌，洗脫液流速優選為0. 5 ~ 2. 5BV/hr;再用中性水溶液洗脫， 棄水洗液，1 ~ 5BV,洗脫液流速優選為0. 5 ~ 2. 5BV/hr。(上述BV ( Bed Volum ) 為樹脂柱裝載的樹脂後的柱床體積。樹脂柱的處理能力與它的樹脂裝載量成 正比。洗脫液的流量和速率以BV或BV/hr為計算單位。)所述大孔樹脂通常為苯乙烯型共聚體的含有酯基或氰基的中等極性吸附 樹脂，其結構為大孔網狀結構，例如D-101大孔樹脂、SIPI-40大孔樹脂、 SIPI-21大孔樹脂或SIPI-8大孔樹脂等。在上樣前，應當對大孔樹脂進行前處理，，防止無樹脂殘存的有害物質、 汙染及樹脂再生。在樹脂前處理時，通常先用5%HC1洗脫，後用純化水洗至 中性，再用2y。Na0H洗脫，後用純化水洗至中性，連續生產時，用95%乙醇洗 柱，後用純化水洗至醇為零度，即可再次使用。步驟5中，得到的抗誇齊提取物進行乾燥處理，得到乾燥形式的提取物， 所用的乾燥方法包括真空千燥、噴霧乾燥和冷凍乾燥等。在採用上迷工藝製備提取物之前，通常需要先將該抗疳瘡藥材進行前處 理，即將藥材洗淨，曬乾，粉碎，過篩。本發明的積極效杲1、 提取效率高。本發明提供的製備工藝能有效地富集主要活性成分一一 總黃酮，但,丁、柚皮苷重量百分比仍在O. 8-4:1範圍內。2、 本發明和常失見大孔樹脂製備方法不同，採取兩步溶液去雜法，同時去 除了各種糖類及生物鹼等非黃酮類成雜質先用ly。鹽酸調節PH為5~6，洗 滌所述吸附柱，棄水洗液；再用中性水溶液洗脫，棄水洗液。該關鍵步驟中， 先用酸性水溶液，將非黃酮類成分生物鹼如辛弗林和N —甲基酪胺能及時洗 除，後用中性水溶液洗脫，將糖類等成分去除。為本發明的大孔樹脂製備方
法的創新。3、 該製備工藝重複性好，工藝參數可控，溶劑安全無汙染。4、 提取物體積小，提高了中藥的內在質量；去除了大量的無機鹽、粘液 質等，從而增強了產品的穩定性。5、 減少了產品的吸潮性所得產物為固體黃色粉末，非浸膏狀，不易吸 溼，不易吸潮。非常便於保管，保存，6、 便於成型及使用容易製備成外觀美觀的各種劑型；直接便於臨床及 製劑使用。7、 產物雜質去除的多，導致分析方法前處理簡單，方便，使建立的高效 液相分析方法更加靈敏，準確，快速(其質量控制方法可通過紫外分光光度 方法和高效液相分析方法進行含量測定和高效液相指紋圖譜進行分析，該分 析方法簡單易控)。8、 大孔樹脂再生處理方便，大大降低了工藝成本。9、該總黃酮提取物具有明顯的抗痔瘡的作用，二者含量的適合配比能夠 達到良好治療效果；與其中所含單一成分相比，提取物作用均較單一黃酮明 顯。急性毒性試驗結果表明，該提取物的毒性低，具有很好的用藥安全性， 這充分提示了本工藝製備的抗疳瘡提取物的臨床用藥的安全性。總之，本發明提供的抗疳瘡提取物製備工藝簡便、快捷、重現性好，汙 染小，適合工業化生產，具有很大的實用性。為了更好地理解本發明的本質，下面結合附圖，通過對本發明較佳實施 方式的描述，詳細說明但不限制本發明。
圖1是蘆丁對照品HPLC圖譜。圖2是柚皮苷對照品HPLC圖譜。圖3是含^"丁、柚皮苷抗癢瘡提取物實施例樣品HPLC代表性圖譜。
具體實施方式
本發明所用的抗誇瘡藥材均經鑑定為槐米為豆科植物槐(S叩horaJaponicaL.)的乾燥花蕾，其千燥花為槐花，枳殼為芸香科植物酸橙(C"r^ awra/ 〃咖Z..)及其栽培變種的乾燥未成熟果實。實施例1含，丁、柚皮普抗疳掩提取物的製備方法。從二者藥材中提取 總黃酮提取物取中藥材枳殼、槐花(或槐米)各100/>斤，加入800kg的5W乙醇， 加熱回流提取3h，濾過，藥渣繼續加700公斤50%乙醇回流提取2h,濾過， 藥渣繼續加600 />斤50%乙醇，濾過，三次提取液合併，減壓回收溶劑，溫度 45~80°C，濃縮到原藥材的IO倍體積，將濃縮液加3倍熱水稀釋，加入適量 中藥澄清劑ZTCA+B，離心，去沉澱，取上清液，上樣於D101大孔樹脂柱(在 上樣前分別用酸，鹼，水，醇對樹脂柱進行前處理)，上樣後先用1BV水(用 1%鹽酸調節PH為5 ~ 6 )洗滌所述吸附柱，棄水洗液；再用中性1BV水溶液洗 脫，水溶液棄除，改用2BV的70°/。乙醇洗脫，洗脫液流速為0. 5BV/h，收集該 乙醇洗脫液。繼續減壓回收溶劑，收集漫膏，噴霧乾燥，即得。實施例2含蘆丁、柚皮苷抗疳齊提取物的製備方法。從二者藥材中提取 總黃酮提取物取中藥材枳殼、槐花(或槐米)各100公斤，加入1噸的85°/。乙醇，力口 熱回流提取3h,濾過，藥渣繼續加1噸乙醇回流提取2h，濾過，兩次提取液 合併。減壓回收溶劑，溫度45 8(TC，濃縮到原藥材的8倍體積，將濃縮液 加5倍熱水稀釋，加入適量中藥澄清劑ZTC A+B,離心，去沉澱，取上清液， 上樣於DIOI大孔樹脂柱(在上樣前分別用酸，鹼，水，醇對樹脂柱進行前處 理)，上樣後先用5BV水(用1%鹽酸調節PH為5 ~ 6 )洗滌所述吸附柱，棄水 洗液；再用中性5BV水溶液洗脫，水溶液棄除，改用5BV的70y。乙醇洗脫，洗 脫液流速為2. 5BV/h,收集該乙醇洗脫液。繼續減壓回收溶劑，收集浸膏，噴 霧乾燥，即得。實施例3抗痔疳提取物的質量分析下列質量分析中所用樣品包括按實施例1的方法，製備的抗痔瘡總黃酮提取物，共2個批號。
按實施例2的方法，製備的抗癢瘡總黃酮提取物，共3個批號 1、含量分析1. 1蘆丁、柚皮香的含量測定採用高效液相色譜法(HPLC)，以,丁、柚皮苷為對照品，測定總黃酮提 取物中二者的含量比例為0. 8 ~ 4: 1。 1. 2. 1色譜條件高效液相色譜儀HP1100系列(美國惠譜公司)，用十八烷基矽烷健合矽 膠為填充劑，C18色譜柱，用十八烷基矽烷健合矽膠為填充劑，色譜柱依利 特Kromasil C18， 5 ju m 4. 6 x 250mm， E1812223。流動相乙腈-0. 05M醋酸 銨溶液(醋酸調PH-5 ) (20: 80)柱溫3(TC。；險測波長283nm、 257nm (DAD^企測儀)。1. 2. 2標準品溶液配製(1) 柚皮苷對照品精密稱取在105。C下乾燥至恆重的柚皮苷標準品 18.53mg，置100ml容量瓶中，加曱醇溶解，定容，即得0. 1853mg/ml的柚皮 苷對照品儲備液。精密量取上述柚皮普對照品儲備液3ml，用曱醇稀釋定容至 10ml,即得濃度為0. 05559mg/ml對照品溶液。(2) 蘆丁對照品精密稱取減壓乾燥至恆重的蘆丁標準品10. 08mg，置 100ml容量瓶中，加甲醇溶解，定容，即得0. 1008mg/ml的,丁對照品儲備液。 供試品溶液的製備將定容至500ml的提取液樣品分別精密吸取2ml，用曱醇 稀釋定容至50ml，搖勻，即得。1.2.3測定方法將對照品和供試品溶液濾過，進樣量10jal，注入色譜儀 測定，即得。1. 2. 4結果柚皮苷、蘆丁對照品及實施例樣品HPLC代表性圖譜如圖l-3所示。五批 測定結果表明；,丁和柚皮香的含量範圍在1.05-2.1:1。2、 雜質分析糖類成分分析重蒸水為空白對照，與蒽酮.碌u酸試液顯色後，於625nm
處測吸光度。以吸光度(對葡萄糖質量濃度進行回歸分析，得出其回歸方程， 表明葡萄糖質量濃度在，據吸光度來計算其含量。結果五批測定結果表明，含量分別為7%, 8%， 9%， 7%， 5%，平均含量為7%，而直接水提或醇提後粗提 的結果，多糖含量為20%。顯然通過兩種方法能直接明顯降低雜質多糖含量。生物鹼成分分析取實施例1和2的5個批號的樣品曱醇液超聲15 min, 以辛弗林和N —甲基酪胺作對照品，以氯仿曱醇丙酮氨水(3: 3: 3: l)作展開劑。噴O. 5%茚三酮乙醇液，結果5個批號的樣品均無這兩個對照品， 而直接水提或醇提的粗提物均有這兩個對照品，說明雜質得到去除。3、吸溼性實驗分別取實施例1和實施例2的5個批號的樣品，均放在25°C ± rC恆溫幹 燥器(下部放置氯化銨飽和溶液)，相對溼度為80% ±2%,放置24h,稱重， 結果，實施例1和實施例2樣品增重百分率為4%~ 6%,而水提物的增重率為 28%,醇提物的增重率為25%,可見，實施例1和實施例2的吸溼性遠優於水 提物或醇提物，易於進一步製劑，生產及保存。以上對本發明的詳細描述並不限制本發明，本領域技術人員可以根據本 發明作出各種改變和變形，只要不脫離本發明的精神，均應屬於本發明所附 權利要求所定義的範圍。
權利要求
1、一種含有蘆丁、柚皮苷的抗痔瘡提取物製備方法，提取藥材選自枳殼、槐花或槐米，包含下列步驟1)藥材用含50～80％的乙醇或水溶液提取；2)減壓濃縮步驟1)所得提取液；3)以水稀釋濃縮液，並作澄清處理，取上清液；4)取上清液，過大孔樹脂柱吸附，棄流出液；然後用PH值為5～6的水洗滌所述吸附柱，棄水洗液；再用中性水溶液洗脫，棄水洗液，之後，採用乙醇洗脫吸附柱並收集該乙醇洗脫液；5)濃縮、乾燥乙醇洗脫液，得到總黃酮提取物；其中，所述的含有蘆丁、柚皮苷的抗痔瘡提取物，蘆丁與柚皮苷二者重量百分比為0.8～4∶1。
2、 如權利要求1所述的製備方法，其特徵在於所述的步驟4)中，在 上樣前，對大孔樹脂進行前處理；所述大孔樹脂為苯乙烯型共聚體的含有酯 基或氰基的中等極性吸附樹脂，其結構為大孔網狀結構。
3、 如權利要求2所述的製備方法，其特徵在於所述的對大孔樹脂前處 理採用5%HC1洗脫，後用純化水洗至中性，再用2WaOH洗脫，後用純化水洗 至中性。
4、 如權利要求2所述的製備方法，其特徵在於連續生產時，用95%乙 醇洗柱，後用純化水洗至醇為零度。
5、 如權利要求4所述的製備方法，其特徵在於所述的步驟l)中，其溶劑用量為藥材重量的8~ IO倍；提取次數為2 3次；加熱溫度為60~85°C;所述的步驟2)中，提取液濃縮後，其體積為原藥材的6~10倍； 所述的步驟3 )中，濃縮液以加3 ~ 5倍體積的水稀釋； 所述的步驟4)中，吸附柱吸附提取液後，優選用1 5BV用1%鹽酸調節 H為5 ~ 6的水洗滌，洗脫液流速優選為0. 5 ~ 2. 5BV/hr;再用中性水溶液洗 脫，棄7K洗液，1~5BV，洗脫液流速優選為0. 5 ~ 2. 5BV/hr;洗脫乙醇優選50 ~ 90%乙醇水溶液，洗脫2 ~ 5BV，洗脫液流速優選為0. 5 ~ 2. 5BV/hr。
全文摘要
本發明公開了一種抗痔瘡提取物及其製備方法。該提取物是從槐米、槐花或枳殼提取而得，總黃酮的含量為55％～90％；其中蘆丁、柚皮苷二者含量百分比為0.8～4∶1。從槐米和枳殼藥材為源頭，按照了大孔樹脂的製備工藝及水煮醇沉的方法，較好地完成了其工業化的製備工藝方法。所選用大孔樹脂製備工藝具有簡單、方便，重現性好，有效地富集了黃酮類成分，祛除了其非黃酮類成分如三萜類化合物、甾體等，成品質量易控制，含量高，提取效率高，可工業化生產等優點。本發明還提供了包含所述抗痔瘡總黃酮提取物的藥物組合物。該抗痔瘡總黃酮提取物具有良好的抗痔瘡作用、各種炎症等疾病。
文檔編號A61P9/14GK101396460SQ20081021698
公開日2009年4月1日 申請日期2008年10月29日 優先權日2008年10月29日
發明者嚴啟新, 馮漢林, 勇 李, 姿 李, 趙金華, 媛 高 申請人:深圳海創醫藥科技發展有限公司