神經性疼痛治療劑和/或預防劑的製作方法

2023-10-22 23:03:47 1

專利名稱：神經性疼痛治療劑和/或預防劑的製作方法
技術領域：
本發明涉及對神經性疼痛有速效鎮痛效果的降鈣素製劑。
背景技術：
神經性疼痛(也稱神經源性疼痛或神經病理性疼痛，但在下面的本申 請說明書中稱作神經性疼痛)是由於末梢或中樞神經系統的功能異常而導 致的難治性疼痛。神經性疼痛是通過由外傷、感染、癌、貧血、糖尿病 等代謝障礙等所引起的神經障礙而發病的。其發病機理尚有許多不明之 處，但據認為其是由於感覺神經的異常持續性放電等所導致的。神經性 疼痛的典型性症狀包括異常性疼痛、痛覺過敏或感覺過敏等。這些症狀 表現為出現"灼燒感"、"針刺感"或"觸電感"等特徵的疼痛。已知通 常對傷害感受性疼痛有效的鎮痛劑特別是麻醉性鎮痛藥等對神經性疼痛 效果不大(非專利文獻1)。以往，作為鎮痛藥已知有以嗎啡為代表的中樞
性阿片類鎮痛藥、以吲哚美辛為代表的非甾體類抗炎藥(NSAIDs)等，但 是，這些藥物對神經性疼痛的效果低，像NSAIDs對急性疼痛那樣僅阻 斷致痛物質的生成而不能消除疼痛。
另外，己知嗎啡對傷害感受性疼痛具有強鎮痛作用，但對神經性疼 痛的效果不足(非專利文獻2)。據認為，嗎啡對神經性疼痛無效的原因在 於，神經障礙導致神經發生功能上和形態上的變化，導致抑制性神經元 的變性、阿片受體減少(非專利文獻3)。
因此認為神經性疼痛的產生與多種因素存在複雜的關係。迄今，作 為治療方法，採用的是阻滯神經傳導、硬脊膜外電刺激等神經外科治療(非 專利文獻4);腰部椎管內給予巴氯芬(非專利文獻5)等。
另外，在疼痛治療中，發現了持續性疼痛導致神經網絡的可塑性變 化，疼痛向難治性疼痛轉變的問題，因此，疼痛的早期控制是最大的課
題之一(非專利文獻6)。並且，期待有能在直至神經障礙治癒的長期進行 疼痛控制的安全性高的藥物。
另一方面，降鈣素製劑被用於高鈣血症和骨質疏鬆症的治療，其通 過破骨細胞的降鈣素受體發揮作用。破骨細胞的受體持續使降鈣素髮揮 作用時，有可能陷入引起負向調節而不能控制血清的鈣濃度的狀態。迄 今，尚沒有報告指出血清鈣濃度的變化與鎮痛作用的有效濃度相背離(乖 離)，所以降鈣素製劑是每天給藥或每周一次的間歇給藥。
迄今己知降鈣素對某種疼痛具有鎮痛作用，並且己知對於不同種類 的疼痛，其作用機理不同。例如，對於炎症性疼痛，有報告指出其具有 抑制前列腺素產生的作用並參與腦內上行性的血清素神經系統。另外， 對於骨轉移癌的疼痛，已知其具有在骨轉移部位抑制骨吸收的作用和引
起(3-內啡肽(內源性阿片類物質)的分泌的作用。但是，就像NSAIDs和嗎
啡對神經性疼痛的效果不大那樣，完全不能期待基於這些機理的實質性 的作用表現。對於由於末梢神經障礙引起的神經性疼痛，認為是引起了 感覺神經的異常持續性放電、閾值下降和痛覺過敏。據報告，這些現象 是由感覺神經中的電壓依賴性鈉通道等的基因表達變化所引起的，所以
認為其是與其他疼痛相獨立的病狀(非專利文獻7、非專利文獻8)。
雖然有臨床報告指出，降鈣素製劑的間歇給藥對各種神經性疼痛有
效，但是效果的顯現需要時間，並且實質上其效果也完全不充分(非專利
文獻9、非專利文獻IO)。
如上所述，在神經性疼痛的治療中，尚沒有確立安全且具有速效性
的有效治療方法，渴望開發出新的治療方案。
非專利文獻1: The Lancet 353, 1959-1966, 1999
非專利文獻2:醫學o & ^辦(醫學進展)，189(10), 751-755， 1999
非專利文獻3:最新脳i神經科學'〉V —《'第6巻痛* O神經科
學^ 'y'力》ti'二一社(最新腦神經科學系列，第6巻，疼痛的神經科學，
醫學瞭望)p97, 1997年
非專利文獻4:醫學o^辦(醫學進展)，189(10)， 757-762 非專利文獻5:機能的脳神經外科(功能性腦神經外科)33 45-49, 1994
非專利文獻6:熊澤孝郎；痛* ii歪tT(疼痛扭曲)。脳全知3(了解
大腦)，久野宗主編，秀潤社，106-116,1999
非專禾U文獻7: Boucher TJ et al: Potent analgesic effects of GDNF in neuropathic pain states. Science, 2000, 290, 124-127
非專利文獻8: Hong S et al， Early painful diabetic neuropathy is associated with differential changes in tetrodotoxin-sensitive and resistant sodium channels in dorsal root ganglion neurons in the rat. J Biol Chem. 2004 Jul 9; 279(28): 29341-50
非專禾lj文獻9: Wade S et al: A critical reviews of controlled clinical trials for peripheral neuropathic pain and complex regional pain syndromes, PAIN, USA, 1997， 73, 123-139
一一專禾(J文獻 10: Antonio Quatraro， calcitonin in painful diabetic neuropathy, THE LANSET, 1992， 339, 746-74
發明內容
本發明的目的是提供一種對神經性疼痛具有速效性的優異鎮痛作用 的新藥物。
為了解決上述課題，本發明人著眼於降鈣素、特別是依降鈣素，進 行了深入研究。從降鈣素迄今已知的鎮痛作用的作用機理或對神經性疼 痛間歇給藥的成果考慮，認為以降鈣素為有效成分難以開發出實質上有 效的神經性疼痛的治療藥，但是，從發現了降鈣素具有修復感覺神經中 鈉通道的基因表達的作用(伊藤等Osteoporosis Japan, 2005， 13巻，1號， 78-80)的方面考慮，啟發了降鈣素具有全新的其他鎮痛藥理作用機理，對 該鎮痛作用機理的最佳表達進行了研究。具體地說，使用神經性疼痛的 模型評價體系，深入研究降鈣素的給藥方法，以發揮對神經性疼痛的速 效性鎮痛效果，並且不引起血清鈣值的變動，結果意外地發現，持續使 用降鈣素、特別是依降鈣素時，表現出了具有速效性的強鎮痛作用，並 且持續給予不引起血清鈣變動的用量也表現出了相同的效果，基於該認 識，完成了本發明。
艮口，本發明涉及如下技術方案
(1) 一種神經性疼痛治療劑和/或預防劑，其含有降鈣素作為有效成 分，該治療劑和/或預防劑的特徵在於，降鈣素以不引起血清鈣值變動的 量給藥；
(2) —種神經性疼痛治療劑和/或預防劑，其含有降鈣素作為有效成
分，該治療劑和/或預防劑的特徵在於，降鈣素以小於0.093mU/kg/秒的量 給藥；
(3) 如(l)或(2)所述的神經性疼痛治療劑和/或預防劑，其特徵在於， 將所述治療劑和/或預防劑持續給藥；
(4) 如(3)所述的神經性疼痛治療劑和/或預防劑，其特徵在於，持續給 藥中每單位時間(秒)內的降鈣素給藥量為引起血清鈣值變動的每單位時
間(秒)內的降鈣素閾值給藥量的四分之一 以下的量；
(5) 如(3)或(4)所述的神經性疼痛治療劑和/或預防劑，其特徵在於， 持續給藥的時間為8小時以上；
(6) 如(i;) (5)任一項所述的神經性疼痛治療劑和/或預防劑，其特徵 在於，神經性疼痛是由於末梢神經的壓迫或末梢神經的損傷所引起的；
(7) 如(l) (6)任一項所述的神經性疼痛治療劑和/或預防劑，其中， 所述降鈣素是依降鈣素；
(8) —種神經性疼痛治療劑和/或預防劑，其是含有降鈣素作為有效成 分用於持續給藥的神經性疼痛治療劑和/或預防劑，該治療劑和/或預防劑 的特徵在於，劑型是緩釋製劑、點滴製劑或粘附製劑中的任一種；
(9) 如(8)所述的神經性疼痛治療劑和/或預防劑，其特徵在於，緩釋制 劑的製劑形式是注射製劑、植入製劑、經皮製劑、鼻用製劑、肺吸入制 齊U、 口服製劑中的任一種；
(10) 如(8)或(9)所述的神經性疼痛治療劑和/或預防劑，其特徵在於， 持續給藥中每單位時間(秒)內的降鈣素給藥量為引起血清鈣值變動的每 單位時間(秒)內的降鈣素閾值給藥量的四分之一 以下的量；
(11) 如(8) (10)任一項所述的神經性疼痛治療劑和/或預防劑，其特 徵在於，持續給藥的時間為8小時以上；(12)降鈣素在製造Cl) (ll)任一項所述的神經性疼痛治療劑和/或預
防劑中的應用。
根據本發明，能夠提供可減少給藥對患者造成的負擔和副作用、效 果更高的具有速效性的神經性疼痛治療劑和/或預防劑。


圖1給出了針對坐骨神經卡壓模型的痛覺閾值的低落而持續給予依 降鈣素時的痛覺閾值的變化。
**:卡壓手術前和手術後的痛覺閾值用t檢驗比較時p〈0.01
#:賦形劑給予組和依降鈣素0.75mU/kg/周給藥組的痛覺閾值用 Williams test進行比較時p<0.025
# #:賦形劑給予組和依降鈣素0.75mU/kg/周給藥組的痛覺閾值用 Williams test進行比較時p<0.005
圖2給出了對坐骨神經卡壓模型持續14天給予依降鈣素後(圖i的 試驗結束後)的血清鈣濃度。
圖3給出了針對坐骨神經卡壓模型的痛覺閾值的低落而持續給予依 降牽丐素時的痛覺閾值的變化。
##:卡壓手術前和手術後的痛覺閾值用t檢驗進行比較時p〈0.01
**:賦形劑給予組和依降鈣素給藥組的痛覺閾值用Williams test進 行比較時p〈0.005
圖4給出了對坐骨神經卡壓模型的痛覺過敏持續給予依降鈣素時給 藥開始的第二天的縮爪潛伏期。並且給出了手術前的值作為參考。
# #:賦形劑給予組和依降鈣素各給藥組的縮爪潛伏期用Williams test 進行比較時p〈0.005
圖5給出了針對坐骨神經卡壓模型的痛覺閾值的低落而持續給予依 降鈣素時的痛覺閾值的變化。
# #:卡壓手術前和手術後的痛覺閾值用t檢驗進行比較時p<0.01 **:賦形劑給予組和依降鈣素給藥組的痛覺閾值用Williams test進
行比較時p〈0.005
圖6給出了針對坐骨神經卡壓模型的痛覺過敏而靜脈持續點滴給予
依降鈣素時的痛覺閾值。還給出了手術前值(pre)作為參考。
# #:賦形劑給予組和依降鈣素各給藥組的痛覺閾值用t檢驗進行比
較時p<0.01
圖7給出了針對坐骨神經卡壓模型的痛覺過敏而給予依降鈣素 -PLGA微球(EL-PLGA)時的痛覺閾值。右圖是左圖的放大圖。僅右圖用 下述的符號表示統計學上的顯著性差異。*或**:生理鹽水給藥組和 EL-PLGA給藥組的痛覺閾值用t-檢驗進行比較時p<0.05或p<0.01
圖8給出了使用坐骨神經卡壓模型間歇給予依降鈣素時的痛覺閾值 的變化。
箭頭表示通過皮下給藥間歇給予賦形劑或依降鈣素的一天。 **:卡壓手術前和手術後的痛覺閾值用t-檢驗進行比較時p〈0.01 #:賦形劑給予組和依降f丐素各給藥組的痛覺閾值用Williams test進 行比較時p〈0.025
# #:賦形劑給予組和依降鈣素各給藥組的痛覺閾值用Williams test 進行比較時p〈0.005
圖9給出了針對坐骨神經卡壓模型的痛覺過敏或痛覺閾值的低落而 間歇給予依降鈣素時給藥2周後的縮爪潛伏期或痛覺閾值。
**:賦形劑給予組和依降鈣素各給藥組的縮爪潛伏期用Williams test 進行比較時p〈0.005
圖10給出了對正常大鼠單次皮下給予依降鈣素時的血清鈣濃度的 變化(給藥後60分鐘)。
圖ll給出了對正常大鼠單次皮下給予依降鈣素時的血清鈣濃度的變 化(給藥後30分鐘)。
具體實施例方式
下面對本申請發明進行具體說明。
作為本發明的神經性疼痛治療劑和/或預防劑的有效成分有用的降 鈣素包括各種天然型降鈣素或其肽類似物等。作為天然型降鈣素的例子，
可以舉出雞降鈣素、鰻魚降鈣素、人降鈣素、鮭降鈣素或豬降鈣素等，
作為優選的例子，可以舉出鰻魚降鈣素、鮭降鈣素(Helv. Chim. Acta(1969), 52(7), 1789-95)，作為特別優選的例子，可以舉出鰻魚降鈣素。另外，作 為其他方式，有時也優選鮭降鈣素。
作為天然型降鈣素的肽類似物的例子，可以舉出基於上述的天然型 降鈣素的結構對其l、 7位的二硫鍵進行化學修飾所得到的化合物等，作 為優選的例子，具體可以舉出[ASUl-7]雞降鈣素、[ASUl-7]鰻魚降鈣素(特 公昭53-41677號公報記載的化學名為l-丁酸-7-(L-2-氨基丁酸)-26-L-天冬 氨酸-27-L-纈氨酸-29-L-丙氨酸降鈣素；下面有時也稱"依降鈣素")等， 作為特別優選的例子，可以舉出[ASUl-7]鰻魚降鈣素(依降鈣素)。
作為本發明的神經性疼痛治療劑和/或預防劑的有效成分有用的降 鈣素特別優選依降鈣素或鮭降鈣素，最優選依降鈣素。 —
另外，作為本發明的神經性疼痛治療劑和/或預防劑的有效成分，還 可以使用作為本發明的神經性疼痛治療劑和/或預防劑的有效成分有用的 降鈣素與可藥用酸的鹽。作為與可藥用酸的鹽，可舉出例如與鹽酸、硫 酸等無機酸的鹽；與乙酸、酒石酸、琥珀酸、蘋果酸等有機酸的鹽等作 為優選的例子。
另外，還可以根據常規方法使用可藥用的載體製成醫藥組合物。 本發明的持續給藥是指將藥物在一定時間以上連續地釋放到體內的 給藥方法，只要是全身性給藥或向末梢組織局部給藥，則與給藥途經無 關，例如可以舉出使用灌輸泵或輸液泵等設備給藥或者手動給藥、以生 物體內分解的高分子作為載體的緩釋製劑等。另外，還包括通過PEG(聚 乙二醇)化等延長效力來控制降鈣素的給藥量的給藥方法。與此相對，間 歇給藥是指，隔開一定時間，不連續地一次以上優選幾次向體內給予藥 物或釋放藥物。
作為適合降鈣素的持續給藥的劑型，可以舉出緩釋製劑、點滴製劑、 粘附製劑等。粘附製劑還包括在對皮膚的粘附面設有微細的針並由此滲 出藥物的類型的製劑。具體地說，可以舉出例如注射液的點滴製劑或持 續輸注製劑以及緩釋製劑。在緩釋製劑的製劑形式方面，可以舉出注射
製劑、植入製劑、經皮製劑、鼻用製劑、肺吸入製劑、口服製劑等。更 具體地說，作為緩釋製劑，例如可以舉出緩釋性注射製劑，使作為藥 物的降鈣素包含在微囊、乳劑、脂質體、油脂、乳酸-乙醇酸共聚物或聚 乳酸、羥基磷灰石等生物降解性微粒載體或非生物降解性微粒載體等中， 以注射劑的形式對皮下、皮內、肌肉內等給藥，在生物體內持續釋放藥 物；以及植入製劑，使藥物包含在生物降解性或非生物降解性的矽酮等 物質中，製成顆粒狀、針狀等的固形物，以植入到皮下等的形式給藥； 經皮製劑，使用吸收促進劑或電能或者以刮擦皮膚等物理方法提高藥物 的透過性，以含有藥物的粘附劑或膠布劑的形式從皮膚持續吸收藥物； 在對皮膚的粘附面設有微細的針的經皮製劑，包括藥物在控制下滲出的 類型和將藥物塗布在微細的針上的類型；鼻用製劑或肺吸入製劑等，使
用對藥物的分解和釋放進行控制的微囊或納米粒子等，通過黏膜等持續 吸收藥物；口服製劑，在其中添加消化道黏膜附著性高分子的片劑或膠 囊等；還有使用脂質體等的口服製劑等。
至於本發明的持續給藥時間，優選為8小時以上，更優選為12小時 以上，特別優選為16小時以上。給藥期可以舉出2個月以下，優選一個 月以下，更優選兩周以下。
根據後述的比較例1，可以認為，降鈣素間歇給藥帶來的鎮痛作用 是每次給藥的效果的累加。另外，間歇給藥的血中持續時間為2小時左 右。所以，重複進行2小時以上不足8小時的持續給藥，使24小時內累 加的持續給藥時間為8小時以上的給藥方法也在本發明的範圍內。
降鈣素對神經性疼痛的鎮痛效果一旦顯現出來，即使在停藥期該效 果也會至少持續一周，所以持續給藥結束後，追加間歇給藥能夠維持其 效果。也有適當組合持續給藥和間歇給藥的治療方法。
神經性疼痛是指由於外傷、壓迫、感染、貧血等或由於糖尿病等代 謝障礙等所導致的神經、神經叢或神經周圍軟組織發生損傷或變性的神 經障礙，由神經障礙引起的某種功能異常導致痛覺閾值下降等持續的疼 痛感覺的異常狀態。神經性疼痛包括自發性疼痛、痛覺閾值下降(對機械 刺激的疼痛感覺)、痛覺過敏(對有害刺激的過度應答)和感覺過敏(對接觸
的過度應答，也稱異常性疼痛)，但不限於這些。並且，有時還伴有麻木 或麻痺。
作為由末梢神經的障礙引起的神經性疼痛的疾病，可以舉出由末梢 神經的壓迫或末梢神經的損傷引起的神經性疼痛，特別可以舉出糖尿病 性神經病、卡壓性(壓迫性)末梢神經障礙、椎管狹窄症、椎間盤突出、腕
管症候群、反射交感性營養不良(RSD)、肩手症候群、CRPS(複雜性區域 疼痛症候群)I型、CRPS II型、帶狀皰疹後神經痛、HIV引起的神經障礙、 拔牙後等的非典型性面痛、三叉神經痛等。還可以舉出NSAIDs等消炎 鎮痛劑給藥後仍有殘存疼痛的術後痛、慢性類風溼性關節炎和骨關節炎 等。還可舉出纖維肌痛症、難治性局部疼痛症候群、與例如特發性或外 傷後神經病以及單神經炎這樣的神經病相伴隨的疼痛、癌浸潤神經引起 的神經性疼痛。還可以舉出NSAIDs等消炎鎮痛劑給藥後仍有殘存疼痛 的腰痛、頸肩僵硬、五十肩等。
由末梢神經的壓迫引起的神經性疼痛是由卡壓性(壓迫性)末梢神經 障礙、椎管狹窄症、椎間盤突出、腕管症候群等引起的神經性疼痛。卡 壓性(壓迫性)末梢神經障礙包括由頸椎病、肘管症候群、頸部變形性脊椎 症、後縱韌帶骨化症、頸椎扭傷、脊椎病、椎骨脫離、脊椎滑脫、崩裂 性脊柱滑脫等引起的疼痛。
末梢神經是指感覺神經、運動神經、交感神經、副交感神經等，中
樞神經是指腦和脊髓的神經。
由末梢神經的障礙引起的神經性疼痛是在末梢組織呈現自發性疼 痛、痛覺閾值降低、痛覺過敏、異常性疼痛的疾病，但不限於此。還包 括神經性間歇性跛行即末梢神經的障礙外加充血負荷產生的疼痛增強。 有時還伴有麻木和麻痺。
另外，神經障礙的種類既可以是單一性神經障礙，也可以是多發性 神經障礙。治療效果是指在神經受到損傷後給予藥物，對神經性疼痛的 治療效果，更具體地說，是通過將降低的痛覺閾值恢復到正常值來治療 疼痛的效果。
通過持續給藥表現出神經性疼痛的治療效果的降鈣素的充分量是指
對產生神經性疼痛的患者或動物持續給藥表現出神經性疼痛的治療效果 的量。優選其為不引起血清鈣值變動的濃度。
血清鈣值的變動是指與給藥前或給予賦形劑時的值比較沒有統計學 上顯著的變化，給藥開始24小時以內一次性變動不超出血清鈣值的正常 範圍的情況是允許的。另外，本申請發明中，血清鈣值可以用血中鈣值 或血漿中的鈣值代替。
作為不引起人體內血清鈣值的變動的依降鈣素的給藥量，可以舉出
少於0.093mU/kg/秒的量。即，在對骨轉移癌患者的嗎啡持續給藥中混入 的降鈣素為400U/人/日時，進行皮下給藥可以發現血清鈣值顯著的下降(J. Pain and Symptom Management, 1999, vol. 18, No. 5, p. 323-330)。另一方 面，對腎性骨症患者以40U/人/5小時的點滴靜脈給藥時，不能發現顯著 的血清鈣的降低(新薬i臨床(新藥與臨床)，1985，第34巻，第4號， p.587-592)。所以，對人來說，假設人的體重為50kg，估算不引起人體血 清鈣值變動的降鈣素的給藥量為0.093mU/kg/秒是合理的。另外，進一步， 以點滴靜脈給藥為肌肉給藥或皮下給藥的三分之二的給藥量來推算依降 鈣素的皮下給藥量時，更優選為0.067mU/kg/秒以下。後述的試驗例l用 於研究對正常大鼠單次給予依降鈣素(10秒的皮下給藥)時不引起血清鈣 值變動的依降鈣素給藥量的閾值，其結果如圖10所示，給予依降鈣素 150mU/kg後，血清鈣值發生變動。即，對15mU/kg/秒的給藥量是引起血 清鈣值變動的閾值的推定是成立的。
另外，在持續給藥一周以上的情況下，例如對大鼠來說，其給藥量 如實施例3所示，優選在0.75mU/kg/周 75U/kg/周之間。另外，如實施 例2所示，給藥0.075mU/kg/周 0.75mU/kg/周有時也是優選的方式。另 夕卜，如實施例4所示，75U/kg/周 400U/kg/周有時也是優選的方式。另 夕卜，據報導，對大鼠的神經性疼痛有效的間歇給藥的給藥量為5U/kg，對 人來說為10U/人(新薬i臨床(新藥與臨床)，1990，第39巻，第2號， p.l30-136)。所以，設人的體重為50kg，在對神經性疼痛有效的給藥量方 面，估算大鼠比人高25倍。所以，對人的給藥量的下限值優選為 0.003mU/kg/周以上，更優選為O.OlmU/kg/周以上，進一步優選為
0.03mU/kg/周以上。對人的給藥量的上限值為不引起血清鈣值變動的量， 即優選少於56U/kg/周，更優選為40U/kg/周以下，進一步優選為18U/kg/ 周以下，最優選為3U/kg/周以下。以該範圍的給藥量得到的鎮痛效果的 程度基本恆定，並且也沒有因過量給藥引起的痛覺減退，所以允許降鈣 素的給藥量在該範圍內變化。
在本發明另一方面中，持續給藥中的每單位時間(秒)的降鈣素給藥量 優選為不引起血清鈣值變動的每單位時間(秒)的降鈣素的閾值給藥量的 百分之一以下的量。並不是受理論的限制，但如上所述，由試驗例1的 圖10可推定，對大鼠單次給予降鈣素時，15mU/kg/秒的給藥量是引起血 清鈣值變動的閾值。另外，實施例3中的持續給藥時，觀察到神經性疼 痛的治療效果的最大量為75U/kg/周(換算為每秒為0.124mU/kg/秒)。因 此，用0.124mU/kg/秒除以15mU/kg/秒，得到為約百分之一。更優選的是 為千分之一以下的量，進一步優選的是為五千分之一以下的量，最優選 的是為一萬五千分之一以下的量。另外，在有些情況下，兩萬分之一以 下有時也是優選的。
另外，對人持續給藥中每單位時間(秒)的降鈣素的給藥量優選為不引 起血清鈣值變動的每單位時間(秒)的降鈣素的閾值給藥量的四分之一以 下的量，並不是受理論的限制，但如上所述，對人持續給予降鈣素時， 推定0.093mU/kg/秒的給藥量為引起血清鈣值變動的閾值。另外，由實施 例4中的持續給藥結果估算，對人來說，用400U/kg/周除以25，估算觀 察到神經性疼痛治療效果的最大量為16U/kg/周(換算成秒為 0.0265mU/kg/秒)。因此，用0.0265mU/kg/秒除以0.093mU/kg/秒，得到結 果為約四分之一。優選為十九分之一以下的量，更優選為百分之一以下 的量，進一步優選為千分之一以下的量，最優選為萬分之一以下的量。 另外，在有些情況下，兩萬分之一以下有時也是優選的。
上述的給藥量是以皮下和肌肉內給藥的情況為例說明的，對靜脈給 藥、經皮、經鼻、經肺、經口等給藥途經，應根據體內動態適當調整。
當然，具體的給藥量應對應體重、性別、症狀的輕重等適當調整， 但任何情況下均不應該引起患者的血清鈣值變動。
神經性疼痛的治療方法也屬於本發明的範圍，其中，持續8小時以 上給予表現出神經性疼痛的治療效果的充分量以上且小於引起血清鈣il 變動的量的降鈣素製劑。
作為適合本發明的藥物的劑型的例子，可以舉出緩釋製劑，例如進 行皮下注射、肌肉注射、靜脈注射或腹腔注射的緩釋製劑，優選進行皮 下注射或肌肉注射的緩釋製劑、點滴製劑、粘附製劑等。作為進行皮下 注射、肌肉注射、靜脈注射或腹腔注射的緩釋製劑，可以舉出如下製備
的緩釋製劑，例如使用了特表平11-501027中公開的應用了聚乙丙交酯 (poly(D，L-lactide-co-glycolide))這樣的生物降解性賦形劑的微球體，使降 鈣素為上述的給藥量。作為點滴製劑，可以舉出如下製備的點滴製劑， 將"日本臨床，第59巻，第9號，p.l789-1793， 2001年"中公開的製劑 中的藥物換成降鈣素，並使降鈣素為上述的給藥量。另外，對於點滴制 劑來說，由於可能產生向點滴容器的吸附和院內感染的問題，所以作為 優選的例子，可以舉出預先將藥物填充到注射泵中所得到的預充式注射 劑。作為粘附製劑，其包括在對向皮膚的粘附面設有微細的針，藥物由 此滲出的形式的粘附劑，例如可以舉出如下製備的粘附劑對於特表 2004-528900中公開的粘附劑，使其中的降鈣素為上述的給藥量。另外， 作為經皮製劑，可以舉出如下製備的經皮製劑，如特許第3054175號公 開的那樣含有正辛基-卩-D-吡喃葡萄糖苷等吸收促進劑和胃蛋白酶抑制劑 等蛋白分解酶抑制劑，並且使降鈣素為上述的給藥量。另外，作為肺吸 入製劑的例子，可以舉出如下製備的製劑如特開2000-143533所公開的 那樣，使用以黏膜附著性高分子殼聚糖覆蓋作為生物降解性聚合物的乳 酸-乙醇酸聚合物的核部分的納米球，並使降鈣素為上述的給藥量。作為 口服製劑，可以舉出如下製備的製劑如特開平11-116499公開的那樣， 使用以殼聚糖覆蓋的納米球，並使降鈣素為上述的給藥量。另外，使用 以殼聚糖覆蓋的納米球，並使降鈣素為上述的給藥量，將如此製備的水 溶液無菌填充到適合於特公平7-8806給出的鼻內給藥用機械噴霧器等噴 霧裝置的安瓶，可得到鼻用製劑。另外，作為口服製劑的例子，還可以 舉出如下得到的製劑如"Pharmazie,61(2), 106-111,2006"公開的那樣，
該製劑使用以十二烷基化殼聚糖覆蓋的脂質體，製劑附著於消化道，提 高了吸收性和持續性，其中，使降鈣素為上述的給藥量。但是，當然不 限於這些例子。
另外，作為緩釋製劑，還可以舉出如後述的實施例1中所示那樣，
在Alzet公司生產的微量滲透泵(2002)中填充上述的給藥量的降鈣素得到 的製劑，並且其可以植入頸部皮下。
另外，對於同時患有骨質疏鬆症和神經性疼痛的患者或動物，可以 將本發明的持續給藥與降鈣素間歇給藥或者骨質疏鬆症治療劑的給藥同 時進行。另外，對於單獨患有神經性疼痛或者在患有神經性疼痛的同時 患有癌性疼痛、炎症性疼痛、類風溼性關節炎、骨關節炎、腰痛、頸肩 僵硬、五十肩、纖維肌痛症等慢性疼痛；心因性疼痛等的患者或動物， 可以在進行本發明的持續給藥的同時合用阿片類、大麻素受體激動劑、 消炎鎮痛劑、抗抑鬱劑、神經阻斷劑、PGE1衍生物等血流改善劑、加巴 噴丁等抗癲癇藥、甾體激素劑、神經營養因子、抗NGF抗體、抗細胞因 子抗體、P38MAPK抑制劑、5-羥色胺受體激動劑、腎上腺素受體激動劑、 腺苷受體激動劑、NO抑制劑、辣椒素受體激動劑、乙醯膽鹼受體激動劑、 緩激肽受體抑制劑、PKC抑制劑、骨吸收抑制劑、抗風溼劑、骨關節炎 治療劑、神經妥樂平、抗病毒劑、去甲腎上腺素受體激動劑、ATP受體 拮抗劑、維生素B12製劑、mGhiRl拮抗劑等穀氨酸鹽受體抑制劑、Na 通道抑制劑、Ca通道抑制劑、GABA受體激動劑、NMDA拮抗劑等。
另外，降鈣素在製造神經性疼痛治療劑和/或預防劑方面的用途也屬 於本發明的範圍。
實施例
下面基於實施例、參考例說明本發明，但本發明的範圍不受以下例 子的限定。
對於由末梢神經損傷引起的神經性疼痛，為了確認依降鈣素(ECT) 的持續給藥的效果，將該模型動物即並木等編著的《麻酔科醫與基礎研 究疼痛與鎮痛(南江堂)》(2000年)中37頁所記載的座骨神經卡壓模型
(CCI模型)改良後進行試驗。購入4周齡的SD(IGS)系雄性大鼠，進行預 詞養、基於管理的馴化、和對機械縮爪閾值測定裝置的馴化各5天，然 後，在7周齡進行坐骨神經卡壓手術或假手術，以供試驗。
乙醚麻醉下，將大鼠置於俯臥位，沿右大腿骨在其正上方將皮膚切 開。在大腿中央部剝離大腿二頭肌，使其露出約5mm，但不要傷到坐骨 神經。使用4-0刀絲(7'" —卜"^ >々)，在大腿中央部從末梢側依次輕輕 地卡壓4次。其後，將筋膜和皮膚縫合。
以節扎手術後第8日的縮爪閾值和體重為指標，通過隨機法(SAS體 系，Version8.2)將大鼠分為CCI-賦形劑組(12隻)和CCI-ECT 0.75mU/kg/ 周、CCI-ECT 7.5mU/kg/周以及CCI-ECT 75mU/kg/周組(各12隻)。在卡 壓手術後第11日，在Alzet公司生產的微量滲透泵(2002型)中填充上述 的給藥量的藥物，在乙醚麻醉下植入頸部皮下。賦形劑使用含有 0.02%BSA的O.lmM乙酸鈉緩衝液(pH5.5)。 Alzet公司生產的微量滲透泵 的流量恆定(0.5pL/小時)，依降鈣素的給藥量以填充的依降鈣素的濃度進 行調整。用於給藥的體重為給藥開始後的推定體重，用給藥開始時的體 重乘以預實驗得到的體重增加係數(=1.1)算出給藥開始後的推定體重。 另外，填充的依降鈣素的濃度用HPLC或夾心ELISA確認，所述夾心 ELISA法中，將以P-半乳糖苷酶標記的兩種多克隆抗體結合於抗原(依降 鈣素)上，進行測定。
利用壓力刺激鎮痛效果測定裝置進行的測定(Randall Selitto法)按照 壓剌激鎮痛效果測定裝置(UGOBASILE: 7200)的手冊進行。另外，剛開 始給藥後，縮爪潛伏期測定人員以外的人以隨機數量隨機移動籠子的位 置，進一步剝離籠子的識別標誌，在測定人員不能分辨個體的狀態下實
首先，調整壓力針的位置，確認支架(7 — A)水平於大鼠腳的厚度。 將大鼠的右後肢置於臺座和支架端的壓力針之間後，將移動子置於0處， 踩踏踏板，使螺杆旋轉，以16mm/秒的速度使移動子移動，對壓力針施 加負荷(16g/秒)。在大鼠縮腳時，鬆開踏板，讀取表上的移動子數值(0 25)。將讀取的數值乘以20，換算成加壓重量(縮爪閾值)。測定以兩次測
定值的平均值作為個體的縮爪閾值。
結果的統計學處理如下對於CCI賦形劑給予組的閾值下降的確認，
用配對t檢驗(SAS體系，Version8.2)對手術前值和手術後第9日的閾值進 行確認，以顯著水平5%以下為有顯著性差異(圖中的**: p<0.01)。另夕卜， CCI賦形劑給予組和CCI ECT給藥組的比較用Williams test進行解析， 以顯著水平2.5。/。以下為有顯著性差異(圖中僅給出了CCI-ECT0.75mU/kg 組，#: p<0.025， p<0.005)。
其結果見圖1。給藥開始日的第二天(16小時後)開始觀察到顯著性的 鎮痛作用，並且持續到試驗結束。另外，在給藥開始後第14天，測定血 清鈣值濃度，發現如圖2所示，依降鈣素的持續給藥完全沒有影響血清 鈣量。另外，與賦形劑給予組相比，依降鈣素持續給藥組的體重沒有變 化。
由此表明，依降鈣素的持續給藥對神經性疼痛模型的痛覺閾值的降 低具有速效性，顯示出優異的鎮痛作用。 [實施例2]
以與上述實施例1同樣的方法對依降鈣素的給藥量為750lAJ/kg/周、 75jAJ/kg/周、7.5jiU/kg/周時的鎮痛作用進行研究。
其結果見圖3。CCI模型被觀察到與手術前相比具有顯著性的痛覺閾 值降低(##: p<0.01)。從給藥開始日的第二天起觀察到750pU/kg/周給藥 組具有顯著性鎮痛作用，而75^U/kg/周給藥組僅在給藥後第三天和第四 天觀察到了顯著性的效果(**: p<0.005)。 7.5pU/kg/周給藥組沒有觀察到 顯著性的效果。所以認為神經性疼痛大鼠的降鈣素表現出鎮痛作用的給 藥量的閾值為75pU/kg/周。
使用與上述實施例1相同的CCI模型動物，研究依降鈣素持續給藥 對CCI模型動物產生的痛覺過敏的效果。CCI模型的製作、依降鈣素的 給藥方法、給藥開始時間與實施例1相同。依降鈣素的給藥量為 0.00075U/kg/周、0.0075U/kg/周、0.075U/kg/周、7.5U/kg/周、75U/kg/周， CCI對照組給予賦形劑。測定按"BASILE足底測量"(UGO BASILE:
7370)的手冊進行。裝置用於測定在自由狀態下對大鼠的後肢給予傷害性 熱刺激至其縮爪的時間(縮爪潛伏期)。以右後肢為測定足。起初，將大鼠
置於玻璃板上的亞克力箱中，馴化5分鐘左右。將移動式I.R(紅外線)發 生器(I.R.容器)置於玻璃板下，將在I.R.容器的上部面板刻印的"sight"十 字(I.R.照射位置)對準右後肢足底的6個球的內側。確認此時玻璃板與後 肢相接觸。接著，按開始鍵，給預熱刺激，測定大鼠縮腳的逃避行動的 縮爪潛伏期。另外，逃避行動開始後，開關自動轉到關閉，並計數反應 時間。此時，使用I.R.強度為80的刺激，截止時間(Cut-Off time)為22.5 秒(規定值)。測定在保持玻璃板上清潔、沒有屎尿的情況下進行。以兩次 測定值的平均值為個體的縮爪潛伏期。
結果的統計學處理如下對於CCI賦形劑給予組的痛覺過敏(縮爪潛 伏期的縮短)的確認，用配對t檢驗(SAS體系，Version8.2)對手術前值和 手術後第9日的閾值進行確認，以顯著水平5%以下為有顯著性差異。另 外，CCI賦形劑給予組和CCI ECT給藥組的比較用Williams test進行解 析，以顯著水平2.5%以下為有顯著性差異(圖中##: p<0.005)。
圖4中給出了給藥開始日的第二天(手術後第12天)的縮爪潛伏期。 另外，圖4還給出了手術前的值作為參考。與賦形劑組相比，依降鈣素 給藥組的任一組均觀察到顯著性的鎮痛作用。其後持續給藥兩周，鎮痛 作用持續。
另外，給藥開始後第14天測定血清鈣濃度，結果發現，依降鈣素的 持續給藥對血清鈣量完全沒有影響。
由此表明，依降鈣素對神經性疼痛模型的痛覺過敏也具有速效性， 顯示出了優異的鎮痛作用。另外在這些給藥量的範圍內，鎮痛作用的程 度基本恆定，沒有產生超過正常值的痛覺遲鈍。
以與上述實施例1相同的方法，研究依降鈣素的給藥量為75U/kg/ 周、400U/kg/周時的鎮痛作用。其結果見圖5。 CCI模型被觀察到與手術 前相比具有顯著性的痛覺閾值降低(# #: p<0.01)。從給藥開始日的第二 天起觀察到依降鈣素給藥組具有顯著性鎮痛作用，並且其效果持續到第ll天后("p<0.005)。
另外對同周齡的大鼠(n二3)給予75U/kg/周或400U/kg/周的依降鈣 素，測定給藥後30分鐘、60分鐘、3小時、6小時、l天、4天、6天、 8天、12天、15天後的血清鈣，與給藥前相比，沒有發現變化。
與上述實施例1同樣地使用CCI模型，研究點滴靜脈給藥的鎮痛效 果顯現時間。
CCI模型的製作、依降鈣素的給藥開始時間與實施例1相同。對頸 靜脈進行套管插入手術，手術2天後，以lmL/個體/24小時的速度靜脈 持續點滴給予依降鈣素(0.75U/kg/周)，在4、 8、 12、 24小時後利用Randall Selitto法測定縮爪壓力。其結果是，4小時內無效，在8小時有改善的趨 勢，12小時以後觀察到顯著性的鎮痛作用(圖6)。所以可以推定效果開始 時間的閾值為8小時。
另外，鎮痛作用表現出後，停藥期間顯著性效果持續了 7天，停藥 後IO天再次產生疼痛。
將2克分子量約2萬的乳酸-乙醇共聚物(PLGA-7520;和光純藥工業 社生產，乳酸乙醇酸聚合比=75: 20)溶解於100mL的二氯甲烷中。將 40mg依降l丐素溶解於150mL 0.01N鹽酸和100mL 1/15M磷酸氫二鈉中。 在依降鈣素溶液中滴加PLGA溶液，用高速乳化機(POLYTRON)進行攪 拌(25000rpm， 5min)。以4。C、 20000rpm、 10min的條件進行離心分離， 除去上清液。加入2mLl〃5M磷酸氫二鈉和200mL二氯甲垸，將一半量 用於後續的工序。將該溶液以4mL/min的速度滴加到300mL含有2%聚 蓖麻油酸聚甘油(6)酯(Hexaglyn PR-15;日光化學社生產)的三(辛基-癸酸) 甘油酯(TriesterF810，日光化學社生產)/200mL己烷中，以5000rpm進行 攪拌。減壓下，在37。C攪拌一晚，蒸餾除去溶劑。加入200mL己垸，進 行離心分離(4。C、 20000rpm、 10min)，除去上清液。加入160mL己垸， 同樣進行離心分離，除去上清液。加入80mL 2。/。聚乙烯醇(PVA-403; Kuraray公司生產)溶液，進行離心分離(4。C、 20000rpm、 10min),除去上Zetasizer 3000HS(Malvern Instruments Ltd， Malvern UK)測定粒徑。根據以動態光散射(光子相關法)求出的自相關係 數，以累積法進行粒徑的計算，其平均粒徑(ZAve)為315.7nm。
含量測定精確稱取依降鈣素-PLGA微球約30mg，將其加入到5mL 的容量瓶中。在其中加入0.5mL精製水，再次懸浮，加入3.5mL丙酮， 溶解PLGA。用精製水定量到5mL，使PLGA析出。通過離心分離(15'C、 20000rpm、 15min)使該析出物沉澱，以上清液作為樣品溶液，用HPLC 將其與依降鈣素標準溶液進行比較分析。其結果是依降鈣素-PLGA微球 中的依降鈣素含量為3.4嗎/mg。
鎮痛實驗使用與上述實施例1相同的CCI模型動物，研究依降鈣 素-PLGA微球對CCI模型動物產生的痛覺過敏的效果。用生理鹽水將依 降鈣素-PLGA微球溶解，製成50U/mL。對於產生痛覺過敏的動物，以 lmL/kg在頸部皮下給予製備液。給藥後4、 8、 12、 24小時後，利用Randall Sditto法測定縮爪壓力，並進一步每日測定一次(從周一到周五)直至給藥 387小時後。其結果表明，4小時內無效，8小時有改善趨勢，12小時以 後觀察到顯著性的鎮痛作用，並且效果持續到387小時(圖7)。所以，可 以推定效果顯現時間的閾值為8小時。
另外，使用與CCI模型同周齡的正常大鼠，測定血中依降鈣素濃度 和血清鈣濃度。其結果表明，給藥後一日內血中依降鈣素濃度為高濃度， 觀察到所謂的初期突現(initial period burst)。其後，直至給藥387小時後 保持在1.3 3.9pg/mL的範圍內。另一方面，血清鈣濃度出現了一次性的 降低，但不在正常範圍以下，24小時內返回到給藥前的值，其後直至給 藥387小時後沒有變化。
以與實施例1相同的方法研究依降鈣素的間歇給藥的作用。 從到貨後第2周起至給予依降鈣素(ECT)的期間，對所有的動物均以 0.05ml/B.W.100g的劑量每周皮下給予5次賦形劑(含有0.02%BSA的 0.1mM乙酸鈉緩衝液(pH5.5))。另外，以結紮手術後第9天的縮爪閾值和 體重為指標，通過隨機法(SAS體系，Version8.2)將大鼠分為CCI-賦形劑
組(12隻)和CCI-ECT 15U/kg 3次/周(周一、三、五給藥；二、四給予賦 形劑)組、CCI-ECT15U/kg5次/周(周一、二、三、四、五)組(各12隻)。 卡壓手術後第12天後， 一次10秒皮下給予ECT或賦形劑 0.05ml/B.W.100g。
其結果見圖8。與手術前相比CCI模型顯現了顯著性的痛覺閾值降 低(**: p<0.01)。從ECT給藥開始日到第三天的期間內沒有發現效果， 但每周給予5次ECT的給藥組在給藥開始後第四天開始閾值逐漸恢復， 第7天後觀察到顯著性的鎮痛作用(#: p<0.025， # #: p<0.005)。每周 給予3次ECT的給藥組發現了改善的趨勢，但不是顯著性的作用。另外， ECT給藥組中發現了對體重增加的抑制。另外增加給藥量進行實驗時， 發現沒有改善鎮痛效果顯現的遲效性，對體重増加的抑制變得明顯，所 以認為不適合作為治療藥。
所以，依降鈣素間歇給藥雖然能改善神經性疼痛，但可以確認到由 於遲效性而不能得到滿意的治療效果。另夕卜，CCI-ECT 15U/kg3次/周組、 CCI-ECT 15U/kg 5次/周組均出現血清鈣值的變動。
另外，以與比較例1相同的方法研究每周5次間歇給予依降鈣素的 用量依賴性。給藥2周後的結果見圖9 。給藥5U/kg時觀察到對基於Randall Sdi加法的痛覺閾值的降低有效，給藥1.5U/kg時對熱痛覺過敏無效，給 藥15U/kg以上時觀察到對熱痛覺過敏有效。由後述的試驗例1的結果可 知，間歇給藥時，對神經性疼痛有效的給藥量會使血清鈣降低到正常值 (8.5 10.5mg/dl)以下。
使用與實施例1、2中給予依降鈣素的起始點同周齡的正常大鼠(各4 只)，單次皮下給藥(給藥10秒)的情況下，研究不引起血清鈣值變動的依 降鈣素的給藥量。採血的時間為依降鈣素給藥後60分鐘，此時大鼠血清 鈣值達到最大。另外，同樣進行在給藥後30分鐘進行採血的試驗。血清 鈣值的測定使用Calcium C-testWako(和光)進行。如圖10和圖11所示， 單次皮下給藥的情況下，150mU/kg即每單位時間(秒)15mU/kg/秒以上時，
血清鈣值開始發生變動。其血清鈣值下降到正常值以下。
由上述可知，與間歇給藥相比，針對神經性疼痛的降鈣素的持續給
藥製劑即使是低用量，也可發揮優異的作用，並且能夠減少副作用和給
藥次數，是有用的治療劑和/或預防劑。 產業上的可利用性
本發明顯示出對神經性疼痛的有效作用，適合用作醫藥用途。
權利要求
1、一種神經性疼痛治療劑和/或預防劑，其含有降鈣素作為有效成分，該治療劑和/或預防劑的特徵在於，降鈣素以不引起血清鈣值變動的量給藥。
2、 一種神經性疼痛治療劑和/或預防劑，其含有降鈣素作為有效成 分，該治療劑和域預防劑的特徵在於，降鈣素以小於0.093mU/kg/秒的量給藥。
3、 如權利要求1或2所述的神經性疼痛治療劑和/或預防劑，其特 徵在於，將所述治療劑和/或預防劑持續給藥。
4、 如權利要求3所述的神經性疼痛治療劑和/或預防劑，其特徵在 於，持續給藥中每單位時間(秒)內的降鈣素給藥量為引起血清鈣值變動的 每單位時間(秒)內的降鈣素閾值給藥量的四分之一 以下的量。
5、 如權利要求3或4所述的神經性疼痛治療劑和/或預防劑，其特 徵在於，持續給藥的時間為8小時以上。
6、 如權利要求1 5任一項所述的神經性疼痛治療劑和/或預防劑， 其特徵在於，神經性疼痛是由於末梢神經的壓迫或末梢神經的損傷所引 起的。
7、 如權利要求1 6任一項所述的神經性疼痛治療劑和/或預防劑， 其中，所述降鈣素是依降鈣素。
8、 一種神經性疼痛治療劑和/或預防劑，其是含有降鈣素作為有效 成分用於持續給藥的神經性疼痛治療劑和/或預防劑，該治療劑和/或預防 劑的特徵在於，劑型是緩釋製劑、點滴製劑或粘附製劑中的任一種。
9、 如權利要求8所述的神經性疼痛治療劑和/或預防劑，其特徵在 於，緩釋製劑的製劑形式是注射製劑、植入製劑、經皮製劑、鼻用製劑、 肺吸入製劑、口服製劑中的任一種。
10、 如權利要求8或9所述的神經性疼痛治療劑和/或預防劑，其特 徵在於，持續給藥中每單位時間(秒)內的降鈣素給藥量為引起血清鈣值變 動的每單位時間(秒)內的降鈣素閾值給藥量的四分之一以下的量。
11、 如權利要求8 10任一項所述的神經性疼痛治療劑和/或預防劑，其特徵在於，持續給藥的時間為8小時以上。
12、 降鈣素在製造權利要求1 11任一項所述的神經性疼痛治療劑和/或預防劑中的應用。
全文摘要
本發明涉及神經性疼痛治療劑和/或預防劑，其是通過持續給予降鈣素而實現的。通過本發明能提供對各種神經性疼痛的治療有效的藥物。該藥物對於神經性疼痛具有有效的作用，且毒性低。所述神經性疼痛的治療劑和/或預防劑含有降鈣素、特別是依降鈣素作為有效成分，該治療劑和/或預防劑的特徵在於，降鈣素以不引起血清鈣值變動的量給藥。本發明還涉及降鈣素、特別是依降鈣素在製造神經性疼痛的治療劑和/或預防劑方面的應用。
文檔編號A61K38/23GK101171029SQ20068001587
公開日2008年4月30日 申請日期2006年6月7日 優先權日2005年6月9日
發明者伊藤彰敏, 武田實音子 申請人:旭化成製藥株式會社