獸用夏枯草注射液及其製備方法
2023-10-22 23:23:07 1
專利名稱：獸用夏枯草注射液及其製備方法
技術領域：
本發明涉及一種獸藥製劑，具體涉及一種夏枯草注射液。
背景技術：
夏枯草具有清火、明目、清肝、散結及消腫之功效，在古典書籍中均有記載。《本經》 中描述「主寒熱，瘰癧，鼠瘻，頭瘡，破症，散癭結氣，腳腫溼痺」。《本草綱目》「樓全善雲 夏枯草治目珠疼，至夜則甚者，神效；或用苦寒藥點之反甚者，亦神效。蓋目珠連目本，肝系也，屬厥陰之經。夜甚及點苦寒藥反甚者，夜與寒亦陰故也。夏枯稟純陽之氣，補厥陰血脈， 故治此如神，以陽治陰也」。夏枯草分布廣泛，資源豐富，化學成分複雜，藥理作用廣泛，有重要的臨床應用價值，具有開發利用價值，是一種有潛力的藥物資源。其主要含有迷迭香酸、三萜類(熊果酸、 齊墩果酸)、黃酮類(金絲桃苷、蘆丁、木樨草素、異葒草素和本樨草苷)、香豆素類、有機酸類、含糖類、揮髮油類等成分。其中迷迭香酸是一種水溶性酚類化合物，具有抗氧化、抗菌、 消炎等生物活性。熊果酸是一種三萜類化合物，不溶於水，常規水提醇沉提取得率低，具有鎮靜、抗炎、抗菌、抗糖尿病、抗潰瘍、降低血糖等多種生物學效應，同時還具有明顯的抗氧化功能。夏枯草在人藥中抗病毒和抗腫瘤研究比較多，臨床效果確切，但在獸藥中較少應用，具有廣闊市場前景。鑑於夏枯草中有效成分化學性質不同，提取方法不同，常規的水提醇沉雖然工藝簡單，但存在雜質多，有效成分不能被高效完全提取純化，甚至流失或被破壞，這嚴重製約了夏枯草在獸藥領域的應用。
發明內容
本發明的目的是提供一種富含迷迭香酸和三萜類活性物質的夏枯草注射液，且工藝合理，有效物質純度高。常規水提醇沉不僅雜質含量高易沉澱、性質不穩定，且會破壞藥材中的有效成分， 本發明採用分級提取方法，先提取水溶性迷迭香酸，再提取難溶物三萜類(熊果酸、齊墩果酸)物質，以充分利用藥材，並使產品效果得到穩定提高。為解決上述問題，本發明採用如下技術方案
一種夏枯草注射液，由以下原料配比組成夏枯草1800-2200g、吐溫-80 3_6ml、苯甲醇 4-6ml。上述夏枯草注射液，由以下步驟製得
A、取夏枯草1800-2200g粉碎；
B、迷迭香酸的提取純化
(1)超聲提取在200-400W功率下超聲波處理15-40min，抽濾將濾液置於55_75°C恆溫水浴鍋中水浴提取，其中提取溶劑為蒸餾水，夏枯草蒸餾水=1 :10-25 (g/ml)，提取後藥渣a用C工藝進行提取；
4(2)微濾除雜提取液用0.2 μ m陶瓷膜進行微濾，除去大部分果膠和蛋白；
(3)萃取純化濾液用正丁醇萃取2次，萃取液減壓回收正丁醇，得迷迭香酸溶液b，其中濾液與正丁醇體積比為1 1-2，提取時間為15-35min ；
C、三萜類的提取純化
(1)回流提取加藥渣a總重量6-12倍60-95%乙醇回流提取2次，每次1_2小時，濾過，合併濾液c，減壓回收乙醇；
(2)NKA大孔樹脂分離純化樹脂用95%乙醇浸泡Mh，充分溶脹，用乙醇衝洗，至洗出液加水無白色沉澱現象後，用蒸餾水洗滌浸泡，待用。將濾液c加入樹脂床層，加蒸餾水洗滌至洗滌液無色，加入洗脫液50-60%乙醇以l-5BV/h的速度由上而下通過樹脂床層，由柱底收集洗脫液d，減壓回收乙醇；
D、洗脫液d與B(3)中所得迷迭香酸溶液b充分混勻，加吐溫-803-6ml，苯甲醇4_6ml， 及300-600ml注射用水，攪拌均勻，靜置過濾；
E、濾液用10%Na0Hi周pH至5.5-7. 5，加0. 1-0. 5%活性炭，80°C加熱攪拌20分鐘，冷卻， 濾過；
F、濾液加注射用水至1000ml，灌封，滅菌，即得。
具體實施例方式下面結合具體實施例對本發明做進一步的說明，以助於理解本發明的內容。實施例1 一種夏枯草注射液，由以下原料配比組成夏枯草2000g、吐溫-80 5ml、 苯甲醇5ml。上述夏枯草注射液，由以下步驟製得
A、取夏枯草2000g粉碎；
B、迷迭香酸的提取純化
(1)超聲提取在300W功率下超聲波處理30min，抽濾將濾液置於65°C恆溫水浴鍋中水浴提取，其中提取溶劑為蒸餾水，夏枯草蒸餾水=1 15 (g/ml)，提取後藥渣a用C工藝進行提取；
(2)微濾除雜提取液用0.2 μ m陶瓷膜進行微濾，除去大部分果膠和蛋白；
(3)萃取純化濾液用正丁醇萃取2次，萃取液減壓回收正丁醇，得迷迭香酸溶液b，其中濾液與正丁醇體積比為1 :1. 5，提取時間為20min ；
C、三萜類的提取純化
(1)回流提取加藥渣a總重量10倍70%乙醇回流提取2次，每次1小時，濾過，合併濾液c，減壓回收乙醇；
(2)NKA大孔樹脂分離純化樹脂用95%乙醇浸泡Mh，充分溶脹，用乙醇衝洗，至洗出液加水無白色沉澱現象後，用蒸餾水洗滌浸泡，待用。將濾液c加入樹脂床層，加蒸餾水洗滌至洗滌液無色，加入洗脫液55%乙醇以!3BV/h的速度由上而下通過樹脂床層，由柱底收集洗脫液d，減壓回收乙醇；
D、洗脫液d與B(3)中所得迷迭香酸溶液b充分混勻，加吐溫-80 5ml，苯甲醇5ml，及 450ml注射用水，攪拌均勻，靜置過濾；
E、濾液用10%Na0H調pH至6.5，加0. 2%活性炭，80°C加熱攪拌20分鐘，冷卻，濾過；F、濾液加注射用水至1000ml，灌封，滅菌，即得。實施例2 —種夏枯草注射液，由以下原料配比組成夏枯草2000g、吐溫-80 5ml、 苯甲醇5ml
上述夏枯草注射液，由以下步驟製得
A、取夏枯草2000g粉碎；
B、迷迭香酸的提取純化
(1)超聲提取在200W功率下超聲波處理40min，抽濾將濾液置於75°C恆溫水浴鍋中水浴提取，其中提取溶劑為蒸餾水，夏枯草蒸餾水=1 25 (g/ml)，提取後藥渣a用C工藝進行提取；
(2)微濾除雜提取液用0.2 μ m陶瓷膜進行微濾，除去大部分果膠和蛋白；
(3)萃取純化濾液用正丁醇萃取2次，萃取液減壓回收正丁醇，得迷迭香酸溶液b，其中濾液與正丁醇體積比為1:2，提取時間為30min ；
C、三萜類的提取純化
(1)回流提取加藥渣a總重量10倍70%乙醇回流提取2次，每次1小時，濾過，合併濾液c，減壓回收乙醇；
(2)NKA大孔樹脂分離純化樹脂用95%乙醇浸泡Mh，充分溶脹，用乙醇衝洗，至洗出液加水無白色沉澱現象後，用蒸餾水洗滌浸泡，待用。將濾液c加入樹脂床層，加蒸餾水洗滌至洗滌液無色，加入洗脫液55%乙醇以!3BV/h的速度由上而下通過樹脂床層，由柱底收集洗脫液d，減壓回收乙醇；
D、洗脫液d與B(3)中所得迷迭香酸溶液b充分混勻，加吐溫-80 5ml，苯甲醇5ml，及 450ml注射用水，攪拌均勻，靜置過濾；
E、濾液用10%Na0H調pH至6.5，加0. 2%活性炭，80°C加熱攪拌20分鐘，冷卻，濾過；
F、濾液加注射用水至1000ml，灌封，滅菌，即得。實施例3 —種夏枯草注射液，由以下原料配比組成夏枯草2000g、吐溫-80 5ml、 苯甲醇5ml。上述夏枯草注射液，由以下步驟製得
A、取夏枯草2000g粉碎；
B、迷迭香酸的提取純化
(1)超聲提取在400W功率下超聲波處理15min，抽濾將濾液置於55°C恆溫水浴鍋中水浴提取，其中提取溶劑為蒸餾水，夏枯草蒸餾水=1 10 (g/ml)，提取後藥渣a用C工藝進行提取；
(2)微濾除雜提取液用0.2 μ m陶瓷膜進行微濾，除去大部分果膠和蛋白；
(3)萃取純化濾液用正丁醇萃取2次，萃取液減壓回收正丁醇，得迷迭香酸溶液b，其中濾液與正丁醇體積比為1 :1，提取時間為15min ；
C、三萜類的提取純化
(1)回流提取加藥渣a總重量10倍70%乙醇回流提取2次，每次1小時，濾過，合併濾液c，減壓回收乙醇；
(2)NKA大孔樹脂分離純化樹脂用95%乙醇浸泡Mh，充分溶脹，用乙醇衝洗，至洗出液加水無白色沉澱現象後，用蒸餾水洗滌浸泡，待用。將濾液c加入樹脂床層，加蒸餾水洗滌至洗滌液無色，加入洗脫液55%乙醇以!3BV/h的速度由上而下通過樹脂床層，由柱底收集洗脫液d，減壓回收乙醇；
D、洗脫液d與B(3)中所得迷迭香酸溶液b充分混勻，加吐溫-80 5ml，苯甲醇5ml，及 450ml注射用水，攪拌均勻，靜置過濾；
E、濾液用10%Na0H調pH至6.5，加0. 2%活性炭，80°C加熱攪拌20分鐘，冷卻，濾過；
F、濾液加注射用水至1000ml，灌封，滅菌，即得。實施例4 一種夏枯草注射液，由以下原料配比組成夏枯草2000g、吐溫-80 5ml、 苯甲醇5ml。上述夏枯草注射液，由以下步驟製得
A、取夏枯草2000g粉碎；
B、迷迭香酸的提取純化
(1)超聲提取在300W功率下超聲波處理30min，抽濾將濾液置於65°C恆溫水浴鍋中水浴提取，其中提取溶劑為蒸餾水，夏枯草蒸餾水=1 15 (g/ml)，提取後藥渣a用C工藝進行提取；
(2)微濾除雜提取液用0.2 μ m陶瓷膜進行微濾，除去大部分果膠和蛋白；
(3)萃取純化濾液用正丁醇萃取2次，萃取液減壓回收正丁醇，得迷迭香酸溶液b，其中濾液與正丁醇體積比為1 :1. 5，提取時間為20min ；
C、三萜類的提取純化
(1)回流提取加藥渣a總重量6倍95%乙醇回流提取2次，每次1.5小時，濾過，合併濾液c，減壓回收乙醇；
(2)NKA大孔樹脂分離純化樹脂用95%乙醇浸泡Mh，充分溶脹，用乙醇衝洗，至洗出液加水無白色沉澱現象後，用蒸餾水洗滌浸泡，待用。將濾液c加入樹脂床層，加蒸餾水洗滌至洗滌液無色，加入洗脫液50%乙醇以lBV/h的速度由上而下通過樹脂床層，由柱底收集洗脫液d，減壓回收乙醇；
D、洗脫液d與B(3)中所得迷迭香酸溶液b充分混勻，加吐溫-80 5ml，苯甲醇5ml，及 450ml注射用水，攪拌均勻，靜置過濾；
E、濾液用10%Na0H調pH至6.5，加0. 3%活性炭，80°C加熱攪拌20分鐘，冷卻，濾過；
F、濾液加注射用水至1000ml，灌封，滅菌，即得。實施例5 —種夏枯草注射液，由以下原料配比組成夏枯草1800g、吐溫-80 5ml、 苯甲醇5ml。上述夏枯草注射液，由以下步驟製得
A、取夏枯草ISOOg粉碎；
B、迷迭香酸的提取純化
(1)超聲提取在300W功率下超聲波處理30min，抽濾將濾液置於65°C恆溫水浴鍋中水浴提取，其中提取溶劑為蒸餾水，夏枯草蒸餾水=1 15 (g/ml)，提取後藥渣a用C工藝進行提取；
(2)微濾除雜提取液用0.2 μ m陶瓷膜進行微濾，除去大部分果膠和蛋白；
(3)萃取純化濾液用正丁醇萃取2次，萃取液減壓回收正丁醇，得迷迭香酸溶液b，其中濾液與正丁醇體積比為1 :1. 5，提取時間為20min ；C、三萜類的提取純化
(1)回流提取加藥渣a總重量12倍70%乙醇回流提取2次，每次2小時，濾過，合併濾液c，減壓回收乙醇；
(2)NKA大孔樹脂分離純化樹脂用95%乙醇浸泡Mh，充分溶脹，用乙醇衝洗，至洗出液加水無白色沉澱現象後，用蒸餾水洗滌浸泡，待用。將濾液c加入樹脂床層，加蒸餾水洗滌至洗滌液無色，加入洗脫液60%乙醇以5BV/h的速度由上而下通過樹脂床層，由柱底收集洗脫液d，減壓回收乙醇；
D、洗脫液d與B(3)中所得迷迭香酸溶液b充分混勻，加吐溫-80 5ml，苯甲醇5ml，及 400ml注射用水，攪拌均勻，靜置過濾；
E、濾液用10%Na0H調pH至6.5，加0. 1%活性炭，80°C加熱攪拌20分鐘，冷卻，濾過；
F、濾液加注射用水至1000ml，灌封，滅菌，即得。實施例6 —種夏枯草注射液，由以下原料配比組成夏枯草2000g、吐溫-80 3ml、苯甲醇5ml。上述夏枯草注射液，由以下步驟製得
A、取夏枯草2000g粉碎；
B、迷迭香酸的提取純化
(1)超聲提取在300W功率下超聲波處理30min，抽濾將濾液置於65°C恆溫水浴鍋中水浴提取，其中提取溶劑為蒸餾水，夏枯草蒸餾水=1 15 (g/ml)，提取後藥渣a用C工藝進行提取；
(2)微濾除雜提取液用0.2 μ m陶瓷膜進行微濾，除去大部分果膠和蛋白；
(3)萃取純化濾液用正丁醇萃取2次，萃取液減壓回收正丁醇，得迷迭香酸溶液b，其中濾液與正丁醇體積比為1 :1. 5，提取時間為20min ；
C、三萜類的提取純化
(1)回流提取加藥渣a總重量10倍70%乙醇回流提取2次，每次1小時，濾過，合併濾液c，減壓回收乙醇；
(2)NKA大孔樹脂分離純化樹脂用95%乙醇浸泡Mh，充分溶脹，用乙醇衝洗，至洗出液加水無白色沉澱現象後，用蒸餾水洗滌浸泡，待用。將濾液c加入樹脂床層，加蒸餾水洗滌至洗滌液無色，加入洗脫液55%乙醇以!3BV/h的速度由上而下通過樹脂床層，由柱底收集洗脫液d，減壓回收乙醇；
D、洗脫液d與B(3)中所得迷迭香酸溶液b充分混勻，加吐溫-80 :3ml，苯甲醇5ml，及 450ml注射用水，攪拌均勻，靜置過濾；
E、濾液用10%Na0H調pH至6.5，加0. 2%活性炭，80°C加熱攪拌20分鐘，冷卻，濾過；
F、濾液加注射用水至1000ml，灌封，滅菌，即得。實施例7 —種夏枯草注射液，由以下原料配比組成夏枯草2000g、吐溫-80 6ml、 苯甲醇5ml。上述夏枯草注射液，由以下步驟製得
A、取夏枯草2000g粉碎；
B、迷迭香酸的提取純化
(1)超聲提取在300W功率下超聲波處理30min，抽濾將濾液置於65°C恆溫水浴鍋中水浴提取，其中提取溶劑為蒸餾水，夏枯草蒸餾水=1 15 (g/ml)，提取後藥渣a用C工藝進行提取；
(2)微濾除雜提取液用0.2 μ m陶瓷膜進行微濾，除去大部分果膠和蛋白；
(3)萃取純化濾液用正丁醇萃取2次，萃取液減壓回收正丁醇，得迷迭香酸溶液b，其中濾液與正丁醇體積比為1 :1. 5，提取時間為20min ；
C、三萜類的提取純化
(1)回流提取加藥渣a總重量10倍70%乙醇回流提取2次，每次1小時，濾過，合併濾液c，減壓回收乙醇；
(2)NKA大孔樹脂分離純化樹脂用95%乙醇浸泡Mh，充分溶脹，用乙醇衝洗，至洗出液加水無白色沉澱現象後，用蒸餾水洗滌浸泡，待用。將濾液c加入樹脂床層，加蒸餾水洗滌至洗滌液無色，加入洗脫液55%乙醇以!3BV/h的速度由上而下通過樹脂床層，由柱底收集洗脫液d，減壓回收乙醇；
D、洗脫液d與B(3)中所得迷迭香酸溶液b充分混勻，加吐溫-80 6ml，苯甲醇5ml，及 450ml注射用水，攪拌均勻，靜置過濾；
E、濾液用10%Na0H調pH至6.5，加0. 2%活性炭，80°C加熱攪拌20分鐘，冷卻，濾過；
F、濾液加注射用水至1000ml，灌封，滅菌，即得。對比例1 一種夏枯草注射液，由以下原料配比組成夏枯草2000g、吐溫-80 5ml、 苯甲醇5ml。上述夏枯草注射液，由以下步驟製得
A、取夏枯草2000g粉碎；
B、加藥材總重量10倍70%乙醇回流提取2次，每次1小時，濾過，合併濾液，減壓回收乙醇；
C、加吐溫-805ml，苯甲醇5ml，及450ml注射用水，攪拌均勻，靜置過濾；
D、濾液用10%Na0H調pH至6.5，加0. 2%活性炭，80°C加熱攪拌20分鐘，冷卻，濾過；
E、濾液加注射用水至1000ml，灌封，滅菌，即得。對比例2 —種夏枯草注射液，由以下原料配比組成夏枯草2000g、吐溫-80 5ml、 苯甲醇5ml。上述夏枯草注射液，由以下步驟製得
A、取夏枯草2000g粉碎；
B、加藥材總重量10倍70%乙醇回流提取2次，每次1小時，濾過，合併濾液，減壓回收乙醇；
C、加苯甲醇5ml，及450ml注射用水，攪拌均勻，靜置過濾；
D、濾液用10%Na0H調pH至6.5，加0. 2%活性炭，80°C加熱攪拌20分鐘，冷卻，濾過；
E、濾液加注射用水至1000ml，灌封，滅菌，即得。試驗例
試驗例1 迷迭香酸含量測定。準確稱取夏枯草粗粉9份，每份50g，分別按實施例1-7和對比例方法製得夏枯草注射液，用HPLC法測定產品中迷迭香酸含量。結果見表1
表1迷迭香酸含量比較
權利要求
1.一種獸用夏枯草注射液，其特徵在於，由以下原料配比組成夏枯草1800-2200g、吐溫-80 3-6ml、苯甲醇 4-6ml。
2.根據權利要求1所述獸用夏枯草注射液的製備方法，其特徵在於，由以下步驟製得A、取夏枯草1800-2200g粉碎；B、迷迭香酸的提取純化(1)超聲提取在200-400W功率下超聲波處理15-40min，抽濾將濾液置於55-75°C 恆溫水浴鍋中水浴提取，其中提取溶劑為蒸餾水，夏枯草蒸餾水=1:10-25 (g/ml)，提取後藥渣a用C工藝進行提取；(2)微濾除雜提取液用0.2 μ m陶瓷膜進行微濾，除去大部分果膠和蛋白；(3)萃取純化濾液用正丁醇萃取2次，萃取液減壓回收正丁醇，得迷迭香酸溶液b，其中濾液與正丁醇體積比為1:1-2，提取時間為15-35min ；C、三萜類的提取純化(1)回流提取加藥渣a總重量6-12倍60-95%乙醇回流提取2次，每次1_2小時，濾過，合併濾液c，減壓回收乙醇；(2)NKA大孔樹脂分離純化樹脂用95%乙醇浸泡Mh，充分溶脹，用乙醇衝洗，至洗出液加水無白色沉澱現象後，用蒸餾水洗滌浸泡，待用；將濾液c加入樹脂床層，加蒸餾水洗滌至洗滌液無色，加入洗脫液50-60%乙醇以 l-5BV/h的速度由上而下通過樹脂床層，由柱底收集洗脫液d，減壓回收乙醇；D、洗脫液d與B(3)中所得迷迭香酸溶液b充分混勻，加吐溫-803-6ml，苯甲醇4_6ml， 及300-600ml注射用水，攪拌均勻，靜置過濾；E、濾液用10%Na0H調pH至5.5-7. 5，加0. 1-0. 5%活性炭，80°C加熱攪拌20分鐘，冷卻， 濾過；F、濾液加注射用水至1000ml，灌封，滅菌，即得。
3.根據權利要求1所述獸用夏枯草注射液的製備方法，其特徵在於，由以下步驟製得A、取夏枯草2000g粉碎；B、迷迭香酸的提取純化(1)超聲提取在300W功率下超聲波處理30min，抽濾將濾液置於65°C恆溫水浴鍋中水浴提取，其中提取溶劑為蒸餾水，夏枯草蒸餾水=1 15( g/ml )，提取後藥渣a用C工藝進行提取；(2)微濾除雜提取液用0.2 μ m陶瓷膜進行微濾，除去大部分果膠和蛋白；(3)萃取純化濾液用正丁醇萃取2次，萃取液減壓回收正丁醇，得迷迭香酸溶液b，其中濾液與正丁醇體積比為1:1. 5，提取時間為20min ；C、三萜類的提取純化(1)回流提取加藥渣a總重量10倍70%乙醇回流提取2次，每次1小時，濾過，合併濾液c，減壓回收乙醇；(2)NKA大孔樹脂分離純化樹脂用95%乙醇浸泡Mh，充分溶脹，用乙醇衝洗，至洗出液加水無白色沉澱現象後，用蒸餾水洗滌浸泡，待用；將濾液c加入樹脂床層，加蒸餾水洗滌至洗滌液無色，加入洗脫液55%乙醇以!3BV/h的速度由上而下通過樹脂床層，由柱底收集洗脫液d，減壓回收乙醇；D、洗脫液d與B(3)中所得迷迭香酸溶液b充分混勻，加吐溫-80 5ml，苯甲醇5ml，及 450ml注射用水，攪拌均勻，靜置過濾；E、濾液用10%Na0H調pH至6.5，加0. 2%活性炭，80°C加熱攪拌20分鐘，冷卻，濾過；F、濾液加注射用水至1000ml，灌封，滅菌，即得。
全文摘要
本發明是一種獸用夏枯草注射液，其製備方法為將粉碎後的夏枯草於200-400W功率下超聲波處理15-40min，經微濾萃取得迷迭香酸溶液；超聲提取後的藥渣再加藥渣總重量6-12倍60-95%乙醇回流水提2次，合併濾液並經NKA大孔樹脂，以50-60%乙醇洗脫分離純化，洗脫液與迷迭香酸溶液充分混勻後，加吐溫-80、苯甲醇混勻，調PH，加0.1-0.5%活性炭，80℃加熱攪拌，冷卻過濾，最後加注射用水至1000ml，灌封，滅菌即得。本發明具有如下優點高純度低毒的有效成分，具有抗菌、抗炎、抗病毒等功效，作為獸藥抗病毒產品，療效確切，可替代抗生素，有效改善藥殘和耐藥性問題。
文檔編號A61K9/08GK102552393SQ201210022080
公開日2012年7月11日 申請日期2012年2月1日 優先權日2012年2月1日
發明者晏永新 申請人:江西新世紀民星動物保健品有限公司