快速篩選產利迪鏈菌素的利迪鏈黴菌突變株的方法
2023-10-22 18:09:22 4
專利名稱：快速篩選產利迪鏈菌素的利迪鏈黴菌突變株的方法
技術領域：
本發明屬於工業微生物領域。
背景技術：
利迪鏈黴菌Streptomyces luteogriseus為我實驗室從土壤分離篩選得到，並於2006年4月13日，經中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(CGMCC)保藏，(保藏地址北京市海澱區中關村北一條13號，中國科學院微生物研究所)，保藏號為CGMCC1692。利迪鏈黴菌CGMCCl692所產生的利迪鏈黴素，具有抗腫瘤，抗HIV蛋白酶以及抗G+細菌活性。2005年Cell雜誌報導了利迪鏈菌素抑制細菌RNA聚合酶的機理，但國內目前沒有相關內容的報導。國外的文獻資料顯示，利迪鏈菌素的產量較低，影響了進一步的研究及應用。為了提高抗生素的產量，通常採用定向誘變和隨機誘變的方法，誘變後篩選的工作量非常大，限制了篩選的工作效率。
發明內容
本發明的目的是提供一種快速篩選產利迪鏈菌素的利迪鏈黴菌突變株的方法，通過對處於不同培養時間的利迪鏈黴菌及其突變株的培養，利用傅立葉變換紅外光譜(FT-IR)技術並結合紅外數據的主成分分析(PCA)不僅可以區分利迪鏈黴菌及其突變株，而且可以區分不同培養時間的同一菌株；用人工神經網絡分析(ANN)構建的數學模型可以判斷突變株是否能產生利迪鏈菌素。由於該方法具有所用的設備比較普及、操作方法簡單、不需特殊的試劑等優點，可用於誘變後菌株的快速篩選。
本發明的技術方案概述如下一種快速篩選產利迪鏈菌素的利迪鏈黴菌突變株的方法，由如下步驟組成(1)培養基的配製①搖瓶種子培養基的配製取葡萄糖1～5克，可溶性澱粉10～20克，酵母浸粉0.5～1.5克，蛋白腖1～3克，磷酸氫二鉀0.2～1.0克，氯化鈉0.1～0.5克，硫酸鎂0.1～0.5克，加水至500ml，混勻，分裝至錐形瓶中，每瓶50ml，滅菌；②搖瓶發酵培養基的配製取葡萄糖2～5克，可溶性澱粉10～30克，蛋白腖0.5～1.5克，磷酸氫二鉀0.1～1克，氯化鈉0.1～0.5克，硫酸鎂0.1～0.5克，加水至500ml，分裝，每瓶45ml，滅菌；(2)種子培養及發酵①搖瓶種子培養將利迪鏈黴菌(Streptomyces luteogriseus)CGMCC1692及不產利迪鏈菌素的利迪鏈黴菌突變株K、利迪鏈黴菌突變株S和利迪鏈黴菌突變株Z分別接入搖瓶種子培養基中，25～30℃，200～250轉/分鐘，培養36～60小時，製得搖瓶種子液；②搖瓶發酵培養將所述搖瓶種子液按照體積百分含量為8～12％的接種量接入搖瓶發酵培養基中，25～30℃，200～250轉/分鐘培養；(3)樣品的製備①菌體的獲得從搖瓶發酵培養12小時開始取樣，每隔12小時取一次樣，至少取5次，4000～6000轉/分鐘，離心10～20分鐘，菌體用質量/體積百分比為0.5％NaCl水溶液洗滌2～4次，經4000～6000轉/分鐘離心10～20分鐘，洗滌後的菌體真空冷凍乾燥後備用；②KBr晶片的製備取3～5mg乾燥後的菌體與150～300mg的乾燥KBr置於瑪瑙研缽中充分研磨後，裝入模具中在7×107Pa～10×107Pa的壓力下將樣品粉末壓成KBr錠片；(4)傅立葉變換紅外光譜分析用紅外分光光度計測定紅外光譜，解析度為4cm-1，掃描範圍4000～400cm-1，掃描結果為15～25次掃描的平均值；(5)數據處理採用歸一化法；(6)再經紅外數據的主成分分析(PCA)及人工神經網絡分析(ANN)，篩選出能產利迪鏈菌素的利迪鏈黴菌突變株。
搖瓶種子培養基的配製優選的是取葡萄糖3克，可溶性澱粉15克，酵母浸粉1克，蛋白腖2克，磷酸氫二鉀0.5克，氯化鈉0.2克，硫酸鎂0.2克，加水至500ml，混勻，分裝至錐形瓶中，每瓶50ml，滅菌。
搖瓶發酵培養基的配製優選的是取葡萄糖2.5克，可溶性澱粉20克，蛋白腖1克，磷酸氫二鉀0.5克，氯化鈉0.25克，硫酸鎂0.25克，加水至500ml，分裝，每瓶45ml，滅菌。
搖瓶種子培養溫度最好是為28℃，轉速為220轉/分鐘，培養時間最好是48小時。
搖瓶發酵培養最好是將所述搖瓶種子液按照體積百分含量為10％的接種量接入搖瓶發酵培養基中，培養溫度為28℃，轉速為220轉/分鐘。
在菌體的獲得步驟中，所述從搖瓶發酵培養液中取樣後離心時的轉速最好為4800轉/分鐘，離心時間為15分鐘，所述菌體用質量/體積百分比為0.5％的NaCl水溶液洗滌2次，經4800轉/分鐘，離心時間為15分鐘。
KBr晶片的製備最好是取3mg乾燥後的菌體與150mg的乾燥KBr置於瑪瑙研缽中充分研磨後，裝入模具中在8×107Pa壓力下將樣品粉末壓成KBr錠片。
傅立葉變換紅外光譜分析中所述掃描結果最好是20次掃描的平均值。
所述步驟(5)的數據處理採用歸一化法時，紅外譜圖最好是採用400～1800cm-1以及2600～3200cm-12個範圍的數據。
紅外數據的主成分分析(PCA)等無監督方法能夠以海量的代謝物組學數據為基礎對生物樣本進行分類，反映不同代謝模式的差異；而人工神經網絡分析(ANN)等有監督方法能夠以一定數量的生物樣本做為訓練樣本建立數學模型，對未知樣本進行預測。
本發明的優點是本發明確定了一種適合利迪鏈黴菌及其突變株快速篩選的方法，包括菌種培養、紅外譜圖的掃描範圍、紅外數據的預處理及分析方法。本發明的應用，可以大幅度提高誘變菌株的篩選速度，提高誘變的工作效率。
圖1為利迪鏈黴菌(Streptomyces luteogriseus)CGMCC1692及其利迪鏈黴菌突變株K、利迪鏈黴菌突變株S和利迪鏈黴菌突變株Z不同培養時間菌體紅外吸收光譜數據的PCA分析結果。A12小時；B24小時；C36小時；D48小時；E60小時；F72小時。
圖2為同一菌株不同培養時間菌體紅外吸收光譜數據的PCA分析結果。A利迪鏈黴菌(Streptomyces luteogriseus)CGMCC1692；B利迪鏈黴菌突變株K；C利迪鏈黴菌突變株S；D利迪鏈黴菌突變株Z。
具體實施例方式
下面結合具體實施例對本發明作進一步說明實施例1一種快速篩選產利迪鏈菌素的利迪鏈黴菌突變株的方法，由如下步驟組成
(1)培養基的配製①搖瓶種子培養基的配製取葡萄糖2.5克，可溶性澱粉15克，酵母浸粉1克，蛋白腖2克，磷酸氫二鉀0.75克，氯化鈉0.25克，硫酸鎂0.25克，加水至500ml，混勻，分裝至錐形瓶中，每瓶50ml，121℃滅菌20min；②搖瓶發酵培養基的配製取葡萄糖2.5克，可溶性澱粉20克，蛋白腖1克，磷酸氫二鉀0.5克，氯化鈉0.25克，硫酸鎂0.25克，加水至500ml，混勻，分裝至錐形瓶中，每瓶45ml，121℃滅菌20min；(2)種子培養及發酵①搖瓶種子培養將利迪鏈黴菌(Streptomyces luteogriseus)CGMCC1692及不產利迪鏈菌素的利迪鏈黴菌突變株K、利迪鏈黴菌突變株S和利迪鏈黴菌突變株Z分別接入搖瓶種子培養基中，培養溫度為28℃，轉速為220轉/分鐘，培養48小時，製得搖瓶種子液；②搖瓶發酵培養將搖瓶種子液按照體積百分含量為10％的接種量接入搖瓶發酵培養基中，培養溫度為28℃，轉速為220轉/分鐘培養；(3)樣品的製備①菌體的獲得從搖瓶發酵培養12小時開始，每隔12小時取一次樣，取5次，每次經4800轉/分鐘，離心15分鐘，將菌體用質量/體積百分比(克/100毫升)為0.5％的NaCl水溶液洗滌2次，洗滌後，用同樣條件離心，即每次經4800轉/分鐘，離心15分鐘，洗滌後的菌體真空冷凍乾燥後備用；②KBr晶片的製備取3mg乾燥後的菌體與150mg的乾燥KBr置於瑪瑙研缽中充分研磨後，裝入模具中在8×107Pa壓力下將樣品粉末壓成KBr錠片；(4)傅立葉變換紅外光譜(FT-IR)分析用島津FT-IR 8900型紅外分光光度計測定紅外光譜，解析度為4cm-1，掃描範圍4000～400cm-1，掃描結果為20次掃描的平均值；(5)數據處理採用歸一化法，根據紅外譜圖的情況採用400～1800cm-1以及2600～3200cm-12個範圍的數據；(6)再經紅外數據的主成分分析(PCA)及人工神經網絡分析(ANN)，能區分出培養不同時間的利迪鏈黴菌及其突變株，也可以通過人工神經網絡分析將產和不產利迪鏈菌素的菌株鑑定出來，即篩選出能產利迪鏈菌素的利迪鏈黴菌突變株。
利迪鏈黴菌突變株K為β-酮醯基-ACP合成酶基因插入失活後得到的、利迪鏈黴菌突變株S為S-腺苷蛋氨酸合成酶基因插入失活後得到的，利迪鏈黴菌突變株Z為紫外線照射及亞硝酸複合誘變後篩選得到的。
前兩個突變株獲得方法，專業技術人員可以從文獻中查到，具體做法是根據相同功能基因的同源性設計引物，利用PCR(聚合酶鏈式反應)擴增得到β-酮醯基-ACP合成酶基因和S-腺苷蛋氨酸合成酶基因的片段。將每個基因片段分別連接在大腸桿菌和鏈黴菌的穿梭質粒pKC1139上，通過原生質體轉化轉入利迪鏈黴菌的原生質體中。通過同源單交換的原理，pKC1139的片段插入到利迪鏈黴菌相應基因的內部，從而導致該基因的失活。由於質粒上攜帶有安普黴素的抗性基因和溫敏特性，只有突變株才能在高於34℃的條件下，在含有安普黴素的培養基上生長。參考文獻1.Hopwood，D.A.，Bibb，M.J.，Chater，K.F.，Kieser，T.，Bruton，C.J.，Kieser，H.M.，Lydiate，D.J.，Smith，C.P.，Ward，J.M.and Shrempf，H.1985.Genetic manipulation of StreptomycesA laboratory manual.NorwichJohn InnesFoundation；2.Xiang，L.K.and Moore，B.S.2003.Characterization of benzoyl coenzyme Abiosynthesis genes in the enterocin-producing bacterium「Streptomyces maritimus」.J.bacterial.185，399-404。
利迪鏈黴菌突變株Z為紫外線照射及亞硝酸複合誘變後篩選得到的，獲得的方法是先經紫外線照射(30W紫外燈距離35釐米照射10秒鐘)後，經0.001M的亞硝酸處理3分鐘，再通過常規方法篩選得到的。
圖1的結果表明，利迪鏈黴菌(Streptomyces luteogriseus)CGMCC1692及其3種不產利迪鏈菌素的利迪鏈黴菌突變株K、利迪鏈黴菌突變株S和利迪鏈黴菌突變株Z在發酵培養12、24、36、48、60和72小時的情況下均能通過本發明實施例1提供的方法得到很好地區分。表明最多需要培養12小時即可進行菌種的篩選，同時證明了該方法的適用性、實用性和可行性，特別是對表型變化不明顯的突變株進行篩選時更具優勢。
圖2的結果表明，培養12、24、36、48、60和72小時的每株菌均能得到很好的區分。進一步證明了本發明的適用性、實用性和可行性。
表1表明用人工構建的神經網絡(共4層，神經元數分別為5、10和1，產利迪鏈菌素的目標值設為1，不產的設為0)經過訓練後，可以準確地預測突變株能否產利迪鏈菌素。按照本發明提供的培養條件，利迪鏈黴菌(Streptomyces luteogriseus)CGMCC1692需要培養至少36小時才能檢測到利迪鏈菌素。利用本發明提供的方法，最多需要12小時就可以預測突變株能否產利迪鏈菌素，可以大大縮短菌種篩選的時間。
表1為人工神經網絡用產及不產利迪鏈菌素的樣本訓練後預測的結果與實際結果的比較。
表1人工神經網絡預測的結果與實際結果的比較
實施例2一種快速篩選產利迪鏈菌素的利迪鏈黴菌突變株的方法，由如下步驟組成(1)培養基的配製①搖瓶種子培養基的配製取葡萄糖3克，可溶性澱粉15克，酵母浸粉0.5克，蛋白腖1克，磷酸氫二鉀0.5克，氯化鈉0.2克，硫酸鎂0.2克，加水至500ml，混勻，分裝至錐形瓶中，每瓶50ml，120℃滅菌30min；②搖瓶發酵培養基的配製取葡萄糖2克，可溶性澱粉30克，蛋白腖1克，磷酸氫二鉀0.5克，氯化鈉0.25克，硫酸鎂0.25克，加水至500ml，混勻，分裝至錐形瓶中，每瓶45ml，12℃滅菌30min；(2)種子培養及發酵①搖瓶種子培養將利迪鏈黴菌(Streptomyces luteogriseus)CGMCC1692及不產利迪鏈菌素的利迪鏈黴菌突變株K、利迪鏈黴菌突變株S和利迪鏈黴菌突變株Z分別接入搖瓶種子培養基中，培養溫度為25℃，轉速為200轉/分鐘，培養60小時，製得搖瓶種子液；②搖瓶發酵培養將搖瓶種子液按照體積百分含量為8％的接種量接入搖瓶發酵培養基中，培養溫度為28℃，轉速為200轉/分鐘培養；(3)樣品的製備①菌體的獲得從搖瓶發酵培養12小時開始，每隔12小時取一次樣，取6次，每次經4000轉/分鐘，離心20分鐘，將菌體用質量/體積百分比(克/100毫升)為0.5％的NaCl水溶液洗滌4次，洗滌後，用同樣條件離心，即每次經4000轉/分鐘，離心20分鐘，洗滌後的菌體真空冷凍乾燥後備用；②KBr晶片的製備取4mg乾燥後的菌體與200mg的乾燥KBr置於瑪瑙研缽中充分研磨後，裝入模具中在7×107Pa壓力下將樣品粉末壓成KBr錠片；(4)傅立葉變換紅外光譜(FT-IR)分析用島津FT-IR 8900型紅外分光光度計測定紅外光譜，解析度為4cm-1，掃描範圍4000～400cm-1，掃描結果為15次掃描的平均值；(5)數據處理採用歸一化法，根據紅外譜圖的情況採用400～1800cm-1以及2600～3200cm-12個範圍的數據；(6)再經紅外數據的主成分分析(PCA)及人工神經網絡分析(ANN)，能區分出培養不同時間的利迪鏈黴菌及其突變株，也可以通過人工神經網絡分析將產和不產利迪鏈菌素的菌株鑑定出來，即篩選出能產利迪鏈菌素的利迪鏈黴菌突變株。
實施例3一種快速篩選產利迪鏈菌素的利迪鏈黴菌突變株的方法，由如下步驟組成(1)培養基的配製①搖瓶種子培養基的配製取葡萄糖1克，可溶性澱粉20克，酵母浸粉1.5克，蛋白腖3克，磷酸氫二鉀0.2克，氯化鈉0.1克，硫酸鎂0.5克，加水至500ml，混勻，分裝至錐形瓶中，每瓶50ml，120℃滅菌30min；②搖瓶發酵培養基的配製取葡萄糖5克，可溶性澱粉10克，蛋白腖0.5克，磷酸氫二鉀0.1克，氯化鈉0.1克，硫酸鎂0.5克，加水至500ml，混勻，分裝至錐形瓶中，每瓶45ml，12℃滅菌30min；
(2)種子培養及發酵①搖瓶種子培養將利迪鏈黴菌(Streptomyces luteogriseus)CGMCC1692及不產利迪鏈菌素的利迪鏈黴菌突變株K、利迪鏈黴菌突變株S和利迪鏈黴菌突變株Z分別接入搖瓶種子培養基中，培養溫度為30℃，轉速為250轉/分鐘，培養36小時，製得搖瓶種子液；②搖瓶發酵培養將搖瓶種子液按照體積百分含量為12％的接種量接入搖瓶發酵培養基中，培養溫度為25℃，轉速為250轉/分鐘培養；(3)樣品的製備①菌體的獲得從搖瓶發酵培養12小時開始，每隔12小時取一次樣，取7次，每次經6000轉/分鐘，離心10分鐘，將菌體用質量/體積百分比(克/100毫升)為0.5％的NaCl水溶液洗滌3次，洗滌後，用同樣條件離心，即每次經6000轉/分鐘，離心10分鐘，洗滌後的菌體真空冷凍乾燥後備用；②KBr晶片的製備取5mg乾燥後的菌體與300mg的乾燥KBr置於瑪瑙研缽中充分研磨後，裝入模具中在10×107Pa壓力下將樣品粉末壓成KBr錠片；(4)傅立葉變換紅外光譜(FT-IR)分析用島津FT-IR 8900型紅外分光光度計測定紅外光譜，解析度為4cm-1，掃描範圍4000～400cm-1，掃描結果為25次掃描的平均值；(5)數據處理採用歸一化法，根據紅外譜圖的情況採用400～1800cm-1以及2600～3200 cm-12個範圍的數據；(6)再經紅外數據的主成分分析(PCA)及人工神經網絡分析(ANN)，能區分出培養不同時間的利迪鏈黴菌及其突變株，也可以通過人工神經網絡分析將產和不產利迪鏈菌素的菌株鑑定出來，即篩選出能產利迪鏈菌素的利迪鏈黴菌突變株。
實施例4一種快速篩選產利迪鏈菌素的利迪鏈黴菌突變株的方法，由如下步驟組成(1)培養基的配製①搖瓶種子培養基的配製取葡萄糖5克，可溶性澱粉10克，酵母浸粉1.5克，蛋白腖3克，磷酸氫二鉀1克，氯化鈉0.5克，硫酸鎂0.1克，加水至500ml，混勻，分裝至錐形瓶中，每瓶50ml，120℃滅菌30min；②搖瓶發酵培養基的配製取葡萄糖5克，可溶性澱粉10克，蛋白腖1.5克，磷酸氫二鉀1克，氯化鈉0.5克，硫酸鎂0.1克，加水至500ml，混勻，分裝至錐形瓶中，每瓶45ml，12℃滅菌30min；(2)種子培養及發酵①搖瓶種子培養將利迪鏈黴菌(Streptomyces luteogriseus)CGMCC1692及不產利迪鏈菌素的利迪鏈黴菌突變株K、利迪鏈黴菌突變株S和利迪鏈黴菌突變株Z分別接入搖瓶種子培養基中，培養溫度為28℃，轉速為220轉/分鐘，培養48小時，製得搖瓶種子液；②搖瓶發酵培養將搖瓶種子液按照體積百分含量為11％的接種量接入搖瓶發酵培養基中，培養溫度為27℃，轉速為220轉/分鐘培養；(3)樣品的製備①菌體的獲得從搖瓶發酵培養12小時開始，每隔12小時取一次樣，取10次，每次經4800轉/分鐘，離心15分鐘，將菌體用質量/體積百分比(克/100毫升)為0.5％的NaCl水溶液洗滌3次，洗滌後，用同樣條件離心，即每次經4800轉/分鐘，離心15分鐘，洗滌後的菌體真空冷凍乾燥後備用；②KBr晶片的製備取5mg乾燥後的菌體與300mg的乾燥KBr置於瑪瑙研缽中充分研磨後，裝入模具中在10×107Pa壓力下將樣品粉末壓成KBr錠片；(4)傅立葉變換紅外光譜(FT-IR)分析用島津FT-IR 8900型紅外分光光度計測定紅外光譜，解析度為4cm-1，掃描範圍4000～400cm-1，掃描結果為25次掃描的平均值；(5)數據處理採用歸一化法，根據紅外譜圖的情況採用400～1800cm-1以及2600～3200cm-12個範圍的數據；(6)再經紅外數據的主成分分析(PCA)及人工神經網絡分析(ANN)，能區分出培養不同時間的利迪鏈黴菌及其突變株，也可以通過人工神經網絡分析將產和不產利迪鏈菌素的菌株鑑定出來，即篩選出能產利迪鏈菌素的利迪鏈黴菌突變株。
權利要求
1.一種快速篩選產利迪鏈菌素的利迪鏈黴菌突變株的方法，其特徵由如下步驟組成(1)培養基的配製①搖瓶種子培養基的配製取葡萄糖1～5克，可溶性澱粉10～20克，酵母浸粉0.5～1.5克，蛋白腖1～3克，磷酸氫二鉀0.2～1.0克，氯化鈉0.1～0.5克，硫酸鎂0.1～0.5克，加水至500ml，混勻，分裝至錐形瓶中，每瓶50ml，滅菌；②搖瓶發酵培養基的配製取葡萄糖2～5克，可溶性澱粉10～30克，蛋白腖0.5～1.5克，磷酸氫二鉀0.1～1克，氯化鈉0.1～0.5克，硫酸鎂0.1～0.5克，加水至500ml，分裝，每瓶45ml，滅菌；(2)種子培養及發酵①搖瓶種子培養將利迪鏈黴菌(Streptomyces luteogriseus)CGMCC1692及不產利迪鏈菌素的利迪鏈黴菌突變株K、利迪鏈黴菌突變株S和利迪鏈黴菌突變株Z分別接入搖瓶種子培養基中，25～30℃，200～250轉/分鐘，培養36～60小時，製得搖瓶種子液；②搖瓶發酵培養將所述搖瓶種子液按照體積百分含量為8～12％的接種量接入搖瓶發酵培養基中，25～30℃，200～250轉/分鐘培養；(3)樣品的製備①菌體的獲得從搖瓶發酵培養12小時開始取樣，每隔12小時取一次樣，至少取5次，4000～6000轉/分鐘，離心10～20分鐘，菌體用質量/體積百分比為0.5％NaCl水溶液洗滌2～4次，經4000～6000轉/分鐘離心10～20分鐘，洗滌後的菌體真空冷凍乾燥後備用；②KBr晶片的製備取3～5mg乾燥後的菌體與150～300mg的乾燥KBr置於瑪瑙研缽中充分研磨後，裝入模具中在7×107Pa～10×107Pa的壓力下將樣品粉末壓成KBr錠片；(4)傅立葉變換紅外光譜分析用紅外分光光度計測定紅外光譜，解析度為4cm-1，掃描範圍4000～400cm-1，掃描結果為15～25次掃描的平均值；(5)數據處理採用歸一化法；(6)再經紅外數據的主成分分析及人工神經網絡分析，篩選出能產利迪鏈菌素的利迪鏈黴菌突變株。
2.根據權利要求1所述的一種快速篩選產利迪鏈菌素的利迪鏈黴菌突變株的方法，其特徵是所述搖瓶種子培養基的配製取葡萄糖3克，可溶性澱粉15克，酵母浸粉1克，蛋白腖2克，磷酸氫二鉀0.5克，氯化鈉0.2克，硫酸鎂0.2克，加水至500ml，混勻，分裝至錐形瓶中，每瓶50ml，滅菌。
3.根據權利要求1所述的一種快速篩選產利迪鏈菌素的利迪鏈黴菌突變株的方法，其特徵是所述搖瓶發酵培養基的配製取葡萄糖2.5克，可溶性澱粉20克，蛋白腖1克，磷酸氫二鉀0.5克，氯化鈉0.25克，硫酸鎂0.25克，加水至500ml，分裝，每瓶45ml，滅菌。
4.根據權利要求1所述的一種快速篩選產利迪鏈菌素的利迪鏈黴菌突變株的方法，其特徵是所述搖瓶種子培養溫度為28℃，轉速為220轉/分鐘，培養時間為48小時。
5.根據權利要求1所述的一種快速篩選產利迪鏈菌素的利迪鏈黴菌突變株的方法，其特徵是所述搖瓶發酵培養將所述搖瓶種子液按照體積百分含量為10％的接種量接入搖瓶發酵培養基中，28℃，220轉/分鐘培養。
6.根據權利要求1所述的一種快速篩選產利迪鏈菌素的利迪鏈黴菌突變株的方法，其特徵是所述菌體的獲得步驟中，所述從搖瓶發酵培養液中取樣後離心時的轉速為4800轉/分鐘，離心時間為15分鐘，所述菌體用NaCl水溶液洗滌的次數為2次，經4800轉/分鐘，離心時間為15分鐘。
7.根據權利要求1所述的一種快速篩選產利迪鏈菌素的利迪鏈黴菌突變株的方法，其特徵是所述KBr晶片的製備取3mg乾燥後的菌體與150mg的乾燥KBr置於瑪瑙研缽中充分研磨後，裝入模具中在8×107Pa壓力下將樣品粉末壓成KBr錠片。
8.根據權利要求1所述的一種快速篩選產利迪鏈菌素的利迪鏈黴菌突變株的方法，其特徵是所述傅立葉變換紅外光譜分析中所述掃描結果為20次掃描的平均值。
9.根據權利要求1所述的一種快速篩選產利迪鏈菌素的利迪鏈黴菌突變株的方法，其特徵是所述步驟(5)的數據處理採用歸一化法時，紅外譜圖採用400～1800cm-1以及2600～3200cm-12個範圍的數據。
全文摘要
本發明公開了一種快速篩選產利迪鏈菌素的利迪鏈黴菌突變株的方法，由如下步驟組成(1)培養基的配製；(2)種子培養及發酵；(3)樣品的製備；(4)傅立葉變換紅外光譜分析；(5)數據處理；(6)再經紅外數據的主成分分析及人工神經網絡分析，能快速篩選出產利迪鏈菌素的利迪鏈黴菌突變株，本發明確定了一種適合利迪鏈黴菌及其突變株快速篩選的方法，可以大幅度提高誘變菌株的篩選速度，提高誘變的工作效率。
文檔編號C12R1/465GK1928070SQ200610015569
公開日2007年3月14日 申請日期2006年9月1日 優先權日2006年9月1日
發明者元英進, 於鳳鳴, 吳曉健 申請人:天津大學