一種測定抗氧化能力的試劑盒的製作方法

2023-10-31 13:05:47

本發明涉及抗氧化能力測定的技術領域，尤其涉及一種測定抗氧化能力的試劑盒。

背景技術：

氧化自由基學說認為，活性氧(ROS)和活性氮(RNS)可以生成自由基，從而引起細胞脂質、細胞膜、蛋白和DNA出現氧化性損傷。隨著時間的推移，氧自由基產生增多，而機體清除能力下降，同時SOD、GSH-PX、CAT酶等活性降低。而且過剩的自由基能與機體細胞中不飽和脂肪酸結合產生MDA等有害化合物。

機體內所有抗氧化基的抗氧化能力的總和稱之為「總抗氧化能力」，總抗氧化能力常常用來評價機體抗氧化系統的總體能力，同時也被用來評價一些保健食品和天然植物的抗氧化性能，揭示出生物抵抗細胞內的氧化應激誘導損傷的能力的強弱。目前對抗氧化能力檢測的基本上是通過購買試劑盒對機體樣品加以檢測的。但是現有技術公開的試劑盒，操作步驟繁瑣、複雜。

技術實現要素：

有鑑於此，本發明的目的在於針對現有技術的不足，而提供一種測定抗氧化能力的試劑盒。

為了實現上述發明目的，本發明提供以下技術方案：

本發明提供了一種測定抗氧化能力的試劑盒，包括以下試劑：碘液、澱粉溶液和凝固劑溶液。

優選的，所述碘液盛放於棕色玻璃瓶中，所述棕色玻璃瓶的容量為 10～100ml。

優選的，所述澱粉溶液盛放於玻璃瓶或塑料瓶中，所述盛放澱粉溶液的玻璃瓶或塑料瓶的容量為1～10ml。

優選的，所述凝固劑溶液盛放於玻璃瓶或塑料瓶中，所述盛放凝固劑溶液的玻璃瓶或塑料瓶的容量為10～100ml。

優選的，所述試劑盒的形狀為長方體，所述試劑盒的底部有3個凹槽。

優選的，所述試劑盒還包括毛細管、矽膠管和注射器。

優選的，所述毛細管的容量為5～10μl。

優選的，所述毛細管的長度為5～15cm。

優選的，所述試劑盒的形狀為長方體，所述試劑盒有6個凹槽。

本發明提供的測定抗氧化能力的試劑盒，包括碘液、澱粉溶液和凝固劑溶液。在本發明中，碘液、澱粉溶液和凝固劑混合後，得到藍色的混合溶液，原理是澱粉溶液中的澱粉遇到碘液中的碘單質後變成藍色，待藍色的混合溶液冷卻後，得到凝固態的碘澱粉，而樣品中的還原物質將與澱粉結合的碘單質還原為碘離子，使藍色變為白色，根據顏色的變化快速分辨抗氧化能力的強弱。本發明提供的試劑盒，操作步驟簡單便捷、快速，可在1h內得到測定結果。而且通過用肉眼可直接判斷樣品溶液抗氧化能力的強弱，並能定量分析樣品溶液中的抗氧化能力，本發明提供的試劑盒的檢測試劑安全無毒，成本低，效果明顯。

附圖說明

圖1為本發明試劑盒的結構示意圖；

圖2為本發明試劑盒優選方案的結構示意圖；

圖3為本發明實施例提供的測定抗氧化能力儀器的連接示意圖。

具體實施方式

本發明提供了一種測定抗氧化能力的試劑盒，包括碘液、澱粉溶液和凝固劑溶液。

本發明提供的試劑盒包括碘液。在本發明中，所述碘液優選由碘單質、碘化物和水配製而成。所述碘化物優選為碘化鉀、碘化鈉、碘化銀、四碘化碳和三碘化氮中的一種或幾種。本發明對所述碘化物的來源沒有特殊的限定，採用本領域技術人員常規選用的藥品即可。在本發明中，所述碘化物具體的可優選為上述藥品中的任意幾種，更優選為兩種。當所述碘化物優選為碘化鉀和碘化鈉，所述碘化鉀和碘化鈉的質量比優選為(0.5～2):(0.5～2)，更優選為(0.8～1.5)：(0.8～1.5)，最優選為1：1。在本發明中，所述碘化物具體的最優選為上述藥品中的碘化鉀。

本發明的試劑盒的結構示意圖具體參見圖1：4、5和6為盛放碘液的棕色玻璃瓶、盛放澱粉溶液的玻璃瓶和盛放凝固劑溶液的玻璃瓶，對上述玻璃瓶的擺放順序沒有特殊限定。

在本發明中，所述碘液中碘單質的濃度優選為(6.9～8.5)×10-7mol/ml，更優選為(7.4～8.2)×10-7mol/ml，最優選為7.9×10-7mol/ml。在本發明中，所述試劑盒中的碘液優選採用棕色的玻璃瓶盛放，所述棕色玻璃瓶的容量優選為10～100ml，更優選為30～70ml，最優選為50ml。

所述澱粉溶液優選採用玻璃瓶或塑料瓶盛放，所述玻璃瓶或塑料瓶的容量優選為1～10ml，更優選為3～7ml，最優選為5ml。

本發明提供的試劑盒包括澱粉溶液。在本發明中，所述澱粉溶液中澱粉的濃度優選為(3.0～4.5)g/ml，更優選為(3.5～4.0)g/ml，最優選為3.75g/ml。本發明對所述澱粉的來源沒有特殊限定，採用本領域技術人員常規選用的市售商品即可。在本發明中，所述澱粉具體的可優選為可溶性澱粉。在本發明中，所述澱粉溶液優選採用玻璃瓶或塑料瓶盛放，所述澱粉溶液的容量優選為1～10ml，更優選為3～7ml，最優選為5ml。

本發明提供的試劑盒包括凝固劑溶液。在本發明中，所述凝固劑溶液中凝固劑的濃度優選為(1.0～1.4)g/ml，更優選為(1.1～1.3)g/ml，最優選為 1.2g/ml。在本發明中，所述凝固劑優選為瓊脂、明膠和果膠中的一種或幾種，更優選為兩種。當所述凝固劑更優選為上述藥品中的兩種時，所述凝固劑的質量比優選為(0.5～2)：(0.5～2)，更優選為(0.8～1.5)：(0.8～1.5)，最優為1：1。在本發明中，所述凝固劑具體的最優選為瓊脂。本發明對所述凝固劑的來源沒有特殊限定，採用本領域技術人員熟知的市售商品即可。

在本發明中，上述各個試劑中的溶劑為水，本發明對所述水的種類沒有特殊的限定，採用本領域技術人員熟知的配製溶液所需的水即可；在本發明中，所述水優選為蒸餾水，更優選為超純水。

在本發明中，所述凝固劑溶液優選由所述凝固劑與水加熱溶解得到。在本發明中，所述加熱溶解的溫度優選為90～110℃，更優選為95～105℃，最優選為100℃；所述加熱溶解的時間優選為3～8min，更優選為4～6min，最優選為5min。本發明對所述加熱溶解的儀器沒有特殊限定，採用本領域技術人員常規加熱溶解的儀器即可，如微波爐。

在本發明中，所述凝固劑溶液優選採用玻璃瓶或塑料瓶盛放，所述玻璃瓶或塑料瓶的容量為10～100ml，更優選為30～70ml，最優選為50ml。

本發明對所述的盛放試劑的玻璃瓶或塑料瓶的來源沒有特殊限定，採用市售商品即可。

在本發明中，所述試劑盒的形狀優選為長方體，上端開口，在試劑盒內層的底部優選有三個凹槽，用來固定盛放試劑的試劑瓶，對所述盛放試劑的試劑瓶的擺放順序沒有特殊限定。

在本發明中，所述碘液、澱粉溶液和凝固劑溶液的混合優選為：將碘液與澱粉溶液混合後，得到碘澱粉溶液，再與凝固劑溶液混合。在本發明中，所述凝固劑溶液與碘澱粉溶液混合更優選為將凝固劑與水混合後加熱溶解，當凝固劑溶液冷卻至45～60℃時，再與碘澱粉溶液混合。在本發明中，所述凝固劑溶液更優選冷卻至47～55℃，最優選為50℃。本發明對所述凝固劑溶液加熱的儀器沒有特殊的限定，採用本領域技術人員常規選用的儀器即可，如微波爐。

在本發明中，用於混合的所述碘液、澱粉溶液和凝固劑溶液的體積比優選為(1～3)：(0.1～0.3)：(5～15)，更優選為(1.5～2.5)：(0.15：0.25)： (7～10)，最優選為2：0.2：8。在本發明中，混合後，澱粉遇到碘單質後變成藍色，從而使得到的預處理碘澱粉混合液為藍色。

得到預處理碘澱粉混合液後，本發明將所述預處理碘澱粉混合液冷卻，得到凝固態碘澱粉。在本發明中，對所述預處理碘澱粉混合液的冷卻方式沒有特殊限定，採用本領域技術人員常規選用的冷卻溶液的方式即可，如將溶液置於冰上。

得到凝固態碘澱粉以後，本發明將待測樣品溶液浸入所述凝固態的碘澱粉內，根據顏色的變化得到氧化能力的測定結果。在本發明中，所述樣品的種類包括食品、植物和血清。在本發明中，所述血清的待測樣品的處理步驟優選包括將未抗凝處理全血置於離心管中，凝固後3000rpm離心10min，將上清液置於另一離心管中，再次3000rpm離心10min，將上清液置於另一離心管即得。

在本發明中，所述植物的待測樣品的處理步驟優選包括用超純水反覆衝洗幼嫩葉片、莖段或果肉，稱取1-5g葉片、莖段或果肉，在研缽內按料液比1:9的比例加入超純水，研磨成勻漿，將研缽內的物質全部裝入離心管， 10000r/min離心10min，吸取上清液，上清液即為植物的待測樣品。

在本發明中，所述食品的待測樣品的處理步驟優選包括稱取1-5g的待測食品，先用液氮將研缽預冷，加入待測食品用液氮研磨成粉末，在研缽內按料液比1:9的比例加入超純水，混勻製成勻漿，將研缽內的物質全部裝入離心管，10000r/min離心10min，吸取上清液，上清液即為食品的待測樣品。

本發明對所述待測樣品溶液置於凝固態的碘澱粉上的儀器沒有特殊限定，採用本領域技術人員常規選用的儀器即可，如注射器。在本發明中，所述顏色的變化得到抗氧化能力的測定結果具體為顏色由藍色變為白色。在本發明中，所述顏色變為白色的原理是澱粉溶液中的澱粉遇到碘液中的碘單質後變成藍色，樣品中的還原物質將與澱粉結合的碘單質還原為碘離子，使藍色變為白色，進而根據顏色的變化快速分辨抗氧化能力的強弱。

在本發明中，所述預處理碘澱粉混合液用毛細管吸滿，快速冷卻後，得到凝固態碘澱粉，再將毛細管的一端進行封口。在本發明在本發明中，對毛細管的種類和來源沒有特殊限定，採用市售商品即可。在本發明中，所述毛細管的規格優選為容量為5～10μl，更優選為6～9μl，最優選為8μl；所述毛細管的長度優選為5～15cm；更優選為8～12cm，最優選為10cm。

在本發明中，所述毛細管的連接方式具體的可優選為矽膠管的一端連接注射器，矽膠管的另一端連接沒有封口的毛細管。本發明對矽膠管和注射器的種類和來源沒有特殊限定，採用市售商品即可。

在本發明中，所述待測樣品的檢測步驟包括取一端已封口的毛細管，注射器取待測樣品並將待測樣品置於毛細管未封口的一端，注射完畢後將毛細管豎直放置，然後未封口一端連接矽膠管的一端，矽膠管的另一端連接注射器，連接完畢後，注射器注射空氣施加壓力，1h內得到測定結果。

本發明的測定抗氧化能力儀器的連接示意圖如圖3所示：1為注射器，2 為矽膠管，3為毛細管。

在本發明中，所述試劑盒優選還包括上述毛細管、注射器和矽膠管，所述試劑盒優選還包括三個凹槽，用來放置上述毛細管、注射器和矽膠管，對所述毛細管、注射器和矽膠管的擺放順序沒有特殊的限定。

本發明試劑盒優選方案的結構示意圖如圖2所示：4、5和6為盛放碘液的棕色玻璃瓶、盛放澱粉溶液的玻璃瓶和盛放凝固劑溶液的玻璃瓶，對上述玻璃瓶的擺放順序沒有特殊限定；1為注射器，2為矽膠管，3為毛細管。

下面將結合本發明中的實施例，對本發明中的技術方案進行清楚、完整地描述。顯然，所描述的實施例僅僅是本發明一部分實施例，而不是全部的實施例。基於本發明中的實施例，本領域普通技術人員在沒有做出創造性勞動前提下所獲得的所有其他實施例，都屬於本發明保護的範圍。

實施例1

取未抗凝處理的小鼠全血2ml於離心管中，凝固後3000rpm離心10min，取上清液於另一離心管中，再3000rpm離心10min，取上清液置於乾淨的離心管中，即得到待測樣品溶液。取2ml碘液與0.2ml可溶性澱粉溶液混合，得到碘澱粉溶液，碘液中碘單質的濃度為7.9×10-7mol/ml，澱粉溶液中澱粉的濃度為3.75g/ml。取8ml瓊脂溶液，100℃加熱5min，待冷卻至50℃時與碘澱粉溶液混合，得到預處理碘澱粉混合液，瓊脂溶液中瓊脂的濃度為1.2g/ml。取規格為8μl，長度為10cm的毛細管吸滿預處理碘澱粉溶液，快速冷卻毛細管中的溶液直至凝固，然後將毛細管的一端封口，取注射器將待測樣品溶液置於毛細管上方無凝固物處，並豎直放置，然後注射器與毛細管通過矽膠管連接，通過注射器空氣施加壓力使其快速反應，1h測量結果。測量結果為變白部分長度為1.4cm，抗氧化能力相當於消耗3.36×10-10mol碘離子的量。

實施例2

取未抗凝處理的小鼠全血2ml於離心管中，凝固後3000rpm離心10min，取上清液於另一離心管中，再3000rpm離心10min，取上清液置於乾淨的離心管中，即得到待測樣品溶液。取1ml碘液與0.1ml澱粉溶液混合，得到碘澱粉溶液，碘液中碘離子的濃度為6.9×10-7mol/ml，澱粉溶液中澱粉的濃度為 3.0g/ml。取5ml瓊脂溶液，100℃加熱5min，待冷卻至60℃時與碘澱粉溶液混合，得到預處理碘澱粉混合液，瓊脂溶液中瓊脂的濃度為1.0g/ml。取規格為5μl，長度為5cm的毛細管吸滿預處理碘澱粉溶液，快速冷卻毛細管中的溶液直至凝固，然後將毛細管的一端封口，取注射器將待測樣品溶液置於毛細管上方無凝固物處，並豎直放置，然後注射器與毛細管通過矽膠管連接，通過注射器空氣施加壓力使其快速反應，45min測量結果。測量結果為變白部分長度為2.0cm，抗氧化能力相當於消耗4.4×10-10mol碘離子的量。

實施例3

取未抗凝處理的小鼠全血2ml於離心管中，凝固後3000rpm離心10min，取上清液於另一離心管中，再3000rpm離心10min，取上清液置於乾淨的離心管中，即得到待測樣品溶液。取3ml碘液與0.3ml澱粉溶液混合，得到碘澱粉溶液，碘液中碘離子的濃度為8.5×10-7mol/ml，澱粉溶液中澱粉的濃度為 4.5g/ml。取15ml瓊脂溶液，90℃加熱6min，待冷卻至45℃時與碘澱粉溶液混合，得到預處理碘澱粉混合液，瓊脂溶液中瓊脂的濃度為1.4g/ml。取規格為10μl，長度為15cm的毛細管吸滿預處理碘澱粉溶液，快速冷卻毛細管中的溶液直至凝固，然後將毛細管的一端封口，取注射器將待測樣品溶液置於毛細管上方無凝固物處，並豎直放置，然後注射器與毛細管通過矽膠管連接，通過注射器空氣施加壓力使其快速反應，50min測量結果。測量結果為變白部分長度為2.6cm，抗氧化能力相當於消耗4.68×10-10mol碘離子的量。

實施例4

取超純水反覆衝洗幼嫩葉片或莖段或果肉，稱取1-5g葉片或果肉，在研缽內按料液比1:9的比例加入超純水，研磨成勻漿，將研缽內的物質全部裝入離心管，10000r/min離心10min，吸取上清液，即得待測樣品溶液。取1ml 碘液與0.1ml澱粉溶液混合，得到碘澱粉溶液，碘液中碘離子的濃度為6.9× 10-7mol/ml，澱粉溶液中澱粉的濃度為3.0g/ml。取5ml瓊脂溶液，100℃加熱 4min，待冷卻至55℃時與碘澱粉溶液混合，得到預處理碘澱粉混合液，瓊脂溶液中瓊脂的濃度為1.0g/ml。取規格為5μl，長度為5cm的毛細管吸滿預處理碘澱粉溶液，快速冷卻毛細管中的溶液直至凝固，然後將毛細管的一端封口，取注射器將待測樣品溶液置於毛細管上方無凝固物處，並豎直放置，然後注射器與毛細管通過矽膠管連接，通過注射器空氣施加壓力使其快速反應， 55min測量結果。測量結果為變白部分長度為2.0cm，抗氧化能力相當於消耗 4.4×10-10mol碘離子的量。

實施例5

稱取1-5g的待測食品，先用液氮將研缽預冷，加入待測食品用液氮研磨成粉末，在研缽內按料液比1:9的比例加入超純水，混勻製成勻漿，將研缽內的物質全部裝入離心管，10000r/min離心10min，吸取上清液，即得待測樣品溶液。取2ml碘液與0.2ml可溶性澱粉溶液混合，得到碘澱粉溶液，碘液中碘單質的濃度為7.9×10-7mol/ml，澱粉溶液中澱粉的濃度為3.75g/ml。取8ml 瓊脂溶液，110℃加熱6min，待冷卻至50℃時與碘澱粉溶液混合，得到預處理碘澱粉混合液，瓊脂溶液中瓊脂的濃度為1.2g/ml。取規格為8μl，長度為 10cm的毛細管吸滿預處理碘澱粉溶液，快速冷卻毛細管中的溶液直至凝固，然後將毛細管的一端封口，取注射器將待測樣品溶液置於毛細管上方無凝固物處，並豎直放置，然後注射器與毛細管通過矽膠管連接，通過注射器空氣施加壓力使其快速反應，1h測量結果。測量結果為變白部分長度為1.4cm，抗氧化能力相當於消耗3.36×10-10mol碘離子的量。

由以上實施例可知，本發明提供的試劑盒，操作步驟簡單便捷、快速，可在1h內得到測定結果。而且通過用肉眼可直接判斷樣品溶液抗氧化能力的強弱，並能定量分析樣品溶液中的抗氧化能力，本發明提供的試劑盒的檢測試劑安全無毒，成本低，效果明顯。

以上所述僅是本發明的優選實施方式，應當指出，對於本技術領域的普通技術人員來說，在不脫離本發明原理的前提下，還可以做出若干改進和潤飾，這些改進和潤飾也應視為本發明的保護範圍。