黃連黃芪黃芩組合物在製備防治糖尿病併發症藥物中的應用的製作方法
2023-10-09 23:49:34 1
專利名稱:黃連黃芪黃芩組合物在製備防治糖尿病併發症藥物中的應用的製作方法
技術領域：
本發明屬中藥領域，涉及防治糖尿病併發症的藥物，具體的涉及黃連黃芪黃芩三味中藥有效部位組合物及其在防治糖尿病併發症中的應用。
背景技術：
糖尿病併發症是隨糖尿病(diabetes mellitus, DM)病程的延長而導致的眼、腎、神經、血管及心臟等多組織的慢性病變，是糖尿病致死致殘的主要原因。早期糖尿病腎病、早期糖尿病心臟病和糖尿病視網膜病變是糖尿病微血管病變的「三聯徵」，也是糖尿病最常見的併發症。
目前，防治糖尿病併發症主要從以下幾個方面進行:1，消除胰島素抵抗作用，血清胰島素代償性升高可促使血栓形成，促使動脈壁沉積和動脈平滑肌增殖，促使水鈉瀦留和血壓升高，加速動脈硬化，造成糖尿病大血管病變；2，調整血脂，血脂紊亂是糖尿病大血管病變的重要危險因素之一；3，阻斷蛋白質的非酶糖基化反應，糖尿病的每種慢性併發症都與蛋白質糖化密切相關。糖尿病個體體內蛋白質發生非酶糖基化反應(NEG)，致使終末糖基化產物(AGEs)增多，是導致糖尿病併發症的重要原因之一。AGEs存在於血管、腎臟和神經組織中，通過影響蛋白質的正常功能，從而導致這些臟器損傷，尤其是在糖尿病腎病的發生發展中起著至關重要的作用。抑制NEG發生，減少AGEs的產生是目前研究開發糖尿病併發症藥物的熱點；4 ，抗氧化反應，高葡萄糖血症伴有大量自由基產生，脂質氧化增加又反過來刺激糖的自身氧化，造成血管通透性增加，基底膜增厚以及組織器官的損傷；5，抑制多元醇途徑的過度活化，糖尿病的高葡萄糖血症狀態下，醛糖還原酶活性增加，合成大量山梨醇，山梨醇不能自由進出細胞，造成細胞水腫破裂，另外又影響了對神經功能重要的肌醇。
目前西藥化學合成製劑雖能較有效地控制血糖，但對糖尿病併發症的防治仍缺乏理想的藥物和有效的措施。目前中成藥中的消渴靈具有良好的糾正脂肪及蛋白質代謝紊亂的作用，糖腎安膠囊可改善血液流變性和坐骨神經內微血管狀態。
黃連總生物鹼、黃苗多糖和黃岑總黃酮，分別是中藥黃連(Coptis chinensisFranch.),黃苗(Astragalus membranaceus Bge.)和黃岑(Scutellaria baicalensisGeorgi)的主要有效成分，迄今為止，尚未見有將上述中藥的有效聯合應用於預防治療糖尿病併發症的報導。
發明內容
本發明的目的是提供一種中藥有效部位組合物在預防治療糖尿病併發症的新用途，具體涉及黃連黃芪黃芩有效部位組合物在製備防治糖尿病併發症藥物中的應用。
本發明所述的中藥有效部位組合物由黃連黃芪黃芩提取物組成，製備方法見專利公開號CN101433607。所述的黃連總生物鹼、黃芪多糖和黃芩總黃酮由原生藥黃連、黃芪和黃芩提取所得，純度分別為黃連總生物鹼彡60% (HPLC檢測)，黃芪多糖彡80% (UV檢測)，黃芩總黃酮≥80% (UV檢測)。[0008]黃連、黃芪、黃芩有效部位組成的組合物重量百分比為:1:1:1或2: 2:1或 1:2:1。[0009]本發明將黃連總生物鹼、黃芪多糖和黃芩總黃酮聯合應用，可按常規方法製成藥物組合物臨床常用製劑，所述藥物組合物製劑的劑型可包括:顆粒劑、片劑和膠囊劑等口服固體製劑。[0010]本發明所述藥物組合物經體外酶學和動物模型試驗，結果證實，組合物體外可顯著抑制NEG的進行和糖化終產物AGEs的生成，且優於各自單用效果；體內可改善糖尿病動物糖脂代謝、腎功能相關指標，顯著抑制糖尿病動物腎臟、晶狀體、紅細胞內的醛糖還原酶活性和山梨醇的生成，抑制肝、腎、晶狀體組織內還原型穀胱甘肽(GSH)的含量，降低脂質過氧化產物丙二醛(MDA)，提高動物抗氧化能力。表明組合物具有預防和治療糖尿病併發症的功效，能預防和治療糖尿病腎病、心臟病和視網膜病變。
[0011]附圖是不同濃度DMF與OD值的線性關係。
具體實施方式
[0012]本發明中藥組合物的有益效果通過下述實驗證實:[0013]實施例1製備藥物組合物臨床常用製劑[0014]根據所述重量百分比，取黃連總生物鹼，黃芪多糖和黃芩總黃酮，其配伍的重量百分比為1:1:1或2: 2:1或1: 2:1。按常規方法製成藥物組合物臨床常用製劑， 所述藥物組合物製劑的劑型，包括顆粒劑、片劑和膠囊劑等口服固體製劑。[0015]實施例2[0016]一、體外實驗:黃連黃芪黃芩組合物對非酶化反應及其終產物的抑制作用[0017](一)材料[0018]小牛血清白蛋白(BSA)購自上海伯奧生物科技有限公司，批號080325 ;D_葡萄糖，磷酸二氫鈉，磷酸氫二鈉，氯化鈉，氯化硝基四氮唑藍(NBT)，疊氮鈉購自國藥集團化學試劑有限公司，批號分別為 F20050712, F20080619, F20070810, F20080114, F20080408 ;碳酸鈉，碳酸氫鈉購自上海虹光化工廠，批號分別為071014，080212 ;鹽酸二甲雙胍片購自上海華氏製藥有限公司，批號071113 ;1_脫氧-1-嗎啉果糖(DMF)購自Sigma公司，批號 011H4030。[0019](二)方法[0020]I體外蛋白NEG體系的建立及黃連黃芪黃芩組合物各組分幹預實驗[0021]在PBS(pH7.4)中加入牛血清白蛋白和葡萄糖使其終濃度分別為40g/L、200mmol/ L。上述體系中分別加入終濃度為0.01,0.l、l、5、10mg/mL濃度的氨基胍、二甲雙胍、黃連總生物鹼、黃芪多糖和黃芩總黃酮以及三者組合物(三種藥濃度相等)，每個濃度設4管。另設不加藥、不加糖、不加糖和藥的對照組。反應體系中加入0.1%的疊氮鈉防腐，37°C恆溫水浴箱中孵育，於第4周測定非酶糖基化白蛋白的含量，第8周測定非酶糖基化終產物的含量。[0022]2非酶糖基化白蛋白的測定
(I)試劑配製
3mg氯化硝基四氮唑藍溶於0.lmol/L, pH 10.8碳酸鹽緩衝液中，以新鮮配製為佳。精確稱取DMF 9.96mg於IOml容量瓶中加小牛血清至刻度，配置成4mmol/L 1-脫氧-1-嗎啉果糖標準液，分裝保存於_20°C冰箱中。
(2)測定步驟
整個反應體系在96孔板上進行，每個測定孔加入250 μ I碳酸鹽緩衝液，10 μ I待測定標本10μ 1，另設空白孔和標準孔分別以10μ I小牛血清和4.0mmo I/L DMF標準液取代測定標本。37°C預溫lOmin，然後以加入NBT試劑20 μ I (終濃度為0.25mmol/L)，37°C下反應15min,反應後立即加入10%乙酸20 μ I終止反應。酶標儀波長530nm進行比色,記錄吸光度。根據DMF濃度與相應吸光度標準曲線求得測定標本中糖化白蛋白含量。
(3)DMF標準曲線的確定
在96孔板上分別設定不同濃度的標準孔和相應對照孔。標準孔分別加入2 μ 1、5μ 1、10μ 1、20μ 1、30μ 1、50μ I的DMF標準液，每個濃度設3個復孔，取其平均值。空白孔分別加入相同量的小牛血清，多於10μ I的孔減少相應量的碳酸鹽緩衝液。37°C預溫lOmin，然後以加入NBT試劑20μ I (終濃度為0.25mmol/L)，37°C下反應15min，反應後立即加入10%乙酸20 μ I終止反應。酶標儀波長530nm進行比色，記錄吸光度。根據吸光度和相應DMF的濃度繪製標準曲線。
(4) AGEs 的測定
取200 μ I測定樣本於96孔板上,用Biotek螢光酶標儀370nm/440nm檢測各樣本的螢光吸光值F。並按下式計算抑制率。抑制率=1-[(F藥物-F不加糖)/(F不加藥-F不加藥和糖)]X 100%。
(三)結果
I黃連總生物鹼、黃芪多糖和黃芩總黃酮不同濃度下NEG的抑制率
反應體系37°C恆溫水浴箱中孵育4周後，各組對NEG的抑制率如表3_1所示，氨基胍和二甲雙胍組對NEG的最高抑制率分別為33.9±2.7%和16.7±9.6%。黃芪多糖和黃芩總黃酮具有比較好的NEG抑制活性，最高抑制率分別達到了 37.0±7.9%,44.1±7.8%，均超過了兩組西藥對照，且具有較好的劑量依賴關係。黃連總生物鹼對NEG僅有微弱的抑制作用。但是當三者合用時，組合物對NEG的抑制率有較大的提高，最高抑制率達到了61.4±7.4%，超過了各單個組分的抑制作用。
表I黃連總生物鹼、黃芪多糖和黃芩總黃酮不同濃度下NEG的抑制率(x±s%，η=6)
權利要求
1.黃連總生物鹼、黃芪多糖和黃 芩總黃酮按重量百分比為1:1:1或2: 2:1或 1:2:1組成的組合物在製備抑制非酶糖基化反應及其終產物製劑中的應用。
專利摘要
本發明提供了一種中藥有效部位組合物在預防治療糖尿病併發症的新用途，具體是黃連、黃芪、黃芩有效部位以重量百分比1∶1∶1或2∶2∶1或1∶2∶1的比例組成的組合物，在製備防治糖尿病併發症藥物中的應用，特別是在抑制非酶化反應及其終產物藥物中的應用。
文檔編號A61P3/10GKCN102068513 B發布類型授權 專利申請號CN 200910199158
公開日2013年6月5日 申請日期2009年11月20日
發明者周明眉, 趙愛華, 楊紅舟, 範自全, 賈偉 申請人:上海中醫藥大學導出引文BiBTeX, EndNote, RefMan專利引用 (1), 非專利引用 (1),