高含量硫酸軟骨素的生產方法
2023-10-09 16:44:34 1
專利名稱：：高含量硫酸軟骨素的生產方法
技術領域：
：本發明涉及一種高含量硫酸軟骨素的生產方法。
背景技術：
：硫酸軟骨素是一種廣泛存在於動物軟骨組織中的酸性粘多糖。硫酸軟骨素作為風溼病、關節炎、肩周炎、腰痛、神經痛、偏頭痛等的治療藥物具有良好的效果，同時，硫酸軟骨素具有防治動脈硬化和血栓及保存角膜等多種功能。此外，硫酸軟骨素作為添加劑廣泛用於食品與化妝品等行業。多年來，我國該產品受到國外市場的歡迎，主要出口歐美等國家。工業生產硫酸軟骨素的方法通常包括中性鹽法、鹼法、酶法、鹼一酶法、鹼鹽法等。這些方法生產出的硫酸軟骨素的含量一般很難超過90%,有專利直接用胰酶一步水解軟骨提取硫酸軟骨素的方法，雖然得率很高，但產品含量達不到95%,同時可能存在硫酸鹽等檢查項目不合格的問題。目前精製的方法也有很多，如乙醇分級沉澱法、季胺鹽絡合法、區帶電泳分離法、離子交換層析法等，這些方法在實驗室及小試範圍內可以收到理想的效果，但在工業化大生產中，這些方法具有成本高、能耗大等缺點。
發明內容本發明涉及一種生化藥物原料，特別是一種高含量硫酸軟骨素的生產工藝。本發明的目的是這樣實現的一種高含量硫酸軟骨素的生產方法，其組成包括強鹼鹽煮骨、鹼提取，其特徵是首先用胰勻漿液酶解、然後進行乙醇沉澱把硫酸軟骨素沉澱出來、然後再次進行胰酶酶解，然後進行脫色、膜濃縮、乙醇沉澱、脫水、乾燥。上述的高含量硫酸軟骨素的生產方法，其特徵是所述的用胰勻漿液酶解是調節溶液pH8.5-9.0，升溫至48'C-55°C，加入軟骨質量8%-20%的胰勻漿液，反應6-8小時，用40%三氯醋酸檢查水解物，如溶液不混濁或顯微混濁，證明水解完全，用鹽酸調節pH4.6-6，迅速升溫至70'C-80'C，停止加熱，過濾。上述的高含量硫酸軟骨素的生產方法，其特徵是所述的再次進行胰酶酶解是沉澱加3-10倍量水溶解，在pH8.5-9.0、48°C-55。C條件下加入O.0496-0.5%胰酶，反應5-7小時。上述的高含量硫酸軟骨素的生產方法，其特徵是所述的脫色為溶液pH9-10，升溫至70'C-80°C，加入O.1%-0.5%活性炭，吸附10分鐘，過濾，再在濾液中加入O.5%-2.5%活性炭，脫色l-2小時，過濾。上述的高含量硫酸軟骨素的生產方法，其特徵是所述的濃縮的濾液用有機膜進行超濾濃縮，其中超濾膜的截流分子量為10，000-20，OOO道爾頓，濃縮到原溶液體積的1/3-1/5，濃縮液中加入乙醇，使濃度達70%，硫酸軟骨素沉澱析出。上述的高含量硫酸軟骨素的生產方法，其特徵是第一次酶解用胰勻漿液作為複合酶載體，所述的胰勻漿液是將新鮮或冷凍的動物胰臟用組織勻漿機破碎製成，第二次酶解用胰酶進行酶解。上述的高含量硫酸軟骨素的生產方法，其特徵是所述的脫色是用活性炭處理兩次，第一次脫色活性炭的濃度為0.1%-0.5%，時間為10分鐘，第二次脫色活性炭的濃度為0.5%-2.5%，時間為l-2小時。這個技術方案有以下有益效果1.本發明鹼的使用量少，為軟骨質量的4%-6%。鹼提取後用胰勻漿液酶解，胰勻漿液中含有多種活性酶，可以消化掉大部分與硫酸軟骨素結合的蛋白質及其他物質。胰勻漿液用量為原料重量的8-20%，生產成本可降低20%-10%2.本發明用不同濃度的活性炭處理濾液，分別達到吸附雜質與脫色的作用。用截留分子量為10，000-20，OOO道爾頓的有機膜進行超濾濃縮，能夠除去解離下來的小分子蛋白質或多肽及無機鹽類雜質，同時起到富集硫酸軟骨素溶液的作用。用該方法生產出的硫酸軟骨素各項指標均符合出口標準，含量高達95%以上。3.本發明耗能小、成本低，生產工藝簡單。實施例1:將潔淨豬鼻骨500kg投入提取灌，煮骨，鹼鹽提取。加入鹽酸(1:1)調pH8.7，升溫至49'C,加入100kg胰勻漿液，保持49'C水解6小時。取少量溶液用濾紙過濾，濾液置於10ml比色管中，加入5滴40%三氯乙酸溶液，溶液不產生渾濁，證明水解完全。加入鹽酸(l:l)測pH4.8，迅速升溫至75'C，停止攪拌，靜置1小時。用管道將上清液虹吸入馬尾槽過濾，濾液打入沉澱灌，攪拌加入乙醇，使濃度達70%。攪拌30分鐘，停止攪拌，靜置分層。虹吸出上清醇液，沉澱物放入不鏽鋼桶中，加4倍量水溶解，邊攪拌邊加入496氫氧化鈉溶液，測pH8.8，升溫到52'C，加入胰酶0.2kg，酶解7小時，調溶液pH10，升溫至80'C，加入2kg活性炭，吸附10分鐘，過濾，濾液中加入10kg脫色1.5小時，過濾。濾液用分離分子量為10,000-20,000道爾頓的有機膜濃縮3倍，濃縮液中加入乙醇，使濃度達70%，得沉澱。沉澱用95%乙醇脫水兩次，50。C減壓乾燥3小時，粉碎得硫酸軟骨素成品。實施例2:將潔淨牛小骨500kg投入提取灌，加入純化水至浸沒軟骨，煮骨，鹼鹽提取。加入鹽酸(1:1)調pH8.8,升溫至50'C,加入85kg胰勻漿液，保持50。C水解8小時。取少量溶液用濾紙過濾，濾液置於10ml比色管中，加入5滴40%三氯乙酸溶液，溶液不產生渾濁，證明水解完全。加入鹽酸(1:1)測P服.O，迅速升溫至78'C，停止攪拌，靜置2小時。用管道將上清液虹吸入馬尾槽過濾，濾液打入沉澱灌，攪拌加入乙醇，使濃度達66%。攪拌30分鐘，停止攪拌，靜置分層。虹吸出上清醇液，沉澱物放入不鏽鋼桶中，加10倍量水溶解，邊攪拌邊加入4%氫氧化鈉溶液，測pH9.O，升溫到48X:,加入胰酶0.15kg，酶解6.5小時，調溶液pH9.8，升溫至78'C,加入0.75kg活性炭，吸附10分鐘，加入3.75kg活性炭，脫色1.5小時，過濾。濾液用分離分子量為10，000-20，000道爾頓的有機膜濃縮3.5倍，濃縮液中加入乙醇，使濃度達709t,得沉澱。沉澱用95%乙醇脫水兩次，5(TC減壓乾燥3小時，粉碎得硫酸軟骨素成品。實施例3:將潔淨豬喉軟骨500kg投入提取灌，加入純化水至浸沒軟骨，煮骨，鹼鹽提取。加入鹽酸(1:1)調pH9.0，升溫至52。C,加入100kg胰勻漿液，保持52'C水解7.5小時。取少量溶液用濾紙過濾，濾液置於10ml比色管中，加入5滴40%三氯乙酸溶液，溶液不產生渾濁，證明水解完全。加入鹽酸(1:1)測pH4.6，迅速升溫至78°C,停止攪拌，靜置2小時。用管道將上清液虹吸入馬尾槽過濾，濾液打入沉澱灌，攪拌加入乙醇，使濃度達68%。攪拌30分鐘，停止攪拌，靜置分層。虹吸出上清醇液，沉澱物放入不鏽鋼桶中，加4倍量水溶解，邊攪拌邊加入4%氫氧化鈉溶液，測pH9.0，升溫到48°C，加入胰酶0.125kg，酶解6.5小時，調溶液pH9.6，升溫至78-C，加入1,25kg活性炭，吸附10分鐘，加入活性炭6.25kg，脫色1.5小時，過濾。濾液用分離分子量為10,000-20，OOO道爾頓的有機膜濃縮3.5倍，濃縮液中加入乙醇，使濃度達70%，得沉澱。沉澱用95%乙醇脫水兩次，5(TC減壓乾燥3小時，粉碎得硫酸軟骨素成品。實施例4-將潔淨羊鼻軟骨500kg投入提取灌，加入純化水至浸沒軟骨，煮骨，鹼鹽提取。加入鹽酸(1:1)調pH8.6,升溫至54-C,加入100kg胰勻漿液，保持54'C水解7.5小時。取少量溶液用濾紙過濾，濾液置於10ml比色管中，加入5滴4096三氯乙酸溶液，溶液不產生渾濁，證明水解完全。加入鹽酸(1:1)測pH4.6，迅速升溫至76""C，停止攪拌，靜置2小時。用管道將上清液虹吸入馬尾槽過濾，濾液打入沉澱灌，攪拌加入乙醇，使濃度達68%。攪拌30分鐘，停止攪拌，靜置分層。虹吸出上清醇液，沉澱物放入不鏽鋼桶中，加4倍量水溶解，邊攪拌邊加入496氫氧化鈉溶液，測pH8.7，升溫到52。C，加入胰酶0.5kg，酶解7小時，調溶液pH9.5，升溫至77。C，加入lkg活性炭，吸附IO分鐘，加入活性炭5kg，脫色1.5小時，過濾。濾液用分離分子量為10，000-20，000道爾頓的有機膜濃縮3.5倍，濃縮液中加入乙醇，使濃度達70%，得沉澱。沉澱用95%乙醇脫水兩次，5(TC減壓乾燥3小時，粉碎得硫酸軟骨素成品。實施例5:將潔淨羊小骨500kg投入提取灌，加入純化水至浸沒軟骨，煮骨，鹼鹽提取。加入鹽酸(1:1)調pH9.0，升溫至53'C,加入90kg胰勻漿液，保持53'C水解7小時。取少量溶液用濾紙過濾，濾液置於10ml比色管中，加入5滴40%三氯乙酸溶液，溶液不產生渾濁，證明水解完全。加入鹽酸(1:1)測pH4.6,迅速升溫至78"C，停止攪拌，靜置2小時。用管道將上清液虹吸入馬尾槽過濾，濾液打入沉澱灌，攪拌加入乙醇，使濃度達66%。攪拌30分鐘，停止攪拌，靜置分層。虹吸出上清醇液，沉澱物放入不鏽鋼桶中，加10倍量水溶解，邊攪拌邊加入496氫氧化鈉溶液，測PH8.5，升溫到48°C，加入胰酶0.5kg，酶解6.5小時，調溶液pH10，升溫至75。C，加入0.9kg活性炭，吸附IO分鐘，加入活性炭4.5kg，脫色1.5小時，過濾。濾液用分離分子量為10，000-20，000道爾頓的有機膜濃縮3.5倍，濃縮液中加入乙醇，使濃度達70%,得沉澱。沉澱用9596乙醇脫水兩次，5(TC減壓乾燥3小時，粉碎得硫酸軟骨素成品。實施例6:將潔淨雞胸骨500kg投入提取灌，加入純化水至浸沒軟骨，煮骨，鹼鹽提取。加入鹽酸(1:1)調pH8.9，升溫至5(TC，加入40kg胰勻漿液，保持5(TC水解7.5小時。取少量溶液用濾紙過濾，濾液置於10ml比色管中，加入5滴40%三氯乙酸溶液，溶液不產生渾濁，證明水解完全。加入鹽酸(1:1)測pH4.6，迅速升溫至77'C，停止攪拌，靜置2小時。用管道將上清液虹吸入馬尾槽過濾，濾液打入沉澱灌，攪拌加入乙醇，使濃度達60%。攪拌30分鐘，停止攪拌，靜置分層。虹吸出上清醇液，沉澱物放入不鏽鋼桶中，加3倍量水溶解，邊攪拌邊加入4%氫氧化鈉溶液，測pH8.8，升溫到55'C，加入胰酶0.5kg，酶解7小時，調溶液pH9.6，升溫至70'C，加入1.5kg活性炭，吸附IO分鐘，加入活性炭7.5kg,脫色1小時，過濾。濾液用分離分子量為10，000-20，000道爾頓的有機膜濃縮3.5倍，濃縮液中加入乙醇，使濃度達67%,得沉澱。沉澱用95%乙醇脫水兩次，5(TC減壓乾燥3小時，粉碎得硫酸軟骨素成品。實施例7:將潔淨鴨胸骨500kg投入提取灌，加入純化水至浸沒軟骨，煮骨，鹼鹽提取。加入鹽酸(1:1)調pH8.5，升溫至55'C,加入40kg胰勻漿液，保持55t:水解6.5小時。取少量溶液用濾紙過濾，濾液置於10ml比色管中，加入5滴40%三氯乙酸溶液，溶液不產生渾濁，證明水解完全。加入鹽酸(1:1)測pH6，迅速升溫至80。C，停止攪拌，靜置2小時。用管道將上清液虹吸入馬尾槽過濾，濾液打入沉澱灌，攪拌加入乙醇，使濃度達70%。攪拌30分鐘，停止攪拌，靜置分層。虹吸出上清醇液，沉澱物放入不鏽鋼桶中，加5倍量水溶解，邊攪拌邊加入4%氫氧化鈉溶液，測pH9.0，升溫到48'C，加入胰酶0.5kg，酶解5小時，調溶液pH9,升溫至70'C，加入lkg活性炭，吸附10分鐘，加入活性炭5kg，脫色2小時，過濾。濾液用分離分子量為10，000-20，000道爾頓的有機膜濃縮3.5倍，濃縮液中加入乙醇，使濃度達70%，得沉澱。沉澱用9596乙醇脫水兩次，5(TC減壓乾燥3小時，粉碎得硫酸軟骨素成品。實施例8:將潔淨牛鼻骨500kg投入提取灌，加入純化水至浸沒軟骨，煮骨，鹼鹽提取。加入鹽酸(1:1)調pH8.5,升溫至48'C，加入100kg胰勻漿液，保持5(TC水解8小時。取少量溶液用濾紙過濾，濾液置於10ml比色管中，加入5滴40%三氯乙酸溶液，溶液不產生渾濁，證明水解完全，加入鹽酸(1:1)測pH4.6，迅速升溫至70'C，停止攪拌，靜置2小時。用管道將上清液虹吸入馬尾槽過濾，濾液打入沉澱灌，攪拌加入乙醇，使濃度達68%。攪拌30分鐘，停止攪拌，靜置分層。虹吸出上清醇液，沉澱物放入不鏽鋼桶中，加4倍量水溶解，邊攪拌邊加入496氫氧化鈉溶液，測pH8.5,升溫到5(TC,調溶液pH8.5加入胰酶0.6kg,酶解6小時，調PH值9.3，加入lkg活性炭，吸附脫色十分鐘過濾。濾液調PH6.8升溫至80。C,加入6kg活性炭，過濾，濾液用分離分子量為10，000-20,000道爾頓的有機膜濃縮4倍，濃縮液中加入乙醇，使濃度達65%，得沉澱。沉澱用95%乙醇脫水兩次，60'C減壓乾燥5小時，粉碎得硫酸軟骨素成品。檢驗結果如下:tableseeoriginaldocumentpage10tableseeoriginaldocumentpage11權利要求1.一種高含量硫酸軟骨素的生產方法，其組成包括強鹼鹽煮骨、鹼提取，其特徵是首先用胰勻漿液酶解、然後進行乙醇沉澱把硫酸軟骨素沉澱出來、然後再次進行胰酶酶解，然後進行脫色、膜濃縮、乙醇沉澱、脫水、乾燥。2.根據權利要求l所述的高含量硫酸軟骨素的生產方法，其特徵是所述的用胰勻漿液酶解是調節溶液pH8.5-9.0，升溫至48'C-55°C,加入軟骨質量8%-20%的胰勻漿液，反應6-8小時，用40%三氯醋酸檢査水解物，如溶液不混濁或顯微混濁，證明水解完全，用鹽酸調節pH4.6-6，迅速升溫至70'C-80'C，停止加熱，過濾。3.根據權利要求1或2所述的高含量硫酸軟骨素的生產方法，其特徵是所述的再次進行胰酶酶解是沉澱加3-10倍量水溶解，在PH8.5-9.0、48。C-55'C條件下加入0.04%-0.5%胰酶,反應5-7小時。4.根據權利要求1所述的高含量硫酸軟骨素的生產方法，其特徵是所述的脫色為溶液pH9-10，升溫至70'C-80'C，加入0.1%-0.5%活性炭，吸附10分鐘，過濾，再在濾液中加入0.5%-2.5%活性炭，脫色1-2小時，過濾。5.根據權利要求1或2所述的高含量硫酸軟骨素的生產方法，其特徵是所述的濃縮的濾液用有機膜進行超濾濃縮，其中超濾膜的截流分子量為10，000-20，OOO道爾頓，濃縮到原溶液體積的1/3-1/5，濃縮液中加入乙醇，使濃度達70%，硫酸軟骨素沉澱析出。6.根據權利要求1或2所述的高含量硫酸軟骨素的生產方法，其特徵是第一次酶解用胰勻漿液作為複合酶載體，所述的胰勻漿液是將新鮮或冷凍的動物胰臟用組織勾漿機破碎製成，第二次酶解用胰酶進行酶7.根據權利要求1或4所述的高含量硫酸軟骨素的生產方法，其特徵是所述的脫色是用活性炭處理兩次，第一次脫色活性炭的濃度為0.l%-0.5%,時間為10分鐘，第二次脫色活性炭的濃度為0.5%-2.596，時間為1-2小時。全文摘要高含量硫酸軟骨素的生產方法。本發明涉及一種高含量硫酸軟骨素的生產方法。目前精製硫酸軟骨素的生產方法有很多，如乙醇分級沉澱法、季胺鹽絡合法、區帶電泳分離法、離子交換層析法等，這些方法在實驗室及小試範圍內可以收到理想的效果，但在工業化大生產中，這些方法具有成本高、能耗大等缺點。其組成包括煮骨、鹼提取，首先用胰勻漿液酶解、然後進行乙醇沉澱把硫酸軟骨素沉澱出來、然後再次進行胰酶酶解，然後進行脫色、膜濃縮、乙醇沉澱、脫水、乾燥。本發明用於生產高含量的硫酸軟骨素。文檔編號C08B37/08GK101392035SQ20071014434公開日2009年3月25日申請日期2007年9月21日優先權日2007年9月21日發明者趙世祥申請人:哈爾濱奧霖藥業有限公司